21.09.

2010
1
FAMILIA VIBRIONACEAE. MICROBIOLOGIA
I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
HOLEREI
Familia: Vibrionaceae
Genuri: Vibrio
Photobacterium
Salinivibrio
Aliivibrio (Allomonas)
Enterovibrio
Grimontia
Caractere generale (cheie) ale familiei: bastonae G-,
drepte sau ncurbate, mobile, reduc nitraii n nitrii,
fermenteaz glucoza, oxidaza+, catalaza+
GENUL VIBRIO
Bastonae G-, ncurbate, polimorfe, 2-3 m / 0,5-
0,8 m, nesporogene, necapsulate, mobile
monotriche (flagel polar unic)
Clasificarea:
- Vibrioni halotolerani - Vibrio cholerae
(agenii holerei i diareilor holeriforme)
- Vibrioni halofili V.parahaemolyticus,
V.alginolyticus, V.anguillarum, V.vulnificus,
V.metschnikovii (oportuniti, pot cauza
toxiinfecii alimentare, septicemii,
meningite, supuraii)
- Vibrioni free life (saprofii)

VIBRIO CHOLERAE
Clasificare :
Serogrupuri: Vibrio cholerae O1, O2, ... O155
- V.cholerae O1, agent cauzal al holerei
- V.cholerae O139 Bengal (descris in 1992,
mutant al Ag O, biovarul El Tor) agent
cauzal al holerei
- V.cholerae non O1/non O139 (O2, O3,... etc,
vibrioni NAG) responsabili de sindrom
holeriform, diaree, toxiinfecii alimentare,
gastro-enterite
21.09.2010
2
Serovariante ale V.cholerae O1 - Ogawa,
Inaba, Hikojima
Biovariante ale V.cholerae O1 :
1. V.cholerae cholerae (clasic) n 1883
izolat n cultur pur de ctre R. Koch, a
cauzat 6 pandemii
2. V.cholerae El Tor izolat n 1905 ntr-o
staie de carantin din El Tor (peninsula
Sinai), n 1961 determin pandemia a VII

Caractere morfotinctoriale (vezi caracteristica genului)
Caractere de cultur
Anaerob facultativ, temperatura optim de cultivare --
37 grade. Crete pe medii simple, dar prefer pH
alcalin (7,6 - 9,6). Halotolerant (0,5 - 7% NaCl,
optimal 3%). Sensibil la pH acid
Mediu de mbogire Apa peptonat alcalin 1%
(AP)
Medii de izolare a culturii pure:
Geloza alcalin (GA) - mediu electiv-selectiv
- Mediul TCBS (tiosulfat-citrat-bil-zaharoz) DD i
selectiv

Manifestarea creterii
AP peste 3-6 ore de incubare vl fin la suprafaa
mediului
GA peste 12 ore colonii S (R atipice), plate,
transparente, cu nuan albstruie
TCBS peste 12 ore colonii S, opace, galbene
(fermentarea zaharozei)
Caractere biochimice: V.cholerae este catalaza+ i
oxidaza+, reduce nitraii n nitrii, produce indol,
posed gelatinaz, LCD i ODC, fermenteaz i
oxideaz glucoza pn la acid (testul Hugh-
Leifson), lactoza -.
Conform activitii glicolitice V.cholerae
aparine grupului I Heiberg
(fermenteaz zaharoza i manoza, nu
fermenteaz arabinoza)- testul ZAM
Se disting 2 biotipuri (variante) de
V.cholerae: clasic (V.cholerae cholerae)
i El Tor (V.cholerae El Tor), identice
morfologic i antigenic.


