Metode rapide de numare a

microorganismelor cu Petri filme

 Petri filme (EN Petrifilms)

Sistem comercial utilizat la

numrarea microorganismelor prin metoda cultural

- mediul de cultur specific, deshidratat,

dar uor rehidratabil, este fixat sub forma unui film
(cu diametru i grosime variabil) pe un suport de carton
plastifiat i acoperit cu o folie din plastic

- prin inocularea suspensiei de celule, lichidul rehidrateaz

mediul i prin termostatare devine posibil dezvoltarea
microorganismelor din suspensie
Numrarea coloniilor (prag minim de detecie 25-250 colonii/
Petrifilm) este facilitat de imprimarea unui caroiaj care mparte
suprafaa mediului n ptrate cu suprafaa de 1cm2.
Se calculeaz ufc/g (ml), similar cu metodele clasice.

Numar total
de bacterii aerobe
E. coli si coliformi
Drojdii si mucegaiuri
Staphylococcus aureus count
Tipuri de
Petri filme
 Avantajele utilizrii Petri filmelor
uurina n exploatare
simplitate n utilizare i n interpretarea cu acuratee a rezultatelor,
prin crearea unor condiii selective de cretere i de evaluare a
microorganismelor testate.
reducerea semnificativ a costului manoperei per analiz;
reducerea la jumtate a timpului necesar pentru realizarea analizelor
microbiologice, cu impact pozitiv asupra:
* controlului eficient al punctelor critice,
* optimizrii strategiilor de control,
* creterii numrului de analize efectuate,
* eficientizrii procesrii,
* mbuntirii calitii i
* asigurarea inocuitii produselor finite.
impact pozitiv asupra organizrii laboratorului de microbiologie, prin
eliminarea operaiilor de pregtire i sterilizare a mediilor de cultur
i a ustensilelor de laborator
riscuri reduse pentru mediul nconjurtor dup utilizare; volum redus
de produse reziduale la finalul analizei care pot fi uor anihilate prin
incinerare;
economie de spaiu la transport, pstrare i termostatare (un
pachet de 50 de Petrifilme ocup un spaiu similar cu cel ocupat
de 2 plci Petri clasice);
valabilitate prelungit (mai mult de un an, prin meninere la 4C).
Metode de concentrare
a microorganismelor
n vederea numrrii lor

Metoda filtrrii
 Metoda filtrrii prin membran
Se folosete pentru cuantificarea
celulelor viabile
Se obine o concentrare a Membran
microorganismelor din volume mari filtrant
de lichid cu ncrctur microbian
0,45 m
redus
Modul de lucru:
se filtreaz un volum cunoscut de
lichid (100-1000mL) printr-o
membran filtrant (dimensiunea
porilor 0,22 sau 0,45m)
Filtru
microorganismele din proba filtrat
vor fi reinute pe membrana filtrant
Membrana filtrant este apoi plasat
pe un mediu nutritiv solid i
termostatat corespunztor.
Dup dezvoltarea coloniilor se
calculeaz UFC/mL
(20-80 colonii/ membran filtrant) Pomp
Se poate aplica doar probelor vacuum care absoarbe lichidul
Lichid
limpezi, cele cu turbiditate mare pot
bloca porii steril
filtrului
 FILTRAREA
Filtrul reine microorganismele
i permite lichidului s treac
prin porii si
Membran filtrant
 2. Datorit vacuumului
proba este filtrat
3. Se desface clema i
se ndeprteaz cilindrul de sticl
1. Se toarn 250mL prob (ap)

4. Cu o penset steril 5. Membrana filtrant se 6. Dup termostatare

se preia membrana plaseaz pe suprafaa corespunztoare se
filtrant unui mediu nutritiv numr coloniile
adecvat, evitnd
formarea bulelor de aer
SEPARAREA PRIN GRADIENT DE
DENSITATE
1. Separarea in functie de marimea particulelor
1. Separarea in
functie
de marimea
particulelor
2. Separarea in functie de densitatea particulelor
(izopicnica)

Centrifugarea de particule
sau de macromolecule intr-o
coloana de lichid care contine
straturi cu densitate crescanda
Separarea se va face pe straturi,
in functie de densitate
Particulele vor migra in timpul
centrifugarii pana ajung la stratul cu
densitate similara cu a lor
2. Separarea in functie de
densitatea particulelor
Reprezentarea schematica a coeficientilor de sedimentare a
biomoleculelor (proteine, acizi nucleici, poliglucide) sau a
organitelor celulare in functie de densitate
Separarea prin gradient de densitate
Gradient de densitate solutii de zaharoza cu
concentratii intre 40- 80% (g/v)
Intr-un tub: primul strat de jos- cel mai dens strat, iar
ultimul strat de sus- cel mai putin dens strat
Deasupra se toarna suspensia de celule de separat si se
centrifugheaza amestecul

Celule de Rhodotorula sphaeroides

cultivate in conditii diferite prezinta
densitati diferite
 Aplicatiile gradientului de
densitate
pentru separarea izopicnica
 Isolation of rice etioplasts by Nycodenz density gradient centrifugation.A, organelle fractions
in the Nycodenz gradient.

Anne von Zychlinski et al. Mol Cell Proteomics

2005;4:1072-1084

2005 by American Society for Biochemistry and Molecular Biology