GENETICA BACTERIAN

Ereditatea: nsuirea tuturor vieuitoarelor de a

transmite caracterele specifice speciei la urmai
Variabilitatea: apariia unor caractere diferite de cele
ale genitorilor.
Suportul material al ereditii: ADN.
Structura i replicarea acestuia este similiar cu cea de
la celulele eucariote.
Proporia de baze complementare este constant n cadrul
unei specii. Raportul adenin-timin/guanin-citozin (AT/GC)
servete drept criteriu taxonomic de baz n clasificarea
modern a bacteriilor.

I. Organizarea materialului genetic la

bacterii
Repliconi = formaiuni genetice ce se replic independent

cromozomul bacterian
elementele genetice extracromozomiale
plasmidele
genomul bacteriofagilor

elementele genetice transpozabile

fragmentele de inserie
transpozonii).

1. Cromozomul bacterian haploid =

echivalent nuclear
codific informaiile absolut necesare
supravieuirii speciei n condiii normale
organizarea supercoil sau supertwist a ADN
(dublu spiralat spre dreapta i suprahelicat spre
stnga) asigur mpachetarea economic a ADN
i o configuraie optim activitii funcinale a
ADN (replicare, transcripie, recombinare).

2. Formaiunile genetice
extracromozomiale
2.1 Plasmidele : molecule circulare de ADN
autonome, libere n citoplasm care se replic
independent de cromozom

conjugative - se pot transfera singure la alte bacterii

(plasmidele R)
neconjugative - care nu pot prsi ele nsi bacteria de
origine, ci numai prin intermediul unui alt plasmid conjugativ sau
a unui bacteriofag (de exemplu plasmidul care codific secreia
de beta-lactamaz la S.aureus)
episomi, care se pot integra prin recombinare n
cromozomul bacterian (combinaii genetice noi prin rearanjarea,
materialului genetic cuprins n dou uniti genetice diferite),
pierzndu-i autonomia de replicare (plasmidul F sau factorul
de fertilitate).

Contin:

determinanii genetici eseniali ai

plasmidelor codific informaiile legate de
replicarea lor autonom

determinanii accesori codific caractere

fenotipice neeseniale supravieuirii celulei
bacteriene n condiii naturale
gene de transfer (tra),
gene de rezisten la antibiotice (factorul R),
gene de secreie a unor toxine etc.

Plasmide de interes medical

A. Plasmidele de virulen poart determinanii

genetici ai unor factori de virulen
secreia de enterotoxina (termolabil i
termostabil)
factorul de colonizare la Escherichia coli,
hemolizina la Staphylococcus aureus, Streptococcus
faecalis i E.coli
exfoliantina la S. aureus
gena de invazivitate la Shigella

B. Plasmidele R -de rezisten (Factorul R) sunt

molecule circulare de ADN care constau n esen din
dou regiuni genetice:
genele care codific rezistena la antibiotice R,
unice sau multiple (prin aglomerarea mai multor gene
de rezisten R, pe acelai plasmid, prin fenomenul
transpoziiei repetate de material genetic)
genele FTR care confer
plasmidului capacitatea
de a se transfera

RTF

Tn 21

Tn 8
Tn 9

0
1
n

R determinant

Plasmidcarryingmanyantibioticresistancegenes

FromS.N.CohenandJ.AShapiro,TransposableGeneticElements.Copyright1980byScientificAmerican,Inc.

Peste 90% din tulpinile de spital prezint o rezisten de

tip plasmidic:
familia Enterobacteriaceae, genurile:Escherichia,
Salmonella, Shigella, Proteus, Providencia, Klebsiella,
Serratia
genurile Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrio,
Yersinia, Pasteurella, Campylobacter, Haemophilus,
Neisseria, Bacteroides, Staphylococcus, Streptococcus,
Bacillus, Clostridium, i Corynebacterium.
Plasmidele prezente la bacilii gram-negativi sunt mai
mari dect cele evideniate la bacteriile gram-pozitive.

C. Plasmidul F plasmid de de sex factor de

fertilitate i

conine genele de transfertra

-se pot transmite prin conjugare-mediaz
transferul de gene de la o celul donor la una
receptor
-n funcie de prezena factorului
bacterii F- lipsite de factorul F, denumite
celule femele i care sunt receptoare de material
genetic,
bacterii F+, masculine, care au factorul F+,
autonom, ca plasmid n citoplasm i care sunt
celule donoare,
bacterii Hfr care au factorul F+ integrat n
cromozom, de asemenea masculine,
bacterii F care au factorul F+ ca plasmid
autonom, dup ce acesta a fost integrat n
cromozom i l-a prsit rupnd un fragment
ADN din cromozom.

