Sunteți pe pagina 1din 4

Crioconservarea este un proces în cazul în care celule sau ţesuturi întregi sunt conservate prin răcire, sub-zero

temperaturi scăzute, cum ar fi (de obicei) 77 K sau -196 ° C (punctul de fierbere de azot lichid). La aceste
temperaturi scăzute, orice activitate biologică, inclusiv reacţii biochimice care ar conduce la moartea celulelor,
este efectiv oprit. Cu toate acestea, atunci cand solutiile crioprotector nu sunt utilizate, celulele fiind conservate
sunt de multe ori avariate din cauza congelarii în timpul abordarea la temperaturi scăzute sau încălzirea la
temperatura camerei.

Temperatura
Deozitarea produselor criogenate la temperaturi foarte scăzute presupune a oferi o durată nedeterminată, dacă
nu chiar în apropierea de infinit, longevitatea la celule, deşi real "termenul de valabilitate", este destul de dificil
de dovedit. În experimentele cu uscate, seminţe, cercetătorii au constatat că nu a existat variabilitate
,deteriorare evidentă în cazul în care probele au fost ţinute diferit "îngheţate" la temperaturi ultra-chiar şi cele
rece. Temperaturi sub punctul de tranziţie de sticlă (Tg) de apă (în jur de minus 136 ° C), par a fi acceptate ca
limite în care activitatea biologică foarte substanţial încetineşte, şi minus 196 ° C (fazei lichide de azot lichid) este
temperatura preferată pentru depozitare a exemplarelor importante. În timp ce frigidere, congelatoare profundă şi
extra congelatoare rece adâncime, toate similare cu cele interne, sunt utilizate pentru multe elemente, în general,
ultra rece de azot lichid la -196 ° C este necesară pentru conservarea cu succes a structurilor mai complexe
biologice pentru a opri aproape toate activităţiile biologice.

Riscuri
Fenomene care pot cauza deteriorarea celulelor în timpul crioconservari au loc în principal în timpul etapei de
congelare, şi includ: soluţie de efecte, formarea extracelulara de gheaţă, deshidratare şi formarea intracelulară
de gheaţă. Multe dintre aceste efecte pot fi reduse prin cryoprotectants.

Atunci când au ajuns în faza de congelate, materialul este relativ conservat în condiţii de siguranţă fata de
viitoarele daune(distrugeri). Cu toate acestea, estimări bazate pe acumularea de radiaţii induse de deteriorarea
ADN-ului în timpul depozitării criogenice au sugerat o perioadă maximă de depozitare de 1000 de ani .

Efecte si soluţii
Deoarece cristalele de gheaţă cresc dizolvarea substanţelor în apă de congelare- sunt excluse,pt ca le
determină să devină concentrate în apă rămasa lichid. Concentraţii ridicate din unele substanţe dizolvate poate
fi foarte dăunătoare.

Formarea extracelulară de gheaţă


Atunci când ţesuturile sunt răcite lent, apa migrează din celule şi forme de gheaţă în spaţiul extracelular. Prea
multă gheaţă extracelulara poate provoca leziuni mecanice membranei celulelor din cauza de zdrobire.

Deshidratarea
Migraţia de apă care cauzează formarea extracelulara de gheaţă poate provoca, de asemenea, deshidratarea
celulelor. Asociate pe celulă pot provoca daune în mod direct.

Formarea intracelulară de gheaţă


În timp ce unele organisme şi ţesuturi pot tolera ceva gheaţă extracelulara, orice gheaţă semnificativă
intracelulara este aproape întotdeauna fatala în celule.

Prevenirea riscurilor

Viteză controlată-şi congelare lent sunt bine stabilite tehnici de pionier la începutul anilor 1970, care a permis
embrionului uman prima naştere congelata (Zoe Leyland) în 1984. De atunci, maşinile care congeleaza probe
biologice utilizând paşii programabili, sau ratele controlate, au fost utilizat în întreaga lume pentru a oamenilor,
animalelor şi biologiei celulare- "îngheţarea joasa" o probă pentru o mai bună păstrare, pentru decongelare în
cele din urmă, înainte de a fi congelate, sau crioconservate, în azot lichid. Aceste maşini sunt utilizate pentru
îngheţarea ovocitului, a pielii, a produselor din sânge, embrionilor, spermei , celulelor stem şi conservarea
generală de ţesut în spitale,in practicile de uz veterinar şiin laboratoarele de cercetare din întreaga lume. Ca un
exemplu, estimările au pus numărul de naşteri vii de la lent îngheţate ", la aproximativ 300.000 de la 400.000 sau
20 de embrioni congelaţi '% din cele aproximativ 3 milioane naşteri din fertilizarea in vitro.

