Primirea si fixarea pieselor chirurgicale

1. Pregatirea pentru fixare:

identificare
spalare
fixare in formol 10-15% (12 24 h)
2. Pregatirea pentru macroscopie:
Spalare din formol
Descriere macro
Alegere fragment
Numerotarea pieselor
3. Pregatirea pentru histochineta
4. Pastrarea rezervelor.

Examen citologic

Tehnica de lucru
1. Primirea produselor
- lichide de punctie
- urini
- aspirate bronsice, brosaje , spute
2.Echilibrare eprubete
3.Centrifugare
- pornire centrifuga in pozitia (4)
- se selecteaza turatia
- timp centrifugare (10-15 min - 1000rot/min)
4.Etalarea materialului biologic pe lame cu lamela sau
ansa
5.Uscare la aer
6.Fixare cu alcool metilic absolut (1-3 min)
7.Colorare - solutie Giemsa (30 min)
- frotiurile cervico-vaginale colorate
metoda Babes Papanicolau
8.Spalare in apa robinet

prin

9.Examen microscopic

Coloratie ( HE ) pentru examenul extemporaneu

intraoperator - criostat

Tehnica de lucru

1. Spalarea cu apa a lamei ce contine sectiunea.

2. Colorare cu Hematoxilina (2 min).
3. Spalare in apa.
4. Diferentiere in apa litinata (5-10 sec.)
5. Colorare cu Eozina (30 sec).
6. Spalare in apa.
7. Deshidratare in alcool etilic (5-10 sec).
8. Toluen pentru clarificare.
9. Montarea lamelei peste sectiune (balsam
Canada).

TEHNICA IMBALSAMARII

1. Se practica o incizie xifo-ombilicala

2. Curatarea cavitatii abdominale (extragerea
eventualului lichid si a altor materiale biologice)
3. Creearea unui suport de vata sau material textil
intratoracic si intraabdominal
4. Introducerea unei cantitati suficiente de formol in
cavitatea toracica si abdominala (aproximativ 30 50
ml / KG)
5. Suturarea inciziei practicate initial.
6. Igienizarea si cosmetizarea cadavrului.

TEHNICA AUTOPSIEI

1. Se practica o incizie submentopubiana.

2. Se inlatura coastele cu ajutorul unui costotom.
3. Se analizeaza cu atentie cavitatea toracica si
abdominala.
4. Se recolteaza fragmente din zonele suspecte de o
anumita leziune patologica.
5. In cazul autopsiei complete, se practica si o incizie
bimastoidiana prin vortex, se decaloteaza craniul apoi
se taie cu ajutorul unui fierastrau.
6. Extragerea creierului
7. Creearea unor suporturi de vata sau material textile
8. Adaugarea de formol 30 50 ml /KG
9. Suturarea inciziilor practicate
10. Igienizarea

si cosmetizarea cadavrului.

Recoltarea si preelevarea materialului

bioptic
Modalitatea de aducere a produselor biologice in serviciul de
anatomie patologica este urmatoarea:
a) produsele biologice vor fi insotite de un bilet de trimitere care
trebuie sa cuprinda: numele si prenumele pacientului; sexul; varsta;
codul numeric personal; numarul foii de observatie; date clinice si
tratamente aplicate anterior; datele examenului macroscopic
intraoperator al piesei prelevate, in cazul pieselor chirurgicale;
rezultate histopatologice sau citopatologice anterioare; diagnosticul
prezumtiv; data operatiei sau efectuarii biopsiei; semnatura si
parafa medicului care trimite aceste produse;
b) produsele biologice vor fi inregistrate in registrul de biopsii,
cu urmatoarele rubrici: numarul de ordine, numele si prenumele
pacientului, codul numeric personal, sexul, varsta, piesa trimisa,
numarul foii de observatie, diagnosticul clinic, sectia care trimite
piesa, numele operatorului, data primirii piesei;
c) piesele operatorii se trimit in totalitate; nu sunt admise
impartirea piesei si trimiterea de tesut in mai multe servicii de
anatomie patologica simultan; piesa se poate trimite proaspata
(nefixata) in maximum doua ore de la operatie sau in formol
tamponat 10% dupa acest interval, intr-un container care trebuie sa
contina un volum de formol de 2-10 ori mai mare decat volumul
piesei; containerul va fi inscriptionat cu numele si prenumele
pacientului, numele piesei trimise, data operatiei, numele
operatorului; piesa chirurgicala va fi trimisa nesectionata,
deschiderea ei facandu-se de catre medicul anatomopatolog; cand
acesta considera necesar, poate solicita prezenta medicului operator
la orientarea macroscopica; medicul anatomopatolog consemneaza
numarul, dimensiunile, aspectul pe suprafata, aspectul pe sectiune
al pieselor operatorii, date care vor fi incluse in buletinul
histopatologic la rubrica examenului macroscopic al piesei; se

