TEHNICA HISTOPATOLOGIC

PENTRU INCLUDERA LA PARAFIN 1 Recoltarea Pentru a realiza o recoltare n condiii optime, instrumentarul folosit trebuie s fie bine ascuit, evitnd astfel strivirea esuturilor. Locul din care se recolteaz proba va fi ales n funcie de contextul lezional i de scopul investigaiilor. Se prefer zonele reprezentative de la marginea leziunii, n aa fel nct fragmentul s cuprind att esut modificat ct i normal. ptrund repede n toat proba. imensiunile prelevatului vor fi de aproximativ !cm" # !$mm lungime, !% mm lime i $& 'mm grosime, pentru ca fixatorul s up o fixare de ()&)* ore, probele vor fi fasonate cu lame ascuite, noua grosime fiind de )&$ mm, apoi vor fi introduse n fixator proaspt. 2 Fixarea +ixarea ,istologic are un triplu scop# !. oprirea fenomenelor vitale din esuturile fixate, pentru a surprinde microscopic aspectele ,istopatologice existente n pies n momentul respectiv i pentru a preveni fenomenul de autoliz(. ntrirea pieselor fixate n vederea operaiunilor ,istologice ulterioare". sterilizarea pieselor, ma.oritatea fixatorilor c,imici fiind buni dezinfectani. +ixarea se realizeaz n flacoane de sticl de !%%&(%% ml, n care volumul fixatorului trebuie s depeasc de aproximativ (% ori pe cel al pieselor din interior. S&a utilizat ca fixator c,imic simplu formalde,ida /formol0 !%1 soluie apoas. S&a preferat acest fixator pentru capacitatea de fixare prin coagulare a proteinelor structurale, bun viteza de penetrare, tolerana i intervalul de timp foarte mare pe durata cruia asigur conservarea. Pentru extragerea srurilor de calciu /demineralizare0 s&a utilizat lic,idul 2ouin n compoziia cruia intr !$ pri acid picric, $ pri formol i o parte acid acetic glacial. 3. I cl!"erea la #ara$i % 3cest timp operator se deruleaz n patru faze succesive# 4. Deshidratarea es,idratarea este necesar pentru eliminarea apei din esuturi, n vederea impregnrii ulterioare n parafin, a pieselor. !

es,idratarea s&a executat trecnd piesele prin trei bi cu alcool n concentraii progresiv crescnde# *%1, 5%1 i alcool absolut. fiecare baie a fost de dou ore. 44. Clarificarea 3 fost executat n vederea extragerii etanolului din piese, acesta nefiind miscibil cu parafina. 6peraiunea a fost executat cu dou bi de aceton i apoi dou bi cu benzen, n fiecare baie cte dou ore. 444. Impregnarea cu parafin 6biectivul acestui timp operator este de a aduce piesa ntr&o stare de rigiditate i de omogenitate optim n vederea secionrii. 6peraiunea se realizeaz n termostatul de includere n parafin, la temperatura de $7%8, n trei bi de parafin lic,id, cte dou ore n fiecare baie. 49. Includerea propriu-zis 4ncluderea propriu&zis sau turnarea blocului are drept scop ncorporarea piesei impregnat cu parafin ntr&un bloc din acelai material. :urnarea blocului se poate realiza cu a.utorul unor forme din aluminiu care au permis includerea simultan a !%&!( piese sau n casete speciale cu dimensiuni diferite funcie de mrimea pieselor de inclus. &. Sec'io area Secionarea ,istologic se realizeaz cu a.utorul microtomului /manual sau semiautomat0 pentru parafin care ofer condiii pentru obinerea unor seciuni cu grosimea de $&7 ;m. <n timpul secionrii esuturile incluse n parafin vor fi uor comprimate i vor apare pliuri, ambele fenomene fcnd seciunile improprii pentru examenul microscopic. Pentru eliminarea acestui inconvenient se recurge la etalarea secionrilor pe lame de sticl port& obiect. ).!. =talarea seciunilor =talarea se poate realiza, utiliznd >acele de disociere?, prin dou procedee# & direct pe lama port&obiect, pe o pictur de ap nclzit la becul de gaz& prin scufundarea seciunilor ntr&o baie de ap la )% &$%8 i preluarea lor de pe suprafaa apei direct cu lama port&obiect( urata de meninere a fragmentelor n

(. Colorarea Seciunile se pot colora prin urmtoarele metode de colorare ,istologic, n funcie de scopul urmrit# & Hematoxilin-Eozin- Albastru de metil /@=30, pentru orientare general& Acid Periodic- Fuxin chiff /P3S0, pentru mucopoliza,aride i micei. & coloraia 3zan, pentru evidenierea fibrinoidului /rou&portocaliu0& coloraia Perls, pentru evidenierea compuilor feruginoi /albastru&verzui0& coloraia Aossa, pentru evidenierea calciului /galben&brun0 1. )eto"a He*atoxili %+Eo,i %+ Al-a.tr! "e *etil /HEA0 B pentru orientare general 4. eparafinare# !. 2enzen 4 & !% minute (. 2enzen 44 & !% minute ". 2enzen 444 & !% minute ). 2enzen 49 & !% minute $. 2enzen 9 & !% minute 44. Ce,idratare !. 3lcool etilic absolut & !% minute (. 3lcool etilic 5%1 & !% minute ". 3lcool etilic *%1 & !% minute ). 3pa robinet & !% minute $. 3p distilat & pasa. 444. 8olorare !. @ematoxilin DaEer & !% minute (. 3p robinet & pasa. ". 3p litinat & !% minute ). 3p distilat & pasa. $. =ozin & !% minute 7. 3p distilat & pasa. '. 3cid fosfomolibdenic !1 & !% minute *. 3p distilat & pasa. 5. 3lbastru de metil !1 & " minute !%. 3p distilat & pasa. "

49. es,idratare !. 3lcool etilic *%1 & !% minute (. 3lcool etilic 5%1 & !% minute ". 3lcool etilic absolut & !% minute 9. 8larificare !. 2enzen 4 & !% minute (. 2enzen 44 & !% minute ". 2enzen 444 & !% minute ). 2enzen 49 & !% minute $. 2enzen 9 & !% minute 2. )eto"a Aci" Perio"ic + F!xi % Sc1i$$ /PAS0 4. eparafinare 44. Ce,idratare 444 .8olorare !. 3cid periodic !1 & !% minute (. 3p robinet & $ minute ". 3p distilat & pasa. ). Ceactiv Sc,iff & !$ minute $. 3p sulfuroas & " minute 7. 3p sulfuroas & " minute '. 3p sulfuroas & ) minute *. 3p robinet & pasa. 5. @ematoxilin DaEer & ) minute !%. 3p robinet & pasa. !!. 3p litinat & $ minute !(. 3p distilat & pasa. 49. es,idratare !. 3lcool etilic *%1 & " minute (. 3lcool etilic 5%1 & " minute ". 3lcool etilic absolut & !% minute 9. 8larificare 3. )eto"a )a2+ Gr3 4al"+ Gie*.a /)GG0 4. eparafinare 44. Ce,idratare )

444. 8olorare !. Soluia DaE& FrGnHald & $ minute (. Soluie Fiemsa & !$ minute ". 3p distilat & pasa. ). 3p acetat %,$1 & (% secunde $. 3p distilat & pasa. 7. 3lcool metilic *%1 & pasa. 49. es,idratare 9. 8larificare 7. Dontarea. up clarificare seciunile se monteaz cu balsam de 8anada i apoi se examineaz la microscopul fotonic.