Universitatea Acedemiei de Stiinte din Moldova

Specialitatea: biologia moleculara

Lucru individual:

Animale MODIFICATE
GENETIC
Realizari si perspective

A efectuat: Liubimova
Anastasia

Gr. BM31
A verificat: Zgardan Dan

CUPRINS:
1.Introducerea
2.oareci transgenici-aplicaii
3.Clonarea animalelor prin transfer nuclear
4.Vite,oi,capre i porci transgenici
5.Psri transgenice
6.Peti transgenici
7.OMG optinute in prezent
8.Bibliografie

INTRODUCERE

Un animal al crei compoziie genetic a fost modificat prin intoducerea de ADN strin este
numit transgenic.ADN-ul introdus este numit transgen i ntregul proces este numit tehnologie
genetic sau transgenez.
Datorita celor doi cercetatori de renume mondial, Watson si Crick, care in anul 1953 au
descoperit structura ADN-ului, ceea ce a facut ca cercetariile din domeniul biologiei moleculare sa
poata lua un avant considerabil.. Principiul de baza al producerii de animale modificate genetic este
introducerea uneia sau mai multor gene de provenienta straina in ADN-ul animalului care urmeaza
sa fie modificat. Genele introduse trebuie sa fie transmise in linia germinala astfel incat fiecare
celula germinativa a animalului sa contina acelasi material genetic modificat.
Exista 3 metode care sunt folosite pentru a modifica un animal din punct de vedere genetic:

Microinjectarea de AND ce consta in transferul de gene (care sunt recombinate, iar mai apoi
clonate) care provin fie de la animale din aceeasi specie, fie de la animale apartinand unor specii
diferite, in pronulceul unei celule reproductive (gametice). Celule manipulate sunt cultivate in
vitropana la un anumit stadiu de dezvoltare si introduse apoi in organismul femelei purtatoare.

Transferul de gene mediat de retrovirusi ce implica retrovirusi folositi ca vectori pentru a transfera
materialul genetic intr-o celula gazda, care mai apoi da nastere unui organism ce contine tesuturi
sau parti de la alte specii. Organismele ce prezinta aceleasi modificari sunt imperecheate timp de
circa 20 de generatii pentru a putea da nastere unor indivizi homozigoti care sa prezinte in mod
caracteristic genele dorite.

Transferul de gene mediat de celulele embrionare stem care consta in izolarea celulelor stem
capabile de multiplicare si specializare, din embrion. Dupa care gena dorita este introdusa in aceste
celule, care mai apoi sunt incorporate intr-un alt embrion din care ia nastere organismul cu
caracteristici specifice genei manipulate.
Dintre acestea, transferul de gene prin microinjectare este cea mai utilizata metoda pentru a
produce animale de ferma. Pentru ca gena dorita sa se poata transmite in descendenta sunt
imperecheate animale care prezinta aceeasi modificare genetica. Insa in ciuda tuturor acestor
eforturi din aceasta metoda rezulta un numar foarte mic de animale care sa prezinte modificarea,
spre exemplu dintr-un esantion de 7000 de ovule de scroafa modificate genetic cu o gena specifica,
doar 0,6% au manifestat la nastere caracteristicile dorite.

oarecii Transgenici:aplicaii
oarecii transgenici pot fi folosii ca sistem model pentru a determina baza biologic
pentru bolile umane i divizarea tratamentelor pentru diferite condiii.n plus transgeneza oarecilor
este un sistem exemplar pentru a determina fizabilitatea unui anumit agent terapeutic.n acest
context,oarecii de laborator au fost numii eprubetele mblnite.
Primele experiene n vederea obinerii de animale transgenice au fost realizate de R. Palmiter i R.
Brinster(1982), cercettori americani(de la Universitile din Seattle, Philadelphia i San Diego)
care au reuit transferul genei hormonului de cretere (somatotropina) de la obolan la oarece.
Gena respectiv a fost prima oar clonat n bacterii pentru obinerea ei n cantiti mari.
Este vorba de un oarece gigant, de dou-trei ori mai mare dect cel normal, caracter generat prin
transferarea n genomul su a genei ce codific hormonul de cretere la obolan.
Pentru a obine oareci transgenici se folosete de obicei urmtoarea tehnic: ovulele sunt prelevate