repereaza zonele interesante din punct de vedere al diagnosticului,

se recolteaza si se prelucreaza corespunzator; piesele operatorii
restante dupa recoltarea fragmentelor pentru examinarea
histopatologica se vor tine minimum 3 luni dupa elaborarea
diagnosticului anatomopatologic in containere cu formol tamponat
10%, etichetate cu numarul de inregistrare din registrul de biopsii,
dupa care vor fi distruse; lamele histopatologice rezultate se vor
pastra o perioada de minimum 10 ani, iar blocurile de parafina
rezultate se vor pastra o perioada de minimum 30 de ani;
d) biopsiile se trimit in formol tamponat 10%; containerul
trebuie inscriptionat cu datele de identitate ale pacientului si sectia
care trimite; se consemneaza numarul, dimensiunile si aspectul
macroscopic, dupa caz; se prelucreaza corespunzator standardelor
histopatologice;
Prelevarea este o etapa esentiala care se realizeaza pe o
placa de lemn moale sau pluta, fixata intr-un suport etans unde se
pot colecta lichidele fixatoare sau lichidele patologice.
Prelevarea materialului biologic va fi precedata de un
studiu macroscopic al piesei recoltate, care se va consemna in
buletinul histopatologic. Se vor mentiona dimensiunile
piesei,greutatea,aspectul macroscopic,prezenta si aspectil
leziunilor macroscopice,intinderea acestora,rapoartele cu alte
structuri sau organe.
Prelevarea trebuie sa tina cont de:
-orientarea sectiunilor histologice;
-grosimea si suprafetele sectiunilor
-prezenta si intinderea leziunii
-mentinerea raporturilor anatomice si histologice cat mai aproape
de starea ,,in vivo
In timpul prelevarii se va tine cont de incidenta sectiunilor care se
vor executa la microton: - prin organele parenchimatoase se vor
realiza sectiuni plane,paralele sau perpendiculare cu grosimea de
3-5 mm
-pentru organe cavitare,tubulare sectiunile var fi perpendiculare pe
lumenul organului;

-pentru scoarta cerebrala planul de sectiune va fi perpendicular;

-pentru muschi,miocard se pot realiza sectiuni longitudinale si
transversale;
In cazul unor organe parenchimatoase cu o consistenta foarte
redusa(timus,encefal) se recomanda introducerea intregului
organin solutia fixatoare(formol 10-20%) timp de 2-24h.
Piesa prelevata va purta un numar corespunzator cu cel din
registru. In registru se descrie locul de unde a fost prelevata piesa
histologica,marimea,grosimea,planul de sectiune fata de axele
anatomice ale organului.
Tehnici de includere
Pentru recoltate la autopsie,fixate in formalina,Zenker sau solutie
Helly dupa spalare se poate utiliza schema;
alcool etilic 80%........................2h
alcool 95%..................................3 bai a 2h
alcool absolut..............................3 bai a 1h
xilen...............................................3 bai a 1 h
xilen-parafina...............................1 baie 1h
parafina.........................................3 bai a 1h
Pentru t. de autopsie fixate in Cornoy:
metanol.........................................2 bai a 2h
benzoat de metilen........................2 bai a 2h
xilen................................................1h
xilen-parafina..................................1h
parafina.............................................3 bai a 1h
Pentru t. mici de biopsie,sub 2mm.fixate in formalina:
alcool 80%......................................30min.
aalcool95%.......................................3 bai a cate 15min.
alcool absolut...................................3 bai a cate 15min.
xilen.................................................2 bai a cate 20min.
parafina..........................................2 bai a cate 20min.
Pentru fg.de biopsie mai mari:
alcool80%..............................2h
alcool95%...............................4 bai a cate 20min,

