IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO-FOSFORICE PRIN

CROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE

CAPITOLUL 1
1.OBIECT
Prezenta procedur stabilete modul n care se efectueaz analiza pentru
identificarea pesticidelor organo-fosforice din coninut stomacal i probe de
albine, prin cromatografie n strat subire.
CAPITOLUL 2
2.DOMENIU DE APLICARE
Prezenta procedur se aplic n laboratorul de toxicologie din cadrul
L.S.V.S.. !ai, pentru determinarea pesticidelor organo-fosforice din coninut
stomacal i probe de albine, n cazul unor suspiciuni de intoxicaie cu aceti
compui.
CAPITOLUL 3
3.PRINCIPIUL METODEI
Pesticidele organo-fosforice sunt extrase din proba de analizat cu eter de
petrol, dup care extractele obinute se purific pe coloan cu florisil, se
concentreaz i se spoteaz pe placa cromatografic unde compuii organo-
fosforici sunt pui n e"iden cu a#utorul unor reacti"i de culoare specifici.
CAPITOLUL 4
4.DEFINIII

!nsecticidele organo-fosforice sunt pesticide frec"ent utilizate n
agricultur i medicin "eterinar, care acioneaz prin blocarea
acetilcolinesterazei, determin$nd creterea exagerat a tonusului
"egetati" parasimpatic, asociat cu manifestri de excitaie i in%ibiie
cortical, %iper i %ipo&inezii.
Pesticidele organofosforice sunt esteri ai acidului fosforic
sau tiofosforic. Primul compus din aceasta clasa produs la scara industriala a
fost tetraetilpirofosfatul '()PP*,utilizat in timpul celui de al doilea razboi
mondial ca substanta toxica de lupta. )stecel mai toxic +P. ,lterior s-a
sintetizat parationul.
La ora actual se cunosc peste -.. de compui, printer cei mai utilizai
fiind/ parationul, malationul, negu"onul, clorofosul, diclor"osul, cumafosul etc.
7.3.2. Echip!"#$"
- )c%ipament pentru cromatografie n strat subire 0 Linia (L1
123
- 4aie de ap '4aie de termostatare 4( 56*
- )tu" +2( 27 !! 4.8.5-6
- 4alan analitic '4alan semianalitic )P-96.,
) 59:5.;66. (9.;8*
- <ota"apor =eidolp%.
7.3.3. M$"%i&" 'i %"c$i(i
R"c$i(i )
- cloroform
- acetonitril pentru cromatografie, saturat cu eter de petrol
- eter etilic
- aceton
- benzen
- acid acetic glacial
- eter de petrol
- florisil '9. 0 :. mes%*, acti"at - ore la 96.
o
1
- alcool etilic
- "at de sticl
- sulfat de sodiu an%idru
- silicagel 9. 3
- amidon
- brom
- %exan
>>>- acid sulfosalicilic sol. 5? n etanol :. ?
- tetrabromfenolftalein et%@l ester sol. .,- ? n aceton
- clorur feric soluie 5 ? n etanol :. ?
- soluie de azotat de argint / .,6g azotat de argint se dizol" n -6 ml ap
i se dilueaz la 5.. ml aceton
- soluie de acid citric / 6g aci citric se dizol" n 6. ml ap i se dilueaz
la 5.. ml cu aceton
- soluie de -,9 0 dibromc%inon 0 A 0 clorimid / 5g de -,9 dibromc%inon 0
A 0 clorimid se dizol" n 5.. ml de alcool etilic, acidulat cu 5 ml acid
acetic glacial
- etaloane de pesticide organo-fosforice.
S$ic&*%i" )
- coloane cromatografice 'lungimea B.. mm i > C -.--6 mm*
- p$lnii de separare x 5.. ml, 6.. ml, -... ml
- p$lnii de filtrare
- baloane cotate x 5.. ml
- pa%are 4erzelius x 5.. ml
- pa%are )rlenma@er x -.. ml
- pipete Pasteur
- cilindri gradai x -6, 6., 5.., -6. ml
- exicator
7.4. M+, ," &-c%-
a) Extracia probelor:
1.Coninut gastric: -. 0 -6 g prob de analizat se extrag cu cca. 5.. ml eter de
petrol timp de A-6 ore, agit$nd energic din c$nd n c$nd. )xtractul se filtreaz i
se concentreaz la cca. -. ml, dup care se supune partiiei cu acetonitril.
