CUPRINS Introducere1 1 Analiza bacteriologica a aerului...2 2 Recoltarea,conservarea si transportarea probelor de aer..2 3 Metoda de recoltare prin aspiraie.....

2 4 Metoda de recoltare prin sedimentaie...3 5 Aprecierea calitatii aerului conform indicatorilor microbiologici.3 6 Analiza bacteriologica a apei4 7 Recoltarea,conservarea si transportarea probelor de apa4 8 Pregatirea pentru analiza..4 9 Determinare numarului total de microorganism..5 10 Depistarea microorganismelor patogene...5 11 Aprecierea calitatii apei conform indicatorilor microbiologici.6 12 Analiza bacteriologica a solului..7 13Obiecte de control. Amplasarea punctelor de recoltare..7 14 Prelevarea, transportarea i pstrarea probelor..7 15 Indicatorii sanitari de poluare microbiologic8 16 Indicatorii indireci de baz8 17 Analiza bacteriologica a produselor alimentare....9 18 Cerine igienice privind recoltarea probelor de produse alimentare..9 19 Transportarea probelor n laborator.10 20 Obiecte de control. Periodicitatea11 21 Indicatori microbiologici pentru aprecierea calitii produselor alimentare12

22Concluzii.14
23Bibliografie...16
1

Introducere
Investigaiile de laborator prezint un compartiment indispensabil de activitate a medicilor igieniti si microbiologi n timpul realizrii supravegherii de stat a sntii publice n domeniul sntii, Rezultatele acestor investigaii servesc ca: argumentare obiectiv a respectrii regulilor i normelor sanitare; argumentare a necesitii de realizare al diferitor msuri profilactice; un procedeu de evaluare a aciunii diferitor factori; mod de folosire a datelor acumulate pentru diferite autorizri sanitare, etc.; Metoda microbiologica de diagnostic permite de a determina calitatea,si proprietatile unor produse precum:apa,aerul,solul,produsele alimentare,de a caror stare depinde sanatatea omului. Metoda microbiologica pentru aer permite a depista: stafilococi, streptococi i hemolitici, numrul total de microorganisme i fungi pe m3de aer ; Metoda microbiologica a apei: prezena bacilului coli (titrul coli i indexul coli).

Metoda microbiologica pentru sol: prezena microorganismelor patogene (bacili, ou de helmini), etc. Prin metode microbiologice aplicate produselor alimentare sunt depistate: Listeria monocytogenes, Salmonella spp., Enterobacter sakazakii, Enterotoxine stafilococice, etc. Pentru fiecare prelevat exista metode speciale de recotare,pastrare si transportare.Deasemenea fiecare grupa de bacteria care se depisteaza se realizeaza dupa metode de diagnostic si tehnici specific. Rezultatele obtinute in urma investigatiiler de laborator sunt comparate cu indicii standart calculati in urma unor serii de cercetari stiintifice,inregistrati in tabele,si aprobati conform legii prin hotarirea guvernului

Analiza bacteriologica a aerului

Inspectia microbiologica a aerului prevede determinarea: -continutul de microbi intr-un m3de aer; -continutul stafilococului auriu in 1m3 de aer;

Recoltarea,conservarea si transportarea probelor de aer

Analiza bacteriologic a aerului permite o apreciere igienic i epidemiologic a mediului aerian, pe baza creia putem stabili un complex de msuri p entru profilaxia infeciilor aerogene, a cror pondere n patologia infecioas este considerabil.Pentru investigaiile bacteriologice ale aerului sunt folosite 2 metode: metoda de sedimentare i metoda de aspiraie.La alegerea metodei de recoltare a germenilor din aer trebuie s se in cont de trei considerente: metoda s fie eficient n recoltarea particulelor ntre 1 i 10 m; s permit evaluarea numrului de germeni la 1m3de aer; s permit identificarea anumitor germeni sau grupe de germeni. Pentru analiza microbiologic a aerului din ncperi nchise se prelev probe la fiecare 20m2 de suprafa, din 5 puncte (pentru metoda de sedimentare) i din 1 punct (pentru metoda de aspiraie)situate la 0,5 m de la perei i la nivelul respiraiei. Recoltarea se face ziua n perioada activitii intensive a omului i dup curenia umed i ventilarea ncperii. Metoda de recoltare prin aspiraie Cea mai precis metod de apreciere a componenei bacteriologice a aerului este metoda de aspiraie. Principiul metodei const pe sedimentarea forat a microorganismelor din aerul atmosferic pe suprafaa mediului nutritiv solid prin utilizarea unui sistem de aspiraie (aparatul Krotov, aparatul). Viteza de aspiraie a aerului constituie 25 l/min. Notnd debitul cu care a funcionat aparatul n momentul recoltrii, precum i timpul efectuat nsmnrii plcii, se poate calcula prin numrarea coloniilor crescute pe plac dup incubare 24-48 ore la 37 C, numrul de microorganisme/m. Se aplic la temperaturi p ozitive ale aerului atmosferic. La recoltarea probelor se aspir 250-1000 l/m de aer, n dependen de gradul presupus de contaminare i mediul nutritiv utilizat. Formula de calcul este urmtoarea:
n x 1000 3

