Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1. TEORIA SISTEMICĂ
Modul dominant de gândire într-o anumită epocă s-a răsfrânt şi asupra
metodologiei de cercetare. Ca toate ştiinţele, cercetarea naturii a parcurs etape
progresive de cunoaştere:
• În cursul Evului Mediu, marcat de gândirea mistică, încercările timide de
cunoaştere a naturii au fost dominate de metoda scolastică. Ea consta doar în
comentarea textelor permise, traduceri şi interpretări neştiinţifice.
• Gândirea metafizică mecanicistă a secolelor XVI-XVIII a avut drept
cauză şi totodată efect apariţia metodei analitice denumită apoi carteziană. Ea
este prima metodă ştiinţifică de cercetare a naturii necesară si larg aplicată, dar
insuficientă. În domeniul biologic metoda constă în analiza cât mai profundă şi mai
corectă a structurilor şi mecanismelor concrete ale diferitelor procese
biologice. Această analiză se perfecţionează pe măsura dezvoltării diferitelor
tehnici. Rezultatele obţinute în această direcţie reprezintă principalul merit al
metodei. Th. Dobzhansky şi E. Boesinger (1968) şi G.G. Simpson (1969) citaţi de
Botnariuc (1976) numesc această metodă şi reducţionistă, relevând prin acest
termen neajunsul ei principal: tendinţa de a explica însuşirile, legile întregului, prin
reducerea lor la legile, însuşirile părţilor componente. Reducţionismul este de fapt
o anumită interpretare a relaţiilor dintre parte şi întreg.
• În secolul XIX, secolul apariţiei şi consolidării gândirii evoluţioniste şi în
primele decenii ale secolului XX, această gândire se concretizează în metoda
istorică (darwiniană). Esenţa metodei constă în aceea că orice structură sau funcţie
biologică, fiecare mecanism concret ce caracterizează materia vie sunt privite
ca un rezultat al unui proces de dezvoltare istorică a vieţii. Prin această metodă
se tinde la clarificarea valorii, a semnificaţiei evolutive şi totodată adaptative a
structurilor şi proceselor biologice. În timp ce metoda carteziană lămureşte
componenţa întregului, mecanismele proceselor, legităţile de structură şi funcţie,
metoda istorică lămureşte originea acestor mecanisme, caracterul lor adaptativ şi
semnificaţia lor în desfăşurarea evoluţiei.
• A apărut evident că metoda analitică şi cea istorică nu se opun, ci au un
caracter complementar, ceea ce face necesară aplicarea lor concomitentă.
Aceasta aplicare a dus la rezultate importante în dezvoltarea concepţiei
evoluţioniste, reprezentată prin neodarwinismul actual sau teoria sintetică a
evoluţiei, ilustrată prin lucrările unor eminenţi biologi, ca J.S. Huxley, I.I.
Smalgausen, B. Rensch, E. Mayr etc.
• Analiza deficienţelor teoriei sintetice, sesizate adesea chiar de
reprezentanţi de seamă ai ei, precum şi încercările de a le depăşi, arată că
neajunsul principal constă în neglijarea unui aspect esenţial, acela al organizării
materiei vii. La ora actuală, metoda ştiinţifică de cercetare a naturii este
reprezentată de teoria sistemică.
Ideea de bază a teoriei sistemice este aceea că întreaga materie, atât cea lipsită
de viaţă cât şi cea vie, este organizată în sisteme ierarhizate. Orice sistem este
alcătuit din subsisteme şi la rândul sau devine parte componentă (subsistem)
a unui sistem mai cuprinzător. Fiecare sistem se comportă ca un întreg şi în cadrul
ierarhiei relaţiile dintre sistemele ierarhizate sunt relaţii dintre parte şi întreg.
În cadrul acestor interacţiuni, metoda sistemică permite reevaluarea modului în
care conexiunile părţilor componente duc la apariţia unor noi însuşiri ale
întregului şi invers, a modului în care întregul influenţează însuşirile părţilor
componente.
După definiţia lui Ludwig von Bertalanffy (1960) un sistem reprezintă "un
ansamblu de elemente aflate în interacţiune". Esenţial este faptul că legăturile şi
interacţiunile dintre elementele sistemului fac ca sistemul să se comporte ca un
întreg, ca un tot, faţă de sistemele înconjurătoare. Menţinerea sistemului va depinde
de gradul şi de modul lui de organizare, de felul cum funcţionează, de capacitatea
lui de a contracara într-un fel sau altul acţiunile exterioare care în general tind să îl
dezorganizeze.
În funcţie de schimburile pe care le realizează cu mediul înconjurător,
sistemele se clasifică în trei categorii: sisteme izolate, sisteme închise şi sisteme
deschise.