Principalele caracteristici ale

plasmidelor

2.2 Bacteriofagii
virusuri care pazariteaz bacteriile
Morfologie.
un cap hexagonal alctuit dintr-un nveli proteic
caracteristic virusurilor (capsida) i adpostete ADN
un gt
o prelungire numit picior (coad). Coada este un
cilindru rigid nvelit ntr-un manon proteic asemntor
miozinei i se termin cu o plac hexagonal ce conine o
enzim de tipul lizozimului. De placa bazal se aprind 6
fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe suprafaa
bacteriei.

Structura
bacteriofagului

Cap, capsid

Manon
contractil

Coa
d

Fibrele
Placa
bazal

Infecia celulei gazd cu bacteriofag

Adsorbia fagului

Ataarea
ireveversibil-prin

existena unor receptori de

perete specifici

Contracia manonului

Injectarea acidului
nucleic

Tipuri de bacteriofagi

Genomul fagic ptruns n celul duce la sinteza unor

bacteriofagi identici cu cei din care a provenit ADN.
ADN-ul se replic ribozomii bacterieni vor sintetiza
proteinele capsidale i ale cozii
Asamblarea noilor componente bacteriofagul
prsete celula=
bacteriofagi litici sau viruleni fagi care se
multiplic n interiorul celulei gazd, lizeaz celula i
elibereaz fagii progeni = ciclu litic
lizogeni sau temperai: fagi care se integreaz
n cromozomul celulei gazd dar care pot iniia
oricnd un ciclu litic, expresia majoritii genelor
fagice fiind reprimat : profag sau fag lizogen

Consecinele lizogeniei
profagul codific el nsui unele caractere pe care le
dobndete bacteria lizogen.
toxigeneza la bacilul difteric care este codificat
de un profag ce se afl n cromozomul bacterian.
Tulpinile de bacili difterici care nu sunt lizogenizate
de acest profag, nu sunt capabile s secrete toxina
i sunt, deci, nepatogene,
transducia- transmiterea de material genetic prin
intermediul bacteriofagilor

2.3 Elemente genetice transpozabile

Barbara Mc Clintock, 1931, 1952, 1983(gene
sltree)
Fragmentele de inserie (IS)
ABCDEFG

Transpozaz

GFEDCBA

fragmente mici de ADN (fac parte in mod normal

din plasmid/cromozom)
cu limite structurale bine precizate
se pot integra repetat n mai multe situsuri dintr-un
genom.
Transpozoni (Tn)
Constau in 2 IS
conin i alte gene dect cele ce codifica transpoziia
IS

Gene de rezisten

IS

IS

Gene de rezisten

IS

II. Variabilitatea la bacterii

Este o latur a geneticii -important n
medicina practic
Mutaia
Transfer de material genetic
Transformare
Transducie
Conjugare
Transpoziie

1. Mutaia

Modificri spontane ale genomului (modificri ale

secvenei de nucleotide din gen)produse de : raze X,
UV, ageni alchilani, etc.
Punctiform afecteaz 1 nucleotid
Inseria (adugare a sute de nucleotide)
Deleia (pierdere )
Asigur:
rezistena la chimioterapice,
structur antigenic modificat,
pierderea unor receptori specifici pentru bacteriofagi,
pierderea capacitii de sintez a unui metabolit

Dpdv medical:
one-step:rezistena brusc la AB
multi-step:bacteria devine rezistent prin mutaii succesive

2. Transferul de material
genetic

2.1 Transformarea :
Reprezint transferul de material
genetic de la o celul donor la una
receptor sub forma de ADN pur,
eliberat fie prin liza celulei donor, fie
prin extracie chimic
1928 Frederick Griffith.

