Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
GENERALIT I
Microorganismele triesc în mediul înconjurtor în prezena anumitor factori fizici, chimici i biotici care
influeneaz în mod favorabil sau defavorabil dezvoltarea i înmul irea lor. De-a lungul timpului, omul a
învat s selecteze acei factori care s-i permite distrugerea speciilor patogene sau selectarea speciilor
folositoare.
În cele mai vechi civilizaii s-au cunoscut practici care au prevenit alterarea alimentelor, putrefac ia
cadavrelor, fr a se cunoate rolul microorganismelor în aceste procese. Astfel, alimentele perisabile au fost
conservate prin adaus de sare, uleiuri aromatice, afumare sau fermenta ie acid . Conservele au ap rut cu 50 de
ani înaintea cercetrilor lui Pasteur, fr a fi fost lmurit principiul care st la baza lor. La începutul secolului al
XVIII-lea s-a folosit pentru prima oar clorura de var i fenolul pentru dezodorizarea gunoaielor i în final pentru
curirea plgilor, fr a se cunoate aciunea bactericid a acestor substane.
Tehnicile de sterilizare s-au dezvoltat iniial în laboratoare pentru a permite izolarea miocrobilor în culturi
pure, ele fiind apoi rapid preluate de toate specialitile medicale pentru a preveni rspândirea infeciilor.
Se folosesc doi termeni pentru a desemna distrugerea sau înl turarea microorganismelor, sterilizarea i
dezinfecia, diferena dintre ele fiind important.
Prin termenul de sterilizare, care este un termen absolut, se îneleg procedeele fizice i chimice care elimin
toi germenii viabili (bacterii, spori, fungi, virusuri, parazi i) de pe un obiect. Se desemneaz ca steril un obiect
care a fost supus unui procedeu de sterilizare i protejat în mod corespunztor pentru a preveni contaminarea sa.
Se folosesc, în principiu, 4 metode de sterilizare:
• sterilizarea prin cldur;
• filtrarea prin filtre bacteriologice care rein bacteriile din lichidele ce nu pot fi supuse temperaturilor
ridicate;
• iradierea cu raze UV sau raze ionizante;
• sterilizarea chimic, metod evitat în general deoarece doar câiva dezinfectan i, foarte toxici i
iritani (ca de exemplu, formaldehida, oxidul de etilen etc.) folosi i în condi ii riguros controlate, sunt
capabili s omoare toate formele de via inclusiv sporii, fr a deteriora obiectele de sterilizat.
Trebuie specificat, îns, c sterilizarea nu este identic cu distrugerea fizic a bacteriei, cu toate c cele
dou noiuni se folosesc des una în locul celeilalte. Acest aspect este foarte important, deoarece solu iile
perfuzabile, care sunt sterile dar conin bacterii omorâte, a c ror produ i de degradare au efecte pirogene, dau
reacii toxice a cror gravitate merge pân la ocul endotoxinic. Deci, apa i lichidele care vor servi la
prepararea soluiilor injectabile sau perfuzabile trebuie s fie nu numai sterile, dar s aib un grad pronun at de
puritate.
Antisepsia const în aplicarea unor substane bactericide sau bacteriostatice în scopul de a omorâ sau inhiba
dezvoltarea florei patogene în plgi.
Asepsia cuprinde toate msurile care împiedica contaminarea cu ageni infecioi a unei plgi.
Cinetica reaciei bactericide prin ageni fizici i chimici decurge ca o reac ie de ordinul întâi, ceea ce
înseamn c bacteriile supuse oricirei aciuni bactericide nu vor muri toate în acelai timp.
Criteriul fundamental de apreciere a aciunii bactericide a unei noxe este pierderea capacit ii
microorganismului de a se înmuli atunci când este însmânat într-un mediu favorabil. Testele de viabilitate sunt
foarte importante în prepararea vaccinurilor, de pild, a cror sterilizare se face prin metode blânde pentru a nu
modifica imunogenitatea microbilor. Astfel, exist posibitatea supravie uirii unui num r mic de bacterii care
dup încetarea noxei se vor înmuli din nou.
