Ministerul Educatiei si Tineretului al Republicii Moldova Universitatea de Stat din Moldova Facultatea Biologie si Pedologie.

REFERAT
Tema: CONSERVAREA RESURSELOR GENETICE VEGETALE
CONSERVAREA IN VITRO A GERMOPLASMEI

Elaborat de:
Turcanu Dorel

Conrtolat de:
Rusu Vadim

Chisinau 2011.

Metodele de conservare in vitro la plante vizeaz o diminuare sau chiar o stopare temporar a proceselor vitale, cu meninerea nealterat a zestrei ereditare a inoculilor stocai. Inoculii cultivai pe medii aseptice (meristeme, apexuri, embrioni, calus, plantule, celule, protoplai) pot fi conservai ntr-o anumit stare morfofiziologic, cu reluarea activitii regenerative, dup trecerea lor n condiii normale, prin aplicarea a mai multor tipuri de tehnici i anume: 1) - Conservare la frig, crioconservare, criostocare; 2) - Conservare n condiii care s imprime inoculilor o cretere lent; 3) - Creterea inoculilor n presiune atmosferic sczut (hipooxic). 1. Crioconservarea Prin crioconservare se are n vedere o oprire prin ngheare sau prin frig a metabolismului, a funcionalitii celulare i a realizrii schimburilor dintre celul i mediu, precum i a celor endocelulare. Crioconservarea materialelor vegetale, cu pstrarea nealterat a viabilitii, respectiv cu asigurarea relurii totale a funciilor vitale dup dezghe, se practic n diferite scopuri. Crioconservarea materialului biologic vegetal, cultivat in vitro prezint numeroase avantaje: a) - posibilitatea stocrii, ntr-un spaiu mic, a unui numr mare de indivizi, fr a exista pericolul de contaminare a lor cu ageni fitopatogeni sau duntori animali. Materialul vegetal criostocat poate servi oricnd ca material iniial de propagare extrem de rapid a clonelor criostocate. Se poate conserva integral, nealterat, zestrea genetic. b) - pstrarea inoculilor la temperaturi foarte sczute poate fi fcut teoretic, pe timp nelimitat. c) - inoculii cultivai in vitro pot fi transportai cu uurin de la o ar la alta, evitndu-se restriciile impuse de ctre carantinele fitosanitare (fiind liberi de orice tip de germeni, cu certificat de sntate). Protejarea corespunztoare a celulelor mpotriva daunelor criogenetice prezint o foarte mare importan. nghearea i dezghearea pot produce distrugeri prin: - formarea de cristale de ghea mari, n interiorul celulelor, fapt care poate provoca ruperea organitelor celulare sau sfierea ntregii celule; - creterea concentraiei soluiilor n interiorul celulelor, pe msura ngherii acestora, prin pierderea treptat a apei din structurile celulare, ceea ce produce o ridicare a gradului de nocivitate a corpusculilor prezeni n celul, mediul endocelular devenind toxic. Pentru protejarea celulelor mpotriva daunelor provocate de ctre congelri (nghe) se adaug extracelular substane numite crioprotectori. Crioprotectorii micorez mrimea cristalelor de ghea i diminueaz aciunea negativ determinat de concentrarea soluiilor endo i extracelulare. Prin protejarea corect a esuturilor, cu crioprotectori, cristalele de ghea formate endocelular sunt foarte mici, iar membranele celulare, biostructurile i organitele, rmn intacte. 2

