Capitol III

III.
ASIGURAREA CALITII I MANAGEMENTUL N LABORATOARELE CARE I DESFOAR ACTIVITATEA N DOMENIUL CONTROLULUI I MONITORIZRII MEDIULUI INCLUSIV AL POLURII SONICE I ELECTROMAGNETICE
Lucrri de laborator
III. ASIGURAREA CALITII I MANAGEMENTUL N LABORATOARELE CARE I DESFOAR ACTIVITATEA N DOMENIUL CONTROLULUI I MONITORIZRII MEDIULUI INCLUSIV AL POLURII SONICE I ELECTROMAGNETICE
Lucrri de laborator
Liliana CRUCERU, Rodica DEBIASI, Ileana NICULESCU, Elena BUCUR
129
Lucrri de laborator
III.1. VALIDAREA METODELOR DE ANALIZ

III.1.1. CONSIDERATII TEORETICE Validarea este confirmarea prin examinare i predicie a unei evidene obiective conform creia cerinele particulare unei anumite utilizri sunt ndeplinite (conform ISO 8402:1994). Validarea metodei nseamn: -Procesul de stabilire a caracteristicilor de performan i limitelor unei metode i identificarea influenelor care pot schimba aceste caracteristici i ct de mult . Ce analii se pot determina, n ce matrice i n prezena cror interferene? n aceste condiii ce nivele de exactitate i fidelitate pot fi atinse? -Procesul de verificare a faptului c o metod corespunde scopului, de exemplu, pentru rezolvarea unei probleme analitice particulare. Verificarea este confirmarea prin examinare i predicie a unei evidene obiective conform creia cerinele specificate sunt ndeplinite (conform ISO 8402:1994). Este necesar s se fac diferena dintre validare i verificare. Verificarea se aplic metodelor care sunt deja standardizate iar validarea trebuie facut pentru: metode nestandardizate; metode elaborate/dezvoltate n laborator; metode standardizate utilizate n alt scop dect cel propus; extinderea i modificarea metodelor standardizate. n studiile de validare pentru metodele analitice pot fi se determinai urmtorii parametrii: limit de detecie; limit de cuantificare; domeniul de lucru; selectivitate; sensibilitatea robusteea; recuperarea; exactitatea; fidelitatea;
130
Lucrri de laborator
repetabilitatea; reproductibilitatea. Parametrii de performan care se testeaz sunt selectai funcie de cerinele analitice conform indicaiilor din tabelul III.1. Tabel III.1. Cerine analitice i parametri de performan corespunztori Cerine analitice Rspuns calitativ sau cantitativ Parametri de performan corespunztori Confirmarea identitii, selectivitii/specificitii Limita de detecie Limita de cuantificare Recuperare Limita de detecie Limita de cuantificare Domeniul de lucru Recuperarea Exactitatea Repetabilitate Reproductibilitate Selectivitate/specificitate Robustee Reproductibilitate Exactitatea Reproductibilitatea
Pentru analitul prezent n mai mult de o form, este de interes analitul total, liber sau extractibil Analitul(ii) de interes i cel mai posibil nivel prezent (%, g g-1, ng g-1 etc.) Nivelul de precizie i ezactitate al rspunsului , gradul de incertitudine permis Interferenele posibile Compararea rezultatelor cu rezultatele altor laboratoare Compararea rezultatelor cu rezultatele specificaiilor externe
Limita de detectie (LoD) reprezint: coninutul cel mai mic care poate fi msurat cu certitudine statistic rezonabil; cea mai mic concentraie de analit dintr-o prob care poate fi detectat, dar nu neaprat cuantificat, n condiiile stabilite ale ncercrii; coninutul cel mai mic de analit, dac este prezent, care va fi detectat i care poate fi identificat. Cnd msurrile implic concentraii sczute (analiz n urme) trebuie cunoscut care este cea mai joas concentraie de analit care poate fi determinat cu ncredere de ctre metod. Aceast problem trebuie s fie analizat statistic i s fie propus un domeniu al criteriilor de decizie. n mod normal este suficient s se furnizeze o indicaie a nivelului la care detectarea devine problematic.
131
Lucrri de laborator
Pentru determinri cantitative , se analizeaz 10 probe oarbe independente (a) sau 10 probe oarbe independente fortificate la cea mai sczut concentraie acceptat (b), msurate o singur dat fiecare, i se calculeaz media i abaterea standard (s) a probei oarbe pentru fiecare set de msurri. Se exprim Lod ca i concentraia de analit corespunztoare la: a) media valorii probei oarbe +3s b) 0+3s sau media valorii probei oarbe +4,65s Pentru determinri calitative este suficient s fie o concentraie limit sub care specificitatea nu mai poate fi identificat. Deci, se analizeaz probe oarbe injectate cu analit pentru un ir de nivele de concentraii. Pentru fiecare nivel de concentraie va fi necesar s se fac 10 msurri repetate independente i se va realiza o curb de rspuns a rezultatelor % pozitive sau negative fa de concentraie. Din aceast curb va fi posibil s se determine, prin interpolare, limita de concentraie la care ncercarea devine nesigur. n general, LoD, exprimat n termeni de concentraie c L sau cantitate qL este obinut din cea mai mic msurare x L care poate fi detectat ntr-o procedur analitic cu certitudine rezonabil. Valoarea lui xL este dat de ecuaia: xL = xbl + ksbl n care: xbl este media msurrilor blankului/probei oarbe de reactivi; s bl este abaterea standard a msurrilor blankului/probei oarbe de reactivi; k este un factor numeric ales funcie de nivelul de ncredere dorit.
Tabel III.2. Limita de detecie Msurtori LIMITA DE DETECTIE ( LoD) 10 probe blank independente masurate o singur dat sau 10 probe blank fortificate cu cea mai scazut cantitate de analit detectabil , msurate o singur dat LoD = 3s + X in care: s = deviaia standard a probei blank sau a probei blank fortificat cu analit X = valoarea msurat sau media masurtorilor -funcie de tipul de metod testat
Calcul/Estimare
Valoare optim
Limita de cuantificare (LoQ) cunoscut ca Limit cuantificabil nseamn: coninutul egal sau mai mare dect punctul cel mai mic al concentraiei de pe curba de etalonare;
132
Lucrri de laborator
cea mai joas concentraie de analit care poate fi determinat cu nivel acceptabil de fidelitate a repetabilitii i exactitii; caracteristicile de performan care caracterizeaz abilitatea unui proces de msurare chimic la cuantificarea adecvat a analitului. Abilitatea de cuantificare este n general exprimat n termeni ai valorii semnalului sau analitului care vor produce estimaii avnd o abatere standard relativ specific (RSD), de obicei de 10%. Formula de calcul este: LoQ = kQQ n care: -Q este abaterea standard n acel punct; k Q este multiplul a crui reciproc este egal cu RSD. Valoarea pentru kQ recomandat de IUPAC este 10. Se analizeaz: 10 probe oarbe independente msurate o singur dat fiecare i se calculeaz abaterea standard (s). LoQ este exprimat ca o concentraie de analit ce corespunde la o valoare a probei oarbe + 10s; cote pri fortificate ale unei probe oarbe cu diferite concentraii de analit apropiat de LoD i se calculeaz abaterea standard (s) a valorii analitului la fiecare concentraie. Se reprezint grafic s fa de concentraie i se stabilete o valoare pt LoQ prin interpolare.
Tabel III.3. Limita de cuantificare Msurtori LIMITA DE CUANTIFICARE ( LoQ) 10 probe blank independente msurate o singur dat sau 10 probe blank fortificate cu cea mai scazut cantitate de analit detectabil , msurate o singur dat LoQ = 10s + X n care: s = deviaia standard a probei blank sau a probei blank fortificat cu analit X = valoarea msurat -funcie de tipul de metoda testat
Calcul/Estimare
Valoare optim
Domeniul de lucru -se determin intervalul de concentraie al analitului sau valoarea pentru care poate fi aplicat metoda. n interiorul intervalului de lucru poate exista un interval linear al rspunsului. Se poate lua n considerare i un interval nelinear n cazul unor situaii n care nu intervin variaii sau al utilizrii calculului pe calculator. n general, studierea linearitii implic cel puin 10 concentraii diferite/valori corespunztoare. Oriunde, n domeniul de lucru, sunt necesare mai
133
Lucrri de laborator
multe puncte de calibrare (de preferat cel puin 6). Este important s se rein c intervalul de lucru i linearitatea pot fi diferite pentru diferite matrice datorit interferenelor dac acestea nu sunt eliminate.
Tabel III.4. Domeniul de lucru Msurtori Calcul/Estimare DOMENIUL DE LUCRU Din trasarea curbei de etalonare cu 6-10 puncte avnd concentraii cresctoare i echidistante -Limita inferioar corespunde cu LoD sau LoQ -Limita superioar se stabilete calitativ prin examinarea vizual a domeniului de liniaritate al curbei de calibrare sau prin calculul coeficientului de regresie -n anumite situaii se pot folosii i curbe neliniare
Valoare optim/Interpretri
Selectivitatea Selectivitatea (sau specificitatea) nseamn abilitatea unei metode de ncercare de a determina cu exactitate i specificitate analitul de inters n prezena altor componente dintr-o matrice, n condiii prestabilite ale metodei Conform Compendiului de Terminologie Chimic IUPAC (1987)[14], selectivitatea n analize nseamn: pentru analize calitative gradul n care alte substane interfer n determinarea unei anumite substane conform unei proceduri prestabilite pentru analize cantitative termen utilizat mpreun cu alt substantiv (de exemplu constant, coeficient, index, factor, numr) pentru caracterizarea cantitativ a interferenelor. Este necesar s se stabilesc faptul c semnalul produs la faza de msurare, sau alt proprietate msurat, care a fost atribuita analitului, se datoreaz numai analitului i nu unei prezene chimice sau fizice similare sau apare din coinciden. Aceasta nseamn confirmarea identitii. Selectivitatea/ specificitatea sunt msuri care estimeaz sigurana msurrilor n prezena interferenelor. Selectivitatea unei metode este de obicei investigat prin studierea abilitii de msurare a analitului de interes n poriuni de ncercare n care s-au introdus n mod deliberat anumii interfereni. Deci, n primul rnd: analiza probelor i a materialelor de referin prin metoda aleas sau alte metode independente i utilizarea tehnicilor de confirmare pentru a evalua abilitatea metodei de a confirma identitatea analitului i abilitatea sa de a msura analitul
134
Lucrri de laborator
separat dintre alte interferene. Se decide ct de mult datele obinute sunt n mod rezonabil necesare pentru a furniza suficient ncredere. analiza probelor cu coninut posibil de interferene n prezena analiilor de interes i examinarea efectelor interferenelor prezena intereferentului intesific sau inhib detecia sau cuantificarea msurandului. Dac detecia sau cuantificarea este inhibat de interferene, este necesar o dezvoltare suplimentar a metodei. Specificitatea se consider a fi 100% selectivitate. Sensibilitate Sensibilitatea este panta curbei de rspuns, de exemplu modificarea rspunsului echipamentului de msurare funcie de modificarea concentraiei de analit.
Tabel III.5. Sensibilitate Msurtori Calcul/Estimare SENSIBILITATE Din trasarea curbei de etalonare cu 6-10 puncte avnd concentraii cresctoare i echidistante b= panta curbei de etalonare sau S = Y/ C n care: S = sensibilitatea Y= variaia absorbanei C = variaia concentraiei -variaz pe diferite domenii de concentraie
Valoare optim
Robustee ncercarea de robustee analizeaz comportamentul unui proces analitic atunci cnd se efectueaz mici modificri ale condiiilor de lucru /parametrilor de operare ct i prin evaluarea efectelor de lung durat asupra rezultatelor.
Tabel III.6. Robustee ROBUSTEE Msurtori
Pe 4 subprobe cu aceiai concentraie cunoscut se fac msuratori n condiiile n care se modific 3 factori din modul de lucru al analizei. Cei 3 factorii (A,B ,C ) depind de etapa de analiz care se testeaz. De exemplu, n cazul etapei de extracie n solveni cei 3 factori pot fi: -timpul de agitare al plniei de separare, -numrul de mL de agent de extracie, -temperatura probei supuse extreciei . n cazul analizei GC propriu- zise cei 3 factori pot fi: -lungimea coloanei cromatografice
135
Lucrri de laborator -debitul gazului purttor -temperatura de lucru Variaiile se fac n intervale de 10% sau mai mici dac apar modificri importante. Cu (+) se marcheaz factorii care au fost amplificai iar cu () factorii nemodificai sau cei micorai. Se aplic schema Youden i Steiner Experiment Factori Rezultat A B C 1 + + + Y1 2 + Y2 3 + + Y3 4 Y4 Efect A = ( Y A+ - Y A- ) /2 In care : Y A+ este suma rezultatelor Yi unde factorul A are valori + Y A- este suma rezultatelor Yi unde factorul A are valori Efect B = ( Y B+ - Y B- ) /2 Efect C = ( Y C+ - Y C- ) /2 -Se stabilete efectul factorului modificat prin aplicarea testului t-Student sau se consider efect puternic modificator n cazul n care : Efectul A ( B,C) > 1,4 s cc s cc = deviatia standard a metodei iniiale stabilit din diagrama de control Metoda este robust dac aceste mici modificri n parametri de lucru nu conduc la modificri importante ale valorilor calculate.
Calcul/Estimare
Recuperarea Recuperarea este fracia de analit adugat unei probe (prob fortificat sau injectat) nainte de msurare. Procentul de recuperare R% se calculeaz cu formula: R% = [(CF-CU)/CA] x 100 n care: CF este concentraia de analit msurat n proba fortificat; CU este concentraia de analit msurat n proba nefortificat; CA este concentraia de analit adugat n proba fortificat. Recuperarea poate fi determinat analiznd MRC i raportnd concentraia gsit la valoarea certificat. Exactitatea
136
Lucrri de laborator
Exactitatea nseamn gradul de concordan ntre rezultatele unei ncercri i valoarea de referin acceptat . Validarea metodei caut s cuantifice exactitatea rezultatelor prin evaluarea erorilor sistematice i aleatoare. Exactitatea are doua componente: justee i fidelitate. Justeea unei metode reprezinta gradul de concordan ntre valoarea medie obinut dintr-un ir mare de rezultate ale unei ncercri i valoarea de referin acceptat. Justeea este n mod normal exprimat n termeni de eroare de justee i poate fi stabilit folosind i analiznd Materiale de Referin Certificate (cu valoarea concentraiei i a intervalului de ncredere cunoscute) sau analiznd aceleai probe prin metoda studiat i o alt metod standardizat. Apoi este necesar s se compare rezultatele obinute i s se verifice dac rezultatul obinut prin metoda dezvoltat se ncadreaz n intervalul de ncredere.
Tabel III.7. Exactitate Msurtori Calcul/Estimare EXACTITATE 10 analize repetate pe o prob de concentraie cunoscut preparat din material de referin ( substan etalon) Exactitate % = ( X - ) x 100 n care: X = media celor 10 determinari = valoarea reala a materialului de referinta ( substanei etalon) X 100 Bias % =
-100% -Se face evaluarea valorii obinute prin aplicarea testului t -student
Fidelitatea este o msur a gradului de concordan ntre rezultatele independente ale unei ncercri obinute n condiii prevzute i se exprim de obicei n funcie de abaterea standard care descrie distribuia rezultatelor. Se determina prin efectuarea a 10 analize repetate pe o prob de concentraie cunoscut preparat din material de referin sau din substan etalon. Repetabilitatea Repetabilitatea i reproductibilitatea reprezint dou msurri ale fidelitii . Repetabilitatea (cea mai mic fidelitate ateptat) d informaii asupra variabilitii metodei cnd se fac msurri succesive ale aceluiai msurand de ctre un singur analist, pe acelai echipament, ntr-o perioad scurt de timp. De obicei repetabilitatea i reproductibilitatea depind de concentraia de analit i deci trebuie s fie determinate pe un numar de concentraii relevante.
137
Lucrri de laborator
Pentru a determina repetabilitatea, acelai analist trebuie s analizeze aceleai probe sau Materiale de Referin fcnd 10 determinri pe acelai echipament la intervale scurte de timp. Apoi se determin media i abaterea standard pentru fiecare concentraie.
Tabel III.8. Fidelitatea Msurtori Calcul/Estimare FIDELITATEA 10 analize repetate pe o prob de concentraie cunoscut preparat din material de referin (substan etalon) CV ( RSD) % =
s 100 X
Valoare optim Tabel III.9. Repetabilitate Msurtori
n care: X = media celor 10 determinri s = deviaia standard -funcie de tipul de metod testat
Calcul/Estimare Valoare optim
REPETABILITATE 10 msurtori repetate pe o prob de concentraie cunoscut preparat din material de referin (substan etalon). Analizele se efectueaz n acelai laborator , de acelai analist, cu acelai echipament, cu aceeai metod de lucru i la intervale de timp apropiate ntre determinri r = 2,8 x sr n care: sr = deviaia standard a repetabilitii -funcie de tipul de metod testat, de nivelul de performan al laboratorului
Reproductibilitatea Reproductibilitatea (cea mai mare fidelitate ateptat) va da informaii asupra variabilitii metodei cnd acelai msurand este anlizat n laboratoare diferite, de ctre analisti diversi, pe echipamente diferite, ntr-o perioad lunga de timp. Pentru a se determina reproductibilitatea in interiorul laboratorului , diferii analiti din acelai laborator trebuie s analizeze aceeai prob sau Material de Referin fcnd 10 determinri pe echipamente diferite la intervale mari de timp. Apoi se determin media i abaterea standard pentru fiecare concentraie.
138
Lucrri de laborator
Pentru a se determina reproductibilitatea interlaboratoare, diferii analiti din diferite laboratoare trebuie s analizeze aceeai prob sau Material de Referin fcnd 10 determinri pe echipamente diferite la intervale mari de timp. Pentru reproductibilitatea interlaboratoare este necesar s se organizeze studiu n colaborare.
Tabel III.10. Reproductibilitate intern Msurtori REPRODUCTIBILITATE INTERN 10 msurtori repetate pe o prob de concentraie cunoscut preparat din material de referin (substan etalon). Analizele se efectueaz n acelai laborator , de analiti diferii, cu echipamente diferite, cu aceeai metod de lucru i la intervale mai mari de timp ntre determinri RL = 2,8 x 1,6 x sr = 1,6 x r n care: sr = deviaia standard a repetabilitii r = repetabilitatea -funcie de tipul de metod testat, de nivelul de performan al laboratorului
Calcul/Estimare
Valoare optim
O dat ce procesul de validare este complet este important s se documenteze proceduri, n aa fel nct metoda s poat s fie implementat n mod clar i fr ambiguiti. Protocolul de Documentare al Metodei trebuie s conin: actualizarea i stadiul reviziilor; titlu; scop; definiii; principiu; referine normative; reactivi i materiale; aparate i echipamente; prelevare i probe; trasarea curbei de etalonare; procedur; calcularea i exprimarea rezultatelor inclusiv unitile de msur finale, incertitudine, intervalul de ncredere; De obicei Protocolul de Documentare al Metodei poate fi realizat urmnd coninutul metodei standard.
139
Lucrri de laborator
III.1.2. EXEMPLU DE CALCUL AL UNOR PARAMETRI DE VALIDARE S se calculeze limita de detecie i limita de cuantificare pentru o metod spectrofotometric n vizibil aplicat la determinarea Cr 6+ la imisii. S-au analizat 10 probe oarbe independente, fa de ap i s-au obinut rezultatele indicate n tabelul III.11.
Tabel III.11. Rezultate pentru LoD i LoQ Proba 1 Proba 2 Proba 3 Proba 4 Proba 5 Proba 6 Proba 7 Proba 8 Proba 9 Proba 10 Valoarea medie - X Abaterea standard - s 3s 10s LoD LoQ X + 3s X +10s Concentratie, g n balon cotat de 25 mL 0,1159 0,0982 0,0569 0,0645 0,1628 0,1804 0,0902 0,09 0,0452 0,0455 0,02786 0,106515 0,319546 1,065152 g g/mL 0,457406 0,0169 1,093012 0,0437
140
Valorile considerate: LoD = 0,5 g CrO3 n soluia din balonul cotat de 25 mL sau soluie de 0,02 g CrO3/mL; LoQ = 1,1 g CrO3 g CrO3 n soluia din balonul cotat de 25 mL sau soluie de 0,044 g CrO3/mL.
Lucrri de laborator
Dac volumul de aer prelevat a fost de 900 litri, atunci LoD i LoQ devin: LoD = mg CrO3 / metru cub aer LoQ = mg CrO3 / metru cub aer
S se calculeze recuperarea metodei studiate mai sus. S-a folosit: - o prob cu un coninut de 16 g Cr6+ fortificat cu 4 g Cr6+; - o prob cu un coninut de 24 g Cr6+ fortificat cu 6 g t Cr6+; - un Material de Referin cerificat (MRC) cu o valoare cerificat de 21,25 g Cr6+/mL i interval de ncredere 20,60 21,91 g Cr6+/mL Rezultatele obinute sunt centralizate n tabelul III.12 i tabelul III.13.
Tabel III.12 . Recuperarea din probele fortificate
Numr det. 1 2 3 Media Cantitatea recuperat R% Prob fortificat cu16 g Cr6+ 0 gCr6+ 4 gCr6+ Conc. Conc. Absorb Absorb ana g ana g 0,2810 16,4587 0,3481 20,4133 0,2806 16,4351 0,3423 20,1246 0,2799 16,3997 0,3476 20,3839 16,4312 20,3073 3,88 96,90 Prob fortificat cu 24 g Cr6+ 0 g Cr6 6 g Cr6 Conc. Conc. Absorb Absorb ana g ana g 0,4173 24,4918 0,5180 30,4267 0,4175 24,5035 0,5145 30,2204 0,4165 24,4691 0,5169 30,3704 24,4881 30,3392 5,85 97,52
Tabel III.13. Recuperarea i justeea pentru MRC Numr det. 1 2 3 4 5 6 7 Media R% Justeea % Rezultate, n g Cr6+/mL 21,45 21,21 21,18 20,96 20,95 20,97 21,54 21,18 99,67
III.1.3. EXERCIIU
141
Lucrri de laborator
Pentru validarea metodei gaz cromatografice de determinare a 2,6-diter-butilfenolului s-au efectuat 10 determinri repetate pe o soluie de concentraie cunoscut ( = 0,100mg/L) preparat din material de referin certificat. S-au obinut urmtoarele valori:
Proba 1 Proba 2 Proba 3 Proba 4 Proba 5 Proba 6 Proba 7 Proba 8 Proba 9 Proba 10 Concentraie, mg/L 0,0952 0,0955 0,0987 0,1010 0,0996 0,0970 0,0970 0,0980 0,0950 0,0925
Utiliznd formulele de calcul specifice v rugm s calculai exactitatea i biasul, fidelitatea i repetabilitatea pentru metoda propus spre validare.
142
Lucrri de laborator
III.2. INCERTITUDINEA DE MSURARE