Conservarea reprezint prevenirea alterrii prin ageni microbieni ai unor produse degradabile cum sunt
alimentele sau medicamentele.
Microorganismele sunt distruse la temperaturi ridicate într-un timp care depinde de mai mul i factori:
• temperatura, care este invers proproional cu timpul necesar expunerii bacteriilor,
• numrul microorganismelor i al sporilor, elemente ce afecteaz rapiditatea sterilizrii,
• specia i proprietatea de a sporula a microorganismelor. Sensiblitatea i supravie uirea la c ldur
variaz la diferitele tulpini din cadrul aceleiai specii,
• materialul în care este cuprins microorgansimul. Un con inut ridicat de substan e proteice, zaharuri, lipide,
amidon, acizii nucleici sau uleiuri protejeaz sporii i formele vegetative de ac iunea c ldurii. Prezen a
dezinfectanilor are efect sinergic cu cel al temperaturii ridicate,
• pH-ul. Rezistena maxim a sporilor la cldur se situeaz la un pH de 7 i scade o dat cu creterea
aciditii sau alcalinitii,
• condiiile în care are loc sporularea. Se pare c sporii forma i în habitatul natural al microbilor sunt mai
rezisteni la cldur decât cei obinui pe mediile de cultur.
Dat fiind sensibilitatea diferit a tulpinilor din cadrul unei specii se prefer ca index pentru timpul în care
sunt distruse bacteriile timpul zecimal de reducere, sau valoarea D10, care este timpul minim exprimat în minute
care reduce viabilitatea culturii bacteriene cu 90% la o temperatur dat în condiii standard.
Cldura umed este mai eficient decât cldura uscat, distrugând bacteriile la o temperatur mai
sczut i timp mai scurt. Formele vegetative a majorit ii bacteriilor, fungilor i virusurilor animale sunt
omorâte de cldura umed în 10 minute la temperaturi cuprinse între 50 oC (Neisseria gonorrhoeae) i 65oC
(Staphylococcus aureus). O susceptibilitate deosebit fa de cldur o prezint Treponema pallidum, care
este distrus în 10 minute la 43 oC. Rezistena maxim la cldur umed o are, îns, Bacillus
stearothermophylus, a crui form vegetativ se poate multiplica la 80 oC. O parte din virusurile animale au o
rezisten crescut fa de cldura umed, ca, de pild, virusul poliomielitic care este inactivat la 60 oC
dup 30 de minute, i virusul hepatitei B care dac se afl în ser rezist 10 ore la 60 o. Muli bacteriofagi au o
rezisten mai mare la cldur umed decât bacteria gazd, aceasta fiind distrus la 60 oC în 15-30 minute iar
bacteriofagul la temperaturi cuprinse între 65-80oC.
Formele sporulate ale actinomicetelor, ciupercilor i a fungilor sunt mai rezistente decât formele vegetative,
dar nu atât de rezistente ca i sporii bacterieni.
Rezistena sporilor bacterieni variaz la diferitele specii, dar chiar i între tulpinile aceleia i specii. Astfel,
majoritatea sporilor de Cl.tetani sunt distrui prin fierbere la 100 oC în 10 minute, dar s-au semnalat tulpini a cror
spori rezist la fierbere 1-3 ore, fiind cei mai rezisteni patogeni ce pot infecta o plag. Rezisten a lor determin
standardele minime pentru sterilizarea chirurgical: 10 minute la 121 oC sau 30 de minute la 115oC fr a socoti
timpul de înclzire. Unii spori de Cl.botulinum rezist la fierbere la un pH=7 pân la 8 ore iar la autoclavare 10-
40 de minute la 115oC.
Omorârea microorganismelor prin cldur umed se produce prin coagularea proteinelor structurale i
inactivarea enzimelor, cu participarea apei. Cei mai rezisten i spori sunt distru i prin expunere la c ldur
umed la 121o timp de 30 de minute.