21.09.2010
3

Diferenierea biovariantelor
Caractere V.cholerae
cholerae
V.cholerae
El Tor
Aglutinarea
eritrocitelor de gin
- +
Hemoliza eritrocitelor
de berbec
- +
Producerea acetoinei
(test VP)
- +
Liza cu bacteriofagi C (IV) ET (II)
Creterea pe mediu cu
polimixin
- +
STRUCTURA ANTIGENIC
A VIBRIO CHOLERAE
Antigenul O somatic, LPZ, termostabil (peste
155 serogrupe - O1, O2....O155)
Ag O1 este constituit din 3 fracii - A,B,C
Respectiv se disting 3 serovariante ale
V.cholerae O1: Ogawa (A,B), Inaba (A, C) i
Hikojima (A; B; C)
Ag H, proteic, termolabil, comun pentru
V.cholerae
FACTORI DE PATOGENITATE
Factori de adeziune (pili - Toxin Coregulated
Pilus (TCP), LPZ, glicocalixul)
Enzime de patogenitate (mucinaza,
neuraminidaza, LDC, lecitinaza)
Enterotoxina (toxina holeric, holeragen),
constituit dintr-o subunitate A (A1, A2) i 5
subuniti B. Codat de genele ctxAB ale
unui bacteriofag filamentos.
Endotoxina
Mecanismul de aciune al enterotoxinei: Subunitile
B servesc la fixarea pe receptorul gangliozidic
GM1 de pe membrana enterocitului. Urmeaz
modificarea conformaional a toxinei cu crearea
unui canal hidrofil prin care subunitatea A
ptrunde n celul. Catena A1, manifestnd
activitate ADP -ribozilant, activeaz adenilat-
ciclaza membranar, ce duce la creterea
concentraiei de AMPc intracelular. Rezult
inhibiia absorbiei bicarbonatului i secreia
exagerat a cloridului. Apa i electroliii (Na
+
K
+
Cl
-

HCO3
-
) se acumuleaz n lumenul intestinal.
Rezult deshidratare extracelular intens cu
hemoconcentraie, oc hipovolemic i acidoz
metabolic.
21.09.2010
4
PATOGENEZA HOLEREI I MANIFESTRILE CLINICE
HOLERA gastroenterit acut, strict
uman.
Agentul cauzal V.cholerae O1/O139
Sursa de infecie bolnav, convalescent,
purttor sntos
Mecanismul de transmitere fecal-oral
- Alimentar (ap, alimente, fructe de mare)
- Contact direct (manual)
Doza infectant 10
9
- 10
11
UFC (10
4
pentru
persoane cu hipoaciditate gastric)
21.09.2010
5
Vibrionii care au supravieuit ajung n intestinul
subire. Local mucinaza descompune mucusul,
asigurnd adeziunea vibrionilor la enterocite,
colonizarea i producerea toxinei. Neuraminidaza
transform di i trisialogangliozidele membranare
n GM1, ce permite fixarea toxinei i penetrarea ei.
Evoluia clinic a holerei:
I - Perioada de incubaie (2-5 zile)
II Enterita holeric (scaune frecvente,
afecale, apoase, constituite din lichid clar
cu flocoane albe - aspect zeam de orez)
III Gastro-enterita (scaune frecvente 10 -
50 ori pe zi i vome abundente).
Consecine deshidratare (3-20 litri
eliminai n 24 ore), carene de sruri,
acidoz, hipoxie tisular, hipotensiune,
contracii (crampe) musculare.

IV - Algida holeric (stare extrem de grav,
hipotermie, asfixie, anurie, colaps, com,
deces)