III.2.1. CONSIDERAII TEORETICE Cuvntul incertitudine nseamn dubiu, deci, incertitudinea msurrii nseamn dubiu privind validitatea unui rezultat ca i dubiu asupra exactitii unui rezultat. EN ISO/CEI 17025:1999 cere ca n primul rnd s se identifice sursele de incertitudine i s se construiasc bugetul de incertitudine. Incertitudinea unui rezultat apare din mai multe surse, cum ar fi: definirea incomplet a msurandului; prelevarea; efectele interferenelor i matricei; incertitudinea echipamentelor de msurare i cntrire; calibrarea echipamentelor i materialele de referin; abilitatea analistului. n estimarea incertitudinii generale este necesar s se ia fiecare surs de incertitudine i s se trateze separat contribuia sa. Fiecare contribuie a incertitudinii se reprezint ca component de incertitudine. Dac o component de incertitudine se exprim ca abatere standard, aceasta este cunoscut ca incertitudine standard. Cnd combinm prin legea propagrii incertitudinii toate componentele incertitudinii se obine incertitudinea standard combinat. n chimia analitic de obicei se raporteaz incertitudinea extins, obinut din incertitudinea standard combinat multiplicat cu un factor de acoperire care depinde de nivelul de ncredere. n estimarea incertitudinii trebuie s se respecte urmtorii pai: Etapa 1. Se specific msurandul n primul rnd se scrie o declaraie clar a ceea ce se msoar, incluznd relaia dintre msurand i parametrii de care el depinde. Informaia referitoare la specificare trebuie s fie furnizat n procedura standardizat de operare (SOP) sau n alt descriere a metodei. Etapa 2. Se identific sursele de incertitudine Se listeaz surse posibile de incertitudine. Aceast list include surse care contribuie la incertitudinea parametrilor din relaia specificat n etapa 1, dar nu numai, precum i surse care apar din presupunerile chimice. Etapa 3. Se cuantific componentele incertitudinii Toate sursele identificate n etapa 2 trebuie pe ct posibil s fie estimate.
143
Lucrri de laborator
Este important s se considere i s se planifice atent experimente i studii suplimentare prin care s se asigure c toate sursele de incertitudine sunt adecvat calculate. Deci, se obine incertitudinea standard asociat fiecrei surse de incertitudine. Etapa 4: Calculul incertitudinii totale Incertitudinea standard individual pentru fiecare surs trebuie s fie combinat pentru a obine incertitudinea general, i apoi, funcie de nivelul de ncredere, s se calculeze incertitudinea extins combinat. Surse tipice de incertitudine sunt: prelevarea; condiiile de stocare; efecte induse de aparat i de echipament; puritatea reactivilor; condiiile de msurare; corecia de blank; efectele induse de operator; efectele aleatorii. Cuantificarea incertitudinii se face innd cont de: caracteristicile de performan ale metodei; studii de validare inclusiv studii n colaborare; studii de validare i dezvoltare in-house; scheme PT. nainte de combinare toate contribuiile incertitudinii trebuie exprimate ca incertitudini standard. Unde componenta de incertitudine a fost evaluat experimental din dispersia mai multor msurri repetate aceasta poate fi exprimat ca abatere standard. Va fi cazul abaterii standard sau abaterea standard a mediei. Unde componenta de incertitudine a fost evaluat pe baza datelor anterioare aceasta poate fi exprimat ca abatere standard sau este necesar s se presupun tipul distribuiei: normal, rectangular sau triunghiular. n distribuia rectangular datele trebuie s se divid cu 31/2 i n distribuia triunghiular cu 6 1/2. n distribuia normal, cnd intervalul de ncredere este indicat, de exemplu 95%, datele trebuie s se divid cu 1,96. Exemplu: 1. O citire la balan de 0,003 mg cu 95% interval de ncredere. Incertitudinea standard va fi 0,003/1,96. 2. Un balon cotat de clasa A de 100 mL este certificat cu 0,5 mL. Incertitudinea standard va fi 0,5/31/2 cnd valorile extreme nu sunt adecvate (distribuie
144
Lucrri de laborator
rectangular). Dac valorile extreme sunt ne adecvate incertitudinea standard va fi 0,5/61/2 (distribuie triunghiular). 3. Pentru o operaie de cntrire se face incertitudinea standard a calibrrii (u cal= 0,03 mg) iar pentru repetabilitate se face abaterea standard s = 0,06 mg cnd se fac ase cntriri repetate. Incertitudinea standard combinat u c este egal cu (0,032 + 0,062)1/2. Incertitudinea combinat extins U c innd cont de factorul Student t pentru 5 grade de libertate i interval de ncredere de 95% (t=2,6) este egal cu: Uc = 2,6 x (0,032 + 0,062)1/2 . Incertitudinea extins va fi raportat ca rezultat x U (uniti) i suntem obligai s indicm nivelul de ncredere sau factorul de acoperire. Exemplu: Nichel: 35,44 0,36 % v/v * * incertitudinea raportat este incertitudinea extins calculat cu un factor de acoperire k=3 la un nivel de ncredere de aproximativ 99,7%. n acest caz dac noi dorim s tim incertitudinea standard combinat trebuie s mprim incertitudinea extins cu 3, deci u c = 0,12%.
145
Lucrri de laborator
III.2.2.
EXEMPLU DE MSURARE
CALCUL
AL
INCERTITUDINII
DE
III.2.2.1 n exemplul urmtor se propune o metodologie de calcul a incertitudinii extinse pentru determinarea particulelor n suspensie prin metoda gravimetric la analiza apelor. Etapa 1. Se specific msurandul Scop Determinarea particulelor n suspensie totale (TSM) n apele reziduale. Procedura folosit este metoda descris n STAS 6953-81. Procedura de msurare este descris n figura III.2.1.
Cntrire
Filtrare
Splare
Uscare
Cntrire
Rezultat
Fig. III.2.1. Procedur de msurare
Msurnd TSM = (m2 m1)x 1000/V n care: m2 masa recipientului cu reziduu, n mg; m 1 masa recipientului fr reziduu, n mg; V volumul probei analizate n litri; 1000 / factorul de conversie din [mL] n [L] Variabilele sunt centralizate n tabelul III.2.1.
146
Lucrri de laborator
Tabel III.2.1 Descriere TSM m2 - m1 V1 Coninutul de TSM, mg / L Masa reziduului, mg Volumul analizat, mL Valoare lui X 13 1,3 100,0 Incertitudinea standard u(x) 2,2 0,22 0,08 Incertitudinea standard relativ, u(x)/x 0,1692 0,1692 0,0008
Etapa 2. Se identific sursele de incertitudine Sursele de incertitudine sunt: a) Masa reziduului care se obine prin diferena de mas dintre dou cntriri independente. Deci, pentru m1 i m2 sursele pentru fiecare din cele dou cntriri reprezint variaia i contribuia incertitudinii n calibrare funcie de scal. Aceast funcie de calibrare are dou surse poteniale de incertitudine: sensibilitatea balanei i linearitatea. Sensibilitatea poate fi neglijat deoarece cntrirea prin diferen se face pe aceeai balan ntr-un interval foarte apropiat. Linearitatea indicat de productor este egal cu 0,1 mg fr alte specificaii. Repetabilitatea este o alt surs. Este indicat de productor i este egal cu 0,2 mg ca abatere standard. b) Pentru V (volumul de ap rezidual prelevat) sursele de incertitudine sunt generate de: - calibrarea pipetei; Productorul indic pentru un volum de 100 mL 0,08 mL la temperature de 200C. Valoarea incertitudinii este indicat fr un interval de ncredere. - repetabilitatea generat de variaii la aducerea la semn reprezint o alt surs de incertitudine i poate fi estimat dintr-un experiment de repetabilitate pe un exemplu tipic de pipete folosite. O serie de 10 experimente de aducere la semn i cntrire folosind o pipet standard de 100 mL d o incertitudine standard de 0,05 mL. - temperatura din laborator influeneaz volumul luat n analiz deoarece calibrarea a fost fcut la 20 0C, n timp ce temperatura din laboator variaz n intervalul 4 C. Etapa 3. Se cuantific componentele incertitudinii a) m1 i m2 - deoarece n informaiile productorului linearitatea este egal cu 0,1 mg fr fr alte specificaii. Conform productorului evaluarea incertitudinii se face dup o distribuie rectangular. Deci valoarea contribuiei liniaritii
147
Lucrri de laborator
trebuie s fie divizat cu 3 1/2 pentru a obine componenta incertitudinii ca o incertitudine standard. 0,1/ 31/2 = 0,058 mg Aceast component trebuie s fie luat n considerare de dou ori din cauza diferenei de 8. - Repetabilitatea indicat ca abatere standard trebuie s fie luat n considerare o singur dat deoarece abaterea standard a diferenelor a fost determinat direct prin diferen. n final cele dou componente, liniaritatea i repetabilitatea, se combin pentru a obine incertitudinea standard u(m) conform formulei: u(m) = [(0,22 + 2 x 0,0582)]1/2 = 0,22 mg b) V - calibrarea: deoarece valoarea incertitudinii (0,08) este indicat fr un nivel de ncredere, incertitudinea standard se calculeaz presupunnd o distribuie rectangular, pentru c volumul actual se situeaz cel mai probabil la extremitate dect n centrul domeniului. Deci, valoarea obinut este 0,08 / 3 1/2 = 0,046 mL; - repetabilitatea: Deoarece repetabilitatea d o incertitudine standard de 0,05 mL aceast incertitudine standard poate fi folosit direct; - temperatura din laborator influeneaz volumul considerat luat n analiz deoarece calibrarea a fost fcut la 20 0C, n timp ce temperatura din laboator variaz n intervalul 4 C. Dilatarea volumului de lichid este considerabil mai mare dect al pipetei. Coeficientul de dilatare pentru ap este 2,1 x 10 -4 C-1, care conduce la o variaie a volumului de 100 mL x 4 C x 2,1 x 10 -4 C-1 = 0,084 mL. Incertitudinea standard se calculeaz presupunnd o distribuie rectangular pentru variaia temperaturii, de exemplu 0,084 / 3 1/2 = 0,048 mL Cele trei contribuii se combin pentru a se obine incertitudinea standard u (V): u (V) = ( 0,0462 + 0,052 + 0,0482)1/2 = 0,083 mL ~ 0,08 mL Etapa 4: Calculul incertitudinii totale TSM se calculeaz cu formula: TSM = (m2 m1)x 1000/V - m1 masa recipientului fr reziduu: 23,1540g; - m 2 - masa recipientului cu reziduu: 23,1553 g; Masa reziduului este 0,0013 g = 1,3 mg. Coninutul de TSM devine: TSM = 1,3 x 1000/100 = 13 mg/L
148
Lucrri de laborator
Tabelul III.2.2 indic valorile calculate i incertitudinea standard asociat.