• fierberea este de fapt o metod de dezinfecie deoarece ea nu distruge toate formele sporulate. Se
efectueaz la 100oC timp de 1/2 de or i se aplic siringilor i instrumentelor de mic chirurgie atunci
când nu este posibil alt metod. Fierberea se mai folosete în epidemii la sterilizarea apei.
• pasteurizarea a fost introdus de Pasteur pentru conservarea vinului, fiind utilizat i acum pentru
sterilizarea unor alimente lichide care nu suport temperaturi prea ridicate (lapte, bere, sucuri de fructe).
Metoda const în înclzirea lichidului la 62°C pentru 30 de minute (pasterurizare joas ), 71 oC 15 minute
(pasteurizare medie), 80-85o 3-5 minute (pasteurizare înalt) sau introducerea unor vapori filan i la o
temperatur de 130 -150oC sub presiune pentru câteva secunde (ultrapasteurizare). Pasteurizarea este o
metod eficient deoarece bacteriile patogene care se pot dezvolta în lapte ( Mycobacterium tuberculosis,
Salmonella, Streptococcus i Brucella) nu sunt bacterii sporulate, numrul lor reducându-se dup
pasteurizare cu 97-99%. Coxiella burnetii nu este distrus prin pasteurizare joas.
• tyndalizarea const în înclzirea produsului de sterilizat 3 zile la rând, în baie de ap la 56-100 oC câte o
or. Temperatura se alege în funcie de produsul de sterilizat. Metoda se aplic lichidelor care nu suport
temperaturile ridicate, ca de exemplu: vaccinuri, medii de cultur ce con in zaharuri în concentra ie mare,
proteine, gelatin etc. Formele vegetative sunt distruse în prima zi, iar sporii se transform în forme
vegetative ce vor fi distruse zilele urmtoare. Reamintim, îns, c sporii bacteriilor termofile nu se distrug
prin aceast metod.
• autoclavarea este metoda folosit pentru instrumentarul de chirurgie iar în laboratoarele de microbiologie
pentru sterilizarea mediilor de cultur i a materialului infec ios. Sterilizarea are loc într-o atmosfer
saturat de vapori de ap la 120oC, la o presiune de 1 atm, timp de 20 de minute, în aparate speciale
numite autoclave.
4. ANTISEPTICE I DEZINFECTANTE
4.3 Srurile
Dintre sruri, cele ale metalelor grele au efectul bactericid cel mai puternic. Astfel, ionii de Hg i Ag sunt
activi într-o proporie de 1/un milion. Aciunea lor bactericid se datoreaz combin rii lor cu grup ri active al
enzimelor pe care le inactiveaz. Eficiena lor depinde, îns , mai degrab de densitatea culturii bacteriene decât
de concentraia lor, deoarece ei sunt absorbii repede i preferenial de bacterii, atingând în bacterii concentra ii
mari în defavoarea concentraiei din mediu.
• clorura de mercur (sublimatul) 1%o se folosete în laboratoare ca dezinfectant pentru pipete i lame;
• merthiolatul, care este un compus organic al mercurului, este folosit drept conservant pentru seruri i
vaccinuri în concentraie de 1/10.000 i ca dezinfectant în concentraie de 1/1000;
• nitratul de argint în concentraie de 1% se folosea în profilaxia oftalmiei gonococice la nou-n scut înainte
de introducerea penicilinei în terapie;
• colargolul, protargolul i argirolul sunt compui de argint care se folosesc sub forma de colire i unguente
în concentraie de 1-1,5%;
• compuii organici ai arsenului, bismutului, antimoniului au fost utilizai în trecut în tratamentul sifilisului
i a unor infecii produse de unele protozoare.
• sulfatul de cupru este folosit cu succes ca fungicid, dar nu în medicin, ci în agricultur;
• oxidul de zinc se folosete ca antiseptic, astringent i caustic în dermatologie.