n general criprotectorii trebuie s aib un grad mare de solubilitate i o toxicitate sczut, s fie uor permeabil n celule. De obicei substanele crioprotectoare se dizolv n mediul de cultur. Substanele folosite frecvent: dimetilsulfoxidul (5-8%), glicerolul (10-20%), manitolul, sorbitolul, polietilenglicol. Se recomand adugarea crioprotectorilor n mod gradat, n decursul a 30-60 min, pentru a proteja celulele de ocul osmotic. Pstrarea viabilitii celulelor este asigurat, n mai mare msur, atunci cnd se folosete un amestec de crioprotectori, sau un amestec de crioprotectori cu glucide (zaharoz), cu sorbitol, sau cu manitol. Tipuri de criostocare Sensibilitatea celulelor plantelor la temperaturi sczute variaz n funcie de specie i natura esutului. Modul de preparare al inoculilor n vederea criostocrii depinde de natura materialului vegetal, de starea morfofiziologic a acestuia, de tipul de criostocare ales. n principal exist trei modaliti de conservare prin frig a materialului biologic inoculat in vitro. 1) criostocarea pe termen lung, la temperaturi sczute (-196o); 2) criostocare pe termen scurt, la temperaturi de -70-100o ; 3) criostocare temporar, la temperaturi coborte, dar pozitive (1-9o). La temperatura azotului lichid activitatea vital a celulelor este complet blocat, reaciile metabolice fiind stopate. n ultimii ani, numeroase tipuri de inoculi au fost stocate n azot lichid, cu conservarea deplin a viabilitii celulare i cu pstrarea totipotenialitii, adic a capacitii regenerative de organogenez i de embriogenez somatic. Conservarea materialului biologic n azot lichid se poate face pe o durat de timp teoretic nelimitat (avnd grij s nu scad cantitatea de azot lichid din recipientele de stocare, care trebuie completat periodic). Metode de criostocare 1) Metoda ultrarapid de rcire i de congelare Seibert (1976) a demonstrat posibilitatea stocrii n azot lichid a fragmentelor detaate din tulpini de garoafe, tehnica constnd n turnarea azotului lichid peste inoculi, dup care recipientele cu inoculi meristematici sunt depozitate n rezervoare speciale coninnd azot lichid. ntre temperatura de -10 i -70oC, rata de rcire a explantelor este de 100oC/ min. Congelarea ultrarapid mpiedic formarea gheii n celule. Metoda ngherii ultrarapide se practic la numeroase specii, ndeosebi la meristemele de garoafe, de cartof, etc. 2) Metoda frigului lent presupune o ngheare treptat a materialului vegetal, cu o rat de rcire variabil, cel mai des utilizat fiind cea de 0,5 -1 oC/min. Rata de rcire se aplic pn la temperatura de -100oC dup care materialul este plonjat direct n azot lichid. Aceast tehnic depinde de mai muli factori i anume: rata de rcire; pretratamente i folosirea crioprotectorilor; tipul i stadiul fiziologic n care se afl materilul vegetal. Seibert (1977) a artat c meristemele de garoafe trebuie congelate cu o rat de minimum 50 oC/ min. Sakai (1980) a observat c plonjarea direct a fragmentelor de tulpini de garoaf n azot lichid nu asigur o supravieuire corespunztoare a materialului biologic. n cazul n care fragmentele au fost ngheate gradat, pn la temperatura azotului lichid s-a realizat conservarea integral a capacitii regenerative a celulelor. 3