Letala este îngheţarea intracelulara, care poate fi evitată dacă răcirea este destul de lenta pentru a permite
suficient apei de a părăsi celula în timpul îngheţarii progresive a lichidului extracelular. Această rată diferă
între celulele de diferite dimensiuni şi o permeabilitate a apei: o rată tipic de răcire în jur de 1 ° C / minut este
adecvat pentru multe dintre celulele mamiferelor după tratamentul cu crioprotectori, cum ar fi glicerolul sau
sulphoxidul de dimetil, dar rata nu este un optim universal.

Mai multe studii independente au furnizat dovezi că embrionii congelaţi stocati ,utilizând tehnici de congelare
lentă-ar putea, în anumite moduri să fie "mai buna" decât în stare proaspătă a fertilizarii in vitro.Studiile au fost
prezentate Societatii Americane de Medicina Reproductiva la conferinta din San Francisco, SUA, 2008. Studiile
indică faptul că folosind embrioni congelaţi, mai degrabă decât embrioni proaspeţi a redus riscul de făt mort şi
naştere prematură deşi motivele exacte sunt încă explorate.

Vitrificarea
Cercetătorii care au dezvoltat o nouă tehnică, vitrificarea, din anul 2000 ca cerere pentru a oferi beneficiile de
crioconservare, fără deteriorări cauzate de formarea cristalelor de gheaţă. În crioconservarea clinica, vitrificarea
necesită de obicei adăugarea de crioprotectori înainte de răcire. Crioprotectorii acţioneaza ca antigel: la cele
mai mici temperaturi de congelare. Ei, de asemenea, creşc viscozitatea. În loc de cristalizare, soluţia siroposa
se transformă într-o gheaţă amorfa, se vitrifica. Vitrificarea de apă este promovată prin răcirea rapidă, şi poate fi
realizata fără crioprotectori de către o cădere extrem de rapidă a temperaturii (megakelvins pe secundă). Rata
de care este necesară pentru a atinge starea sticlos în apă pură a fost considerată a fi imposibil până în anul
2005.

Cele două condiţii de obicei necesare pentru a permite vitrificarea sunt o creştere a vâscozitatii şi-o depresiune
de temperatura de congelare. Multe substanţe dizolvate fac ambele, dar molecule mai mari, în general, au efect
mai mari, în special pe viscozitate. Răcirea rapidă, de asemenea, promovează vitrificarea.

În stabilirea metodelor de crioconservare, substantele dizolvate trebuie să pătrundă membrana celulelor, în


scopul de a realiza viscozitatea a crescut şi deprimă temperatura de congelare din interiorul celulei. Zaharurile
nu pătrund cu uşurinţă prin membrana. Aceste substanţe dizolvate fac, cum ar fi sulfoxidul de dimetil, un
crioprotector comun,si sunt de multe ori toxice, în concentraţie mare. Unul dintre compromisurile dificile cu care
se confruntă în crioconservarea este vitrificarea ,de a limita daunele produse de crioprotector insusi.

Tesuturi inghetate

În general, este mai uşor de crioconservat pentru probe subtiri si tufe mici de celule individuale, pentru că
acestea pot fi răcite mai rapid şi mai impun acest lucru doze mai mici de crioprotectori toxici. Prin urmare, scopul
de a crioconservare de ficat uman şi inimii pentru depozitare şi de transplant este încă la distanţă.