de la o femel matur i fecundate cu sperm in vitro. Dup aceea un plasmid recombinat, care
posed o gen ce poate fi relativ uor identificat, este introdus prin microinjecie cu un tub fin de
sticl n pronicleul mascul al ovulului proaspt fecundat. Dup aceea are loc implantarea zigotului
respectiv ntr-o femel, care va da natere unor animale transgenice. Prin astfel de microinjecii s-a
reuit transferul genei hormonului de cretere de la obolan la oarece, gen ataat de un promotor
puternic al genei metallothioneinei. oarecii care prezentau 35 de copii ale genei hormonului de
cretere aveau un ritm de cretere mult mai rapid ca cel al oarecilor normai.
n experienele lui R. Palmiter i R. Brinster s-a observat c cca 1/3 dintre oarecii manipulai
genetic au integrat gena exogen i au avut la vrsta de trei luni o talie dubl fa de cea normal.

Clonarea Animalelor prin Transfer Nuclear

ntr-un caz intens mediatizat o oaie pe nume Dolly a fost clonat prin transfer de nucleu de
la o celul a ugerului unui animal adult.Aceasta a fost prima demonstrare a pluripotenei
(totipotenei) nucleului diferitelor celule adulte.De la clonarea lui Dolly,nucleii celulelor somatice
au fost folosite pentru a clona vite,capre i porci.

n aceste cazuri procedeul de transfer a nucleului este similar.Pe scurt celulele donor fie ele
embrionare,fetale sau adulte sunt izolate,cultivate i modificate genetic.Cu toate c celulele adulte
nu sunt ntotdeauna fesabile culturile lungi sunt preferate pentru c astfel cei ce efectueaz
experimentul au timp n plus pentru a realiza alterri genetice succesive cum ar fi inactivarea
ambelor alele ale unui locus sau crearea de schimbri genetice multiple.
Dup stabilirea unei linii celulare cu o modificare genetic specific celulele donor
individuale sunt fuzionate cu un oocit enucleat cu impulsuri electrice de durat scurt.Impulsurile
induc simultan fuziunea celular i activarea oocitelor.Celulele fuzionate sunt cultivate fiecare pn
la stadiul de blastocit nainte de a fi transferat n uterul unei femele fals nsrcinate.La natere prin
analiza genotipului se identific transgena.
n general animalele produse prin transfer de nucleu sunt sntoase.Totui exist o pierdere
substanial de indivizi nainte i dup natere.Cauza acestei rate sczute de supravieuire nu este
cunoscut.n ciuda eficinei sczute transferul nuclear are o serie de avantaje fa de microinjecia
de ADN n pronucleu.Prin transfer nuclear schimbrile genetice specifice sitului sunt posibile;toi
produii de concepie sunt transferai i mici turme de acelai sex pot fi produse ntr-un timp scurt.
n contrast,prin microinjecie cu ADN integrarea transgenei se face n situri
randomizate,expresia fiind limitat de localizarea cromozomial,se formeaz tandemuri instabile,iar

stabilirea liniilor transgenice presupune un oarecare numr de generaii.Din aceste motive se depun
eforturi pentru perfecionarea clonrii animalelor cu nuclei din celule somatice.