--------------= numrul de microorganisme/m,

unde: n = numr de colonii dezvoltate pe plac, V = volum de aer aspirat. Rezultatul se exprim n UFC/ m Metoda de recoltare prin sedimentaie Metoda const n deschiderea i expunerea cutiilor Petri cu un mediu solid timp de cteva minute pn la o or. Pentru a se putea calcula numrul de germeni la un anumit volum de aer, se recomand expunerea timp de 5 minute sau expuneri de tip multiplu de 5 minute (10, 15, 20 etc. pn la 1or). Dup expunere, cutiile se nchid i se incubeaz la temperatura i timpul respectiv n funcie de scopul urmrit. Se numr apoi coloniile pornind de la premiza c fiecare colonie s -a dezvoltat dintrun microorganism.Timpul de expunere trebuie apreciat n funcie de gradul de ncrcare a aerului. Trebuie evitat o ncrcare prea mare cu colonii a suprafeei mediului de cultur, deoarece numrtoarea devine dificil i exist posibilitatea, c anumite bacterii prin aglomerare s inhibe dezvoltarea altora. Pentru exprimare pe unitate de volum de aer se poate folosi formula de calcul Omeliansky, care este bazat pe observaia, c n timp de 5 minute se depun pe o suprafa de 100 cm3germenii din 10 litri de aer: n x 10000 Numr germeni/m = ---------------, T S x ----5 unde: n numrul de colonii dezvoltate pe suprafaa mediului de cultur; S suprafaa cutiei; T timpul de expunere n minute; Pentru Stafilococul Aureus in cutiile Petri se pune geloza salina cu galbenus de ou.Se termostateaza pentru 24 ore la temperatura de 37 C,apoi timp de 24 ore se lasa la temperatura camerei,la lumina.In prezenta bacteriilor de acest tip,coloniile vor aparea rotunde,unsuroase,stralucitoare,pigmentate. [Instructie pentru controlul bacteriologic al complexului sanitaro-igienic al aerului,din 1978,O.ino]
4

Aprecierea calitatii aerului conform indicatorilor microbiologici

Nivelul admisibil de poluare bacteriana a aerului in incapari in functie de destinatie si gradul de curatenie. Indici microbiologici Depistarea microorganismelor pathogen

Denumi rea incaperi i

G r a d u l d e c u r a t e n i e

Sali de operatii,d e nasteri,bo xe aseptice pentru pacientii hematolo

F o a r t e

N r .t o t a l d e g e r m e n i i n 1 m 3 d e a e r < 2 0 0

N r . S t . A u r e u s i n 1 m 3 d e a e r

Nr.de fungi si micelii in 1m3 de aer

< 5 0 0

N u tr e b ui e
5

Nu trebuie sa fie

gici,saloa nele pentru copii nascuti premature ,sala de sterilizare, baxele laboratoru lui microbiol ogic. Salile de procedure ,de pansamen te,saloane si Saliderea nimare,in caperile laboratoar elor clinoce si bacteriolo gice

c u r a t e ( A ) C u r a t e ( B ) < 5 0 0 < 7 5 0

sa fi e

N u tr e b ui e sa fi e N u tr e b ui e sa fi e

Nu trebuie sa fie

Saloanel e de chirurgie, si coridoare le de linga sectiile de chirurgie, boxele si saloanele sectiilor de boli infectioa se,depozi tele

< F a c u l t a t i v e c u r a t e ( V ) 7 5 0

< 1 0 0 0

Nu trebuie sa fie

Incaperil e si coridoare le blocului administr ative,WC ,scarile blocului curative profilacti c

M u r d a r e ( P )

N u s e n o r m e a z a

N u se n or m ea za

Nu se normeaza

[Anexa Nr.5 la Regulamentul sanitar privind conditiile de igiena pentru institutiile medico-sanitare,conform:Hotarirea Guvernului Nr.633 din 23.07.2010, Monitorul Oficial din 30.07.2010 131-134]