Sistemele izolate sunt acele sisteme care nu fac nici un fel de schimburi
(materiale sau energetice) cu mediul înconjurător. În natură asemenea sisteme nu
există, ele sunt postulate doar teoretic (ipotetice). Postularea teoretică a unor
asemenea sisteme este utilă şi chiar necesară deoarece ele reprezintă starea "ideală"
a unui sistem. Ştiinţele operează cu asemenea stări ideale, inexistente în natură,
dar necesare teoretic.
Sistemele închise sunt sisteme care stabilesc schimburi energetice cu mediul
înconjurător, fără a face şi schimburi materiale. De exemplu, un vas cu apă ermetic
închis nu va avea cu mediu schimburi materiale ci doar energetice: dacă aerul
înconjurător se va răci, apa va ceda din căldura ei, iar dacă se va încălzi, apa va
absorbi căldura. Din punct de vedere termodinamic, sistemele închise evoluează spre
starea termodinamică cea mai probabilă, în care energia liberă a sistemului tinde
către minim, iar entropia tinde către valoarea maximă. O asemenea evoluţie duce
deci la nivelarea termodinamică a sistemului faţă de mediul înconjurător. Sisteme
apropiate de cele închise pot exista în condiţii naturale.
Sistemele deschise sunt acele sisteme care stabilesc schimburi de materie şi
energie cu mediul ambiant. În această categorie sunt cuprinse o mare diversitate de
sisteme lipsite de viaţă, precum şi toate sistemele biologice. Deoarece
noţiunea de sistem deschis este mai largă decât cea de sistem biologic, este
necesară o caracterizare diferenţiată a celor două noţiuni.
Din punct de vedere sistemic, celula reprezintă un sistem deschis biologic.
3. CARACTERELE SISTEMELOR
Capitolul II
Prionii sunt agenţi infecţioşi care se replică în celula gazdă prin copierea unei
structuri proteice aberante. Se pot forma în levuri şi provoacă diverse maladii
degenerative la mamifere. Maladia cea mai cunoscută provocată de prioni este
encefalopatia spongiformă bovină (boala vacii nebune), boală care se poate
transmite ocazional la om în cazul ingestiei de carne infectată.
Virusurile sunt agenţi infecţioşi care se replică în celula gazdă prin copierea
propriului material genetic. Prezintă o structură simplă formată dintr-un acid
nucleic (ADN sau ARN) învelit într-o capsidă proteică. La unele virusuri,
capsida este înconjurată de o anvelopă lipoglicoproteică de formă şi dimensiune
diferită (fig.II.l). Virusurile se pot multiplica doar în interiorul unei celule gazdă
utilizând energia şi aparatul de sinteză proteică al acesteia. În general, replicarea
implică dezasamblarea particulei virale, replicarea genomului viral, sinteza
proteinelor virale, reasamblarea componentelor cu formarea particulelor virale
fiice (fig.II.2.). Efectul major celular al infecţiei virale depinde de forma sa de
organizare structurală :
• În cazul virusurilor fără anvelopă, o particulă virală (virion) poate
produce mii de cópii virale ceea ce va conduce la moartea celulei gazdă. Celula
gazdă este lizată şi permite în acest fel accesul virusurilor nou formate la
celulele vecine (de exemplu moartea celulelor epidermice din zona cutanată
afectată de virusurile herpes simplex şi al variolei).
• Virusurile cu anvelopă lipoproteică pot părăsi celula fără să distrugă
membrana plasmatică, deci fără să o omoare. Acestea pot provoca infecţii
cronice (HIV, virusul hepatitei B, C, D), iar unele dintre ele determină
transformarea celulei infectate în celulă malignă (ex.papilloma virus
implicat în etiologia cancerului de col uterin, virusul Epstein-Barr implicat în
etiologia anumitor tipuri de limfoame).
Materia vie este organizată în celule, iar viaţa se manifestă numai în cadrul
organismelor cu structură celulară. Organismele vii, indiferent de sistemul
taxonomic în care sunt încadrate, aparţin la două tipuri de organizare celulară -
procariot şi eucariot, fiecare fiind caracterizat printr-o anumită structură şi
compoziţie chimică. Indiferent de organizare, celula, ca punct nodal de la care apare
viaţa, manifestă "triada viului": autoreglare, metabolism şi reproducere.
• celule de talie mică cu diametre sub 10μ: limfocitele mici (5-6μ), neuronii
moleculari (3-4μ), eritrocitele (7,5μ), capul spermatozoidului (4-5μ).