alcool absolut............................ 3 bai a 30min.

xilen.........................................3 bai a 30 min
parafina.....................................2 bai a 60min.
Pentru piesele de rezectie chirurgicala sau biopsii mai mari:
alcool80%..................................3 1/2h
alcool 95%................................4 bai a cate 1h
alcool absolut..............................3 bai a cate 1h.
xilen.............................................1h.
xilen/parafina...............................1h.
parafina......................................2 bai a cate 1h.

FIXAREA

Are ca scop oprirea fenomenelor vitale din tesuturi si celule, pentru a putea surprinde
microscopic un anumit aspect histofiziologic sau histopatologic existent in produsul
recoltat la momentul recoltarii.
Fixarea impiedica alterarile post mortem a structurilor tisulare si celulare si intareste
piesa, asfel ca aceasta sa poata fi supusa prelucrarilor ulterioare.
Cantitatea de fixator trebuie sa fie suficienta pentru ca apa din piese sa nu-i schimbe
concentratia . De obicei, volumul fixatorului trebuie sa fie de 210 ori mai mare decat
volumul piesei fixate.
La primirea pieselor gata fixate, se va controla cantitatea de lichid fixator si se va
completa cu volum de lichid , acolo unde este cazul.
Durata fixarii este variabila, in functie de tipul tesutului si dimensiunea piesei, putand
dura de la 24 ore la cateva zile.
Fixatorul poate fi schimbat de-a lungul procesului de fixare, cu modelarea definitiva a
piesei. Temperatura fixatorului este temperatura camerei.
Fixarea la cald se utilizeaza doar pentru diagnostic histopatologic de urgenta.
AGENTI FIXATORI

1. Formol salin
Indicatii : - tehnica histologica de rutina, pentru orice piesa ;
- recomandat pentru piese mari ;
- recomandat pentru strudiul lipidelor in histochimie ;
- studiu imunohistochimic.

Preparare : formol din comert ( 40% ) diluat cu apa de robinet pana la concentratia 10%
- formol comercial 40% - 6,5 litri;
- apa distilata
- NaCl

- 43,5 litri;
-

0,5 kg.

2. Formol neutru 10%

Indicatii :

- pentru orice piesa in tehnica histologica de rutina ;

- recomandat in special pentru piese mari ;

- studiul lipidelor in histochimie ;
- studiu imunohistochimic.
Preparare : formol din comert ( 40%) diluat cu apa distilata pana la concentratia 5% :
- formol comercial 40% - 10 ml ;
- apa distilata

- 90 ml ;

- carbonat de calciu

- 1 gr.

3. Fixator pentru ganglion limfatic

Indicatii :

- piese de evidare ganglionara ;

- piese ce necesita izolarea ganglionilor.

Preparare : - alcool etilic 96%
- cloroform

- 650 ml ;

- 200 ml ;

- acid acetic glacial

- 50 ml ;

- formol concentrat 40% - 150 ml.