. / P%$i0i c- c"$+#i$%i&)
)xtractul concentrate de la punctul a* se trece ntr-o p$lnie de separare de
5.. ml, transferul efectu$ndu-se cu eter de petrol astfel ca "olumul final s fie
de cca. -6 ml. Se adaug -6 ml acetonitril saturat cu eter de petrol, se agit
energic i apoi se las n repaus pentru separarea straturilor. Partiia acetonitril-
eter de petrol permite separarea reziduurilor de pesticide 'care trec n acetonitril*
de grsimi 'care rm$n n eter de petrol*. )xtracia cu acetonitril se repet, iar
extractele reunite se trec ntr-o p$lnie de separare de 6.. ml care conine B.. ml
soluie apoas de sulfar de sodium -?. P$lnia de 6.. ml 'conine faza apoas i
organic* se agit puternic 5 minut i se las n repaus cel puin B. minute. Dup
separare, stratul organic care conine pesticidele se purific pe o coloan cu
florisil.
c/ P-%i1ic%" p" c+&+#* c- 1&+%i2i&)
1oloana de sticl, lung de B.. mm i cu un diametru de -.--6 mm,
pre"zut cu frit sau cu dop de "at, se umple cu un strat de 5. cm de florisil
acti"at care se acoper cu un alt strat de 5 cm de sulfat de sodiu an%idru.
1oloana se umecteaz cu 6. ml eter de petrol, reg$ndu-se "iteza de
curgere a lic%idului prin coloan la 6 mlEminut, dup care se introduce extractul
eteric al reziduurilor de pesticide.
)luarea reziduurilor de insecticide organo-fosforice de pe coloana cu
florisil se face succesi" cu urmtoarele amestecuri de sol"eni/ -.. ml 9? eter
etilic n eter de petrolF -.. ml 56? eter etilic n eter de petrol i -.. ml 6.? eter
etilic n eter de petrol. Dup eluie cele trei poriuni de eluat se concentreaz la
un "olum de 5-6 ml i se trece la determinarea propriu-zis a insecticidelor.
2. Probe e albine: se introduc -.--6g de prob mrunit ntr-un mixer
peste care se adaug B6. ml amestec de B6? ap n acetonitril. Se omogenizeaz
timp de 6 minute, se iau -6. ml de filtrate i se introduce ntr-o p$lnie de
separare. Peste extractul apos se adaug 5.. ml eter de petrol. Se agit
amestecul - minute. Se adaug 5. ml soluie saturat de Ga1l i 9.. ml ap,
agit$ndu-se energic, dup care se las straturile s se separare. Se arunc faza
apoas, iar stratul de sol"ent se spal de - ori cu c$te 5.. ml ap. Haza eteric se
trece ntr-un )rlenma@er de 5.. ml cu dop. Se adaug 56g Ga
-
S+
A
an%idru i se
agit. Gu se las mai mult de o or cu Ga
-
S+
A
deoarece poate a"ea loc o
adsorbie a reziduurilor de insecticide pe acesta. )xtractul se filtreaz i se
concentraz la un "olum de c$i"a ml.
+bser"aie/ dac extractul este colorant, se poate purifica pe o coloan cu
florisil.
,/ S"p%%" c%+!$+3%1ic*)
)xtractele obinute sunt supuse separrilor cromatografice pe cromatoplci cu
diametrul de -.x-. cm, acoperite cu silicagel 3 sau alumin. 3rosimea stratului
adsorbant este cuprins ntre .,-6 0 .,6 mm. Plcile se acti"eaz timp de o or la
55.
o
1. Spoturile se aplic la 5,6 cm de marginea inferioar a plcii. Distana de
migrare este de aproximati" 58 cm, astfel nc$t s se obin o separare
con"enabil.
Pentru aprecierea calitati", aplicarea spoturilor se face cu pipete Pasteur
bine efilate, dup care depozitul spotat se usuc sub current de aer, pentru a
mpiedica mprtierea sol"entului pe o suprafa mai mare de .,6 cm diametru,
c%iar dac aplicaia se repet.
lturi de spoturile probei de analizat se pun spoturi dintr-o soluie etalon de
insecticide indi"iduale sau n mixtur.
1romatografia se execut n sistem ascendent n tancuri etane care se satureaz
n prealabil pentru ec%ilibrare, prin cptuire cu %$rtie de filtru mbibat cu
sol"eni.
1a amestec de eluie se folosete sistemul benzen 0 aceton n raportul A/5.