2. Transferul de material genetic

2.1 Transformarea
Streptococcus, Haemophilus, Bacillus, Neisseria,
Salmonella
se petrece nu numai ntre tulpinile aceleiai specii, ci
i ntre specii diferite
stare de competen - se modific structura
peretelui celular, care devine mai poros, ncrcat
electropozitiv, favoriznd legarea ADN-lui strin
are loc n medii unde triesc mai multe specii
bacteriene(colon) i sunt puse n libertate cantiti
mai mari de de ADN
Se practic azi n tehnici de inginerie genetic

2.2 Transducia :
transfer de gene cromozomiale de la o celul bacterian la
alta, mediat de bacteriofagi
2.2.1.Transducia generalizat
este mediat de fagii viruleni, litici, care dup ptrunderea n
celula bacterian se multiplic i determin liza celulei gazd.
n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se
fragmenteaz
ocazional: un fragment cu o dimensiune apropiat de cea a
genomului fagic, n locul genomului fagic. se integreaz n capsida
bacteriofagului
aceti fagi pot ptrunde n alte celule bacteriene injectndule ADN-ul, ce provine de fapt din genomul celulei donoare.
ADN-ul se va integra n cromozomul celulei receptoare prin
recombinare, conferindu-i acesteia caractere noi:
rezistena la chimioterapice,
proprieti ce in de patogenitatea bacteriei etc

Transductia Generalizata
Infectarea Donorului
Replicarea fagului si degradarea AND- ului gazdei
Asamblarea particulelor fagului
Eliberarea fagului
Infectarea receptorului
Recombinare legitima (omologa)

Transducia specializat:
mediat de fagii temperai.
Dup ptrunderea n celula bacterian a ADN-lui
bacteriofagului temperat, acesta se inser n cromozom prin
recombinare sub forma de profag
n anumite condiii are loc un proces de derepresie i
genomul bacteriofagic prsete cromozomul bacterian
devenind din nou autonom si iniiaz un ciclu litic
cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa din
acesta un fragment de ADN care va rmne legat de
genomul bacteriofagic
bacteriofagul va putea intra n alt celul integrndu-se n
cromozomul acesteia tot sub forma de profag.
Fragmentul provenit de la prima celul bacterian poate s
codifice diferite caractere
rezistena la antibiotice,
secreia unor enzime, toxine etc., ce se vor manifesta
fenotipic la noua bacterie gazd.

2.3 Conjugarea

transferul de material genetic de la o

bacterie donoare la una receptoare printrun proces de mperechere, ce se realizeaz
prin contactul direct dintre cele dou celule.
Prin conjugare se pot transmite plasmide,
precum i gene cromozomiale (prin intermediul
factorului F+) .

Conjugarea la BGN
Factorul F+ poate fi situat pe:
plasmid transfer conditionat de
existenta genelor tra, responsabile de
sinteza sex-pilului si transferul
plasmidului
sau pe cromozom-transfer de gene
cromozomale. Aceste celule , care au
factorul F integrat in cromozom, numite
Hfr (frecenta mare a recombinarii genelor
de la celula donoare cu cele de la celula
receptoare).

F+

F+

Hfr

Hf
r

Hf
r

F-

F-

Hf
r

Hf
r

F-

F-

Transferul prin conjugare a plasmidelor la

bacilii gram negativicondiionat de prezena genelor de
transfer tra
incepe cu sinteza sex-pilului care va adera
de receptori specifici prezeni pe peretele
celular al bacteriei receptoare
apoi - replicarea de transfer a plasmidului
o caten parental de ADN va rmne n celula
donor, iar a doua va trece n celula receptoare,
pe tiparul lor sintetizndu-se catene
complementare.

Dpdv medical importante sunt plasmidele

conjugative de rezisten R. Proprieti:
spectrul de gazde: circul ntre specii diferite. Acest
transfer are loc i n laborator i n macroorganism. (s-a
descris transferul de plasmide de la bacilul coli nepatogen
la salmonele sau shigelle. Nu s-a observat ns transferul
plasmidelor de la BGN la BGP);
determinanii de rezisten R: caracteristici
pentru plasmidele conjugative sunt determinanii de
rezisten multipli. S-au evideniat astfel la tulpinile
izolate din spital plasmide ce au factori de rezisten fa
de toate chimioterapicele uzuale (ampicilina,
cefalosporine, streptomicina, tetraciclina, cloramfenicol,
kanamycina, gentamicina, sulfonamide).