Tabel III.2.2. Valorile calculate i incertitudinea standard calculat Descriere Masa de reziduu (mg) Volumul V (mL) Valoarea x 1,3 100,0 Incertitudinea standard u(x) 0,22 0,08 Incertitudinea standard relativ u(x)/x 0,1692 0,0080
Pentru aceast expresie de multiplicare incertitudinile asociate cu fiecare component sunt combinate dup cum urmeaz:
u c (TSM ) u ( m) u (V ) = + = TSM m V 0,1692 2 + 0,0080 2 = 0,1694
2 2
u c (TSM ) = TSM 0,1694 = 13 0,1694 = 2,20mg / L
Totui este de preferat s se calculeze incertitudinea standard combinat folosind datele din tabelul III.2.3.
Tabel III.2.3. Tabel de calcul al incertitudinii A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 B Valoare Incertitudine m2 m1 V c(TSM) u2 u(TSM) 1,3 100,0 13 4,8401 2,20 C M2 m1 1,3 0,22 1,52 100,00 15, 2 2,2 4,84 D V 100,00 0,08 1,3 100,08 12,99 0,01 0,0001
n care: nC2-D2 valori ale parametrilor; C3-D3 incertitudini asociate; B5-B6 valori ale parametrilor; C5 = C2+C3; D6 = D2+D3; B8 = Concentraia TSM calculat cu parametrii de la B5-B6; C8 = Concentraia TSM calculat cu parametrii de la C5-C6; D8
149
Lucrri de laborator
= Concentraia TSM calculat cu parametrii de la D 5-D6; C9 = diferena dintre C8 i B8; D9 = diferena dintre D8 i B8; C10 ptratul lui C9; D10 ptratul lui D9; B10 = suma dintre C9 i D9; B12 incertitudinea standard combinat, rdcina ptrat a lui B 10 Incertitudinea extins UTSM se obine prin multiplicarea incertitudinii standard combinate cu un factor de acoperire 2 obinndu-se U TSM = 2 x 2,20 mg/L = 4,40 mg/L.
III.2.2.2. Titrare acido / bazic