Vite,Oi,Capre i Porci Transgenici

Dac glanda mamar este folosit ca bioreactor,vacile pentru lapte ce produc anual
aproximativ 10.000 litri de lapte coninnd aproximativ 35g de proteine/litru sunt candidate
profitabile pentru transgenez.
Unul dintre scopurile transgenezei vacilor de lapte este de a schimba compoziia
laptelui.Cantitatea de brnz produs din lapte este direct proporional cu coninutul de kcasein.Creterea produciei de k-casein cu supraexpresia unei transgene pentru k-casein este un
scenariu realizabil.Pentru un scop final diferit expresia transgenei pentru lactoz n glanda mamar
ar putea scade coninutul n lactoz a laptelui cu toate c este nevoie de o anumit cantitate de
lactoz pentru secreia de lapte.
Cu toate c transgeneza vitelor pare promitoare,progresia spre a produce numere mari de
animale modificate genetic va fi destul de nceat,deoarece dureaz 2 ani producerea unui viel
dintru-un ovul fertilizat.
n prezent,bolile infecioase ale animalelor domestice sunt controlate prin
vaccinare,medicamente,izolare fizic i monitorizare atent.n cazul animalelor se pot face ncercri
de a crea animale ce motenesc rezistena la boli virale,bacteriene sau parazitare.De
exemplu,rezistena genetic la boli bacteriene cum ar fi:mastita la vacile de lapte ,dizenteria
neonatal la porci i holera ar fi putea fi utile.Dac cauza rezistenei n fiecare caz este datorat unei
singure gene este posibil creearea unor animale transgenice cu protecie specific mpotriva unor
boli bacterine dup izolarea i caracterizarea acestor gene.
O alt abordare,ce poate fi folosit pentru dezvoltarea liniilor de animale rezistente la ageni
infecioi presupune creearea proteciei imunologice motenit prin transgenez.Un numr de gene
candidate ce contribuie la sistemul imun sunt studiate pentru acest scop.
Cercetarea transgenezei la oi i capre a fost n cea mai mare parte ndreptat spre dezvoltarea
glandelor mamare a acestor organisme drept bioreactoare pentru producerea de proteine
farmaceutice.Cu toate c cantitatea de lapte produs fie de oi,fie de capre este mai mic fa de cea
produs de vaci,lactaia la oi i capre produce cantiti de sute de litri de lapte/an.
Printr-o metod foarte asemnatoare cu cea folosit pentru producerea de oareci
transgenici cu aceste construcii transgenice ce presupun conducerea secvenelor de gene umane de
ctre promotorii specificii glandei mamare cercettorii au creat oi,capre,porci i iepuri transgenici
pentru mai mult de 100 de proteine umane ce sunt secretate n lapte.Proteinele derivate din
transgenez au fost glicolizate i au avut alte modificri postranslaionale.n multe astfel de cazuri
proteinele recombinate au activitate biologic identic cu acelea ce provin din surse umane.
Transgeneza este folosit i pentru abordarea anumitor probleme ce in de mediu.De
exemplu o problem de mediu major adus de creterea numrului de porcine este abundena de
fosfor (P) din materiile lor fecale.Fosforul din fecale de porcine i galinacee ce este depozitat n aer
liber sau este folosit ca ngrmnt se poate infiltra n sistemele de irigare i poate determina
creterea excesiv de populaii bacteriene (cianobacterii) ,care scad rezerva de oxigen i prin urmare
omoar petii i alte organisme acvatice.Cantiti mari de P sunt implicate n producerea de gaze,ce
cresc efectul de ser,care contribuie la nclzirea global.
Porcinele i galinaceele excret cantiti mari de P pentru c,spre deosebire de rumegtoare
nu sunt capabile s digere i s utilizeze acidul fitic,care este forma n care se gsete P n
nutrieni.Ca surs principal de hran pentru porci este soia,ce are aproximativ 50% din fosfatul su

sub form de acid fitic.Incapacitatea de a cataboliza acidul fitic este cauzat de absena unei enzime
fitaze,care se gsete n plante i microorganisme.Majoritatea fitozelor nlocuiesc succesiv P din
acidul fitic pentru a produce inozitol 2-monofostat sau inozitol.A fost adugat fitoz n nutrieni
pentru a facilita aportul de fosfor alimentar i pentru a scdea concentraia de fosfor din
excremente.Totui acest supliment este costisitor i ineficient pentru c majoritatea activitii
enzimei este pierdut prin prepararea i depozitarea hranei.
Ca strategie alternativ este justificat faptul c porcii transgenici,ce exprim gena fitazei n
glandele lor salivare s poat depii consecinele de ordin nutriional i din punctul de vedere al
polurii cu privire la prezena acidului fitic n diet.Pentru a ndeplinii acest scop,microinjectarea
embrionilor cu pronuclei a fost folosit pentru a introduce la porci un construct transgenic ce const
din gena appA pentru fitoz provenind de la E.coli aflat sub controlul promotorului proteinei
glandei parotide,care dirijeaz producia unei proteine specifice salivare la oareci.Stabilirea unor
linii transgenice productoare de fitoz a fost realizat i apoi testat cu privire la nivelul de P dup
mese de soia ce conineau 53% din fosfat sub form de acid fitic.
n aceste condiii acidul fitic din soia a fost digerat aproape n totalitate i coninutul de P
din fecale a fost redus cu 75% n comparaie cu lipsa de control transgenic.Nu au fost semnalate
efecte adverse la aceti porci.Mai sunt necesare studii pentru a demonstra c fitoza nu este
sintetizat i n alte locaii n afar de glandele salivare i c nu este alterat cantitatea crnii,dar i
c fitoza nu este alergen.Cel mai probabil aceast abordare va scdea costul produciei de porcine
ct i de galinacee i va diminua efectele negative asupra mediului.Deci,aceti porci au fost numii
porci envitro.