4.4. Halogenii
Halogenii cei mai utilizai ca antiseptice i dezinfectante sunt clorul i iodul, ambele cu ac iune puternic
bactericid i sporicid. Mecanismul de aciune al halogenilor se bazeaz pe proprietile lor oxidante.
Clorul a fost introdus ca dezinfectant de O.W.Holmes la Boston în anul 1835 i de Semmelweis la Viena în
1847 pentru a preveni transmiterea febrei puerperale prin mâinile medicilor.
• clorul gazos în concentraie de 2-3mg%o este folosit pentru potabilizarea apei, dar concentra ia trebuie s
fie mai mare dac apele au coninut crescut de substane organice, deoarece acestea fixeaz i
inactiveaz clorul;
• hipocloritul de sodiu se folosete tot pentru dezinfecia apei, a veselei i a WC-urilor, la cur irea
suprafeelor în industria alimentar, în uniti de alimentaie public etc;
• cloramina este folosit ca dezinfectant pentru vesel, lenjerie, în concentraie de 2-3% i ca antiseptic în
concentraie de 1%;
Iodul este un oxidant puternic i se combin ireversibil cu proteinele bacteriene. Se folose te sub form
de:
• soluie alcoolic 1-2% ca antiseptic cutanat
• tinctur de iod care conine 4-5% iod i 2-5% iodur de potasiu se utilizeaz tot ca antispetic
cutanat pentru antiseptizarea pielii înainte de interven ii chirurgicale. Atât solu ia alcoolic cât i
tinctura nu pot fi aplicate direct pe plgi deoarece au efect distructiv asupra esuturilor;
• iodoforii conin iod complexat cu un detergent anionic au o serie de avantaje. Au o penetrabilitate foarte
bun a pielii, nu sunt iritani deoarece iodul este eliberat treptat din combina ie i nu p tez lenjeria.
Un exemplu este betadina, un complex hidrosolubil al iodului cu polivinilpirolidona. Preparatul poate fi
folosit pentru antiseptizarea plgilor superficiale.
Dezavantajul antisepticelor cu iod este alergizarea pe care o produc la unele
persoane.
Glutaraldehida 2% în soluie apoas este mai activ decât formolul i mai pu in iritant . Este mai
activ în mediu alcalin fiind bactericid, sporicid i virulicid . Este indicat în sterilizarea unor instrumente
medicale ce nu pot fi supuse sterilizrii prin cldur, ca, de pild , cistoscoape, echipament de anestezie,
materiale plastice i termometre.
Fenolii. Fenolul (C6H5OH) sau acidul carbolic este un bun denaturant al proteinelor precum i un detergent.
Aciunea sa bactericid presupune liza celulelor bacteriene. El se poate folosi ca dezinfectant în concentra ie de
2,5% la decontaminarea bilor, a podelelor de spital, a plo tilor etc., fiind îns iritant. Este activ fa a de
majoritatea bacteriilor, inclusiv fa de bacilul tuberculozei i spori. În cocentra ie de 1%o se folose te pentru
conservarea vaccinurilor.
Activitatea antibacterian a fenolului crete prin halogenarea sau alkilarea inelului, ceea ce intensific
polaritatea gruprii fenolice (-OH), restul moleculei devenind mai hidrofob . Compusul halogenat este mai
tensioactiv i puterea bactericid crete de 100 de ori. Spre deosebire de detergen ii cationici, ac iunea fenolilor
este intensificat de spunuri care le faciliteaz ptrunderea. Lungimea catenei fenolului cre te pân la un
punct activitatea antibacterian, pentru a o scdea la o lungime ce depete o anumit limit .
• mixtura de tricresol (ortho, meta, para-metilfenol) i s pun este larg utlizat pentru dezinfec ia
materialelor rezultate din laboratorul de bacteriologie, aciunea nefiind diminuat de prezen a materiilor
organice. Are un miros neplcut i ptrunztor.
• lizolul este un amestec de tricrezol i un spun de K. Se utilizeaz ca dezinfectant în medicina veterinar ,
fiind activ asupra bacilului lui Koch în concentraie de 3‰.