Scop: o soluie de HCl este standardizat fa o soluie de NaOH de concentraie cunoscut. Introducere Acest exemplu analizeaz o secven de experimente pentru a determina concentraia unei soluii de acid clorhidric (HCl). Totodat, sunt evideniate un numr de aspecte ale procedurii titrimetrice. Soluia de HCl este titrat cu o soluie de NaOH proaspt standardizat fa de ftalat acid de potasiu (KHP). Se presupune cunoscut concentraia de acid clorhidric ca fiind de ordinul 0.1 mol/L i se determin punctul final al titrrii cu un sistem automat de titrare folosind forma curbei de pH. Aceast evaluare duce la o incertitudine de msurare exprimat n uniti SI. Etapa 1. Specificaie n prima etap este prezentat o descriere a procedurii de msurare. Ea armonizeaz o list a etapelor msurrii i o declarare matematic a msurandului. Procedur Determinarea concentraiei soluiei de HCl const din urmtoarele etape (figura III.2.2). Etapele separate sunt: i) etalonul titrimetric de ftalat acid de potasiu (KHP) se usuc pentru a asigura puritatea specificat n certificatul furnizorului. Apoi, se cntresc aproximativ 0.3888 g de etalon uscat pentru a obine un volum de titrare de 19 mL NaOH. ii) masa de etalon titimetric KHP se dizolv cu aproximativ 50 mL ap deionizat i apoi este titrat folosind soluia de NaOH. Un sistem de titrare controleaz automat adugarea de NaOH i nregistreaz curba de pH. Punctul final al titrrii este evaluat din forma curbei de pH nregistrat. iii) 15 mL de soluie de HCl sunt transferai cu ajutorul unei pipete. Soluia de HCl este diluat n paharul pentru titrare cu ap deionizat pentru a se obine aproximativ 50 mL soluie. iv) Acelai titrator automat este utilizat pentru msurarea concentraiei soluiei de HCl.
150
Lucrri de laborator
Cntrire KHP
Titrare KHP cu NaOH
Transferul unui volumde HCl
Titrare HCl cu NaOH
REZULTAT
Fig. III.2.2. Determinarea concentraiei unei soluii de HCl
Calcul Msurandul este concentraia soluiei de HCl. Aceasta depinde de masa de KHP, puritatea sa, masa sa molar, volumele de NaOH la punctul final al celor dou titrri i de volumul de HCl luat n lucru:
c HCl =
1000 m KHP PKHP VT 2 mol / L VT 1 FKHP V HCl
unde: cHCl = concentraia soluiei de HCl, mol/L; 1000 = factor de conversie de la mL la L; mKHP = masa etalon titimetric KHP, g; P KHP = puritatea etalon titimetric, exprimat ca fracie de mas; V T2 = volumul de NaOH folosit la titrarea HCl, mL; V T1 = volumul de NaOH folosit la titrarea KHP, mL; V HCl = volumul de HCl titrat cu soluia de NaOH, mL. Etapa 2. Identificare i analiz surse de incertitudine Diferitele surse de incertitudine i influena lor asupra msurandului sunt cel mai bine analizate prin vizualizarea lor ntr-o diagram cauz-efect (figura III.2.3).
151
Lucrri de laborator
V (T2) Influen Repetabilitate BIAS Etalonare Sensibilitate Temperatur Liniaritate Etalonare Repetabilitate m(tar) Repetabilitate Repetabilitate Etalonare Sensibilitate
m (KHP)
Punct echivalen
Liniaritate
Repetabilitate Repetabilitate Etalonare Etalonare Temperatur Temperatur Punct echivalen Repetabilitate Influene V(T1) P(KHP) F(KHP) V(HCl)
C(HCl)
Fig. III.2.3. Diagrama final cauz-efect
Deoarece, din studii de validare a procedurii ca ntreg, este disponibil o estimaie de repetabilitate, nu este nevoie s se considere individual toate contribuiile de repetabilitate. De aceea, ele sunt combinate ntr-o singur contribuie (ilustrat n diagrama cauz-efect revizuit n figura III.2.3) V (HCl) Cu ajutorul unei pipete se transfer 15 mL din soluia de HCl de investigat. Volumul de HCl descrcat cu pipeta este afectat de aceleai trei surse de incertitudine ca n cazul tuturor mijloacelor de msurare volumetrice: variabilitatea sau repetabilitatea volumului descrcat; incertitudinea volumului declarat al pipetei; temperatura soluiei care difer de temperatura la care pipeta a fost etalonat.
152
Lucrri de laborator
Etapa 3. Cuantificare componente incertitudine Scopul acestei etape este de a cuantifica fiecare surs de incertitudine analizat n etapa 2. Repetabilitatea Validarea metodei indic o repetabilitate de 0,1% (exprimat ca % RSD). Aceast valoare poate fi utilizat direct pentru calculul incertitudinii standard compuse asociat diferiilor termeni de repetabilitate. m (KHP) Etalonarea/Linearitatea: Productorul balanei indic valoarea de 0,15 mg pentru contribuia linearitii. Aceast valoare reprezint diferena maxim dintre masa real pe platan i citirea de pe scal. Presupunnd o distribuie rectangular, incertitudinea standard asociat contribuiei linearitii este:
0,15 3 = 0,087 mg
Contribuia linearitii trebuie calculat de dou ori, o dat pentru tar i o dat pentru masa net, ceea ce conduce la o incertitudine u (mKHP ) de:
u(m KHP ) = 2 (0,087) 2 u(m KHP ) = 0,12 mg
Nota 1: Contribuia este aplicat de dou ori deoarece nu s-a fcut nici o presupunere legat de forma nelinearitii. Prin urmare, nelinearitatea este tratat ca un efect sistematic pentru fiecare cntrire, care variaz aleatoriu n magnitudine de-a lungul domeniului de msurare. Nota 2: Nu s-a considerat corecia pentru fora ascensional deoarece toate rezultatele cntririlor sunt considerate n condiiile convenionale pentru cntrirea n aer [H.19]. Incertitudinile rmase sunt prea mici pentru a fi considerate. P(KHP) P(KHP) este indicat n certificatul productorului ca 100 % 0.05 %. Incertitudinea specificat este considerat ca avnd o distribuie rectangular, astfel nct incertitudinea standard u(PKHP) este de:
u ( P KHP ) = 0,0005 3 = 0,00029
V (T2)
153
Lucrri de laborator
1. Etalonarea: Valoarea dat de productor este 0,03 mL i este aproximat printr-o distribuie triunghiular:
0,03 6 = 0,012 mL
2. Temperatura: Variaia posibil de temperatur este n limitele de 4oC i este aproximat printr-o distribuie rectangular:
15 2,1 10 4 4 3 = 0,007 mlL
3. Deplasare a punctului final al titrrii : Poate fi prevenit o deplasare a punctului final al titrrii determinat precum i a punctului de echivalen datorat CO 2 atmosferic prin efectuarea titrrii n atmosfer de argon. n acest caz, nu este necesar s se considere nici o incertitudine. VT2 a fost de 14,89 mL. Comparnd cele dou contribuii ale incertitudinii u (VT 2 ) asociate volumului VT2 se obine valoarea de:
u( V T 2 ) = 0,012 2 + 0,007 2 u ( V T 2 ) = 0,014 mL
V (T1) Toate contribuiile, cu excepia temperaturii sunt aceleai ca pentru V T2: 1. Etalonare: mL
0,03 6 = 0,012 ml
2. Temperatura: Volumul aproximat pentru titrarea a 0.3888 g KHP este de 19 NaOH, prin urmare contribuia sa la incertitudine este:
3 = 0,009 mL
19 2,1 10 4 4
3. Deplasare a punctului final al titrrii: neglijabil VT1 a fost de 18.64 mL cu o incertitudine standard compus, u (VT 1 ) , de:
u( V T 1 ) = 0,012 2 + 0,009 2 u ( V T 1 ) = 0,015 mL
F (KHP) Masele molare i incertitudinile listate (din tabelele actuale ale IUPAC) pentru elementele constituente ale KHP (C8H5O4K) sunt:
154
Lucrri de laborator
Tabel III.2.4. Element C H O K Masa molar 12,0107 1,00794 15,9994 39,0983 Incertitudinea publicat 0,0008 0,00007 0,0003 0,0001 Incertitudinea standard 0,00046 0,000040 0,00017 0,000058
Pentru fiecare element se obine incertitudinea standard tratnd incertitudinea publicat de IUPAC ca formnd limitele unei distribuii rectangulare. Prin urmare, incertitudinea standard corespunztoare se obine mprind acele valori cu 3 . Prin urmare, masa molar a KHP i incertitudinea sa standard compus sunt: FKHP = 812,0107 + 51,00794 + 415,9994 + 39,0983 = 204,2212 g/mol
u ( F KHP ) = (8 0,00046) 2 + (5 0,00004) 2 + (4 0,00017) 2 + 0,000058 2 u ( F KHP ) = 0,0038 g/mol
Not: Contribuiile atomice singulare nu sunt independente. Prin urmare, incertitudinea contribuiei atomice se calculeaz nmulind incertitudinea standard a masei atomice cu numrul de atomi. V (HCl) 1. Etalonarea: incertitudinea declarat de productor pentru o pipet de 15 mL este de 0,02 mL i este aproximat printr-o distribuie triunghiular:
0,02 6 = 0,008 mL
2. Temperatura: Temperatura laboratorului este n limitele de 4oC. Considernd o distribuie rectangular a temperaturii se obine o incertitudine standard de:
15 2,1 10 4 4 3 = 0,007 mL
Compunnd aceste contribuii se obine valoarea de:

u( V HCl ) = 0,0037 2 + 0,008 2 + 0,007 2 u ( V T 2 ) = 0,01lmL
155
Lucrri de laborator
Etapa 4. Calculul incertitudinii standard compus c HCl este dat de:
c HCl =
1000 m KHP PKHP VT 2 VT 1 FKHP VHCl
Toate valorile intermediare ale celor dou etape sunt prezentate n tabelul III.2.5.
Tabel III.2.5. Valorile i incertitudinile titrrii acid-baz Descrierea m KHP P KHP VT2 VT1 FKHP VHCl masa de KHP puritatea KHP volumul de NaOH necesar pentru titrarea HCl volumul de NaOH necesar pentru titrarea KHP Masa molar de KHP volumul de HCl luat n lucru Valoarea X 0,3888 1,0 18,89 18,64 204,2212 15 mL Incertitudinea standard U(x) 0,00013 0,00029 0,015 0,016 0,0038 0,011 Incertitudine standard relativ 0,00033 0,00029 0,0010 0,00086 0,000019 0,00073
Folosind aceste valori:

cHCl = 1000 0,3888 1,0 14,89 = 0,10139 mol /L 18,64 204,2212 15
Incertitudinile asociate fiecrei componente sunt n mod corespunztor compuse:

2 2 2 2 2
u ( mKHP ) u ( PKHP ) u ( uc (cHCl ) VT 2 ) u ( VT 1 ) u ( F KHP ) u ( V HCl ) = + + + + + cHCl mKHP PKHP VT 2 VT 1 F KHP V HCl = 0,000312 + 0,000292 + 0,000942 + 0,000802 + 0,000019 2 + 0,000732 + 0,001 = 0,0018 uc (cHCl ) = cHCl 0,0018 = 0,00018mol /L
156
Lucrri de laborator
Pentru a simplifica calculul incertitudinii standard compuse de mai sus se poate utiliza metoda diagramei de mprtiere. Diagrama complet cu valorile corespunztoare este ilustrat n tabelul III.2.6, care are explicaii suplimentare. Mrimea diferitelor contribuii poate fi comparat utiliznd o histogram. Figura III.2.4 ilustreaz valorile contribuiilor u (( y , x i ) din tabelul III.2.6. Incertitudinea extins U(cHCl) se calculeaz multiplicnd incertitudinea standard compus cu un factor de extindere de 2: U(cHCl) = 0,0018 2 = 0,0004 mol/L Concentraia soluiei de HCl este de: (0,1014 0,0004) mol/L.
Tabel III.2.6. Tabel de calcul al incertitudinii
A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 c (HCl) 0,101387 2,55E-8 u(c(HCl)) 0,00016 0,101421 0,101417 0,101489 0,101300 0,101385 0,101313 -0,000074 5,52E-9 0,000034 0,000029 0,000102 0,000087 -0,0000019 1,1E-9 8,64E-10 1,043E-8 7,56E-9 3,56E-12 m (KHP) P (KHP) V (T2) V (T1) F (KHP) V (HCl) Valoare Incertitudine 0,3888 1,0 14,89 18,64 204,2212 15 B C m (KHP) 0,3888
0,00013 0,38893
D P (KHP) 1,0
0,00029
E V (T2) 14,89 0,015 0,3888 1,0 14,89 18,64
F V (T1) 18,64 0,016 0,3888 1,0 14,89 18,64
G F (KHP) 204,2212 0,0038 0,3888 1,0 14,89 18,64
H V (HCl) 15 0,011 0,3888 1,0 14,89 18,64 204,2212 15
0,3888 1,00029 14,89 18,64
1,0 14,89 18,64
204,2212 204,2212 204,2212 204,2212 204,2212 15 15 15 15 15
157
Lucrri de laborator
m (KHP) P (KHP) V (T2) V (T1) F (KHP) V (HCl) c (HCl) 0 0.0005 0.001 0.0015 Incertitudinea standard relativ
Fig. III.2.4. Incertitudini n titrarea acid-baz
III.2.2.3. Determinarea cantitii de cadmiu extras din pereii ceramici n mediu acid prin spectrofotometrie de absorbie atomic Rezumat Scop Cantitatea de cadmiu pus n libertate din pereii unui vas ceramic n mediu acid este determinat folosind spectrofotometria cu absorbie atomic. Procedura utilizat se bazeaz pe o metod empiric descris n standardul BS 6748. Procedur de msurare Diferitele etape n determinarea cantitii de cadmiu extras din pereii unui vas ceramic sunt prezentate n diagrama flux (figura III.2.5). Msurnd
r=
c 0 .V L .d . f acid . f timp . f temp [ mg .dm 2 ] aV
Identificare surse de incertitudine Sursele relevante de incertitudine sunt ilustrate n diagrama cauz-efect n figura III.2.6.
158
Lucrri de laborator
Cuantificare surse de incertitudine n tabelul III.2.7 este prezentat mrimea diferitelor contribuii i n figura III.2.6 sunt ilustrate, sub form de diagram, valorile acestora.
Preparare
Pregtire suprafa
Umplere cu acid 4% vol
Extragere metal prin dizolvare Preparare soluii etalon pentru etalonare
Omogenizare soluie de acid
Determinare AAS
Etalonare AAS
REZULTAT
Fig. III.2.5. Procedura de extragere a cadmiului
159
Lucrri de laborator
Tabel III.2.7. Incertitudinile la determinarea cadmiului extras Descriere c0 VL aV facid ftimp ftemp r Concentraie de Cd n soluie de acid care a extras metalul Volumul de acid care a extras (prin dizolvare) metalul Aria suprafeei vasului Influen a concentraiei de acid Influena timpului Influena temperaturii Mas de Cd extras pe unitatea de arie Valoare x 0,26 mg.L-1 0,332 L 237 dm2 1,0 1,0 1,0 0,036 mg.dm-2 Incertitudine Standard u(x) 0,018 mg.L-1 0,0018 l 0,06 dm2 0,0008 0,001 0,06 0,0033 mg.dm2
Incertitudine standard Relativ u(x)/x 0,069 0,0054 0,025 0,008 0,001 0,06 0,09
c(0) Curb de calibrare f(acid) f(timp) f(temperatur) Umplere Temperatur Calibrare Citire
V(L)
Rezultat, r Lungime (1) Lungime (2) Arie A(V)
Fig. III.2.6. Sursele de incertitudine la determinarea cadmiului extras din pereii ceramici. d factor prin care eantionul a fost diluat.
Exemplul 1. Determinarea cantitii de cadmiu extras din pereii ceramici n mediu acid prin spectrofotometrie de absorbie atomic Etapa 1: Specificaie Urmtorul extras din BS 6748:1986 Limite de extragere a metalului din perete ceramic, perete de sticl, perete de sticl ceramic i de perete emailat constituie specificaia msurandului.
160
Lucrri de laborator
Reactivi Ap, corespunztor cerinelor BS 3978. Acid acetic, CH3 COOH, glacial. Soluie de acid acetic 4% vol. n 500mL de ap se adaug 40 mL de acid acetic glacial i se completeaz la 1 litru. Soluia se prepar proaspt nainte de utilizare.
(500 1) mg Cd n 1 L de acid acetic 4% (vol.) Aparat Spectrofotometru de absorbie atomic, cu o limit de detecie de cel mult 0,2 -1 mg L Pb (n soluie de acid acetic 4% vol.) i 0,02 mgL -1 Cd (n soluie de acid acetic 4% vol.). Sticlrie de laborator, mijloace volumetrice de cel puin clas B din sticl borosilicat care nu pune n libertate nivele detectabile de plumb sau de cadmiu n soluie de acid acetic 4% vol. n cursul procedurii de ncercare. Preparare eantioane Eantioanele trebuie splate la (405) 0C ntr-o soluie apoas coninnd un -1 1mg L detergent lichid casnic, cltit cu ap (aa cum s-a specificat mai sus), scurs i uscat cu o hrtie de filtru curat. Suprafeele eantioanelor care, n timpul utilizrii, nu sunt n contact cu alimente, sunt acoperite cu un strat de protecie dup splare i uscare. Procedur Procedura analitic este ilustrat schematic n figura III.2.5. Diferiii pai sunt: i) Eantionul este condiionat la (222) 0C.Acolo unde se poate (cazul articolelor din categoria 1) se determin aria suprafeei articolului. ii) Eantionul condiionat se umple cu o soluie acid 4% vol la un nivel ce nu depete 1mm de la punctul de revrsare, msurat de la marginea superioar a eantionului i nu la mai mult de 6 mm de la captul eantionului cu o ram (cadru) plan sau n pant. iii) Cantitatea de acid acetic 4% vol. cerut sau utilizat este notat cu exactitate de 2%. iv) Eantionului i se permite s stea timp de 24 h la temperatura de (22+2) 0C (n cazul n care se determin cadmiu, la ntuneric) lund precauii pentru a preveni pierderile prin evaporare. v) Din soluia extract, omogenizat prin agitare sau prin alte mijloace fr pierderi de soluie sau zgrierea suprafeei de testat, se colecteaz o poriune pentru analiza prin AAS. Analiz
Soluii etalon metalice 4% (vol.)
(1000 1) mg Pb n 1 L de acid acetic
Preparare 161 soluii etalon pentru Etalonare etalonare AAS
Lucrri de laborator
vi)
vii)
Instrumental AAS este operat conform instruciunilor productorului folosind lungimile de und de 217,0 nm pentru determinarea plumbului i respectiv, 228,8 nm pentru determinarea cadmiului cu corecia de fond corespunztoare efectelor de absorbie de fond. Dac valorile de absorban ale soluiilor etalon de metal i a celor de soluie de acid acetic 4% vol. indic un drift mineral, atunci rezultatul poate fi calculat ntr-o curb de etalonare stabilit manual (mai jos) sau utiliznd tehnica de etalonare n jurul valorii de interes. Calculul rezultatelor ntr-o curb de etalonare preparat manual Coninutul de plumb sau cadmiu, c0, este dat de ecuaia:
c0 =
( A0 B0 ) .d [ mg .L1 ] B1
unde: c0 concentraie de plumb sau de cadmiu n soluia de acid ce a extras metalul [mg.L-1]; A0- absorban msurat pe plumb sau pe cadmiu n soluia extract; B 1 pant a curbei de etalonare; B0 deprtarea de origine a curbei de etalonare; d factor prin care eantionul a fost diluat. Not: Curba de etalonare trebuie astfel aleas nct s conin valorile de absorban n interiorul intervalului de valori de concentraie ale extractului eantion, sau ale extractului eantionului diluat. Rapoarte ncercare ntre altele, raportul ncercrii trebuie s includ: natura articolului ncercat; dup caz, aria suprafeei sau volumul articolului; cantitatea de plumb i /sau de cadmiu exist n cantitatea total de soluie extract exprimat ca miligrame de Pb sau Cd per decimetru ptrat de arie a suprafeei pentru categoria 1 de articole sau ca miligrame de Pb sau Cd per litru de volum pentru categoria 2 sau 3 de articole. Not: Acest extras din BS 6748:1986 este reprodus cu permisiunea BSI. Copii complete pot fi obinute prin pot de la serviciul BSI cu publicul, 389 Chiswick High Road, Londra W4 4AL Marea Britanie, Tel: +44(0)20899690001. Etapa 2: Identificare i analiz surse de incertitudine Etapa 1 descrie o metod empiric. Dac o asemenea metod se opereaz n limitele domeniului su de aplicare, prin definiie, deplasarea metodei este egal cu zero. Prin urmare, estimarea deplasrii se leag de performanele laboratorului i nu de deplasarea intrinsec a metodei. Deoarece nu este disponibil nici un material de referin certificat pentru aceast metod standardizat, controlul global al deplasrii se leag de controlul parametrilor metodei care influeneaz rezultatul. Asemenea mrimi de influen sunt timp, temperatur, mas, volum etc.
162
Lucrri de laborator
Concentraia de plumb sau de cadmiu n acidul acetic se determin prin spectrometria de absorbie atomic. Pentru vasele care nu pot fi umplute complet metoda empiric cere ca rezultatul s fie exprimat ca raportul de mas r (exprimat n mg.dm-2) de Pb sau de Cd extras per unitatea de arie. r este dat de:
r=
c0 .V L V .( A0 B0 ) .d = L .d aV aV .B1
unde: r mas de Cd sau Pb extras pe unitatea de arie [mg dm -2]; VL volum de acid care a extras metalul [L]; a V aria suprafeei vasului [dm 2]; c0 concentraie de plumb sau cadmiu n soluia extract [mg.L -1]; A0 absorban a metalului n eantion extract; B0 deprtarea de originea curbei de etalonare; B 1 pant a curbei de etalonare; d factor prin care eantionul a fost diluat. Prima parte a ecuaiei se utilizeaz pentru a schia diagrama de baz cauzefect (figura III.2.7).
Curb de calibrare Umplere Temperatur Calibrare Citire Rezultat, r 1 Lungime 2 Lungime Arie A(V)
Fig. III.2.7. Diagrama cauz efect iniial
Nu exist nici un material de referin certificat pentru aceast metod empiric cu care s se evalueze performana laboratorului. Prin urmare, toate mrimile de influen posibile trebuie s fie considerate, cum ar fi temperatura, timpul procesului de extragere a metalului din pereii ceramici i concentraia acidului. Pentru a considera mrimile suplimentare de influen, ecuaia este completat cu factorii de corecie corespunztori ceea ce duce la:
r=
c 0 .V L .d . f acid . f timp . f temp aV