Analiza bacteriologica a apei

Recoltarea,conservarea si transportarea probelor de apa
Recoltarea,pastrarea si transportarea probelor de apa din sursele alimentare decentralizate cu apa se efectueaza in conformitate cu STAS 4979-49Apa pentru alimentare potabila ,menajera,si industriala. Modul de recoltare a apei din surse centralizate. Apa se recolteaz dup ce robinetul a fost curit cu un tampon curat i s-a lsat s curg 10 -15 minute apa stagnat din robinet. Prelevarea apei din bazinele de not. Din bazinele de not se recolteaz o prob unic, unde curentul este mai puternic, sau 3 probe (n cazul studiilor mai amnunite), cum ar fi: o prob la centru i 2 probe n apropierea malurilor. n fiecare punct a bazinului de not se recolteaz cte 1 litru de ap din stratul superior al apei. Din rezervoarele cu ap se vor recolta probe de ap de la punctul de ieire din rezervor Probele de apa din fintini pentru analiza bacteriologica trebuie de recoltat cu batometrul,care inainte de a fi scufundat in apa se flambeaza.In lipsa batometrului se admite de recoltat apa cu galeata publica,preliminar gura galetii se flambeaza.Primele doua galeti se varsa,iar din a treia se recolta apa in flacoane sterile de 0,5 l.Plicul de hirtie sau capisonul de la flacon se scoate impreuna cu dopul nemijlocit inainte de recoltarea probei,evitind atingerea dopului cu miinile.Se toarna 350 ml de apa in flacon,astfel ca la transportare sa nu se umecteze dopul.Flacoanele umplute se inchid cu dopuri rodate de cauciuc,guma de pluta si cu capison sterile de hirtie care se leaga cu ata de sfoara.Probele recoltate trebuie sa fie insotite de procesul verbal respectiv forma nr.205 U,in care este prezentata informatia ce cuprinde ora ,data ,sursa de apa,scopul investigatiei.Probele trebuie sa fie cercetate nu mai tirziu de doua ore dupa recoltare.In cazul in care este imposibil de indeplinit aceste conditii,se admite efectuarea analizei nu mai tirziu decit peste 6 ore de la recoltarea probei,pastrind in acest rastimp proba la temperatura de 1-5 *C.Flacoanele cu probe trebuie sa fie impachetate in lazi izoterme.Temperatura indicata trebuie mentinuta folosind pungi din cauciuc sau masa plastica,umplute vara cu gheata.
[Regulamentul igienic si cerinte privind calitatea apei potabile la aprovizionarea decentralizata.Protectia surselor amenajarea si mentinerea fintinilor,cismelelor,aprobat de medicul-sef sanitar de Stat al R.Moldova,M. Magdei,23 februarie 1996 Nr.06.6.3.18-96; SM ISO 5667-5:2010 Calitatea apei. Prelevare. Partea 5. Ghid de prelevarea apei potabile i apei utilizate n industria alimentar. SM ISO 5667-11:2010 Calitatea apei. Prelevare. Partea 11. Ghid general pentru prelevarea apelor subterane. ]
8

Pregatirea pentru analiza

Probele care sunt aduse in laborator se trec in Registrul de inregistrare a probelor si eliberarea rezultatelor investigatiilor.In acesta se trece numarul de laborator,data,ora recoltarii probei,ora intrarii in laborator,denumirea probei,cantitatea,volumul,locul recoltarii probei,conditiile speciale de recoltare,scopul investigatiei,stabilizatori,conservanti folositi la recoltarea probei,data/ora la inceputul investigatiei,ora la sfirsitul investigatiei,ora de lichidare a probei.

Determinare numarului total de microorganisme

Determinarea numarului total de microorganisme in apa se realizeaza prin numarea coloniilor ce au aparut pe mediul de cultura cu agar.Initial,apa de investigat se toarna in pilnia din Pompa de filtrare a apei SARTORIUS.Apa este filtrata prin membrane filtrante sterile din celuloza,cu pori 0,45micro.m.Dupa ce toata apa a fost absorbita in colector,cu penceta sterila,scoatem filtrul si-l aplicam pe cutia Petri cu mediul Endo,se pune in termostat si se incubeaza la temperature de 37*C,pentru 18-24ore.Daca apar colonii albastre-verzui,rosii intunecate,cu luciu metalic,roze transparente,din aceste colonii se fac frotiuri colorate dupa Gram si se studiaza la microscop.Daca se vor gasi bacteria G-,polimorfe,se va efectua testul oxidazei.Daca toate coloniile vor fi oxidazo +,rezultatul va fi negative.Abesnta oxidazei la coloniile rosii-intunecate cu luciu metalic confirma prezenta bacteriilor din grupa intestinala.Daca se vor inregistra colonii roze ,transparente,oxidazo-,inseamna ca sunt bacterii din grupa intestinala.Cite 2-3 colonii de fiecare tip se vor recultiva pe mediul cu glucoza.Dupa 4-5 orede incubare la temperature de 37*C se va observa daca este present acid si gaz rezultatul este+.Daca se va depista numai acid,se va pune eprubeta in thermostat pentru 24 ore,daca dupa termostatare gazul lipseste ,rezultatul este negativ.Apa potabila de baut corespunde cerintelor 2874-73.,daca indicele Coli nu depaseste3. Rezultatul se determina prin sumarea coloniilor de pe cele trei filter si impartit la 3.Indicele resultant se inregistreaza in jurnal si in protocolul analizei.
[Standartul de stat ;SM ISO 5667-5:2010 Analiza microbiologica a probelor de apa. 1446-76 - . ]