Cu toate acestea, combinaţii adecvate de crioprotectori şi regimuri de răcire şi clătire în timpul încălzirii de
crioconservare permite de multe ori cu succes a materialelor biologice, suspensii special de celule sau probe de
ţesuturi subţire. Exemplele includ:

Material seminal
Sânge
Celule speciale pentru transfuzie
Celulele stem
Sângele ombilical din cordonul ombilical (mai multe informaţii: Cord banca de sânge # Crioconservare)
Probe de ţesuturi cum ar fi tumori şi secţiuni transversale histologice
Ouă (ovocitelor) A se vedea crioconservarea ovocitului
Embrionii care sunt 2, 4 sau 8 celule cand sunt inghetate
Ţesut ovarian
Seminţe de plante sau lăstarilor poate fi crioconservati în scopuri de conservare.
În plus, eforturile sunt în curs de a păstra om criogenic, cunoscut sub numele de cryonics. În astfel de eforturi, fie
a creierului în cadrul cap sau întregul corp pot fi supuse procesului de mai sus. Cryonics este într-o categorie
diferită de exemplele menţionate anterior, cu toate acestea, în timp ce pentru nenumărate celule crioconservate ,
vaccinuri, ţesut şi alte probe biologice au fost decongelate şi folosite cu succes, acest lucru nu a fost încă cazul,
la toate pentru creier crioconservat sau organisme. În cauză sunt criteriile de definire a "victoriei". Sustinatorii
cryonics fac un caz care crioconservare folosind tehnologia actuală, în special vitrificare a creierului, poate fi
suficientă pentru păstrarea persoanelor într-o informare "teoretica", sensul, astfel încât acestea ar putea fi
reînviat şi a făcut foarte mult în ansamblu, prin avansarea tehnologiei in viitor

.
Material seminal
materialul seminal poate fi folosit cu succes practic la infinit, după crioconservare. Cea mai lungă raportate de
stocare de succes este de 21 de ani. El poate fi folosit pentru donarea de sperma în cazul în care beneficiarul
doreşte tratament într-un timp diferite sau de loc, sau pentru barbatii care trec printr-o vasectomie, de a avea în
continuare posibilitatea de a avea copii.

Crioprotector mass-media pot fi completat cu gălbenuş de ou, fie sau lecitină de soia, cu cele două care nu au
diferenţe semnificative statistic în comparaţie cu reciproc cu privire la motilitate, morfologie, capacitatea de a lega
de Hialuronat in vitro, sau integritatea ADN-ului, după decongelare.

ovocitelor
crioconservarea ovocitului la om
crioconservarea ovocitului este o tehnologie nouă, în care ouăle unei femei (ovocitelor) sunt extrase, congelate
şi depozitate. Mai târziu, când ea este gata să să rămâneţi gravidă, ouăle pot fi decongelate, fertilizat, şi
transferate în uter ca embrioni.

E Embrionii
Crioconservarea pentru embrionii sunt utilizate pentru depozitarea de embrioni, de exemplu, atunci când
fertilizarea in vitro a avut drept rezultat embrioni mai mult decât este necesar în prezent.

Sarcini au fost raportate de la embrioni stocate timp de 16 de ani. Multe studii au evaluat copiii născuţi de la
embrioni congelaţi, sau "inghetati". Rezultatul a fost uniform pozitiv cu nici o creştere de malformaţii congenitale
sau anomalii de dezvoltare.

De la 1 octombrie 2009 embrioni umani au permisiunea de a fi stocati timp de 10 ani din Marea Britanie, în
funcţie de fertilizare a omului şi Embriologie Actul 2008.

Datele utilizate mondial sunt greu de gasit, dar a fost raportat într-un studiu din 23 de ţări care aproape 42000 de
embrioni congelaţi transferuri omului s-au efectuat în cursul anului 2001 în Europa.

Un studiu de mai mult de 11.000 crioprotectori de embrioni umani nu au arătat nici un efect semnificativ de timp,
de stocare de pe supravieţuire dupa dezghetare pentru fertilizarea in vitro sau cicluri donaţiei ovocitului, sau
pentru embrioni congelaţi în etapele de pronuclear sau de clivaj. În plus, durata de stocare nu a avut nici efecte
semnificative asupra sarcinii clinice, avort spontan, implantare, sau rata natalităţii în direct, fie de la fertilizarea in
vitro sau cicluri de donare a ovocitului. mai degrabă, de vârstă ovocitului, proporţia de supravieţuire, precum şi
numărul de embrioni transferati sunt predictori ai rezultatului sarcinii.

