Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Scop
Este un fixator larg utilizat, cu pH 6,8
Reactivi
Fosfat de sodiu monobazic ........................... 4,0 mg
Fosfat de sodiu dibazic ................................. 6,5 mg
Formaldehid 37% ..................................... 100,0 ml
Ap distilat ............................................... 900,0 ml
Se omogenizeaz, apoi se eticheteaz i se dateaz.
Atenie! Carcinogen.
Timpul de fixare
Fragmentele biopsice ar trebui fixate timp de minim 1-4 ore. Un timp mai
ndelungat se recomand pentru piesele mai mari.
Tehnica fixrii
1. Piesele recoltate de chirurgi sunt pstrate n acest tip de fixator;
Timpul de fixare
Probele de dimensiuni mici 2-4 ore, iar cele mai mari pn la 3 zile.
6.4. Procesarea esuturilor
Odat ce esuturile au fost fixate, ele trebuie nglobate ntr-o form care s
permit manipularea i efectuarea unor seciuni seriate foarte subiri. Cel
mai folosit material n acest scop este parafina. esuturile incluse n
parafin pot fi secionate n fragmente cu grosimi de la 3 la 10 m, uzual 4-6
m. Tehnica de includere n parafin a esuturilor fixate se numete
Procesarea esuturilor. Paii principali ai acestui proces sunt
deshidratarea i clarificarea.
- esuturile fixate umed (n soluii apoase) nu pot fi direct impregnate cu
parafin deoarece aceasta nu este miscibil cu apa. De aceea, esuturile
trebuie
deshidratate. Aceasta se realizeaz de obicei cu ajutorul unor soluii de
etanol,
Bibliografie selectiv
1. Bancroft J, Stevens A (1982) - Theory and Practice of Histological
Techniques, 2nd ed., Churchill Livingstone, N.Y.
2. Bancroft, J D, Stevens A (1982) - Theory and practice of histological
techniques 2nd ed., Churchill Livingstone, Edinburgh & London, UK.
3. Carson F (1990) - Histotechnology: A Self-Instructional Text, 1st ed.,
ASCP,
III.
4. Crookham J, Dapson R (1991) - Hazardous Chemicals in the
Histopathology
Laboratory, 2nd ed., Anatech.
5. Culling C F A (1974) - Handbook of histopathological and histochemical
techniques; 3nd ed., Butterworth, London, UK.
Mod de lucru
Procedura 1
1. Se degreseaz lamele i lamelele prin imersia lor n alcool acidifiat 95%
(1 ml
HCl concentrat la 100 ml etanol) i se terg energic cu o pnz curat din
bumbac. Seciunile nu vor adera la lam dac acestea nu sunt complet
degresate. Se evit contactul degetelor cu suprafaa lamelor;
2. Se plaseaz seciunile pe lam cu ajutorul unor ace de disociere. Acestea
vor
pluti la adugarea ctorva picturi de albumin diluat la marginea
panglicii.
Ne vom asigura c seciunile au fost montate pe faa lamei cu captul mat
i nu
pe faa cu captul lucios;
Procedura 2
1. Se utilizeaz lame degresate ca mai sus; se adaug o pictur de adeziv
nediluat pe lam i se etaleaz cu pulpa degetului mic prin micri
circulare. Excesul se terge cu pulpa degetului inelar. Degetele vor fi
degresate n prealabil cu alcool acidifiat 95 %;
2. Se plaseaz una sau dou seciuni pe suprafaa apei ntr-o baie reglat la
o
temperatur cu 5-10C sub punctul de topire a parafinei. Se las cteva
minute
pentru ntinderea seciunilor;
3. Se introduce lama n baie, sub seciune i folosind un ac de disociere se
prinde i se fixeaz fragmentul de panglic pe lam, dup care aceasta se
scoate din
baie; fragmentul de panglic va adera la lam;
Tehnica de secionare
Seciuni cu grosimea de 4-5 m, din fragmente de esut incluse n parafin
Echipament
Sticlrie de laborator, timer de laborator
Reactivi
Hematoxilina Ehrlich (1886)
Hematoxilin ...................................................... 2 g
Etanol 95% ................................................... 100 ml
Ap distilat .................................................. 100 ml
Glicerin ....................................................... 100 ml
Alaun de potasiu, n exces ..................... aprox. 20 g
Acid acetic ...................................................... 10 ml
Hematoxilina Harris
Hematoxilin ................................................... 5,0 g
Etanol 95% .................................................. 50,0 ml
Alaun de potasiu .......................................... 100,0 g
Ap distilat ................................................ 1000 ml
Oxid de mercur ................................................ 2,5 g
Se dizolv hematoxilina n etanol i alaunul n ap cu ajutorul cldurii. Se
amestec cele dou soluii. Amestecul se aduce la fierbere ct mai repede
posibil i apoi se adaug oxidul de mercur. Se continu fierberea pn
cnd apare o culoare purpurie intens (rou-nchis, violet), apoi se
introduce recipientul ntr-o baie de appn la rcirea complet. Dup
rcire, se adaug 40 ml de acid acetic glacial.Cnd se observ o strlucire
aurie a soluiei, aceasta se filtreaz. Dac aceast strlucire nu apare,
coloraia va fi de calitate inferioar.
Hematoxilina Mayer
Hematoxilin ................................................... 5,0 g
Ap distilat ............................................... 700,0 ml
Alaun de potasiu ............................................ 50,0 g
Glicerin .................................................... 300,0 ml
Iodat de sodiu .................................................. 0,4 g
Acid acetic glacial ....................................... 20,0 ml
Se dizolv hematoxilina ntr-o cantitate redus de ap, apoi alaunul n
aproximativ 650 ml de ap distilat. Se amestec cele dou soluii i se
completeaz pn la 700 ml. Se adaug iodatul de sodiu n soluie, dup
care aceasta se nclzete blnd pentru a grbi oxidarea
hematoxilinei.Soluia se las la rcit pentru o jumtatede or, se filtreaz,
apoi se adaug acidul acetic glacial i glicerina. Soluia poate fiutilizat
imediat i este stabil 2-3 luni.
Tehnica de colorare
1. Deparafinarea i hidratarea cu ap distilat a seciunilor;
2. Se imerseaz preparatele ntr-una din soluiile de hematoxilin, un timp
variabil, conform variantei de hematoxilin ntrebuinate: 5-10 minute
pentru
hematoxilina Mayer, 5 minute pentru hematoxilina Harris i 15 minute
pentru
hematoxilina Ehrlich;
3. Se spal lamele cu ap distilat, apoi se introduc n soluia de albstrire
Scott
pentru 1-2 minute. Se cltesc n ap distilat i se examineaz la
microscop.
Seciunea trebuie s fie supracolorat;