Sunteți pe pagina 1din 56

4.

PROPRIETILE MICROORGANISMELOR PATOGENE: PATOGENITATEA I VIRULENA


BACTERIAN
Din multitudinea de microorganisme existente n natur, un numr limitat sunt capabile s se dezvolte n asociaie
cu organismele superioare, iar dintre acestea, un numr restrns (cteva sute) sunt patogene.
Bacteriile patogene au dou proprieti definitorii: patogenitatea i virulena. Cei doi termeni au semnificaie
distinct.
4.1. Definiii
Patogenitatea (gr. pathos boal, suferin; om. gr.-geneia, fr. gnie nscut, produs al) este proprietatea esenial a
oricrui agent patogen ce const n capacitatea acestuia de a genera un proces infecios, acelai din punct de vedere clinic,
manifestat prin starea de boal, atunci cnd ptrunde n organismul sensibil pe cale natural sau pe cale experimental. Un
microorganism patogen este capabil s induc leziuni tisulare la o gazd receptiv. n mod obinuit, patogenitatea este
asociat, inexact, cu modul de via parazitar a microorganismelor, dar calitatea de patogen nu se asociaz totdeauna cu
parazitismul. Majoritatea bacteriilor patogene sunt parazite, iar in vitro se dezvolt ca saprobionte pe medii organice,
uneori cu compoziie chimic complex. Unele bacterii, dei sunt strict saprobionte, adic se dezvolt pe materia organic
n mediile naturale (de exemplu, Cl. botulinum), dar nu sunt parazite, produc totui efecte patologice prin intermediul
exotoxinelor pe care le secret.
Patogenitatea a aprut n cursul co-evoluiei gazd-parazit i implic existena a patru proprieti eseniale:
- ptrunderea i localizarea n esuturile gazdei;
- multiplicarea i producerea de toxine/invadarea gazdei;
- inducerea unui rspuns imun i rezistena la mecanismele de aprare ale gazdei;
- producerea leziunilor specifice.
Patogenitatea este un caracter calitativ de specie. De exemplu, B. anthracis, C. diphteriae, S. typhi, M. tuberculosis
sunt patogene sau condiionat patogene, adic determin apariia unui proces infecios numai dac sunt inoculate n doze
foarte mari sau dac organismul are o rezisten general sczut. Cel mai ilustrativ exemplu de patogenitate condiionat
este oferit de Ps. aeruginosa, o bacterie saprobiont n mediile naturale: organismul uman mpiedic, n condiii obinuite,
colonizarea cu pseudomonade, dar la persoanele imunocompromise, n rnile provocate de arsuri sau de traumatisme sau
n esutul pulmonar al pacienilor cu fibroz chistic, Ps. aeruginosa produce ntotdeauna infecii.
Alte specii (Azotobacter sp., Nitrobacter sp., Acetobacter sp. etc.) nu sunt niciodat patogene, pentru c nu au
capacitatea de a stabili interaciuni cu organismele superioare.
Virulena (lb. latin virulentus = otrvitor) este capacitatea relativ a unei tulpini patogene de a determina leziuni
tisulare (de a coloniza, de a se multiplica i eventual de a invada celulele i esuturile gazdei i/sau de a produce toxine),
determinnd o stare patologic la o gazd receptiv.
Virulena exprim cantitativ gradul de patogenitate a unei tulpini pentru o anumit gazd i este o proprietate
multifactorial, dependent de paticularitile structurale i fiziologice ale agentului patogen materializate n:
- infeciozitate (sau capacitatea de colonizare);
- agresivitate (sau invazivitate);
- toxigenitate.
Procesul infecios
Infecia (lb. latin inficere - otrav) este deteminat de capacitatea agentului patogen de ptrunde, de a se localiza
i multiplica n organismele gazd sensibile. Infecia bacterian produce modificri de tip alterativ ale organismului gazd.
Ele sunt primare (directe), datorate factorilor de patogenitate bacterian (intoxicaii, toxiinfecii, bacteriemii) i secundare,
mediate de factorii umorali i celulari ai sistemului imunitar (strile de hipersensibilitate).
Factori de virulen
Virulena este corelat cu prezena unor structuri bacteriene (flageli, fimbrii),a unor proteine membranare sau cu
unele particulariti fiziologice i de sintez (de exemplu sinteza exotoxinelor sau a exoenzimelor), denumii factori de
virulen, care determin producerea unor leziuni n organismul gazdei.
Moleculele care mediaz virulena au fost grupate n 4 clase: adezine, invazine, agresine i impedine. Adezinele
sunt proteine bacteriene care mediaz interaciunea celulei bacteriene cu o varietate de celule ale gazdei, n special epitelii,
ca o prim treapt de colonizare a gazdei. Invazinele sunt proteine bacteriene care permit celulei s intre n celula
eucariot. Agresinele sunt molecule, de exemplu toxine i proteaze, care produc leziuni ale gazdei ori favorizeaz
rspndirea infeciei. Impedinele sunt componente bacteriene care inhib aciunea mecanismelor de aprare, fr s
produc leziuni.

22

Moleculele inductoare ale sintezei de citokine sunt, probabil, tot factori de virulen, dar nu aparin celor 4 clase
enumerate mai sus. Componentele care induc sinteza citokinelor, moduleaz activitatea celulei infectate, cu consecine
patologice i au fost denumite moduline.
Analiza genetic a factorilor de virulen bacterian a artat c patogenii se disting de bacteriile nepatogene, prin
prezena genelor specifice de patogenitate, adeseori organizate n aa numitele insule de patogenitate aglomerri de
gene care aparent au fost dobndite n evoluie, pe calea transferului orizontal al genelor ( fig. 30, 31).

Fig 30.
Fig. 30. Structura unei insule de patogenitate (V1-4), gene de virulen, IS (secvene de inserie) (Barton et al., 2009)

Fig. 31. Reprezentarea evoluiei bacteriilor patogene din bacterii comensale prin dobndirea genelor de virulen prin transfer orizontal mediat de
diferite elemente genice mobile. PAIs (insule de patogenitate- pathogenicity islands) (dup Ahmed et al., 2008).

Bacteriile patogene conin 1-2 insule de patogenitate, dar diferite tulpini de Salmonella au pn la 5 astfel de
secvene insulare de ADN. Originea comun a genelor codificatoare a factorilor de virulen explic faptul c ageni
patogeni cu grad mic de nrudire poart gene de virulen strns nrudite. Afirmaia este foarte evident pentru un set de
aproximativ 20 de gene, codificatoare ale unui set de proteine care definesc un mecanism de patogenitate, denumit sistem
de secreie de tip III.
Scopul practic al cercetrii proprietilor de virulen a unui agent patogen este obinerea unor mijloace de
contracarare a exprimrii sau aciunii factorilor de virulen (vaccinuri) pentru a preveni infecia.
4.2. Infeciozitatea
Infeciozitatea reprezint capacitatea unui microorganism de a depi mijloacele de aprare a organismului, de a
se implanta i de a coloniza esuturile sntoase, adic de a stabili o localizare i de a forma un focar primar de infecie.
Colonizarea esutului de ctre un microorganism patogen este o faz iniial critic pentru evoluia procesului patologic i
este un fenomen complex, care implic att implantarea, ct i utilizarea substanelor nutritive disponibile n mediul
gazdei.

23

Traversarea stratului de mucus de ctre agenii infecioi este favorizat de prezena organitelor de micare
(flageli), dar i prin secreia substanelor mucolitice (de exemplu, mucinaza produs de Helicobacter pylori i Vibrio
cholerae), stimularea secreiei de mucus, producerea unor toxine care inhib motilitatea ciliar.
n medii apoase motilitatea este asigurat de flageli dispui peritrih, n timp ce flagelii cu localizare polar
favorizeaz traversarea rapid a mediilor cu vscozitate crescut (de exemplu, bacteriile spiralate), iar fenomenul de
hiperflagelare asigur deplasarea pe suprafaa majoritii mucoaselor (de exemplu, la Proteus mirabilis expresia
flagelilor este legat de exprimarea altor factori de virulen; B. bronchiseptica devine mobil atunci cnd ajunge n
medii srace n substane mutritive, mobilitatea fiind implicat n persistena i cronicizarea infeciei).
Aderena la celulele gazdei este direct (prin intermediul adezinelor specifice de tipul pililor, hemaglutininei HA) sau indirect (prin intermediul glicocalixului sau al moleculelor de matrice extracelular de tipul fibronectinei sau al
opsoninelor). Adezinele bacteriene confer specificitate tisular (de exemplu, H. pylori - pentru mucoasa gastric; E. coli
uropatogen - pentru mucoasa tractului urinar; Str. pneumoniae - la pacienii cu otite, ader mai eficient la celulele
nozofaringelui, dect la pacienii cu septicemie sau cu meningite; Str. mutans - se leag de glicoproteine salivare), dei
exist i ageni infecioi care pot coloniza diferite esuturi, n funcie de poarta de intrare n organismul gazd, producnd
diferite tipuri de infecii (de exemplu, B. anthracis poate produce crbunele pulmonar, digestiv i cutanat).
4.2.1. Adezinele bacteriene
Prima etap a colonizrii unui esut este aderena celulelor bacteriene la celulele gazdei.
Legarea bacteriilor patogene de celulele sensibile este etapa iniial a procesului infecios. Aderena mpiedic
ndeprtarea bacteriilor prin: fluxul secreiilor, tuse, motilitatea cililor, peristaltismul intestinal.
Aderena este mediat de structuri specializate ale suprafeei bacteriene, cunoscute sub denumirea generic de
adezine. Structurile bacteriene de aderen, anatomice sau moleculare sunt de cele mai multe ori adaptative. Ele dispar
prin cultivarea succesiv in vitro. De aceea, tulpinile bacteriene de laborator sunt mai puin aderente la suport, comparativ
cu tulpinile bacteriene izolate recent.
Aderena asigur colonizarea anumitor situsuri din organism, multiplicarea bacteriilor, sinteza toxinelor i
desfurarea reaciei inflamatorii de aprare.
Bacteriile ader n special la epiteliile mucoaselor, dar i la epiteliile cheratinizate, la endotelii, la esutul osos, la
smalul dentar etc. Aderena implic interaciunea situsurilor complementare de pe suprafaa celor dou tipuri de celule:
epitelial i bacterian.
Aderena este condiionat de complementaritatea sarcinilor electrice ale celor dou suprafee. Cele mai multe
bacterii au o sarcin net negativ a suprafeei lor, dar au i zone limitate electropozitive, precum i molecule cu caracter
hidrofob.
Aderena reprezint un avantaj ecologic major pentru bacteriile patogene, cu privire la asigurarea nutrienilor,
protecia fa de anticorpi i lizozim etc. Multiplicarea lor, dup aderen, are loc cu o rat net superioar fa de a
celulelor neaderente.
Mecanismele aderenei bacteriene in vivo au fost studiate n special pentru bacteriile generatoare de carii dentare.
Aderena celulelor bacteriene patogene la celulele sensibile implic participarea a doi factori: o adezin localizat pe
suprafaa bacteriei i un receptor de pe suprafaa celulei gazd (fig. 32).

Fig. 32. Reprezentarea schematic a adererenei celulelor


bacteriene la celula gazd sensibil, mediat de adezine (liganzi)
i receptori specifici (http://lib.bioinfo.pl/courses/view/312,
http://diverge.hunter.cuny.edu/~weigang/Images/1501_adherence_1.jpg).

Fig. 33. Diversitatea structurilor implicate n aderena bacteriilor Gram-pozitive


(Streptococcus pyogenes) la celula gazd sensibil
(http://d3jonline.tripod.com/10-Bacteria/Microbial_Virulence.htm).

24

Adezinele bacteriene se mpart n dou categorii: a) adezine de natur proteic; b) adezine neproteice.
Grupul adezinelor proteice cuprinde fimbriile, care sunt structuri filamentoase, neflagelare ale suprafeei
celulare, diferite de pilii participani la conjugare. Fimbriile fac parte din categoria lectinelor i se gsesc numai la
bacteriile Gram-negative. Ele se leag de receptori specifici ai membranei celulare. Fimbriile care aparin aceluiai tip
sunt formate din molecule proteice identice. Diferitele variante fimbriale se deosebesc prin lungimea filamentului i prin
greutatea molecular a monomerilor polipeptidici constitutivi.
n aceeai categorie sunt incluse o categorie de proteine din structura membranei externe a bacteriilor Gramnegative sau din structura peretelui celular al bacteriilor Gram-pozitive, care ndeplinesc funcia de adezine (fig. 33).
Grupul adezinelor neproteice.
O serie de substane de natur glucidic, cu structuri complexe i particulare intr n structura peretelui celular al
bacteriilor Gram-pozitive i Gram-negative, exercitnd un rol important n patogeneza bacterian (aderen, evitarea
mecanismelor de aprare ale gazdei, meninerea unei anumite ncrcturi electrice a celulelor bacteriene). Studiul acestor
glicoconjugate constituie obiectul glicomicii bacteriene (Reid i colab., 2010) (fig. 34).

Fig. 34. Diversitatea glicomului bacterian: (A) Bacterii Gram-negative (1) precursori glucidici complexai cu nucleotide; (2) peptidoglican; (3)
Glicoproteine N-linkate; (4) LPS/LOS; (5) polizaharide extracelulare; (6) polizaharide capsulare; (7) proteine glicozilate O-linkate - Salmonella
enterica; (8) pilin - Neisseria gonorhoeae (B) Micobacterii (9) arabinogalactan (10) acizi micolici (11) lipomannan and (12) lipoarabinomannan.
(C) polizaharide capsulare, polizaharide extracelulare, PG (13) acid teichoic (14) acid lipoteichoic, IM: membrana intern; OM: membrana extern
(dup Reid i colab., 2010).

Cele mai comune adezine neproteice sunt polizaharidele care intr n structura unei reele de tip glicocalix, de tip
capsular sau a unei structuri neorganizate de tipul stratului mucos. Exopolizaharidele formeaz structuri capsulare la
multe bacterii patogene i au consisten de geluri hidratate. Ca factori de virulen, exopolizaharidele au dou roluri
majore:
a) aderena de substratul tisular. Dupa Gristina i colab. (l985), att suprafaa celulei bacteriene, ct i a substratului
tisular sunt polianionice. Sarcinile electrice asemntoare determin respingerea celulei bacteriene de ctre substratul
tisular. Forele de respingere sunt contracarate de forele de atracie London-van der Waals. Ele permit realizarea unor
interaciuni hidrofobe ntre moleculele suprafeei bacteriene i ale celulei gazd. Exopolizaharidele bacteriene intensific
interaciunile dintre liganzii bacterieni i tisulari. Astfel, esutul este acoperit de un biofilm, n care agregatul de celule
bacteriene, nconjurat de o matrice molecular, ader strns la substrat;
b) protecia celulei bacteriene fa de sistemele de aprare a gazdei. Capsula mpiedic fagocitoza pentru c bacteriile
capsulate formeaz microcolonii i nglobarea lor de ctre fagocite devine dificil. Cu ct suprafaa celulei bacteriene este
mai hidrofil, cu att este mai greu fagocitat. Pe de alt parte, complementul i anticorpii nu au acces la suprafaa celulei.
Unele specii bacteriene produc o capsul a crei compoziie chimic este asemntoare componentelor tisulare ale

25

organismului gazd infectat (de exemplu, capsula de la Str. pyogenes i Pasteurella multocida conin acid hialuronic.O
astfel de capsul camufleaz celula bacterian fa de sistemul imunitar).
Matricea molecular polizaharidic, cu structur fibroas favorizeaz creterea celulelor i stabilitatea biofilmului.
Stabilitatea biofilmului asigur formarea continu de microcolonii, persistena i extinderea infeciei cronice. Din structura
sa scap periodic celule bacteriene care trec n snge sau n lichidele tisulare adiacente, favoriznd extinderea infeciei.
Alte adezine sunt acizii lipoteichoici, caracteristici bacteriilor Gram pozitive, ancorai de glicolipidele
membranare. Sunt structuri moleculare filamentoase, foarte asemntoare fimbriilor, cu rol de aderen la substrat. La Str.
pyogenes, acizii lipoteichoici au efect sinergic cu proteina M.
Adezinele neproteice sunt mai puin eficiente n medierea proceselor de aderen bacterian, comparativ cu cele
proteice. Polizaharidele capsulare, n anumite cazuri favorizeaz aderena, iar alteori au efect invers (de exemplu,
polizaharidele mpiedic aderena celulelor de H. influenzae, N. meningitidis sau P. multocida tip A).
Receptori de adezine. Interaciunea dintre celula epitelial sensibil i adezinele bacteriene este mediat de receptorii
de adezine i se bazeaz pe principiul complementaritii spaiale.
Uneori, interaciunea este nespecific, ceea ce explic faptul c unele specii bacteriene (Salmonella, Yersinia)
infecteaz att celulele intestinale umane, ct i liniile celulare de Drosophila. Alteori, interaciunea are un grad nalt de
specificitate. De exemplu, Str. pyogenes se localizeaz la nivelul epiteliului faringian i foarte rar n tractul urinar, iar E.
coli colonizeaz epiteliul intestinal i al cilor urinare, dar foarte rar pe cel respirator.
Helicobacter pylori, un patogen specific uman, ader la celulele epiteliale ale mucoasei gastrice, dar nu la celulele
profunde ale mucoasei sau ale colonului. Pe celulele epiteliului, H. pylori recunoate antigenul de grup sanguin Lewis, dar
probabil i alte molecule, deoarece H. pylori infecteaz i indivizi negativi pentru acest antigen. Un factor esenial pentru
colonizare este ureaza, pe care H. pylori o produce n cantiti foarte mari. In vitro, celulele de H. pylori hidrolizeaz
ureea, elibernd amoniul care neutralizeaz aciditatea i permite colonizarea iniial. Amoniul generat prin hidroliza ureii
produce NH4OH care se disociaz i ionul OH- produce leziuni ale mucoasei.
Receptorii de adezine ai celulelor epiteliale sunt molecule din familia integrinelor, care ndeplinesc funcii
fiziologice importante: leag proteine plasmatice, dar i proteine din matricea extracelular (fibronectine, fibrinogen,
laminina, colagenul de tip I etc.).
Receptorii de adezine sunt molecule ale suprafeei celulei sau se gsesc la nivelul mucopolizaharidelor care
tapeteaz ntotdeauna epiteliile mucoase.
Din punct de vedere chimic, receptorii de adezine sunt glicoconjugate: glicoproteine ale membranei celulare sau
ale stratului mucopolizaharidic i glicolipide din structura membranei (fig. 35).

Fig. 35. Reprezentarea schematic a aderenei bacteriene la celula


gazd, mediat de adezine fimbriale sau afimbriale, prin intermediul
receptorilor de natur glicolipidic sau glicopeptidic (dup Nizet i
Esko, 2009).

Fig. 36. Evidenierea efectului anti-infecios al manano-oligozaharidelor


(MOS), analogi structurali ai receptorilor pentru fimbriile de tip I la
Salmonella (dup Moran, 2009).

Glicoproteinele i glicolipidele proemin la suprafaa membranei celulare i expun la exterior catene


oligozaharidice mai mult sau mai puin complexe, cu rol de receptori de adezine.
Glicoproteinele din stratul mucopolizaharidic sunt formate din catene polipeptidice legate prin puni S-S. Catena
oligozaharidic este format din N-acetil-galactozamin, N-acetil-glucozamin, fucoz, galactoz i acid sialic.
Glicoproteinele din mucus se gsesc i n secreii (salivar, digestive).
Glicoproteinele membranare se deosebesc de cele din mucus: N-acetil-galactozamina lipsete, locul ei fiind luat
de manoza i de acizii uronici. Catenele glicoproteice ale mucopolizaharidelor i ale suprafeei celulare sunt asemntoare

26

cu cele ce se gsesc pe suprafaa eritrocitelor i formeaz antigenele de grup sanguin. Aa se explic proprietile
hemaglutinante pe care le posed anumite adezine bacteriene, dac receptorul lor celular se gsete pe hematii.
Glicoconjugatele pot avea rol de receptori pentru toxine. De exemplu, glicolipidul GM 1, prin componenta sa
oligozaharidic este receptor specific al toxinei holerice.
Detectarea localizrii receptorilor glicoproteici i glicolipidici pe suprafaa celulei este posibil prin utilizarea
lectinelor. Lectinele sunt glicoproteine ce se leag specific cu un rest oligozaharidic. Lectinele cuplate cu un derivat
fluorescent sunt utilizate pentru a studia repartiia receptorilor suprafeei celulare.
Modularea expresiei proprietilor de aderen se poate face, teoretic, pe mai multe ci:
- prin blocarea receptorilor celulari cu analogi structurali ai adezinei bacteriene. De exemplu, aderena streptococilor
poate fi inhibat in vitro, dac la mediul de reacie se adaug acid lipoteichoic, analogul structural al adezinelor
acestor bacterii;
- prin utilizarea analogilor structurali ai receptorilor celulari. D-manoza, adugat n mediul de reacie inhib
aderena S. typhimurium i Sh. flexneri la eritrocitele de cobai. Bacteriile poart fimbrii de tip I, ai cror receptori
celulari sunt glicoproteine cu manoz (fig. 36);
- blocarea parial sau total a adezinei cu anticorpi specifici este considerat ca o modalitate eficient de protecie.
Astfel, starea imunitar postvaccinal sau consecutiv unei infecii, asigur o protecie bun fa de o infecie
ulterioar cu acelai agent sau cu ali ageni care au adezine comune;
- utilizarea antibioticelor la doze subinhibitorii este o modalitate de a modifica expresia adezinelor. Dozele
subinhibitorii blocheaz, parial sau total, biosinteza unor constitueni ai suprafeei celulare, antrennd i modificri
ale anumitor proprieti, inclusiv a celor de aderen.
Receptorii celulari de adezine se modific, att cantitativ, ct i calitativ.
Modificrile receptorilor celulei gazd pot favoriza aderena i invazia tisular. Un exemplu este infecia sever
produs de Str. pneumoniae, care determin infecii clinice (pneumonie, otit medie, septicemie).
Sensibilitatea la infecie crete foarte mult consecutiv unei infecii virale a tractului respirator. Citokinele gazdei
activeaz receptorul pentru PAF (platelet activating factor), pe suprafaa celulelor epiteliului pulmonar.
Pneumococii ambelor tipuri de colonii (transparente i opace) ader la suprafaa celulei pulmonare, dar cei ce produc
colonii transparente invadeaz circulaia sistemic prin capilarele pulmonare ori prin vasele limfatice.
Astfel se explic predispoziia pacienilor infectai cu un virus al tractului respirator la complicaiile consecutive
pneumoniei cu Str. pneumoniae (meningit, septicemie).
Interaciunea unui patogen cu celula gazd nu este mediat ntotdeauna de receptori celulari. Adeseori, bacteriile
patogene activeaz cile de semnalizare ale celulei, direct prin componentele celulare sau prin intermediul citokinelor
inflamatorii.
4.2.2. Biofilmele microbiene
Aderena la un substrat reprezint o etap iniial a formrii biofilmului microbian.
Biofilmul este o comunitate microbian sesil alctuit din celule ataate ireversibil la un substrat, la o interfa
sau ntre ele, ncorporate ntr-o matrice de substane polimerice extracelulare pe care le-au produs i manifest un
fenotip modificat cu privire la rata de cretere i de transcriere a genelor (Donland i Costerton, 2002).
Etapele formrii unui biofilm. Pentru a forma biofilmul, bacteriile trebuie s adere la un substrat. Condiia iniial
este deplasarea microorganismelor din mediu la suprafaa substratului, care se poate realiza prin trei mecanisme:
- prin difuziune consecina micrii browniene a celulelor bacteriene - asigur deplasarea lent ntr-un mediu
staionar, ca i n cursul procesului de sedimentare, n care poate reprezenta singurul mod de contact al
microorganismelor cu diferite substraturi;
- prin cureni de convecie, asociat cu circulaia lichidului n care sunt suspendate, poate asigura un transport cu
cteva ordine de mrime mai rapid dect cel precedent;
- micarea activ, cea mai rapid, poate duce la contacte ntmpltoare sau orientate chimiotactic n cazul existenei
unui gradient chimic n regiunea interfacial.
n condiii naturale, orice suprafa iniial ,,curat, este acoperit n scurt timp de molecule adsorbite, n general, de
natur proteic. nc din faza n care se gsesc la oarecare distan de substrat, microorganismele sunt expuse forelor
generale fizico-chimice. Aderena la substrat este iniial reversibil, n sensul unei depuneri pe suprafaa suport, cu
meninerea n continuare a micrii browniene i flagelare i cu posibilitatea de ndeprtare prin agitare uoar sau chiar
prin propria mobilitate. Un rol important n procesul de aderen au att interaciunile London-van der Waals, care sunt de
regul atractive, tensiunea superficial *, legturile covalente, ct i forele electrostatice de respingere. n mediile naturale,
datorit structurilor nveliului celular, att bacteriile Gram-negative ct i cele Gram-pozitive sunt ncrcate

27

electronegativ. Energia potenial rezultat din interaciunea lor este variabil i n funcie de concentraia electroliilor
determin comportarea bacteriilor n raport cu substratul.
*Tensiunea superficial se manifest la nivelul suprafeei de separare dintre un lichid i un gaz (sau dintre dou lichide nemiscibile).
Suprafaa lichidului se comport ca o membran elastic, ce tinde s se contracte i s se micoreze la minimum posibil. Tensiunea superficial este o
for rezultant a atraciilor din interior i exterior, exercitate asupra moleculelor din stratul de separare lichid-gaz sau lichid-lichid.

Etapa de legare ireversibil sau permanent este caracterizat prin ncetarea micrii browniene i prin
posibilitatea ndeprtrii bacteriilor aderente numai sub aciunea unor fore puternice de agitare. Aderena este favorizat
de prezena polizaharidelor extracelulare i a glicoproteinelor preformate sau sintetizate de novo pe suprafaa celulei care
ader. Fenomenul explic tendina superioar de aderen la substrat, a bacteriilor n faza exponenial de cretere,
comparativ cu cele aflate n faza staionar, mbtrnite sau moarte (fig. 37).

Fig. 37. Prezentarea corelaiilor dintre densitatea bacterian, faza de cretere a unei culturi asincrone, n sistem discontinuu, i etapele formrii
biofilmului microbian (dup Costerton i colab., 1999).

Dup legarea ferm, bacteriile ncep s creasc i s se multiplice rapid. Celulele legate ireversibil de substrat, dar
nu i ntre ele, formeaz un strat continuu monocelular care acoper toat suprafaa expus a substratului. Celulele legate
att de substrat, ct i ntre ele formeaz microcolonii i biofilme. Ulterior, biofilmele rezultate din creterea
pluristratificat a bacteriilor pot fi colonizate i de alte specii incapabile, per se, s colonizeze suprafee strine, care pot
contribui la organizarea mai complex a biofilmului. Se adaug, uneori, cantiti importante de polimeri specifici cu
structur reticulat sau fibrilar, care ancoreaz suplimentar celulele de substrat i unele de altele (fig. 38).

28

Fig. 38. Diagram prezentnd etapele dezvoltrii unui biofilm de Ps. aeruginosa 1. Ataarea iniial, reversibil, a celulelor la substrat. 2. Sinteza
exopolizaharidelor care determin ataarea ireversibil. 3. Formarea microcoloniilor. 4. Maturarea arhitecturii biofilmului. 5. Dispersia celulelor din
biofilm (Dup Caiazza i colab., 2007, http://www.dartmouth.edu/~gotoole/swarm.html).

Cnd biofilmul devine suficient de gros, straturile profunde devin anoxice i conin predominant specii anaerobe.
Mai devreme sau mai trziu, cel puin celulele de la baza sistemului devin nfometate i mor. Anoxia, moartea multor
celule i producerea de gaze pot destabiliza biofilmul, determinnd detaarea i desprinderea lui de suprafeele solide.
Creterea poate fi reluat avnd un caracter ciclic (Zarnea, 1994).

Fig. 39. Modaliti de desprindere a celulelor din biofilm (dup Costerton i colab., 1999)

Proprietile biofilmelor
Biofilmele bacteriene sunt foarte heterogene n ceea ce privete structura, fiziologia, ecologia i parametrii fizicochimici.
Arhitectura biofilmelor este heterogen att n spaiu ct i n timp, schimbndu-se constant datorit aciunii unor
factori interni i externi. Tolker-Nielsen i colab. au studiat rolul motilitii celulare asupra arhitecturii biofilmului,
examinnd interaciile dintre Ps. aeruginosa i Ps. putida prin microscopie confocal de baleiaj cu raze laser. Cocultivarea
celor dou organisme ntr-un sistem de cretere continu, a avut iniial ca rezultat formarea unor mici microcolonii ale
fiecrei specii, ns n timp coloniile au devenit mixte, datorit migrrii celulelor de la o microcolonie la alta.
Biofilmele sunt dinamice din punct de vedere funcional i rspund la schimbarea condiiilor mediului. Celulele
bacteriene pot fi diseminate din biofilm prin eliberarea celulelor rezultate din diviziune, prin dispersie datorit
gradientului concentraiei nutrienilor, procesului de quorum sensing, sau prin diseminare n agregate, datorit curenilor
de curgere. Agregatele celulare pstreaz sensibilitatea sczut fa de substanele antimicrobiene, caracteristic
biofilmului. Biofilmele pot de asemenea, s migreze pe suprafee prin modaliti foarte variate (fig. 39, 40).

Fig. 40. Modaliti posibile de deplasare a biofilmelor: deplasare colectiv prin unduire sau rostogolire pe suprafa; prin detaare; deplasare
individual prin diseminare (dup Dircks, 2003).

