ACIUNEA AGENILOR FIZICI I CHIMICI ASUPRA BACTERIILOR

Efectele complexe ale factorilor din mediul nconjurtor sunt influenate de

natura microorganismelor (caracterele de specie), compoziia chimic i faza de dezvoltare (vrsta culturii), dar i de forma vegetativ sau sporulat a bacteriilor.

Pe de alt parte, efectul aciunii este determinat de

intensitatea sau concentraia agentului, timpul de expunere, concentraia ionilor de H+ sau OH- etc.

Efectele pot fi: stimulatoare, de atenuare, de oprire a multiplicrii sau de distrugere abacteriilor.

 Efect bacteriostatic: inhib nmulirea bacteriilor fr ale omor, fenomen reversibil; Efect bactericid: omoar microorganismele prin lezarea integritii sau a funciei bacteriene, fenomen ireversibil.

 Agenii fizici i chimici au o larg aplicare n:

practica sterilizrii, dezinfeciei, obinerea de variante i de produse biologice conservarea bacteriilor etc.

 Septic infectat, contaminat cu germeni patogeni. Aseptic (steril) lipsit de microbi patogeni sau nepatogeni. Asepsie ansamblul de metode prin care se evit contaminarea unui substrat steril. Sterilizare distrugerea sau ndeprtarea oricror forme de viat, a tuturor microorganismelor patogene sau nepatogene, forme vegetative sau sporulate de pe o suprafat sau dintr-un substrat inert Dezinfectie distrugerea formelor vegetative microbiene (mai rar a celor sporulate) din sau de pe suprafata unor

 Dezinfectant substant chimic, toxic pentru tesuturi vii, cu actiune microbicid, ireversibil. Antisepsie distrugerea sau ndeprtarea temporar a formelor vegetative microbiene de pe substraturi vii (mucoase, tegumente, plgi), cu ajutorul antisepticelor. Antiseptic substant chimic, netoxic pentru tesuturile vii, cu actiune reversibil, bacteriostatic asupra microorganismelor. Prezervare prevenirea multiplicrii unor microorganisme n produse farmaceutice, vaccinuri, alimente etc.

Sterilizarea
cuprinde mijloacele prin care toate formele de via microbian vegetativ i sporulat sunt omorte i utilizeaz metode drastice, de obicei fizice (caldura, radiatii,), prin care se obine un efect bactericid. ine cont de existena sporilor, mult mai rezisteni dect formele vegetative.

DEZINFECTIA
Dezinfecia urmrind distrugerea unor grupe de microorganisme, mai ales a celor patogene, vegetative (mai puin sporii) apeleaz la substane chimice. Antisepsia (de la sepsis putrefacia esuturilor) const n utilizarea local pe esuturi vii (tegumente, mucoase, plgi) a unor substane care s mpiedice multiplicarea bacteriilor sau s le distrug, fr a fi toxice pentru celulele organismului.

Agenii fizici
Temperatura poate fi favorabil sau defavorabil
microorganismelor, cea din urm aciune datorndu-se ruperii legturilor intramoleculare ale proteinelor i ale altor molecule n stare nativ, prezena apei mrind labilitatea legturilor chimice. n general, formele vegetative ale bacteriilor patogene sunt omorte ncepnd de la 50 70C. Sporii, prezentnd o compoziie chimic diferit (cu deosebire n natura proteinelor i lipidelor coninnd acid dipicolinic) i coninut de ap foarte redus, sunt mult mai rezisteni, fiind omori la temperaturi de 100 160C. Cea mai eficient metod de sterilizare, fa de spori, este cea prin autoclavare la o atmosfer (121C) timp de 15 minute

Cldura umed
Are ca mecanism de actiune coagularea proteinelor si degradarea enzimelor. 1. temperaturi sub 100C sunt aplicate pentru formele vegetative ale bacteriilor mezofile si criofile aflate n solutii apoase.
pasteurizarea expunere termic + refrigerare imediat; tindalizarea Autoclav cu robinetul de vapori deschis

 2.temperatura de 100C metoda imperfecta de sterilizare fiind utilizat la decontaminarea apei, alimentelor, lenjeriei, instrumentarului etc. Se folosesc fierbtoare nclzite electric sau la flacr. 3. temperatura de peste 100C este temperatura la care se realizeaz sterilizarea. Se folosesc autoclave care folosesc vapori de ap sub presiune: 0,5 atm - 115C; 1 atm - 121C; 2 atm - 1 34C.

Cldura uscat
Are ca mecanism de actiune carbonizarea structurilor bacteriene. 1. flambare metod de completare a sterilittii, metod deasepsie; 2. nclzire la incandescent pentru ansa sau acul de platin; 3. incinerare pentru materiale contaminate, reziduuri, animale; 4. sterilizare cu aer supranclzit se realizeaz n cuptorul Pasteur (Poupinel; etuv) la 180C timp de 1 or , sau la 160C timp de 2 ore.