Depistarea microorganismelor patogene

Sursa cea mai importanta de poluare bacteriana a apei o constituie reziduu-rile, excrementele umane si animale, care pot contine germeni patogeni, de aceea in
9

analiza apei se urmareste detectarea poluarii fecale-folosind indicatorii coliformii.Metoda pentru determinarea bacteriilor coliforme include teste prezumtive, de confirmare, bazate in primul rand pe capacitatea bacteriilor de a fermenta lactoza cu producere de acid lactic, CO2, H2, in timp de 48 ore la 35C. Testul prezumtiv consta in inocularea probei in mediu nutritiv cu lactoza (BCLP -bulion de carne cu lactoza), mediu de imbogatire favorabil inmultirii atat a bacteriilor coliforme cat si a altor bacterii care folosesc lactoza ca sursa de carbon. Testul de confirmare, consta in inocularea culturilor din eprubetele pozitive ale testului prezumtiv pe medii selective (BBLVP- bulion bila cu lactoza verde de briliant) care inhiba dezvoltarea bacteriilor insotitoare si asigura inmultirea bacteriilor coliforme. [http://www.referat.ro/laboratoare/Analiza_microbiologica_a_apei_c400a.html
Trimis la data:2010-06-18Materia:Biologie Autor:Adriana Nicusor]

Din grupul coliform, cel mai frecvent este intalnit genul Escherichia cu specia Escherichia coli, care indica o contaminare fecala recenta. [ISO9308-1] Enterococii intestinali sunt G+,catalazo-,se prezinta ca colonii rugoase,pigmentate,de culoare roz-rosu-maro,sunt insamintate pe mediul cu lactoza,manifestind activitate lactoz pozitiva.[ISO 7899-2] Prin investigatiile de laborator sunt depistate prezenta Pseudomonas aeruginosabacterie G-,nesporulate,oxidazo,catalazo+,se cultiva pe mediu cu gelatina peptonata,glicerol,caseina si agar,da testul nitrat reductaza+,lichefiaza gelatina,hidrolizeaza caseina.Toate coloniile albastre-verzui confirma prezenta acestor bacterii. [EN ISO 12780] Nivelurile nesatisfacatoare a stafilococilor coagulazo-pozitiv indic faptul c folosirea excesiva a timpului/temperaturaturii pentru un aliment poate s fi aparut n urma manipulrii improprii n timpul pregtirii alimentelor. Un test pentru enterotoxine, SET, poate fi corespunzator dac nivelul stafilococilor coagulazopozitivi depeste 103 cfu/g.; Este posibil ca organisme viabile s nu mai fie prezente ntr-un numar semnificaiv n alimente, n acest caz suspectam practici necorespunzatoare de manipulare a alimentelor. Nivelurile 104 cfu sunt considerate riscuri poteniale deoarece consumul alimentelor cu acest nivel de contaminare poate conduce la toxiinfecii alimentare.

10

Aprecierea calitatii apei conform indicatorilor microbiologici

Tabelul 1 A Parametrii microbiologici pentru apa potabila: Parametrul Valoarea admisa(nr./1 00ml) 0 0 Metoda analiza de

E.Coli Enterococi(Streptoco ci fecali) Bacterii coliforme

ISO 9308-1 STAS 3001/91 ISO 7899-2 IAO 9308-1

[Ttabelul 1A,anexa 7 [7] Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau -2012] Tabelul 1B Parametrii microbiologici pentru apa potabila imbuteliata in sticle /alte recipiente. Parametrul E.Coli Enterococi(Streptococ i fecali) Pseudomona Aeruginosa Valoarea admisa 0/250ml 0/250ml 0/250ml Metoda analiza de