Psri Transgenice
Anumite caracteristici,care sunt proprii reproducerii aviare,dar i dezvoltrii aviare fac
producerea liniilor trangenice prin microinjectare de ADN n ovule specializate extrem de
ineficient.De exemplu,n timpul fertilizrii la psri ovulul este penetrat de mai muli
spermatozoizi.Prin urmare este imposibil identificarea pronucleului masculin ce va fuziona cu
pronucleul feminin.De asemenea ADN-ul injectat n citoplasma ovulului fertilizat nu se integreaz
n ADN-ul genomic.n final,chiar dac microinjectarea nucleului cu ADN ar fi practicabil tehnica
ar fi dificil de implementat deoarece ovulul aviar dup fertilizare devine acoperit de o membran
dur,nconjurat de cantiti mari de albumin i nchis ntr-o membran intern i extern extrem de
rezistent.Lund n calcul aceste dezavantaje este posibil injectarea unei transgene n regiunea
glbenuului(disc germinativ),
care este format din pronucleii feminin i masculin.Discul germinativ este prezent naintea formrii
cojii oului.Dup administrarea ADN-ului discului germinativ fiecare ou este cultivat n vitro i cnd
se formeaz embrionul acesta este plasat ntr-un ou surogat pentru a produce un pui de gin.n
ciuda dificultilor tehnice anumite linii transgenice ale puilor au fost stabilite prin aceast metod.
Pn cnd membrana extern a oulor se ntrete embrionul n curs de dezvoltare are
2 straturi,ce conin ntre 30.000 i 60.000 de celule.n cadrul stadiilor experimentale inocularea n
stadiul de blastoderm cu vectori retrovirali defectivi de replicare cu gene bacteriene markeri au
rezultat n caiva pui ce aveau aceste secvene ADN n genomul lor.Dei unele organisme
transgenice nu au produs virui folosirea vectorilor retrovirali pentru a inocula gene ntr-un produs
destinat consumului ca hran a acestuia va ridica ntrebri cu privire la sigurana acestora cu toate
c riscurile sunt reale sau imaginare.
Vehicolul ideal pentru transgenez ar fi celulele pluripotente ce pot fi obinute
continuu n cultur i pot fi modificate prin metode standard.Pn n prezent doar celule din stadiul
de blastoderm i celule primordiale germinative ce au o cretere limitat n vitro i celule stem
embrionare de pui n stadiul X ,ce supravieuiesc 21 de zile n cultur,sunt disponibile acestui
scop.Deci,aceste celule sunt extrase de la puiul donator transfectate cu constructul transgenic
i implantate n spaiul subgerminal al embrionilor primitori din ou proaspt clocite.La eclozare o

parte din progenituri prezint o mixtur de celule.

Un organism cu celule diferite provenite de la 2 sau mai muli indivizi este numit
himer.La anumite himere de pui de gin celulele provenite din celule transfectate devin parte a
liniei esutului germinativ i formeaz celule germinative.Liniile transgenice pot fi astfel stabilite
pornind de la aceste himere prin mperechere.n general celulele primitoare sunt mult mai multe
dect celulele donatoare ce conin transgena.Totui proporia celulelor donatorului poate fi crescut
cu scopul de a mrii posibilitatea obinerii liniilor himerice.n ciuda ineficienei sale aceast
procedur a fost adesea folosit pentru a produce pui de gin transgenici.
Pui de gin transgenici pot fi folosii pentru a mbuntii genotipurile existente
prin dobandirea rezistenei la virui i bacterii,a unei luri n greutate mai eficiente,a unui nivel de
grsimi i colesterol mai sczut n ou i a unei caliti mai bune a crnii.
n prezent experimental pui de gin ce sintetizeaz anticorpi monoclonali,hormoni
de cretere,insulin,albumin seric uman i -interferon au fost creai.