Imunitatea umoral (sIgA, IgG),
antibacterian i antitoxic, de scurt
durat (2 ani), reinfecii sunt posibile
21.09.2010
6
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL HOLEREI
Prelevate: mase vomitive,
materii fecale, bil (purttori), de
la cadavru 3 fragmente din
intestinul subire i vezica biliar,
prelevate din mediul extern (apa,
alimente)
Metode de diagnostic
1. Diagnosticul rapid
- Frotiu Gram (bacterii G-,
ncurbate)
- Studierea mobilitii (preparate
native bacterii mobile, grupate
n bancuri de peti
- Imobilizarea i aglutinarea
vibrionilor cu serul anti-O1
- Imobilizarea vibrionilor cu
bacteriofagi C i ET
- RIF
2. Examenul bacteriologic (de baz)
- Prelevatele se nsmneaz n AP I
(mbogire) i GA I / TCBS (izolarea culturii
pure) termostat, 37 grade C
- Peste 6 ore se examineaz cultura din AP
(vl la suprafa?), utilizat pentru
diagnosticul rapid, apoi se rensmneaz
pe AP II i GA II.
21.09.2010
7
- Peste 12 ore se examineaz coloniile de pe GA I
sau TCBS. Coloniile suspecte (plate i transparente
cu nuan albstruie pe GA, galbene pe TCBS)
sunt expuse diagnosticului rapid (5 teste), apoi
repicate pe mediul cu lactoz i zaharoz pentru
acumularea culturii pure i difereniere primar.
AP II poate fi utilizat pentru efectuarea testelor
rapide i nsmnare pe GA III
- Culturile lactoza-/zaharoza+ sunt identificate
morfologic, cultural, biochimic, serologic (cu ser
O1 sau RO (colonii atipice), apoi cu seruri
monospecifice Ogawa i Inaba). Se efectueaz
fagoidentificarea i diferenierea biovariantelor
3. Depistarea toxinei
- In vivo (ansa ligaturat la iepure, culturi de celule)
- In vitro (ELISA, cu utilizarea gangliozidului GM1;
latexaglutinarea)
- Tehnici de biologie moleculara (PCR, etc)
4. Serodiagnostic (retrospectiv)
Anticorpii (aglutinine, vibriocine, antitoxine) apar dup
10-15 zile de boal
- RA (serul bolnavului + diagnostic din V.cholerae O1
(titrul diagnostic 1/80)
- RHAI (serul bolnavului + diagnostic eritrocitar)
- Reacia de vibrioliz (serul bolnavului + cultur de
vibrioni + complement). Titrul diagnostic 10
-4
- Dozarea antitoxinelor (ELISA, RHAI)

TRATAMENTUL I PROFILAXIA HOLEREI
Tratament
- Rehidratare
- Antibiotice (tetraciclin, sulfanilamide, doxiciclin)
- Tratament simptomatic
Profilaxie
- Igiena individual i colectiv
- Vaccinarea (vaccin inactivat, vaccin subunitar,
holeragen-anatoxin)
Imunitatea pn la 6 luni
Vaccinul viu este n proces de studiu
VIBRIONII HALOFILI
V. parahaemolyticus toxiinfecii alimentare,
consecutive utilizrii fructelor de mare, gastro-
enterite
V. vulnificus, V. alginolyticus procese
supurative (otite, conjunctivite, infecii de
plag, etc), toxi-infecii alimentare, septicemii

CAMPYLOBACTER

Caractere morfobiologice
Reprezentanii genului Campylobacter
sunt bastonae Gram -, ncurbate n
virgula, n S sau pescru in zbor,
mobili monotrichi. Trei specii de
Campylobacter sunt patogene pentru
om : C. fetus, C. jejuni, C.coli .
21.09.2010
8
Campylobacter au metabolism
respirator microaerofil. Pot fi izolate pe
medii selective imbogite cu snge
coninnd numeroase antibiotice
(bacitracin, novobiocin, vancomicin,
polimixin, etc)
Temperatura optima 37 grade C.
Colonii S, plate, cenuii, translucide, 1-
2 mm diametru, apar peste 2-4 zile de
cultivare.
HABITAT
Campylobacter se intlnesc n tubul
digestiv al animalelor, n special ovine,
porcine i la psri
Contaminarea omului are loc pe cale
alimentar (ap, lapte, carne).
PATOGENEZA SI FORME CLINICE
C. jejuni/coli au o putere enteropatogen
important, fiind responsabile de enterite.
Afecteaza toate vrstele, dar mai frecvent
copiii, n condiii de igien precar. Maladia
evolueaz benign cu vindecare spontan n
cteva zile.
C. fetus determin septicemii la persoane
fragilizate: cirotici, diabetici, cardiaci,
gravide...
SENSIBILITATE LA AB
Eritromicina este antibioticul de elecie
n tratamentul campilobacteriozelor
digestive.
Alte antibiotice: tetraciclina,
aminoside, cloramfenicol, ampicilina