• celule de talie mijlocie cu diametre cuprinse între 10-30μ sunt majoritatea
celulelor din corpul omului: hepatocite, enterocite, splenocite, nefrocite, tireocite
etc.;
• celule de talie mare cu diametre peste 30μ: neuronii pseudounipolari din
ganglionii spinali (40-60μ), neuronii Purkinje din scoarţa cerebeloasă (30-50μ),
neuronii piramidali din scoarţa cerebrală (80-120 μ), ovulul (200μ), celula
musculară striată scheletală (12 cm diametrul longitudinal şi până la 100 μ
diametrul transversal).
Capitolul III
Macromolecule informaţionale
Se presupune că materia vie provine din univers. Acesta este alcătuit din
elemente chimice care luate separat nu sunt (nici unul din ele) specifice viului.
Organismele vii selecţionează şi utilizează din mediul înconjurător numai
elementele chimice de care au nevoie. Din totalitatea elementelor din tabloul lui
Mendeleev, numai 92 sunt considerate a fi elemente naturale. Dintre acestea, în
celule au fost identificate aproximativ 60, dar numai 20 sunt componente esenţiale
ale diferitelor organisme vii. Acest lucru dovedeşte unitatea materială a lumii vii şi
nevii, materia vie fiind rezultatul evoluţiei materiei lipsite de viaţă.
Concentraţia elementelor din materia vie este diferită de cea a elementelor
care caracterizează non-viul. Dacă în scoarţa terestră predomină elementele grele
(Si, Al, Fe), în celule predomină elementele uşoare. Elementele grele nu sunt
adecvate vieţii, datorită insolubilităţii lor în soluţii apoase, la pH fiziologic.
Elementele uşoare au volum mic, traversează cu uşurinţă membranele, pot ceda sau
accepta uşor electroni, ceea ce determină apariţia unor compuşi stabili. Din acest
punct de vedere, compoziţia mediului intern este apropiată de cea a Cosmosului (cu
excepţia gazelor inerte) şi de cea a apei de mare.
Elementele din compoziţia materiei vii prezintă o distribuţie specifică.
Compoziţia chimică diferă de la un regn la altul (tab.III.I.), de la o specie la alta, de
la un tip celular la altul.
1.3. Oligoelemente. Sunt reprezentate de Fe, Cu, Co, Mn, Zn, I, Mo, F, B, V, Si. Ele
prezintă o concentraţie celulară sub 0,02% şi îndeplinesc un rol catalitic,
influenţând activităţile enzimatice. Cu toate că se găsesc în concentraţie foarte mică,
rolul lor biologic este deosebit de important. Carenţa sau excesul lor în apă şi sol în
unele zone geografice determină în organism apariţia unor boli, denumite “endemii
bio-geo-chimice”. Astfel, absenţa iodului în zonele submuntoase determină boala
numită “guşă endemică”, iar absenţa zincului determină nanism şi hipogonadism
(boala a fost descrisă la popoarele asiatice, care au o alimentaţie predominant
cerealieră; cerealele inhibă absorbţia intestinală a zincului).
Fierul are rol fundamental în transportul oxigenului, fiind un component al
pigmenţilor respiratori (hemoglobina), al enzimelor respiratorii (citocromi), al
catalazelor şi peroxidazelor. Intră de asemenea în componenţa miozinei,
siderofilinei, feritinei. Deficitul de fier de origine endogenă (hemoragii, boli
parazitare, boli metabolice) sau exogenă (aport insuficient) determină anemii
feriprive.
Fluorul este un constituent al dinţilor şi oaselor. Concentraţia sa scăzută
favorizează apariţia cariei dentare, iar excesul determină fluoroza dentară. De
asemeni, creşterea concentraţiei de fluor determină dezechilibre minerale în
organele aparatului locomotor, disfuncţii tiroidiene, renale, miocardice.
Iodul intră în componenţa hormonilor tiroidieni asigurând astfel funcţia glandei
tiroide şi a tuturor proceselor metabolice ce ţin de aceasta. Carenţa în iod determină
insuficienţa tiroidiană cu tulburări trofice şi neuropsihice de diferite grade. Boala se
combate prin administrare profilactică de sare iodată.
Cuprul este implicat în funcţia hematopoetică (sinteza hemului, adeseori în
conexiune cu fierul) şi în funcţia metabolică, fiind necesar activităţii unor enzime
tisulare. Participă la formarea pigmenţilor şi la asigurarea apărării antiinfecţioase.