4. Alcool formol- acetic ( AFA)
Indicatii :

- fixator ideal pentru coloratii de rutina si imunohistochimice;

- dezavantajul este reprezentat de pretul ridicat ;

- se va utiliza pentru toate piesele mici :

biopsii ;
ganglioni ;
chiuretaje ;
biopsii osteo-medulare ;
tiroida;
sectoare mamare de mici dimensiuni;

Preparare :

- formol concentrat

un fragment reprezentativ din orice tumoare ( din

tumorile mai mici de 3 cm.).

- 20 ml ;

-acid acetic glacial

- 50 ml ;

- alcool etilic 96%

- 785 ml.

3) DECALCIFICAREA
Se aplica pieselor histologice care contin carbonat de calciu, fapt ce face imposibila
sectionarea ( ex.os).
Decalcificarea se poate efectua concomitent cu fixarea sau dupa aceea.
Piesa ce urmeaza a fi decalcificata se fixeaza in formol , care previne umflarea
exagerata a fibrelor de colagen.
Cantitatea de lichid de decalcificare trebuie sa fie mai mare de 100-200 ori fata de piesa
fixata.
Lichidul de decalcificare se schimba de mai multe ori.
Durata decalcificarii depinde de grosimea piesei.

Aprecierea decalcificarii
- aprecierea gradului de inmuiere al piesei prin palpare sau intepare cu ac ;
- decalcificarea se considera terminata cand piesa se sectioneaza cu usurinta.
Dupa decalcificare, piesele se spala cu apa curgatoare de la robinet si se trateaza cu
solutie apoasa de sulfat de sodiu sau litiu ( previne umflarea fibrelor de colagen).
Agentul de decalcificare : Acid tricloracetic :
Preparare : 10 gr. Acid tricloracetic + 100 ml. apa distilata.
Metoda de lucru: - piesa se fixeaza in formol 24 ore;
- transele supuse decalcificarii se taie la 3 mm. ;

- se tine in decalcificator pana la inmuierea

tesutului( minim 3 zile) ;
- se impune prelungirea timpilor de colorare in coloratia
HE,in special.

PIESE CHIRURGICALE si NECROPSII

BIOPSII

PUNCTII
I. RECOLTAREA SI PRELEVAREA MATERIALULUI BIOLOGIC
II. PRIMIRE
III. ORIENTAREA MATERIALULUI BIOLOGIC
1. Piesa se trimite n recipient etichetat cu numele bolnavului
2. Alturat se trimite un buletin de nsoire cu:

Locul de prelevare

Date clinice

Tratamente efectuate

Alte examene histopatologice

3. Fragmentul de esut poate fi trimis n secia de anatomie patologic:
n formol 10% tamponat verificai
Proaspt dar pe o compres umed NICIODAT uscat;
timp de aducere recomandabil max 30 de minute
4. Pentru examen electronomicroscopic: n glutaraldehid
5. Pentru IFD: proaspt; mediu umed; rapid
6. Artefacte de prelevare - metoda de prelevare

Artefacte de strivire

Artefacte de eletrocoagulare
7. ORIENTAREA PIESEI
AFECTIUNI TUMORALE

Marcai repere care s v permit orientarea piesei

Marcarea cu un fir chirurgical a orei 12 e suficient

Precizarea limitelor de rezecie (invadate sau nu) i

distana ntre tumor i limita de rezecie

Limita de rezecie chirurgical neinvadat nu nseamn

c limita de rezecie oncologic e suficient!!!

Atentie- limita de rezecie molecular!!!

8. Artefacte de orientare sectiuni tangentiale
9. Artefacte:

Fixare inadecvat
Prelucrare histopatologic inadecvat:
deshidratare deficitar,
clarificare insuficient,

impregnare cu parafin insuficient

Secionare deficitar
Colorare deficitar
Montare deficitar

10. Erori:

Pierderea piesei
Etichetarea greit a blocului
Etichetarea greit a lamelor
Fragmente tisulare care nu aparin piesei respective
Incluse n bloc
Prezente pe lam fr s fie incluse n bloc