ISO9308-1 STAS3001/ 1991 ISO 7899-2 STAS 3001/1991 Pr EN ISO 12780

Nr.de 22*C

colonii

la

100/1ml

STAS 3001/91 Pr EN ISO 6222

11

Nr.de 37*C

colonii

la

20/ 1ml

STAS 3001/91 Pr EN ISO 6222

[Ttabelul 1B,anexa 7 [7] Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012

Analiza bacteriologica a solului

Obiecte de control. Amplasarea punctelor de recoltare Se consider zone cu risc crescut n care omul poate realiza un contact direct sau indirect, n anumite mprejurri: terenurile de joac pentru copii, plaje, zone destinate turismului i agrementului, campinguri, terenuri de sport, terenuri din apropierea surselor de ap potabil, etc.Pentru Prelevarea probelor se va efectua n conformitate cu 1446-76 .

Prelevarea, transportarea i pstrarea probelor

Recoltarea solului pentru analiz microbiologic nu se face n timpul sau imediat dup precipitaii. Recoltarea solului se efectueaz n borcane din sticl cu dop lefuit sau pungi de polietilen neutr cu ajutorul unor linguri sau spatule metalice pentru prelevarea solului. Din profunzimea solului se recolteaz probe cu ajutorul unor dispozitive speciale. Materialul utilizat n vederea recoltrii se sterilizeaz n prealabil, iar manipularea n timpul recoltrii trebuie s exclud contaminarea probei sau a persoanei care efectueaz recoltarea. Pentru caracteristica sanitar a solului este necesar prelevarea unei probe medii care s fie reprezentativ pentru o suprafa de aproximativ 100 m2. Recoltarea se face fie de la suprafa (0 -5 cm), fie din profunzime (20-25 cm), considernd c acesta este stratul biologic activ al solului, n care densitatea microorganismelor de provenien uman i animal este maxim. Probele de sol sunt colectate din 5 puncte amplasate pe diagonala sectorului sau conform metodei plicului (4 puncte n prile unghiulare iar cellalt n centru). Terenul se cur prin ndeprtarea resturilor mari de pe sol cu o mtur. Suprafaa se mparte n 5 - 10 parcele egale i se recolteaz probe de sol de pe fiecare arie desemnat.Proba sumar se compune din prelevatele pariale ale unei suprafee de cercetare. Pentru investigarea bacteriologica de pe fiecare parcel se obine o prob sumar (200 g) de sol, care include 10 probe pariale a cte 20 g fiecare, recoltate de la suprafa sau la
12

adncimea de 20-30cm. Probele de sol pentru analiza bacteriologic sunt transportate n laborator n lzi izoterme n timpul cel mai scurt. n cazul n care nu este posibil efectuarea imediat a analizelor de laborator, probele sun t pstrate n frigider la temperaturile de +4C. Timpul maxim de pstrare pn n momentul nsmnrii nu va depi 24 ore. Proba va fi nsoit de o fi de recoltare care va cuprinde: data, ora, locul recoltrii, folosina terenului, precum i orice alte elemente.
[ 17.4.4.02-84 . . , .]

Indicatorii sanitari de poluare microbiologic

Indicatorii sanitari de poluare microbiologic folosii n prezent pentru depistarea gradului de poluare a solului pot fi mprii n indicatori direci i indireci. Indicatorii direci ai polurii biologice a solului sunt reprezentai de germenii patogeni care prezint pericol nemijlocit de mbolnvire. Indicatorii indireci ai polurii biologice a solului sunt reprezentai de o serie de germeni prezena crora arat gradul de poluare i riscul pentru sntate.

Indicatorii indireci de baz

Numrul de germeni coliformi arat poluarea solului cu coninutul intestinal i posibilitatea prezenei germenilor patogeni, mai ales din grupa de contaminare om-sol-om. Prezena enterococilor (enterococilor fecali) indicatori ai polurii fecale a solului, acest indicator are avantajul diferenierii polurii umane (ciclul om-sol-om) de poluare animal (ciclul animal-sol-om). Ca indicatori sanitari ai polurii fecale mai pot fi germenii sulfito-reductori. Prezena acestor germeni pot avea i valoare direct, deoarece alturi de ali germeni din clasa Clostridium poate produce gangrena gazoas. Tabelul 2. Cerine normative privind nivelul inofensivitii sanitare a solului dup parametrii microbiologici.
Gradul de poluare Gradul de pericol c o l i f o r m b a c t e r i i
13