3) Metoda de stocare la frig, la temperaturi sczute pozitive (1-9oC) n condiiile stocrii la frig, fr congelare, procesele vitale sunt mult ncetinite, dar nu sunt stopate complet. De aceea este necesar operarea unor subculturi periodice pentru remprosptarea calitilor mediilor de cultur. Bannier i Steponkus (1976) au realizat un experiment referitor la stocarea calusului de Chrysanthemum morifolium, pe un mediu de cultur mbogit cu 10% zaharoz, peste 28 de zile, la 3,5oC. Clirea plantelor la frig, nainte de a explanta meristemele i de a criostoca este necesar. Astfel, meristemele de garoafe, prelevate de la plante inute la 4 oC - cel puin trei zile dup crioconservare au regenerat n procent de 100% (Seibert i Wetherbee,1977). Un rol important l are durata de timp scurs din momentul inoculrii i pn n momentul criostocrii. Aceast perioad de timp trebuie s fie scurt, dar att ct este necesar pentru vindecarea suprafeelor rnite, n cursul prelurii i fasonrii explantelor. n general s-a constatat c este mai uor de realizat crioconservarea celulelor izolate sau chiar a protoplatilor n comparaie cu cea a meristemelor apexurilor sau a calusului. Dezghearea Dezghearea inoculilor se face brusc, prin cufundarea recipientelor scoase din condiiile de criostocare direct n baia de ap, la 40 oC, timp de 1-2 min. nc nu este cunoscut i neleas n totalitate starea fiziologic care se instaleaz dup dezghearea celulelor, precum i efectele +/- exercitate de ctre factorii de mediu, la inoculii dezgheai. Practic nu se poate obine un procent de regenerare egal cu cel care se refer la supravieuirea inoculilor dup dezghe. De exemplu, Seibert i Wetherbee au artat n 1977, c la garoafe 90% din meristeme supravieuiesc la o sptmn dup dezghe, dar numai cca. 70% dintre acestea genereaz plante. Cnd procentul de supravieuire a fost mai mic de 60%, au fost obinute n final numai 17% plante regenerate. Stocarea la frig prezint o mare importan n pepinierele industriale (create pentru culturile in vitro) care utilizeaz tehnici de micropropagare i de producere n condiii aseptice a materialului sditor. Astfel, pentru perioade mai lungi sau mai scurte de timp, plantele stocate n camere frigorifice pot fi distribuite pe pia n funcie de cerere, existnd astfel posibilitatea de a pune la dispoziia consumatorilor cantiti mari de plante, care n mod normal sunt imposibil de obinut prin tehnicile tradiionale. 2) Conservarea inoculilor prin impunerea unor condiii de cretere lent Creterea lent este o alt metod de conservare a inoculilor cultivai in vitro, care ns este mai puin practicat. n principal, se are n vedere meninerea culturilor n condiii limit de temperatur (1-4oC sau peste 26oC), folosind o presiune sczut a O2 n recipiente i prin administrarea unor tratamente fitohormonale speciale. Aceast tehnic poate fi comparat cu metoda tradiional japonez Bonsai, de cretere a arborilor n vase mici, limitate ca volum, procesele de dezvoltare fiind frnate prin combinarea n aa fel a condiiilor ambientale, astfel nct s se produc o reducere la minimum a creterii. La crizanteme au fost stocai minibutai, formai din cte un nod mpreun cu frunza aferent la temperatura de 6-7oC la ntuneric. Dup trei zile de la inoculare au fost trecui n regim de cretere lent. Dup stocarea lor la frig timp de 2-3 luni, acetia au fost transferai la lumin, la temperatura de 25 oC i s-a urmrit capacitatea lor regenerativ. 4

Procentul de regenerare a fost de 75%, iar regenerarea s-a produs fr formare de calus, de la nivelul muguraului situat la axila frunzuliei.

