Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Curs4. Bioprocese
Curs4. Bioprocese
1. Introducere
Natura este i va fi surs de inspiraie pentru om n dezvoltarea i proiectarea de noi
tehnologii. n natur se petrec procese complexe de sintez, fizic i chimic, ce evolueaz de
la sine, n condiii naturale, care de multe ori sunt de neneles pentru om. Un exemplu de
proces inspirat din natur este obinerea brnzeturilor i a produselor din lapte. De mii de ani
omul produce iaurturi i diverse tipuri de brnz, fr s fi cunoscut foarte exact mecanismele
prin care laptele este transformat n iaurt, de exemplu. n zilele noastre, iaurturile i
brnzeturile sunt produse la scar industrial astfel nct s fie acoperite cerinele pieei de
consum, cu indici de calitate ridicai. Necesitile crescnde ale omenirii i dorina omului de
a nelege i a reproduce procesele naturale au condus la apariia unui domeniu nou biotehnologia - care s se ocupe de nelegerea i reproducerea la scar industrial a
proceselor de interes ntlnite n natur. Biotehnologia cuprinde, ntr-un sens larg, procese
lansate la scar industrial n care sunt implicate organisme vii.
n zilele noastre, biotehnologiile sunt asociate n special cu obinerea pe cale
industrial a alimentelor i buturilor, mai ales pentru c omul aplic procedeele de obinere a
acestora din timpuri strvechi, fr s fi cunoscut mecanismele fizico-chimice care conduc la
sintetizarea alimentelor i buturilor, atribuind aceste realizri forei impresionante care este
natura. Din acest moment oamenii de tiin devin contieni de fora pe care o prezint
microorganismele i faptul c aceste creaturi minuscule joac un rol foarte important n viaa
de zi cu zi.
Toate aceste miracole nu au avut o explicaie tiinific pn n anul 1960, cnd
olandezul Van Leeuwenhoek descoper, folosind microscoape simple, lumea
microoorganismelor, introducnd lumii animalele minuscule n form se sfere, bastonae sau
spiral din apa de ru sau din decocturile de fn, i globulele ce se micau n mustul folosit
la obinerea berii [Chirvase i Caramihai, 2002]. De atunci i pn n zilele noastre domeniul
biotehnologiei a cunoscut o dezvoltare deosebit, prin prisma interesului crescnd acordat
acestui domeniul vast de ctre oamenii de tiin i datorit dezvoltrii sistemelor de msur i
a tehnicii de calcul ce permite implementarea unor structuri de conducere avansate.
Concepiile despre biotenologie i definiiile date acestui domeniu pun n eviden
strnsa legtur dintre biotehnologie i problemele de maxim interes ale dezvoltrii umane:
vindecarea bolilor, asigurarea unei alimentaii echilibrate i ieftine, disponibilitatea i costul
energiei, diminuarea polurii mediului, creterea calitii vieii n general. Rezultatele
raportate n literatura de specialitate confirm faptul c biotehnologiile dezvoltate i lansate n
practic sunt strns legate de soluionarea problemelor importante cu care se confrunt lumea
de astzi n medicin, agricultur, industriile chimic i alimentar, n procese de conservare,
epurare sau detoxifiere a mediului, precum i industria energetic, prin producerea pe cale
artificial a produilor utili pentru aceste domenii n medii controlate. Astzi, metoda de
obinere pe cale artificial a produilor utili este cunoscut cu numele generic de bioproces,
ns termenul are i un neles mai larg, ce nglobeaz orice proces n care sunt implicate
celule vii.
