Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Principiul tehnicii histopatologice impune transformarea unui prelevat dintr-un organ sau ţesut dintr-
o masa tisulară opacă într-un preparat fin, translucid care permite vizualizarea microscopica a
detaliilor structurale tisulare. Pentru a realiza aceasta prelevatul suferă transformări succesive:
Produs final - preparatul histopatologic permanent care permite interpretarea corecta în vederea
stabilirii diagnosticului anatomo-patologic.
Protocoalele de lucru histopatologie sunt orientative; pot fi folosiţi reactivi diferiţi, timpul de acţiune
şi concentraţiile menţionate în reţete sunt orientative şi se adaptează în funcţie de condiţiile locale
(temperatură ambientală, duritatea şi pH-ul apei de robinet etc). Tehnica folosită este considerată
corectă dacă se obţin rezultatele preconizate prin coloraţia respectivă. La reţetele de coloraţii
recomandate sunt admise variaţii, în funcţie de structura care se doreşte evidenţiată; de asemenea,
pot fi folosite alte coloraţii speciale pentru evidenţierea aceleiaşi structuri (de exemplu coloraţie
pentru colagen Roşu Sirius, coloraţie mixtă uzuală şi pentru colagen - Hematoxilină eozină safran,
mucicarmin pentru mucopolizaharide acide, auramină pentru bacili acid alcoolorezistenţi şi altele
asemenea) sau coloraţii speciale pentru substanţe care nu pot fi identificate prin procedeele
recomandate (de exemplu coloraţie von Kossa pentru calciu, coloraţie Scharlach, Sudan III, negru
Sudan sau roşu ulei O pentru lipide, coloraţie cu rodanină pentru depozite de cupru şi altele
asemenea).
Pentru tehnicile de imunohistochimie timpul de expunere la anticorpi primari şi secundari poate fi
modificat în funcţie de diluţia anticorpului; de asemenea metodele de pretratament pot fi modificate
faţă de recomandarea producătorului (de exemplu fierbere în tampon citrat în loc de tratament
enzimatic pentru pancitokeratina AE1-AE3) cu condiţia obţinerii de rezultate concordante cu
structurile evidenţiate pe lame martor.
PROTOCOL DE LUCRU
prelucrarea pieselor anatomo-patologice (piese chirurgicale, biopsii, fragmente tisulare recoltate la
necropsii)
5. Fixare - în formol 10% tamponat, minimum 24h; timpul de fixare poate fi redus în funcţie de timpul
de fixare prealabilă (anterioară orientării macroscopice) a fragmentelor tisulare
8. Includere în parafină; dacă se formează blocuri de parafină, acestea vor fi fasonate şi etichetate;
dacă se include pe casete, casetele vor fi fasonate şi se va verifica etichetarea acestora
11. Deparafinarea şi rehidratarea lamelor; se va efectua prin treceri prin băi succesive de agent de
deparafinare (benzen, toluen, xilen sau alte substanţe asemenea), alcool etilic şi apă de robinet;
numărul băilor şi timpul de expunere variază în funcţie de desfăşurarea manuală sau automată a
procesului (minimum 25 de minute - automat, 1 oră - manual)
PROTOCOL DE LUCRU/CITOLOGII
- Material primit: broşaj, puncţie mamara, puncţie tiroidiana, lichid ascitic, lichid pleural, lichid
sinovial, urina, frotiuri cervicovaginale.
1. COLORATII UZUALE
2. COLORATII SPECIALE
2.1 Coloratia Van Gieson
I. Deparafinare
II. Hidratare
III. Spalare
IV. Colorare cu hematoxilină Weigert (2 părţi hematoxilină + 1 parte mordant) - 5 minute
V. Spalare
VI. Diferentiere rapida în alcool-acid clorhidric.
VII. Spalare
VIII. Contrastare în solutie saturata de Li(2)CO(3)
IX. Spalare
X. Colorare cu picrofucsină - 2-5 minute
XI. Spalare
XII. Deshidratare
XIII. Clarificare
XIV. Montare
Reactivi:
Hematoxilină Weigert: 99ml alcool 96°C+ 1g hematoxilină la termostat timp de 24 ore
Mordant: 4 ml solutie hexaclorohidrat de fier trivalent 29%+1 ml acid clorhidric 1N+95 ml apa
distilata
Picrofucsină: 100 ml acid picric solutie suprasaturata+10 ml fucsină acidă 1% rezultat: nucleii-negri,
citoplasma-galben, colagen-rosu
Reactivi: Soluţie Roşu de Congo 0,5%: 0,5g Roşu de Congo în 100 ml alcool etilic 50%
Rezultate: nuclei - albaştri, amiloid - roşu cărămiziu (birefringenţă verde în lumină polarizată)
Reactivi: Solutie Albastru alcian pH 1: Albastru alcian 8GX 1g+99 ml apa distilata+acid clorhidric 1N
până la pH 1.
Solutie Albastru alcian pH 2,5: Albastru alcian 8GX 1g+50 ml alcool etilic absolut+50 ml apa distilata+
acid acetic glacial până la pH 2,5
Rezultate: nuclei - albastru, polizaharide acide – albastru
Reactivi: solutie argento-amoniacala: 5 ml solutie azotat de argint 10%+hidroxid de amoniu 25% până
la dispariţia precipitatului de oxid de argint+azotat de argint 10% până la opalescenta. Se aduce la 50
ml cu apa distilata.
Rezultate: pigment melanic, hemosiderină – negru