3) Conservarea inoculilor prin creterea acestora n presiune atmosferic sczut sau n lips de oxigen (hipooxie) Metoda presupune coborrea presiunii atmosferice n jurul esuturilor cultivate in vitro, printr-o scdere a presiunii pariale a tuturor gazelor atmosferei din recipientele de cultur, respectiv a aerului cu care este n contact materialul vegetal. Conservarea materialelor biologice la presiune sczut se practic n cazul alimentelor, florilor, butailor, etc. O alt metod de conservare a plantelor in vitro const n scderea parial numai a oxigenului (hipooxic), nlocuind O2 cu un gaz inert, de exemplu azot. Scderea parial a presiunii oxigenului, n jur de 50 mm Hg n recipientele de cultur, determin o reducere a creterii. Dup reluarea creterii n condiii normale, nu s-a observat nici o modificare fenotipic, plantele difereniate din inoculi ajungnd la o maturitate complet. 4) Deshidratarea inoculilor, la limita de supravieuire; Resursele genetice vegetale reprezint toate formele de via din domeniul vegetal: plantele slbatice, formele vechi cultivate, soiurile i populaiile locale, buruienile, formele ameliorate, etc. Asigurarea securitii alimentare n condiiile exploziei demografice impune pstrarea resurselor genetice vegetale, n mod deosebit a celor ameninate cu dispariia i identificarea de noi specii dintre cele slbatice, susceptibile s devin noi plante de cultur. Se impune astfel colectarea, evaluarea i conservarea resurselor genetice vegetale, n acest scop fiind create o serie de instituii i organisme naionale i internaionale: Bnci de gene, Institutul Internaional de Resurse Genetice Vegetale (IPGRI) cu sediul la Roma, Comitetul Naional de Resurse Genetice Vegetale etc. Conservarea resurselor genetice vegetale se face pe de o parte prin pstrarea lor n habitatele n care s-au format i au evoluat (conservare in situ), iar pe de alt parte prin pstrarea n instituii special create n acest sens i anume: bnci de gene i grdini botanice (conservare ex situ). servare ex situ). Cea mai evoluat form de conservare a resurselor genetice vegetale se realizeaz n bncile de gene care sunt instituii dotate cu instalaii ce asigur temperatura de conservare i cu laboratoare, echipamente i aparatur necesare caracterizrii i evalurii materialului genetic conservat. Bncile de gene sunt instituii n care se realizeaz conservarea germoplasmei n laborator (ncaperi speciale), sub form de semine, polen i culturi in vitro, sau direct n cmp (IPGRI, 1999). Bncile de gene mai sunt numite i centre de resurse genetice la plante. Un compartiment relativ nou n cadrul majoritatii bancilor de gene este cel de regenerare a probelor. Pana in prezent, acesta a fost mai mult sau mai putin de sine statator, dar rolul lui s-a dovedit de mare importanta pentru asigurarea viabilitatii genotipurilor pe perioade lungi de timp. ntre atribuiile comportimentului intr i distribuirea seminelor ctre alte bnci de gene sau utilizatori. De asemenea, n cadrul bncilor de gene se impune necesitatea efecturii unor studii referitoare la influena factorilor genetici i de mediu asupra viabilitii seminelor, gsirea i a altor metode de conservare genetic, stabilirea intervalelor de reinmulire a seminelor, calitatea materialului colectat din punct de vedere chimic, fiziologic, citologic, genetic, etc. Conservarea genetic a plantelor (realizat n special prin semine) impune crearea acelor condiii necesare meninerii viabilitii seminelor ntr-o proportie de cel puin 85%. n cadrul acestei 5

activiti trebuie avute in vedere att evitarea costurilor ridicate, a complicaiilor i a riscurilor atunci cnd plantele se pastreaz prin inmulire in cmp la intervale obligate ct i reducerea la minimum a deteriorarilor genetice.