Dup uscare, se expune placa la "apori de brom i dup 5. - 56 minute
se spreiaz cu o soluie de clorur feric .,5?. Dup nc 56minute se spreiaz
cu o soluie de acid sulfosalicilic 5? c$nd apar spoturi caracteristice alb-glbui
pe fondul mo" lila al plcii.
+ alt posibilitate de a pune n e"iden pesticidele organo-fosforice este
urmtoarea/ se elueaz placa cu un amestec de %exan/ aceton n raport de A/5.
Dup uscare, se pul"erizeaz uniform cu o soluie de .,-? ester etilic de
tetrabromfenolftalein. Placa de"init albastr se pul"erizeaz apoi cuo soluie
de azotat de argint .,6?. Dup alte - minute plcile se spreiaz cu o soluie de
acid citric 6?. par spoturi albastre sau purpurii pe fond galben.
,n alt reacti" de culoare c%aracteristic pentru compuii organo-fosforici este
-,9-dibromc%inon-A-clorimid. Dup eluarea plcii cu %exan/aceton i uscare,
aceasta se pul"erizeaz cu o soluie de -,9-dibromc%inon-A-clorimid 5? n
alcool. par spoturi galbene, roii sau brune, caracteristice di"erselor grupe de
compui organo-fosforici. Pentru intensificarea culorii spoturilor placa se
nclzete la 55.
o
1 timp de 6 minute.
Limita de detecie este de 5 Ig.
7.4. E5p%i!%" %"6-&$$"&+%
R"6-&$$-& 2" "5p%i!* 2-. 1+%!) 7p"2$ici," +%3#+-1+21+%ic" -
p%"6"#$"8 2- 7p"2$ici," +%3#+-1+21+%ic" - #","$"c$.i&"8.

IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO - CLORURATE DIN
CONINUT STOMACAL 9I PROBE DE ALBINE
7.2.1 P%+$"c0i p"%2+#&-&-i 0 se realizeaz n conformitate cu
P+ 0 L - .: F
a. )ste obligatoriu purtarea %alatului alb, de protecie F
b.Splarea sticlriei cu amestec sulfocromic se "a face purt$nd mnui de
cauciuc. Jn cazul n care amestecul sulfocromic a "enit n contact cu pielea,
se spal cu mult ap receF
c. Jn laboratorul n care se lucreaz cu sol"eni uor inflamabili, este interzis
lucrul cu foc desc%isF
d. Deoarece sol"enii i reacti"ii utilizai sunt toxici, se "a e"ita ingerarea
acestora n timpul manipulrii.
7.2.2. P%+$"c0i "chip!"#$"&+%
a. (oat sticlria care se folosete n aceast determinare se pstreaz curat,
n dulapuri sau sertare speciale, pentru a e"ita prfuirea, contaminarea sau
spargerea accidental. Sticlria de msur utilizat nu "a fi uscat la cald
'etu"* pentru a pre"eni decalibrareaF
b. 4alanele cu care se efectueaz c$ntririle se instaleaz pe suprafee plane,
fr trepidaii 'de preferin pe mese consol sau grele*, n mediu lipsit de praf
i sc%imbri brute de temperatur.
7.2.3. :"%i1ic%" 2$*%ii ," 1-#c0i+#%" "chip!"#$"&+% 'i
c+#1i%!%" !"$%+&+3ic*
4alanele, n perioada de "alabilitate a "erificrii metrologice, se "erific
periodic conform instruciunilor pre"zute n P3 0 L - 5..
Gu se "or utiliza mi#loace de msurare a cror perioad de "alabilitate
metrologic este depit, care nu funcioneaz la parametrii corespunztori sau
care nu se ncadreaz n clasa de precizie impus de standardul de lucru.
7.3. R"3-&i ," p%+c",-%* p%i(i#, !+,-& ," &-c%-
77.3.2. Echip!"#$"
- )c%ipament pentru cromatografie n strat subire 0 Linia (L1
123
- 4aie de ap '4aie de termostatare 4( 56*
- )tu" +2( 27 !! 4.8.5-6
- 4alan analitic '4alan semianalitic )P-96.,
) 59:5.;66. (9.;8*
- <ota"apor =eidolp%.