11. FIXAREA MATERIALULUI BIOLOGIC

- Formaldehida 10% - 48h..20-25C

- 24h..35C
- 2-10 h (biopsii, punctii)
-Formaldehida 20% - 3h.. 55C
12. SPALARE -24h in apa curgatoare
13. PROCESARE:

DESHIDRATARE
-alcool etilic 80%- 2 h
-alcool 95% - 3bai a cate 2 h
-alcool absolut 3 bai a cate 1 h

CLARIFICARE
-xilen 3bai a cate 1 h

IMPREGNARE
-xilen-parafina 1h
14.INCLUDEREA
-parafina 3 bai a cate 1h
15. SECTIONAREA SI POZITIONAREA SECTIUNII PE LAMA DE

STICLA

16.COLORARE
1. HEMATOXILINA-EOZINA
A. Scop: coloraia standard n histopatologie
B. Principiu: reacia chimic dintre hematoxlin (colorant bazic) i
acizii nucleici i eozin (colorant acid) i componentele
citoplasmatice
C. Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin,
seciuni 4-5 microni
D. PROCEDUR:

Deparafinare -3 bai successive xilen (3 X 3 min)

Hidratare 3 bai alcool

- etanol 100% (3 x 3 min)
- etanol 95% (1 x 3 min)
- etanol 80% (1 x 3 min)
- apa deionizata?( 1 x 5 min)

Indepartarea particulelor oxidate de la suprafata vasului

cu hematoxilina ???

Stergerea surplusului de apa de pe lama

Hematoxilin Mayer 3 min

Clatire apa deionizata

Spalare apa robinet 5 min

Difereniere rapid -> acid-alcool (scufundare rapida

10-12x)

Splare apa robinet 1 min

Clatire- apa deionizata 2 min (in aceasta faza lamele pot

fi lasate peste noapte)

Stergerea surplusului de apa de pe lama

Eozin (PH=5)- 30 sec (45 sec pt cea veche)

Deshidratare
etanol 95% (3 x 5 min)
etanol 100% (3 x 5 min)

Clarificare

-xilen (3 x 15 min) (lamele pot fi lasate in xilen

peste noapte pt o mai buna clarificare)

Montare.
-se pune o picatura de Permount(pe baza de xilen) sau Balsam de
Canada pe lama, folosind o bagheta de sticla, fara a lasa bule
-se aplica lamella
- se lasa la uscat
E. REZULTAT:
Nucleul - albastru
Citoplasma - roz
Copyright@
http://www.bcm.edu/rosenlab/protocols/HEstaining.pdf
http://www.protocolonline.org/prot/Histology/Staining/Haematoxylin___Eosin__HE__Staining/index.
html

Tissue
Type

Haematoxylin Acid alcohol

0.3%

Eosin

Comment

Routine
tissues

4 minutes

See technical 2 minutes

point 2

Renal
biopsies

10 minutes

1-2 seconds

2-4
minutes

Decals

10 minutes

1-2 seconds

30 seconds after blueing. Hx

Check staining

Check staining

step may need to

be repeated if
prolonged decal.
http://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/h&e_ellis.htm

2. VAN GIESON

A. Scop: diferenierea colagenului de muchi

B. Principiu: reacia chimic dintre acidul picric i citoplasma
fibrelor musculare i fucsin i colagen
C. Control: muchi
D. Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin,
seciuni 4-5 microni
E. PROCEDURA:

Deparafinare i hidratare
Colorare cu hematoxilin Weigert (2 pri hematoxilin +
1 parte mordant) - 5 minute
Spalare
Diferentiere rapida in alcool-acid clorhidric.
Spalare
Contrastare n solutie saturata de Li2CO3
Spalare
Colorare cu picrofucsin - 2-5 minute
Spalare
deshidratare, clarificare i montare.

F. REZULTAT

Nuclei negri

Citoplasme de fibre musculare galbene

Alte citoplasme cenuii

Hematii galbene

Colagen rou

3. TRICROM MASSON
A.
B.

Scop: evidenierea colagenului

Coloraie de rutin pentru biopsiile hepatice i renale

C.
D.
E.

F.

