BIOTEHNOLOGII

ALIMENTARE

CURS 4

Titular: Conf.dr.ing. Alexandra Mocanu

alexandra.mocanu@upb.ro
Departamentul de Inginerie Chimică și Biochimică – D106, C006
 3.Sterilizarea
– procesul de distrugere sau îndepărtare a oricăror forme de
microorganisme patogene sau nepatogene din substraturi, instalaţii,
spaţii închise, diferite obiecte etc.
Pasteurizarea reprezintă operația de distrugere a microorganismelor (inclusiv bacterii)
prin incălziri repetate la temperaturi sub 100˚C.

Metode de sterilizare:
• metode termice - uscate - cu aer cald la 140-2000C
- prin încălziri repetate la 70-1000C.
- umede - cu vapori de apă sub presiune la 120-1400C
• metode fizice - filtrarea prin umpluturi fibroase, materiale poroase,
• membrane, etc.
- iradiere cu radiaţii UV, IR, raze X, raze γ - gamma etc.
• metode chimice - utilizarea agenţilor chimici cum ar fi oxidul de etilenă,
formol, fenol, ozon etc.

Alegerea metodei de sterilizare se face în funcţie de proprietăţile fizico-

chimice ale materialului supus sterilizării, pentru a evita degradarea,
modificarea compoziţională.
3.1. Metode termice - Sterilizarea termica

a) uscată (încălzire cu aer cald sau prin suprafeţe de transfer);

! Nu se aplică materiilor prime termolabile sau celor

care se pot autoaprinde la temperaturi ridicate.

Etuvă industrială cu aer cald1

Benzi indicatoare pentru sterilizare2

1http://www.despatch.com/ta_tf.aspx
2http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap07/lecture4.htm
Sterilizarea prin aer cald uscat este specifica utilajelor similare etuvelor
cu aer cald.
• La temperaturi de 160 °C sterilizarea se realizaeaza in aproximativ 1
ora.
Nu va fi aplicată bumbacului sau materiilor prime pe baza de celuloza.
Un microorganism utilizat ca indicator pentru sterilizare este
Clostridium botulinum. Alegerea sa nu este întâmplătoare, deoarece
produce toxine mortale pentru organismul uman şi, în plus, sporii săi
sunt printre cei mai rezistenţi la temperaturi ridicate (sterilizare peste
85 °C). Cum Clostridium botulinum este, totuşi, foarte periculos pentru
organism, au mai fost selectate şi alte microorganisme nepatogene
termorezistente, pentru a fi utilizate ca indicatori de apreciere a
sterilizării. In prezent pentru proiectarea procesului de sterilizare se
utilizează Bacillus stearothermophilus.
b) umedă (cu vapori de apă sub presiune)
Avantaje: - transfer termic rapid al căldurii, pătrunde mai ușor prin materiale poroase, eficienţă
sporită datorită acţiunii hidratante a apei şi aburului asupra proteinelor microbiene, necesită o
temperatură mai scăzută şi timp de acţiune mai scurt; se realizează în autoclave sub presiune.

a ! Nu poate fi utilizată pentru

materiale anhidre (pulberi și uleiuri)
și/sau termolabile.

a,bhttp://www.telstar.com/
Sterilizarea cu vapori de apa supraincalziti si sub presiune se
realizeaza in autoclave.
Exemplu: la o presiune de 2 atm sterilizarea are loc la 136 °C, la
2,5 atm temperatura de sterilizarea creste la peste 140 °C si
dureaza 30 min.
• Sterilizarea umeda in autoclave permite sterilizarea inclusiv a
metarialelor plastice utilizate pentru ambalare, instrumente
metalice, echipamente de protectie, solutii saline, medii
lichide.
Conditii standard: presiune 15 psi, temperatura 121° C, timp 15
minute.
Principiul de funcționare al unei autoclave

http://www.slideshare.net/saravananchandran712/sterilization-methods-of-parenterals
 Denumire Sterilizare
microorganism
uscată umedă
Temp. 0C Timp, sec Temp. 0C Timp, sec
Salmonella typhimurium 100 1800 65 20
Mycobacterium tuberculosis 100 2700 65 10
Spori de Bacillus anthracis 170 600 100 600
Spori nativi din sol 180 1800 120 1800
Staphilococcus pyogenes 120 1800 65 60

Salmonella typhimurium1 Mycobacterium tuberculosis2 Bacillus anthracis3

1https://www.britannica.com/science/Salmonella-typhimurium
2http://mycobacterium-tuberculosis.com/
3http://www.npr.org/sections/health-shots/2015/05/28/410327135/cdc-investigates-live-anthrax-shipments
Sterilizarea umedă se urmăreşte în funcţie de
- punctul termic mortal - valoarea temperaturii la care sunt
omorâte toate celulele unei anumite specii în timp de 10 minute;
- timpul termic mortal - valoarea timpului de expunere la o
anumită temperatură necesară distrugerii tuturor celulelor
sporulante şi scade semnificativ cu creşterea temperaturii.

Tabel 2. Timpul termic mortal pentru sporii unor microorganisme în etapa de sterilizare
termică umedă
Spori Temperatura, 0C
80 100 110 120
Bacillus subtilis 74-75 ore 175 min. 37 min. 7,5-8 min.