Expresia genic este diferit la bacteriile incluse n biofilm fa de cele planctonice. Brzel i colab. (1995, citai
de Stoodley, 2002) au evaluat schimbrile expresiei genice la celulele ataate de Ps. aeruginosa i au artat c n timpul
diferitelor etape ale aderenei, nivelul de expresie a peste 70 de gene s-a modificat.
Sauer i colab.(2002) au artat c biofilmele mature de Ps. aeruginosa prezint un profil proteic radical diferit de
acela al bacteriilor planctonice crescute n chemostat. Aproximativ 50% din proteomul detectat (peste 800 de proteine)

29

prezint diferene de expresie de ase ori mai mari sau chiar mai mult. Dintre acestea, peste 300 de proteine au fost
detectate n eantioanele de biofilm matur, dar nu la bacteriile planctonice.
Printre genele exprimate la un nivel nalt n celulele biofilmelor mature sunt cele care codific proteine implicate
n traducerea mesagerilor, n metabolism, n transportul membranar i/sau n secreie i reglarea genic.
Celulele biofilmului i coordoneaz comportamentul prin molecule pentru semnalizare destinate comunicrii
intercelulare. Comunicarea intercelular este un aspect esenial al convieuirii ntr-o comunitate bacterian i este mediat
prin semnale chimice denumite i feromoni bacterieni sau autoinductori. Exist dovezi c unele semnale chimice,
produse de ctre celule i eliminate n mediul extern, pot fi interpretate nu doar de membrii aceleiai specii, ci i de alte
specii microbiene i poate chiar de organisme mai complexe (comunicare inter-regn).
n populaiile planctonice, semnalele chimice produse de celule nu sunt suficient de concentrate pentru a determina
schimbri n expresia genic. Totui, n biofilme, matricea care susine celulele n strns proximitate permite acumularea
moleculelor de semnalizare n concentraii suficiente pentru a determina schimbri coordonate n comportamentul celular.
Populaiile bacteriene i activeaz unele gene numai atunci cnd recepioneaz stimulii chimici care semnaleaz c populaia lor
este destul de numeroas pentru a fi avantajos i/sau sigur s iniieze schimbarea unei activiti genice. De exemplu, unele
bacterii patogene nu vor produce toxine pn la atingerea unei densiti adecvate pentru a supravieui mecanismelor de aprare a
gazdei. Modalitatea de recunoatere a densitii celulare a unei populaii prin mecanisme de semnalizare chimic intercelular a
fost denumit quorum sensing and response (QS).
QS este un sistem de reglare ubiquitar n lumea bacteriilor, care prezint dou componente implicate n
transducia semnalului: o component proteic receptoare (senzor), cu un domeniu extracelular care recepioneaz
semnalele extracelulare i un domeniu intracelular cu aciune enzimatic de histidin-kinaz, localizat membranar; o
component proteic reglatoare (efector), localizat n citoplasm, cu rol activator sau represor al transcrierii genice,
prin modificarea conformaiei specifice a ADN sau prin interaciune cu ARN- polimeraza .
Fiecare celul dintr-o populaie bacterian
produce o anumit cantitate de feromon
(autoinductor) care se acumuleaz pe msura
creterii densitii celulare. La atingerea strii de
quorum bacterian, feromonii (denumii n acest
caz factori de quorum) vor atinge concentraia
prag necesar pentru a interaciona cu proteine
receptoare (senzor). Sub influena feromonilor,
proteina-senzor se activeaz printr-un proces de
autofosforilare. Proteina efectoare activat prin
fosforilarea
domeniului
aminoterminal
va
interaciona direct cu ADN bacterian, modulnd
activitatea anumitor gene.
Cel mai studiat sistem de comunicare interbacterian, prin intermediul feromonilor, este sistemul
homoserin-lactonelor (HL) i al derivailor lor, funcional la bacteriile Gram-negative.
Sistemele QS, la bacteriile Gram- pozitive, implic semnale chimice diferite de HL. Unele specii de
Streptomyces sintetizeaz compui difuzibili similari autoinductorilor, denumii generic, butanolide, care intervin
n reglarea producerii antibioticelor i a metaboliilor generai n faza staionar. Cel puin dou peptide secretate
de B. subtilis sunt necesare pentru inducerea strii de competen i sporulare. La S. aureus un singur octapeptid
este suficient pentru declanarea expresiei coordonate a mai multor factori de virulen. Feromonii oligopeptidici
sunt necesari i pentru transferul conjugativ la Enterococcus faecalis. Sporularea la Myxococcus xanthus necesit,
de asemenea, integrarea unor semnale extracelulare, dintre care cel puin unul este constituit din aminoacizi.
Primul sistem QS a fost evideniat la bacteriile luminiscente (Vibrio fischeri, Vibrio harveyi, Photobacterium sp.)
care triesc n simbioz n organele luminoase ale unor specii de peti marini de mare adncime i ale diferitelor specii de
molute. Aceste bacterii produc lumin (prin activarea genelor ce codific luciferaza) numai n stare simbiotic. n stare
liber, cnd densitatea bacterian este sczut, bacteriile nu produc luciferaz. Aceleai bacterii, cultivate n condiii de
laborator, la atingerea unei densiti critice, i activeaz genele pentru luciferaz, consecina fiind creterea brusc de
circa 100 de ori a cantitii de lumin eliberate de fiecare celul. Prin adugarea la o cultur bacterian cu densitate mic a
unui supernatant de cultur bacterian cu densitate mare, celulele i-au activat genele pentru luciferaz, demonstrndu-se
astfel reglarea acestui proces fiziologic prin intermediul unui factor solubil (feromon) ce se acumuleaz n mediul de
cultur pe msura creterii densitii culturii bacteriene. Aceste observaii explic de ce bacteriile luminescente nu pot
produce lumin atunci cnd triesc n stare liber i la densiti sczute n mediul marin. n schimb, n condiiile simbiozei

30

cu organele luminoase ale organismelor superioare, aceleai specii bacteriene supuse unor condiii favorabile de cretere i
n acelai timp, unei restricii spaiale, pot atinge densiti celulare mult mai mari, necesare induciei feromonilor
bacterieni.
Rolul feromonilor nu se limiteaz numai la controlul bioluminiscenei, ci i al altor procese fiziologice extrem de
variate: (i) expresia coordonat a anumitor factori de virulen de ctre bacteriile patogene sau oportuniste ca rspuns la
contactul cu celulele eucariote ale gazdei sensibile, inclusiv formarea biofilmelor mature, care implic procese de
difereniere a celulelor incluse n biofilm (fig. 41), (ii) inducerea competenei pentru procesul de transformare
bacterian, (iii) sporularea, (iv) transferul plasmidelor conjugative, (v) procese metabolice dependente de densitatea
celular, (vi) biosinteza antibioticelor, (vii) motilitatea (twitching, swarming, swirming).

Fig. 41. Ilustrarea rolului mecanismului de quorum sensing n formarea biofilmului de ctre o specie Gram-negativ. Dei celulele
planctonice secret semnale chimice (HSL - homoserin lactone), concentraia sczut a moleculelor de semnalizare nu modific expresia genic. n
biofilm densitatea celular este mare, astfel nct HSL secretate ating concentraii mai mari. Moleculele HSL sunt recepionate de celulele din
biofilm i determin schimbri n activitatea genetic a celulei (dup Costerton i Dircks, 2004).

Deoarece unul dintre cele mai importante roluri ale mecanismelor de QS, att la bacteriile Gram-negative,
ct i la cele Gram-pozitive, este reprezentat de reglarea expresiei coordonate a factorilor de virulen i evitarea
mecanismelor de aprare antiinfecioase ale gazdei, n prezent aceste mecanisme reprezint inta dezvoltrii unor
noi strategii anti-patogenice, bazate pe blocarea mecanismelor de semnalizare intercelular la diferite niveluri
(blocarea sintezei moleculelor de semnalizare prin administrarea unor analogi ai acestora, inhibarea propagrii
semnalului mediat de feromoni prin diminuarea concentraiei extracelulare a acestora, inhibarea recepionrii semnalelor
prin utilizarea unor molecule competitive (cu structur asemntoare feromonilor bacterieni) sau necompetitive (cu
structur chimic diferit) capabile s interfere cu legarea moleculelor de semnalizare la proteina senzor sau cu
transmiterea semnalului la proteina reglatoare.
Una dintre cele mai importante consecine ale formrii biofilmelor este rezistena crescut a celulelor incluse
n biofilm, att la mecanismele de aprare ale gazdei ct i la dozele convenionale de antibiotice i biocizi, celulele
manifestnd proprietatea de rezisten fa de substanele antimicrobiene. Mecanismul proteciei sau rezistenei la factorii
antimicrobieni, pentru care termenul mai corect ar fi toleran sau rezisten fenotipic (foarte diferit de rezistena propriuzis la antibiotice, determinat genetic) este subiectul unor dezbateri curente.
Pentru a explica mecanismele rezistenei fenotipice (comportamentale) sau a rezistenei celulelor incluse n
biofilme la substane antimicrobiene, au fost emise mai multe ipoteze, care au formulat factorii determinani ai rezistenei
comportamentale, diferii de factorii genetici de rezisten (fig. 42):
- aderena la substrat i agregarea bacteriilor ntre ele;
- exopolimerii secretai care protejeaz celulele; aceast ipotez, formulat adesea n trecut, conform creia structura
mucoid ar constitui o barier de difuzie fa de moleculele antimicrobiene, este respins azi de unii autori;
- enzimele degradative, fie provenind de la o singur specie i acumulate n concentraii mari, fie, provenind de la
specii difertie i acionnd sinergic;
- aderena celular nsi determin modificri fiziologice (intrarea n stare de laten metabolic a celulelor din
straturile profunde ale biofilmului, subexprimarea porinelor, supraexprimarea pompelor de eflux) care explic
fenomenul de rezisten a microorganismelor din biofilme.

31

Fig. 42. Mecanismele rezistenei biofilmelor la antibiotice: i) permeabilitatea redus a matricei biofilmului pentru antibiotice, care acioneaz doar la
nivelul straturilor superficiale; activitate redus a antibioticelor datorit condiiilor locale (reziduuri microbiene, pH, pCO 2, pO2 etc); distrugerera
antibioticului de ctre enzimele inactivatoare acumulate n interiorul biofilmului; rata de cretere redus a celulelor din biofilm (populaie persister);
eliminarea activ a antibioticului prin intermediul pompelor de eflux exprimate de celulele crescute n biofilm; activarea rspunsului la stres care se
manifest prin supra-exprimarea unor mecanisme de rezisten la antibiotice (de exemplu, enzime inactivatoare) (dup Pozo i Patel, 2007).

Biofilmele microbiene sunt implicate n generarea infeciilor cronice, persistente, greu de tratat, consecutiv
formrii biofilmelor pe esuturi (endocadita valvular, otita medie, fibroza chistic, prostatita bacterian cronic,
periodontita) sau pe dispozitive medicale (valve cardiace artificiale (protetice), catetere centrale venoase, catetere urinare,
lentile de contact, dispozitive intrauterine) (fig. 43).

Fig. 43. Interaciunea unui biofilm microbian cu efectorii imunitari ai gazdei. Bacteriile planctonice pot fi eliminate de anticorpi i fagocite i sunt
sensibile la antibiotice. b. Celulele bacteriene aderate formeaz biofilme, preferenial pe suprafee inerte. Comunitile sesile sunt rezistente la
anticorpi, fagocite i antibiotice. c. Fagocitele sunt atrase de biofilme. Biofilmul nu poate fi fagocitat, dar fagocitele i elibereaz enzimele
lizosomale n mediul extracelular. d. Enzimele fagocitelor lezeaz esutul din jurul biofilmului i celulele planctonice sunt eliberate din biofilm.
Eliberarea lor poate determina diseminarea i infecia acut n esutul nvecinat (dup Costerton et al., 1999).

4.3. Sideroforii factori de virulen


Fierul, dei este al IV-lea metal al planetei din punct de vedere cantitativ, se gsete majoritar sub forma
hidroxizilor insolubili. Fe este substana mineral esenial pentru toate celulele eucariote i procariote, dar este toxic n
concentraie mare. n cele mai multe habitate Fe 2+ este instabil, fiind oxidat la Fe3+, fie spontan prin reacia cu O2
molecular, fie pe cale enzimatic, n reaciile metabolice. n mediile naturale, n prezena O 2 i a H2O, la pH neutru i
alcalin, Fe3+ formeaz oxidul feric hidratat (Fe 2O3. nH2O) sau este legat de ageni chelatori (compui chimici n care un
ion metalic multivalent este captat, sechestrat i legat n structura ciclic a agentului chelator). n organismul uman i
animal, Fe este legat stabil de diferite proteine: hemoproteinele (hemoglobina, mioglobina) leag circa 2/3 din cantitatea
total de Fe, n hem.

32

Multiplicarea bacteriilor n esuturile gazdei este limitat de mecanismele de aprare ale gazdei i este
condiionat de capacitatea de a-i obine nutrienii. Bacteriile necesit prezena obligatorie a Fe 2+ (forma accesibil
metabolismului), cu excepia lactobacililor. Fe2+ se gsete n structura chimic a tuturor tipurilor de celule.
Fe este un component al moleculelor eseniale (citocromi, ribonucleotid-reductaza etc.), fiind necesar desfurrii
unor variate reacii enzimatice, eseniale pentru cretere: replicarea ADN, transferul electronilor, metabolismul oxigenului,
peroxidului i radicalului superoxid (SOD este o enzim cu Fe); Fe 2+ este un cofactor de sine stttor sau parte a unui grup
prostetic, n special de tip hem, ca un component esenial al catenei de transport al electronilor n membrana celular.
Fierul poate fi defavorabil pentru metabolismul bacterian: radicalii liberi OH . generai n reaciile Haber-Weiss,
catalizate de Fe, se pot acumula, consecina fiind moartea celulei. De aceea, sechestrarea, mobilizarea i depozitarea Fe
ntr-o form netoxic, biodisponibil, este foarte important pentru celul. S-au identificat dou tipuri de proteine de
depozit al Fe: bacterioferitina (depoziteaz Fe hemic i nehemic) i feritina (depoziteaz numai Fe nehemic).
Fe are nu numai un rol fiziologic deosebit, dar multe bacterii l utilizeaz pentru activarea unor factori de
virulen: toxine, adezine, invazine.
n mediile naturale, ca i n organismul uman i animal, Fe se gsete n cantiti suficient de mari pentru a asigura
creterea microorganismelor, dar este n forme inaccesibile. Astfel, concentraia normal a Fe n plasma mamiferelor (mai
mic de l0 M) este satisfctoare pentru creterea i multiplicarea bacteriilor, dar numeroi factori l fac inaccesibil
microorganismelor. Practic, Fe disponibil lipsete, deoarece este chelat de proteine care-l leag cu mare afinitate sau este
component al eritrocitelor. Un deficit parial al Fe are efect bacteriostatic, iar deficitul major are efecte letale, prin inhibiia
sintezei proteinelor. Fe anorganic este insolubil n aerobioz la pH fiziologic.
De aceea, sinteza componentelor celulare care utilizeaz Fe este controlat prin diferii parametri, care acioneaz
n diferite condiii fiziologice i de mediu, n sens negativ (n condiiile excesului de Fe n mediu) sau n sens pozitiv (n
condiiile limitante ale Fe). Concentraiile mari ale Fe duc la stoparea expresiei multor gene implicate n nglobare. n
condiiile limitrii Fe, intr n aciune mecanismele reglatoare pozitive.
n organismul uman i animal, Fe este legat n complexe organice cu proteine intracelulare (feritina,
hemosiderina, gruparea hem din hemoglobin sau din mioglobin), cu glicoproteine extracelulare (lactoferina din secreii
- lapte, saliv, lacrimi), precum i cu transferina din snge i limf.
*

Cea mai mare parte a transferinei se sintetizeaz n ficat i este eliberat n fluidele organismului. Ea leag Fe feric la
locul absorbiei i-l transport la locul utilizrii. Celulele mamaliene regleaz concentraia Fe intracelular, prin intermediul
a dou proteine:
- o protein de import al Fe, cu rol de receptor de transferin;
- o protein de depozit al Fe, reprezentat de feritina.
Transferina ptrunde n celul prin intermediul receptorului membranar specific. Dup ce celula import transferina,
Fe este ncorporat n proteinele celulare (citocromi etc.), iar excesul este depozitat ca feritin. Cnd celula necesit o
cantitate mai mare de Fe, crete densitatea receptorului de transferin i astfel celula preia o cantitate mai mare de Fe din
mediul extracelular i reduce concentraia de feritin.
Dac Fe se acumuleaz n exces n celul, scade densitatea receptorilor de transferin i crete cantitatea de feritin.
n plasm, hemoglobina (Hbg) este complexat cu alte proteine ca haptoglobina *, iar cantiti mici de hem pot fi legate
de albumin sau de hemopexin. Fierul intracelular poate fi asociat cu Hbg, transferina sau cu lactoferina sau este
depozitat sub forma feritinei.
*

Haptoglobina este o protein din setul reactanilor de faz acut. Se sintetizeaz n ficat i are rolul de a ndeprta hemoglobina liber, rezultat
prin hemoliza intravascular. Se formeaz un complex stabil, ireversibil, care este epurat rapid de hepatocite. Dup leziunea tisular, haptoglobina
crete de 2-4 ori i se gsete n exudatul inflamator. Nivelul sczut de haptoglobin are semnificaie clinic dup vrsta de un an i se poate datora
insuficienei hepatice, dar la majoritatea pacienilor, cauza este hemoliza intravascular i rata rapid de clearance a complexelor haptoglobinhemoglobin. Nu exist o corelare cantitativ ntre nivelul haptoglobinei plasmatice i amploarea hemolizei, deoarece chiar o hemoliz minor
diminueaz masiv cantitatea de haptoglobin. Dac pacientul este n faza acut a unui proces infecios sau inflamator de alt natur, nivelul normal
al haptoglobinei nu exclude diagnosticul de hemoliz.

Lactoferina face parte din familia transferinei. Este sintetizat de celulele fagocitare i de hepatocite. n stare
liber se gsete n secreii (lapte, lacrimi, saliv, secreia mucoas care tapeteaz epiteliile). Neutrofilele elibereaz
lactoferina n situsul inflamator. Identitatea secvenei aminoacizilor dintre lactoferin i transferin este de 60%.
Proteinele care leag Fe au afinitate nalt, au constante nalte de legare, de aproximativ 10 36 i n mod normal
sunt parial saturate. De exemplu, feritina leag circa 4500 atomi de Fe 3+/molecul, iar transferina*, proteina major de
transport a Fe n plasma sanguin, este saturat n proporie de 30%.
Transferina i lactoferina conin 2 situsuri de
legare a Fe/molecul. Homeostazia Fe controlat riguros, are ca rezultat o concentraie sczut a Fe biodisponibil liber n

33

plasm, de circa 10-24M, de cteva ori mai mic dect nivelul necesar creterii normale a bacteriilor. De aceea, organismele
patogene sunt strict limitate n privina dobndirii Fe.
Rolul Fe n patogeneza infecioas a fost demonstrat experimental. Dup administrarea parenteral a Fe la cobai,
sensibilitatea la infecia cu K. pneumoniae a crescut dramatic, ceea ce demonstreaz rolul aprovizionrii cu Fe asupra
patogenezei bacteriilor. De aceea, serul sanguin uman este bacteriostatic.
n timpul evoluiei, cantitatea restrictiv de Fe disponibil a creat mecanisme specializate pentru utilizarea
resurselor de Fe, prin contact direct sau indirect. Bacteriile i-au elaborat mecanisme adaptative prin care mobilizeaz Fe
i l disponibilizeaz pentru activitile celulei. Bacteriile preiau Fe din transferin, lactoferin, hemoglobin i din
complexele hemoglobin-haptoglobin, air cele cu localizare intracelular din rezerva celulei.
L. monocytogenes produce un reductor al Fe3+ la Fe2+ i astfel Fe este eliberat din glicoproteinele chelatoare
intracelulare.
Se recunosc dou mecanisme prin care bacteriile dobndesc Fe:
- mecanismul prelurii indirecte prin intermediul sideroforilor;
- mecanismul prelurii directe a Fe prin receptorii celulari care leag proteinele cu Fe.
Sideroforii sunt ageni chelatori sintetizai i secretai de microorganismele procariote i eucariote (i chiar de
plantele superioare), care intr n competiie pentru legarea Fe, cu proteinele gazdei care sechestreaz Fe. Denumirea
general a agenilor chelatori bacterieni este cea de siderofori. Sideroforii sunt molecule mici (600 Da), difuzibile,
secretate de multe microorganisme, n condiiile scderii concentraiei de Fe biodisponibil, care au n structura lor, grupri
caracteristice de tipul catechol, fenolat sau hidroxamat. Structura molecular caracteristic, definit funcional ca o cuc
molecular, are rolul de a lega Fe3+ (feric) din mediul extracelular. Sideroforii sunt secretai prin pompele de eflux ale
suprafamiliei MFS (major facilitator superfamily).

Structura ferocromului, exemplul tipic al unui siderofor de tip hidroxamat. R = R = R = H; R = CH3 (Neilands, 1995).

Structura enterobactinei ferice, exemplul tipic al unui siderofor de tip catechol (cele 3 inele catechol asigur legarea coordinativ a Fe) (Neilands,
1995).

Structura aerobactinei, exemplu tipic al unui siderofor de tip citrat-hidroxamat (Neilands, 1995).

Sinteza sideroforilor este catalizat de sintetaze neribosomale, un complex multienzimatic care activeaz i
asambleaz un spectru larg de aminoacizi, ceea ce are ca rezultat diversitatea structural nalt a peptidelor macrociclice.
Sideroforii secretai formeaz complexe stabile cu Fe 3+ extracelular.

34

Ulterior, complexul siderofor - Fe3+ este recunoscut de un receptor situat n membrana extern, dar nu poate trece
prin canalele membranei celulei bacteriene datorit dimensiunilor sale. Transferul membranar al Fe 3+ mediat de receptor,
este asociat cu reducerea lui la forma feroas (Fe 2+), iar sideroforul rmne la nivelul receptorului (fig. 45 a, b). La
bacteriile Gram pozitive, complexele Fe-siderofor sunt recunoscute selectiv de receptori membranari i transportate n
celul cu consumul ATP. n celul, complexul Fe-siderofor se disociaz prin hidroliza sideroforului i/reducerea ionului
feric la Fe2+ (feros), care este depozitat n bacterioferitin, utilizat ca un cofactor n cteva procese celulare vitale. Fe este
legat n centrul sideroforilor cu o afinitate echivalent celei de legare cu transferina.

Fig. 44a. Mecanismul prelurii Fe de ctre siderofori (Baron, 1996).

Fig. 44b. Ilustrarea mecanismului prin care sideroforii funcioneaz ca


mediatori ai cantitii de Fe disponibil
(//www.chem.duke.edu/~alc/labgroup/research).

Sideroforii se gsesc nu numai la bacteriile patogene, ci constituie mecanisme eficiente de preluare a Fe n tot
regnul procariotelor. n funcie de specie, ei sunt factori cu diferite grade de virulen. Sideroforii pot prelua ionii de Fe
chiar din compui minerali, ca hematita.
O modalitate frecvent de preluare a Fe este utilizarea xenosideroforilor, funcional la S. cerevisiae, adic
microorganismele preiau Fe din sideroforii sintetizai de alte microorganisme.
Fe intracelular poate fi obinut prin liza celulei gazd, mediat de citolizine sau hemolizine. Se elibereaz Fe,
hemul sau Hbg. Unele bacterii folosesc Fe din celulele care degenereaz la suprafaa epiteliilor mucoase.
S-a constatat c genele pentru aerobactin la Shigella sp. sunt represate in vivo, n interiorul macrofagelor. Totui,
unele bacterii intracelulare secret molecule siderofor-like capabile s penetreze vacuola, s se ncarce cu Fe din
citoplasm i s se ntoarc n vacuol. Vacuolele parazitare pot fuziona cu vezicule de exocitoz sau endocitoz care
conin Fe i l utilizeaz. Unii parazii (Toxoplasma) pot induce formarea porilor n membrana vacuolar, permind
moleculelor gazdei (care transport Fe) s ptrund n interiorul vacuolei.
Neisseria i Prevotella (Bacteroides) elimin proteaze specifice care degradeaz transferina i elibereaz Fe.
Mecanismele directe de preluare a Fe constau n nglobarea surselor de Fe (lactoferina, transferina, feritina, hemul
i/sau hemoproteinele). Dezavantajul este c mecanismele directe necesit existena receptorilor specifici pentru fiecare
surs de Fe, iar structura chimic a surselor este diferit de la un compartiment la altul al gazdei. Mecanismul de preluare
direct a Fe este propriu unor bacterii patogene care colonizeaz mucoasele (Neisseria sp., Bordetella sp., H. influenzae,
M. catarrhalis, Actinobacillus pleuropneumoniae). Ele nu secret siderofori, dar preiau Fe prin contactul selectiv ntre
componentele membranei externe, cu proteinele care leag Fe (transferina, lactoferina sau chiar hemoglobina). Neisseria
sp. i H. influenzae utilizeaz ca surse de Fe numai transferina i lactoferina uman, ceea ce ar explica specificitatea lor
pentru gazdele primate.
Receptorul pentru hemoglobin de la N. gonorrhoeae leag preferenial, dar nu exclusiv, hemoglobina uman, scoate
hemul i-l transfer n spaiul periplasmic. Printr-un mecanism necunoscut, este internalizat numai hemul, iar
hemoglobina rmne la exterior. n citoplasm, unele bacterii au enzime omologe oxigenazei hemice umane, care
degradeaz hemul la -biliverdin, cu eliberarea Fe i CO*.
*
Toxicitatea CO pentru om se atribuie afinitii nalte pentru toate proteinele ce conin Fe hemic, scznd capacitatea hemoglobinei de a lega O 2.
CO este inhibitor al enzimelor cu Fe nehemic, inclusiv hidrogenaza i nitrogenaza. Mamiferele produc CO endogen prin degradarea hemului. Hbg
discrimineaz ntre CO endogen i exogen. Fr discriminare, CO de origine endogen s-ar lega cu 20% din proteinele cu hem din organism.

4.4. Agresivitatea (Invazivitatea)

35

Puterea de invazie (agresivitatea sau invazivitatea) reprezint capacitatea agenilor patogeni de a depi prin
mecanisme specifice, barierele epiteliale, de a ptrunde n esuturile gazdei i de a se multiplica, producnd efecte
patologice. Microorganismele invazive au capacitatea de a ptrunde prin mijloace proprii n esuturile gazdei sau de a
stimula funcia endocitar a substratului i de a-i pstra viabilitatea n mediul gazdei (fig. 45).

Fig. 45. Biologia celular a procesului infecios indus de bacterii extra i intracelulare. a, b. Reorganizarea citoscheletului; c. Ptrunderea n
citoplasma celulei gazd prin endocitoz; d. Evitarea mecanismelor de aprare prin prezentarea antigenelor bacteriene asociate cu moleculele CMH,
modificarea expresiei genelor pentru molecule proinflamatorii (de exempu, NF-kB); e. Aciunea direct a moleculelor bacteriene injectate prin
mecanismul SST III asupra nucleului celulei gazd (dup Bhavsar et al., 2007).