PRINCIPIU: esuturile mai pin poroase se coloreaz cu

molecula cu dimensiunile cele mai mici
Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin,
seciuni 4-5 microni
PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare

Hematoxilin Weigert 7-10 minute

Splare - n ap , Li2CO3 5 secunde

Ponceau fucsin 4 minute

(2 pri Ponceau 1%, 1 parte fuxin acid 1%, 1 parte

acid acetic glacial)

Splare (n ap distilat)

Acoperire cu acid fosfomolibdenic 1%- 10 minute

Anilin orange -5 minute (lama nu se spal nainte)

Splare (n ap distilat)

Deshidratare, clarificare i montare.

REZULTAT:

Citoplasme, muchi, eritrocite roii

Colagen albastru

Nuclei negri

NOTA: variant cu verde lumin n loc de albastru de

anilin colagenul - verde

4. GOMORI
A.
B.
C.
D.
E.

Scop: evidenierea reticulinei

PRINCIPIU: reacia chimic dintre fibrele de reticulin iniial
sensibilizate i ionii de argint
Control: ficatul normal
Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin,
seciuni 4-5 microni
PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare

Oxidare cu permanganat de potasiu 1% (se filtreaz)

Splare

F.

Decolorare rapida cu metabisulfit de natriu sau potasiu

2%
Splare
Mordansare cu alaun feriamoniacal 2%- 2 minute
Splare
Impregnare cu soluie argento- amoniacal (Tollens)
Ap distilat - 2 bi rapide
Reducere - formol neutru 10%
Ap
Reducere - cu metabisulfit de natriu/potasiu 2%- 1 minut
- facultativ
Ap
Fixare - tiosulfat de natriu 1%- 1 minut
Splare
Deshidratare, clarificare i montare.

REZULTAT:

Reticulina negru

Colagenul matur auriu

5. PAS
A.
B.
C.
D.
E.
F.
G.

Scop: evidenierea glicogenului, mucinelor, membranei bazale,

fungilor
Coloraie de rutin pentru biopsiile hepatice i renale
Avantaj: se poate efectua PAS cu diastaz diastaza lizeaz
glicogenul i glicogenul nu se mai coloreaz
PRINCIPIU: reacie histochimic ntre acidul periodic i
legturile carbon carbon aldehide care reacioneaz cu
acidul fucsin sulfuros reacie de culoare rou magenta
CONTROL: tegument, rinichi, orice esut care conine fungi
Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin,
seciuni 4-5 microni
PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare n ap distilat

Soluie acid periodic 0.5% 5 minute

H.

Splare cu ap distilat.
Recativ Schiff 30 minute la temperatura camerei sau 4560 sec la microunde

Splare cu ap de robinet 5 minute.

Supracolorare cu hematoxilin 3 minute.

Splare cu ap de robinet .

Deshidratare, clarificare i montare.

REZULTAT:
Glicogen, fungi, mucus: rou magenta
Nuclei albatri

6. ALBASTRU ALCIAN
A.
B.
C.
D.
E.

F.

Scop: evidenierea mucinelor

PRINCIPIU: reacia chimic dintre mucopolizaharidele acide
carboxilate i sialomucinele sulfatate sau carboxilate din
colorant i gruprile acide ale mucopolizaharidelor acide
Control: intestin subire, colon
Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin,
seciuni 4-5 microni
PROCEDUR:
Deparafinare i hidratare
Solutie Albastru alcian 20 minute
Spalare
Contracolorare cu Hematoxilina Mayer 2-5 minute
Spalare
Diferentiere rapida cu alcool-acid clorhidric
Spalare
Deshidratare, clarificare i montare.
REZULTAT:

mucine - albastru

Fond slab bleu

7. GROCOTT

A. Scop: evidenierea fungilor

B. PRINCIPIU: mucopolizaharidele din peretele celulelor fungice sunt
oxidate i eliberaeaz grupri aldehidice care reacioneaz cu nitratul
de argint determinnd precipitarea argintului
C. Control: orice esut care prezint fungi
D. Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin, seciuni
4-5 microni
E. PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare n ap distilat

Soluie acid cromic 5% o or la 60C sau 2% 45 sec

microunde

Splare cu ap de robinet i apoi distilat.