Bacillus megaterium 16-17 ore 15-16 min.

Clostridium botulinicum 5,5 ore 32 min. 4 min.

Clostridium sporogenes 10 ore 90 min. 15 min.

 3.2. Metode fizice de sterilizare
a) Sterilizarea prin filtrare
- Se realizeaza pe materiale poroase si este utilizata ca metoda de inlocuire a sterilizarii
termice pentru preparatele termolabile;
- Se utilizeaza filtre poroase de tip Jena G5; filtre de azbest-celuloză, filtre cu
membrană, filtre de profunzime, filtre absolute, etc.
• Filtre poroase Jena/Duran/Robu G5

Denumire Dimensiune pori a

P00 250-500 µm

P0 160-250 µm
b
P1 100-160 µm

P2 40-100 µm

P3 16-40 µm

P4 10-16 µm

P5 1.0-1.6 µm

ahttp://www.duran-group.com/
bdamschittenden.com/ROBU_frits.html
 (a) Instalație de laborator pentru filtrare; (b) Membrana filtrantă pentru reținerea
microorganismelor celulare; (c) Colonii de celule rezultate după incubare1

• Filtre cu membrană: membrane din acetat/nitrat de celuloză, policarbonat, teflon sau

teflon-celuloză, etc.
1http://microbiollogy.blogspot.ro/2013/03/control-of-microorganisms-by-physical_14.html
 • Filtre Seitz - fabricate din azbest-celuloză

a b c

Filtre care contin diatomita incorporata in membrana polimerica, un silicat utilizat in special pentru realizarea filtrelor
destinate sterilizarii apei piscinelor. In industria alimentara se folosesc inclusiv la filtrarea vinului.

http://www.slideshare.net/saravananchandran712/sterilization-methods-of-parenterals
ahttp://microbiollogy.blogspot.ro/2013/03/control-of-microorganisms-by-physical_14.html
bwww.pall.com/main/biopharmaceuticals/product.page?lid=gri78lh6
chttp://www.scottlabsltd.com/product/seitz-supradisc-ii-filter-module/
• Filtre de profunzime – rețin în interiorul lor o cantitate mare de particule
Aplicații: industria alimentară (filtrarea băuturilor), ingineria chimică (purificare solvenți),
industria petrolieră

a Sunt utilizate pentru soluții/suspensii care conțin

o canitate mare de particule. Se colmatează mai
b greu – blocare totală a filtrului.
Sunt utilizate pentru sterilizarea apei potabile.
Sunt fabricate in general din polietilena (PE),
polietilenimina (PEI),
polisulfona/polietersulfona(PSF/PES).
Au capacitate de filtrare de la 75 până la 130 L/h
la o suprafață de 3600 cm2. Dezavantajul constă în
faptul că nu au o viață lungă de utilizare, dupa 1-2
cicluri trebuie schimbate.
Filtrul pentru apa potabila prezintă un strat
multimplu de membrane pt o reținere mai bună a
particulelor.

ahttp://www.daidomachines.com/global/filter/depthfilter.html
bhttp://www.dramm.com/html/main.isx?sub=488
• Filtre absolute – sunt utilizate pentru situații/aplicații critice – sunt filtre cu o
dimensiune clară a porilor (ex. 1 micron, 5 microni, etc.) care pot reține până la 100%
anumite microorganisme în anumite condiții specifice de presiune, concentrație, etc.;
❖ sunt utilizate atât pentru etapele de sterilizare, cât și pentru etapele de filtrare ale
produselor finite.

Filtru absolut pentru purificare aerului2

Filtre absolute pt îndepărtarea microorganismelor Cryptosporidium și Giardia intestinalis din apă1

1http://www.rainfresh.ca/cyst_filters.php
2http://www.maftech.net/hepa-filter-and-accessories.html#air-purifier-hepa-filter
 b) Sterilizare prin iradiere:
• Radiații neionizante:UV, IR
• Radiații ionizante: raze X, raze gamma, electroni accelerați, etc.

Aparatură pentru radiații IR

http://www.xtremetechnologylb.com/
http://www.slideshare.net/DrSathyajithR/sterilization-and-disinfection-54451216
 Schema unei instalații pentru sterilizarea cu raze gamma

https://www.killersilver.com/product-safety.html
Pt sterilizarea produselor alimentare pt prelungirea termenului de valabilitate,
protejarea acestora fata de anumite microorganisme. Se pot steriliza fructe,
legume, peste , cereale, etc. Sterilizarea produselor se face prin generarea unei
anumite cantitati de energie care distruge strict microorganismele
patogene/nepatogene in totalitate intr-un timp de expunere minim.

Doza de radiatii absorbita de proba este masurata in kiloGray adica kGy. Aceasta
modalitate de sterilizare se face si pentru echipamente medicale, pt sterilizarea
vaccinurilor si uneori a deseurilor medicale.

Avantajul utilizarii consta in facptul ca temperatura obiectelor nu creste in timpul

sterlizarii, se evita astfel supraincalzirile locale si degradarile produselor.

Radioisotopul pentru generarea radiatiile gamma este Co 60.