Biofizica transportului

prin membrane

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Cuprins

❒
Structura membranei celulare
❒
Clasificarea modalitatilor de transport
membranar
❒
Transportul pasiv membranar
❒
Transportul activ membranar
❒
Receptori membranari si semnalizare
celulara

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei celulare

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Membrana celulara

= structura supramoleculara care separa

spatiul intracelular de spatiul extracelular

❒
Este semipermeabila si selectiv permeabila

❒
Nu este o bariera pasiva, ci are numeroase
functii:

Transport de substanta dintr-o parte in alta a sa

Traducere si transfer de informatie

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei

Modificat dupa Wikimedia Commons

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei

❒
Mozaic fluid proteolipidic (Nicholson &
Singer, 1972):

Bistrat lipidic

Proteine si glicoproteine inserate

❒
Structura fluida si dinamica

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei - lipidele

❒
Lipide - aprox. 50% din masa membranei

Fosfolipide (majoritatea!): fosfatidilcholina, sfingomielina,
phosphatidilserina,
fosfatidiletanolamina

Colesterol (proportie variabila; in unele celule – raport
de 1:1 cu moleculele de fosfolipide)

Glicolipide (5% din lipidele membranare): ganglioside

Se gasesc exclusiv in stratul extern, non-
citoplasmatic

❒
Organizate in bistrat, cu capatul hidrofil spre exterior si
lanturile hidrofobe spre interior

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei - lipidele

❒
Lungimea lantului hidrofob
influenteaza tipul de organizare a
moleculelor lipidice

Lanturi scurte → solubile in apa

Lanturi mai lungi → micele

Lanturi si mai lungi → lipozomi

Cele mai lungi lanturi (16-20 atomi C) → bistraturi lipidice

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei - lipidele
❒
Comportament fluid
➔
Miscari ale moleculelor PL:

Vibratie (flexie a lanturilor la nivelul
legaturilor duble)

Rotatie (in jurul propriului ax)

Difuzie laterala (107/sec; D = 10-8 cm/s)
= schimbarea pozitiei intre molecule vecine


Flip-flop (<1/luna) = tranzitie intre cele 2
straturi

➔
Factori care influenteaza fluiditatea:
●
Compozitia
– Colesterul scade fluiditatea
– Tranzitia de faza solid-lichid are loc la temperaturi cu atat mai joase, cu cat
lanturile lipidice sunt mai scurte si mai bogate in duble legaturi (mai
nesaturate)
●
Temperatura
UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)
Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei - proteinele
❒
Proteine intrinseci (integrale)

Traverseaza intreaga grosime a membranei

Sunt molecule amfifile

Aprox. 70% din proteinele membranare

❒
Proteine extrinseci (periferice)

Molecule hidrofile

Se ataseaza doar periferiei membranei (legaturi
mai slabe) in zona hidrofila, sau unor proteine
integrale

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei - proteinele

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Structura membranei - proteinele
❒
Zonele membranare unde exista proteine mult mai
dese au o organizare speciala (raft-uri lipidice, lipid
rafts)

Sunt mai bogate in colesterol

Au fluiditate mai scazuta

Wikimedia Commons

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Modele de studiu al membranelor
❒
Membrane lipidice artificiale
❒
Metode:

BLM – Black Lipid Membrane

SSM – Solid Supported Membrane

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Clasificarea modalitatilor de
transport membranar

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Macrotransport si microtransport

❒
Macrotransport (trafic vezicular)

Endocitoza

Exocitoza

Transcitoza

❒
Microtransport

Transport pasiv

Transport activ

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transport activ si transport pasiv
❒
Transportul pasiv:

Se realizeaza in sensul gradientilor
electrochimici

Nu necesita consum energetic extern

❒
Transportul activ:

Se realizeaza in sensul contrar gradientilor
electrochimici din sistem

Necesita consum energetic

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Macrotransportul

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Tipuri de macrotransport

❒
Endocitoza: transportul unor molecule mari / structuri
mai complexe (ex: fragmente bacteriene etc) din exteriorul
celulei spre interior, in vezicule citoplasmatice

❒
Exocitoza: transportul unor molecule mari / structuri
mai complexe din interiorul celulei (vezicule
intracitoplasmatice) spre exteriorul celulei, in urma
fuzionarii acestor vezicule cu membrana

❒
Transcitoza: endocitoza + exocitoza acelorasi
componente (traversarea celulei prin vezicule de
transcitoza)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Endocitoza
❒
Tipuri particulare:

Pinocitoza – transportul lichidului extracelular

Fagocitoza – transportul bacteriilor, corpilor straini
mici etc in vederea digestiei enzimatice (face parte din
procesele de aparare ale organismului)

Endocitoza mediata de receptori – substantele se
ataseaza la membrana prin cuplarea cu receptori
specifici, apoi sunt internalizate sub forma de vezicule

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)
Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Exocitoza
❒
Secretia constitutiva

Secretia permanenta a unor produsi de sinteza
celulari
❒
Secretia controlata:

Exocitoza unor produsi de sinteza celulara ca
urmare a unui stimul extracelular (factor
hormonal / umoral) care activeaza celula

Exocitoza neurotransmitatorilor

Mediata de Ca2+

Implicate modificari conformationale ale proteinelor
asociate veziculelor sinaptice (SNAP)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)
Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Proteine asociate
veziculelor sinaptice

Wikimedia Commons

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transcitoza

❒
Endocitoza + exocitoza ulterioara a unor
vezicule
❒
Modalitate de traversare a celulei
❒
Exemplu:

Traversarea endoteliului de catre proteine
sangvine, pentru a ajunge in spatiul extracelular
tisular (transvazarea proteinelor plasmatice)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Directionarea traficului vezicular
❒
Caile principale ale macrotransportului
celular:

Calea de biosinteza – secretie:
➔
Reticulul endoplasmic (RE) → Aparatul Golgi (AG) (NU necesita semnale
de sortare propriu-zise)
➔
AG → vezicule secretorii → membrana / spatiul extracelular
➔
AG → endozomi (vezicule citoplasmatice)
➔
AG →lizozomi

Calea de endocitoza:
➔
Exteriorul celulei / membrana →vezicule de endocitoza / endozomi ( →)
lizozomi

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Directionarea traficului vezicular
❒
Se bazeaza pe recunoasterea unor proteine
specifice atasate membranei veziculare,
numite semnale de sortare
❒
Exemple de semnale de sortare:

COP I – directioneaza traficul de la aparatul
Golgi catre RE

COP II – directioneaza traficul de la RE spre AG

Clatrina – directioneaza traficul de la AG spre
endozomi

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transportul pasiv

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Tipuri de transport pasiv
❒
Difuzia simpla:

Traversarea membranei de catre substante
hidrofobe

❒
Difuzia prin canale ionice / pori

Traversarea membranei de catre substante
hidrofile, prin zone specializate ale
membranei

❒
Difuzia facilitata:

Cu ajutorul unor proteine-transportori

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Difuzia simpla prin membrana
❒
Este metoda de transport pentru substante
care se pot dizolva in mediul lipidic al
membranei:

Substante hidrofobe

Gaze

❒
Difuzie conform legii lui Fick; permeabilitatea
membranei P depinde de coeficientul de partitie β, de
coeficientul de difuzie D si de grosimea membranei δ:

D
P=


UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)
Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Difuzia prin canale ionice si pori
❒
Canale ionice:

Proteine integrale ale membranei

Permit trecerea unor substante hidrofile, de
dimensiuni mici (ioni etc)

Permit transport bidirectional

Au filtre de selectivitate
❒
Pori:

Structuri neselective (cu exceptia dimensiunii
particulelor)

Aparitia lor in membrana este un fenomen
stochastic

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Canale ionice

❒
Structura:

Senzor (S)

Filtru (F)

Vestibul (V)

Poarta (P)

Inactivator (I) (±)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Canale ionice
❒
Tipuri de canale ionice:

Canale ionice activate electric
➔
Ex: canalele ionice de Na+ si K+ din membrana
neuronala, implicate in aparitia PA


Canale ionice activate chimic
➔
Ex: receptorii ionotropi pentru neurotransmitatori


Canale ionice activate mecanic
➔
Ex: canalele de K+ din celulele ciliate (din varful
stereocililor)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Canale ionice
© Gary G. Matthews

UMF Carol Davila http://www.blackwellpublishing.com/matthews Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Canale ionice
❒
Transportul printr-un canal ionic deschis se
realizeaza in sensul gradientului de
concentratie

❒
Transportul presupune legarea ionilor la
proteina-canal → cinetica Michaelis-Menten

❒
Transportul poate fi inhibat specific prin
blocanti ai canalelor ionice

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Difuzia facilitata
❒
Se realizeaza cu ajutorul unor proteine
integrale numite transportori, care se pot afla
in doua stari conformationale distincte:

Stare cu afinitate mare pentru substrat
➔
Substratul se leaga la transportor, la nivelul situsurilor de
legare
➔
Legarea induce modificarea conformationala si tranzitia la
starea cu afinitate mica, in care situsul de legare este
pozitionat pe partea opusa a membranei

Stare cu afinitate mica pentru substrat
➔
Substratul este eliberat pe partea opusa a membranei
➔
Dezlegarea substratului induce revenirea la starea
conformationala initiala (cu afinitate mare)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Difuzia facilitata

❒
Exemple de transportori:

Pentru glucoza

Pentru colina

Pentru ioni (= Ionofori)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Comparatie intre tipurile de
transport pasiv

TRANSPORTORI CANALE IONICE

SPECIFICITATE Mai mare Mai mica

VITEZA Mai mica Mai mare

❒
Transportorii sunt intr-un numar mai mare in organism decat
canalele ionice
❒
Transportorii pot fi implicati si in transport activ

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transportul activ

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Tipuri de transport activ
❒
Transport activ primar:

Cu ajutorul pompelor ionice, care functioneaza
cu consum energetic

Energia este furnizata de hidroliza moleculelor
de ATP / GTP

❒
Transportul activ secundar:

Cu ajutorul transportorilor

O specie este transportata in sens invers
gradientului de concentratie, pe seama
transportului altei specii in sensul gradientului
de concentratie

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transportul activ primar

❒
Pompele ionice:

Proteine integrale

Au un centru activ (cu situsurile de legare ale
speciilor transportate) cu acces alternativ catre
partea extracelulara si intracelulara, prin
modificari conformationale ale proteinei

Modificarea conformationala necesita energie
furnizata prin hidroliza ATP / GTP etc

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transportul activ primar
❒
Pompa de Na+/K+ (“Na+/K+ ATP-aza”)

Transporta 3 ioni de Na+ din interiorul celulei
spre exterior si 2 ioni de K+ din exteriorul celulei
spre interior, la un ciclu → transport impotriva
gradientilor de concentratie


Energia necesara transportului este furnizata
prin hidroliza unei molecule de ATP


Transport net de o sarcina pozitiva spre
exterior / ciclu → activitate electrogena


4 subunitati (2α, 2β); subunitatile au activitate
ATP-azica
UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)
Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 + +
Pompa de Na /K
❒
Functionarea pompei
este descrisa de
schema Alberts - Post

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 + +
Pompa de Na /K

http://highered.mcgraw-hill.com/

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transportul activ secundar
❒
Simport:

Transportul celor doua specii are loc in acelasi
sens, relativ la membrana

Ex: simportul glucoza / Na+ din lumenul intestinal spre interiorul
celulelor epiteliale (glucoza – transportata activ, pe seama
transportului pasiv de Na+)