7.3.3. M$"%i&" 'i %"c$i(i
R"c$i(i )
- eter de petrol
- acetonitril pentru cromatografie, saturat cu eter de petrol
- eter etilic
- florisil '9. 0 :. mes%*, acti"at - ore la 96.
o
1
- alcool etilic
- sulfat de sodiu an%idru
- silicagel 9. 3
- amidon
- amestec de eluie / 9? eter etilic n eter de petrol F56? eter etilic n eter
de petrol F
- difenilamin F
- etaloane de pesticide organo-clorurate.
S$ic&*%i" )
- coloane cromatografice 'lungimea B.. mm i > C -.--6 mm*
- p$lnii de separare x 5.. ml, 6.. ml
- p$lnii de filtrare
- baloane cotate x 5.. ml
- pa%are 4erzelius x -.. ml
- pa%are )rlenma@er x -.. ml
- pipete Pasteur
- cilindri gradai x -6, 6., 5.., -6. ml
- exicator
7.4. M+, ," &-c%-
b) Extracia probelor:
1.Coninut gastric: -. 0 -6 g prob de analizat se extrag cu cca. 5.. ml eter de
petrol timp de A-6 ore, agit$nd energic din c$nd n c$nd. )xtractul se filtreaz i
se concentreaz la cca. -. ml, dup care se supune partiiei cu acetonitril.
. / P%$i0i c- c"$+#i$%i&)
)xtractul concentrate de la punctul a* se trece ntr-o p$lnie de separare de
5.. ml, transferul efectu$ndu-se cu eter de petrol astfel ca "olumul final s fie
de cca. -6 ml. Se adaug -6 ml acetonitril saturat cu eter de petrol, se agit
energic i apoi se las n repaus pentru separarea straturilor. Partiia acetonitril-
eter de petrol permite separarea reziduurilor de pesticide 'care trec n acetonitril*
de grsimi 'care rm$n n eter de petrol*. )xtracia cu acetonitril se repet, iar
extractele reunite se trec ntr-o p$lnie de separare de 6.. ml care conine B.. ml
soluie apoas de sulfat de sodiu -?. P$lnia de 6.. ml 'conine faza apoas i
organic* se agit puternic 5 minut i se las n repaus cel puin B. minute. Dup
separare, stratul organic care conine pesticidele se purific pe o coloan cu
florisil.
"/ P-%i1ic%" p" c+&+#* c- 1&+%i2i&)
1oloana de sticl, lung de B.. mm i cu un diametru de -.--6 mm,
pre"zut cu frit sau cu dop de "at, se umple cu un strat de 5. cm de florisil
acti"at care se acoper cu un alt strat de 5 cm de sulfat de sodiu an%idru.
1oloana se umecteaz cu 6. ml eter de petrol, reg$ndu-se "iteza de
curgere a lic%idului prin coloan la 6 mlEminut, dup care se introduce extractul
eteric al reziduurilor de pesticide.
)luarea coloanei se face cu -.. ml amestec 9? eter etilic n eter de petrol.
)luatul astfel obinut se concentreaz la 6 0 5. ml. cest eluat conine n general
toate reziduurile de pesticide organo-clorurate cu excepia dieldrinului i
endrinului.
Dup colectarea primului eluat se mai poate face o eluie a coloanei cu
-.. ml 56? eter etilic n etre de petrol. cest din urm eluat conine dieldrin i
endrin i se reunete cu primul eluat.
2. Probe e albine: se introduc -.--6g de prob mrunit ntr-un mixer
peste care se adaug B6. ml amestec de B6? ap n acetonitril. Se omogenizeaz
timp de 6 minute, se iau -6. ml de filtrate i se introduce ntr-o p$lnie de
separare. Peste extractul apos se adaug 5.. ml eter de petrol. Se agit
amestecul - minute. Se adaug 5. ml soluie saturat de Ga1l i 9.. ml ap,
agit$ndu-se energic, dup care se las straturile s se separare. Se arunc faza
apoas, iar stratul de sol"ent se spal de - ori cu c$te 5.. ml ap. Haza eteric se
trece ntr-un )rlenma@er de 5.. ml cu dop. Se adaug 56g Ga
-
S+
A
an%idru i se
agit. Gu se las mai mult de o or cu Ga
-
S+
A
deoarece poate a"ea loc o
adsorbie a reziduurilor de insecticide organo-clorurate pe acesta. )xtractul se
filtreaz i se concentraz la un "olum de c$i"a ml.
+bser"aie/ dac extractul este colorant, se poate purifica pe o coloan cu
florisil.