• difenolii halogenai, ca, de pild, hexaclorofenul este bacteriostatic în dilu ii foarte mari (1/2.500.000) i
este mai puin inactivat de spunuri decât detergenii anionici. Hexoclorofenul nu are mirosul p trunz tor al
celorlali fenoli i nu este prea volatil. Este larg utilizat pentru dezinfec ia pielii în combina ie cu un detergent,
sau în spunurile deodorante care împiedic descompunerea sudorii sub ac iunea bacteriilor. În cazurile în care
este posibil absorbia lui pe cale cutanat din pudre (de exemplu prin pielea sugarilor imaturi), pot apare semne
toxice sistemice.
• esterii alkil ai acidului p-hidroxibenzoic sunt folosi i în conservarea alimentelor i a medicamentelor. Ei
acioneaz pe bacterii ca i fenolii alkilai, dar sunt netoxici când p trund pe cale oral deoarece sunt rapid
hidrolizai în p-hidroxibenzoat, netoxic.
• uleiurile eseniale care au fost utilizate înc din antichitate ca antiseptice i conservante con in o mare
varietate de compui fenolici cum sunt tymolul (5-metil-2-isopropilfenol) i eugenolul (4-alil-2-methoxifenol).
Ultimul este folosit în stomatologie.
4.8. Solvenii volatili
Alcooli. Aciunea dezinfectant a alcoolilor alifatici crete o dat cu lungimea catenei de carbon pân la
C8-C10, dup care solubilitatea în ap descrete. Aciunea dezinfectant a alcoolilor, precum i activitatea lor
de denaturare a proteinelor presupune prezena apei.
Metanolul este activ în soluii de 50-70% i este foarte des utilizat în antiseptizarea pielii înainte de injec ii
i puncii venoase. Pielea pe care se aplic alcoolul etilic trebuie s fie uscat , diluarea alcoolului etilic
sczând puterea sa bactericid. Aplicarea alcoolului pe piele îndep rteaz stratul lipidic f când pielea
nereceptiv fa de ali dezinfectani liposolubili. Adausul de clorhexidin (0.5%) sau de iod (1-2%) cre te
foarte mult activitatea bactericid i sporicid.
• alcoolul de 95% are o actiunea dezinfectant foarte slab, datorit lipsei de ap , sporii de bacil c rbunos
rezistând în alcool “pur” peste 51 de zile
• cu toate c este mai puin folosit, alcoolul isopropilic are o serie de avantaje: nu este atât de volatil, deci
persist timp mai îndelungat pe suprafee, este puin mai activ i nu constituie o restric ie legal folosirea lui
în recoltarea sângelui pentru stabilirea alcoolemiei.
Ali solveni organici ca de exemplu eterul i acetona sunt slab bactericizi i nu pot fi folosi i ca
antiseptice sau dezinfectante.
Adausul a câtorva picturi de toluen sau cloroform în ap va avea un caracter pronun at antifungic i
antibacterian.
Glicerolul este bacteriostatic într-o concentraie de peste 50% i este folosit la conservarea vaccinurilor sau
altor produse biologice, nefiind iritant pentru organism.
4.10. Coloranii
Coloranii trifenilmetanici, cum sunt cristal-violetul, metil-violetul i verdele briliant, sunt substan e
puternic bacteriostatice, slab bactericide active mai ales pe bacteriile gram-pozitive. Violetul de gen iana se poate
folosi ca antiseptic în concentraie de 0,2%.
Coloranii tiaznici, cum este albastrul de metilen, se folosesc ca antiseptici externi în concentrna ii de
0,2%-0,5%. Albastrul de metilen poate fi administrat ca antiseptic intern in infeciile urinare (urodezinfectante).
Dintre coloranii acridinici, cel mai utilizat este rivanolul (lactat de metacridin) în concentraii
de 1-2%, la antiseptizarea plgilor chirurgicale i traumatice.