Bioprocesele implic manipularea organismelor vii (celule animale sau vegetale sau
microorganisme) astfel nct prin dirijarea dezvoltrii acestora n medii de cultur controlate
s se obin produi de interes economic. Creterea dirijat a microorganismelor implic
proiectarea i realizarea incintelor n care se va efectua cultivarea lor (bioreactoarele), precum
i soluionarea problemelor legate de asigurarea condiiilor optime de dezvoltare, astfel nct
n urma lansrii unui bioproces productivitatea s fie maxim, iar costurile de producie s fie
minime. Oferirea de soluii viabile n controlul bioproceselor este ngreunat de faptul c n
prezent nu sunt suficiente informaii legate de transformrile ce au loc la nivelul celulelor,
despre mecanismele ce determin aceste celule s se dezvolte i despre modalitatea n care
dezvoltarea celulelor sau a microorganismelor este afectat de variaii ale condiiilor din
mediul n care ele sunt cultivate. n prezent modelarea i conducerea bioproceselor reprezint
un subiect de mare actualitate n lumea tiinific. nelegerea fenomenelor complexe ce se
produc la nivelul organismelor vii vor continua s prezinte interes pentru cercettori, pentru a
putea avansa tehnologii prin care procesele viului s poat fi reproduse la scar industrial, cu
costuri minime i profit maxim. n acest context, controlul bioproceselor este un domeniu
important care poate ajuta la atingerea acestor obiective.
2. Modelarea bioproceselor
Cinetica
proceselor
biotehnologice
este
determinat
de
proprietile
microorganismelor, de particularitile i de modul de construcie al bioreactorului i nu n
ultimul rnd de condiiile i de mediul n care se face cultivarea. Influena acestor factori
conduc la dinamici de cretere complexe ce fac dificil reproducerea procesului i asigurarea
productivitii i a calitii constante a produsului de interes. Procesele biotehnologice sunt n
esena lor complexe, fiind sisteme multivariabile, neliniare, cu puternice legturi ntre
variabilele interne. n aceste condiii, modelele matematice nu pot s descrie aceste sisteme
dect ntr-o manier simplificat, datorit faptului c structura complicat a metabolismului
celulelor i microorganismelor, precum i mecanismele de autoreglare a acestuia nu sunt nc
complet cunoscute. Dinamicile diverselor faze prezente n sistemele biotehnice au influen
asupra condiiilor de operare din bioreactor. Legtura dintre variaiile condiiilor de operare i
fazele sistemului nu este cunoscut, motiv pentru care nglobarea acesteia n modelele
matematice ataate bioproceselor este tratat ntr-o form simplificat.
Conform clasificrii generale a modelelor utilizate pentru descrierea cineticilor
bioproceselor dat de Moser [Moser, 1988], acestea se mpart n modele deterministice i
modele probabilistice. La rndul lor, modelele deterministice pot fi:
nestructurate, ce consider celulele ca fiind sisteme de tip black box, avnd
importan doar cantitatea de celule, influenat doar de mediul nconjurtor;
structurate, ca modele ce in cont de structura celular, fie la nivelul
componentelor chimice, fie la nivelul morfologiei celulare, cu introducerea
efectelor legate de form, vrst sau dimensiune.
O alt clasificare a modelelor ce descriu biosistemele este fcut n funcie de
recunoaterea sau neglijarea faptului c o populaie celular este alctuit dintr-un numr
mare de indivizi (celule), care pot avea caracteristici (proprieti) diferite. Din acest punct de
vedere, modelele pot fi:
nesegregate, adic nu iau n considerare existena celulelor individuale;
segregate, ce expliciteaz prin model existena celulelor individuale cu proprieti
distincte.
n biotehnologie, cele mai utilizate modele pentru descrierea bioproceselor sunt
modelele simple, de tip nestructurat, nesegregat. Motivele ce au condus la utilizarea unor
astfel de modele simplificate sunt legate de cunotinele reduse pe care specialitii le au la
dispoziie despre mecanismele interne ce determin dezvoltarea celulelor sau
microorganismelor, precum i de dificultatea de a determina legturile dintre variabilele
interne ale bioproceselor i influena pe care o au condiiile de cultivare i variaiile acestora
asupra metabolismului microorganismelor. n general, modelele matematice ataate
bioproceselor sunt derivate din ecuaii de bilan masic i rezult sub forma unor ecuaii
difereniale ce ncearc s prezinte ct mai corect variaiile principalelor variabile din
bioproces.
Mrimile specifice ce intervin n evoluia bioproceselor sunt:
concentraia de biomas X (populaia de microorganisme);
servicii. Unitile acestui nevel pot efectua acelai tip de operaii i cu alt set de parametrii.