1/ S"p%%" c%+!$+3%1ic*)
)xtractele obinute sunt supuse separrilor cromatografice pe cromatoplci
cu diametrul de -.x-. cm, acoperite cu silicagel 3 sau alumin. 3rosimea
stratului adsorbant este cuprins ntre .,-6 0 .,6 mm. Plcile se acti"eaz timp
de o or la 55.
o
1. Spoturile se aplic la 5,6 cm de marginea inferioar a plcii.
Distana de migrare este de aproximati" 58 cm, astfel nc$t s se obin o
separare con"enabil.
Pentru aprecierea calitati", aplicarea spoturilor se face cu pipete Pasteur
bine efilate i uscarea consecuti" a depozitului spotat, pentru a mpiedica
mprtierea sol"entului pe o suprafa mai mare de .,6 cm diametru, c%iar dac
aplicaia se repet.
lturi de spoturile probei de analizat se pun spoturi dintr-o soluie etalon
de insecticide indi"iduale sau n mixtur.
1romatografia se execut n sistem ascendent n tancuri etane care se
satureaz n prealabil pentru ec%ilibrare, prin cptuire cu %$rtie de filtru
mbibat cu sol"eni.
1a amestec de eluie se folosete sistemul eter de petrol / eter etilic n raportul
-/5.
Dup eluie plcile se usuc la temperatura camerei. <ele"area se face prin
stropirea plcilor cu o soluie alcoolic .,6? de difenilamin, urmat de iradiere
n ultra"iolet timp de c$te"a minute.
Limita de detecie este de .,6 Ig.
7.4. E5p%i!%" %"6-&$$"&+%
R"6-&$$-& 2" "5p%i!* 2-. 1+%!) 7p"2$ici," +%3#+-c&+%-%$" -
p%"6"#$"8 2- 7p"2$ici," +%3#+-c&+%-%$" - #","$"c$.i&"8.
IDENTIFICAREA PESTICIDELOR PRIN GAZCROMATOGRAFIE
Mod de lucru, execuia propriu-i!"
#$%$&$'$ Ex(racia
#$%$&$'$'$ Ex(racia pe!(icidelor di) produ!e de ori*i)e )o)-a)i+al"
a$ Ex(racia pe!(icidelor di) ,ruc(e -i le*u+e
Din proba de origine non-animal, foarte bine omogenizat, se cntresc,ntr-
un tub de centrifug, 7,5 g (la balana analitic, cu precizie de 0,0001g! "e adaug
15 ml aceton, se omogenizeaz timp de #0 secunde apoi se adaug 15 ml clorur
de metilen $i 15 ml eter de petrol! "e agit din nou pentru #0 secunde!
"e centrifug%eaz la &000 rot' min timp de 10 min! "e decanteaz 15 ml din
e(tractul organic,se e)apor pn aproape de sec la rota)apor(temperatura bii de
ap este de &0
0
*! "e e)apor la sec la temperatura camerei!
+eziduul se redizol) n , ml amestec isooctan'toluen ((- .1)') coninnd
standard intern de concentraie 0,05 /g'ml mire( pentru determinarea pesticidelor cu
detector 0*D, 0,1 /g'ml etion pentru determinarea pesticidelor cu detector 1"D sau
0,# /g'ml 122 pentru determinarea pesticidelor cu detector 3" $i se sonic%eaz
timp de 5 min! 4n continuare se procedeaz ca la punctul 7!,!&!,!
3etoda poate fi lucrat $i cu cantiti la 5umtate!
.$ Ex(racia pe!(icidelor di) cereale -i alu)e/+e(oda !(a(ic"0
Din proba de cereale sau alune, foarte bine omogenizat, se cntresc 1#,5
grame,ntr-un pa%ar 6erzelius! "e daug 50 ml amestec. aceton'clorur de metilen
(50.50,)'), se omogenizeaz timp de #0 secunde apoi se las peste noapte!
"e centrifug%eaz la &000 rot'min timp de 10 min! "e decanteaz 15 ml din
e(tractul organic $i se e)apor pn aproape de sec la rota)apor (temperatura bii
de ap este de &0
0
*! "e e)apor la sec la temperatura camerei!
+eziduul se redizol) n , ml amestec isooctan'toluen ((- .1)') coninnd standard
intern de concentraie 0!05 /g'ml mire( pentru determinarea pesticidelor cu detector
0*D, 0,1 /g'ml etion pentru determinarea pesticidelor cu detector 1"D, 0,# /g'ml
122 pentru determinarea pesticidelor cu detector 3" $i se sonic%eaz timp de 5 min
!