Conjugarea la bacterii gram-pozitive

procese de mperechere i la bacteriile gram-pozitive

Streptococcus, Streptomyces, Clostridium
celula receptoare produce un peptid cu mol. mic
(GM=1000 daltoni) care determin sinteza unor
substane proteice de agregare de ctre celula
donoare cu afinitate pentru unele substane adezive de
pe suprafaa receptorului
se produce astfel o legtur strns ntre receptor i
donor cu formarea unei puni intercelulare care permite
transferul de material genetic.

2.4. Transpoziia
integrarea ntr-un genom al unui elemente genetic
transpozabil din aceeai molecul de ADN sau din alta
prezent n aceeai celul .
Clasa I-transpoziia se face pe baza translocrii
conservative(secvena se mut de la donor la receptor
fr reduplicarea Tn)
IS au n jur de 1000 baze i fac parte n mod normal
din cromozom sau plasmide
sunt prezente n mai multe copii i flancate la cele
2 capete ale aceleiai baze, dar n ordine invers
Nu confer caracter nou celulei-pot produce
modificri n expresia genelor
Tn compui = 2 Is i delimiteaz determinani de
rezisten sau alte caractere
Clasa II
Clasa III

Inseria oricrei gene ntre dou elemente

transpozabile face posibil transferul ei prin
recombinare neomolog, n aceeai celul pe o
molecul de ADN nenrudit structural.
Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii,
transpuneri de determinani genetici de pe un plasmid
pe altul sau chiar fuzionarea stabil a unor repliconi
complei, de pild a dou plasmide.
Evoluia rezistenei la antibiotice a bacteriilor nu
poate fi conceput astzi fr fenomenul de
transpoziie.
Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de
formarea plasmidelor cu multirezisten, prin
inserarea succesiv pe un plasmid a
determinanilor genetici de rezisten situai ntre
dou elemente transpozabile de pe alte plasmide.

Integronii

Definitie: sisteme de captura si

expresie a genelor sub forma de casete.
Casetele sunt elemente mobile
capabile sa fie integrate sau excizate
printr-un mecanism de recombinare
specifica, mediat de o integraza.

Integronii

Structura: incapabili de autoreplicare,

integronii sunt purtati pe cromozom sau
plasmid, sau pot fi vehiculati printr-un element
transpozabil.
transpozabil
Sunt constituiti dintr-o regiune 5' inclusiv o
gena intI care codeaza o integraza , un site
de atasament attI si un promotor.

Integronii

Exista mai multe clase de integroni

definite in functie de natura genelor
care codifica integraza.
Trei dintre ele (clasele 1, 2 ,3) sunt bine
caracterizate si sunt implicate in
diseminarea rezistentei la antibiotice.

Integronii
Integronii difera de transpozoni prin mai
multe caracteristici:
Casetele nu contin gene care sa codifice
proteinele responsabile de mobilitatea lor,
recombinaza este prezenta pe partea
imobila a integronului
Casetele nu sunt flancate la extremitati
de secvente repetitive

Au fost descrise peste 60 de casete

implicate in rezistenta la antibiotice sau
antiseptice :

Studii epidemiologice demonstreaza

raspandirea integronilor de clasa 1 la
diferite bacterii Gram-ngative :
Entrobacterii, Pseudomonas, Vibrio,
Acinetobacter, Campylobacter.

Ingineria genetic
Existena vectorilor (plasmide, bacteriofagi i n
ultimul timp descoperirea existenei unor transpozoni ce
se pot transmite de la o celul bacterian la alta) permite
transferul de gene celulei bacteriene, ceea ce
consituie baza ingineriei genetice.
Bacteria preferat a ingineriei genetice este E.coli, care
n mod natural nu este capabil de transformare, dar
creia prin clonare i s-au introdus n genom cei mai
diveri determinani genetici provenind de la organisme
ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i animalele.
Prin aceast tehnic se introduc n genomul bacterian
gene care codific sinteza unor substane ca, de exemplu,
interferoni, insulin, STH etc., a cror obinere pe cale
chimic ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare.
costisitoare

Aplicaiile biotehnologiei
moleculare n diagnosticul clinic

Au permis apariia unei noi discipline:

diagnosticul molecular reprezentnd
utilizarea probelor de acizi nucleici n
diagnosticul bolilor
boli infecioase,
neoplasme,
boli ereditare
O alt aplicaie : amprenta ADN permite diferenierea indivizilor prin
utilizarea unor fragmente minuscule de
esut sau probe de snge