C . P e r f i n

Indicii inofensivitii epidemoilogice UFC/g m m NT / / G o o t e r m n i t r

i , e n t e r o c o c i i n o f e n s i v c u r a t 1 1 0

g e n s

p a t o g e n e

o f i l e

i f i c a t

s u b 1 0

1 x 1 0
2

s u b 1 0

1 x 1 0
3

su b 1 x 1 04

r e l a t i v i n o f e n s i v p e r i c u l o s

s l a b p o l u a t

1 0 1 x 1 0
2

1 0 1 x 1 0
2

1 x 1 0 4 1 x 1 05

p o l u a t

1 x 1 0
2

1 x 1 0
2

1 x 1 0
3

1 0 1 x 1 0 3

1 x 1 0

1 x 1
14

1 x 1 0

1 x 1 05 1 x 1 06

0
4

f o a r t e p e r i c u l o s

f o a r t e p o l u a t

p e s t e 1 x 1 0
3

p e s t e 1 x 1 0
4

1 x 1 0
5

1 x 1 0
6

p e s t e 1 x 1 0
3

p es te 1 x 1 06

[Tabelul 2,Anexa 8[34] Parametrii microbilogici ai solului Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012]

Analiza bacteriologica a produselor alimentare

Una din normele obligatorii privind calitatea produselor alimentare i securitatea acestora pentru sntatea omului i stabilitatea n procesul de depozitare i de desfacere,este controlul microbiologic. O importana deosebit pentru consumator are securitatea microbiologic a produselor alimentare, ale cror securitate este o sarcina de baza a controlului microbiologic la ntreprinderi, productoare a produselor de carne-, carne de pasre i produse din ou. Controlul microbiologic se efectueaz att asupra procesului de producie, ct asupra calitii produciei finite, precum i asupra strii sanitare a ncperilor de producie, asupra utilajelor, inventarului mic i asupra igienei personale a lucrtorilor.

Cerine igienice privind recoltarea probelor de produse alimentare

Recoltarea probelor de alimente pentru analize se face in onformitate cu standartele care prevad acest lucru pentru produsele alimentare,Indicatiile metodice privind controlul sanitaro-microbiologic in intreprinderile de alimentatie publica si comert cu produse alimentarenr.2657-82,indicatiile metodice Normativele de efectuare a principalelor investigatii sanitaro-microbiologice a obiectelor mediului ambientnr.2671-83 Probele de alimente se recolteaza respectind conditiile de aseptica,si completindu-se formularul medico-sanitar in care se inregistreaza nr de
15

investigatie,denumirea si numarul de mostre,ambalajul,marcarea,locul,data si timpul recoltarii,denumirea,scopul investigatiei,denumirea laboratorului unde este trimis materialul. Pentru recoltarea probelor de produse se folosesc vase sterile cu volum de 0,250,5 l acoperite cu 2 straturi de hrtie, legate cu o sfoar, cuite sterile, pens ete, linguri nvelite n hrtie. Este important, ca laboratorul s primeasc probele, care sunt cu adevrat reprezentative pentru produs i care nu au suferit deteriorri sau modificri n timpul transportului sau depozitrii. n cazul recoltrii produselo r alimentare (bucatelor gata) de pe mas pentru investigaiile sanitaro bacteriologice se recolteaz toat poria (bucatele reci, bucatele de felurile doi, trei .a.).

Transportarea probelor n laborator

La transportarea probelor n laborator este necesar de a asigura depozitarea lor n condiii n care s previn orice modificare a numrului de microorganisme prezente n ele. Este preferabil s se ia toate msurile pentru ca transportul s fie ct mai rapid. Transportul probelor este necesar de a fi efectuat de un autotransport special n lzi compartimentate cu ageni frigorifici sau n geni frigorifice, care snt supuse prelucrrii nainte de fiecare recoltare a probelor. O atenie special trebuie acordat respectrii regimului de temperatur prevz ut pentru transportarea produselor alimentare enumerate mai jos: produsele neperisabile temperatura mediului nconjurtor; produsele perisabile, inclusiv proaspete i refrigerate ntre 0 i + 40C; produsele congelate sau puternic congelate sub minus 180C; produsele pasteurizate i similare - ntre 0 i + 40C; mostrele produselor neperisabile alterate - ntre 0 i + 40C;. AVERTIZARE: produsele alimentare perisabile (de exemplu: subprodusele, petele proaspt) trebuie pstrate la temperaturi ntre 0 i +20C.n timpul transportrii nu se permite congelarea probelor recoltate, n deosebi, n anotimpul de iarn. Produsele alimentare alterate se transport n ambalaje nchise, pentru a fi protejate mpotriva unei posibile scurgeri de coninut.