Invazia este modalitatea prin care microorganismele infecioase sparg barierele epiteliale ale gazdei. Multe
bacterii patogene au capacitatea de a supravieui n interiorul celulei eucariote. Ele ptrund n celule care n mod obinuit
nu sunt fagocitare (celulele mucoase, celulele endoteliale ale vaselor sanguine). Mediul intracelular ofer protecie
microorganismului, care ori se multiplic ori persist.
n general, organismele invazive ader la celula gazd prin intermediul unei clase de molecule de adezine,
denumite invazine, care orienteaz intrarea bacteriei n celul. Mecanismele de aderen declaneaz sau stimuleaz
semnalele celulare, care direct sau indirect uureaz intrarea bacteriei. Invazia este un eveniment activ, susinut de
funciile normale ale celulei. Suportul procesului de invazie i nglobare este citoscheletul celulei gazd.
Puine specii bacteriene sunt capabile s foreze intrarea direct n celula gazd, printr-o digestie enzimatic local
a membranei celulei gazd, dup aderen. De exemplu, R. prowazecki secret fosfolipaze care produc degradarea
localizat i controlat a membranei celulei gazd. Prin leziunile membranare, agentul patogen intr direct n citoplasm.
n categoria invazinelor intr o categorie de proteine asociate suprafeei celulare, dar i apendicele celulare
evideniate la microscopul electronic (fimbrii i flageli) sau cele care constituie un strat fin, nalt organizat, pe suprafaa
celulei. Invazinele uureaz rspndirea bacteriilor n organism, dup fixarea i multiplicarea lor la poarta de intrare.
Flagelii ca organite de motilitate sunt n acelai timp invazine, deoarece confer un avantaj evident celulelor
bacteriene care trebuie s traverseze stratul vscos de mucus, pentru a ajunge la celulele epiteliale ale tractului digestiv sau
respirator.
Fimbriile, la bacteriile patogene, au rol de adezine bacteriene, dar n aceiai msur ele constituie i un factor de
agresivitate, deoarece confer un grad de protecie a celulei fa de factorii de aprare ai gazdei.
Unele invazine produc efect necrotic sau determin alte modificri care favorizeaz colonizarea tisular
progresiv. De exemplu, unele bacterii produc hialuronidaza i alte enzime care hidrolizeaz polimerii din substana
fundamental a esutului conjunctiv, favoriznd astfel invadarea vaselor sanguine i limfatice.
Agenii patogeni au elaborat strategii care le permit s invadeze suprafeele mucoase. Aderena selectiv de celulele M
este o modalitate eficient de invazie. Bacteriile i virusurile care utilizeaz calea de transport a celulelor M, pot infecta
mucoasa digestiv i se pot disemina sistemic.
Celulele M (Microfold), care acoper plcile Peyer reprezint o specializare local a epiteliului intestinal. Ele separ
foliculii limfoizi asociai epiteliului, de lumenul intestinal. Plcile Peyer, formate din foliculi limfoizi agregai, sunt
componenta major a sistemului imunitar al mucoaselor i au o funcionalitate precis: s exclud antigenele exogene,
nainte ca ele s ptrund n mediul intern i s evite sau s minimalizeze expunerea aparatului imunitar sistemic, la
antigenele moleculare sau celulare care tind s ptrund n mediul intern. n acelai timp, esutul limfoid asociat
mucoaselor trebuie s rmn insensibil la microbiota normal a mucoaselor. MALT are calitatea de zon de control a

36

organismului, la contactul cu antigenele, dar are i rol reglator asupra funcionalitii aparatului imunitar sistemic. Aa se
explic faptul c administrarea oral a unui antigen la om sau animale, n esen, nu produce un rspuns imun sistemic, ci
de obicei, un rspuns imun al mucoasei. Mecanismul nu este cunoscut, dar sistemul imunitar al mucoaselor mpiedic
rspunsul imun amplu al aparatului imunitar sistemic, dup contactul cu un numr foarte mare de antigene intestinale, n
special de origine alimentar. Antigenele complexe bacteriene sau virale pot iniia un rspuns imun complex, prin
intermediul aparatului imunitar al mucoaselor. Deficienele funcionale ale MALT expun organismul i aparatul imunitar
sistemic, unei permanente stri de activare, care depete limitele fiziologice, consecina fiind instalarea maladiilor
autoimune.
Celulele M acoper plcile Peyer i pinociteaz material luminal sub form solubil, pe care l transfer macrofagelor
subiacente. Macrofagele prelucreaz antigenele i le prezint limfocitelor adiacente. Celulele M sunt considerate ca un
sistem timpuriu de avertizare a sistemului imunitar. Ele sunt acoperite cu un strat mucos subire, microvili scuri, dar sunt
foarte active din punct de vedere al pinocitozei, comparativ cu celulele epiteliale columnare. Au puini lizosomi i
materialele nglobate nu sunt supuse degradrii. Dei celulele M au evoluat ca un sistem protector strategic, proprietile
lor funcionale le confer calitatea unor adevrate pori de intrare un clci al lui Achile al intestinului, deoarece
bacteriile patogene dobndesc acces spre structurile profunde.
Celulele M transport macromolecule, particule i microorganisme, direct n mediul celular al foliculilor limfoizi ai
mucoasei. Ele nu au receptori pentru imunoglobulinele polimerice, adic nu transfer IgA, ceea ce favorizeaz accesul
antigenelor la suprafaa mucoasei. Prin epiteliul folicular, microorganismele dobndesc acces la structurile limfoide ale
foliculului. Consecina este benefic, deoarece, astfel se iniiaz rspunsul imun protector fa de microorganismele
luminale. Din acest punct de vedere, celulele M formeaz un sistem de avertizare timpurie.
Celulele M ale foliculilor sunt specializate pentru transportul transepitelial. Suprafaa bazolateral a celulelor M este
intruzat profund, formnd un buzunar mare, intraepitelial, n care sunt eliberate particulele i macromoleculele
transportate. Celulele M au prelungiri bazale de circa 10 m, ce se extind n esutul limfoid subiacent i stabilesc contacte
directe cu celulele limfoide sau cu celulele prezentatoare de antigen. Celulele din pliul membranar al celulei M sunt
limfocite T CD4 cu receptor de tip , limfocite B i un numr mic de macrofage. Puine limfocite T sunt de memorie sau
neangajate (naive). Pliul celulei M este situsul interaciunii celulelor T, cu celulele ce prezint antigenul (limfocite B i
macrofage).
Sub celula epitelial M se gsete o populaie bogat de macrofage i celule dendritice, n raporturi spaiale strnse cu
limfocitele T CD4 i cu limfocitele B. Macrofagele i celulele dendritice au probabil rolul de a ngloba agenii patogeni
transportai de celulele M, de a prelucra i depozita antigenele.
Interaciunea agenilor patogeni cu celula M variaz larg, de la transportul simplu, pn la distrugerea celulelor
epiteliale foliculare. Virusurile care ader de celulele M declaneaz procesul de endocitoz, iar bacteriile modific
enzimatic suprafaa celulelor epiteliale M, induc semnalul declanator al internalizrii i altereaz bariera epitelial.
Ptrunderea virusurilor prin celulele M
Celulele M preiau virionii adereni i macromoleculele prin mecanismul endocitozei, pe calea veziculelor tapetate cu
clatrin. Materialele neaderente sunt preluate prin endocitoz n faza fluid, n vezicule tapetate sau netapetate cu clatrin.
Particulele mari aderente i bacteriile stimuleaz procesul de endocitoz, mediat de extensia prelungirilor celulare i
reorganizarea filamentelor de actin ale citoscheletului. Nu este cunoscut dac celulele M particip la prelucrarea i
prezentarea antigenelor.
Enterovirusurile ptrund n organism pe cale oral. Poliovirusul de tip I i tulpina Sabin atenuat ader selectiv de
celulele M i se multiplic n plcile Peyer, nainte de a se disemina sistemic. Deoarece poliovirusul depete bariera
intestinal prin celula M, i confer calitatea de vector al unor vaccinuri orale.
Transmiterea sexual a HIV se face pe cale vaginal sau anal. Infecia este uurat de leziunile epiteliale, dar HIV
poate traversa epiteliile simple i stratificate. In vivo, celulele epiteliale ale rectului se pot infecta, dar dovezile nu sunt
concludente pentru epiteliul vaginal.
n rectul uman, foliculii limfoizi sunt acoperii de celule M. Celulele M rmn o cale posibil de acces a HIV, la celulele
limfoide subiacente.
Ptrunderea microorganismelor la nivelul epiteliului folicular are i consecine nefavorabile, deoarece acesta poate fi
o cale de acces a microorganismelor patogene (S. typhi), la structurile submucoase.
Enterobacteriile au mecanisme proprii de invazie. Agenii patogeni enterici strpung bariera mucoasei intestinului
subtire, prin motilitate flagelar, la nivelul celulelor M.
Aderena bacteriilor de celulele eucariote necesit recunoaterea oligozaharidelor specifice ale glicoproteinelor. Faptul
este evideniat de rezultatele experimentale in vitro: oligozaharidele sunt cei mai puternici inhibitori ai interaciunii

37

bacteriilor cu suprafaa celulei eucariote. Celulele bacteriene interacioneaz cu celulele M, probabil, prin intermediul
glucidelor. Celulele M posed o diversitate de glicoconjugate, care moduleaz capacitatea lor de a prelua
microorganismele.
E. coli nepatogen din intestin nu ader selectiv la celulele epiteliale, dar anumite tulpini patogene colonizeaz
mucoasa i interacioneaz cu celulele M. Aderena la celulele epiteliului intestinal i la celulele M induce dezagregarea
microvililor i respectiv a pliurilor celulelor M, odat cu formarea la situsurile de aderen a unor structuri speciale,
denumite piedestale consecin a reorganizrii filamentelor de actin.
V. cholerae interacioneaz strns cu zone extinse ale membranei apicale ale celulei M. Semnalul activator induce
reorganizarea actinei submembranare i celula bacterian este fagocitat fr lezarea celulei M. nglobarea de ctre
celulele M nu produce maladia. Agentul patogen nu supravieuiete n mucoas i nu se disemineaz sistemic.
nglobarea vibrionilor de ctre celulele M activeaz un rspuns imun protector al mucoasei: secreia de sIgA antitoxin i anti-LPS, care pot preveni colonizarea mucoasei cu V. cholerae i implicit maladia diareic.
n intestinul subire, V. cholerae exprim un grup de adezine proteice prin intermediul crora ader de enterocite. Pilii
stabilizeaz coloniile pe suprafaa mucoasei, iar toxina choleric induce secreia ionilor de clor, din celulele intestinale n
lumen.
Ingestia celulelor de Salmonella induce formarea focarelor de infecie n plcile Peyer. S. typhi i S. typhimurium ader
rapid i selectiv de celulele M, dar poate invada direct prin epiteliul vilozitilor. Salmonella invadeaz enterocitele prin
mecanismul fagocitozei n vacuole mari, indus dup dezasamblarea microvililor i reorganizarea citoscheletului apical.
Experienele cu anse intestinale ligaturate au evideniat c dup 30 de minute de la injectare, Salmonella induce
creterea volumului celulelor M, nglobarea rapid a bacteriilor, urmat de degenerarea celulelor M i accesul celulelor
infecioase la structurile mucoasei.
Yersinia ptrunde n mucoasa intestinal pe calea celulelor M: ader preferenial la celulele M, este nglobat i
traverseaz citoplasma prin transcitoz.
Shigella, un patogen cu localizare intracelular facultativ, induce leziuni severe ale mucoasei intestinului i colonului,
nsoite de pierderea funciei de barier a epiteliului. Shigella ader de membrana plasmatic, este fagocitat i, dup
ruperea membranei fagosomului, este eliberat n citoplasm, unde bacteriile se multiplic, induc asamblarea unei cozi de
filamente de actin i sunt extruzate ntr-o vacuol de origine membranar, care este fagocitat ulterior de celulele
nvecinate.
Experienele cu enterocite intestinale, in vitro, au evideniat c S. flexneri nu invadeaz suprafaa apical dac
jonciunile epiteliale nguste sunt intacte. Invazia este posibil numai prin membrana bazolateral. In vivo, Shigella
invadeaz mucoasa, n primul rnd, pe calea celulelor M, urmat de invazia celulelor epiteliale prin suprafaa bazolateral.
Ulcerrile mucoasei au cea mai mare frecven n ileon i n colon, unde foliculii limfoizi i celulele M sunt mai numeroi.
4.5. Toxigenitatea
Toxigenitatea (toxigeneza) reprezint capacitatea unui agent patogen de a elabora n cursul creterii sale, una sau
mai multe substane toxice. Toxigeneza este o proprietate esenial a patogenitii bacteriene.
Sub denumirea de toxin sunt cuprinse toate substanele toxice de provenien biologic (sintetizate de bacterii,
fungi, celule vegetale sau animale). Termenul de toxin deriv din cuvntul grecesc toxicon, care nseamn otrav.
Unele sunt secretate de celulele bacteriene n cantiti foarte mici, fiind proteine cu aciune predominant enzimatic i
poart denumirea generic de exotoxine. Altele, de natur lipopolizaharidic (LPS), care nu au aciune enzimatic i sunt
biologic active la concentraii mult mai mari, aparin endotoxinelor. Se cunosc circa 140 de toxine proteice, din care 2/3
sunt produse de bacteriile Gram-pozitive, dar i de unele specii de bacterii Gram-negative (de exemplu, Ps. aeruginosa,
Sh. dysenteriae, V. cholerae, V. parahaemolyticus, E. coli). Unele specii bacteriene produc ntre 5 i l0 tipuri de toxine.
Clasificarea toxinelor bacteriene
Pentru a-i exercita efectul, toxinele trebuie s se elibereze din celule i s se solubilizeze n umorile
organismului. Dup sintez, toxinele pot rmne asociate permanent sau temporar cu celula sau sunt eliminate la exterior.
Aceste diferene sunt dependente, n primul rnd de specia productoare, precum i de fazele succesive ale evoluiei unei
populaii bacteriene: faza exponenial, staionar sau de declin. Chiar toxinele care n faza exponenial a culturii
bacteriene sunt asociate celulei, n faza de declin se gsesc libere n mediul extracelular datorit lizei celulelor. Din
aceast cauz, studiul raportului topologic ntre celul i toxin are semnificaie numai pentru faza de evoluie a culturii
bacteriene. Din acest punct de vedere se disting urmtoarele categorii de toxine:

38

a) Toxine localizate n celul (citoplasmatice) produse de bacterii Gram-negative (Sh. dysenteriae, Y. pestis, B.
pertusis, E. coli etc.) i Gram-pozitive (enterotoxina produs de Cl. perfringens, streptolizina S, pneumolizina produs de
Str. pneumoniae, o toxin sintetizat de Cl. difficile). Toate sunt de natur proteic. Sunt localizate n citoplasm sau sunt
asociate membranei citoplasmatice i pot fi eliberate dup ndeprtarea peretelui prin liz mecanic sau prin extracie
chimic.
b) Toxinele constitutive ale peretelui celular, produse numai de bacteriile Gram-negative i care corespund
endotoxinelor clasice. Sunt situate n afara membranei citoplasmatice i fac parte din structura membranei externe a
peretelui celular. Din punct de vedere chimic, endotoxinele sunt complexe glicolipidice sau glicolipoproteice. Ele nu sunt
niciodat eliberate n cursul fazei de cretere exponenial, ci numai prin dezagregarea peretelui celular.
c) Toxinele eliminate n mediul extern sau exotoxinele propriu-zise sunt de natur proteic i sunt produse mai
frecvent de bacteriile Gram-pozitive (toxina difteric, toxinele stafilococice, toxina de B. anthracis etc.), dar i de cele
Gram-negative (V. cholerae, Ps. aeruginosa). Exotoxinele ndeplinesc n mod obligatoriu, 3 condiii:
- se gsesc n mediul de cretere, independente de celula care le-a produs;
- eliberarea lor n mediul extracelular nu necesit autoliza celulei. Celula rmne viabil, continu s creasc i s se
multiplice;
- nu se acumuleaz n celul.
Aceste criterii se aplic celulelor n faza de cretere exponenial i staionar, deoarece n faza de declin, celulele
pot prezenta fenomene de autoliz, independente de sinteza toxinei.
d) Toxinele cu localizare mixt (endocelular i exocelular), n funcie de faza de evoluie a culturii bacteriene.
n faza exponenial, toxinele sunt secretate parial n mediu, dar o fracie semnificativ rmne n interiorul celulei i este
eliberat prin autoliz (toxinele tetanic, botulinic).
Mult timp s-a considerat c exotoxinele sunt de natur proteic, iar endotoxinele de natur lipopolizaharidic.
Aceast difereniere nu este net, deoarece unele toxine proteice aparin categoriei endotoxinelor, fiindc rmn asociate
celulei productoare i invers, uneori, toxinele de natur lipopolizaharidic sunt eliminate la exterior ca exotoxine. De
aceea, clasificarea toxinelor trebuie s se fac dup criteriul compoziiei chimice. Din acest punct de vedere, majoritatea
exotoxinelor sunt de natur proteic, iar endotoxinele de natur lipopolizaharidic.
Raynaud i Alouf (1970) au clasificat toxinele n raport cu compoziia chimic i cu localizarea celular.
Grupa I cuprinde toxinele proteice intracitoplasmatice ale bacteriilor Gram-negative, eliberate dup ruperea mecanic,
enzimatic, prin autoliza nveliurilor sau prin extracie chimic. Sunt sintetizate de B. pertussis, Sh dysenteriae
(neurotoxina), Y. pestis.
Grupa a II-a cuprinde toxinele lipopolizaharidice sau glico-lipo-peptidice (endotoxine), componente structurale ale
peretelui celular Gram-negativ.
Grupa a III-a cuprinde exotoxinele proteice propriu-zise, produse de V. cholerae, Cl. tetani, C. diphteriae.
Grupa a IV-a cuprinde toxinele proteice cu localizare intra- i extracelular, n cursul fazei logaritmice de cretere:
toxinele produse de Cl. tetani, Cl. botulinum, Cl. oedematiens, Cl. sordelii.
Din punctul de vedere exclusiv al compoziiei chimice, se disting:
1) Toxine proteice, reprezentate de exotoxinele produse de bacteriile Gram-pozitive i de toxinele proteice intracelulare
ale unor bacterii Gram-negative: B. pertussis, Y. pestis, Sh. dysenteriae (neurotoxina).
2) Toxine glico-lipo-polipeptidice, corespunztoare endotoxinelor.
n raport cu tropismul lor se disting: neurotoxine, enterotoxine, cardiotoxine, cu efecte limitate la esutul respectiv, sau
toxine pantrope, cu efecte asupra mai multor categorii de esuturi.
Determinismul genetic al sintezei toxinelor
Sinteza toxinelor bacteriene este codificat de gena tox, a crei localizare este cromosomal, plasmidial sau
fagic. La V. cholerae, subunitile toxinei holerice sunt codificate de gene cromosomale, asociate cu alte gene ce codific
ali factori de virulen. Astfel de grupe de gene de virulen se numesc insule de patogenitate. Secvena lor difer mult de
a altor gene cromosomale, ceea ce denot c ele sunt achiziii relativ recente n evoluie. Ar putea s aib originea prin
integrarea unui element genetic exogen fagul.
La Cl. botulinum, gena tox, cu situs cromosomal, prezint mai multe alele, care codific sinteza a 7 serotipuri de
toxina (notate A --- G), care nu dau reacie ncruciat semnificativ cu anticorpii obinui fa de una dintre ele.
Enterotoxinele i hemolizinele de E. coli, toxina dermo-exfoliativ stafilococic sunt codificate de gene
plasmidiale.
Gena tox, codificatoare a toxinei difterice este localizat n genomul unor bacteriofagi ADN (, P, 1, W).
Activitatea ei este controlat de o gen situat pe cromosomul bacterian.

39

Fagii purttori ai genei tox se gsesc n celulele de C. diphteriae n stare integrat (profag), de fag virulent
replicativ sau sub forma de replicon autonom represat. Este cunoscut modul de funcionare a genei tox, purtat de fagul ,
ce se integreaz ca profag. Ea se gsete aproape de situsul de inserie a genomului fagic n cromosomul bacterian, dar are
propriul su promotor i se poate exprima independent de alte gene fagice, dar poate fi represat fr s influeneze
biosinteza altor proteine fagice. Aceast gen nu pare a fi esenial pentru genomul fagic. Modificarea ei mutaional nu
influeneaz ciclul de multiplicare a fagului. Se consider c gena tox a acestui fag este de origine bacterian, mobilizat
prin procesul de transducie fagic.
Sinteza toxinei eritrogene streptococice (scarlatinoas), precum i a toxinelor botulinice C i D este codificat de
fagi temperai. La Cl. perfringens, toxigeneza este legat temporal de procesul sporulrii. Sporularea este o condiie
obligatorie, dar insuficient pentru producerea toxinei. Toxina pare a fi un produs al unei gene de sporulare i este o
protein de structur a tunicii sporale.
Cile secreiei proteinelor la bacteriile Gram-negative
Interaciunea bacteriilor patogene cu celulele gazd este caracterizat de factori localizai pe suprafaa bacteriei
sau secretai n spaiul extracelular.
Proteinele bacteriene secretate sunt numeroase, diferite structural i ndeplinesc o varietate larg de funcii:
proteoliza, hemoliza, citotoxicitatea, fosforilarea i defosforilarea proteinelor. Transportul acestor proteine din citoplasm
n spaiul extracelular se face pe mai multe ci.
Pentru bacteriile patogene, termenul de secreie (sau export) semnific transportul activ al proteinelor din
citoplasm, prin membran la exteriorul bacteriilor Gram pozitive i respectiv, n spaiul periplasmic la bacteriile Gramnegative.
Termenul de translocaie semnific transferul unei molecule care rmne la suprafaa celulei bacteriene,
n membrana citoplasmatic sau n stratul mureinic la bacteriile Gram-pozitive sau n membrana intern a bacteriilor
Gram-negative.
Secreia proteinelor urmeaz o cale comun la bacteriile Gram-pozitive i negative, cu implicarea cii generale de
secreie (calea Sec-dependent). Dup traversarea membranei citoplasmatice, proteinele translocate urmeaz ci diferite:
- la bacteriile Gram-pozitive, proteinele sunt fie eliberate n mediul extracelular, fie ncorporate n peretele celular;
- la bacteriile Gram-negative, proteinele translocate prin membrana intern sunt eliberate n spaiul periplasmic.
La bacteriile Gram-negative s-au descris 5 ci de secreie a proteinelor (I-V) (fig. 47-48).
Sistemele de secreie de tipul 1 (TOSS) sunt sec- independente, implicate n secreia hemolizinelor de E. coli,
hemolizinei cu funcie adenilat ciclazic (HlyA) i a hemaglutininei filamentoase (FHA) de la B. pertussis, a proteazelor
alcaline de la Ps. aeruginosa, a leucotoxinelor de la Pasteurela haemolytica, a metaloproteazei de Erwinia chrysantemum.
Secreia unei molecule prin TOSS nu necesit secven semnal, ns necesit 3-4 proteine accesorii care formeaz un
canal transmembranar prin care sunt transportate proteinele secretate. Genele care codific pentru proteinele accesorii au
secvene apropiate de genele codificatoare pentru moleculele secretate. Moleculele accesorii sunt omologe i adesea
interanjabile. Energia necesar transportului rezult prin hidroliza ATP (una dintre proteinele accesorii conine un
domeniu de legare a ATP), iar regiunea C-terminal a moleculelor secretate codific informaia necesar secreiei. Secreia
HlyA se face printr-un proces continuu prin membrana intern i extern.
Proteinele secretate prin TOSS nu au peptidul leader cu rol de semnal, nu sunt supuse clivajului proteolitic, iar
semnalul de secreie este localizat n secvena de C-terminal de 60 de aminoacizi a proteinei secretate (C. Hueck, 1998).
Nu sunt prelucrate n timpul secreiei i nu formeaz intermediari periplasmici distinci.
Funcionalitatea TOSS, exemplificat de -hemolizina de E. coli i de adenilil-ciclaza de B. pertussis, este
conferit de 3 proteine: o protein a membranei interne din clasa ABC (ATP binding casette); o protein de fuziune
membranar; o protein a membranei externe ce formeaz un por. Procesul de secreie este iniiat dup ce un semnal de
secreie de la captul C-terminal al moleculei destinat secreiei interacioneaz cu proteinele transportoare ABC.
Secvena semnal este recunoscut specific de transportorul ABC.
Sistemele de secreie de tipul III (TTSS) funcioneaz pentru secreia specific a factorilor de virulen a unor
ageni patogeni ai omului, animalelor i plantelor: Yersinia spp. (proteina Yops), Shigella spp, Salmonella spp, E. coli
EPEC, EHEC (O157 : H7), Ps. aeruginosa (exoenzima S), Vibrio parahaemolyticus, Bordetella spp, Chlamydia
trachomatis, pentru toxinele produse de Xanthomonas campestris, Ps. solanacearum, Ps. syringae, Erwinia amylovora.
Proteinele secretate pe cile de tip I i III traverseaz membranele intern i extern ntr-o singur etap, nu au
secven leader i sunt exportate ntr-o form nemodificat. Deoarece proteinele exportate nu au secven leader, ambele

40

ci sunt independente de sistemul sec i nu implic prelucrarea N-terminal a proteinelor secretate. Secreia proteinelor pe
aceste ci este un proces continuu, fr prezena distinct a intermediarilor periplasmici.
Sistemul de tip III este specializat pentru secreia factorilor de virulen care nu pot difuza i nu pot ptrunde
independent, ci sunt transferai direct n celul i acioneaz asupra factorilor intracelulari ai gazdei. n general, expunerea
celulelor gazd la proteine de tip III, n absena celulei bacteriene, nu are efect sau efectul este minim. Activitatea unor
sisteme de transport de tip III este dependent sau este stimulat ca rspuns la contactul bacteriei cu celula gazd.
Mecanismul de transport care elibereaz factorii de virulen direct n celula gazd asigur eficiena interaciunii i
utilizarea cu randament optim a proteinelor bacteriene.
Ca i TOSS, TTSS transport moleculele efectoare prin membrana intern i extern ntr-o modalitate Secindependent, dar dependent de contactul cu substratul tisular al gazdei i are rol n secreia i translocaia * unor proteine
bacteriene.
*

Secreia i translocaia sunt evenimente distincte funcional. Termenul de translocaie este folosit pentru a descrie
transportul proteinelor din celula bacterian, prin membrana plasmatic, n citosolul celulei int eucariote, iar secreia
semnific transportul proteinelor din citoplasma bacterian, n spaiul extracelular.
Trstura esenial a TTSS este injectarea proteinelor efectoare direct n celula eucariot, adic funcionarea sa
este dependent de contactul agentului patogen cu membrana celulei gazd eucariote i permite eliberarea factorilor de
virulen n interiorul acesteia. Moleculele secretate (efectoare) interfer cu cile de semnalizare ale celulei gazd.
TTSS funcioneaz numai la bacteriile Gram-negative i transport proteinele prin membrana intern, stratul de
peptidoglican, membrana extern i prin barierele celulei gazd (membrana plasmatic i chiar prin peretele celulei
vegetale). TTSS sunt inductibile la contactul agentului patogen cu celula gazd i, n esen, au rolul de a transloca
factorii bacterieni de virulen, direct n celula gazd n timpul infeciei.
Sistemul de secreie de tip III este un mecanism de virulen bine conservat la foarte bacterii Gram-negative
patogene, dar proteinele secretate sunt foarte diferite. Dei patogenii posed i ali factori de virulen, sistemul de secreie
de tip III este determinantul esenial al virulenei, deoarece multe dintre proteinele secretate astfel interacioneaz direct
cu componentele celulare, alternd transducerea semnalelor, sau acioneaz n citoplasma celulei eucariote n care sunt
translocate.
Dintre miile de proteine bacteriene, doar cteva sunt secretate prin sistemul de secreie de tip III n spaiul
extracelular sau translocate n celula gazd.
Sistemul de secreie de tip III este alctuit din circa 20 de proteine, majoritatea localizate n membrana intern,
asemntoare cu cele din corpusculul bazal al flagelului bacteriilor Gram-pozitive i Gram-negative. De aceea se
presupune c sistemul TTSS a aprut prin duplicarea genelor celulare. Aparatul TTSS necesit o ATP-az, probabil
asociat membranei. Transferul din spaiul periplasmic, prin membrana extern, este mediat de un set restrns de proteine
suplimentare sau pe calea secretorie general alctuit din cel puin 12 proteine.
Semnalul de secreie este secvena de 15-20 de aminoacizi N-terminali ai proteinei secretate. Secvenele Nterminale ale proteinelor secretate pe calea sistemului de tip III nu sunt asemntoare.
Unele sisteme de secreie de tip III asambleaz structuri macromoleculare la suprafaa celulei bacteriene, care pot
fi implicate n translocaia moleculelor efectoare n celula eucariot (fig. 46). Cele mai proeminente sunt structurile cu
form de ac, observate pe imaginile electrono-optice.

41

Fig. 46. Structura acicular proeminent la suprafaa unor bacterii patogene, cu rol n translocaia proteinelor efectoare n citoplasma celulei gazd.
Amnunte n text (dup Coburn i col., 2007).

La Salmonella, Shigella i Yersinia, structurile sunt rigide, luminale, lungi de 45-80 nm, cu rolul de a transloca
proteinele n celula gazd, iar la E. coli patogen, acul se extinde cu apendice filamentoase care par s faciliteze ataarea
bacteriei de celula gazd prin stratul gros de glicocalix.. Acul TTSS este aezat pe o pereche de inele concentrice incluse,
unul n membrana intern, cellalt n membrana extern. Cele dou inele, asemenea inelelor corpusculului bazal al
flagelului, par s formeze o cale de transport direct i continu prin membrana intern, stratul peptidoglicanic i prin
membrana extern.
La bacteriile fitopatogene, structura echivalent acului este asemntoare pilului (pilul Hrp). Este flexibil,
luminal, cu lungimea de 2 m, adaptat s traverseze peretele gros al celulei vegetale.
Varietatea maladiilor cauzate de agenii patogeni la diferite gazde este reflectat de diversitatea proteinelor
secretate pe calea sistemului de tip III: unele mediaz invazia bacteriei n esuturile gazdei, altele paralizeaz ori omoar
celula gazd.
Sistemul de secreie de tip III este funcional pentru biogeneza flagelului la Ps. aeruginosa, pentru secreia
proteinei InvA la Salmonella, care induce un semnal n celula gazd ce determin internalizarea bacteriei. InvA este
omolog cu MxiA de Shigella i cu LcrD de Yersinia, de asemenea cu rol n secreia factorilor de invazie.
Calea de secreie de tip III a fost iniial identificat la Yersinia, unde funcioneaz pentru secreia a circa 12
proteine, majoritatea cu rol n virulen (proteinele Yops - Yersinia outer proteins).
Sh. flexneri posed o plasmid de virulen, pe care sunt localizate circa 15 gene care codific antigenele Ipas
(invasion plasmid antigens), ce determin capacitatea de invazie a celulelor epiteliale ale mucoasei colonului, cu apariia
simptomelor clinice de dizenterie. Salmonella secret proteinele Sip (Salmonella invasion proteins), omologe proteinelor
Ipas, necesare invaziei celulelor. Antigenele Ipas nu conin peptidul cu rol de semnal, sunt localizate pe suprafaa extern
a bacteriei, dar i n mediul extracelular i sunt transferate n celula gazd prin TTSS, ca i antigenele Sip.
Multe dintre componentele TTSS sunt omologe proteinelor de la baza flagelului. Cteva proteine de la baza flagelului
folosesc energia din hidroliza ATP pentru a propulsa moleculele de flagelin prin lumen, la captul distal. Foarte probabil,
TTSS folosete un mecanism asemntor, energizat de ATP, pentru propulsarea proteinelor prin canalul central al pilului
n celula int. Dup ce proteina a fost eliberat, plierea poate fi completat de chaperoni citosolici ai celulei int.
Sistemul de secreie de tip III s-a pstrat la bacteriile Gram-negative patogene pentru plante (E. amylovora, Ps.
solanacearum, Ps. syringae i X. campestris). Interaciunea agentului patogen cu planta gazd determin procesul
infecios la plantele sensibile i reacia hipersensibil* la cele rezistente. Genele codificatoare s-au denumit hrp.
La unele organisme, genele aparatului de secreie de tip III sunt localizate pe plasmide specifice patogenilor,
absente la speciile nepatogene. La ali patogeni (S. typhimurium, EPEC, Ps. syringae, Ps. aeruginosa, E. amylovora,
Xanthomonas), genele codificatoare ale aparatului de translocaie de tip III sunt localizate pe cromosom.