Metabisulfit de sodiu 1% 1 minut

Splare cu ap de robinet i apoi distilat.

Soluie de argint metenamin 1 or la 60C sau 70 sec

microunde.

Splare cu ap distilat.

Clorur de aur 0.5%, 1 minute .

Splare cu ap distilat

Verde lumin 1 minut

Splare cu ap distilat

Deshidratare, clarificare i montare.

F. REZULTAT:

Fungi negri

Fond verde

8. PERLS
A. Scop: evidenierea depozitelor de fier (fier feric) din esuturi
B. Normal mici cantiti de fier sunt prezente n splin i mduva
osoas
C. PRINCIPIU: reacia chimic dintre fierul feric din depozitele de
hemosiderin cu ferocianur de potasiu ferocianur feric
albastru intens
D. Control: orice esut care prezint depozite de hemosiderin
E. Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin, seciuni
4-5 microni
F. PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare n ap distilat

Imersie n soluie: - sol. ferocianur de potasiu 2% + sol.
acid clorhidric 2% (raport sol. = 1/1 incubare timp de 30
minute, 56-60 grade C)
Ap distilat 10 minute
Supracolorare cu Kernechtrot - 3 minute sau

Fuxin acid 1% - 1 minut sau

Rou neutru 1% - 5 minute

Splare
Deshidratare, clarificare i montare.
G. REZULTAT:

Hemosiderina - albastr

Fond roz

9. ZIEHL-NEELSEN
A. Scop: evidenierea bacililor acid-alcoolo-rezisteni (BAAR) din genul
'mycobacterium (AFB acid-fast bacteria)
B. PRINCIPIU: capsula lipoid a BAAR se coloreaz cu carbolfucsin
i rezit la decolorarea cu acid diluat
C. Nu folosim col Gram pentru c la temperatura camerei capsula
lipidic este impermeabil la soluii apoase
D. CONTROL: orice esut care conine BAAR
E. Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin, seciuni
4-5 microni
F. PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare n ap distilat

Soluie de Carbol-fucsin fie 1 or la 60C, fie 45 sec la

microunde, fie 1 minut nclzire cu flacr direct

Splare cu ap de robinet.

Soluie acid alcool 1% pn seciunea este roz palid i nu

mai iese culoarea

Splare cu ap de robinet 5 minute.

Splare cu ap distilat.

Soluie albastru de metilen de lucru 30 secunde.

Splare cu ap de robinet .


Deshidratare, clarificare i montare.
G. REZULTAT

BAAR roii

Eritrocite roz-palid: CONTROL INTERN!!!

Fond albastru

10.

GIEMSA

A. Scop: evidenierea detaliilor celulare

B. PRINCIPIU: reacia chimic dintre coloranii bazici albastru de
metilen i acizi eozina pe de o parte i structurile celulare pe de alta
C. Control: splina
D. Metod: fragmente fixate n formol 10%, incluse la parafin, seciuni
4-5 microni
E. PROCEDUR:

Deparafinare i hidratare n ap distilat

Giemsa (1 parte Giemsa - KIT/ 4 pri ap) -20-30

minute

Splare n ap distilat n care se pun 7-8 picturi de acid

acetic glacial la 100 ml ap distilat

Difereniere cu alcool 96% (pn coloraia devine roz)

deshidratare, clarificare i montare.

F. REZULTAT:

Nuclei albatri

Citoplasme albastru palid

Hematii roz glbui

Granulele mastocitelor - violet

Rickettsii rou purpuriu

Helicobacter pilori albatri