PRELUCRAREA PROBELOR CONGELATE

Tehnica secionrii pieselor biologice congelate este apanajul laboratoarelor de anatomie

patologic i permite analiza microscopic rapid a unui preparat. Recoltarea, fixarea,
secionarea, etalarea, colorarea, montarea i etichetarea se desfoar ntr-un timp foarte
scurt (cca 10 minute) fa de tehnica seciunilor fine la parafin (cca 16 ore). Calitatea
preparatului este ns diminuat fa de probele incluse in parafin i secionate la
microtom.

Aplicaiile tehnicii de secionare a pieselor congelate

- efectuarea unui examen anatomopatologic rapid:
o n cadrul tehnicii chirurgicale Mohr (chemiochirurgie) - o metod simpl
de control microscopic 100% al marginilor unei probe chirurgicale;
o pentru examinarea n timpul operator a unei tumori cu presupuse
metastaze; proba suspecta de a fi o metastaza este prelucrat prin
congelare i secionare la criotom iar rezultatul decide continuarea
procedurii operatorii n sens radical sau conservator;
- evidenierea unor componente tisulare care se pierd la prelucrarea prin tehnici
histologice uzuale (n care, de exemplu, folosirea formolului ca fixator dizolv
lipidele); se pot detecta lipidele, enzimele, mucopolizaharidele.
- efectuarea unor preparate care s permit detecia unor antigene, prin tehnici
complementare de imunofluorescen sau imunohistochimie; aceste antigene pot
fi mascate de fixarea cu formalin, motiv pentru care se poate opta pentru
secionarea la criotom.

Materiale i echipamente necesare

- esut proaspt recoltat;
- criotom - un microtom pentru seciuni congelate, cu grosimea de 5-60m,
amplasat ntr-o incint frigorific.
- gel crioprotector OCT (Optimal Cutting Temperature), un amestec de glicerol i
rini care mpiedic formarea cristalelor de ghea n interiorul esutului (fapt
care ar afecta structura tisular);
- soluii de colorare (fie albastru de toluidin fie clasica tehnic de colorare HE),
lame, lamele, mediu de montare, alcool, xilol.

Tehnic de lucru
- recoltarea se poate realiza prin metodele cunoscute (biopsie, puncie bioptic etc);
- fixarea se realizeaz prin congelarea probei (implicit - metod fizic)
Congelarea probei se realizeaz ntr-un container special (fig.1a)
Piesa este acoperit cu soluie crioprotectoare (fig.1b) i sigilat cu o membran PET.
Congelarea se poate realiza n sistemul de rcire al criotomului, pe o plac rcit la
-58C. Preparatele pot fi apoi stocate ntr-un congelator la -74C, dac nu sunt secionate
imediat. Incinta criotomului ajunge la -35C

Containerul special de congelare este amplasat pe sistemul portobiect al criotomului.

Blocul congelat cu esutul trebuie s fie paralel cu lama cuitului; acum se poate ncepe
secionarea.

n timpul secionrii, care poate fi automat, semi-automat sau manual, cu ajutorul unui
penson se mpiedic incurbarea seciunilor.
n final seciunile sunt preluate cu un penson i amplasate pe lam.

Colorarea seciunilor la ghea