Prin selectarea setului corect de parametrii, operaiile pot fi adaptate unui produs specific.
Operaiile nu pot starta dect n cadrul unor condiii predefinite, iar mecanismele de
stopare/blocare sunt corelate cu starea unitii de procesare, fiind necesar implementarea
unor rutine care s trateze excepiile pentru a evita situaiile nedorite. La acest nivel, cerinele
legate de comportarea n timp sunt mai puin stricte dect n cazul buclelor de reglare aflate pe
primul nivel.
n cazurile bioproceselor de complexitate medie, cum ar fi procesele operate n modul
de cultivare batch, combinarea acestor dou nivele ale structurii de monitorizare i control a
bioproceselor este suficient pentru a asigura controlul automat. n cazul cultivrilor continue,
operatorul de proces trebuie s controleze un numr mare de operai secveniale, de la
startarea fiecrei operai pn la finalizarea ei. Aceast metod de conducere a bioprocesului
este mare consumatoare de timp, procedurile manuale de conducere nefiind recomandate n
controlul bioproceselor cu complexitate ridicat.
Cel de-al treilea nivel al sistemului de monitorizare i control al bioproceselor are rolul
de a planifica startarea operaiilor, conform unui scenariu stabilit anterior. Formal, acest
planificator poate fi reprezentat cu ajutorul unui graf n care fiecare nod corespunde unei
operaii ce ateapt s fie startat dup terminarea uneia sau mai multor operaii aflate n
derulare. Dac execuia unei operaii eueaz, unitatea de procesare ce efectua acea operaie
nu va atinge starea final ateptat de planificator. O strategie simpl de tratare a unei astfel de
excepii este de a se restarta manual operaia ce a euat n execuie. De ndat ce unitatea de
procesare va atinge starea final corect, planificatorul i va continua funcionarea prin
lansarea n execuie a urmtoarei operaii [Beyeler et al., 2000].
Din scurta prezentare a nivelelor ce compun sistemele de monitorizare i control ale
bioproceselor se remarc multitudinea de operaii pe care aceste sisteme trebuie s le
ndeplineasc, n condiiile n care multe dintre operaii sunt complexe.
Aspectele legate de controlul i monitorizarea bioproceselor prezentate pun n
eviden necesitatea de a se dezvolta sisteme de msur i monitorizare sigure i capabile s
ofere informaii n timp real. n condiiile n care calitatea i cantitatea de informaii vor
crete, atunci se vor putea proiecta sisteme de control avansate care s asigure rate de
producie i productivitate ridicate, cu costuri de producie minime. Progresele nregistrate n
domeniul tehnologiei informaiei asigur suportul necesar implementrii sistemelor de control
avansate, bazate pe tehnici ale inteligenei artificiale.
4. Studiu de caz: Modelarea i conducerea unui bioproces de producie enzimatic
n cadrul acestui proiect atenia a fost concentrat asupra modelrii, identificrii i
conducerii unui bioproces de producie a alcooloxidazei. Datele experimentale utilizate la
modelarea i identificarea bioprocesului de producie a alcooloxidazei au fost obinute n
urma efecturii a trei experimente, n care a fost cultivat drojdia Hansenula polymorpha CBS
4732 ntr-un reactor de tip air lift cu circulaie normal [Chirvase, 1998]. Mediul de cultur
conine (NH4)2SO4, KH2PO4, MgSO47H2O, CaCl2, extract de drojdie i microelemente (Fe, B,
Cu, I, Mn, Zn, Mo). Principalii parametrii de bioproces, reglai pe bucle independente, sunt:
temperatura, meninut constant ntre 37 38C ;
nivelul minim de oxigen (10% din concentraia de saturaie);
pH, meninut ntre limitele 4.5 5.
Bioprocesul a fost lansat n modul de operare fed-batch, n care singura surs de
carbon, metanolul, a fost introdus discontinuu n raport cu viteza de consum, pentru a
elimina posibilitatea inhibiiei prin substrat.
YX / S
dt
d ( XV )
dt
E
E
dV
0 S M
S M dt
XV
(1).