42

Rspunsul hipersensibil al plantelor rezistente nu are nimic comun cu reacia de hipersensibilitate a mamiferelor i se caracterizeaz prin colapsul
rapid i necroza esuturilor care au venit n contact cu agentul patogen, urmat de stoparea progresiei procesului infecios .

Proteina inductoare a reaciei hipersensibile la plantele rezistente (harpin) nu are secvena clasic N-terminal i
este asociat cu membrana extern, o situaie omolog cu a proteinelor Yops i Ipas, descrise iniial ca proteine asociate
membranei, nainte de a fi secretate n mediul extracelular.
Practic, toate bacteriile Gram-negative patogene pentru plante posed secvene omologe genelor hrp, cu excepia
A. tumefaciens, care produce procesul patologic printr-un mecanism unic.
Descoperirea genelor de virulen la bacteriile patogene pentru mamifere i la cele patogene pentru plante, a cror
secven pstreaz un grad semnificativ de omologie, a creat o punte de legtur ntre cele dou domenii de cercetare i
ridic probleme de filiaie ntre organisme ndeprtate filogenetic (Gijsegem, 1993).
Cile de secreie II i IV, dependente de sistemul general de secreie celular (Sec-dependente), traverseaz
membrana extern i intern n etape distincte. La ambele sisteme, exportul prin membrana intern, n spaiul
periplasmic, este mediat de sistemul proteinelor de secreie Sec dar difer prin cile pe care proteinele sunt
transportate prin membrana extern.
Proteinele secretate pe cile II i IV se sintetizeaz pe ribosomii citoplasmatici ca preproteine, cu o secven
semnal N-terminal ce orienteaz proteina spre calea de secreie Sec a membranei interne. Trstura definitorie a
exportului proteinelor prin sistemul sec dependent este prezena unei secvene semnal de circa 30 de aminoacizi hidrofobi
la captul N-terminal al proteinei. Secvena semnal uureaz transportul proteinelor n spaiul periplasmic i este ulterior
clivat de o peptidaz specific (signal-peptidaz).
Cile de secreie sec-dependente cuprind un set de proteine localizate n membrana intern, o ATP-az asociat
membranei citoplasmatice (Sec A) ce furnizeaz energia necesar exportului proteinei i o protein chaperon care are rolul
de a se lega de proteina int nainte de a fi secretat.
Sistemul de secreie de tip II este varianta principal a cii secretoare generale (gsp) sec-dependent, utilizat
pentru transportul moleculelor prin membrana intern n spaiul periplasmic. Proteinele accesorii (circa 14) mediaz
exportul moleculelor prin membrana extern. Cel mai studiat sistem de secreie de tip II este al pululanazei la Klebsilla
oxytoca, alctuit din cel puin 7 proteine localizate n membrana citoplasmatic i alte proteine din membrana extern.
Sistemul de secreie de tip II este calea principal pentru secreia enzimelor degradative extracelulare, de ctre
bacteriile Gram-negative: elastaza, fosfolipaza C, exotoxina A secretat de Ps. aeruginosa, pululanaza la Klebsiella
oxytoca), o lipoprotein ce hidrolizeaz amidonul i care, dup ce este secretat n mediul extern, formeaz micelii, toxina
de V. cholerae, proteina pililor de tip IV de la Ps. aeruginosa.
Aparatul Sec este alctuit din mai multe proteine: una dintre ele - Sec A- conine situl de legare la ATP, care prin
hidroliz furnizeaz energia necesar transportului ATP-az. Alte cteva proteine sunt integrate n membrana intern; o
semnal-peptidaz cliveaz o secven semnal N-terminal implicat n procesul de export al moleculelor n spaiul
periplasmic. Aici, restul proteinei adopt o stare quasinativ, facilitat de chaperoni.
Transportul prin membrana extern necesit alte 12-16 proteine accesorii, din clasa celor integrate, ce poart
denumirea generic de secreton.
Calea de secreie de tip IV (TFSS) este funcional pentru o serie de toxine bacteriene care sunt eliberate din
celul printr-un mecanism de autotransport. Autotransportorii utilizeaz un sistem sec-dependent i necesit clivarea unei
secvene semnal pentru translocaia prin membrana intern. Proteinele sistemului de secreie de tip IV traverseaz
membrana extern i formeaz un por prin care trece proteina secretat. Proteinele secretate traverseaz membrana
extern n virtutea secvenei C-terminale, care este ndeprtat enzimatic dup ce proteina este eliberat din membrana
extern: astfel sunt secretate toxinele-enzime cu activitate proteazic specific ce cliveaz IgA produse de N.
gonorrhoeae, N. meningitidis, H. influenzae, citotoxina vacuolant sintetizat de Helicobacter pylori, serin-proteaza de
Serratia marcescens, o familie de proteine din membrana extern la B. pertussis, toxinele secretate de Sh. flexneri i de E.
coli enteropatogen (EPEC). Sistemul de secreie de tip IV funcioneaz i la celulele eucariote.
Prototipul acestei ci de secreie este transferul nucleoproteinei T-ADN de la A. tumefaciens, n celula vegetal.
Funcional, TFSS se aseamn cu aparatul de conjugare: ambele au capacitatea de a transloca proteine,
intercelular (de la bacterie la alta sau de la celula bacterian n celula eucariot).

43

Fig. 47. Reprezentarea schematic a sistemelor de secreie proteic de tip I, II, III, IV. Calea de tip I este exemplificat pentru hemolizina HlyA de la
E. coli; sistemul de tip III exemplificat pentru de secreia proteinelor de mebran extern -Yop de la Yersinia; sistemul de tip II exemplificat pentru
secreia de pululanaza la Klebsiella oxytoca; sistemul de tip IV exemplificat de de sistemul VirB la Agrobacterium tumefaciens. Proteinele HlyB,
YscN, SecA i VirB11 au rolul de ATP-aze. Moleculele efectoare secretate sunt reprezentate sub forma ovalelor gri. Sistemele de secreie de tip II i
IV folosesc chaperonul citoplasmatic SecB. Secreia de tip III implic chaperoni citoplasmatici (SycE), dar nu interacioneaz cu transloconul Sec al
membranei interne. Proteinele structurale majore ale fiecrui sistem sunt reprezentate n nveliul celular (dup Henderson i colab., 2004).

Al V-lea sistem pentru secreia macromoleculelor (fig. 48) transport toxine polipeptidice sau complexe ADNproteine, ntre dou celule bacteriene sau ntre o celul bacterian i o celul eucariot: toxina de B. pertussis; H. pylori
secret factorul inductor la sintezei IL-8. Aceeai cale este implicat n transferul conjugativ al plasmidelor.
Proteinele pot fi secretate prin sistemul de autotransport (Va) sau pe calea de secreie cu dou componente (Vb).
Structura primar a proteinei autotransportate cuprinde 3 domenii:
secvena semnal (leader) la captul N-terminal;
- domeniul al proteinei transportate, cu funcie efectoare;
- domeniul C-terminal, , cu rol n autotransport, denumit unitatea de translocare.

44

Fig. 48. Reprezentarea schematic a sistemului de secreie de tip V. Sunt reprezentate cele 4 domenii funcionale ale proteinelor: secvena
semnal, domeniul efector, regiunea de legare (linker), domeniul . Poliproteinele autotransportate sunt sintetizate i exportate, n general, prin
membrana citoplasmatic via aparatul Sec. Secvena semnal este extins la toate cele 3 tipuri de secreie tip V. In membrana intern, secvena
semnal este clivat i domeniul se inser n membrana extern ntr-o conformaie , formnd un por n membrana extern. Dup dobndirea
conformaiei , domeniul efector se inser n por i este translocat la suprafaa celulei bacteriene, unde poate s fie sau nu prelucrat ulterior.
NTP = nucleozid-trifosfai (ATP, GTP), (dup Henderson i colab., 2004).

Secvena semnal orienteaz proteina spre membrana intern. Dup trecerea prin membrana intern, proteina
autotransportat se gsete ca form intermediar, n spaiul periplasmic. Domeniul rmne temporar extins n spaiul
periplasmic, iar domeniul C-terminal trece n membrana extern. Domeniul se pliaz n periplasm, nainte sau
simultan cu translocaia prin membrana extern.
Domeniul are conformaie -pliat. La captul C-terminal, aminoacidul este totdeauna fenilalanina sau triptofanul,
precedat de resturi alternante hdrofile i hidrofobe.
Prin analogie cu modelul biogenezei porinelor, modelul (Henderson i colab., 2004) presupune c preproteina
autotransportat se inser spontan n membrana extern, n conformaie -pliat, pe msur ce interacioneaz cu mediul
hidrofob. Domeniile stabilesc legturi de H antiparalele i formeaz spontan o structur inelar cu diametrul de 2 nm,
care constituie porul prin care este transportat domeniul .
Domeniul efector poate fi prelucrat i eliberat n mediul extern; este clivat i rmne n contact cu suprafaa celulei
prin interaciune necovalent cu domeniul sau nu este clivat i rmne ca o protein al crei domeniu C-terminal este
ancorat n membran.
Sursa de energie (ATP sau GTP) nu exist n periplasm, iar la nivelul membranei externe lipsete fora protonmotrice. Fora care controleaz translocaia domeniului efector prin membrana extern deriv chiar din plierea sa corect
pe suprafaa celulei.
Domeniile efectoare ale proteinelor autotransportate sunt foarte diverse, iar funcional sunt factori de virulen
(proteaze, peptidaze, lipaze i esteraze), sunt implicate n motilitate, au rol de adezine, sunt proteine imunomodulatoare,
toxine etc.
Mecanismele de autotransport funcioneaz numai la Bacteria i n primul rnd la Proteobacteria (, , ,
Proteobacteria), dar i la Chlamidiae.

45

Calea de transport de tip V cu dou componente se deosebete de calea autotransportului prin aceea c domeniul
(efector) i domeniul (transportor ce formeaz porul) sunt sintetizate ca molecule distincte.
Toxicitatea
Exotoxinele sunt termolabile, au toxicitate foarte nalt, mai ales n form purificat, iar prin inactivare rezult
anatoxine. Astfel, toxina botulinic de tip D este de trei milioane de ori mai puternic dect stricnina luat ca etalon , iar
toxinele tetanic, neurotoxina de Sh. dysenteriae i cea botulinic de tip A sau B, de un milion de ori.
Efectul toxic este variabil nu numai n funcie de specia bacterian, ci i de tulpina productoare, chiar pe medii
optime. n multe cazuri, toxigeneza se atenueaz sau chiar dispare prin subcultivare repetat.
n general, efectul toxinelor este variabil n funcie de natura, vrsta, greutatea, sexul i linia genetic a animalelor
pe care sunt testate, ca i de tehnica i calea de administrare folosite.
Datele referitoare la toxigenez se refer la administrarea lor parenteral, deoarece cu excepia enterotoxinelor,
toxinele uzuale sunt distruse de modificrile de pH sau de activitatea enzimelor digestive.
Potenialul toxic al toxinelor este ilustrat de date teoretice:
1) toxina botulinic de tip A purificat i cristalizat ar conine ntr-un miligram, 1 000 000 DLM (doze limite mortale)
pentru un kg corp cobai, ceea ce nseamn c 1 mg de toxin poate s omoare l 200 tone de cobai sau dou milioane de
oareci;
2) 200 g neurotoxine (botulinic sau tetanic) ar putea omor ntreaga populaie a globului.
Potenialul toxic al toxinelor bacteriene este dependent de calea de administrare. Dozele letale pentru cile
respiratorie i digestiv sunt de l00l000 de ori mai mari dect pentru cile intravenoas, intramuscular, intraperitoneal
sau subcutanat. Pielea intact este o barier eficient fa de toxine.
Toxicitatea diferitelor probe ale aceleiai toxine poate prezenta variaii foarte importante: de exemplu, unele probe
de toxin botulinic sunt de 6000 de ori mai toxice pentru cobai dect pentru oarece, iar altele numai de 3 ori.
Exotoxinele au, uneori, un rol determinant n patogeneza unor ageni infecioi, datorit potenialului lor toxic
foarte nalt. De exemplu, toxinele purificate reproduc n general, manifestrile clinice ale infeciei cu V. cholerae, C.
tetani sau C. diphteriae. Dar la majoritatea agenilor patogeni, exotoxinele acioneaz sinergic cu alte componente celulare
pentru a produce efectele poteniale asupra gazdei. Sinteza i secreia toxinelor este reglat de ali factori de virulen. De
exemplu, capacitatea de aderen creeaz un contact strns ntre agentul patogen i celula sensibil, ceea ce permite
transferul toxinei i exprimarea ntregului potenial toxic. Dei toxina holeric poate reproduce multe din simptomele
procesului infecios, pentru exprimarea integral a virulenei bacteriene este necesar adezina care leag celula bacterian
de celula mucoasei intestinale. Alteori, toxina are alte funcii suplimentare celei de toxicitate, care amplific virulena:
toxina de B. pertusis are i rolul de protein de aderen a bacteriei, la celulele mamaliene.
Receptori celulari pentru toxine
Interaciunea toxinelor cu celulele sensibile, asemenea altor biomolecule (hormoni, antigene, lectine, fatori
reglatori etc.) este mediat de molecule specifice denumite receptori, situate n stratul extern al membranei citoplasmatice.
Celulele sensibile nu au receptori specifici pentru toxine. Toxinele mprumut receptorii, care n mod obinuit au rolul de
a ngloba molecule utile metabolismului celular.
Se cunosc receptorii prin intermediul crora cteva toxine interacioneaz cu suprafaa celulei. De exemplu,
receptorul celular pentru streptolizina O (SLO), pentru listeriolizin (LLO) i pentru pneumolizin (PLO) este
colesterolul. Aceste toxine se fixeaz pe suprafaa celulei prin intermediul colesterolului membranar i nu depind de ali
receptori de suprafa. De aceea, ele pot s lizeze membranele, teoretic, ale oricrei celule animale.
Toate toxinele acestui grup sunt alctuite dintr-o singur caten polipeptidic, a crei lungime variaz de la 471
aminoacizi (pentru pneumolizin) pn la 571 pentru streptolizina O. Variaia lungimii se datoreaz n ntregime
secvenelor localizate la captul N-terminal, a cror funcie rmne necunoscut. Cea mai lung secven, cu omologie
aproape perfect la toxinele grupului este de 11 aminoacizi i este bogat n triptofan.
Secvena comun pentru toate aceste molecule i esenial pentru activitatea citolitic, corespunde celei mai mici
secvene - a pneumolizinei. Pneumolizina se deosebete de celelalte toxine ale grupului, prin absena peptidului semnal
secretor i din aceast cauz este eliberat numai prin liza celulelor de Str. pneumoniae.
Aceste toxine nu se leag de membranele care nu conin colesterol sau un compus nrudit cu colesterolul.
Interaciunea cu colesterolul se produce n absena altor lipide. Toxinele interacioneaz chiar cu sterolul pur n soluie sau
n suspensie i rezultatul este inhibiia activitii litice.

46

Alte cteva toxine au ca receptori moleculele de gangliozide. Acestea sunt glicolipide, mai abundente n neuroni,
alctuite dintr-o component oligozaharidic legat de un ceramid (acid stearic i sfingozin). Gangliozidele difer ntre
ele, prin numrul i secvena resturilor glucidice componente, n special a acidului N-acetil neuraminic (NANA) sau de
acid sialic.
Toxina tetanic se leag de gangliozide, n special de di- i tri-sialogangliozide, care conin dou i respectiv trei
resturi de acid sialic, ataate de galactoz. ntre toxina tetanic i hormonul tirostimulator (TSH) exist o competiie de
legare strict reciproc, pe membrana celulelor tiroidiene. Astfel s-a dedus c receptorul neuronal pentru toxina tetanic
este asemntor cu receptorul celulei tiroidiene pentru TSH.
Receptorul celular pentru toxina holeric, ca i pentru toxina termolabil de E. coli, foarte asemntoare toxinei
holerice, este gangliozidul GM1. S-a evideniat o corelaie direct ntre coninutul membranar n GM 1 i sensibilitatea
tisular la toxin.
Receptorul celular al toxinei de B. pertussis pare a fi tot o gangliozid care conine acid sialic, iar receptorul
toxinei difterice ar fi o glicoprotein.
n raport cu localizarea intei lor moleculare se disting dou categorii de toxine:
- cele care au inta final la nivelul membranei;
- toxine a cror int final este citoplasmatic.
inta final este structura a crei interaciune cu toxina produce efectul toxic, n timp ce receptorul are uneori
rolul de int intermediar, dei alteori este chiar inta final.
Toxinele care acioneaz la nivelul membranei sunt active prin modificri structurale pe care le induc n
membrana citoplasmatic, urmate de ruperea acesteia. Consecina este citoliza ori moartea celulei. Toxinele care
consecutiv aciunii lor produc dezorganizarea membranei se numesc citolizine (respectiv hemolizine, dac celula inta este
eritrocitul).
Toxinele a cror int final este intracelular, traverseaz mai nti membrana pentru a ajunge n citoplasm.
Moleculele suprafeei eritrocitului, cu rol de receptor pentru toxinele bacteriene, sunt glicolipidele. Legarea
toxinelor de glicolipide pare a fi mai avantajoas dect legarea de glicoproteine, pentru interacia cu membrana, care este
esenial pentru aciunea toxic.
Ptrunderea moleculelor de toxin n celul
Toxinele bacteriene a cror int este intracelular sunt molecule bifuncionale, ca i toxinele vegetale (ricina,
abrina), bacteriocinele sau hormonii glicoproteici. Toate aceste categorii de molecule sunt alctuite dup acelai model
funcional, fiind monomere (de exemplu, toxina difteric, exotoxina de Ps. aeruginosa) sau dimere (de exemplu,
enterotoxina holeric i cea termostabil de E. coli). Cele monocatenare au o secven COOH-terminal, prin care se leag
la nivelul receptorului i o secven NH 2-terminal, care ptrunde n citoplasm i interacioneaz cu inta intracelular.
Pentru toxinele dublu catenare, funciile de legare B (Binding) i de activitate propriu-zis A (Activity) sunt realizate
separat de fiecare caten.
Ptrunderea moleculei de toxin n celul este un proces complex pentru majoritatea toxinelor cu aciune
intracelular i se face prin unul din urmtoarele mecanisme:
- endocitoza mediat de receptori;
- pinocitoza nespecific n faza lichid;
- transferul direct al moleculei prin membrana citoplasmatic.
nglobarea prin mecanismul endocitozei mediate de receptori confer specificitate i eficien aciunii moleculelor
mari. Receptorii celulari glicoproteici, dup interaciunea cu moleculele de toxin, sufer o dinamic accentuat. n mod
normal, moleculele cu rol de receptor sunt uniform distribuite n planul membranei sau sunt concentrate n teritorii
specializate denumite zone tapetate cu clatrin* (coated pits), un nveli de natur proteic pe faa citoplasmatic a
membranei. Dup legarea moleculei de toxin, complexele receptor-toxin se aglomereaz n zonele tapetate cu clatrin,
situate la baza microvilozitilor. Zonele respective se intruzeaz i formeaz vezicule acoperite cu clatrin, cu rol de
transport. n citoplasm, nveliul de clatrin se dezorganizeaz i receptorii celulari devenii disponibili sunt reciclai spre
suprafaa celulei, iar molecula de toxin este eliberat spre un situs intracelular specific.
*

Clatrina este o protein mare, oligomeric, ce formeaz o reea pe suprafaa intern a membranei plasmatice,
favoriznd intruzia membranei i formarea unei vezicule tapetat cu reeaua molecular, care ulterior poate fuziona cu alte
organite celulare.
Mecanismele de aciune a exotoxinelor

47

Efectul biologic al exotoxinelor este specific i este datorat afinitii lor caracteristice pentru anumite celule-int
ale organismului.
Unele toxine (tetanic, difteric, botulinic, holeric, eritrogen) au un rol determinant n patogenitatea
bacterian. Primele patru enumerate mai sus, sunt factori unici ai patogenitii pentru bacteriile productoare. n cazul
holerei, gravitatea infeciei este consecina efectelor fiziopatologice nespecifice ale toxinei asupra mucoasei intestinale ce
constau n pierderea apei i srurilor minerale la acest nivel.
Eritemul specific scarlatinos, produs de Str. pyogenes se datoreaz efectului primar al toxinei eritrogene
streptococice.
Enterotoxinele stafilococice i enterotoxina de Cl. perfringens produc efecte la nivelul mucoasei intestinale, ca
rezultat al intoxicaiei alimentare.
Toxina produs de Sh. dysenteriae este cauza dizenteriei, deoarece enterocitele i celulele endoteliale ale vaselor
mici se lizeaz sub aciunea toxinei, rezultatul fiind ulcerarea mucoasei intestinale.
Exotoxina de B. anthracis produce un edem local i hemoragie, iar n cazul septicemiei, efectul letal pare a fi
datorat neurotropismului su, cu aciune n special asupra centrului bulbar al respiraiei.
Efectele biologice ale toxinelor se produc la nivelul diferitelor structuri celulare. De exemplu, hemolizinele i
leucocidinele acioneaz la nivelul membranei citoplasmatice, iar alte toxine sunt active asupra organitelor, asupra catenei
transportoare de electroni .a.m.d.
Toxinele perturb funciile celulei gazd: influeneaz cile de transducere a semnalelor, rearanjeaz citoscheletul
i traficul vacuolar.
Uneori, toxine cu structur asemntoare pot genera manifestri clinice foarte diferite. De exemplu, toxina
botulinic ingerat odat cu alimentele, produce o paralizie flasc datorat aciunii la nivelul terminaiilor nervoase
periferice, iar toxina tetanic, eliberat n rnile profunde contaminate cu C. tetani produce paralizia spastic prin
intermediul sistemului nervos central. Ambele toxine acioneaz prin acelai mecanism: blocarea eliberrii mediatorilor
sinaptici prin clivarea sinaptobrevinelor, proteine componente ale veziculei sinaptice. Toxina tetanic blocheaz eliberarea
mediatorilor glicin i GABA, n timp ce toxina botulinic blocheaz eliberarea acetilcolinei. Ambele proteine sunt
metaloendoproteaze i se aseamn prin domeniile care leag Zn.
n funcie de mecanismul de aciune, exotoxinele se clasific n: toxine cu conformaie de tip AB, toxine formatoare de
pori, toxine cu domeniul RTX, proteaze ale IgA, toxine termostabile, toxine care modific citoscheletul gazdei (fig. 49).

Fig. 49. Reprezentarea schematic a mecanismelor de aciune ale diferitelor exotoxine de natur proteic (dup Geny i Popoff, 2006).

Toxinele cu conformaie de tip AB sunt alctuite din 2 subuniti:


- subunitatea A (active), determin activitatea enzimatic, toxic (activitate ADP-ribozilant - toxina holeric,
pertusic, activitate proteolitic - toxina tetanic, toxina botulinic) i prezint att regiuni conservate, n special
n regiunile importante pentru activitatea enzimei, ct i regiuni variabile;

48

- subunitatea B (binding) care permite legarea de receptorii celulei gazd i faciliteaz eliberarea subunitii active
n interiorul celulei gazd.
Cele dou subuniti pot fi localizate pe aceeai caten polipeptidic (toxina difteric), pe dou catene separate
(toxina botulinic) sau pot avea formula AB5, cele 5 subuniti B fiind asociate necovalent (toxina pertusic).
Activitatea enzimatic a subunitii A produce efecte foarte variabile, de la cea ADP-ribozilant (toxinele holeric,
pertusic, difteric, toxina termolabil de E. coli, exotoxina A de Pseudomonas, ADP-ribozil-transferazele C2 i C3
produse de Cl. botulinum), pn la aciunea proteolitic (toxinele tetanic i botulinic).
O categorie aparte o formeaz urmtoarele toxine binare:
toxina C2 (produs de Cl. botulinum);
CDT (produs de Cl. difficile);
- toxina i (iota produs de Cl. perfringens);
- CST (produs de Cl. spiroforme);
- toxinele edematoas i letal (B. anthracis);
- VIP (proteinele insecticide produse de celulele vegetative de B. cereus).
Subunitile CDT, CST i i au secvene ale aminoacizilor foarte asemntoare i sunt interanjabile, ceea ce relev
o cale comun de evoluie a acestor ageni patogeni ntr-o ni comun, asociai cu maladia gastrointestinal la om i
animale.
Spre deosebire de alte toxine binare, subunitile acestor toxine nu se leag de receptorii celulari sub forma
complexului AB. Interaciunea lor cu celulele implic legarea iniial a componentelor B la receptorii celulari, ca
monomeri, apoi formeaz homoheptameri pe suprafaa sau n interiorul celulei. Monomerii B sunt generai numai dup
proteoliza precursorilor. Complexul heptamer B-receptor celular are rolul de suport pentru legarea componentei
enzimatice A, dup care este endocitat. n endosom, homoheptamerul se inser n membrana veziculei, formnd un por
prin care componenta enzimatic A este translocat n citosol, unde produce efectul toxic prin unul dintre cele 3
mecanisme (fig. 50):
- mono-ADP-ribozilarea actinei G, ce determin dezorganizarea citoscheletului i moartea celulei;
- proteoliza protein-kinazelor activate de mitogeni i inhibarea semnalizrii celulare;
- creterea nivelului AMP ciclic, ce duce la edem i imunosupresie.

Fig. 50. Reprezentarea schematic a mecanismului toxic al toxinelor binare de Clostridium i Bacillus. Toxinele sunt formate din dou subuniti
A i B neasociate n soluie sau pe suprafaa celulei. Componenta B activat n mediul extracelular interacioneaz cu receptorii celulari, fie ca
homo-heptameri inelari preformai sau ca monomeri ce se asambleaz ulterior heptameri. Componenta enzimatic A se leag la heptamerul B legat de
celul i complexul receptor holotoxin este nglobat pe calea EMR n endosomi ce se acidific sub aciunea ATP-azei din membrana vacuolar.
Aciditatea endosomului este esenial, deoarece heptamerul B se modific conformaional i se inser n membran formnd un canal prin care,
probabil, componenta A este translocat n citosol. Excepia o constituie precursorul antigenului protector (PA83) de la B. anthracis, deoarece se
leag de receptorul celular i ulterior este clivat (dup Barth i colab. 2004).