#$%$&$'$1!Ex(racia *r"!i+ii di) e!u(urile *ra!e
*irca 100g esut gras (inut n prealabil la recese trec prin robotul de
buctrie $i se omogenizeaz! Din proba bine omogenizat, se cntresc circa #5g
prob $i se pun ntr-o plnie de sticl pre)zut cu %rtie de filtru, pe care s-a a$ezat
un strat de cca 10g de sulfat de sodiu an%idru! "e a$eaz plnia ntr-un )as conic $i
se ine n etu) la 75
0
*, timp de &ore, pn cnd grsimea nceteaz s mai curg!
"e cntresc 0,5g de grsime, care se dizol) ntr-un mililitru de eter de petrol!
#$%$&$'$%$ Ex(racia *r"!i+ii di) lap(e -i produ!e lac(a(e
a$ Ex(racia direc(" a *r"!i+ii di) lap(e pri) +e(oda AOAC
4ntr-o plnie de separare, de 700cm
,
se introduc 100cm
,
lapte cu 1g o(alat de
sodiu! 8poi se adaug 100cm
,
alcool metilic, 100cm
,
eter etilic, 100cm
,
eter de petrol
$i se agit 1 min! "e las plnia n repaus pn la separarea straturilor! "tratul
inferior se ndeprteaz! 2entru des%idratare, e(tractul eteric(stratul superior se
trece printr-o coloan de sulfat de sodiu an%idru $i se colecteaz ntr-un balon de
100cm
,
! "e concentreaz la e)aporatorul rotati), la cca! &0
0
*, obinndu-se astfel
grsimea purificat! "e cntresc 0,5g grsime $i se dizol) ntr-un mililitru de eter
de petrol!
.$ Ex(racia *r"!i+ii di) lap(e pri) ce)(ri,u*are
Di) lap(e i)(e*ral
"e centrifug%eaz 50 ml de lapte integral timp de 10min la #500 rot'min $i se
transfer smntna ntr-un pa%ar ce conine 7g de sulfat de sodiu an%idru! "e
adaug ,0 ml n-%e(an $i se omogenizeaz timp de 10min! "e filtreaz faza %e(anic
printr-un dop de )at de sticl acoperit cu sulfat de sodiu an%idru!"e e)apor la
e)aporatorul rotati) faza de n-%e(an la &0
0
* la apro(imati) 1ml $i se ndeprteaz
sol)entul rmas folosind un curent slab de azot! "e cntresc 0,5g grsime $i se
dizol) ntr-un mililitru de eter de petrol! 4n continuare se procedeaz ca la punctul
7!,!&!#!
Di) lap(e pra,
"e iau 10g lapte praf dizol)at n -0ml ap (omogenizat timp de & ore!
c$ Ex(racia *r"!i+ii di) .r2)e(uri
4ntr-un balon de 100ml se introduc #5g brnz foarte bine mrunit $i 50ml
eter de petrol! "e agit foarte bine $i se las peste noapte! "e decanteaz stratul de
sol)ent $i se filtreaz prin %rtie de filtru cu porozitate mare, n care s-a introdus, n
prealabil, cca!5g sulfat de sodiu an%idru! 0(tractul eteric se prinde n balonul
e)aporatorului rotati) $i se concentreaz, pn la ndeprtarea sol)entului! "e
cntresc 0,5g grsime $i se dizol) ntr-un mililitru de eter de petrol!
d$ Ex(racia *r"!i+ii di) u)(
"e nclze$te untul la cca 50
0
* $i se filtreaz la cald printr-o %rtie de filtru
cu porozitate mare pe care s-a pus, n prealabil, un strat de sulfat de sodiu an%idru!
"e cntresc 0,5g grsime $i se dizol) ntr-un mililitru de eter de petrol! 4n
continuare se procedeaz ca la punctul 7!,!&!#!
#$%$&$1$ Ex(racia -i puri,icarea reiduurilor de pe!(icide di) *r"!i+ea de
ori*i)e a)i+al"
a$ Ex(racia pe!(icidelor di) *r"!i+ea de ori*i)e a)i+al"
"e cntresc # poriuni de grsime(ma(im 0,5g n eprubete de centrifug, se
adaug #,5ml amestec de e(tracie (acetonitril'eter de petrol(%e(an 75'#5 $i se
amestec cu )orte(ul timp de 1min! "e centrifug%eaz la ,000rot'min timp de #0min,
la -10
0
*! "e separ fazele prin decantarea fazei superioare ntr-o eprubet, se
nclze$te u$or grsimea rmas pe fundul eprubetei de centrifug pn cnd se
tope$te $i se repet e(tracia folosind #,5ml amestec de e(tracie!"e colecteaz
fazele organice $i se concentreaz la sec!