FRIGUL
refrigerarea temperaturi de 0 7 au efect bacteriostatic asupra majorittii microorganismelor; unele bacterii mor (Neisseria meningitidis, N.gonorhoeae, Haemophilus influenzae) altele se pot multiplica. congelarea dac este fcut lent, la temperaturi de (-20C) favorizeaz formarea cristalelor de ap care lezeaz membrana citoplasmatic a celulei bacteriene care va fi distrus (efect microbicid).

Congelarea rapid la (-80C) n bulion glicerinat duce la solidificarea amorf a apei intracelulare ceea ce face ca celula microbian s rmn n viat. socul rece unele bacterii pot fi distruse prin scderea brusc a temperaturii, de la 45C la 15C.

DESICAREA
Prin ndeprtarea apei din celula bacterian, n citoplasma lor apar numeroase schimbri chimice i fizice, precum i denaturarea proteinelor. Formele vegetative ale unor bacterii, mor repede prin desicare, n ore (pneumococul, gonococul, vibrionul holeric) sau n cteva zile (bacilul tuberculozei), n timp ce sporii i pot pstra viabilitatea un timp ndelungat. Uscarea n vid a culturilor congelate (liofilizarea) n prezena unei soluii protectoare de proteine, prin zpad carbonic la -78C, este o metod de conservare.

PRESIUNEA OSMOTIC
n medii hipotone are loc acumularea apei n celula bacterian care devine turgescent, peretele bacterian sprgndu-se. n mediul hiperton bacteria pierde ap (plasmoliza), fenomen cu efecte letale asupra bacteriei.

RADIATIILE
Radiatii neionizante radiatiile UV au efect microbicid, dar au putere de penetrabilitate mic. Se pot folosi la
dezinfectia aerului
n ncperi din boxele de lucru

la dezinfectia suprafetelor
n laboratorul de microbiologie, ca o metod complementar msurilor de curtenie si dezinfectie chimic.

RADIATIILE
Radiaiile X se pare c i exercit efectul bactericid prin ionizare, cu formare de radicali oxigen bactericizi. Acestea, ca i razele beta, gama i alte tipuri de radiaii penetrante, produc ionizarea moleculelor, formarea peroxidului de hidrogen, inactivarea proteinelor, inclusiv a enzimelor, locul important al aciunii lor fiind ADN-ul Aceast metod de sterilizare se utilizeaz pentru medicamente, instrumentar confectionat din material degradabil termic. Ca surse de radiatii gama sunt folosite cobaltul 60 sau cesiul 137

ULTRASUNETELE
Au actiune microbicid prin actiune mecanic, sprgnd peretele celular acele sunete care ating 16.000 cicli/sec. Determin liza celulelor bacteriene prin ruperea peretelui celular i dezintegrarea structurilor, ca urmare a ruperii i golirii coninutului celular prin procesul de cavitaie. De asemenea, n cursul aciunii undelor ultrasonice, se ating temperaturi de 50 - 80C, care determin moartea microorganismelor. Bacteriile difer mult n privina sensibilitii lor la efectele sonice. Sporii sunt extrem de rezisteni

FILTRAREA
Prin procesul de trecere a unui lichid sau gaz printr-un material poros, pot fi retinute, mecanic sau electrostatic, cele mai multe dintre bacterii dac dimensiunea porilor este de aproximativ 0,22 m. Filtrele cu dimensiunea porilor de 0,01 m pot retine si virusurile mici, aceste filtre avnd n mod real rol sterilizant al materialului filtrat. Este o metod se sterilizare la rece aplicat solutiilor denaturabile termic. Se poate aplica si aerului din incaperi

LASERUL
Laserul (light amplification by stimulated emission of radiation) are efect microbicid instantaneu

AGENI CHIMICI
Pe lng substantele chimice necesare dezvoltrii si multiplicrii bacteriene, exist o serie de alte substante chimice cu efect bacteriostatic sau bactericid. Aceste substante sunt
antibiotice, chimioterapice, antiseptice, dezinfectante.

 Agenii chimici aplicai n cadrul metodelor de dezinfecie duc la distrugerea formelor vegetative, un dezinfectant fiind un agent chimic care omoar microorganismele patogene i nepatogene

 Un antiseptic este un agent chimic aplicat pe esuturi vii, care inhib sau omoar microorganismele. Un bun antiseptic trebuie s ndeplineasc o serie de condiii: s omoare bacteriile la concentraii joase ntr-o perioad scurt i s prezinte un spectru microbian larg; s fie solubil i stabil n ap sau ntr-un solvent, fr a pierde puterea bactericid; s fie relativ netoxic pentru esuturi; s fie ct mai penetrant i s nu se combine cu materialul organic etc.