❒
Antiport

Transportul celor doua specii are loc in sens opus

Ex: antiport 3 Na+/1 Ca2+ in miocite (electrogen; Na+ transportat
pasiv, Ca2+ activ)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Transport activ secundar

Simport

Antiport

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Sinteza – modalitati de transport

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori membranari si
semnalizare celulara

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Semnalizare celulara

= Comunicarea intre celule, care sta la baza

oricarui sistem de control in organism

❒
Semnalele sunt receptate de celule si
determina ca raspuns o serie de modificari ale
activitatii celulare

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Definitii
❒
Receptor celular = proteina situata in membrana /
citoplasma celulara; caracteristici:

Legarea unei molecule (= ligand) determina modificarea
conformationala a acestuia

Modificarea conformationala a acestuia are ca urmare o cascada de
alte modificari ale unor componente celulare, cu rezultat final un
raspuns celular

❒
Ligand = molecula care se leaga cu un grad mai mic
sau mai mare de specificitate de un anumit receptor;
liganzii pot fi:

Agonisti – determina activarea receptorului

Antagonisti – determina inactivarea/blocarea receptorului

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Definitii
❒
Mesager prim = molecula-ligand care declanseaza
cascada de modificari celulare (de obicei, un agonist al
unui receptor membranar)

❒
Mesager secund = molecula generata in urma
activarii receptorului celular; ea difuzeaza, activand la
randul sau enzime celulare, continuand cascada de
modificari induse de activarea receptorului initial

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori - clasificare

❒
Tipuri de receptori:

Receptori membranari

Ionotropi – sunt canale ionice activate chimic, de catre
moleculele semnal

Metabotropi – activarea lor determina activarea unor lanturi
enzimatice, cu modificari metabolice celulare


Receptori intracelulari

Receptori citoplasmatici – de obicei, pentru mesageri
secunzi

Receptori nucleari – pentru factori de transcriptie (semnale
care controleaza transcrierea informatiei genetice si sinteza
de proteine)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori ionotropi

❒
Exemple:

Receptori nicotinici ptr ACh
 Receptori pentru GABA (GABAA,C)

Receptori pentru glicina

Receptori pentru serotonina

Receptori pentru glutamat (AMPA, NMDA, rec. ptr
kainat)

Receptori pentru ATP (P2X)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori ionotropi

© Gary G. Matthews

http://www.blackwellpublishing.com/matthews

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori metabotropi
❒
Tipuri de receptori metabotropi:

Receptori cuplati cu proteine G (GPCR)

Receptori cuplati cu enzime (de obicei, tirozin-
kinaze) (RTK)

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori metabotropi cuplati cu
proteine G

❒
Foarte multe tipuri
❒
Implicati in:

Perceptia vizuala, olfactiva

Neurotransmisia vegetativa si in sistemul nervos central (roluri
modulatoare, frecvent)

Roluri modulatoare in lanturile de semnalizare ale sistemului imun
❒
Exemple:

Receptori muscarinici pentru acetilcolina

Receptori muscarinici pentru GABA

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori cuplati cu proteine G

http://highered.mcgraw-hill.com/

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Receptori cuplati cu tirozin-kinaze

❒
Proteina receptor are activitate de tirozin-kinaza, in
forma fosforilata
❒
Categoria cuprinde receptori pentru:

Factori de crestere

Hormoni

Citokine
❒
Exemplu: receptorul pentru insulina

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Sinteza - receptori

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010
 Bibliografie suplimentara
❒
http://www.wiley.com/college/pratt/0471393878/student/ani
❒
http://programs.northlandcollege.edu/biology/Biology1111/an
http://programs.northlandcollege.edu/biology/Biology1111/a
❒
http://www.wiley.com/legacy/college/boyer/0470003790/anim

UMF Carol Davila Transportul prin membrane (AP)

Catedra de Biofizica Medicala An universitar 2009-2010