Unele din produsele vii i care la rndu-i produce viaa, este smna, care reprezint factorul de baz al agriculturii. Valoarea seminelor este dat nu numai de faptul c asigur omenirea cu produse agricole necesare, ci i de faptul ca ele ncorporeaz ntr-un spaiu att de redus, un volum uria de informaie genetic. (Cristea M., 2006). Depozitarea n vederea conservrii seminelor a fost utilizat mai nti de catre Vavilov, cu puin timp nainte nceperii celui de-al doilea rzboi mondial, n Rusia. Ulterior, i ndeosebi n ultimele dou decenii, activitatea a luat amploare, astfel c, n prezent, exist peste 1300 de colecii naionale i regionale pentru conservarea germoplasmei. Dintre acestea n numai 397 de colecii se depoziteaz semine pe termen lung sau mediu. (Ghidra V. si colab., 2004). Conservarea se realizeaz pe o durat diferit de timp n funcie de scopul urmrit i de nsuirile fiziologice ale seminelor dupa cum urmeaz: +-1. Termen lung, la temperaturi cuprinse intre -10C+40C (10C), umiditatea relativ a aerului de 3045% i umiditatea seminelor de 3-7 % (cele uleioase) sau de 8-10 % cu asigurarea unei variabiliti de 85-90%. Se realizeaz n ncperi speciale amenajate denumite celule de conservare . 2. Termen foarte lung, la temperaturi de -100C, -200C sau chiar mai reduse, umiditatea relativ a aerului de 30% i umiditatea seminelor ntre 3 i 10%. 3. Termen mediu are nelesul de depozitare pe o perioad mai redus dect pe termenul lung ( aproximativ 3-5 ani). Conservarea pe termen mediu se aplic, de regul, pentru seminele destinate procesului de ameliorare, sau pentru distribuie n alte bnci de gene sau grdini botanice. 4. Termen scurt se aplic la seminele ortodoxe pstrate direct n cmp pe perioade de timp 1-3 ani . n funcie de particularitile specifice ale seminelor, prin care ele au o anumita reacie i comportament fa de reducerea umiditii i temperaturii, exist diferite categorii de semine: Seminte ortodoxe (clasice)- se caracterizeaz prin capacitatea de a suporta uscarea pn la realizarea unor procente reduse de umiditate (exemplu: porumb, gru, secaa, ceapa, morcov, ardei, castravei, soia, bumbac, tomate, vinete, spanac, varza, etc). Semine intermediare- prezint o capacitate de suportare a uscrii fapt ce le face vulnerabile i la temperaturile foarte sczute. Seminele din aceasta categorie se pastreaz la temperaturi cuprinse ntre +50C i -100C i se ntlnesc la specii precumCitrus limon, Carica papaya etc. Semine recalcitrante sunt cele care nu tolereaz scderea umiditii i temperaturii sub anumite limite. Pentru pstrarea seminelor din aceasta categorie, trebuie s se recurg la metode alternative de conservare, pe termen lung (exemple de specii: Araucaria sp., Castanea sp., Havea brasiliensis, Juglans sp., Quesrcus sp., Caffea sp. etc).

n anul 1994, n cadrul Organizaiei pentru Agricultur i Alimentaie (FAO) si Institutul Internaionalpentru Resurse Genetice (IPGRI) s-au elaborat i publicat standardeletehnologice ce trebuie respectate pentru pstrarea seminelor ortodoxe ( Tabelul 1). Nr. Crt. 1. Tehnologia de pastrare Tipul Scopul (destinatia)

2.

3. 4.

5.

6.

7.

8.

Seminte uscate la Conservarea pe termen lung temperaturi scazute (-180C) (colectii de baza); rezerva de Seminte ortodoxe si continut in umiditate de 3accesiuni pentru uz curent (colectii 7% active) Seminte uscate, la Conservare pe termen mediu temperaturi scazute (65% (colectii de baza); rezerva de Seminte ortodoxe viablitate prin conservare accesiuni pentru colectii active si de timp de 10-20 ani) lucru Seminte ultra uscate la Conservare pe termen mediu pana Seminte ortodoxe temperatura camerei la lung Seminte ortodoxe la Pastrarea la temperatura specii de viata maiRezerv pentru colectii active camerei a semintelor uscate lunga Specii cu inmultireConservare pe termen scurt si Cultivarea plantelor intregi vegetativa si altele cutermen mediu ( colectii de baza); in banci de gene, pe camp seminte recalcitrante rezerva pentru colectii active Specii cu inmultire Crestere inceata, in vegetativa si uneleConservare pe termen mediu si succesiune, prin inmultire specii cu seminterezerva pentru colectii active in vitro recalcitrante Seminte, polen, Cryoconservare la -1960C intesuturi, celule, Conservare pe termen lung si foarte azot lichid, sau la -1540C,embrioni de la specii lung -1960C in vapori de N2 capabile de regenerare dupa cryoconservare Inghetarea semintelor uscateSeminte si tesuturi deConservarea pe termen mediu si sau a esuturilor plante lung in functie de specie