.$ Puri,icarea pe coloa)" de ,lori!il
4n coloana cromatografic se adaug &g florisil, se taseaz umplutura prin
batere u$oar n pereii tubului $i deasupra se adaug 1g sulfat de sodiu
an%idru!
0(tractul organic de la punctul 7!,!&!#! adus la sec se reia cu 5ml eter
petrol(%e(an $i se trece cantitati) n coloan! "e spal pa%arul, de , ori, cu cte 1 ml
eter de petrol!+eziduurile de pesticide reinute pe florisil se elueaz cu cte ,0ml
sol)ent eluie 8, 6 $i *! "e regleaz robinetul coloanei astfel nct debitul s fie de
#,5-,ml'min! 0luatul obinut se concentreaz la rota)apor, la &0
0
*, la sec !
c! Co)ce)(rarea !ol3e)(ului de eluie
Dup trecerea pe coloana de florisil, sol)entul de eluie se colecteaz n
balonul de 100 ml al e)aporatorului rotati) $i se concentreaz pn ce )olumul
eluatului se reduce la circa 1ml, dup care concentratul se e)apor la sec sub curent
de azot! +eziduul se redizol) n #,5 ml amestec isooctan'toluen ((- .1)')
coninnd standard intern!
d$Ex(racia reiduurilor -i puri,icarea lor pri) *el per+eaie de 4)al("
per,or+a)"
9rsimea obinut se tope$te prin nclzire u$oar pe baia de ap! Din
aceasta se cntre$te 0,5 g ntr-un )ial , se dizol) cu 5ml amestec ciclo%e(an-
acetat de etil1.1, $i se in5ecteaz n sistemul 92*!
2entru produsele cu un coninut redus de grsime,e(tractul eteric obinut n
urma etapei de e(tracie se concentreaz pn aproape de sec,dup care se aduce
la un )olum de 5ml cu amestec ciclo%e(an-acetat de etil 1.1 se introduce ntr-un )ial
al sistemului 92*!si se in5ecteaz!
2robele purificate astfel se concentreaz sub curent de azot aproape de sec
dup care se aduc la un )olum de ,ml $i apoi se in5ecteaz n 9*!
e$ Puri,icarea reiduurilor de pe!(icide di) produ!e de ori*i)e )o)
a)i+al" pri) *el per+eaie de 4)al(" per,or+a)"
'$ Par(iie
Din proba de origine non-animal, foarte bine omogenizat, se cntresc,ntr-
un tub de centrifug, 7,5 g (la balana analitic, cu precizie de 0,0001g! "e adaug
15 ml aceton, se omogenizeaz timp de #0 secunde apoi se adaug 15 ml clorur
de metilen $i 15 ml eter de petrol! "e agit din nou pentru #0 secunde!
"e centrifug%eaz la &000 rot' min timp de 10 min! "e decanteaz 15 ml din
e(tractul organic,se e)apor pn aproape de sec la rota)apor(temperatura bii de
ap este de &0
0
*! "e e)apor la sec la temperatura camerei!
+eziduul se redizol) n 5 ml amestec ciclo%e(an'acetat de etil (1 .1)')
1$ Puri,icarea
"e introduce proba astfel pregtit ntr-un )ial al sistemului 92* $i se
in5ecteaz!
2roba purificat se concentreaz sub curent de azot aproape de sec dup care se
aduce la un )olum de ,ml cu amestec isooctan'toluen(-.1,apoi se in5ecteaz n 9*!
#$%$&$%$Separarea *a-cro+a(o*ra,ic"
a$ Co)diii de lucru ale GC5ECD6
"e desc%ide metoda de lucru $i se a$teapt pn cnd aparatul a5unge la
condiiile de lucru .
temperatura in5ectorului . #50
0
* :
temperatura detectorului. ,00
0
*:
programul de temperatur al cuptorului. 1
iniial
; 70
0
* , +ate 1. 1emp;#00
0
*,
)iteza de cre$tere a temperaturii este ,0
0
*' min!, st 1min!: +ate #.