163
Lucrri de laborator
Aceti factori suplimentari sunt inclui, deasemenea, n diagrama cauz efect (figura III.2.8). Acolo ei sunt ilustai ca efecte asupra lui c 0. Not: Domeniul permis de standard pentru temperatur constituie o cauz de incertitudine rezultat din speficarea incomplet a msurandului. Luarea n considerare a temperaturii permite estimarea intervalului de rezultate ce ar putea fi raportate ct timp se supun metodei empirice. Etapa 3: Cuantificare surse de incertitudine Scopul acestei etape este acela de a cuantifica incertitudinea care apare din fiecare din sursele de incertitudine identificate anterior. Acest lucru poate fi fcut fie utiliznd date experimentale sau obinute din presupuneri bine fundamentate. Factor de diluie d Pentru eantioane curente nu este necesar nici o diluare a soluiei de acid ce a extras metalul, prin urmare, nu trebuie luat n calcul nici contribuia lui d la incertitudine.
c(0) Curb de calibrare f(acid) f(timp) f(temperatur) Umplere Temperatur Calibrare Citire Rezultat, r Lungime (1) Lungime (2) Arie A(V) V(L)
Fig. III.2.8. Sursele de incertitudine la determinarea cadmiului extras din pereii ceramici.
Volum VL Umplere: Metoda empiric cere ca vasul s fie umplut pn la 1 mm de margine. Pentru un pahar sau pentru un vas de buctrie tipic, 1 mm reprezint aproximativ 1% din nlimea vasului. Prin urmare, vasul va fi umplut 99,5 0,5% (adic VL va fi aproximativ 0,9950,005 din volumul vasului). Temperatur Temperatura soluiei de acid acetic trebuie s fie de 22 2 0C. Acest domeniu de temperatur conduce la o incertitudine n determinarea volumului, datorit unei dilatri considerabil mai mari a lichidului comparativ cu cea a vasului n care se afl. Incertitudinea standard a volumui de 332 mL, considernd o distribuie rectangular a temperaturii, este:
164
Lucrri de laborator
2,1 10 4 .332,2 3
= 0,08 mLS
Citire: Volumul VL utilizat trebuie notat cu o exactitate n limita a 2%. n practic la utilizarea unui cilindru gradat exactitatea de msurare este de aproximativ 1% (adic 0,01 VL). Incertitudinea standard se calculeaz presupunnd o distribuie triunghiular. Etalonare: Volumul este etalonat, conform specificaiilor productorului, n domeniul 2,5 mL pentru un cilindru gradat de 500 mL. Incertitudinea standard se obine presupunnd o distribuie triunghilar. n acest exemplu, s-a utilizat un volum de 332 mL i, prin urmare, patru surse de incertitudine sunt compuse:
0,005.332 0,01.332 2,5 2 u( VL ) = + ( 0,08) + + =1,83 mL 6 6 6
2 2 2
Concentraia de cadmiu c0 Cantitatea de cadmiu eliberat se calculeaz dintr-o curb de etalonare stabilit manual. Pentru acest scop, pornind de la un etalon de referin de cadmiu de 500 0,5 mg.L-1, s-au preparat cinci etaloane cu concentraile de 0,1mg.L -1, 0,3 mg.L-1, 0,5 mg.L-1,0,7 mg.L-1 i 0,9 mg.L-1. Procedura de fitare liniar folosit presupune ca incertitudinile valorilor de pe abscis s fie considerabil mai mici de ct cele ale valorilor de pe ordonat. Prin urmare, procedura uzual de calcul a incertitudinii lui c 0 reflect doar incertitudinea de pe abscis, nu i incertitudinea etaloanelor i nici corelaiile inevitabile introduse de diluiile succesive din aceeai soluie stoc. Totui, n acest caz, incertitudinea datorat soluiilor etalon este suficient de mic pentru a fi neglijat. Cele cinci soluii au fost msurate de cte trei ori fiecare, rezultnd urmtoarele date:
Tabel III.2.8. Concentraie [mg.L-1]
0,1 0,3 0,5 0,7 0.9
1
0,028 0,084 0,135 0,180 0,215
2
0,029 0,083 0,131 0,181 0,230
3
0,029 0,081 0,133 0,183 0,216
Dreapta de etalonare este descris de ecuaia:

165
Lucrri de laborator
Aj= ci.B1+B0 unde: Aj, a j-a msurare de absorban a soluiei etalon; c I concentraie corespunztoare a substanei etalon I; B1 pant a dreptei; B0 deprtarea de la origine a dreptei. Iar rezultatul filtrrii liniare este:
Tabel III.2.9. B1 B0 Valoare 0,2410 0,0087 Abatere standard 0,0050 0,0029
cu un coeficient de corectie, r de 0,997. Dreapta de regresie este ilustrat n figura III.2.9. Abaterea standard rezidual, S este de 0,005486.
0.25
Absorban
x x x x x
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
Concentraie de Cd[mg/L]
Fig. III.2.9. Filtrarea liniar prin metoda celor mai mici ptrate i intervalul de incertitudine pentru determinri duplicate.
Soluia real a fost msurat de dou ori, obinndu-se o concentraie c 0 de 0,26 mg.L-1.
166
Lucrri de laborator
u(c0) este dat de:
S u(c0)= B1
1 1 (c0 c ) 2 0,005486 1 1 (0,26 0,5) 2 + + = + + p n S xx 0,241 2 15 1,2
u (c 0 ) = 0,018mg.L1
cu abaterea standard rezidual dat de :
S=
i
[ A
j =1
( B0 + B1 .c j )] 2 n2 = 0,005486
S = (c j c) 2 = 1,2
j =1
unde: B1 - pant a curbei de etalonare; p- numr de msurri efectuate pentru a determina pe c0; n - numr de msurri efectuate pentru etalonarea aparatului; c 0concentraia determinat de cadmiu n soluia de acid care a extras metalul; c- valoare medie a diferitelor soluii etalon folosite la etalonare (n este numrul de msurri); i -index pentru numrul de soluii etalon pentru etalonare; j-index pentru numrul de msurri pentru a obine curba de etalonare. Arie aV Msurarea de lungime: Aria suprafeei totale a vasului eantion, determinat din dimensiunile msurate a fost de 2,37 dm 2. Deoarece recipientul este aproximativ cilindric, dar nu perfect regulat, msurrile sunt estimate n limita a 2 mm pentru un nivel de ncredere de 95%. Dimensiunile tipice sunt ntre 1,0 dm i 2,0 dm ceea ce conduce la o incertitudine standard estimat a msurrii dimensiunilor de 1 mm (dup mprirea cifrei de 95% cu 1,96). Msurrile de arie cer uzual dou msurri de lungime, de nlime i respectiv, de lime (adic 1,45 dm i 1,64 dm ). Aria: Deoarece vasul nu are o form geometric perfect, este o incertitudine n oricare calcul de arie; n acest exemplu, se estimeaz c aceasta contribuie suplimentar cu 5% la un nivel de ncredere de 95%. Contribuiile incertitudinii la msurarea lungimii i, respectiv, a ariei se combin n maniera uzual:
167
Lucrri de laborator
0,05.2,37 u (a V ) = 0,01 + 0,01 + 1,96