nregistrarea resurselor genetice- pentru fiecare accesiune (respectiv probele, eantioanele sau genotipurile) se aloc un numr unic evitndu-se riscul unor greeli de nregistrare sau de impurificare a materialului biologic. Fiecare accesiune va fi insoit de informaii relevante, ct se poate de amnunite, primite sau colectate odat cu eantionul respectiv. Odat cu nregistrarea, seminele se supun unor teste fitosanitare preliminare. Pregatirea seminelor- Seminele din fiecare prob trebuie sa fie autentice i s se prezinte ntr-o stare biologic normal. Se acioneaz pentru ndepartarea seminelor strine, a celor seci, a seminelor infectate sau infestate, a corpurilor strine, a seminelor atipice, a sprturilor, etc. n funcie de specie i de particularitile seminelor sau necesitile care se impun, ordinea n care se execut principalele operaii este urmatoarea: separarea seminelor de pulp, uscarea, trierea, curarea, analiza puritii. Conservarea seminelor este o procedur de rutin practicat n unele bnci de gene. In vederea conservrii, numrul minim de seminte pentru o accesiune, solicitat de bncile de gene, este de 1000 (pentru populaii omogene) i respectiv 12000 ( pentru populaii heterogene). Operaiunea de 7

curare este nregistrat pe baza unor descriptori (numrul accesiunii, data efecturii operaiunii de curare, metoda folosit, estimarea numrului de semine, proporia de semine seci, tratamentul fitosanitar si pesticidele folosite, operatorul sau persoana care a executat operaia). Uscarea semintelor svantarea) este operaia de reducere a umidittii seminelor in vederea stocrii , pn la nivelurile corespunzatoare conservrii fr a fi afectat viabilitatea lor. Umiditatea seminelor se determin pe eantioane, alctuite din 1000 semine (la speciile cu semine mici), respectiv 100 semine ( la speciile cu semine mari). n final, se efectueaz inregistrarea descriptorilor, notndu-se: numrul accesiunii, procentul final de umiditate, data la care s-a determinat umiditatea, masa total a seminelor uscate i masa a 1000 de semine. Testarea viabilitii seminelor. Metodele cele mai cunoscute constau n germinarea seminelor pe hrtie absorbant umectat sau n nisip. De regul, pentru siguran, se fac analiza n 2-3 repetiii pentru fiecare test, evitndu-se eventualele erori care ar putea distruge proba. n urma executrii testului de viabilitate se nregistreaz: numrul accesiunii, tipul coleciei din care provine proba, metoda folosit pentru determinarea viabilitii, data testrii, viabilitatea (%) i numele operatorului. Factorii care influeneaz viabilitatea seminelor. n depozit, seminele sufer influena unor factori legai de caracteristicile seminei sau de condiiile de depozitare, care trebuie cunoscui, n vederea asigurrii unei ct mai bune viabiliti (Justice i Bass, 1978). 1.Factorii genetici. ntre specii exist diferene genetice in ceea ce priveste viabilitatea seminelor. Astfel, seminele cu inveliul exterior deosebit de tare, pot supravieui pe perioade foarte mari de timp. Dup Harrington (1972), cele mai longevive semine aparin urmtoarelor genuri: Cassia (158 ani), Albizia (147 ani), Goodia (105 ani) i Trifolium (100 ani). 