49

Toxinele cu aciune enzimatic (toxina Shiga, toxina holeric, toxina pertusic, toxina difteric i exotoxina A de
Ps. aeruginosa) sunt clivate proteolitic pentru a produce fragmentul A catalitic activ.
Multe toxine neenzimatice care se inser n membrana celulei eucariote, necesit clivajul proteolitic pentru a
permite oligomerizarea i formarea porilor: hemolizina de V. cholerae El Tor este clivat N-terminal, iar aerolizina, toxina
de C. septicum i citotoxina de Ps. aeruginosa sunt clivate C-terminal. Hemolizina de E. coli, formatoare de pori,
reprezint o clas unic de toxine ce necesit prelucrarea posttraducere pentru activare.
Toxinele formatoare de pori
Numeroase microorganisme patogene cu localizare intracelular produc proteine care pot s lizeze membrana
celulei eucariote. Cteva dintre aceste toxine sunt eseniale pentru patogenitate. Rolul lor este diferit, de la blocarea
funciei celulelor imunitare, pn la medierea ieirii din vacuola de fagocitoz n citosol. Toxinele formatoare de pori
acioneaz prin inseria toxinei n membrana plasmatic a celulelor gazd, urmat de oligomerizarea monomerilor i
formarea unor complexe parial sau total circulare (por sau canal) care vor induce liza celular (de exemplu, toxinele RTX
produse de E. coli, Bordetella sp., Actinobacillus sp., Proteus sp., Pasteurella sp.), toxinele , , , produse de
Staphylococcus sp., Clostridium sp., toxinele tiol-activate produse de Clostridium sp., Listeria sp., Streptococcus sp.,
Bacillus sp.. Procesul de formare a porilor este independent de ATP. Rolul acestor toxine n patogenez este puin
investigat, cu excepia listeriozinei care determin evadarea Listeriei din vacuola de fagocitoz.
Citolizinele (citotoxinele) sunt definite ca proteine care omoar celulele int. Ele pot aciona intracelular sau la nivelul
membranei i formeaz pori. Efectul lor const n liza eritrocitelor (hemolizine), leucocitelor (leucocidine) i celulelor
tisulare. Citotoxinele cu aciune intracelular se leag la nivelul receptorilor membranari i sunt prelucrate nainte de a
ajunge n citoplasm.
Mecanismele de aciune ale citotoxinelor sunt diferite:
- inhibiia sintezei proteinelor celulare;
- inhibiia formrii filamentelor de actin;
- formarea porilor membranari.
Formarea porilor n structura membranei int este un mecanism major de aciune a citotoxinelor. Astfel de citotoxine se
pot detecta prin activitatea lor litic asupra eritrocitelor, motiv pentru care se mai numesc hemolizine. Liza eritrocitelor
poate fi un mecanism de dobndire a Fe.
Formarea porilor induce un set de larg de reacii secundare n celulele nucleate: eliberarea citokinelor, disfuncia
citoscheletului, sinteza mediatorilor lipidici. Liza leucocitelor poate determina scderea reactivitii imunitare.
Streptolizina O, produs de streptococii grupului A, este hemolitic pentru eritrocitele multor specii de mamifere,
antigenic, labil n prezena O2 (este oxidat i inactivat, dar este reactivat sub aciunea agenilor reductori).
Streptolizina S este stabil la O2, dar nu este antigenic.
Toxinele SLO, LLO, PLO aparin familiei toxinelor activate de gruparea thiol. Capacitatea lor de a forma pori
depinde de o secven conservat de aminoacizi la captul C terminal, care conine resturi de Trp, eseniale pentru
formarea porilor i un rest de Cys, care le face intolerante la condiiile oxidante. Toxinele thiol -activate recunosc
colesterolul din membrana celulelor eucariote i induc formarea unor pori mari inelari (pn la 30 nm) sau n form de arc
(de dimensiuni mai mici), alctuii din cca. 50 de monomeri de toxin. Cantitatea de colesterol membranar trebuie s
depeasc cu cteva ordine de mrime cantitatea de toxin pentru a avea loc o interacie stabil, probabil din cauza unor
restricii sterice sau termodinamice. Colesterolul nu are doar rol de receptor pentru moleculele de toxin, ci mediaz i
oligomerizarea monomerilor de toxin, acionnd probabil ca un efector alosteric.
Toxinele thiol-activate sunt alctuite din 4 domenii, dintre care domeniul 4 este implicat n legarea de receptor
(colesterol). Legarea iniial de colesterol este reversibil, se realizeaz foarte rapid i independent de temperatur. Dup
legarea iniial, domeniile 1 i 3 implicate n oligomerizare sufer modificri alosterice care conduc iniial la apariia unui
pre-por metastabil, care ulterior este stabilizat prin fore de tensiune superficial. Porii incomplei, n form de arc, permit
de asemenea inseria moleculelor de toxin n membran.
Rolul biologic major al acestor toxine este de a permite ptrunderea n interiorul celulei eucariote a altor toxine sau
enzime bacteriene, prin porii de dimensiuni mari. n cazul bacteriilor intracelulare, aceste toxine (de exemplu,
listeriolizina) permit propagarea infeciei de la o celul la alta.
Toxinele thiol-activate se gsesc la bacterii care au un mod de via asemntor. Listeria i Streptococcus produc
infecii invazive, iar toxinele lor sunt determinani de patogenitate. Aceste bacterii produc enzime depolimerizante
(proteaze, nucleaze) secretate concomitent cu toxinele. Porii formai de toxinele activate de thiol sunt mari i constituie
calea de acces a acestor enzime n interiorul celulei. Toxina i enzimele coopereaz pentru degradarea celulelor animale,
n beneficiul agentului patogen.

50

n cazul infeciilor clostridiene gangrena gazoas sau tetanosul, cele dou moduri de via prezint convergene
evidente: toxinele pot fi implicate att n stadiul iniial al lezrii esutului, necesar pentru realizarea unui mediu anaerob,
ct i n stadiul tardiv (postmortem), caracterizat prin distrugere tisular rapid i masiv.
Listeriolizina este produs intracelular i se abate de la condiiile de aciune ale altor lizine, prin necesarul unui pH acid
optim pentru aciunea ei. Mediul acid este creat n fagosom, din care Listeria se elibereaz prin secreia toxinei.
Unele toxine funcioneaz prin inseria n membrana celulei sensibile, formnd un por sau canal, care duce la liza
celulei prin mecanisme osmotice. O astfel de familie este format de toxinele RTX (repetead toxins - denumire datorat
repetrii unei secvene de 9 aminoacizi n fiecare toxin), produse de bacteriile Gram-negative.
Toxinele RTX prezint omologie de secven i organizare genetic, precum i ci de secreie i activare similare:
-nu au secven peptidic semnal i nu sunt clivate proteolitic n vederea maturrii;
-regiunea COOH-terminal este implicat n secreia toxinei, pe calea sistemului de secreie de tip I;
-necesit un aparat secretor constituit dintr-un complex transmembranar format din mai multe proteine;
-sunt secretate fr acumularea intermediarilor periplasmici;
-prezint unui reziduu de 9 aminoacizi, bogat n Gly, care leag ionii de Ca 2+, repetat de mai multe ori n partea Cterminal. Cnd leag Ca2+, secvenele repetitive RTX formeaz scurte lanuri -pliate, organizate ntr-o structur
neobinuit de suprahelice-. Legarea Ca2+ este o necesitate absolut pentru o activitate citotoxic i se produce dup
exportul proteinei. Nivelul intracelular al Ca 2+ este prea mic (0,1 M) pentru a activa Hly A.
Toxinele au fost grupate pe baza efectelor toxice i litice asupra celulelor gazd ale mamiferelor. Prototipul acestei
familii este hemolizina de E. coli.
Hemolizina A (Hly A) este un factor important al virulenei n infeciile extraintestinale, aa cum sunt cele ale tractului
respirator superior sau ale tractului urinar, produse de E. coli. Este reprezentantul unei familii de toxine bacteriene care
necesit modificarea posttraducere pentru dobndirea activitii biologice.
Hly A face parte dintr-o familie care mai cuprinde leucotoxina de Y. haemolytica, hemolizinele i leucotoxinele de
Actinobacillus actinomycetemcomitans, toxina bifuncional (adenilat-ciclaz/ hemolizin) de B. pertussis i hemolizinele
de P. vulgaris, Morganella morganii i Moraxella bovis, fa de care exist o identitate a secvenei aminoacizilor n
proporie de 30-75%.
Toate sunt citotoxice pentru diferite tipuri de celule nucleate. Hemolizina de E. coli lizeaz n cteva minute
eritrocitele diferitelor specii: oarece, iepure, berbec, bovine, cal, om, dar i granulocitele, monocitele, celulele
endoteliale, celulele epiteliale renale de oarece, rumegtoare i primate. Absena receptorilor specifici poate s explice
spectrul larg al aciunii Hly A.
Eritrocitele expuse aciunii Hly A de E. coli sufer schimbri majore ale citoscheletului care se exteriorizeaz prin
formarea proieciilor de suprafa. Liza eritrocitelor poate s semnifice eliberarea Fe, iar liza leucocitelor poate s aib
semnificaia unui factor de virulen, care mpiedic fagocitoza. Majoritatea bacililor Gram-negativi, inclusiv unele specii
din microbiota normal gastrointestinal produc hemolizine:
Unele citolizine sunt fosfolipaze: LLO de L. monocytogenes, citolizinele produse de Cl. perfringens i Ps.
aeruginosa sunt fosfolipaze C, iar cea de Corynebacterium pseudotuberculosis este o fosfolipaz D.
Fosfolipazele bacteriene cuprind un grup heterogen de proteine-enzime, care produc o varietate de efecte in vivo
i in vitro, de la alterri celulare minore n structura i funcia membranei citoplasmatice, pn la efectul letal.
Listeriolozina O (LLO) produs de L. monocytogenes, este singura toxin activat de gruparea tiol, a crei activitate
optim este la pH acid din vacuola intracelular. Valoarea acid a pH este declanatoare a lizei vacuolei.
LLO este singura toxin-enzim din familia citolizinelor produs de un patogen intracelular, care are rolul de a
liza fagosomul. Acidifierea coninutului vacuolar declaneaz efectul litic al LLO, limitat la membrana fagosomului.
LLO este reprezentat de dou fosfolipaze C, cu specificitate pentru fosfatidil-inozitol i fosfatidil-colin.
Ieirea agenilor patogeni de Rickettsia din vacuola celulei este mediat de fosfolipaze, care fac parte din aceiai
familie a citolizinelor.
Trypanosma cruzi invadeaz celulele, cu formarea vacuolelor acide intracelulare i produce o toxin activ la pH
5,5, n stadiile intracelulare ale ciclului. Blocarea acidificrii reduce capacitatea T. cruzi de a liza vacuola i de a trece n
citosol.
Toxinele termostabile produse de E. coli, Yersinia, Citrobacter freundii, Vibrio mimicus acioneaz printr-un
mecanism comun: activarea guanilat-ciclazei.
Enterotoxinele sunt proteine secretate care se leag de un receptor celular, intr n celul i produc creterea
nivelului AMPc.
O mare parte dintre enterotoxinele diareice se leag la receptorii de natur glicosfingolipidic. Unele dintre aceste
toxine sunt capabile s formeze canale permeabile pentru ionii de Ca, care ptrunde n celulele epiteliului intestinal i
acioneaz ca mesager secundar, modulnd procesele de transport ionic. Toxinele care nu formeaz astfel de canale,

51

determin, consecutiv interaciunii cu receptorii specifici, eliberarea altor mesageri secundari inductori ai secreiei ionilor
de Cl, care la rndul lor antreneaz secreia ionilor de Na i a apei, ca i a altor anioni, ceea ce conduce la acumularea apei
n lumenul inestinal, la dezechilibrarea balanei hidro-electrolitice i generarea diareii secretorii. Activitatea
enterotoxinelor se poate evidenia in vitro prin alungirea celulelor CHO (Chinese hamster ovary), rotunjirea celulelor Y-1
(mouse adrenal tumor cells) sau prin determinarea AMPc n celulele expuse aciunii toxinei. O metod independent de
celulele cultivate este ELISA (enzyme-linked imunosorbent assay). Receptorii specifici (de exemplu, gangliozidele GM 1)
sunt fixate pe faza solid pentru a lega enterotoxina, care poate fi detectat cu antiserul specific. n varianta alternativ a
metodei ELISA, sandwich, faza solid const din fragmente F(ab)2 ale anticorpilor anti-toxin. Ambele metode au
sensibilitate i specificitate nalte. In vivo, pentru detectarea activitii enterotoxinelor se folosete testul ansei ileale de
iepure sau de obolan.
Toxine cu activitate ADP-ribozilant
Toxinele ADP-ribozilante au ca situs comun de legare NAD. Efectul lor const n transferul ADP-ribozei de la
NAD, pe care o leag covalent, la proteine ale celulei eucariote, dup reacia global:
NAD+ + Proteina int ----- ADP-riboza- Protein + Nicotinamida + H +.
Unele dintre exotoxinele grupului se asociaz cu proteine cu rol important n fiziologia celular, care au capacitatea de
a lega nucleotidele i produc ADP-ribozilarea:
- unor proteine heterotrimerice care leag GTP;
- unor proteine mici care leag GTP;
- actinei;
- altor proteine ale celulei eucariote, neidentificate.
Exotoxinele ADP-ribozilante au trei tipuri de organizare A-B:
- proteine polipeptidice unice, cu componentele A-B legate covalent;
- complexe cu componente A-B localizate pe proteine separate, legate prin interaciuni necovalente;
- complexe multiproteice cu componente A-B localizate pe dou proteine separate.
Pentru unele exotoxine ADP-ribozilante, nu s-a evideniat organizarea structural de tip A-B.
Mecanismele activrii exotoxinelor ADP-ribozilante, in vitro, cu organizare de tip A-B (fig. 51, 52) sunt:
- proteoliza parial i generarea peptidului A activ cu activitate catalitic;
- reducerea legturilor S-S;
- activarea alosteric de ctre nucleotide sau de ctre proteinele accesorii ale celulei eucariote.

Fig. 51. Mecanismul de aciune al toxinei holerice.

Modelul de aciune* al toxinelor ADP-ribozilante s-a elaborat pe baza proprietilor moleculare ale toxinei difterice,
exotoxinei A de Ps. aeruginosa i enterotoxinei termolabile de E. coli.

52

Fig. 52. Reprezentarea reaciei de ADP-ribozilare.


*

Reaciile de ADP-ribozilare sunt de 4 tipuri: mono-ADP-ribozilare, poli-ADP-ribozilare, reacii de ciclizare a ADP-ribozei i reacii cu formarea
O-acetil-ADP-ribozei. n aceste reacii NAD + are rolul de donor al ADP-ribozei, ceea ce impune sinteza sa constant pentru a evita epuizarea rezervei
celulare. NAD+ se sintetizeaz din L-Trp i acid nicotinic, din nicotinamid. Mono-ADP-ribozilarea este o reacie filogenetic veche, reversibil, de
modificare post-traducere, prin legarea covalent a ADP-ribozei eliberat de NAD +, de un aminoacid specific al unei proteine acceptoare, cu
eliberarea simultan a nicotinamidei. n celulele eucariote, reacia are loc prin mecanism enzimatic sau neenzimatic, fiind identificat iniial ca
mecanism patogen al ctorva toxine bacteriene: pertusic, holeric, unele toxine clostridiene, catalizate de mono-ADP-ribozil-transferaza (MART).
Enzima s-a detectat la multe procariote, eucariote i la virusuri.
Reacia de ADP-ribozilare catalizat de MART este reversat de mono-ADP-ribozo-hidrolaze (MARH), prin hidroliza legturii covalente dintre
protein i ADP-riboz. Coexistena n aceiai celul a ADP-ribozil-transferazelor i a hidrolazelor sugereaz c mono-ADP-ribozilarea proteinelor
are rolul unui mecanism reglator reversibil. Cele mai studiate reacii de mono-ADP-ribozilare sunt catalizate de toxinele bacteriene. S-au identificat
cel puin 6 clase de MART cu specificitate de aminoacid: pentru Arg, Asp, Glu, Cis, His modificat etc. n celula eucariot sunt ADP-ribozilate
proteine extracelulare, citoplasmatice i nucleare (Hassa et al., 2006).

Toxina difteric i exotoxina A de Ps. aeruginosa produc ADP-ribozilarea proteinelor mari care leag GTP, cum
ar fi factorul de alungire a catenei polipeptidice EF-2, la resturi de acid glutamic diferite (148 i respectiv 553), dar
omologe din punct de vedere funcional, deoarece ambele leag inelul nicotinamidei din NAD printr-un mecanism
dependent de UV.
Toxinele proteolitice
Proteazele sunt enzime care catalizeaz hidroliza legturilor peptidice ale proteinelor. Ele sunt fie exopeptidaze, a
cror aciune este limitat la capetele COOH sau NH 2 ale proteinelor, sau endopeptidaze cele care cliveaz legturile
peptidice interne. Proteazele sunt sintetizate de toate organismele i ndeplinesc funcii variate.
Proteazele microbiene sunt predominant extracelulare i pot fi clasificate n 4 grupe, n funcie de restul catalitic
esenial la situsul activ: serin-proteaze, cistein-proteaze (tiol-proteaze), aspartat-proteaze i metaloproteaze. Cele mai
multe metaloproteaze sunt proteinele cu Zn. Zn este un component integral al multor proteine implicate n toate aspectele
metabolismului.
La toate enzimele cu Zn, a cror structur cristalin este cunoscut, un atom de Zn catalitic are raporturi egale cu
3 resturi de aminoacizi ai proteinelor i o molecul activ de ap, iar atomii structurali de Zn au raporturi egale cu 4 resturi
de cistein.
Numeroase bacterii patogene (Cl. perfringens, S. aureus, N. gonorrhoeae, streptococii de grup A i bacterii
anaerobe) elibereaz enzime care degradeaz esuturile gazdei sau au aciune specific fa de unele molecule cu rol
strategic pentru aprare.
Metaloproteaze. Proteazele produse de Clostridium s-au asociat cu patogenitatea i cu deprecierea alimentelor. Cl.
histolyticum agentul cauzal al mionecrozei clostridiene (gangrena gazoas) produce un amestec de colagenaze cunoscut
ca o clostridio-peptidaz A sau colagenaz A. n filtratul culturii s-au identificat 6 colagenaze: sunt metaloproteaze cu Zn
dependente de Ca, ce pot fi divizate n 2 clase, n funcie de diferenele structurale i biochimice. Structura secundar a
celor 6 colagenaze este foarte asemntoare i enzimele dau reacii serologice ncruciate.
Neurotoxinele clostridiene toxina tetanic i 7 serotipuri de toxin botulinic sunt produse de Cl. tetanicum i
respectiv Cl. botulinum. Zn se leag de toxina tetanic i de cele clostridiene i are rol esenial pentru inhibiia eliberrii
mediatorilor sinaptici de ctre aceste toxine. Catenele L ale ambelor tipuri de toxine au activitate proteolitic: toxina
botulinic de tip E cliveaz actina, iar toxina botulinic de serotip B i toxina tetanic au specificitate nalt pentru
sinaptobrevin. Alte neurotoxine de Cl. botulinum sunt proteaze care cliveaz alte proteine int.

53

Staphylococcus este o cauz frecvent a infeciilor umane. Majoritatea tulpinilor produc cteva proteaze
extracelulare. O metaloproteaz cu Zn, dependent de Ca, are rol n activarea unei serin-proteaze.
Str. sanguis, cauz a endocarditei bacteriene i constituent al plcii dentare, produce o proteaz extracelular ce
degradeaz IgA, caracterizat ca o metaloproteaz.
Proteaza care cliveaz IgA 1 este un factor major al virulenei pentru N. gonorrhoeae, N. meningitidis, H. influenzae,
Str. pneumoniae, H. pylori, Serratia marcescens, EPEC, Sh. flexneri, V. cholerae. Enzima cliveaz IgA1 la secvene
specifice prolin-treonin sau prolin-serin n regiunea balama i inactiveaz aciunea specific a anticorpului principal,
protector al mucoaselor. Enzima s-a identificat n leziunile parodontale produse de streptococi. IgA proteazele sunt
sintetizate sub form de precursori inactivi, care nainte de a fi secretai sufer un proces de autoproteoliz. Secreia se
realizeaz fr acumulare de intermediari n spaiul periplasmic. Pentru translocaia prin membrana extern, nu necesit
prezena factorilor accesorii (sunt autotransportatori).
Pronaza P, un amestec comercial de proteaze produse de Streptomyces griseus, conine cteva tipuri de proteaze,
inclusiv cteva metaloproteaze neutre. Din pronaza P s-au purificat i caracterizat 2 endopeptidaze cu Zn.
Ps. aeruginosa un patogen oportunist ce produce infecii fatale n special la persoanele imunosupresate, secret
numeroase produse extracelulare, dou dintre ele fiind metaloproteaze: elastaza i o proteaz alcalin. Elastaza este o
metaloproteaz cu Zn, ce degradeaz o varietate de proteine: elastina, laminina, fibrina, colagenul uman, cteva
componente ale C i Ig.
Legionella un patogen facultativ, ce produce o pneumonie acut (boala legionarilor) secret o proteaz cu rol
important n patogenez: este o metaloproteaz neutr cu Zn. Enzima are multe proprieti care sugereaz implicarea n
patogenez: este citotoxic i este distructiv pentru esuturi.
Hemaglutinina de V. cholerae O1 este o proteaz neutr cu Zn, dependent de Ca, care cliveaz cteva substraturi:
mucina, fibronectina, lactoferina.
Aeromonas hydrophila, un patogen oportunist pentru om i peti, produce o varietate de substane extracelulare,
inclusiv proteaze, ce condiioneaz virulena. Metaloproteaza de A. hydrophila are activitate esterazic, dar nu citotoxic.
S. marcescens este un patogen oportunist. Secret o metaloproteaz, ca factor de virulen n infeciile pulmonare.
Enzima degradeaz fibronectina, colagenul i cteva proteine serice.
Multe proteaze bacteriene extracelulare sunt sintetizate ca precursori cu un peptid suplimentar (propeptid), care este
clivat i nu se regsete n proteina matur secretat. Propeptidul are rolul de a menine proteaza n stare inactiv n
interiorul celulei, protejnd celula de efectul proteazei. Poate avea rol n plierea proenzimei ntr-o conformaie necesar
pentru activitate sau pentru secreie; poate ancora proteaza de membran.
Mecanismul clivajului nu este cunoscut: s-a sugerat o prelucrare autoproteolitic.
Alte enzime degradative. C. perfringens produce lecitinaza care atac lecitina (fosfatidil-colina), lipidul membranar
major i este hemolitic. S. aureus secret coagulaza, care n asociaie cu factorii sanguini produce coagularea plasmei i
formeaz o reea de fibrin pe suprafaa celulei bacteriene, cu efect protector fa de fagocite.
Hialuronidazele, enzime ce hidrolizeaz acidul hialuronic din substana fundamental a esutului conjunctiv sunt
produse de stafilococi, streptococi i de anaerobi. Streptococii hemolitici produc streptokinaza (fibrinolizina), ce activeaz
o enzim proteolitic a plasmei i dizolv coagulul plasmatic, favoriznd diseminarea streptococilor n esuturi.
Streptokinaza a fost folosit n tratamentul infarctului miocardic acut, pentru a dizolva cheagul de fibrin.
Toxinele termostabile (secretate de Yersinia pestis, Citrobacter freundii, Vibrio mimicus) sunt polipeptide scurte
bogate n Cys, care activeaz calea guanilat-ciclazei a celulei gazd, deoarece prezint omologie cu guanilina, activator
endogen al guanilat-ciclazei intestinale.
Toxinele care acioneaz asupra citoscheletului celulei gazd (toxinele A i B de la Clostridium difficile,
exoenzima de C3 de la C. botulinum, factorii citoxici necrozani - cytotoxic necrotizing factor (CNF) 1,2 de la E. coli)
altereaz polimerizarea actinei gazdei prin aciunea asupra proteinelor Rho, Ras, Rac (proteine care leag GTP-ul).
Proteinele familiei Rho leag GTP i mediaz polimerizarea actinei celulare, avnd rol n organizarea
citoscheletului, n formarea veziculelor de transport, n creterea i diviziunea celulei i desfurarea ciclului celular,
particip la procesele de transducie a semnalelor, sunt implicate n endocitoza mediat de receptor i secreie, controleaz
transcrierea, apoptoza i transformarea celular i sunt inta aciunii toxinelor bacteriene.
Proteinele Rho sunt GTP-aze mici, controlate prin ciclul GTP-azei: sunt inactive n forma legat de GDP, dar se
activeaz dup trecerea GDP n GTP. Invers, hidroliza GTP legat, inactiveaz proteinele.
Exoenzimele i moleculele nrudite

54

Pe lng exotoxine, celulele bacteriene produc o serie de exoenzime implicate n liza celular, denaturarea
moleculelor care formeaz jonciunile intercelulare, formarea i dizolvarea cheagurilor sanguine: leucocidine
(Streptococcus, Staphylococcus) implicate n alterarea fagocitozei, hemolizine (Streptococcus, Staphylococcus, C.
perfringens) care produc liza eritrocitar, coagulaze (Staphylococcus) implicate n coagularea fibrinogenului plasmatic,
kinaze (Str. pyogenes streptokinaz, S. aureus - stafilokinaz) ce produc denaturarea i dizolvarea cheagului de fibrin,
hialuronidaza implicat n hidroliza acidului hialuronic (Clostridium, Pseudomonas), colagenaza implicat n denaturarea
colagenului, factori necrozani, hipotermici, lecitinaze, proteaze, siderofori.
Endotoxinele (LPS) sunt relativ termostabile i mai puin toxice dect exotoxinele, iar efectele lor sunt lipsite de
specificitate. Din punct de vedere chimic, endotoxinele LPS sunt macromolecule complexe ce conin fosfolipide i
polizaharide, toxicitatea lor este indirect, iar activitate biologic se manifest la concentraii mari.
Termenii de LPS i endotoxin sunt folosii cu sensuri echivalente, dar LPS semnific moleculele purificate,
iar denumirea de endotoxin desemneaz complexul format din LPS i proteinele asociate din membrana extern.
LPS sunt molecule amfifile, cu o parte hidrofob, capabil s se dizolve n lipidele membranare i o regiune
hidrofil, care poate rmne n faza apoas. O prim treapt a aciunii LPS o constituie interaciunea dintre molecula
amfifil i suprafaa celulei sensibile. Molecula LPS poate fi inserat n membrana celulei prin jumtatea hidrofob sau se
ataeaz de receptorii membranari prin jumtatea hidrofil. O modalitate distinct a interaciunii LPS cu macrofagele, este
aceea mediat de o protein plasmatic de faz acut denumit LBP (LPS binding protein).
Sursele majore de endotoxine sunt urmtoarele: 1) septicemia cu bacterii Gram-negative; 2) bacterii originare n
microbiota intestinal, datorit leziunilor mucoasei.
O particularitate a LPS, n contrast cu aciunea exotoxinelor, const n aceea c simptomele toxice nu se datoreaz
aciunii lor directe asupra celulelor sensibile, ci sunt mediate, n mare parte, de citokinele sintetizate de novo de
macrofage, ca rspuns la LPS.
LPS sunt molecule foarte imunogene prin stimularea nespecific, policlonal a limfocitelor B. Anticorpii au
specificitate fa de polizaharidul extern i precipit LPS, dar nu neutralizeaz efectele lor toxice. Rspunsul imun este de
tip primar, deoarece molecula de LPS este un antigen timo-independent, cu grupri antigenice repetitive.
Lipidul A are proprieti imunogene, iar anticorpii specifici reacioneaz ncruciat cu lipidul A al altor
endotoxine, datorit uniformitii structurii sale.
Antigenul polizaharidic, obinut prin hidroliza acid i pstreaz proprietatea de specificitate, dar nu este
imunogen, avnd proprietatea de hapten.
Efectele endotoxinei se manifest att n stare fizic legat de celul, ct i dup ce a fost eliberat prin moartea i
liza celulei sau printr-un proces de nmugurire, care nu influeneaz viabilitatea acesteia. Din aceast cauz, cele dou
stri, endotoxemia i bacteriemia pot s coexiste sau s se manifeste n etape distincte ale procesului infecios.
Proprietile endotoxice ale celulelor bacteriene, vii sau omorte, sunt aceleai cu ale preparatului de endotoxin. n
organismul infectat nu exist o corelaie linear ntre nivelul bacteriemiei i al endotoxemiei i respectiv, intensitatea
efectelor endotoxice. Capacitatea organismului de a detoxifica este un factor modulator esenial al manifestrilor
endotoxice. Glucocorticoizii au efect protector anti-endotoxic, probabil prin modificarea permeabilitii capilare.
Endotoxinele nu au rol n colonizarea i penetrarea suprafeei mucoase, deoarece lipidul A are o localizare
profund n membrana extern. Tulpinile invazive i neinvazive de Salmonella produc cantiti similare de endotoxin.
Endotoxina are rol n iniierea infeciei, probabil prin inducerea unei scderi tranzitorii a capacitii de aprare a gazdei,
prin ntrzierea declanrii unui rspuns inflamator.
Dozele mici de toxin mresc rezistena organismului la infeciile bacteriene i virale prin stimularea activitii
fagocitare i respectiv, a producerii de interferon.
Endotoxinele iniiaz calea alternativ a activrii complementului, dar efectul nu este bacteriocitoliza, deoarece
reacia se produce la distan de membrana extern. In vitro au efect mitogenic asupra limfocitelor B. LPS au proprieti
adjuvante, deoarece stimuleaz rspunsul imun specific fa de un antigen administrat simultan.
Dozele mari de endotoxine determin o serie de manifestri patologice sistemice, nespecifice:
- hipertermie (febr), prin aciunea lor asupra centrilor termoreglrii, chiar dup administrarea unor doze minimale.
Inducerea febrei este semnul marcant al toxicitii LPS. Febra este efectul indirect al aciunii LPS asupra
macrofagului, care secret cteva citokine: IL-1, TNF , IFN , cu aciune direct asupra hipotalamusului. Starea
febril se instaleaz brusc, este monofazic, mediat de prostaglandine;
- leucopenie urmat de leucocitoz. Efectul se exercit direct i rapid asupra leucocitelor. Ele prsesc patul vascular i
se retrag aproape instantaneu n plmn i n alte esuturi, n proporie de circa 60%. Dupa circa 4 ore, numrul
leucocitelor circulante crete peste limitele normale. Crete numrul hematiilor circulante, datorit eliberrii n
circulaie a rezervelor celulare din centrele de formare i depozitare a eritrocitelor;

55

modificri cardiovasculare: legarea endotoxinei de celulele hepatice sau de alte celule induce eliberarea rapid a
aminelor biogene (histamina, serotonina) i a peptidelor (bradikinina) din depozitele celulare. Aminele produc o
hipertensiune tranzitorie, urmat de hipotensiune sever, hipovolemie i formarea cheagurilor vasculare de fibrin.
Endotoxinele activeaz sistemul de coagulare sanguin;
- efecte metabolice: endotoxina inhib sistemele enzimatice ale gluconeogenezei i ale sintezei glicogenului.
Din punct de vedere clinic, dozele mari de endotoxin produc urmtoarea secven de modificri: frison, febr,
somnolen, dispnee, modificri ale dinamicii tranzitului intestinal, diaree sanguinolent, hiperglicemie incipient urmat
de hipoglicemie, paralizie, com, moarte. Acest tablou de modificri se succede n circa 24 de ore dup injectarea
preparatului la animalele sntoase i corespund strii de oc endotoxic, consecin a endotoxemiei (fig. 53). Endotoxemia
este rezultatul suprancrcrii celulelor cu rol de aprare, ca urmare a revrsrii endotoxinelor n circulaie. Starea de
endotoxemie nu este totdeauna urmat de oc i moarte. Nu se cunosc cauzele marilor diferene de rspuns i reactivitate,
la starea de endotoxemie. ocul fatal este consecina interaciunii endotoxinei cu sistemul de coagulare a sngelui, pe care
l activeaz i l amplific. S-a emis ipoteza c instalarea ocului ireversibil este favorizat de absorbia n snge a
endotoxinelor produse de microbiota intestinal. n mod normal, mecanismele de detoxifiere a organismului sunt
eficiente, dar starea de oc se instaleaz consecutiv diverselor tulburri funcionale, care mpiedic o reactivitate optim
fa de infecia cu bacterii Gram-negative.
ocul este consecina unui rspuns inflamator intens la produsele de origine microbian. Inflamaia este reacia de
mobilizare a componentelor humorale (anticorpi, complement) i celulare (neutrofile, macrofage, limfocite T) ale
sistemului imunitar. Celulele activate, dar n special celulele seriei monocit/macrofag iniiaz sinteza unei cantiti mari de
mediatori specializai: citokine, chemokine, mediatori lipidici. Mediatorii altereaz permeabilitatea vascular i fluxul
sanguin. Crete aderena fagocitelor la celulele endoteliale i se intensific migrarea leucocitelor n esut. De cele mai
multe ori, procesul inflamator are ca rezultat eliminarea agentului infecios, sterilizarea focarului i regenerarea tisular.
Rspunsul biologic net inflamaiei este determinat de raportul mediatorilor proinflamatorii i anti-inflamatorii. ocul este
consecina unui dezechilibru major n favoarea mediatorilor proinflamatorii. TNF i IL-1 sunt considerai a fi cei mai
importani mediatori ai rspunsului inflamator. In vivo, aciunea lor este sinergic, ntr-o infecie local sau sistemic.
Blocarea ambelor citokine cu anticorpi specifici diminu mult severitatea inflamaiei.