2 2
2 u (a V ) = 0,06 dm Efectul temperaturii ftemp Au fost efectuate un numr de studii privind efectul temperaturii asupra extragerii metalului dintr-un perete ceramic. n general, efectul temperaturii este substanial i sa observat o cretere aproape exponenial a cantitii de metal extras cu temperatura, pn ce valorile limit sunt atinse. Doar un singur studiu a indicat mrimea efectelor n intervalul de temperatur (20.....25) oC. Din informaiile grafice prezentate, modificarea concentraiei metalului extras cu temperatura aproape de 25 0C este aproximativ liniar cu un gradient de aproximativ 5% 0C-1. Pentru domeniul de 2 0C, permis de metoda empiric, aceasta conduce la un factor de 1 0,1. Convertind aceasta ntr-o incertitudine standard i presupunnd o distribuie rectangular, se obine:
u ( f temp ) = 0,1 /
3 = 0,06
Efectul timpului ftimp Pentru un proces relativ lent ca acea extragere, cantitatea eliberat va fi aproximativ proporional cu timpul pentru mici modificri n timp. Krinitz i Franco au gsit c modificarea medie n concentraie pe o perioad mai mare de 6 h de extracie este de aproximativ 1,8 mg.L-1 n aproximativ 0,3%h. Pentru o durat de (24 0,5) h va fi necesar o corecie pentru c 0 cu factorul ftimp de 1 (0,5.0,003) = 1 0,0015. Aceasta este o distribuie rectangular care conduce la o incertitudine standard: u(ftimp) = 0,0015/ 3 = 0,001 Concentraia de acid facid Un studiu asupra efectului concentraiei de acid asupra cadmiului extras a artat c modificnd concentraia de la 4 la 5% vol a crescut cadmiulu extras dintr-un anumit lot ceramic de la 92,9 la 101,9 mg.L -1, adic o modificare n facid de (101,992,9)/92,9=0,097 sau aproape de 0,1. Un alt studiu, folosind metoda eliberrii fierbini, a artat o modificare comparabil (50% modificare n plumbul extras de 2 la 6% vol.). Presupunnd c acest efect este aproximativ liniar cu concentraia de acid se obine o modificare estimat n facid de aproximativ 0,1 per % vol. ntr-un experiment separat, concentraia i incertitudinea sa standard s-au stabilit folosind titrarea cu o soluie etalon de NaOH cu titrul (3,996% vol u= 0,008% vol). Considernd incertitudinea de 0,008% vol pentru concentraia de acid, atunci incertitudinea
168
Lucrri de laborator
factorului facid este de 0,008.0,1=0,0008. Deoarece incertitudinea concentraiei de acid este deja exprimat ca incertitudine standard, aceast valoare poate fi utilizat direct ca incertitudine asociat cu facid. Not: n principiu, incertitudinea valorii ar trebui corectat pentru presupunerea c singurul studiu menionat mai sus este suficient de reprezentativ pentru toate materialele ceramice. Prezenta valoare indic totui o estimaie rezonabil pentru mrimea incertitudinii.
Tabel III.2.10. Valori intermediare i incertitudini pentru analiza cadmiului extras Descriere c0 VL aV facid ftimp ftemp Coninutul de cadmiu n soluia de acid Volumul de acid care a extras Cd Arie a suprafeei vasului Influen a concentraiei acidului Influen a timpului Influen a temperaturii Valoare 0,26 mg.L-1 0,332 L 2,37 dm2 1,0 1,0 1,0 Abatere standard u(x) 0,018 mg.l-1 0,018 l 0,06 dm2 0,0008 0,001 0,06 Abatere standard relativ u(x)/x 0,069 0,054 0,025 0,0008 0,001 0,06
Etapa 4: Calcul incertitudine standard compus Cantitatea de cadmiu, n mg.L-1, extras per unitate de arie este dat de:
r=
c 0 .V L .d . f acid . f timp . f temp av
Valorile intermediare i incertitudinile lor standard sunt sintetizate n tabelul III.2.10. nlocuind acele valori se obine:
r = 0,26.0,332 .1,0.1,0.1,9 = 0,036 mgdm2 2,37
Pentru a calcula incertitudinea standard compus a unui produs (ca cel de mai sus), se utilizeaz astfel incertitudinile standard:
169
Lucrri de laborator
u (c0 ) u( uc ( r ) VL + = r VL c0
U (a V + a V
u ( f timp) u ( f temp) u ( f acid ) ) + + f + f f temp acid timp
= 0,064 2 + 0,0056 2 + 0,025 2 + 0,0008 2 + 0,0012 + 0,06 2 = 0,095 uc ( r ) = 0.095 r = 0,0034 mg .dm2
Un model mai simplu de determinare, cu ajutorul diagramei de mprtiere, a incertitudinii standard compuse este ilustrat n tabelul III.2.11 de mai jos. n cel de-al doilea rnd de la C2 la H2 sunt introduse valorile parametrilor, iar n rndul de mai jos (C3:H3) incertitudinile lor standard. Programul copiaz valorile de la C2:H2 n cea de-a doua coloan (B5:B10). Folosind aceste valori, este calculat rezultatul (r) i prezentat n celula B12. Celula C5 indic valoarea lui c 0 din celula C2 plus incertitudinea sa, prezentat n celula C3. Rezultatul calcului folosind valorile de la C5:C10 este indicat n celula C12. Coloanele D i H urmresc o procedur similar. Rndul 13 ( C13:H13) arat diferenele dintre rndul (C12:H12) minus valoarea dat n celula B12. n rndul 14 (C14:H14) valorile rndului 13(C13:H13) sunt ridicate la ptrat i nsumate pentru a se obine valoarea indicat n celula B14. Celula B16 indic incertitudinea standard compus, care este rdcina ptrat din B14. Contribuiile diferiiilor parametrii i influena mrimilor la incertitudinea de msurare sunt ilustrate n figura III.2.9, comparnd mrimea fiecrei contribuii (C13:H13 din tabelul III.2.11) cu incertitudinea compus (B16). Incertitudinea compus u(r) se obine aplicnd un factor de extindere de 2. Ur =0,0034.2 =0,007 mg .dm-2 Astfel, cantitatea de cadmiun extras, msurat conform BS 6748.1986 este de (0,036 0,007) mg.dm-2 unde incertitudinea specificat este calculat folosind un factor de extindere de 2.
Tabel III.2.11. Calculul cu diagram de mprtiere a incertitudinii pentru analiza cadmiului extras din pereii ceramici
A 1 2 3 4 5 6 7 8 B valoare incertitudine c0 VL aV facid 0,26 0,332 2,37 1,0 C c0 0,26 0,018 0,278 0,332 2,37 1,0 D VL 0,332 0,0018 0,26 0,3338 2,37 1,0 E aV 2037 0,06 0,26 0,332 2,43 1,0 F facid 1,0 0,0008 0,26 0,332 2,37 1,0008 G ftimp 1,0 0,001 0,26 0,332 2,37 1,0 H ftemp 1,0 0,06 0,26 0,332 2,37 1,0
170
Lucrri de laborator A ftimp ftemp r u(y,xi) u(y)2 uc(r) B 1,0 1,0 0,036422 1,199 E-5 0,0034 C 1,0 1,0 D 1,0 1,0 E 1,0 1,0 F 1,0 1,0 1,0 G 1,001 1,0 H 1,0 1,06
9 10 11 12 13 14 15 16
0,038943 0,036619 0,035 523 0,00252 0,00019 -0,000899 1 7 6,36 E-8 3,90 E-8 8,09 E-7
0,036458 0,038607 0,036 451 0,000036 0,002185 0,000 029 1,33 E-9 4,78 E-6 8,49 E-10
III.2.2.4 Cantitatea de pesticide organofosforice n pine - extracie i determinare prin GC. Introducere Acest exemplu ilustreaz modul n care datele de validare intern pot fi folosite pentru a cuantifica incertitudinea msurtorii. Scopul msurrii este de a determina cantitatea de reziduu de pesticid organofosforic, din pine. Schema de validare i experimentele stabilesc trasabilitatea prin msurri pe probe injectate. Se presupune c incertitudinea datorat oricrei diferene n rspunsul msurrii la injectare i analitul din prob este mic comparativ cu incertitudinea total a rezultatului. Pasul 1. Specificaii Specificarea msurandului pentru metode analitice mai extinse este bine fcut printr-o descriere clar a diferitelor etape ale metodei analitice i prin indicarea ecuaiei de calcul a msurandului. Procedur Procedura de msurare este ilustrat schematic n figura III.2.10. Etapele separate sunt: i) Omogenizarea: Proba complet este mprit n fragmente mici (aproximativ 2 cm), se face o selecie ntmpltoare de 15 fragmente, iar aceste subprobe sunt omogenizate. Unde se presupune existena neomogenitii se practic o prelevare proporional nainte de amestecare. ii) Cntrind subprobele se obine masa probei mprob iii) Extracie: extracia cantitativ a analitului cu solvent organic, decantare i uscare printr-o coloan cu sulfat de sodiu anhidru (eliminarea apei), apoi concentrarea extractului folosind un aparat Kedurna-Danish. iv) Extracia lichid-lichid: separarea lichidului acetonitril/hexan, splarea extractului de acetonitril cu hexan, eliminarea apei din stratul de hexan printr-o coloan de sulfat de sodiu.
171
Lucrri de laborator
v)
Concentrarea extractului splat prin trecerea de gaz prin extract pn aproape de apariia vaporilor. vi) Diluarea la volum standard Vop (aproximativ 2 mL) n tub gradat de 10 mL. vii) Msurare: injectare i msurare prin GC a 5 L prob de extract pentru a obine picul de intensitate Iop. viii) Prepararea a aproximativ 5 g/mL soluie standard (concentraia masic cref). ix) Etalonarea GC folosind standardul preparat anterior, injecie i msurarea cu GC a 5 L de standard pentru a obine picul de referin de mrime Iref.
Omogenizare
Extracie
Splare
Concentrare
Prepararea soluiei standard
Determinare GC
Etalonare GC
Rezultat
Fig. III.2.10. Analiza pesticidelor organofosforice
Calcul Concentraia masic cop n soluia final este dat de: I op c op = c ref g / mL I ref i nivelul estimat de pesticide Pop n prob (mg/kg) este dat de:
Pop =
172
c op Vop Re c m proba
10 6 mg / kg
Lucrri de laborator
care conduce la ecuaia global:

Pop = I op c ref Vop I ref Re c m proba 10 6 mg / kg
unde: Pop = cantitatea de pesticide n prob, mg/kg; I op = mrimea picului extractului de prob; cref = concentraia masic a soluiei etalon, g/mL; Vop = volumul total al extractului de prob, mL; 106 = factorul de transformare din g/g n mg/kg; Iref = mrimea picului soluiei etalon; Rec = recuperarea; mprob = masa de subprob luat n lucru, g. Scop Metoda analitic este aplicabil unui interval mic de pesticide chimice similare, de concentraie 0,01 2 mg/kg cu diferite tipuri de pine ca matrice. Pasul 2. Identificarea i analiza surselor de incertitudine Identificarea tuturor surselor relevante de incertitudine pentru o procedur analitic att de complex este mai bine fcut prin realizarea diagramei cauz-efect. Toi parametrii din ecuaia de calcul a msurandului reprezint ramurile principale ale diagramei. Apoi se adaug ceilali factori n diagram innd cont de fiecare pas din procedura analitic (figura III.2.11) pn ce factorii care contribuie devin suficient de slabi (fr importan). Totul conduce la urmtoarea diagram:
c(ref) I(op) V(op) Etalonare (lin) m(ref) Temperatur V(ref) Etalonare Diluie Etalonare fidelitate Etalonare fidelitate Etalonare fidelitate fidelitate Puritate(ref) Temperatur
fidelitate
fidelitate
m(gross) Linearitat e Sensibilitate
Etalonare
m(tara) Linearitate Sensibilitate
Etalonare fidelitate I(ref) Etalonare m(prob) fidelitate
F(hom)
Recuperare
Fig. III.2.11. Diagrama cauz-efect cu adugarea ramurilor principale pentru neomogenitatea probelor.
173
Lucrri de laborator
Neomogenitatea probei nu este un parametru n ecuaia general a msurandului, dar poate avea un efect semnificativ n procedura analitic. De aceea o nou ramur principal se adaug n diagrama cauz-efect. n final ramura incertitudinii datorat neomogenitii probei trebuie inclus n calculul msurandului. Pentru a indica efectul incertitudinilor rezultate din aceast surs n mod clar, este necesar a se scrie:
Pop = Fhom I op c ref Vop I ref Re c m proba 10 6
unde Fhom este un factor de corecie care s-a presupus a fi unitar n calculul principal. Acest lucru face evident faptul c incertitudinea factorilor de corecie trebuie inclus n estimarea incertitudinii globale. Expresia final arat de asemenea cum se aplic incertitudinea. Not: Factorii de corecie: aceast aproximare este destul de general i poate fi foarte valabil scoaterii n eviden a aspectelor presupuse. n principiu, orice msurare are asociai astfel de factori de corecie, care s-au presupus a fi unitari. De exemplu, incertitudinea n cop poate fi exprimat ca o incertitudine standard pentru c op sau ca incertitudine standard care reprezint incertitudinea unui factor de corecie. n ultimul rnd, valoarea este identic incertitudinii pentru c op exprimat ca deviaie standard relativ. Pasul 3. Cuantificarea componentelor incertitudinii Cuantificarea diferitelor componente ale incertitudinii utilizeaz date din trei pai majori ai studiilor de dezvoltare i validare intern. Estimarea cea mai fezibil a tuturor variaiilor succesive ale procesului analitic. Cea mai bun estimare posibil a tuturor influenelor (Rec) i incertitudinilor acestora. Cuantificarea oricrei incertitudini asociate cu efecte incomplet stabilite din punct de vedere al studiilor privind performana. Anumite rearanjri a influenelor identificate anterior conduc la diagrama caz-efect din figura III.2.12 care coreleaz aceti trei pai majori.
174
Lucrri de laborator
I(op) I(ref) m(ref) V(ref) diluie V(op) m(prob) Etalonare Diluie m(gross) Linearitate Etalonare Etalonare m(tara) Linearitate I(op) V(op) Etalonare (lin) m(ref) Temperatur V(ref) Etalonare Etalonare Etalonare Temperatur Puritate(ref)
F(hom)
Recuperare
I(ref)
m(prob) Etalonare
Fig. III.2.12. Diagrama cauz-efect dup rearanjarea pentru acomodarea datelor de la studiul de validare.
P(op) 1. Studiul fidelitii Variaiile succesive totale ale procedurii analitice realizat printr-un numr de probe paralele de pesticide organofosforice tipice gsite n diferite probe de pine. Aceste rezultate sunt centralizate n tabelul III.2.12. Deviaia standard total s = 0,382. Rezultatul diferenei standard (diferena mprit la medie) constituie o msur a variabilitii fidelitii. Pentru a obine incertitudinea standard relativ estimat pentru determinri unice se ia deviaia standard a diferenelor standard i se divide la 2 pentru a corecta deviaia standard a diferenelor pereche fa de incertitudinea standard a unei valori unice. Aceasta d o valoare pentru incertitudinea 0,382 = 0,27 . standard datorat variaiei succesive a ntregului proces analitic: 2 Not: La prima vedere s-ar prea c probele paralele (duble) furnizeaz insuficiente grade de libertate. Dar scopul nu este de a obine numere foarte exacte pentru fidelitatea procesului analitic pentru un pesticid specific ntr-un tip specific de pine. n acest studiu este mai important de a ncerca/analiza o varietate mai larg de diferite materiale i niveluri de concentraie a pesticidelor pentru o selecie reprezentativ a pesticidelor organofosforice tipice. Acest lucru se realizeaz n modul cel mai eficient prin ncercri duble pe diferite materiale, furniznd (pentru estimarea repetabilitii) aproximativ un grad de libertate pentru fiecare material studiat n duplicat. 2. Studiul interferenelor
175
Lucrri de laborator
Interferenele procedurii analitice au fost analizate n scopul validrii interne folosind probe injectate. Tabelul III.2.13 centralizeaz rezultatele unui studiu ndelungat pe probe injectate de diferite tipuri. Linia relevant este linia de intrare pine care arat o recuperare medie de 90% pentru 42 probe cu o deviaie standard (s) de 28 %. Incertitudinea standard a fost calculat ca deviaie standard a mediei:
u (Rec) = 0,28 42 = 0,0432
Exist trei cazuri posibile pentru atingerea valorii recuperrii Re c : Re c lund n considerare c u ( Re c ) nu este diferit semnificativ de 1, deci
nu se aplic corecia. Re c lund n considerare c u ( Re c ) este semnificativ diferit de 1 i se aplic o corecie Re c lund n considerare c u ( Re c ) este semnificativ diferit de 1 dar nu se aplic corecie. Pentru a determina dac recuperarea este semnificativ diferit de 1 s-a folosit un test important. Testul statistic t s-a calculat folosind urmtoarea ecuaie:
t= 1 Rec u (Rec) = (1 0,9) =2,315 0,0432
Aceast valoare se compar cu 2-valoarea critic t crit, pentru n-1 grade de libertate la un nivel de ncredere de 95% (unde n este un numrul de rezultate folosit pentru estimarea Re c ). Dac t tcrit atunci Re c este semnificativ diferir de 1; t = 2,31 tcrit,41 2,021 n acest exemplu, s-a aplicat un factor de corecie (1/ Re c ) i de aceea Re c este n mod explicit inclus n calculul rezultatului.
Tabel II.2.12. Rezultatele analizelor duble de pesticide Reziduu Malathion Malathion Malathion Malathion Malathion Pirimiphos 176 D1 [mg/kg] 1,30 1,30 0,57 0,16 0,65 0,04 D2 [mg/kg] 1,30 0,90 0,53 0,26 0,58 0,04 Media [mg/kg] 1,30 1,10 0,55 0,21 0,62 0,04 Diferena D1-D2 0,00 0,40 0,04 -0,10 0,07 0,00 Diferena/medie 0,000 0,364 0,073 -0,476 0,114 0,000
Lucrri de laborator
Reziduu Methyl Chloropyrifos Methyl Pirimiphos Methyl Chloropyrifos Methyl Pirimiphos Methyl Chloropyrifos Methyl Chloropyrifos Methyl Pirimiphos Methyl Chloropyrifos Methyl Pirimiphos Methyl
D1 [mg/kg] 0,08 0,02 0,01 0,02 0,03 0,04 0,07 0,1 0,06
D2 [mg/kg] 0,09 0,02 0,02 0,01 0,02 0,06 0,08 0,01 0,03
Media [mg/kg] 0,085 0,02 0,015 0,015 0,025 0,05 0,75 0,10 0,045
Diferena D1-D2 -0,01 0,00 -0,01 0,01 0,01 -0,02 -0,10 0,00 0,03
Diferena/medie -0,118 0,000 -0,667 0,667 0,400 -0,400 -0,133 0,000 0,667
Tabel II.2.13. Rezultatul studiilor de calcul al recuperrii pentru pesticide Substrat Ulei uzat Unt Hran tip I pentru animale Grsimi animale i vegetale de tip I Brassicas 1987 Pine Rusks M M R W S B Tip de reziduu PCB OC OC OC OC OP OP OC OC OC OC OC OC Concentraia [mg/kg] 10,0 0,65 0,325 0,33 0,32 0,13 0,13 0,325 0,325 0,325 0,325 0,325 0,325 N1) 8 33 100 34 32 42 30 8 9 11 25 13 9 Media2)[%] 84 109 90 102 104 90 84 95 92 89 88 85 84
s 2)
[%]
9 12 9 24 18 28 27 12 9 13 9 19 22
1) Numr de determinri efectuate 2) Media i deviaia standard a probelor sunt date n procente de recuperare.
177
Lucrri de laborator
3. Alte surse de incertitudine Diagrama cauz-efect din figura III.2.13 arat care alte surse de incertitudine trebuie examinate i eventual considerate n calculul incertitudinii msurrii. (1) Considerate n timpul investigrii variabilitii procedurii analitice. (2) Considerate n timpul studiului interferenelor n procedura analitic aplicat. (3) S fie considerate n timpul evalurii altor surse de incertitudine.
I(op) I(ref) m(ref) V(ref) diluie V(op) m(prob) Etalonare (3) Diluie m(gross) Linearitat e Etalonare(3) Etalonare(2) I(op) Etalonare (lin)(2) m(ref) Temperatur(2) Etalonare (2) V(ref) Etalonare (2) Etalonare(2) Temperatur(2) c(ref) V(op) Puritate(ref)
m(tara) Linearitate
F(hom)(3)
Recuperare(2)
I(ref)
m(prob) Etalonare(2)
Fig. III.2.13. Evaluarea altor surse de incertitudine
Toate balanele i sticlria volumetric important folosit se afl sub un control strict. Studiul interferenelor ia n considerare influena etalonrii sticlriei volumetrice pentru c n timpul investigaiei s-au folosit diferite baloane cotate i pipete. Studiile extinse de variabilitate, care s-au efectuat n mai mult de jumtate de an, au determinat de asemenea influena temperaturii mediului asupra rezultatului. Puritatea standardelor de referin este dat de fabricant ca fiind 99,530,06%. Puritatea este o alt surs posibil de incertitudine cu o incertitudine standard de 0,0006/ 3 = 0,00035 (distribuie rectangular). Dar aceast valoare este mult prea mic pentru a fi considerat ca avnd o contribuie semnificativ. Alt cantitate care influeneaz este nelinearitatea semnalelor pesticidelor organofosforice studiate n domeniul n care s-au situat concentraiile. Studiul de validare intern a dovedit c acest caz studiat nu este semnificativ.
178
Lucrri de laborator
Omogenitatea subprobelor este ultima surs de incertitudine rmas. Nu au fost disponibile date asupra distribuiei urmelor de componente organice n produsele de pine, cu toate c s-a fcut o cercetare extins n literatur (la prima vedere acest lucru este surprinztor dar muli analiti de hran consider existena omogenitii ca atare, dect s estimeze evaluarea neomogenitii). Astfel este mai practic s msori omogenitatea direct. Astfel contribuia omogenitii a fost estimat pe baza metodei de prelevare folosite. Pentru a ajuta estimarea, au fost considerate cteva scenarii ale distribuiei reziduului de pesticide i s-a folosit o distribuie binomial simpl pentru a calcula incertitudinea standard pentru cele total incluse n probele analizate. Scenariile i incertitudinile lor standard relative calculate n cantitatea de pesticide din proba final au fost: Reziduu distribuit numai pe suprafaa superioar: 0,58 Reziduu distribuit doar mai la suprafa: 0,20 Reziduu distribuit chiar n prob dar redus n concentraie datorit pierderilor prin evaporare sau descompunere: 0,05-0,10 (funcie de stratul de suprafa). Scenariul (a) a fost stabilit n condiii specifice prin prelevare proporional sau omogenizare complet. El poate apare n cazul adugrilor suplimentare (ntreaga smn) la suprafa. Scenariul (b) este considerat cel mai nefericit caz. Scenariul (c) este cel mai probabil dar nu poate fi uor distins de (b). Pe aceast baz a fost aleas o valoare de 0,2. Not: Pentru mai multe detalii ale modelului de neomogenitate a se vedea ultima seciune a exemplului. Calculul incertitudinii standard combinate n timpul studiului de validare intern a procedurii analitice, repetabilitatea incertitudinii i toate celelalte surse de incertitudine au fost bine investigate. Valoarea lor i incertitudinile sunt centralizate n tabelul III.2.14. Numai valoarea relativ a incertitudinii standard combinate poate fi calculat pentru c contribuia incertitudinii pentru ntreg intervalul analitului a fost evaluat.
uc = 0,27 2 + 0,048 2 + 0,2 2 = 0,34 uc ( Pop ) = 0,34 Pop Pop
Tabelul centralizator al acestui caz ia forma din tabelul III.2.15. Repetabilitatea reprezint contribuia cea mai mare la incertitudinea msurrii. Deoarece aceast component este derivat din toate variabilele metodei, ar putea fi necesar experimentarea suplimentar pentru a vedea unde pot fi fcute perfecionri. Totui incertitudinea poate fi redus semnificativ omogeniznd toat pinea nainte de a lua proba.
179
Lucrri de laborator
Incertitudinea standard extins U(P op) este calculat multiplicnd incertitudinea standard combinat cu un factor 2: U(Pop) = 0,34 Pop2 = 0,68 Pop
Tabel II.2.14. Incertitudinile n analiza pesticidelor Descriere Repetabilitate(1) Bias (Rec)(2) Alte surse (omogenitatea)(3) Valoare x 1,0 0,9 1,0 Incertitudinea standard u(x) 0,27 0,043 0,2 Incertitudinea standard relativ u(x)/x 0,27 0,048 0,2 Observaii
Analize duble pe tipuri diferite de probe Probe injectate Estimri stabilite la poluarea modelului Incertitudinea standard relativ
u ( Pop ) Pop
--
--
0,34
Tabel III.2.15. Incertitudinea n analiza pesticidelor A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 B Valoare Incertitudine Repetabilitatea Interferena Omogenitatea 1,0 0,9 1,0 1,1111 0,1394 ur(Pop) 0,37 C Repetabilitate 1,0 0,27 1,27 0,9 1,0 1,4111 0,30 0,09 D Interferena 0,9 0,043 1,0 0,9043 1,0 1,1058 - 0,0053 0,000028 E Omogenitate 1,0 0,2 1,0 0,9 1,2 1,333 0,222 0,04938
III.2.3. EXERCIIU S se calculeze incertitudinea la prepararea a 100 mL soluie de cobalt de 10 g/mL, folosind pulbere ce cobalt de puritate 99,9 %. Un balon cotat de clasa A de 100 mL este certificat cu 0,1 mL i are o abatere standard de repetabilitate de
180
Lucrri de laborator
0,0118 mL. Un balon cotat de 1000 mL este certificat cu 0,4 mL i are o abatere standard de repetabilitate 0,0596 mL. O pipet cu bul de 10 mL este certificat cu 0,02 mL i are o abatere standard de repetabiliate de 0,01. Temperatura la care s-a preparat soluia este de 20C.
181
Lucrri de laborator
III.3. DIAGRAMA DE CONTROL