Obiecte de control. Periodicitatea

Analiza microbiologic a produselor alimentare are unele particulariti legate de consistena alimentului, caracterul prelucrrii i conservrii, durata permis de pstrare. n produsele lichide condiiile de multiplicare i rspndire a microbilor n tot produsul sunt mai favorabile. n produsele solide rspndirea microorganismelor este localizat cu o concentraie mai mare a lor la suprafa. Dezvoltarea florei microbiene n produs depinde de PH, concentraia de NaCl, zahar, conservani.
16

Se examineaz: gustrile reci: salate, vinegrete, carne rece, pete fiert, prjit, copt, tartine cu salam, mezeluri, pateuri, etc.; alimentele servite la felul I: bor, supe, ciorbe; alimente servite la felul II: preparate din carne tocat, din carne tiat mrunt, din pete, diverse garnituri, sosuri; alimentele servite la felul III: compoturi, creme gelatinoase, buturi; produse acidolactice: brnz, smntn, chefir, iaurt, etc. n cazul recoltrii produselor alimentare (bucatelor gata) de pe mas pentru investigaiile sanitaro-bacteriologice se recolteaz toat poria (bucatele reci: vinegretele i salatele din fructe i legume fierte; bucatele de felul doi: produse tocate, produse din carne tiat mrunt gula, tocan .a.; garnituri; felurile trei compoturi, buturi .a.). [www.cnsp.md/down/info1335692044ro.pdf Recomandari metodice Privind aplicarea metodelor instrumentale i de laborator la efectuarea supravegherii de stat a
sntii publice n domeniul sntii copiilor i tinerilor aprobate la 25 aprilie 2012]

Indicatori microbiologici pentru aprecierea calitii produselor alimentare

Indicatorii microbiologici vor corespunde prevederilor stipulate n Regulile privind criteriile microbiologice pentru produsele alimentare, aprobate prin HG nr. 221 din 16.03.2009 [21] i alte documente normative de reglamentare la produs sau la grupul de produs. n normarea microbiologic a alimentelor, prevzut n documentele oficiale (reguli, reglementri tehnice, standarde, standarde de firm, etc.), prima i cea mai important condiie este lipsa germenilor patogeni din alimente (Listeria monocytogenes, Salmonella spp) i a unor microorganisme condiionat patogene (Enterobacter sakazakii, Enterotoxine stafilococice). Pentru caracteristica microbiologic a alimentelor s-a acceptat utilizarea unor germeni indicatori, care sunt martori al unor condiii de igien ncepnd cu etapa de preparare, regimul de pstrare i transportare a produselor (Escherichia coli, Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, familia Enterobacteriaceae i un numr de colonii aerobe). Pentru evaluarea calitii diferitor tipuri de produse alimentare este necesar a selecta indicatorii microbiologici respectivi. Principii de selectare a indicatorilor microbiologici sunt urmtoarele: rolul epidemiologic al unui produs anumit n clarificarea cauzelor apariiei toxiinfeciilor alimente la om; regimul tehnologic de preparare a alimentelor, condiiile recomandate pentru depozitarea, precum i metode de preparare pentru consum;
17

 receptivitatea la infecii alimentare a consumatorului, pentru care acest produs este destinat. Prezenta microorganismelor mezofile (in afara de celea care se folosesc pentru fermentare)in numar de 106 si mai mult la 1g (cm3),face ca alimentul corespunzator sa fie potential periculos chear daca lipsesc devieri ale proprietatilor organoleptice. Conform Cerintelor medico-biologice si normele sanitare ale calitatii materiei prime alimentare si produselor alimentare nr.5061 -89 criteriile microbiologice ale calitatii produselor alimentare include 4 grupe. In prima grupa intra indicatorii sanitari microbiologici:numarul total de unitati formatoare de colonii,germeni mezofili aerobi si facultativ anaerobi,bacteriile coliforme totale in special E.Coli.Grupa a doua include microorganismele conditionat patogene :Stafilococus aureus,Bac.cereus,Cl.sulfitoreducatoare,Cl.perfingens,genul proteus,VibrioParahemoliticus.Altreileagrup:Salmonella,Grupul patru:levuri,ciuperci microscopice. Grupul germenilor coliformi include microbe nesporulati,G-,aerobi si facultativ anaerobi,di genurile Escherichia,Citrobacter,Enterobacter,Klebsiella,reprezentanti ai familiei Enterobacteriaceea.Metodele de determinare a grupului dat se bazeaza pe capacitatea lor de a fermenta lactoza la temperature de 36+/-1oC cu producerea de acid si gaze timp de 24 ore.E.Coli poseda aceste calitati si la temperature de 44+/- 0,5oC,mai formind inca si indol.Depistarea in alimente a E.Coli este o dovada directa a poluarii cu fecale proaspete. Genul Stafilococus(aureus,epidermis,saprophyticus) sunt bacteria facultative anaerobe,se dezvolta in alimentele bogate in glucide,si protein.Pericolul pentru sanatate il prezinta enterotoxinele termo-stabile.Doza suficienta pentru determinarea toxicoinfectiei alimentare este atunci cind contaminarea produsului cu stafilococi coagulazo+ ajunge la gradul de 105-107/g sau cm3.Zaharul opreste dezvoltarea lor numai incepind cu concentartia de 60% in faza lichida. Bac.cereus bacil sporulat aerob G+.Poate produce intoxicatie alimentara cind atinge 106-107 intr-un g.Multiplicarea intensive a microbului are loc in intervalul ph-7-9,5.Este destul de rezistent la actiunea zaharului,clorurii de sodium,aceasta din urma stopind activitatea lor in concentartie de 10-15 %. Salmonella.Conform Cerintelor medico-biologice si normelor sanitare ale calitatii materiei prime alimentare si produselor alimentarenr.5061 -89 salmonelele trebuie sa lipseasca in 25g(cm3) de alimente.Salmonellele sunt
18