 Aciunea bactericid a agenilor chimici se poate realiza pe mai multe ci, care pot s stea la baza clasificrii lor, dup cum acioneaz: prin blocarea gruprilor active ale proteinelor, prin alterarea permeabilitii peretelui bacterian, concomitent cu alterarea enzimelor

 Dintre agenii chimici care acioneaz prin denaturarea coloizilor proteici, inclusiv a enzimelor, mai importani sunt:
acizii i alcalii - prin disociaia electrolitic i concentraia ionilor de H+ i OH-, sau acizii organici neionizai care sunt bacteriostatici pentru enterobacterii ; alcooli (izopropilic, etilic, metilic) la concentraii de 50 70% - acionnd asupra complexelor lipidice membranare i prin denaturarea proteinelor; ionii metalici de mercur, argint, cupru - a cror eficacitate este n raport cu disociaia electrolitic i cu potenialul de reacie cu gruparea SH a proteinelor enzime.

 Agenii chimici care acioneaz prin halogenare i prin oxidare (halogenii, cloraminele, iodul, peroxidul de hidrogen H2O2, permanganatul de potasiu) au o deosebit de larg ntrebuinare. Agenii chimici alchilani cu aciune reductoare: sub form gazoas (oxidul de etilen, formolul, glutaraldehida, etc). Dintre acetia, oxidul de etilen, este mult mai eficient pentru sterilizarea materialului chirurgical, produselor de cauciuc, de plastic, ce nu suport temperatur nalt. Astfel de sterilizare se practic sub presiune, controlnd umiditatea i temperatura.

 Coloranii, larg utilizai n bacteriologie pentru colorarea germenilor, dar i pentru activitatea lor bacteriostatic i bactericid (violetul de genian, cristal violetul, etc), interfernd cu sinteza acizilor nucleici. Cristal violetul este folosit n tratarea infeciilor bacteriene gram pozitive i unele infecii fungice, ex. infeciaoral cu Candida (cu o soluie de 0,5%).

 Detergenii sunt clasificai n trei grupe:

cationici, anionici i neionici.

Detergenii cationici: cei mai importani

fiind grupul compuilor de amoniu cuaternar. n soluii apoase, ca rezultat al disociaiei, se formeaz cationi cu ncrctur pozitiv (radicalul amoniu) care se absoarbe pe suprafaa membranei, fiind activi att fa de bacteriile gram negative ct i gram negative, prin ruperea i liza membranei. Exemplu, Zefiranul este detergent cationic cu aciune de suprafa folosit ca antiseptic al

 Detergenii anionici, prin disociaie,

elibereaz ioni negativi (anioni) cu efect toxic, sunt eficieni mai ales, asupra bacteriilor gram pozitive. n acest grup se includ i spunurile, care dei au o aciune antimicrobian mai slab, determin ndeprtarea mecanic prin emulsionarea secreiilor lipoidice

 n functie de actiunea antimicrobian pe care o au dezinfectantii vorbim despre efect antimicrobian a. de nivel nalt substante care distrug toate microorganismele cu exceptia unui numr redus de spori bacterieni, cu conditia timpului de contact de cel putin 20 de minute
peroxid de hidrogen stabilizat (6%), acid peracetic, hipoclorit desodiu (5%, 25%), glutaraldehida (2%), cloramina B (2%);

 b. de nivel mediu substante care distrug virusuri, fungi, formele vegetative bacteriene (inclusiv Mycobacterium tuberculosis) dar nu distrug endosporii bacterieni si unele virusuri fr nvelis extern (rhinovirus, enterovirus). Timpul de contact este de 10 minute:
fenoli, iodofori, alcooli, compusi pe baz de clor etc;

 c. de nivel sczut substante care distrug

majoritatea formelor vegetative bacteriene, unele virusuri, unii fungi dar nu distrug M.tuberculosis, endosporii bacterieni si virusurile nude. Timpul de contact este de 10 minute:
clorhexidina, compusi cuaternari de amoniu

Actiunea antimicrobian a antisepticului sau dezinfectantului depinde de

concentratie, timpul de contact si de prezenta substantelor organice

Agenti sterilizanti
Sunt substante chimice, cu bun penetrabilitate, care
n incinte nchise etans, n anumite concentratii, ntr-un timp de contact bine stabilit, n conditii stricte de temperatur si umiditate au actiune microbicid.

Se folosesc
glutaraldehida 2%, acidul peracetic, peroxidul de hidrogen stabilizat 6%.

Atunci cnd nu exist alt mijloc de sterilizare adecvat se foloseste oxidul de etilen.