Dup prelucrarea acestor relaii rezult urmtorul set de ecuaii difereniale ce pun n
eviden variaiile principalelor mrimilor specifice ale acestui bioproces:
E
E
dV
S M
dt
S M
E
dX
X E
X S M
dt
V S M
dS
X E S S S E S E M
dt
YX / S
V
V S M
(2),
EM ES
dt
KS S V
S X
E
dS
S
max
S S EM ES
dt
K S S YX / S
V
V
(3),
unde max reprezint viteza maxim specific de cretere, K S este constanta de saturaie, iar
celelalte mrimi i parametri i pstreaz semnificaiile prezentate anterior.
Operarea bioprocesului de producie enzimatic a fost realizat n modul de cultivare
fed-batch, ceea ce nseamn c realimentarea mediului de cultur cu substrat sau cu cantiti
de mediu proaspt se face pe parcursul operrii fie intermitent (n porii), fie continuu, prin
adugarea substratului cu o vitez egal cu viteza sa de consum, astfel nct s se menin
concentraia de substrat la o valoare constant pe timpul cultivrii. Aceste intervenii asupra
bioprocesului determin modificri ale strii bioprocesului, respectiv vor determina
modificri ale volumului mediului de cultur, ale concentraiei de substrat sau ale
concentraiei de biomas. n modelara bioprocesului, va trebui s se in cont i de variaiile
principalelor mrimi de bioproces datorate modului n care s-a fcut cultivarea.
Setul de ecuaii (3) pune n eviden variaiile concentraiilor de substrat i biomas i
variaia volumului fazei lichide din reactor ntre momentele de discontinuitate. Prin momente
de discontinuitate se neleg acele momente de timp din evoluia bioprocesului n care se
preleveaz probe din mediul de reacie sau se adaug cantiti determinate de substrat sau
mediu proaspt. Fiecare astfel de moment de discontinuitate modific concentraiile de
substrat i biomas din reactor. Astfel, un adaos de substrat sau mediu va modifica
concentraia de substrat, respectiv concentraia de biomas din mediul de reacie i volumul
mediului de reacie. Dac se nlocuiete o cantitate de mediu, atunci se modific volumul
fazei lichide din reactor cu diferena dintre cantitatea adugat i cea scoas din reactor i
concentraia de biomas. La modelarea bioprocesului de producie enzimatic s-a inut cont de
aceste momente de discontinuitate. Acestea au fost modelate sub forma unor ecuaii de bilan
de tipul:
Cantitate nainte (k) + Adaos = Cantitate recoltat + Cantitate dup (k+1),
rezultnd urmtoarele ecuaii ce descriu momentele de discontinuitate pentru volum,
concentraia de substrat i concentraia de biomas:
Vk ASk AMk PMk Vk 1
S k M Vk ASk S PMk M S k S k 1 M Vk 1
X kVk PMk X k X k 1Vk 1
(4),
unde V, S i X reprezint volumul, respectiv concentraiile de substrat i biomas la
momentele de timp k i k+1, M i S sunt masele volumice ale mediului de cultur i a
E M [g/L
]
E S [g/L]
Experimentul 1
Experimentul 2
Experimentul 3
0.032
0.054
0.079
0.003
0.009
0.008
a) Experimentul 1
c) Experimentul 3
b) Experiment 2
Din cele trei grafice se remarc faptul c modelul matematic (3) urmrete destul
fidel datele experimentale. Cel mai bun rezultat este pentru evoluia volumului mediului
cultur. Variaiile concentraiei de substrat i a concentraiei de biomas sunt apropiate
realitate.
Parametrii optimi ai bioprocesului rezultai n urma celei de-a doua etape
identificare sunt prezentai n tabelul urmtor, pentru cele trei experimente.
de
de
de
de
max [1/h]
Experimentul 1
0.3
KS
[g/g]
0.0005
Experimentul 2
Experimentul 3
0.07
0.42
0.0006
00014
YX / S [
g/g]
0.3
0.26
0.22
S 0 [g/L]
X 0 [g/L]
0.00011
7
0.0046
0.00013
0.009
2.98
0.01