tesutul ovarian
Crioconservarea de ţesut ovarian este de interes pentru femeile care vor să păstreze funcţia lor de reproducere,
dincolo de limita naturala sau al căror potenţial de reproducere este ameninţată de terapie de cancer. copil mai
întâi să fie născuţi de o femeie după un transplant de ţesut ovarian congelat, şi în ciuda ca mama fiind într-o
stare de menopauza premature provocate de chimioterapie, a fost efectuat de profesorul Jacques Donnez şi
echipa sa de la Cliniques Universitaires Saint-Luc, Belgia. O parte din ovar stânga a fost eliminat, iar tesutul a fost
lent congelat înainte de a fi depozitat în terapia de azot lichid în acelaşi timp, a fost realizată. Ţesutul sase ani
mai târziu a fost implantat în apropiere de trompele uterine şi ouă au fost în scurt timp produse, care să permită
concepţie normal să aibă loc .

crioconservarea naturala
Apa poartă (Tardigrada), organisme multicelulare microscopice, poate supravieţui congelarii la temperaturi
scăzute, prin înlocuirea cea mai mare parte a apei lor interne cu trehaloză de zahăr. Zaharuri şi a substanţelor
dizolvate, altele care nu cristalizează uşor au ca efect de limitare subliniază faptul că prejudiciul membranelor
celulare. Trehaloză este un zahar care nu cristaliza uşor. Amestecuri de dizolvate poate obţine efecte similare.
Unele substanţelor dizolvate, inclusiv sărurile, au dezavantajul că acestea pot fi toxice la concentraţii mari.

Istorie
Una dintre cele mai importante lucrări devreme pe teoria de crioconservarea a fost James Lovelock de faima
teoriei Gaia. Locul de muncă Dr. Lovelock's a sugerat că deteriorarea celulelor roşii din sânge în timpul de
congelare s-a datorat subliniază osmotic. Lovelock la începutul anilor 1950 au sugerat, de asemenea, că
creşterea concentraţiilor de sare într-o celulă în care se deshidrateaza pentru a pierde apă la gheaţă externe, ar
putea cauza daune la celulă. Crioconservarea de ţesut în ultima vreme a inceput cu îngheţarea spermatozoizilor
de la păsări, care, în 1957 a fost crioprotectori , de o echipă de oameni de ştiinţă în Regatul Unit, condus de Dr.
Christopher Polge. Procesul sa mutat în lumea umană în anii 1950, cu sarcini obţinute după inseminarea
spermei congelate. Cu toate acestea, imersiunea rapidă a probelor în azot lichid nu a făcut-o, pentru unele dintre
aceste probe, cum ar fi tipurile de embrioni, măduvei osoase şi celulele stem-produc viabilitatea necesare pentru
a le face mai uşor de utilizat la decongelare. Înţelegerea sporită a mecanismului de prejudiciu congelare la celule
a subliniat importanţa controlarii sau lentă de răcire pentru a obţine maxim de supravieţuire pe dezgheţare a
celulelor vii. O rată de controlat a procesului de răcire, care să permită să se echilibreze probe biologice pentru a
optimza parametri fizici osmotici într-un crioprotector (o formă de anti-blocare) înainte de răcire într-un
predeterminat, mod controlat dovedit necesar. Capacitatea de crioprotectorilor , în cazurile începutul glicerol,
pentru a proteja celulele de la un prejudiciu de îngheţare a fost descoperit accidental. Un prejudiciu de congelare
are două aspecte-daune directe din cristale de gheaţă şi daunele secundare, cauzate de creşterea concentraţiei
de substanţelor dizolvate ca treptat mai mult de gheaţă se formează. În 1963 Peter Mazur, la Oak Ridge National
Laboratory din SUA, a arătat că îngheţarea letalea intracelulară ar putea fi evitate dacă răcirea a fost destul de
lenta pentru a permite apei suficientă pentru a părăsi celula în timpul îngheţarii progresive a lichidul extracelular.
Această rată diferă între celulele de diferite dimensiuni şi o permeabilitate a apei: o rată de tipic de răcire în jur de
1 ° C / minut este adecvat pentru multe dintre celulele de mamifere după tratamentul cu crioprotectori cum ar fi
glicerolul sau sulphoxide de dimetil, dar rata nu este un optim universal.