Fig. 53. Efectele patologice ale endotoxinelor (dup Kaiser, 2005)

Porphyromonas gingivalis, H. pylori i Chl. trachomatis, asociate cu maladii inflamatorii cronice, conin LPS cu
activitate biologic sczut, adic stimuleaz puin sinteza de mediatori ai inflamaiei. Aceste LPS au mai puini acizi
grai i grupri fosfat ataate de lipidul A.
Starea de oc este indus de bacteriemia cu bacterii Gram-negative i se datoreaz eliberrii masive a endotoxinei,
spontan sau consecutiv lizei bacteriene. Unii pacieni tratai cu antibiotice eficiente pot sucomba datorit ocului produs
de eliberarea masiv a endotoxinelor din bacteriile omorte. Antibioticele -lactamice sunt cele mai eficiente pentru

56

eliberarea endotoxinei n exces. Capacitatea lor de a elibera endotoxina este dependent de afinitatea de legare la diferite
proteine ale membranei externe.
Capacitatea de a elabora toxine nu este limitat la bacteriile patogene propriu-zise. Numeroase saprobacterii
produc substane toxice, uneori foarte puternice (de exemplu, toxina botulinic produs de Cl. botulinum). Toxigenitatea
bacterian variaz la diferitele tulpini ale aceleiai specii i este dependent de condiiile de mediu.
4.6. Proprieti metabolice particulare implicate n virulena bacterian
Multe bacterii patogene i comensale folosesc acizii sialici ca surse de C, N, energie i de zaharuri aminate pentru
sinteza peretelui celular. Metabolizarea acidului sialic este un factor de virulen pentru civa ageni infecioi.
Cunoaterea mecanismelor metabolismului acidului sialic unific studiul interaciunilor gazd-ageni patogeni ai unor
maladii infecioase invazive.
Acidul sialic este un component ubiquitar al glicoproteinelor vertebratelor i are o poziie terminal n
glicoconjugatele celulelor gazd, fiind molecula care mediaz interaciunea celul-agent infecios.
Dup ce este preluat n celul prin transportori de mare afinitate, acidul sialic poate fi clivat i rezult ManNAc i
piruvat. Piruvatul intr n metabolismul intermediar ca fosfo-enol-piruvat (pe calea EMP) sau pe calea acetil-CoA (ciclul
Krebs), iar ManNAc este convertit la fructozo-6P i intr n calea glicolizei.
V. cholerae secret propria sialidaz (neuraminidaz) o glicohidrolaz ce cliveaz legturile glicocetozidice ale
enterocitelor prin reacie exohidolitic, elibernd acidul sialic pentru catabolism.
O alt funcie a sialidazei microbiene este modularea imunitii nnscute a gazdei. n focarul inflamator crete
concentraia acidului sialic, pe o cale independent de sialidaza microbian. Neutrofilele atrase n focarul inflamator,
stimulate de IL-8, mobilizeaz sialidaza intracelular proprie la suprafaa celulei, elibernd acidul sialic din moleculele
proprii i din glicoproteinele moleculelor nconjurtoare pentru a fi preluat de agenii infecioi care posed mecanisme
transportoare de nalt afinitate (TRAP= tripartite ATP-independent periplasmic transporters).
Unele specii de bacterii patogene sintetizeaz acidul sialic: E. coli K1, N. meningitidis sintetizeaz material
capsular cu o structur chimic identic: poli-acid sialic.
4.7. Reglarea expresiei factorilor de virulen
La bacterii au fost descrise o serie de mecanisme implicate n reglarea i coordonarea expresiei factorilor de
virulen i patogenitate:
- Sistemele de reglare cu 2 componente (quorum sensing and response) cu o distribuie ubiquitar n lumea
bacterian (Erwinia carotovora, E. chrysanthemi, E. stewartii, E. herbicola, Ps. aeruginosa, Ps. fluorescens, Ps.
syringae, Ps. solanaceum, Ps. aureofaciens, Chromobacter violaceum, Rhizobium meliloti, R. leguminosarum bv.
phaseoli, R. leguminosarum bv. viciae, Photobacterium (Vibrio) fischeri, Aeromonas hydrophila, Vibrio
anguillarum, V. harveyi, V. cholerae, Serratia liquefaciens, S. marcescens, Y. enterocolitica, E. coli, Enterobacter
agglomerans, Caulobacter crescentus, Brucella abortus, Streptomyces sp., Mixoxoccus xanthus, B. subtilis, S.
aureus, Str. pneumoniae, Str. mutans, Str. pyogenes, Lactococcus lactis, Enterococcus faecalis, A. tumefaciens);
- Familia activatorilor transcrierii Ara C - proteine ce conin motive helix-turn-helix, care se leag la secvene
specifice de ADN n amonte de genele reglate i transcrise (ex. Vir F la S. flexneri, reglatorul proteinelor Yops la
Yersinia, al exoenzimelor A i S de la Ps. aeruginosa;
- Reglatorii transcrierii Lys R - proteine care se leag la molecula de ADN, n aval de genele reglate i transcrise
(ex. activatorul Spv R de la Salmonella, localizat plasmidial, regleaz expresia altor factori de virulen (Spv A
Spv D), jucnd un rol important n supravieuirea pe termen lung la oarece);
Sistemele reglare Fur (feric uptake regulator) - protein care leag ADN numai n prezena Fe, iar
legarea sa duce la represia tuturor genelor situate n aval. n absena Fe, genele sunt transcrise (astfel condiiile limitative
n ceea ce privete concentraia ionilor de Fe pot derepresa expresia factorilor de virulen);
Topologia ADN - enzime care influeneaz gradul de suprarsucire sau proteine histon-like implicate n
exprimarea unor factori de virulen: factori de invazie la S. typhimurium, exprimarea pililor la Neisseria sp., formarea
corpilor elementari la Chl. trachomatis);
Factorii alternativi tip sunt reglatori ai transcrierii, grupai n dou familii de proteine, 70 i 54, care
confer specificitate de recunoatere a promotorilor de ctre ARN-polimeraz, contribuie la separarea catenelor de ADN
complementare i la iniierea transcrierii, fiind implicai n expresia factorilor de virulen la numeroase specii bacteriene
(Salmonella, B. bronchiseptica; Bacillus sp.); n prezent, blocarea funcionrii mecanismelor de reglare prin intermediul
factorilor constituie o nou abordare n strategiile anti-patogenice (Kazmierczak i colab., 2005);
Modificri epigenetice - metilarea post-replicativ a ADN la nivelul adeninei, influeneaz virulena
diferiilor ageni patogeni ai omului i animalelor: E. coli, Salmonella, Vibrio, Yersinia, Haemophilus i Brucella.

57

Fenomenul ce implic metilarea ADN la bacterii este variaia de faz. n variaia de faz, gena funcional se
caracterizeaz prin alternana ntre activitate (on) i inactivitate (off).
4.8. Evoluia bacteriilor patogene
Bacteriile trebuie s se adapteze permanent schimbrilor de mediu pentru a putea supravieui, elabornd n acest
scop strategii evolutive bazate pe diversitatea genetic, realizat prin: mutaii punctiforme (deleii), rearanjri genomice
(reversibile sau ireversibile) (de exemplu, variaia de faz la Salmonella, Moraxella), transferul orizontal de gene (TOG)
localizate pe elemente genice mobile (plasmide, fagi, insule de patogenitate).
TOG conduce la microevoluie (apariia rapid a noilor variante, n termen de zile/sptmni, aa cum este cazul
insulelor de patogenitate care pot suferi inserii sau deleii specifice de sit care genereaz rezistena la antibiotice) sau la
macroevoluie (stabilizarea noilor genotipuri prin mutaii pato-adaptative i apariia variantelor noi, generarea noilor
specii, emergena noilor genuri bacteriene).
Mutaiile punctiforme pot aprea la nivelul:
- regiunii promotor (de exemplu, variaia de faz sau antigenic la meningococ, Mycoplasma, E. coli);
- extremitilor 5 ale genelor de virulen;
- genelor reglatoare (factorul alternativ );
- genelor structurale mutaii pato-adaptative care permit unei bacterii s devin mai bine adaptat la o anumit
ni. Conferind un avantaj adaptativ, mutaiile se stabilizeaz n populaiile bacteriene. Dac bacteriile mutante pot
supravieui chiar i n niele naturale, atunci se va selecta o subpopulaie de bacterii virulente. Mutaiile genelor
structurale permit adaptarea bacteriilor patogene n absena dobndirii unor gene suplimentare. Patogenii
oportuniti pot suferi diferite mutaii pato-adaptative care s favorizeze adaptarea la condiiile gazdei.
Deleiile reprezint unul dintre principiile majore ale plasticitii genomice. De exemplu, la Streptomyces,
emergena noilor variante are loc prin deleia unor segmente de 800 kpb. La B. subtilis excizia fragmentelor de ADN din
regiunea codificatoare duce la apariia unor noi variante. Deleia permite integrarea sau excizia plasmidelor, integrarea
specific de sit sau deleia secvenial a insulelor de patogenitate.
Insulelele de patogenitate sunt uniti genetice distincte, flancate de secvene repetate, cu un coninut de GC
diferit de cel al cromosomului bacterian, de dimensiuni mari (> 30 Kpb) care prezint mai multe gene de virulen,
asociate cu gene pentru ARNt i/sau cu secvene de inserie. Insulele de patogenitate sunt prezente la tulpinile patogene i
absente sau puin reprezentate la tulpinile nepatogene, sunt instabile i prezint gene mobile (SI, integrare, transpozaze,
origini de replicare plasmidial). Insulele de patogenitate se integreaz pe cromosomul bacterian la nivelul genelor pentru
ARNt.
Evenimentele de recombinare specific de sit (deleii, inversii, amplificare genic, rearanjri ale ADN bacterian
mediate de secvene de inserie) conduc la apariia fenomenului de variaie antigenic (sinteza pililor la N. gonorrhoeae,
capsulei la Str. pneumoniae), sau la apariia unor noi mecanisme de rezisten (rezistena la penicilin la Str.
pneumoniae).
Transferul orizontal al genelor (plasmide, fagi, insule de patogenitate) asigur diseminarea genelor codificatoare
pentru factori de virulen (adezine, toxine, capsul, invazine, rezistena la antibiotice).
Caracterizarea genelor de patogenitate/virulen se poate realiza experimental prin:
construcia mutanilor (mutaii non-letale, mutaii monogenice, stabile);
inserie de Tn care are drept consecin inactivarea genic i permite caracterizarea funcionalitii in vitro i
respectiv, in vivo);
localizarea unei gene inactivate prin hibridizare, caracterizarea numrului de SI prin southern blot, caracterizarea
secvenelor flancate prin RFLP, secveniere;
clonare i expresia genei ntr-un vector heterolog pentru identificarea unei posibile funcii ale respectivei gene;

sonde intragenice;
primeri de amplificare.

4.9. Relaia dintre patogenitate i parazitism


Relaiile dintre bacteriile patogene i organismele gazd sunt foarte variabile. Multe bacterii infecioase pot s se
dezvolte n mediile naturale i s intre n competiie cu microorganismele indigene. Alteori ns, bacteriile patogene sunt
strict dependente de o gazd animal pentru perpetuarea lor n natur, dar pot supravieui perioade relativ lungi n mediile
naturale.
Dependena absolut de gazd are mai multe cauze, cea mai probabil fiind determinat de existena unor
exigene nutriionale complexe.

58

Modul de via parazitar implic pierderea funciilor ce asigur supravieuirea n mediile naturale. Evoluia
dependenei de gazd tinde spre o adaptare ct mai eficient a creterii in vivo. Situaia extrem a acestei adaptri
este tolerana reciproc ce evolueaz n direcia unei simbioze.
Bacteriile patogene cel mai bine adaptate sunt cel mai adesea capabile de cretere intracelular, iar cele
oportuniste sau facultativ parazite au o localizare extracelular. Pe aceast baz s-au descris trei categorii de bacterii
parazite: parazite extracelulare, facultativ intracelulare i obligat intracelulare.
Bacteriile parazite extracelulare colonizeaz n mod normal pielea i mucoasele, dei unele specii invadante se
pot dezvolta n snge i n limf. Supravieuirea lor in vivo este condiionat de rezistena la fagocitoz. Ele colonizeaz
zone inaccesibile fagocitozei sau sintetizeaz substane cu aciune antifagocitar: leucocidine i polizaharide capsulare.
Leucocidinele sunt factori de virulen care omoar fagocitele profesioniste. Au fost descrise la S. aureus, Str.
pyogenes, Ps. aeruginosa.
Multe bacterii patogene sunt omorte curnd dup ce au fost ingerate de neutrofile sau de macrofage. Unii ageni
patogeni evit fagocitoza sau aciunea mecanismelor microbicide ale fagocitelor. De exemplu, S. aureus are proteina
A pe suprafaa sa, care leag regiunea Fc a IgG. Capsula (la Str. pneumoniae) exercit aciune antifagocitar pe mai
multe ci:
- este o barier fizico-chimic, mpiedicnd legarea factorilor opsonizani pe suprafaa celulei bacteriene;
- blocheaz contactul celulei bacteriene cu receptorii fagocitelor;
- are efect chimiotactic negativ.
Puine bacterii (Capnocytophaga, Bordetella) secret factori solubili sau toxine cu efect inhibitor al chimiotaxiei
leucocitelor i inhib fagocitoza.
Str. pyogenes (grup A) are proteina M de suprafa, cu efect antifagocitar; N. gonorrhoeae posed pili cu acelai
efect.
Heterogenitatea antigenic a structurilor de suprafa este un factor major al virulenei multor ageni patogeni: sau identificat peste 90 de variante antigenice ale polizaharidului capsular la Str. pneumoniae i peste 150 de variante ale
proteinei M la streptococii de grup A. Consecina heterogenitii antigenice este c organismul gazd se apr fa de
varianta antigenic infecioas, dar rmne sensibil fa de celelalte variante.
Bacteriile patogene parazite facultativ intracelular se multiplic att extracelular, dar pot ptrunde i n celulele
gazdei. Unele se multiplic n fagocitele neprofesioniste sau n alte tipuri de celule, dar nu i n macrofage (de exemplu,
Shigella, N. gonnorhoeae). Altele sunt capabile s se multiplice n fagocitele neprofesionoiste, dar i profesioniste.
Ele rezist atacului enzimelor litice n vacuolele fagosomilor. Rezistena bacterian se datoreaz prezenei
lipopolizaharidelor pe suprafaa celulei.
Bacteriile parazite obligat intracelulare se dezvolt exclusiv n celulele vii, dar pot supravieui i n mediile
extracelulare.
4.10. Microorganismele oportuniste
Sub aceast denumire sunt reunite bacterii, microfungi, protozoare care produc infecii la gazde compromise sub
raportul capacitii de aprare.
Conceptul de microorganism oportunist este ambiguu, deoarece definiia nu exclude producerea infeciei la o
gazd, ale crei capaciti de aprare sunt depite de doza infectant sau de virulena crescut a microorganismelor.
Pentru microorganismele oportuniste, starea de funcionalitate a mecanismelor de aprare este determinant n
ceea ce privete rezultatul interaciunii sale cu gazda. Microorganismele oportuniste nu au mijloacele eficiente pentru a
depi mecanismele de aprare ale gazdei. Oportunitii pot fi foarte adaptai s produc infecii, dar datorit situsului
preferat de cretere (de exemplu, suprafaa mucoasei) i a unor condiii preferabile de cretere (de exemplu, condiii de
microaerofilie), rareori au ansa s produc procesul patologic.
Dup von Graevenitz ( l977) microorganismele oportuniste pot produce trei tipuri de infecii:
- exclusiv la gazdele compromise imunologic (Mycobacterium avium, Corynebacterium equi);
- cu o frecven mai mare la gazdele imuno-compromise (Staphylococcus, Salmonella);
- mai severe la gazdele imuno-compromise (Mycoplasma pneumoniae, Salmonella).
Microorganismele care produc infecia clinic numai la gazde neimunizate (de exemplu, C. diphteriae) nu sunt
oportuniste.
Microorganismele oportuniste formeaz o categorie distinct de a celor saprobionte. Cele saprobionte triesc pe materia
organic n descompunere i nu intr n competiie cu microbiota normal a organismului. Cele oportuniste pot fi
saprobionte, nu fac parte din microbiota normal, dar intr n competiie cu microbiota normal a organismului. Unii
membri ai acesteia pot produce infecii oportuniste.

59

Pentru ca un agent s fie ncadrat n categoria microorganismelor oprtuniste, von Graenevitz ia n consideraie
urmtoarele condiii:
- microorganismul s fie izolat de mai multe ori din leziuni clinice, de la gazde cu deficit la funciei imuntare;
- sa fie mai frecvent prezent i izolat de la gazde compromise imunologic, dect de la restul populaiei;
- prezena sa ntr-un proces patologic s nu se datoreze unor cauze indirecte.
Ps. aeruginosa supravieuiete n diferite soluii, n care substanele nutritive se gsesc n cantiti infime i chiar n
soluiile dezinfectante. Organismul uman, n mod obinuit, mpiedic colonizarea pseudomonadelor, dar la persoanele
imunocompromise i n rnile provocate de arsuri sau de traumatisme, ca i n plamnii pacienilor cu fibroz chistic, Ps.
aeruginosa este prezent ntotdeauna.

60

5. EVOLUIA PROCESULUI INFECIOS


5.1. Etapele procesului infecios
O prim etap a procesului infecios const n ptrunderea i colonizarea esuturilor gazdei la poarta de intrare n
organismul gazd (tabelul 4), ceea ce presupune mobilizarea unor strategii microbiene care s depeasc bariera de
aprare anti-infecioas cutaneo-mucoas.
Intoxicaia botulinic, fr colonizarea organismului gazd reprezint o excepie. Cl. botulinum se multiplic n
alimentele conservate i produce toxina, care, odat ingerat cu alimentele contaminate, determin intoxicaia.
Tabelul 4. Porile de intrare pentru diferii ageni patogeni n organismul uman

Tractul
respirator

Patogen
Str. pneumoniae

M. tuberculosis
B. pertussis
Virusul influenza
Virusul rujeolei
(Morbillivirus)
Virusul rubeolei
(Rubivirus)
Virusul Epstein-Barr
(Lymphocryptovirus)
Varicella zoster
(Varicellavirus)
Histoplasma capsulatum
Tractul
gastro- Shigella
intestinal
Brucella

Tractul genitourinar

Piele sau ruta


parenteral

S. enteritidis
S. tyhphimurium
S. cholerasuis
S. typhi
Virusul hepatitei A
Paramyxovirus
Trichinella spiralis
N. gonorrheae
T. pallidum
Chl. Trachomatis
HSV 2
HIV
Candida
Cl. Perfringens
Cl. Tetani
Ricketssia ricketssii
Virusul hepatitei B
(Hepadnavirus)
Virusul rabic
(Lyssavirus)
P. malariae

Boala
Pneumonia
pneumococic
TBC
Tusea convulsiv
Gripa
Rujeola

Perioada de incubaie
Variabil

Rubeola

2-3 spt.

Mononucleoza
infecioas
Varicela

2-6 spt.

Histoplasmoza
Dizenteria bacilar
Bruceloza/febr
ondulant
Salmoneloze

5-18 zile
1-2 zile
6-14 zile

Febra tifoid
Hepatita acut A
Oreion
Trichineloz
Gonoree
Sifilis
Uretrit negonococic
Herpes
SIDA
Candidoz
Gangren gazoas
Tetanus
Febra
Munilor
Stncoi
Hepatita B

14 zile
15-50 zile
2-3 spt.
2-28 zile
3-8 zile
9-90 zile
1-3 spt.
4-10 zile
10 ani

Rabia

10 zile-1 an

Malaria

2 sptmni.

Variabil
12-30 zile
18-36 h
11-14 zile

14-16 zile

7-22 h

1-5 zile
3-21 zile
3-21 zile
6 spt.-6 luni

61

La nivelul tractului respirator superior, intestinului, tractului uro-genital, microorganismele patogene ntr n
competiie cu microbiota rezident, care exercit n mod direct i indirect activitate antimicrobian (prin privarea de
substane nutritive, ocuparea siturilor de legtur de la suprafaa mucoasei, producerea substanelor inhibitoare). Efectul
protector al microbiotei rezidente este contracarat de microorganisme prin intermediul unei varieti de factori, care le
confer capacitatea de a invada gazda, de a se rspndi n esuturi i de a supravieui mecanismelor de aprare ale acesteia.
Dac agenii patogeni rmn localizai la poarta de intrare n cursul ntregului proces infecios se produce infecia
localizat (neinvaziv). O form particular a infeciei localizate este infecia de focar, caracterizat de constituirea unui
focar de inflamaie, adic o reacie de aprare local a organismului, cu mobilizarea i aglomerarea leucocitelor.
Rezultatul inflamaiei este supuraia la nivel cutanat i la nivelul mucoaselor respiratorie, digestiv, urinar, genital.
Febra reumatismal este considerat ca o infecie tipic de focar, n timpul creia streptococul localizat la poarta de
intrare (amigdale) elimin substane cu efect alterativ i alergizant.
n alte cazuri, microorganismele cantonate la poarta de intrare secret toxine care disemineaz sistemic i i
manifest aciunea la distan (de exemplu, C. diphteriae, Cl. tetani) (fig. 54). n aceste cazuri, infecia local are
caracterul unei toxiinfecii. De exemplu, Cl. tetani se multiplic n plaga anaerob provocat de rnire, iar toxina ajunge
prin difuzie axonal retrograd, la motoneuronii din coloanele anterioare ale mduvei, unde i exercit efectul. n mod
similar, C. diphteriae se multiplic pe mucoasa faringian, iar toxina determin efecte patologice la distan, asupra fibrei
musculare cardiace, celulei nervoase sau glandelor suprarenale.
Toxiinfeciile alimentare sunt rezultatul consumului alimentelor infectate (carne, lapte, ou) provenite de la
animalele bolnave sau contaminate n timpul manipulrii. De exemplu, Salmonella sp. i S. aureus se multiplic excesiv n
alimente (carne) i concomitent se acumuleaz endotoxine i respectiv enterotoxine.
Consumul alimentelor echivaleaz cu ingestia unei culturi bacteriene. Concomitent cu efectele toxinelor se
manifest i procesul infecios iniiat de celulele vii ingerate, de colonizare a mucoasei intestinale.
Unii ageni patogeni, dup o perioad iniial de multiplicare la poarta de intrare, se rspndesc la distan pe
diferite ci genernd infeciile invazive:
- prin contiguitate, tipic agenilor infecioi cu multiplicare intracelular (virusuri, rickettsii). Dup eliberare prin
necroza celulei, prin nmugurire, prin permeabilizarea sau ruperea membranei, agenii infecioi infecteaz celulele
sensibile nvecinate;
- prin continuitate, n cazul agenilor patogeni care se multiplic ntr-un esut prevzut cu un sistem canalicular. De
exemplu, infeciile respiratorii progreseaz de la nivelul tractului respirator superior spre bronhii (bronite), esutul
pulmonar (pneumonii), pleure (pleurite), n timp ce la nivelul tractului urogenital i a cilor biliare, infecia
progreseaz ascendent, de la nivelul uretrei spre rinichi. De la nivelul apendicelui, agentul diseminat poate produce
peritonita;
pe cale limfatic. De la nivelul focarului infecios primar, agenii infecioi sunt preluai de curentul limfatic.
Consecina imediat este inflamarea vaselor limfatice i a ganglionilor regionali (limfadenita). Infecia poate progresa
prin deversarea limfei n snge, rezultatul fiind bacteriemia sau viremia.
Bacteriemia semnific prezena unui numr mic de bacterii n torentul circulator, pentru o perioad strict limitat
de timp. Sistemele de aprare, n special sistemul fagocitar elimin bacteriile circulante. Bacteriemia este consectiv
proceselor infecioase acute pulmonare, interveniilor chirurgicale, extraciei dentare, absorbiei intestinale i chiar
periajului dentar. n snge, cu rare excepii (bacilul crbunos, al pestei) bacteriile nu se multiplic.
De aceea, prezena lor n snge semnific o eliberare dintr-un focar de infecie, att de abundent, nct, temporar,
depete capacitatea protectoare a mecanismelor de aprare a organismului.
Extinderea infeciei pe una dintre cile menionate poate determina fie o infecie regional, care corespunde
extinderii infeciei (diseminarii) pe teritorii ntinse (de exemplu, sistemul limfatic regional i eventual vasele sanguine
tributare zonei), fie o infecie generalizat.
Dintr-o infecie regional, agenii patogeni diseminai pe o cale adecvat pot dobndi localizri secundare, n orice
esut sau organ, unde iniiaz noi focare infecioase. Aceste localizri pot fi unice (de exemplu, pe valvele cardiace, n
plmni, meninge, ficat, vezica biliar, creier, rinichi etc.) sau multiple (miliare) denumite septicopioemii, care evolueaz
spre infecii generalizate.
Diseminarea sanguin determin infecii generalizate. Ele sunt precedate de trecerea masiv a bacteriilor dintr-un
focar infecios n snge i semnific incapacitatea mecanismelor de aprare a gazdei de a reaciona eficient fa de agentul
infecios. Existena stabil a unui numr mare de bacterii n snge caracterizeaz infecia septicemic. Septicemia este
consecina descrcrii masive de bacterii dintr-un focar de infecie, vascularizat. Starea septicemic poate fi nsoit de
toxemie, ca urmare a difuziei toxinelor din focar (abces, meningit).

62

Uneori, faza septicemic nu este precedat de multiplicarea agentului patogen la poarta de intrare. Agenii patogeni
ai infeciilor transmise de insectele hematofage (tifos exantematic, febra recurent) sau prin muctur (leptospiroze)
strbat mucoasele i trec direct n snge.

Fig. 54. Evoluia sistemului gazd - agent infecios (dup Wilson et al., 2002).

La ptrunderea unui agent infecios, organismul gazd mobilizeaz o serie de mecanisme de aprare nnscute, care
de cele mai multe ori reuesc s previn multiplicarea i propagarea agentului infecios, mpiedicnd astfel apariia bolii
(tabelul 5). n unele situaii, mecanismele de aprare nnscute nu sunt suficiente pentru eliminarea agentului infecios, iar
atunci intr n aciune mecanismele adaptative specifice fa de agentul infecios, mai eficiente, dar se activeaz dup o
perioad de laten mai mare (tabelul 6).
Tabelul 5. Mecanisme de aprare anti-infecioas la nivelul barierei cutaneo-mucoase.

Poarta de
Intrare
esut cutanat

Mecanisme de aprare anti-infecioas

Mucoas

Stratul de mucin reprezint o barier fizic, care capteaz bacteriile


Stratul de mucus conine: lizozim, sIgA care previne ataarea bacteriilor la celulele mucoasei,
lactoferin care prin legarea Fe previne multiplicarea bacteriilor; lactoperoxidaz, cu efect
microbicid prin generarea radicalului superoxid
Descuamarea periodic a celulelor mucoasei ndeprteaz bacteriile aderate la jonciunile
strnse i previne invazia printre celulele mucoasei
esutul limfoid asociat submucoasei (MALT).

Desicaie
pH acid
Variaiile de temperatur
Descuamarea celulelor epiteliale
Microbiota rezident la acest nivel (competiie pentru siturile de aderen i colonizare)
Foliculii piloi i glandele sebacee (conin lizozim i lipide toxice cu efect microbicid)
esutul limfoid subcutanat (SALT).

63

Mucoasa
conjunctival
Nazofaringe

Reflexul de clipire ndeprteaz periodic microorganismele ajunse la acest nivel


Secreia lacrimal (conine lizozim, sIgA, Lf)
Microbiota rezident
Secreii (lizozim, sIgA, Lf, fagocite)
Tractul respirator
Mucus
superior
Micri ciliare
Plmn
Macrofage
Cavitate bucal
Descuamarea periodic
Saliv (conine lizozim, sIgA, microbiota rezident, Lf)
Stomac
pH sczut
Enzime proteolitice
Intestin subire
Descuamarea periodic
Viteza mare a fluidului
Colon
Viteza sczut a fluidului
Descuamarea periodic
Microbiota rezident abundent.
Principala caracteristic a rspunsului adaptativ la o anumit infecie este instalarea memoriei imunitare.
Infecie
Imunitate nnscut

Boal

Boal

Imunitate dobndit

Vindecare

Reinfecie
Boal
Tabelul 6. Mecanisme de aprare nnscut care previn ptrunderea agentului infecios n organism.