2. Factorii anteriori recoltrii. Evoluia condiiilor climatice dinaintea recoltrii, influeneaz viabilitatea seminelor n depozit. Mackay i Tonkin (1967), folosind un numr mare de probe nmulite n Anglia, ntr-o perioada de 26 de ani, au stabilit corelaii pozitive ntre calitatea acestor condiii n timpul masurrii si recoltrii ovzului, orzului i grului i numrul de ani necesari pentru ca smna respectiv s se deterioreze n proporie de sub 80%, sau sub 50% din punctul de vedere al germinaiei. 3.Structura i compoziia seminelor. Inveliurile care protejeaz smna influeneaz viabilitatea acesteia. S-a gsit c seminele de orz i timoftic au avut o durata mai lung de via atunci cnd au fost depozitate cu glume, n comparaie cu seminele decorticate. 4 Coninutul n umiditate al seminelor. Cel mai important factor care afecteaz longevitatea seminelor este coninutul n umiditate al acestora. Experienele efectuate de Bass (1953) dovedesc pierderea viabilitii seminelor de iarb albastr de Kentucky proaspt recoltate este corelat cu coninutul n umiditate al seminelor i cu durata meninerii lor la o temperatura dat. Astfel, seminele cu 54% coninut n umiditate, depozitate la 300C timp de 45 ore, au pierdut 45% din facultatea germinativ; seminele cu 44 % coninut n umiditate, depozitate la 45 0C timp de 36 de ore, nu au nregistrat pierderi de viabilitate; seminele cu coninut n umiditate de 22 i 11 %, depozitate la 50 0C, timp de 45 de ore nu au pierderi de viabilitate. 5.Deteriorrile mecanice. Cercetrile efectuate au evideniat c seminele cu leziuni mecanice au o longevitate mai redus. Seminele de lucern cu leziuni provocate prin frecarea lor cu glass-papier i depozitate au supravieuit numai 14 ani. Testarea seminelor din acelai lot, dar fr leziuni evideniau, dup aceeai perioad, 23% semine vii. De aici, necesitatea c seminele care urmeaz a fi supuse conservrii sa fie cu atenie recoltate, nct s evite deteriorile mecanice. 6. Vigoarea. Loturile de semine cu vigoare mare au un potenial de via mai ridicat dect loturile de semine cu vigoare sczut . Viteza cu care scad vigoarea i viabilitatea seminelor depinde de mai muli factori, incluznd constituia genetic a speciei sau a soiului, starea seminelor, condiiilor de depozitare, uniformitatea lotului, etc. 7.Condiiile de depozitare 8.Temperatura de depozitare. ntr-un experiment, Barton (1966) a depozitat semine de pyrethrum la diferite temperaturi, n containere ermetic inchise i n containere deschise, pe o perioada de 15 ani (tabel nr. 2). 8

Tabel nr.2 Efectele diferitelor temperaturi asupra semintelor de pyrethrum, depozitate in containere inchise si deschise dupa diferite perioade de timp (Barton,1966)

Temperatura (0C) 5 10 20 30 1

Germinaia (%) n depozitarea nchisGerminaia (%) n depozitarea deschis dup anii: dup anii: 3 13 15 3 13 15 61 53 47 44 44 29 53 37 28 38 8 46 10 6 47 1 0