Peti Transgenici
Cum pescriile naturale devin insuficiente producerea acestei hrane rspandite pe ntreg
mapamondul va depinde din ce n ce mai mult de aquacultur.n acest context,raii de cretere
mari,tolerana la stresul ambiental i rezistena la boal sunt unele caracteristici ce pot fi create prin
transgenez.Pn n prezent,transgenele au fost introduse prin microinjecie n ovulele fertilizate a
unui numr de specii de pete incluzandu-le pe cele de:crap,somon,pstrv,pisic de
mare,etc.Pronuclei de pete nu pot fi vizualizai la microscop dup fertilizare prin urmare ADN-ul
transgenic este injectat n citoplasma ovulelor fertilizate sau a embrionilor ce au ajuns la un stadiu
de dezvoltare de 4 celule.Spre deosebire de embriogeneza mamiferelor,dezvoltarea oulor de pete
este extern prin urmare nu este nevoie de procedur de implantare.Dezvoltarea de peti transgenici
se realizeaz n acvarii cu temperatur reglabil.Prezena transgenei este evident prin PCR sau
printr-o scal AND pentru eritrocitele nucleate.Vor mai fi efectuate mperecheri pentru a obine linii
transgenice pure.

O multitudine dintre studiile iniiale pe peti transgenici au fost realizate pe examinarea

efectelor transgenei pentru hormonul de cretere.ntr-un studiu o transgen ce era format din
promotorul genei pentru proteina antinghe a petelui renumit ocean pout,AND-ul pentru
hormonal de cretere de la somon i semnalele poliadenilrii a captului 3 a genei proteinei
antinghe din petele ocean pout au fost injectate n oule somonului Atlantic.n general
somonii transgenici au fost mai mari i au crescut mai repede dect petii netransgenici.Acest
sistem de exprimare a fost ales pentru a mbuntii transcripia hormonului de cretere n apele
reci.Un construct exclusiv din pete a fost asamblat pentru a evita posibilele incompatibiliti

biologice ce ar fi putut aprea la folosirea de hormon de cretere din surse nepiscicole.

Pentru o specificitate i mai mare un construct pentru hormonul de cretere format doar din
somon a fost formulat i microinjectat n ou de somon.Dup aprox.1 an somonii transgenici au fost
de aprox.11 ori mai grei decat somonii normali.Totui la adult nu exist diferene de mrime.
Teoretic,creterea mai rapid a somonilor tineri ar scdea costul pentru hran i ar diminua
poluarea apelor de coast din vecintatea locului
unde sunt inui petii.Vor exista i alte
posibiliti printre care petii transgenici n aquacultur pot fi dezvoltai n locaii ngrdite.ns
pn atunci eliberarea accidental a populaiilor de peti transgenici printre populaii naturale
trebuie luate n considerare dac petii sunt crescui n arcuri transgenice.
n plus pentru a mbuntii trsturi ce folosesc la producerea petilor pentru hran
transgeneza poate fi folosit pentru a genera un sistem model pentru monitoizarea riscurilor de
sntate i de screening a chimicalelor pentru a determina dac acestea provoac mutaii.Un
numr de sisteme biologice au fost proiectate pentru detectarea mutaiilor induse la microbi i
roztoare.
Dintre cerinele majore pentru determinarea mutaiilor n vivo,acestea nu trebuie s afecteze
viabilitatea dect dac sunt urmrite efectele genelor letale,de asemenea mutaiile induse trebuie s
produc un fenotip identificabil,gena intit s poat fi extras i o nou mutaie s fie uor de
determinat prin secvenializarea ADN-ului.
Un alt tip de mutaie a petilor transgenici la care se folosete o transgen plasmidic cu o
gen sensibil la antibiotice ca int pentru mutaie a fost dezvoltat.n acest caz Escherichia coli
este transformat cu ADN plasmidic recuperat de la petii transgenici tratai, creterea incidenei
coloniilor rezistente la antibiotice provenite din monstre tratate n comparaie cu monstre netratate
denot mutagenez.n general petii transgenici vor oferii o metod eficient din punct de vedere al
costurilor pentru determinarea mutagenilor chimici n apa de la surse poluante.