III.3.1 CONSIDERAII TEORETICE Diagrama de control este o metod grafic care permite observarea modului n care se produc abateri sau variaii de la abaterea sau variaia admise. Aceasta implic faptul c verificrile sistematice, de exemplu pe zi sau pe lot, trebuie s arate c rezultatele rmn reproductibile i c metodologia de msurare a analitului este respectat Diagrama de control este instrumentul de control analitic cel mai utilizat i disponibil laboratoarelor de mediu. Utilizarea diagramei de control ca o activitate de rutin este de asemenea o cerin a multor programe de acreditare. Se pot aplica mai multe tipuri de diagrame de control,dar cele mai utilizate sunt: Diagrama de control a Mediei (diagrama- x , diagrama Shewhart) pentru controlul exactitii (bias) (fig. III.3.1) Diagrama de control de tip rat de recuperare (diagramaR) pentru controlul fidelitii (fig. III.3.2). A. Diagram - x poate fi nceput atunci cnd se dispune de un numr mare de valori msurate ale probei de control. Pentru aceasta se recomand s se nceap cu cel puin 20 analize repetate ntr-un interval de timp de cel puin 20 de zile. Se calculeaz media, x , i deviaia standard, s, ale setului de rezultate, apoi limitele de atenie (2s) i limitele de actiune ( 3s) care se traseaz de o parte i de alta a valorii medii (Figura2). Coordonatele diagramei sunt date de: numrul lotului sau data analizrii pe abscis concentraia sau semnalul analitic pe ordonat De fiecare dat cnd se obine un rezultat pentru proba de control dintr-un set de probe de ncercat, acest rezultat este nregistrat pe diagrama de control. n cazul n care o diagram s-a completat trebuie s se nceap alta nou. Regulile de control al calitii au fost dezvoltate pentru a detecta eroarea de justee excesiv i imprecizia ct i schimbrile i tendinele n analize.
182
Lucrri de laborator
Conc. (mg/L)
Dat/lot
LAC = limita de aciune LAT = limita de atenie
Fig. III.3.1. Diagrama de control a Mediei (diagrama- x )
1. 2. 3. 4. 5.
Regulile de atenie (dac apar) conduc la inspecia n continuare a datelor: un singur rezultat de control peste limita de atenie; Regulile de eliminare (dac apar) conduc la eliminarea datelor: -1 rezultat peste limita de aciune; -2 rezultate succesive peste aceiai limit de atenie; -7 rezultate succesive de aceiai parte a valorii medii; -10 rezultate succesive din 11 avnd aceeai valoare; -atunci cnd un rezultat nu pare corect. Regulile 1 i 2 apar n general datorit unor greeli de manipularea a sticlriei, greeli la diluii sau de calcul. Regulile 3 i 4 indic o eroare sistematic n proces. Pentru depistarea acestei erori sunt necesare i testri suplimentare pe probe blank, prin utilizarea unui standard independent sau prin calibrarea aparatului. Regula 5 este subiectiv i se bazeaz pe capacitatea analistului de a sesiza o posibil eroare. n acest scop sunt utile informatiile ncruciate, n care s se in
183
Lucrri de laborator
seama i de ali parametrii determinai la aceeai prob. De asemenea acest tip de abatere poate fi depistat n urma reclamaiei venite de la client. Limita de atenie este depit n general n mai puin de 5% din cazuri iar limita de aciune n 0,3 % din cazuri. Dac una dintre regulile de eliminare a fost ncalcat se iau urmtoarele msuri: se repet analiza iar dac noul rezultat obinut este bun se continu procesul analitic;
dac rezultatul nu este bun, se investigheaz cauza depirilor; nu se utilizeaz rezultatele pentru lotul n care s-a nregistrat depirea pn nu se depisteaz cauza. Rezultatele pot fi utilizate doar n cazul n care a fost o eroare de calcul care se poate remedia;
dup depistarea i eliminarea sursei de erori, se repet analizele pentru ntregul lot sau chiar i analizele din loturile anterioare, funcie de cauza generatoare de abateri. B. Diagrama - R poate fi obinut efectund analize n duplicat din acelai lot de probe de control sau probe de analizat. Diferenele ntre rezultate permit calcularea diferenei mediei - R ntre probele duplicat i deviaia standard - S R a domeniului tuturor perechilor duplicat. Parametrii R i SR se determin pentru cel puin 10 perechi de probe n duplicat efectuate iniial. Limitele de atenie i de aciune pot fi trasate la distanele 2s i 3s de media diferenelor. Graficul este pe o singur parte, n aa fel nct cea mai mic valoare a diferenei observabil s fie zero (figura III.3.2).
R
LAC LAT
Dat /lot
LAT = limit de atenie LAC = limit de aciune
Fig. III.3.2. Diagrama de control de tip rat de recuperare (diagrama R ) 184
Lucrri de laborator
Efectuarea analizelor n duplicat asupra probei de control n fiecare lot reprezint cea mai simpl cale de control al fidelitii. Un dezavantaj al utilizrii acestui tip de verificare a preciziei l constituie faptul c aceasta nu reflect complet fidelitatea analizei probei de analizat att n funcie de compoziia matricei ct i a concentraiei. Cel mai convenabil mod de a rezolva aceast problem este s se utilizeze mai multe probe de control de concentraii diferite sau s se utilizeze probe de analizat n locul probelor de control. Regulile de control al calitii precum i msurile care trebuie luate sunt similare celor din diagrama mediei, respectiv: Regulile de atenie (dac apar) conduc la inspecia n continuare a datelor: un singur rezultat de control peste limita de atenie; Regulile de eliminare (dac apar) conduc la eliminarea datelor: 1. -1 rezultat peste limita de aciune; 2. -2 rezultate succesive peste aceiai limit de atenie; 3. -7 rezultate succesive de aceiai parte a valorii medii; 4. -10 rezultate succesive din 11 avnd aceeai valoare; 5. -atunci cnd un rezultat nu pare corect. n laboratoarele mari, diagramele de control sunt efectuate automat pe computer. Pentru laboratoarele mici sau medii este recomandat realizarea manual a diagramei i acolo unde este posibil calculul computerizat. III.3.2. EXEMPLU DE REALIZARE A UNEI DIAGRAME DE CONTROL n exemplul urmtor este prezentat o diagram de control trasat cu o prob de control preparat dintr-un Material de Referin Certificat de Cr 6+ avnd valoarea certificat de 21,25 g/mL . n tabelul III.3.1 sunt prezentate rezultatele obinute n urma efectuarii repetate a determinarii ntr-un interval de 20 de zile.Tot n acest tabel sunt nscrise i valorile calculate ale parametrilor cu ajutorul crora se traseaz diagrama de control Datele calculate se trec n formularul diagrama de control nscriind numrul lotului sau data analizrii pe abscis i concentraia sau semnalul analitic pe ordonat. Liniile care marcheaz valoarea medie, limitele de atenie i limitele de actiune se nscriu cu culori diferite pentru a se observa mai uor eventualele depiri ale valorilor limit. n formularul din figura III.3.3 s-a trasat diagrama de control a soluiei de Cr6+. Apoi, la fiecare lot de minim 20 probe analizate s-a analizat i proba de control cu concentraie cunoscut iar rezultatele au fost nscrise n diagram, mpreun cu data la care s-au efectuat testele i identificarea persoanei care a fcut analizele.
185
Lucrri de laborator
Tabel III.3.1. Rezultatele determinrilor efectuate pentru trasarea diagramei de control Zi 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Valoare xi 20,76 20,91 21,33 21,34 21,45 21,45 21,61 21,57 21,57 21,57 21,61 21,54 20,97 20,96 21,57 20,92 21,21 21,18 20,96 20,95
_ Valoare x 21,271g/mL
s = 0,303 g/mL 2s = 0,606 g/mL 3s = 0,909 g/mL x +2s = 21,877 g/mL x +3s = 22,180 g/mL x -2s = 20,665 g/mL x -3s = 20,362 g/mL
Rezultatele obinute au fost:

Data 12.04.2004 19.05.2004 29.05.2004 30.06.2004 16.07.2004 24.07.2004 07.08.2004 15.08.2004 29.08.2004 Valoarea obinut g/mL 21,375 21,601 21,090 20,703 21,375 21,271 21,271 21.601 20,901
Cu ajutorul reprezentrii grafice se poate observa cu uurin care dintre valorile determinate nu se ncadreaz n limitele admise i se poate intervenii n timp util n redresarea procesului analitic.
186
Lucrri de laborator
III.3.3. EXERCIIU Pentru ntocmirea diagramei de control n cazul determinrii Pb prin metoda spectoscopiei de absorbie atomic s-au efectuat 20 determinri repetate pe o soluie standard de Pb avnd concentraia de 10 mg/L. S-au obinut urmtoarele rezultate: x1 x2 x3 x4 x5 x11 x12 x 13 x 14 x 15 = 10,07 = 10,09 = 9,94 = 9,98 = 9,91 = = = = = 10,09 9,92 9,94 9,72 10,07 x6 x7 x8 x9 x10 x 16 x 17 x 18 x 19 x 20 = 9,83 = 9,92 = 9,61 = 9,79 = 9,72 = 9,98 =9,91 = 9,61 = 9,79 = 9,83
Folosind formulele de calcul pentru valoarea medie ( x ) i abaterea standard (s) s-au obinut urmtoarele rezultate:
a)
x=
x
i =1
= 9,887
b)
s=
(x
i =1
x)2
= 0,151
n 1
S-au calculat valorile pentru limitele de atenie x 2 s i de actiune x 3 s obinndu-se valorile: 2 s = 0,302 3 s = 0,453
x + 2s = 10,19 x - 2s = 9,58 x + 3s = 10,34 x - 3s = 9,43
S se marcheze pe diagrama de control liniile corespunztoare valorii medii ( x ), a limitelor de control i a limitelor de detecie. S-au efectuat n timp determinri pe probe de control cu concentraie de 10 mg/L i s-au obinut urmtoarele valori:
187
Lucrri de laborator
Data efecturii 7.01 18.01 21.01 24.01 28.01 03.02 07.02 12.02 17.02 19.02 22.02 01.03 09.03
Valori determinate 9,985 9,813 10,48 10,04 10,01 9,98 9,93 9,91 9,90 9,84 9,97 9,45 9,51
Data efecturii 15,03 19,03 24,03 30,03 07,04 12,04 19,04 25,04 30,04 04,05 10,05 17,05 20,05
Valori determinate 9,65 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,98 9,87
nscriei pe diagram aceste valori i mentionai n care situaii sistemul analitic este ieit de sub control fiind necesare msuri de intervenie.
188
Lucrri de laborator
Fig. III.3.3. Diagrama de control a soluiei de Cr6+. 189
Lucrri de laborator
190
Lucrri de laborator
BIBLIOGRAFIE EURACHEM Guide The Fitness for Purpose of Analytical Methods. A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics, First English Edition (1998); EURACHEM Guide - Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement, Second edition (1999); NATA 17025 Laboratory assessment worksheet august 2000; W. Funk, V. Dammann, G. Donnevert Quality Assurance in Analytical Chemistry VCH, 1995; ISO 7870:1993- Diagrame de control- Principii generale i mod de ntrebuinare; ISO 8258-1991- Diagrame de control Shewart.
191

Capitol III

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Capitol III

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

III.

III.1. VALIDAREA METODELOR DE ANALIZ

Valoare optim Tabel III.9. Repetabilitate Msurtori

Calcul/Estimare Valoare optim

III.2. INCERTITUDINEA DE MSURARE

Fig. III.2.1. Procedur de msurare

Tabelul III.2.2 indic valorile calculate i incertitudinea standard asociat.

u c (TSM ) = TSM 0,1694 = 13 0,1694 = 2,20mg / L

III.2.2.2. Titrare acido / bazic

Titrare KHP cu NaOH

Transferul unui volumde HCl

Titrare HCl cu NaOH

1000 m KHP PKHP VT 2 mol / L VT 1 FKHP V HCl

Fig. III.2.3. Diagrama final cauz-efect

Compunnd aceste contribuii se obine valoarea de:

Etapa 4. Calculul incertitudinii standard compus c HCl este dat de:

1000 m KHP PKHP VT 2 VT 1 FKHP VHCl

Folosind aceste valori:

Incertitudinile asociate fiecrei componente sunt n mod corespunztor compuse:

E V (T2) 14,89 0,015 0,3888 1,0 14,89 18,64

F V (T1) 18,64 0,016 0,3888 1,0 14,89 18,64

G F (KHP) 204,2212 0,0038 0,3888 1,0 14,89 18,64

H V (HCl) 15 0,011 0,3888 1,0 14,89 18,64 204,2212 15

0,3888 1,00029 14,89 18,64

1,0 14,89 18,64

204,2212 204,2212 204,2212 204,2212 204,2212 15 15 15 15 15

Fig. III.2.4. Incertitudini n titrarea acid-baz

c 0 .V L .d . f acid . f timp . f temp [ mg .dm 2 ] aV

Umplere cu acid 4% vol

Extragere metal prin dizolvare Preparare soluii etalon pentru etalonare

Omogenizare soluie de acid

Fig. III.2.5. Procedura de extragere a cadmiului

Rezultat, r Lungime (1) Lungime (2) Arie A(V)

Soluii etalon metalice 4% (vol.)

(1000 1) mg Pb n 1 L de acid acetic

Preparare 161 soluii etalon pentru Etalonare etalonare AAS

Fig. III.2.7. Diagrama cauz efect iniial

c 0 .V L .d . f acid . f timp . f temp aV

Dreapta de etalonare este descris de ecuaia:

0.00 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

u(c0) este dat de:

1 1 (c0 c ) 2 0,005486 1 1 (0,26 0,5) 2 + + = + + p n S xx 0,241 2 15 1,2

0,05.2,37 u (a V ) = 0,01 + 0,01 + 1,96

c 0 .V L .d . f acid . f timp . f temp av

u ( f timp) u ( f temp) u ( f acid ) ) + + f + f f temp acid timp

Prepararea soluiei standard

Fig. III.2.10. Analiza pesticidelor organofosforice

care conduce la ecuaia global:

m(gross) Linearitat e Sensibilitate

m(tara) Linearitate Sensibilitate

Etalonare fidelitate I(ref) Etalonare m(prob) fidelitate

Fig. III.2.13. Evaluarea altor surse de incertitudine

III.3. DIAGRAMA DE CONTROL

Fig. III.3.1. Diagrama de control a Mediei (diagrama- x )

Fig. III.3.2. Diagrama de control de tip rat de recuperare (diagrama R ) 184

Rezultatele obinute au fost:

Fig. III.3.3. Diagrama de control a soluiei de Cr6+. 189

S-ar putea să vă placă și