9.Lumina. Cercetrile efectuate de Harrington (1972) stabilesc ca razele ultraviolete ale soarelui au influene negative asupra seminelor din depozite. 10.Respiraia seminelor. Pe masur ce respiraia progreseaz, rezervele de hran din semine se consum din ce in ce mai mult. Sunt utilizate substanele hidrocarbonate din endosperm naintea celor din embrion, iar zaharurile i amidonul sunt digerate naintea lipidelor i a proteinelor. Ambalarea seminelor (foto 4). nainte de trecerea semintlor la pstrare se procedeaz la ambalarea acestora. Operaiunea se efectueaz cu scopul de a evita absorbia apei din atmosfer de ctre semine, prevenirea contaminrii seminelor conservate cu boli i duntori i meninerea autenticitii probelor. Ambalarea se face n ambalaje etane, de regul pungi din aluminiu, containere de sticle atent etichetate. Se impune ca pe durata pstrarii s se in o eviden strict a probelor, inclusiv modul lor de amplasare si respectiv locul fiecarei probe n camerele de pstrare, rafturi sau sertare. In cazul pstrarii pe termen lung, se folosesc sticle standard (tip Bordeaux), cu capacitate de 37,5 cl., 75 cl. si 150 cl. la coleciile de siguran, se pot folosi pentru pstrare ampule din sticla de tip pyrex (10-200 ml). La pstrarea pe termen mediu se pot folosi borcane sau pungi din folie de aluminiu sigilate, iar la pstrarea pe termen scurt se folosesc pungi de plastic nchise ermetic. Conservarea seminelor n bncile de gene reprezint un proces complex care presupune meninerea seminelor pe o perioad mai lung sau mai scurt de timp, cu pastrarea viabilitii i structurii ereditare a accesiunilor. Durata de conservare a seminelor i comportarea seminelor la pstrare depind puternic de factorul genetic, respectiv genotipul stocat (specie, cultivar, etc.). indiferent de durata de conservare avut n vedere, seminele trebuie aduse la un anumit nivel de umiditate, optim premizelor unei pstrari corespunzatoare, si unei viabiliti bune la finalul pstrarii. Cercetarile privind viabilitatea seminelor conservate au dus la obinerea unor informaii foarte utile, referitoare la condiiile ce trebuie asigurate pentru prelungirea duratei de pstrare, diferenele existente ntre specii, momentul n care se poate impune renoirea seminelor. Deoarece conservarea seminelor pe perioade diferite de timp este specific pentru anumite grupe de semine i specii, asigurarea celor mai adecvate condiii trebuie axat pe cercetri judicioase. ntruct nu se pot aplica aceleai condiii de pstrare pentru toate accesiunile aflate n conservare, pstrarea seminelor devine mai dificil pe masur ce crete perioada lor de pstrare. Regenerarea accesiunilor dintr-o baza de date 9

Regenerarea accesiunilor dintr-o banc de gene este o aciune complex, bine monitorizat, care are drept scop renoirea, asigurarea supravieuirii i perpeturii resurselor genetice conservate, regenerarea se impune atunci cnd se ajunge la limita scopului datorit schimbrilor genetice, sau cnd apare pericolul pierderii materialului biologic. Regenerarea se execut atunci cnd viabilitatea scade sub 85% n timp ce multiplicarea are loc n momentul epuizrii stocurilor seminele colectate n cmp sunt insuficiente pentru necesarul de conservare, pentru utilizarea de ameliorator i pentru schimb (pe termen mediu i lung); pentru a fi suficiente sunt necesare cinci generaii de multiplicare (Cristea M., 1985) . Repetarea celor dou operaii, la intervale scurte de timp, prezint riscul pierderii integritii genetice a probei iniiale, ca rezultat al erorilor de execuie sau al aciunii driftului genetic. n timpul aciunii de regenerare a accesiunilor se utilizeaz urmatorii descriptori: numrul accesiunii, tipul de colectare, locul regenerarii, amplasarea locului de multiplicare, data semnatului, data transplantarii, densitatea la semnat, procentul de germinare n cmp, practicile culturale, diferite observaii asupra plantelor n procesul creterii i fructificrilor, etc.

Bibliografie:
Cristea M., 1985, Conservarea genetic a plantelor i agricultura; Editura Academiei Republicii Socialiste Romnia, Bucureti Cristea M. D.; 2006, Biodiversitatea, Editura Ceres, Bucureti FAO/IPGRI, 1994, Genebank Standards. Rome, Food and Agriculture Organization of the United Nations/ International Plant Genetic Resources Institute Ghidra V., Botu M., Sestras R., Botu I, 2004, Biodiversitate i Bioconservare; Editura AcademicPres, Cluj Napoca http://www.scribd.com.

10