Organisme Modificate Genetic in prezent

Petele Fluorescent
Este primul oraganism transgenic,care a fost acceptat ca animal de companie.A fost
obinut prin ncruciarea unor gene strine cu cromozomi cunoscutului pete Zebra, nainte de
eclozarea icrei.Genele aparin unor vieti marine care eman lumin.S-au obinut astfel zebre roii
i verzi care n timpul zilei absorb lumina,iar noaptea devin fosforescente.Au fost create iniial
pentru a fi folosite drept sistem de avertizare n cazul polurii,dar cu timpul au ptruns pe piaa
petilor de acvariu.

oprla Umbuku
Acest organism este singurul din list care nu a fost proiectat cu scop practic,ci
pentru a demostra c este posibil.oprlei Umbuku i-au crescut aripi n urma modificrii ADN-ului
de ctre geneticienii din Zimbabwe.Se pare c Umbuku este urmaa speciei Prerodactile,care i-a
pierdut capacitatea de a zbura cu cteva milioane de ani n urm.Pn acum nu au fost produse
dect ase astfel de oprle zburtoare.

Arborele de hrtie
A fost creat pentru a reduce costurile de producie,dar i pentru a proteja
pdurile.Popularitatea reciclrii hrtiei din ultima perioad a stimulat civa cercettori suedezi s
creeze un copac cu frunze ptrate,care,o dat uscate,pot fi folosite pentru scris.

Dolion-ul
Acesta este probabil cel mai elocvent exemplu al evoluiei tiinei.Dolion-ul este
rezultatul combinrii genelor unui cine cu cele ale unui leu.Este similar tigrului (ncruciarea dintre
leu i tigru), excepie fcnd faptul c cel din urm se poate produce i n mediul natural,fr a
intervenii asupra ADN-ului.

Pianjenul ferig
Este singurul organism din lista,care a rezultat n urma combinrii dintre plant i
animal.A fost creat pentru a se studia ce anse de supraviuire are un pianjen ce se poate camufla
fa de unul obinuit.Rezultatele studiului nu au fost fcute publice nc.

Lemurat-ul
Este un animal de companie pentru oamenii foarte bogai din China.Aa cum i
sugerez i numele este rezultatul ncrucirii genelor dintre un lemur i o pisic.Este mai agresiv
dect o felin domestic obinuit,dar nu mai mult dect un cine Chihuahua.Numele tiinific al
acestei vieti este Prolos Fira.

BIBLIOGRAFIE:
1.Bernard R.Glick,Jack J.Pasternak Molecular Biotechnology Principles and
Applications of Recombinant DNA,Department of Biology,University of Waterloo
Waterloo,Ontario,Canada.
2.Jose Cibelli,Robert P.Lanza,Heith H.S.Campbell,Michael D.West Principiile
Clonrii,Editura Tehnic Bucureti,2007.
3.Anna Claybourne, Ilustrat de: Stephen Monrieff, Consultani tiinifici:
prof.referent Michael J.Reiss Noiuni despre Gene i ADN,Editura Aquila.
4.http://www.recolta.eu/ce-sunt-organismele-modificate-genetic-si-alimentele-obtinute-dinorganisme-modificate-genetic/
5.http://www.ecomagazin.ro/organisme-modificate-genetic-duse-la-extrem/
6.http://www.sanatateatv.ro/articole/alimentatie/omg/
7.http://www.yuppy.ro/articol/Health/2136/OMG-bucataria-din-laborator.html
8.http://vivanatura.ro/bio/?p=2126

http://admin.romania.indymedia.org/ro/2008/03/2464.shtml
http://www.agriculturaromaneasca.ro/produse/animalele-modificate-genetic-rolul-lorin-zootehnie-149-t10.html