Imunitate

nnscut

Adaptativ

Factori solubili

Lizozim, complement, CRP

Ac eficieni fa de microorganisme extracelulare

Celule

NK, fagocite

Limfocite T /eficiente fa de microoganisme


intracelulare

Primoinfecie
Infecie secundar

+
+

+
+++

Memorie

imunologic
specific
Interaciunea gazd-bacterie patogen
Bacterie patogen

gazd sensibil

Leziuni tisulare

64

Perturbarea homeostaziei
Boal
Leziunile tisulare sunt rezultatul producerii toxinelor sau a unor rspunsuri exagerate din partea gazdei infectate
(tabelul 7), mediate de interleukine pro-inflamatorii, activarea focarelor inflamatorii, inducerea sintezei autoanticorpilor
care pot conduce la distrugerea esuturilor (de exemplu, sechelele reumatismale dup infecia cu Streptococcus sp.,
spondilita anchilozant dup infeciile cu Klebsiella sp.), activarea policlonal a limfocitelor T de ctre superantigenele
bacteriene, cu efect mitogen asupra celulelor efectoare specifice ale rspunsului imun celular (enterotoxinele stafilococice,
toxinele sindromului de oc toxic, exotoxinele streptococice pirogenice, glicoproteinele de suprafa de la Mycoplasma
sau glicoproteinele virale).
Tabelul 7. Imunitate i imunopatologie post-infecioas

R.I. protector
Imunitate strict adaptativ:
alogenic
tranzitorie
Ac protectori:
neutralizani;
opsonizani (C, FcR);
citotoxici
- T4 TH1 (macrofag)/TH2 (Ac)

Rspuns imun exagerat


Alergii
Autoantigene (HLA)
Ac facilitatori, autoanticorpi

HSR

R.I.:
- T8 citotoxic

Citokine: IFN, TNF, IL-2

Celule autoreactive

TNF, IL-1 oc septic mediat de LPS

Infeciile bacteriene pot modula apoptoza celulelor gazdei, iniia inflamaia sau evita mecanismele de aprare ale
gazdei (de exemplu, M. avium i BCG blocheaz apoptoza celulelor gazdei, favoriznd astfel supravieuirea lor n celul).
Tulpinile de Salmonella sp. i Shigella sp. induc apoptoza macrofagelor i iniiaz astfel reacia inflamatorie;
Actinobacillus sp. i Bordetella sp. distrug macrofagele i evit aciunea fagocitelor; Staphylococcus sp. induce apoptoza
limfocitelor T, Listeria sp. induce apoptoza celulelor dendritice.
Noiunea de bacterie invaziv se refer la capacitatea celulei bacteriene de a supravieui i/sau multiplica n
macrofage. Nu ntmpltor bacteriile au dezvoltat mecanisme de adaptare la modelul intracelular reprezentat de
macrofage, aceste celule fiind un surogat pentru habitatele naturale ale anumitor ageni patogeni reprezentai de
protozoare.
Celulele bacteriene au elaborat o serie de strategii de supravieuire n macrofage, adaptarea la viaa
intracelular fiind considerat punctul culminat al strategiilor de evitare a efectorilor sistemului imunitar al gazdei (tabelul
8).
Bacteriile intracelulare s-au adaptat la supravieuirea n diferite compartimente ale celulei. Odat cu
evidenierea unor markeri de maturare i transport specifici pentru diferite vezicule intracitoplasmatice, s-a dovedit c
bacteriile intracelulare ocup compartimente intracelulare foarte variate. Astfel Shigella sp., Listeria sp. Rickettsia sp.
lizeaz membrana vacuolar i ajung n citoplasm, un mediu bogat n nutrieni, Coxiella sp. poate supravieui n mediul
lizosomal, iar Salmonella sp., Mycobacterium sp., Legionella sp. inhib fuziunea fagosomului cu lizosomul.
Pentru a ptrunde n celula gazd Salmonella sp. i EPEC sp. induc influxul Ca2+, n timp ce Shigella sp.
utilizeaz proteinele Rho pentru a induce polimerizarea actinei. Shigella sp.i Salmonella sp. produc rearanjri tranzitorii
ale filamentelor de actin, n timp ce EPEC induce formarea unei formaiuni de tip piedestal.

65

Supravieuirea n interiorul unei vacuole fagocitare este mediat de enzime care degradeaz proteinele lizozomale
ale gazdei, de capsula bacterian i de LPS. Salmonella sp. supravieuiete n mediu acid care i permite sinteza factorilor
necesari pentru persisten, n timp ce Legionella sp. previne acidifierea veziculei de endocitoz.
Anumite bacterii (Shigella sp. prin intermediul invazinei lpaB sau Listeria sp. cu ajutorul listeriolizinei i
fosfolipazelor) distrug vacuola i se multiplic n citoplasm. Dup liz, are loc condensarea actinei n jurul bacteriei i
organizarea unei comete de actin care propulseaz bacteria n citoplasm i spre celulele adiacente.
Tabelul 8. Mecanismele prin care diferii ageni patogeni invadeaz celulele gazdei.

Specia bacterian
Yersinia

Caracterul invaziv
Invaziv

Relaia cu celulele gazd


integrine

L. monocytogenes

Yad A
Ail
Internalin (IntA)

integrine
?
E-cadherin

Sh. flexneri

Ipa B-D

5 integrin

EPEC

Invaziv

Hp 90

Fagocitoz prin mecanism de fermoar,


bazolateral,
activat de tirozinkinaz
Fagocitoz prin mecanismul de
fermoar
Vluri membranare, rearanjri majore
ale citoscheletului
Formarea piedestalurilor i aderen
intim, invazie slab (dependent de
actin i microtubuli), acumularea
citoscheletului sub bacterii mediat de
tirozinkinaz.

Majoritatea bacteriilor induc reorganizarea filamentelor de actin pentru a penetra n interiorul celulei eucariote,
cu unele excepii (Neisseria sp., Campylobacter sp. sau Klebsiella sp. nu se multiplic n interiorul celulei gazd), care
utilizeaz microtubulii.
Bacteriile intracelulare se disemineaz prin disocierea jonciunilor intercelulare, cu traversarea membranei bazale
i deversarea n snge sau limf.
Un rol major n invazie l au celulele M care posed la suprafaa lor microviloziti i care au o puternic activitate
de endocitoz i coninut lizozomal redus, fiind capabile s internalizeze particulele din lumenul intestinal care nu sunt
degradate i care vor fi prezentate la suprafaa bazolateral a celulelor adiacente, aa cum sunt macrofagele (ex:
Salmonella sp., Shigella sp., Yersinia sp.) (tabelul 9).
Tabelul 9. Interaciunea unor ageni patogeni cu celulele M.

E.coli RDEC-1
V. cholerae
Campylobacter jejuni
Y. enterocolitica
Y. paratuberculosis
Sh. flexneri
S. typhi
S. typhimurium

Distrugerea microvililor/formarea
piedestalurilor, nu are loc invazia
Preluat n vacuole prin endocitoz
Invazia activ n vacuole
Idem
Idem
Invazia activ n vacuole, apoi eliberarea n
citoplasm i rspndirea intercelular
Voaluri membranare, degenerarea microvililor,
preluarea n vacuole, distrugerea celulelor M.

Succesul progresiei unei infecii invazive depinde de capacitatea celulei bacteriene de a interfera cu mecanismele
de aprare ale gazdei, n scopul supravieuirii interaciunii iniiale cu prima linie de aprare a gazdei, dezvoltrii unor
strategii pentru evitarea mecanismelor de aprare ale gazdei, alterarea direct a componentelor RI sau modularea acestui
rspuns (fig. 55, 56).

66

Fig. 55. Ilustrarea schematic a mecanismelor nespecifice de aprare anti-infecioas (dup Roitt, 2004).

Interaciunea celulelor bacteriene cu efectorii imunitari ai gazdei se realizeaz prin legarea celulelor bacteriene de
proteinele matricei extracelulare i mascarea antigenelor de suprafa bacterian, evitarea fagocitozei, inhibarea RFC (prin
intermediul capsulei, LPS), degradarea proteinelor complementului, strategii de preluare a Fe, variaia antigenic a
moleculelor de suprafa, legarea de regiunea Fc a moleculelor de Ig prin proteina A (S. aureus), legarea la heparin prin
intermediul hemaglutininelor filamentoase FHA (B. pertussis).
Mecanisme prin care microorganismele evit aprarea gazdei.
Infeciozitatea microorganismelor patogene este dependent de capacitatea lor de a coloniza esuturile gazdei i de
a contracara mecanismele de aprare a gazdei. Capacitatea de variaie rapid a moleculelor de suprafa este o trstur
evolutiv comun n tot spectrul patogenilor. Unele bacterii patogene au elaborat mecanisme ce permit variaia antigenic
rapid i eficient a unor componente ale suprafeei, precum i fenomenul variaiei de faz. Rata nalt de mutaie produce
un numr mare de variante antigenice.
Cel mai comun mecanism prin care microorganismele patogene realizeaz evaziunea n raport cu efectorii
sistemelor moleculare i celulare ale gazdei este variaia antigenic a componentelor suprafeei. Structurile suprafeei
celulare sunt intele majore ale rspunsului imun humoral. Termenul de variaie antigenic sau comutare fenotipic se
refer la capacitatea unei specii microbiene de a-i modifica specificitatea antigenic a componentelor de suprafa.
Aceeai structur (flageli, fimbrii, proteine ale membranei externe, polizaharidul capsular) se sintetizeaz n variante
biochimice diferite, mrind capacitatea de colonizare a esuturilor gazdei i de evitare a factorilor imunitari. Informaia
genetic pentru producerea variantelor antigenice este disponibil oricnd n celul, dar la un moment dat o singur
variant este exprimat.

67

Variaia de faz semnific posibilitatea comutrii reversibile on-off a genelor, ceea ce nseamn c o structur
dat, este sau nu produs. Pentru bacterii, rata variaiei de faz este de 1/100-1/1000/generaie. Comutarea on-off n
variaia de faz semnific pierderea sau ctigul reversibil al unei structuri de suprafa a celulei i se datoreaz
plasticitii fenotipice a microorganismelor n general i a celor patogene n special. ntr-o populaie clonal, dup
diviziune, majoritatea celulelor vor pstra caracterele fazei parentale, dar o minoritate vor comuta expresia fazei.
Comutarea este un eveniment aleatoriu.
Moleculele de suprafa ale agenilor patogeni se caracterizeaz prin secvene de variabilitate accentuat a
structurii primare. Ele sunt codificate de genele unei familii mari, prezente n variante multiple, ce formeaz o adevrat
serie polialelic. Regiunile conservate ale moleculelor de suprafa sunt ancorate n membran, iar secvenele expuse
mediului extern i sistemului imunitar al gazdei prezint un grad accentuat de variaie individual.
Ratele nalte de mutabilitate ale genei (genelor) codificatoare par s produc un numr mare de forme antigenice
distincte. Variabilitatea genetic este o modalitate de adaptare a organismelor la condiiile variabile ale mediului.
O alt surs important de variaie antigenic, ce poate fi o surs potenial de evaziune a sistemului imunitar, este
modificarea post-traducere. De exemplu, adugarea gruprilor polizaharidice, modific ntr-un grad foarte nalt
antigenitatea suprafeei.
Generarea unui nveli antigenic versatil, cu o rat nalt a modificrilor biochimice, ofer organismului infecios
modalitatea de a evita efectul neutralizant al anticorpilor. De exemplu, patogeneza N. gonorrhoeae este condiionat de
rolul esenial al fimbriilor pentru ataarea de celulele epiteliale. N. gonorrhoeae expune 3 antigene ale suprafeei celulare,
care i modific specificitatea antigenic cu o rat foarte nalt: LPS prezint 6-8 variante biochimice, proteinele
membranei externe aparin unui numr de 10-12 tipuri, iar variaia antigenic a fimbriilor este nelimitat, specific pentru
fiecare tulpin bacterian. Moleculele de fimbrilin evideniaz secvene constante, semivariabile i hipervariabile.
Regiunile hipervariabile determin antigenitatea acestor structuri i tropismul fa de celulele epiteliale ale tractului
urogenital uman. Numrul variantelor antigenice de N. gonorrhoeae este att de mare, nct fiecare tulpin pare a fi
distinct antigenic de celelalte tulpini. Fiecare dintre cele 3 antigene de suprafa are mecanisme genetice proprii de
variabilitate. Variaia antigenic a gonococului permite evitarea rspunsului imun al gazdei.
N. meningitidis este capsulat i numai fimbriile proemin dincolo de limitele stratului polizaharidic. De aceea,
pierderea fimbriilor inhib proprietatea de aderen la suprafaa epiteliilor.
Polizaharidul capsular este repelent pentru fagocite, deoarece celulele fagocitare nu au receptori pentru
polizaharidele capsulare. Uneori, acestea sunt asemntoare oligozaharidelor din moleculele glicoproteice proprii
organismului, ceea ce explic slaba lor imunogenitate. Tulpinile variante, necapsulate, sunt mai puin virulente, dar au
avantajul c nu sunt recunoscute de anticorpii specifici fa de antigenele capsulare. Absena capsulei, la H. influenzae,
confer celulei o capacitate sporit de a se ataa i de a invada celulele epiteliale ale gazdei.
La Str. pyogenes s-au identificat peste 80 de serotipuri diferite, ce rezult din mutaiile punctiforme ale genei ce
codific proteina M, component a peretelui celular.
LPS protejeaz fizic celula bacterian de aciunea complementului i a fagocitelor, constituind un strat protector,
iar diversitatea glucidelor din polizaharidul terminal, confer o variaie antigenic extrem de larg. La. S. typhimurium sau identificat peste 2500 de variante antigenice ale polizaharidului regiunii externe a LPS (antigenul O) i ale flagelinei,
cu tot attea specificiti serologice. La E. coli sunt peste 150 de variante antigenice ale antigenului O i peste 100 de
variante ale antigenului K (capsular).
Tipul antigenic al bacteriilor poate fi marker al virulenei, dat fiind natura clonal * a agenilor patogeni. De
exemplu, V. cholerae tip 1 i antigenul O de tip 139 produc toxina holeric, dar foarte puine dintre celelalte tipuri
antigenice O au aceast proprietate.
*

Populaia de celule a unui agent patogen izolat dintr-un proces infecios are natur clonal, toate celulele fiind descendente ale unui numr mic de
celule identice din punct de vedere genetic.

Microorganismele care leag acidul sialic * pe suprafaa lor, i mascheaz situsurile antigenice critice i evit sau
inhib efectorii imunitii nnscute. Avantajul selectiv al acidului sialic de suprafa, pentru supravieuirea
microorganismelor sau pentru persisten, este foarte mare.
*

Denumirea de acid sialic vine de la cuvntul grec sialon = saliv, deoarece s-au descoperit n mucina glandelor salivare submaxilare. Dup unii
autori, acizii sialici sunt nu numai cele mai interesante molecule ale lumii vii, dar i cele mai importante. Acidul sialic (mai rar denumit acid
neuraminic) desemneaz o familie de peste 40 de cetoacizi naturali, cu 9 atomi de C. Sunt unici n lumea vie, deoarece sunt singurii derivai ai
glucidelor cu 9 atomi de C, ce se gsesc la procariote.

68

Sinteza acidului sialic este limitat la metazoarele din grupul deuterostomienilor. Plantele, protostomienii (insecte, arahnide, crustacei,
molute, cefalopode i nematode) i fungii nu au niveluri detectabile de acizi sialici, ceea ce sugereaz c divergena cii evolutive a sintezei sale s-a
fcut timpuriu n evoluie.

Tapetarea suprafeei celulare cu acid sialic este o modalitate eficient de evitare a imunitii nnscute a gazdei.
Microorganismele infecioase utilizeaz mai multe strategii pentru acoperirea suprafeei cu acid sialic:
- unele microorganisme sintetizeaz acidul sialic, care constituie o subunitate repetitiv a polizaharidului capsular la
E. coli K1 sau la N. meningitidis, care mpiedic legarea de/i invazia celulei gazd, dar protejeaz bacteria de
mecanismele imunitii nnscute. Sialil- transferaza implicat n sializarea lipooligozaridelor (LOS) este legat de
membran i este expus la suprafa, avnd acces la substratul sializat al gazdei. Sializarea LOS confer
meningocilor rezisten la mecanismele imunitii nnscute, cum ar fi fixarea C independent de anticorpi;
- la unele tulpini de N. gonorrhoeae legarea acidului sialic la suprafa este catalizat de o sialil-transferaz
extracelular;
- T. cruzi, T. brucei, C. diphteriae etc. utilizeaz o trans-sialidaz a suprafeei proprii: n mod obinuit sialidaza
transfer acidul sialic de la substratul sializat, la ap (hidroliz). Trans-sialidaza transfer acidul sialic la restul
galactozil terminal sau la N-acetilglucozamina unui receptor al suprafeei parazitului (lactoza, respectiv
lactozamina). Trans-sialidaza agentului patogen sializeaz nu numai moleculele endogene (proprii), dar i
moleculele celulei gazd. Acceptorii endogeni ai acidului sialic sunt molecule asemntoare mucinei, care dup
sializare protejeaz Tripanosoma din snge de factorii protectori ai imunitii nnscute. Remodelarea prin sializare
a glicoconjugatelor de suprafa ale parazitului i ale celulelor gazdei este important pentru virulena sau pentru
persistena paraziilor transmii de vectori;
- H. influenzae preia acidul sialic al gazdei prin transportori de mare afinitate (TRAP), l activeaz i l transfer la
oligooligozaharid (LOS), molecul asemntoare cu LPS, dar creia i lipsete antigenul somatic O.
La spirocheta Borrelia hermsii (agentul febrei recurente, caracterizat prin crize febrile, separate de intervale
asimptomatice), episoadele febrile semnific apariia i multiplicarea unei noi variante antigenice. Antigenul variant este o
protein abundent a membranei externe (VMP = variable major protein).
Mecanismul general al microorganismelor eucariote patogene pentru generarea variabilitii componentelor de
suprafa, este existena i activarea succesiv a unui set de gene multiple care codific sinteza aceleiai structuri chimice
n variante chimice i antigenice distincte. Genele sunt organizate n familii, care permit generarea unui repertoriu extins
de variante antigenice.
Unul dintre cele mai studiate exemple de variaie antigenic este al tripanosomelor africane care produc boala
somnului. T. brucei (tripanosoma african), agentul cauzator al bolii somnului, produce infecii persistente, cu valuri de
parazitemie, datorit generrii periodice a unor populaii de celule ce difer prin specificitatea antigenic a glicoproteinei
majore a suprafeei (VSG). Succesiunea noilor variante antigenice este trstura biochimic determinant a parazitului, iar
ciclurile de parazitemie se succed, n absena tratamentului, pn la sfritul letal al gazdei. n stadiile finale ale infeciei,
invazia i proliferarea n esuturi i organe depesc mijloacele de aprare ale gazdei.
Glicoproteina de virulen a suprafeei parazitului (VSG) este antigenul major, recunoscut de sistemul imunitar.
Celulele individuale de Tripanosoma exprim o singur variant antigenic a VSG. n cursul infeciei persistente,
majoritatea celulelor parazitului sunt sensibile la aciunea neutralizant a anticorpilor, dar un numr mic de parazii
comut la sinteza unei noi variante antigenice de VSG i evit astfel aciunea neutralizant imediat a rspunsului imun
mediat humoral, stimulat de populaia parental. Rata de variaie antigenic este evaluat la 1/10 2-107 celule. Celulele noii
variante antigenice se multiplici refac populaia parazitului , mai bine adaptat pentru evaziunea efectorilor imunitari.
Capacitatea de comutare periodic la noi variante antigenice ale VSG are ca rezultat epuizarea rezervelor de aprare, iar n
final parazitul invadeaz esuturile i sistemele de organe.
Celulele de T. brucei au capacitatea potenial de a expune n cursul unui proces infecios peste 100 de variante
antigenice ale VSG, codificate de un numr echivalent de gene, care formeaz o caset genic i sunt transcrise coordonat,
de la un numr limitat de promotori.
Glicoproteinele VSG sunt alctuite din 400-500 aminoacizi i au o variaie ampl a secvenei. Studiile de
cristalografie cu raze X sugereaz o uniformitate remarcabil a conformaiei tridimensionale. Secvena primar a
aminoacizilor este mai bine conservat la captul carboxil, prin intermediul cruia molecula VSG se ancoreaz n
membrana citoplasmatic a parazitului. VSG formeaz un monostrat compact pe suprafaa parazitului, astfel nct numai o
parte a moleculei este accesibil legrii anticorpilor. nveliul glicoproteic pare a avea rolul de protecie a suprafeei
parazitului de atacul sistemelor de aprare, inclusiv de atacul fagocitelor.
Infecia cu P. falciparum este persistent, recurent i se caracterizeaz printr-un tablou foarte variabil al
manifestrilor clinice. Imunitatea specific se dezvolt lent i numai dup infecii ample i repetate se consolideaz un
rspuns imun protector fa de infecia sever, dar este o imunitate incomplet i incapabil s sterilizeze organismul. n

69

ariile geografice cu o rat nalt de transmitere a parazitului, apar complicaii severe, cu mortalitate crescut, la copiii sub
5 ani. Copiii care depesc 5 ani au imunitate adecvat pentru a controla infecia. Starea de protecie persist tot restul
vieii, n condiiile inoculrii continue a sporozoiilor de la narii infectai. Rspunsul imun fa de antigenele parazitului
este mediat de anticorpi (IgG), dar este condiionat de un set de citokine secretate de celule imunitare i neimunitare.
Astfel s-ar explica faptul c la pacienii cu SIDA (care exacerbeaz dramatic evoluia tuberculozei sau infeciile
oportuniste), malaria nu are o evoluie mai sever, ceea se nseamn c sinteza IgG este independent de celulele T.
Eritrocitele infectate sunt ingerate de macrofage, independent de IFN.
Severitatea diferit a infeciei se datoreaz gradului diferit de virulen a agentului infecios. Diversitatea
antigenic a tulpinilor de Plasmodium este argumentat de miniepidemiile de malarie sever, care apar n zonele
endemice. Generarea continu a diferitelor populaii variante antigenice de parazii, cu diferite specificiti de aderen,
este cauza infeciilor persistente caracterizate prin unde de parazitemie i manifestri clinice specifice malariei.
Severitatea miniepidemiilor este explicat prin variaia proprietilor de citoaderen a eritrocitelor infectate, ca factor
major al virulenei agentului malariei. Pe suprafaa eritrocitelor infectate este expus o diversitate de antigene ale
parazitului, ceea ce favorizeaz aderena de diferite esuturi. Astfel, eritrocitele infectate n stadiul matur al parazitului P.
falciparum, prin antigenele membranare pe care le expun, pot fi reinute i sechestrate n alte esuturi, n afara splinei: n
creier, ficat. Aderena eritrocitelor infectate la esutul cerebral, renal sau hepatic, este cauza formelor severe de malarie,
cum ar fi malaria cerebral.
Rata variaiei antigenelor expuse pe suprafaa eritrocitelor este de circa 2% / generaie, ceea ce duce ntr-un timp
scurt la generarea unor populaii foarte diverse de parazii, att n ceea ce privete antigenele de suprafa, ct i n
capacitatea de a se lega de diferite molecule ale celulelor tisulare, inclusiv de endoteliul postcapilar i chiar de eritrocitele
neinfectate.
n esen, modificarea proprietilor de antigenitate i citoaderen ale parazitului condiioneaz manifestrile
severe ale infeciei malarice i favorizeaz persistena parazitului n competiie cu mecanismele de aprare ale gazdei i
producerea infeciilor repetate.
Un alt esut care sechestreaz eritrocitele infectate, este placenta. n perioada sarcinii, sensibilitatea la infecia cu
malarie crete semnificativ, cu consecine grave. Se crede c n esutul placentei se gsete o mare densitate a receptorilor
(condroitin-sulfatul A) prin intermediul crora antigenele parazitului se fixeaz pe eritrocite.
Diversitatea fenotipic corespunztoare variaiei antigenice este o strategie foarte eficient pentru adaptarea la
presiunea selectiv pe care o exercit efectorii rspunsului imun i la diversitatea de particulariti structurale i
funcionale ale esuturilor gazdei. Mecanismele de variaie sunt deosebit de importante pentru succesul diseminrii unei
infecii n populaia gazd.

70

SUPRAVIEUIRE DUP
INTERACIUNEA INIIAL CU
PRIMA LINIE DE APRARE A
GAZDEI

MULTIPLICAREA LA POARTA DE
INTRARE i SECREIA DE
EXOTOXINE, EXOENZIME,
MOLECULE NRUDITE

ETAPELE PROCESULUI INFECIOS

evitarea mecanismelor de aprare al

Efecte citotoxice:

gazdei:

evitarea fagocitozei (capsul, LPS,


proteine de nveli, pili, inhibarea
fuziunii fagolizozomale, evadarea
din fagozom)

COLONIZAREA
SUPRAFEELOR
MUCOASE
ccompetiie cu
normal;

matricii
extracelulare;

mimetism molecular

traversarea

mascarea antigenelor

stratului

modularea activ a RI prin

mucos (flageli,

alterarea

distrugerea

componentelor

RI

(degradarea complementului, prot.

stratului

A stafilococic, siderofori, legarea

mucus,

transferinei, Lf; IgA proteaze)

stimularea

iinducerea/inhibarea apoptozei

secreiei
mucus,
inhibarea

moleculele

INVAZIA

(interaciune
dinamic adezine,
invazive/ receptori,
activarea cilor de
semnalizare
celulelor

ale
gazd,

distrugerea celulelor
gazd).

motilitii

leucocidine,

alterarea

metabolismului

celular

(adenilat ciclaza de la Bacillus

antimicrobiene

ale

anthracis, Bordetella pertussis).

secreiilor i plasmei

II. Exotoxine

(proteaze,

III. Endotoxine - LPS

lizozim,

transferin,

a.

lactoferin).

lipid

Internalizarea
Supravieuirea

multiplicarea
intracelular
(proteaze,

ciliare).

hialuronidaz,

fosfolipaze, coagulaze, fibrinolizina;

Evitarea

la celulele gazdei

de

distrugerea mecanismelor de aprare

proprietilor

de

nespecifice (lgA proteaze);

lla

variaie antigenic

enzime extracelulare:

ADERENA

microbiota

I.

b.

lizozim,

poli

transferin,
lactoferin).