1emp;#,0
0
*, )iteza de cre$tere a temperaturii este ,
0
*' min!, st 5min: +ate
,. 1emp;#<0
0
*, )iteza de cre$tere a temperaturii este 5
0
*' min!, st 5min!
gaz purttor. %eliu de puritate --,--= cu debitul de #ml' min:
gaz de adaos( ma>e-up . azot de puritate --,--= cu debitul de #5ml' min!:
)olumul de in5ecie. 1/l!
.$ Co)diii de lucru ale GC5TSD6
"e desc%ide metoda de lucru $i se a$teapt pn cnd aparatul a5unge la
condiiile de lucru .
temperatura in5ectorului . #50
0
* :
temperatura detectorului. #50
0
*:
programul de temperatur al cuptorului. 1
iniial
; 70
0
*,sta 1min!,+ate 1.
1emp;1<0
0
*, )iteza de cre$tere a temperaturii este ,0
0
*' min!, st ,min: +ate
#. 1emp;#,0
0
*,)iteza de cre$tere a temperaturii este &
0
*' min!,st 1min:+ate
,.1emp;#70
0
*, )iteza de cre$tere a temperaturii este,0
0
*' min, st 0min:
gaz purttor. %eliu de puritate --,--= cu debitul de #ml' min:
gaz de adaos( ma>e-up . azot de puritate --,--= cu debitul de ,0ml' min!:
gaze de flacr. ?#-&,#ml'min: aer- 175ml'min:
bead current. ,,&8:
)olumul de in5ecie. 1/l!
c$ Co)diii de lucru ale GC5MS6
"e desc%ide metoda de lucru $i se a$teapt pn cnd aparatul a5unge la
condiiile de lucru .
temperatura in5ectorului . #50
0
* :
temperatura detectorului. #50
0
*:
programul de temperatur al cuptorului. 1
iniial
; 50
0
*,sta 1min!,+ate 1.
1emp;1<0
0
*, )iteza de cre$tere a temperaturii este 1<
0
*' min!, st #min: +ate
#. 1emp;#00
0
*,)iteza de cre$tere a temperaturii este #
0
*' min!,st &min:+ate
,.1emp;#-0
0
*, )iteza de cre$tere a temperaturii este10
0
*' min, st &min:
gaz purttor. %eliu de puritate --,--= cu debitul de 1,5ml' min:
)olumul de in5ecie. 1/l
Dup ce aparatul a a5uns la condiiile de lucru de mai sus se analizeaz
probele $i se integreaz dup curba de calibrare! *urba iniial de calibrare se
prepar pentru fiecare analit de interes, folosind 5 sau mai multe standarde de
calibrare de concentraii apropiate, dar deasupra limitei de detecie a metodei
precum $i alte concentraii ce corespund domeniului de concentraie n probele reale!
*oeficientul de determinare este calculat, pentru fiecare curb, de ctre soft $i este
folosit la aprecierea curbei potri)ite! @n coeficient A 0,-- este acceptat! *urba de
calibrare iniial trebuie s fie )erificat la fiecare #& ore(continuarea calibrrii prin
in5ectarea standardului de lucru! Dac rspunsul )ariaz de la rspunsul pre)zut,
mai mare dect criteriul acceptat, trebuie s se fac o nou calibrare!
4n cadrul determinrilor de reziduuri de pesticide, prin gaz-cromatografie,
ordinea zilnic a cromatogramei trebuie s fie urmtoarea.
prob oarb Bblan>C pentru controlul puritii reacti)ilor:
etalonul compus de lucru:
un test de recuperare compus dintr-o prob martor $i o prob fortificat :
setul de probe lucrate n ziua respecti) cu acela$i lot de reacti)i $i materiale
(care au fost controlate prin proba BblancC $i de ctre acela$i analist :
etalonul compus de lucru care nu trebuie s difere semnificati) de cel de la
nceputul lucrului!
"e in5ecteaz cte 1/l de etalon compus, la fel $i pentru probe, recuperare
sau blan>! "e obin astfel cromatogramele etalonului $i a probei de analizat!
Ddentificarea componenilor din prob se face n funcie de timpul de retenie,
comparati) cu timpul de retenie a etalonului! 2rin utilizarea sistemului de integrare
se realizeaz att marcarea automat a timpilor de retenie ct $i integrarea )rfurilor
cromatografice, afi$ndu-se direct aria lor!
Ea probele cu dep$iri a 3+E se repet analiza $i se reface curba de calibrare
n matrice!