bacteria facultative-anaerobe,G-,temperature optima de dezvoltare 37oC,iar ph slab alcalin (7,2-7,4).[Regulile privind criteriile microbiologice pentru produsele alimentare,
aprobate prin HG nr.221 din 16.03.2009 ,Igiena alimentatiei,Chisinau 2001,autori:Alexei Chirlici,Uliana Jalba ]

EVALUAREA REZULTATELOR DE LABORATOR I COMPLETAREA FORMULARELOR DE EVIDEN

Probele prelevate pentru investigaiile bacteriologice vor fi nsoite de formularul F205/e Trimitere la investigaie sanitaro-microbiologic, perfectat de ctre asistentul medicului igienist sau medic ntr-un singur exemplar. Ulterior laboratorul sanitarobacteriologic va elibera rezultatele perfectnd formularul F-205/e Rezultatul investigaiei sanitaro-microbiologice ntr-un singur exemplar. n cazul efecturii investigaiilor de laborator sanitaro-microbiologice prin contract se va perfecta formularul F- F-343/e Raport al ncercrilor de laborator ntr-un singur exemplar.

Bibliografie
1.[Instructie pentru controlul bacteriologic al complexului sanitaro-igienic al aerului,din 1978,O.ino] 2.[Anexa Nr.5 la Regulamentul sanitar privind conditiile de igiena pentru institutiile medicosanitare,conform:Hotarirea Guvernului Nr.633 din 23.07.2010, Monitorul Oficial din 30.07.2010 131-134] 3.[Regulamentul igienic si cerinte privind calitatea apei potabile la aprovizionarea decentralizata.Protectia surselor amenajarea si mentinerea fintinilor,cismelelor,aprobat de medicul-sef sanitar de Stat al R.Moldova,M. Magdei,23 februarie 1996 Nr.06.6.3.18-96; SM ISO 5667-5:2010 Calitatea apei. Prelevare. Partea 5. Ghid de prelevarea apei potabile i apei utilizate n industria alimentar. SM ISO 5667-11:2010 Calitatea apei. Prelevare. Partea 11. Ghid general pentru prelevarea apelor subterane. ] 4. [Standartul de stat ;SM ISO 5667-5:2010 Analiza microbiologica a probelor de apa. 1446-76 - . ] 5. [http://www.referat.ro/laboratoare/Analiza_microbiologica_a_apei_c400a.html Trimis la data:2010-06-18Materia:Biologie Autor:Adriana Nicusor] 6 .[Ttabelul 1A,anexa 7 [7] Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012]

19

7 . [Ttabelul 1B,anexa 7 [7] Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012] 8.[ 17.4.4.02-84 . . , .] 9.[Tabelul 2,Anexa 8[34] Parametrii microbilogici ai solului Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012] 10.[www.cnsp.md/down/info1335692044ro.pdf Recomandari metodice Privind aplicarea metodelor instrumentale i de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sntii publice n domeniul sntii copiilor i tinerilor aprobate la 25 aprilie 2012] 11[Regulile privind criteriile microbiologice pentru produsele alimentare, aprobate prin HG nr.221 din 16.03.2009 ,Igiena alimentatiei,Chisinau 2001,autori:Alexei Chirlici,Uliana Jalba ] Interpretarea rezultatelor obtinute se vor realize conform Cerinte medico-biologice si norme sanitare ale calitatii materiei prime alimentare si produselor alimentarenr.5061-89 (Anexa 2)

20