Fig. 56. Etapele procesului infecios


22

Rolul citokinelor n procesul patologic infecios


Citokinele sunt proteine sau glicoproteine, cu greutate molecular mai mare de 5 kDa, ce pot fi secretate de orice
celul a organismului, cu posibila excepie a eritrocitelor, care se leag i activeaz o varietate de celule. Citokinele sunt
componente care particip la pstrarea homeostaziei mediului intern. Spre deosebire de hormoni, a cror aciune se
manifest la distan, citokinele acioneaz la nivel local.
Citokinele sunt implicate n toate etapele procesului patologic. Ele i produc efectele biologice numai dup ce se
leag la receptorii specifici de mare afinitate de pe suprafaa celulelor int, activeaz cile de semnalizare celular i
eventual comut un set particular de gene. Genele activate codific sinteza unei varieti de proteine: receptori de aderen
intercelular, proteaze, factorul de agregare plachetar, enzimele ce metabolizeaz lipidele, NO-sintaza i citokine,
inclusiv citokina stimulatoare iniial. Efectele citokinelor sunt diverse: stimularea diviziunii i diferenierii celulei,
inhibiia diviziunii sau apoptoza, stimularea chemokinezei (deplasarea orientat a celulei).
Afinitatea receptorilor de citokine pentru liganzii specifici este foarte nalt (10 -9-10-15). Majoritatea celulelor au
un numr mic (sute sau cteva mii) de receptori. Activarea celulelor i producerea efectelor in vivo este indus de un
numr mic de molecule, care se fixeaz pe receptorii specifici.
Denumirea multor citokine reflect activitatea biologic atribuit: TNF (factorul de necroz tisular) are efecte
proinflamatorii, dar are o slab activitate citotoxic (necrotic); TGF (factorul de cretere al celulelor T) este un
inhibitor al diviziunii celulelor epiteliale, astfel c denumirile citokinelor nu reflect totdeauna efectele lor.
Citokinele proinflamatorii, IL-1, IL-6, TNF (cea mai puternic este IL-6) ndeplinesc urmtoarele funcii:
- stimuleaz ficatul s sintetizeze proteinele de faz acut. Proteinele de faz acut au rolul de opsonine i favorizeaz
fagocitoza;
- induc sinteza moleculelor de aderen intercelular: moleculele familiei selectinelor P i E, care leag liganzii
glucidici ai leucocitelor i determin ncetinirea deplasrii i fenomenul de rostogolire pe suprafaa endoteliului, n
focarul inflamator. Ali receptori endoteliali de aderen sunt moleculele de aderen intercelular ICAM i VCAM
(vascular cell adhesion molecules). Acetia se leag cu afinitate nalt de contrareceptorii membranei leucocitului,
denumii -integrine, o familie de proteine heterodimerice (Henderson, 1996). Interaciunea dintre integrine i ICAM
determin oprirea leucocitelor circulante i trecerea n esutul conjunctiv (diapedez). Leucocitele circulante exprim
constitutiv 2-integrine, dar ntr-o conformaie nefuncional. 2-integrinele pot fi activate sub aciunea unor factori
chimiotactici (IL-8). Se crede c bacteriile comensale induc sinteza unor citokine inhibitorii ale reaciei inflamatorii.
Citokinele au o redundan enorm. Ele se activeaz n cascad i constituie o reea complex ce mediaz
interaciunile dintre celule. Citokinele produse de o celul induc sinteza n celulele sensibile a unui set de citokine, care
include citokina de iniiere.
Citokinele antiinflamatorii inhib procesul inflamator: IL-4, IL-10, IL-12, IL-13, TGF . Efectele antiinflamatorii
s-au studiat in vitro, asupra substratului celular sensibil.
5.2. Condiiile de apariie a procesului infecios
Simpla prezen a unui microorganism patogen n mediul nconjurtor nu este suficient pentru a produce o
infecie la o gazd sensibil. Pentru iniierea procesului infecios sunt necesare urmtoarele condiii obligatorii: existena
unui izvor de infecie, a unei ci de eliminare a agentului infecios, a unei ci de transmitere i a unei pori adecvate de
intrare n organismul sensibil. Domeniul specializat al patologiei infecioase care studiaz cile de eliminare, transmitere
i ptrundere a agenilor patogeni n organism se numete epidemiologie.
a) Izvorul de infecie
Necesitatea existenei izvorului de infecie deriv din faptul c mediul extern (sol, ap, aer) este nefavorabil
creterii i multiplicrii majoritii agenilor patogeni. Mediul extern asigur, cel mult, condiii de supravieuire temporar
a microorganismelor i de pstrare a infeciozitii virusurilor. Perpetuarea microorganismelor patogene n natur este
condiionat de existena unui izvor sau rezervor de infecie, n care agentul patogen se multiplic. Aici se realizeaz
procesul de acumulare natural, de unde agentul patogen se disemineaz i contamineaz alte organisme.
Izvorul de infecie este diferit, n funcie de agentul patogen i de spectrul su de gazd. Unele microorganisme i
virusuri infecteaz numai gazdele animale i produc zoonoze, omul fiind infectat n situaii accidentale. Alteori, agenii
patogeni produc boli infecioase (transmisibile) strict caracteristice omului (denumite antroponoze) fr s infecteze
organisme animale. n acest caz, omul reprezint unicul izvor de infecie n natur, cum este cazul unor viroze (variola,
varicela, oreionul, poliomielita, guturaiul, gripa, hepatite) sau bacterioze (dizenteria bacterian, febra tifoid, febrele
paratifoide, tusea convulsiv, sifilisul, gonoreea, lepra). n alte cazuri (febra tifoid, scarlatina, difteria, poliomielita,
holera), agentul infecios este transmis att de omul bolnav, ct i de cel sntos, purttor de ageni patogeni. n unele

22

cazuri, purttorii sunt fotii bolnavi care s-au imunizat, nu mai prezint simptome clinice, dar pstreaz n organism
agentul patogen, temporar sau pentru totdeauna, pe care l elimin n mediu. Purttorii sunt foarte importani pentru
diseminarea agenilor patogeni n mediul extern, deoarece fiind aparent sntoi sunt greu de depistat i se deplaseaz
liber n colectiviti unde pot transmite infecia la organismele receptive.
O alt categorie de boli infecioase comune omului i animalelor este reprezentat de antropozoonoze. Izvorul de
infecie este reprezentat de animale domestice sau slbatice: cinele pentru rabie, febra butonoas, leptospiroze; bovinele
pentru salmoneloze, vaccin, bruceloz, tuberculoz, febra Q; obolanul pentru salmoneloze, leptospiroze, febra
mucturii de obolan (febra sodoku), turbare, pest (cium), tifos murin; psrile pentru encefalite virale, ornitoze,
salmoneloze etc.
Controlul antropozoonozelor este foarte dificil pentru c n circuitul agentului patogen intr animalele salbatice.
De exemplu, turbarea este rspndit la vulpe, veveri, liliac, de unde este transmis la cine, iar de la cine la om. Chiar
dac incidena bolii scade dup imunizarea cinilor prin vaccinare, virusul nu se poate elimina din populaiile de animale
slbatice.
Unele microorganisme patogene se dezvolt n primul rnd n mediile naturale (ap, sol) i numai accidental
infecteaz gazdele: de exemplu, agenii tetanosului i ai gangrenei gazoase. Agenii se multiplic n sol i pentru a se
menine nu este necesar transmiterea la o gazd. Cl. botulinum, agentul botulismului, se dezvolt numai n sol, de unde
ajunge n conservele alimentare, se multiplic i produce toxina, care dup ingestie produce manifestri patologice.
b) Calea de eliminare a agenilor patogeni
Agenii patogeni care se multiplic n izvorul natural de infecie sunt eliminai n mediu i pot s infecteze gazde
noi. Calea de eliminare este condiionat de localizarea lor specific n organism. Principalele ci de eliminare a agenilor
patogeni sunt cea intestinal i cea respiratorie.
Calea intestinal este comun bacteriilor enterotrope, prin intermediul materiilor fecale, care pot conine
intermitent sau continuu, cantiti mari de ageni patogeni ai febrelor tifoide i paratifoide, dizenteriei, holerei, ai
toxiinfeciilor alimentare, precum i virusuri (virusul hepatitei A, virusul polio).
Calea respiratorie asigur rspndirea agenilor patogeni ai maladiilor respiratorii (difteria, tusea convulsiv,
rujeola, variola, varicela, oreionul, gripa, guturaiul), prin intermediul secreiilor nazofaringiene i bucale, proiectate n
timpul tusei, strnutului, vorbirii. Pe aceast cale, omul bolnav sau infectat rspndete n jur o pulbere fin de aerosoli
constituii din picturi microscopice de secreii ncrcate cu ageni patogeni. ntr-un strnut se pot elimina ntre l0000
100000 celule bacteriene. Cele rezistente la uscciune i pstreaz viabilitatea pentru perioade lungi de timp, ataate de
particulele inerte.
Alte ci de eliminare a agenilor patogeni sunt reprezentate de: rni i supuraii (n cazul infeciilor produse de
stafilococi, streptococi, bacilul piocianic, clostridiile gangrenei gazoase); calea urinar (pentru agenii febrei tifoide,
leptospirozei, febrei Q, tuberculozei renale); secreia lactat (pentru agenii brucelozei, tuberculozei, febrei Q).
Pentru agenii patogeni care produc infecii generalizate i care nu au o cale natural de eliminare din organism,
ieirea se realizeaz prin intermediul unui artropod hematofag care se hrnete cu sngele infectat (de exemplu, agenii
tifosului exantematic, ai pestei, ai encefalitelor virale, ai paludismului) sau ieirea se face pe cale artificial, prin sering
sau instrumente chirurgicale infectate (agenii hepatitelor virale B, C, D, ai sifilisului) (cale iatrogen).
c) Calea de transmitere a agenilor infecioi
Dup ce au fost eliminai din organismul bolnav sau purttor, agenii patogeni trebuie s fie transmii la o nou
gazd receptiv. Transmiterea se realizeaz n mai multe modaliti.
Transmiterea prin contact direct are loc n cazul n care, ntre organismul infectat i cel receptor exist o legtur
direct i se face prin muctur (agenii turbrii, ai febrei mucturii de obolan), prin supt (la animale, agenii febrei Q,
tuberculozei, iar la om, M. tuberculosis, agenii infeciilor piogene), prin srut (agenii tuberculozei pulmonare, sifilisului,
mononucleozei infecioase), prin contact cutanat direct (agenii dermatomicozelor, furunculozei), prin contact sexual
(agenii sifilisului, gonoreii). Cnd agentul cauzal este transmis prin cile genitale, infecia se numete veneric.
De cele mai multe ori, transmiterea infeciei este indirect, prin interpunerea, mai mult sau mai puin evident, a
unui factor de mediu neanimat denumit vehicul, sau a unui organism denumit vector, ntre izvorul de infecie i
organismul receptor:
- transmiterea prin intermediul produselor alimentare carne, lapte, ou, n cazul n care provin de la animale infectate
sau sunt contaminate prin manipulare de ctre o persoan (bolnav sau purttoare) care elimin ageni patogeni.
Bacteriile patogene se multiplic de regul n produsele alimentare. Astfel se transmit agenii febrei tifoide, ai
toxiinfeciilor alimentare (cu Staphylococcus si Salmonella), ai febrei Q, ai infeciei crbunoase, ai botulismului, ai
tuberculozei;

23

transmiterea prin intermediul obiectelor folosite de un bolnav (vesel, rufe, mbrcminte, cri, jucrii etc.) este
posibil un timp limitat dup contaminarea acestora, proporional cu rezistena agenilor patogeni la condiiile de
mediu (agenii tuberculozei, difteriei, scarlatinei, variolei);
- transmiterea prin vectori se realizeaz prin intermediul artropodelor, n special hematofage (insecte, capue), care
preiau agenii patogeni de la gazda infectat i i transmit la o nou gazd, fie prin neptur, fie depunndu-i pe
tegumentul intact sau lezat. Uneori, vectorul are numai rol mecanic pentru agentul patogen, pe care l transport n
tubul digestiv sau pe suprafaa corpului. Musca este vector mecanic pentru agentul patogen al febrei tifoide, al
dizenteriei. Alteori, vectorul este el nsui infectat i realizeaz o transmitere biologic. n acest caz, agentul patogen
se multiplic masiv n corpul vectorului (de exemplu, Ricketsia prowazeki, agentul tifosului exantematic) sau strbate
o faz a ciclului su vital (de exemplu, sporozoidul Plasmodium, n corpul narului). Flavivirusurile (agenii
encefalitelor) se multiplic n organismul artropodelor vectoare, fr s produc leziuni tisulare;
- transmiterea prin intermediul aerului se face prin inhalarea picturilor septice, rspndite de un bolnav sau de un
purttor de ageni patogeni. Cele mai eficiente sunt picturile septice foarte mici (nuclei), care pot rmne n
suspensie n aer (ca aerosoli), mult timp dup eliminarea lor din organism. Astfel se transmit agenii gripei,
guturaiului, rujeolei, rubeolei, varicelei, scarlatinei, tusei convulsive;
- transmiterea hidric este proprie infeciilor intestinale (agenii febrelor tifoid i paratifoid, holerei hepatitei A,
enterovirozelor) i leptospirozelor i se produc prin contaminarea accidental a unei surse de aprovizionare cu ap,
cu agenii patogeni provenii din dejecii umane sau animale;
- transmiterea prin intermediul solului are loc n cazul unor plgi, de regul adnci, n care au fost antrenate granule de
sol. Astfel se transmit infeciile cu B. anthracis, cu Cl. tetani, agenii gangrenei gazoase (Welchia perfringens, Cl.
oedematiens, Cl. histolyticum).
d) Poarta de intrare n organism
Pentru ca agenii patogeni s determine o boal infecioas este necesar ca ei s nving barierele naturale
protectoare ale gazdei. Poarta de intrare n organism corespunde, n general, cii prin care s-a facut eliminarea agentului
patogen din organismul infectat.
De cele mai multe ori, poarta de intrare n organism este reprezentat de calea respiratorie (n infecii ca oreionul,
guturaiul, gripa, rujeola, variola, varicela, difteria, tusea convulsiv, scarlatina), calea digestiv (febra Q, hepatita viral A,
poliomielita), calea cutanat (infecia crbunoas, tularemia, febra Q, agenii infecioi transmii prin muctur, prin
neptura vectorilor, prin rnire).
Unii ageni patogeni ptrund n organismul receptiv pe mai multe ci, din care una este principal, dar determin
aceleai manifestri indiferent de poarta de intrare. Ali ageni produc maladii cu caractere clinice diferite, n funcie de
poarta de intrare, ca unic factor determinant i fr relaie cu vreun caracter biologic particular al agentului patogen. De
exemplu, B. anthracis, dup ptrunderea pe cale tegumentar produce crbunele cutanat, iar dup ingestia alimentelor
contaminate produce un proces patologic intestinal. Dac infecia se face pe cale respiratorie, rezultatul este infecia
pulmonar.
Infecia reprezint totalitatea proceselor biologice care se desfoar n organismul uman sau animal, ca urmare a
ptrunderii i multiplicrii agenilor patogeni.
Pentru iniierea procesului infecios, agentul patogen trebuie s ptrund n organism pe o cale adecvat, iar
organismul s fie receptiv (s permit multiplicarea agentului infecios). n concepia modern, procesul infecios trebuie
interpretat ca rezultat al interaciunii dinamice dintre micro- i macroorganism. n concepia ecologic, agentul infecios
este fora motrice a procesului infecios, iar reactivitatea imunitar a organismului condiioneaz intensitatea, extinderea,
gravitatea i nsi posibilitatea apariiei procesului infecios.
n raport cu momentul n care se face infecia organismului uman i animal se disting patru tipuri de infecii.
a) Infecia germinal se produce n cazurile n care ovulul sau spermatozoidul sunt purttorii agentului infecios, pe
care-l transmit celulei-ou (pe vertical), odat cu caracterele ereditare. Acest mecanism de infecie nu s-a demonstrat la
om i nici la animalele superioare. A fost descris la artropode (cpue din g. Ornithodorus, Dermacentor, Rhipicephalus),
infectate astfel cu bacteria spiralat Borrelia recurentis, agentul patogen al febrei recurente de cpue. Ele devin astfel,
rezervoare naturale de infecie.
b) Infecia transplacentar (intrauterin) este demonstrat i la om. Uneori este condiionat de producerea prealabil a
unor leziuni placentare sub aciunea agentului patogen, ca de exemplu, T. pallidum, Brucella sp., Coxiella burnetii
(agentul febrei Q). Alteori, infecia are loc fr modificri placentare (infecia variolic, rujeolic, hepatic etc.).
c) Infecia intrapartum se produce n timp ce ftul traverseaz cile genitale (la expulzie), cu microorganisme patogene
ale tractului genital matern (oftalmia i conjunctivita gonococic a nou nscuilor).

24

d) Infecia postpartum se produce dup natere. n aceast categorie sunt cuprinse majoritatea infeciilor omului i
animalelor. Ele se manifest n special dup epuizarea imunitii pasive, conferit de transferul anticorpilor materni prin
placent i colostru.
n raport cu originea microorganismelor care le produc, infeciile sunt de dou categorii:
- exogene, provocate de microorganisme care ptrund pe o cale adecvat;
- endogene, provocate de microorganisme autohtone (indigene), potenial patogene ale microbiotei normale, datorit
scderii rezistenei locale sau generale a gazdei, dup iradiere, dup tratamentul cu medicamente citotoxice, hormoni
corticosteroizi, malnutriie, obstrucia cilor de excreie. Aceste infecii nu induc un rspuns imun detectabil i au
tendina s revin ciclic sau s evolueze lent.
5.3. Modaliti de evoluie a procesului infecios
Infecia poate evolua n dou modaliti: inaparent sau aparent, ca boal infecioas.
Infecia inaparent caracterizeaz acele situaii n care procesul infecios nu se exteriorizeaz prin
simptomatologie clinic. De exemplu, infecia tuberculoas inaparent se detecteaz prin reacia de hipersensibilitate
ntrziat la tuberculin. Reacia este pozitiv la un procent mare de indivizi, dar maladia tuberculoas clinic se manifest
la un procent mic din totalul persoanelor pozitive pentru testul tuberculinei. De cele mai multe ori, infeciile inaparente se
detecteaz prin reacii serologice in vitro sau prin reacii de hipersensibilitate in vivo. Uneori, infecia asimptomatic poate
fi mortal. Explicaia const n paralizia mecanismelor de aprare a gazdei.
Infecia aparent este cea care se manifest printr-un ansamblu de semne clinice obiective i subiective,
specifice i nespecifice, consecine ale alterrilor produse de agentul infecios i de produsele activitii sale.
Maladia infecioas prezint urmtoarele caracteristici; a) este produs de microorganisme vii sau de toxine ale
microorganismelor; b) poate realiza o imunitate specific de durat variabil; c) organismul bolnav poate deveni surs de
mbolnvire a indivizilor sntoi; d) este specific, n sensul c aceeai maladie este produs ntotdeauna de acelai agent
cauzal, dei sub form clinic se poate prezenta sub aspecte variate.
Etapele maladiei infecioase
n evoluia sa, procesul infecios aparent parcurge mai multe etape distincte, separate in timp.
Perioada de incubaie sau perioada iniial este intervalul de timp scurs ntre momentul ptrunderii agentului
patogen n organism i acela al debutului maladiei. Aceast perioad este lipsit de simptome clinice evidente i are o
durat variabil (zile, sptmni, luni sau este foarte scurt), n funcie de natura agentului patogen, iar pentru acelai
agent, n raport cu doza infectant, cu virulena agentului patogen i cu reactivitatea imunitar a gazdei. Pentru infeciile
exogene, durata incubaiei se poate determina relativ precis, prin infecia experimental a animalelor de laborator sau a
voluntarilor. Pentru infeciile endogene, perioada de incubaie nu se poate determina. Din momentul contaminrii este
posibil scurgerea unei perioade foarte lungi de timp pn cnd microorganismul poate s iniieze un proces infecios. n
aceast perioad, agentul patogen se multiplic, se localizeaz la nivelul situsului receptiv i eventual elaboreaz substane
toxice.
Cel mai adesea, agenii infecioi manifest un organotropism evident, legat de faptul c, n general, fiecare specie i
gsete condiiile optime de dezvoltare ntr-un anumit esut. De exemplu, indiferent de calea de ptrundere, vibrionul
holeric se localizeaz n intestinul subire, bacilul dizenteric n mucoasa intestinului gros, Brucella n placenta
bovinelor i ovinelor, datorit concentraiei mari de eritrol (dar nu n placenta uman), R. prowazeki n celulele epiteliale
ale capilarelor SNC, B. pertusis exclusiv n mucoasa bronic.
B. anthracis se multiplic n orice esut, chiar i n snge.
Debutul bolii este marcat de momentul n care numrul de ageni infecioi i cantitatea de toxine acumulate au
atins un nivel critic. Debutul poate fi brusc sau lent i este caracterizat din punct de vedere clinic, prin instalarea (brusc
sau gradat) a semnelor bolii: febr, cefalee, frisoane, algii musculo-articulare. Debutul marcheaz nceputul perioadei de
invazie a agentului infecios de la locul multiplicrii primare sau al eliberrii unei cantiti prag de toxin, spre noi zone
sensibile, iar din punct de vedere cronologic i clinic semnific nceputul perioadei de stare.
Perioada de stare este intervalul de timp n care maladiile infecto-contagioase i desfoar un tablou clinic cu
simptome caracteristice, de amplitudine maxim, decisiv pentru evoluia ulterioar. n aceast perioad poate surveni
decesul.
La sfritul perioadei de stare, simptomele dispar brusc in crisis (de exemplu, n pneumonia bacterian), nsoit
de sterilizarea bacteriologic sau lent in lysis (n cazul febrei tifoide). Organismul se poate steriliza sau poate s rmn
infectat pentru o perioad nedefinit de timp.
n perioada de stare, organismul se imunizeaz abundent cu antigene ale agentului patogen i se sintetizeaz
anticorpi. Imunizarea are ca rezultat, de regul, sterilizarea bacteriologic sau virologic a organismului. Uneori,

25

organismul nu se sterilizeaz i n focarele de infecie greu accesibile efectorilor rspunsului imun, agentul persist,
consecina fiind o infecie cronic.
Convalescena este perioada de timp n care organismul i reface potenialul de activitate, anterior mbolnvirii.
Infecia cronic corespunde unei stri de echilibru ntre agentul infecios i organismul gazd, caracterizat prin
faptul c vindecarea clinic (dispariia simptomelor) nu este nsoit de sterilizarea organismului. Focarele de infecie
cronic au localizri greu accesibile factorilor de aprare a organismului sau medicaiei: n SNC, n viscerele
parechimatoase (ficat, rinichi, splin), n sinusurile osoase, n glandele bine ncapsulate (prostata). Infecia cronic poate
s persiste fr simptome clinice (sifilisul latent) sau poate evolua cu reacutizri intermitente la diferite perioade
(bruceloza, tuberculoza, sifilis teriar).
Starea de purttor este fie consecina unei infecii cronice, fie a persistenei pentru o perioad de timp, a unui
focar de infecie, n organismele clinic sntoase. Uneori, fotii bolnavi tolereaz la nivelul mucoaselor agentul patogen pe
care l elimin timp de cteva sptmni (Str. pyogenes, C. diphteriae, V. cholerae). Alteori, bacteriile i virusurile sunt
eliminate pentru perioade ndelungate (de ordinul anilor): S. typhimurium rmne localizat n vezica biliar, de unde se
elimin intermitent, iar bolnavii de difterie pot rmne purtatori ai bacilului C. diphteriae. Purttorii creeaz probleme
dificile din punct de vedere epidemiologic, deoarece reprezint izvoare de infecie greu de depistat. Purttorii sunt foarte
periculoi pentru sntatea public, mai ales dac vin n contact cu alimentele, ca manipulatori sau preparatori ai acestora.
Tipuri de evoluie epidemiologic a infeciei
Din punct de vedere epidemiologic, maladia infecioas poate evolua pe mai multe niveluri de extindere spaiotemporal i incidental:
- evoluia sporadic semnific apariia cazurilor izolate de mbolnvire, att n timp, ct i n spaiu;
- evoluia endemic este definit prin apariia cazurilor relativ rare de infecie, care se menin numeric constante ntr-o
colectivitate i apar cu relativ regularitate, de obicei sezonier, la intervale variabile de timp. Majoritatea indivizilor
populaiei sunt imunizai i deci indemni fa de agentul infecios;
- evoluia epidemic, caracterizeaz evoluia rapid a unei infecii ntr-un interval scurt de timp, cu un numr mare de
cazuri clinice ntr-o colectivitate (cmin, cazarm, sat, regiune, ar). Se cunosc epidemiile de cium, grip, rujeol,
scarlatin;
- evoluia pandemic este aceea n care maladia infecioas se extinde foarte rapid pe un teritoriu foarte larg (ri,
continente), cu un numr foarte mare de cazuri clinice. Este caracteristic infeciei gripale i este favorizat de
mijloacele de deplasare rapid, la distane foarte mari.
Fa de un agent patogen, absent n mod obinuit dintr-un areal, populaia poate fi foarte susceptibil. La primul
contact cu populaia receptiv, agentul patogen declaneaz o epidemie exploziv, dar odat cu instalarea strii de
imunitate specific, incidena maladiei scade.
Dac agentul patogen i modific specificitatea antigenic, epidemia evolueaz i ntr-o populaie imunizat,
deoarece, fa de noile variante antigenice, populaia nu posed anticorpi specifici.
Epidemiile sunt condiionate de standardul de via al comunitii. Maladia tuberculoas este o reflectare a acestei
condiii, n timp ce bolile venerice sunt favorizate de promiscuitatea sexual.
Bibliografie selectiv
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.

Ahmed N., Dobrindt U., Hacker J., Hasnain S.E. 2008. Genomic fluidity and pathogenic bacteria: applications in diagnostics,
epidemiology and intervention. Nature Reviews Microbiology. 6:387-394
Balotescu M.C., Israil A. 2001. Fenomenul de quorum-sensing bacterian. Bact. Virusol. Parasitol. Epidemiol., 2001, 47: 5
Baron S. 2006. NCBI Bookshelf Medical Microbiology Bacteriology Bacterial Pathogenesis Detection of Endotoxin in
Medical Solutions
Barth H., Aktories K., Popoff M.R., Stiles B.G. 2004. Binary bacterial Toxins: Biochemistry, Biology and Applications of Common
Clostridium and Bacillus Proteins MMBR 68, 3, p. 373-408.
Barton N.H., Bricks D.E.J., Eisen, J., Goldstein D.B, Patel N.H. Evolution. 2007-2009. Cold Spring Harbor Laboratory Press. All
rights reserved.
Bhavsar A. P., Guttman J.A., Finlay B. B. 2007. Manipulation of host-cell pathways by bacterial pathogens. Nature 449: 827-834
Bolstad A. J., Jensen H. B., Bakken V. 1996. Taxonomy, biology and periodontal aspects of Fusobacterium nucleatum Clin.
Microbiol. Rev. vol. 9, p. 55-71.
Brooks G. F., Caroll K.C., Butel J.S., Morse S.A. 2007. Jawets, Melnick & Adelberg Medical Microbiology, 24th Ed.
Casadesus J., Low D.2006. Epigenetic Gene Regulation in the Bacterial World MMBR. 70 (3): 830-856.
Coburn B., Sekirov I., Finlay B.B., 2007. Type III Secretion Systems and Disease Clin. Micr. Reviews 20, 4, p. 535-549.
Cornelis G. R. 2002. The Yersinia YscYop 'Type III' weaponry. Nature Reviews Molecular Cell Biology 3, 742-754
Costerton JW, Stewart PS, Greenberg EP. 1999. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections. Science
284(5418):131822.
De Kievit T. R., Iglewski B.H. 2000. Bacterial Quorum Sensing in Pathogenic Relationships. Infection and Immunity. 68 (9): 4839
4849

26

14. del Pozo J L, Patel R. 2007. The Challenge of Treating Biofilm-associated Bacterial Infections. Clinical Pharmacology &
Therapeutics. 82. 204-209
15. Donlan M.R., Costerton J.W. 2002. Biofilms: Survival Mechanisms of Clinically Relevant Microorganisms. Clin. Microbiol. Rev.
15: 167-193.
16. Dune W.M. Jr. 2002. Bacterial Adhesion: Seen any Good Biofilms Lately? Clin. Micr. Reviews, 15, 1, 155-166.
17. Geny B., Popoff R.M. 2006. Bacterial protein toxins and lipids: pore formation or toxin entry into cells. Biology of the Cell 98: 667
678
18. Ghosh P. 2004. Process of Protein Transport by the Typ III Secretion System . MMBR. 68, 4: 771-795.
19. Hase C.C.,. Finkelstein R. A . 1993. Bacterial extracellular zinc-containing Metalloproteases. Micr. Rev. 57, 4: 823-837.
20. Hassa, P., Haenni S.S., Elser M., Hottiger M.O. 2006. Nuclear ADP-ribosylation Reactions in Mammals cells. MMBR, 70, 3: 789829.
21. Henderson B., Poole S., Wilson M. 1996. Bacterial modulins: a novel class of virulence factors which cause host tissue pathology by
inducing cytokine synthesis - Microbiol. Rev. 60 (2):316-341.
22. Henderson I. R., Garcia F.N., Desvaux M., Fernandez R.C., AlaAldeen D. 2004. Type V Secretion Pathway: the Autotransporter
Story. MMBR 68, 4, p. 692-744.
23. http://d3jonline.tripod.com/10-Bacteria/Microbial_Virulence.htm
24. http://d3jonline.tripod.com/10-Bacteria/Microbial_Virulence.htm
25. http://faculty.irsc.edu/FACULTY/TFischer/micro%20resources.htm
26. http://lib.bioinfo.pl/courses/view/312
27. http://lib.bioinfo.pl/courses/view/312
28. http://www.dartmouth.edu/~gotoole/swarm.html
29. Kaiser G. E. Doc Kaiser's Microbiology Home Page, Updated: Oct. 12, 2005
30. Kazmierczak M.J., Wiedmann M., Boor K.J. 2005. Alternative Sigma Factors and Their Roles in Bacterial Virulence. Microbiology
and Molecular Biology Reviews. 69, 4:527-543
31. Krueger K.M., Barbieri J. T. 1995. The family of bacterial ribosylating exotoxins Clin. Microbiol. Rev. vol. 8, p. 34-47.
32. Miethke M., Marabiel M.A. 2007. Siderophore Based Iron Acquisition and Pathogen Control. MMBR. 71(3): 413-451.
33. Moran C. A. 2009. Nutritional approaches to controlling Salmonella. Pig Progress. Net. 25 (2)
34. Neilands J. B. 1995. Siderophores: Structure and Function of Microbial Iron Transport Compounds. J.Biol. Chem. 270: 2672326726.
35. Nizet V., Esko J.D. 2009. Bacterial and Viral Infections. Essentials of Glycobiology. CSH Press
36. Reid; C.W., Fulton; K.M., Twine S.M. 2010. Never Take Candy from a Stranger: The Role of the Bacterial Glycome in Host
Pathogen Interactions. Future Microbiology. 5(2):267-288.
37. Sears C. L.,. Kaper J. B. 1996. Enteric bacterial Toxins: Mechanisms of Action and linkage to Intestinal Secretion - Microbiol. Rev.
60(1): 250-265.
38. Vimr E.R., Kalivoda K.R., Deszo E.L., Steenbergen S.S., 2004. Diversity of Microbial Sialic Acid Metabolism MMBR, 68, 1, p.
132-153. 0
39. Wilson J .W., Schurr M. J., LeBlanc C. L., Ramamurthy R., Buchanan K .L., Nickerson C. A.2002. Mechanisms of bacterial
pathogenicity. Postgrad Med J. 78:216-224
40. www.chem.duke.edu/~alc/labgroup/research
41. http://diverge.hunter.cuny.edu/~weigang/Images/15-01_adherence_1.jpg
42. Caiazza N.C., Merritt J.H., Brothers K.M., O'Toole G.A. 2007. Inverse regulation of biofilm formation and swarming motility by
Pseudomonas aeruginosa PA14. J Bacteriol.189(9):3603-12. Epub 2007 Mar 2.

27