În organism el intră în componenţa unor enzime cum sunt: citocromoxidaza,
ceruloplasmina, aminoxidaze, fenoloxidaza, hepatocupreine. Dezechilibrul
metabolic al cuprului antrenează tulburări ale sintezei proteinelor. Excesul de cupru
determină în organism boli care au la bază dereglări ale metabolismului proteic (boli
reumatice, sanguine, cardiovasculare, tiroidiene, infecţii bacteriene şi virale).
Manganul este un element necesar creşterii, metabolismului lipidic şi funcţiei
“marţiale” a fierului. Excesul de mangan determină scăderea funcţiei hepatice şi a
eritropoezei. De asemenea, creşterea concentraţiei de mangan determină inhibiţia
enzimelor oxidative implicate în biosinteza catecholaminelor (tirozinhidroxilaza) şi
în fosforilarea oxidativă. Efectele dezechilibrelor de concentraţie ale manganului se
repercută şi la nivel genetic, prin tulburarea activităţii enzimelor care asigură
metabolismul ADN şi funcţia ribozomilor.
2. SUBSTANŢELE ANORGANICE
2.1. APA
2.1.1. Importanţa apei în celulă. Apa reprezintă una dintre cele mai importante
substanţe anorganice din organismul uman. Ea reprezintă constituentul celular cel
mai abundent, cu excepţia ţesutului osos şi al smalţului dentar (fig.III.2). Apa
reprezintă mediul în care are loc organizarea structurilor celulare şi în care se
desfăşoară toate procesele fizico-chimice ale vieţii. Este indispensabilă activităţii
metabolice deoarece procesele fiziologice au loc în mediu apos. Fără apă, viaţa nu
este posibilă, dar ea nu constituie substratul proceselor vitale. Prin extragerea apei
din celule, procesele vitale sunt doar stagnate, nu suprimate. Un exemplu în acest
sens sunt experienţele efectuate pe seminţele de cereale, bacteriile şi sporii de
ciuperci găsite în mormintele faraonilor, care reintroduse în mediu propice
(rehidratate), şi-au continuat ciclul biologic.
2.1.2. Originea apei. Pentru organism, sursa de apă este de natură exogenă prin
ingestia de lichide şi alimente (care în mod normal este de aproximativ 2 litri pe zi)
şi de natură endogenă, rezultată din reacţiile metabolice. Deci, pe de o parte
moleculele de apă participă la realizarea reacţiilor intracelulare şi pe de altă parte
ele însele pot proveni din reacţiile metabolice.
H2O → H+ + OH-
↓ → H3O+ + OH‾ = 2 H2O
H+ + H2O → H3O+
2.3. GAZELE
3. SUBSTANŢELE ORGANICE
3.1. PROTEINELE
3.3. GLUCIDELE
GAG Răspândire
Condroitinsulfat Cartilaj
Dermatansulfat Piele
Keratansulfat Cornee
Heparansulfat Plămâni
Localizare Exemple
• plasmă - fibrinogen
- imunoglobuline
- proteine de grup sanguin
- tiroxină legată proteic
• urină - glicoproteine urinare
• hormoni - gonadotropină corionică
- hormon stimulator al foliculinei
- hormon stimulator al tiroidei
• enzime - ribonucleaza B
- glucuronidaza
- pepsina
- colinesteraza serică
• secreţiile mucoaselor - glicoproteine submaxilare
- glicoproteine gastrice
• ţesut conjunctiv - colagen
• membrane celulare - glicoforina
• membrane extracelulare - glicoproteine din membrana bazală
3.3.6. Proteoglicanii
Glicoproteinele cu concentraţie crescută glucidică poartă denumirea de
proteoglicani. Sunt sintetizaţi de fibroblaste, condroblaste, osteoblaste, macrofage,
histiocite, enterocite etc. Din punct de vedere al organizării moleculare sunt formaţi
dintr-un miez proteic numit proteină core pe care se ataşează lanţuri de GAG
(fig.III.21). Clasificarea şi localizarea lor este redată în tabelul III.VII.
3.4. LIPIDELE
3.4.1. Acizii graşi liberi apar în concentraţii mici. Au rol energetic şi structural. Ei
intră în căile de metabolizare, participând la:
a) -oxidare în mitocondrii şi peroxizomi;
b) biosinteza trigliceridelor cu formarea de depozite intracitoplasmatice;
c) biosinteza lipidelor complexe;
d) biosinteza prostaglandinelor.
3.4.2. Trigliceridele (triacilglicerolii) sunt esteri ai glicerolului cu acizii graşi.
Constituie familia cea mai numeroasă de lipide şi reprezintă componentele majore
ale lipidelor de depozit (rezervă) din celulele animale. Se depun în citosol sub forma
unor picături de dimensiuni variabile, evidenţiabile în MO prin tehnici de colorare
Sudan III, IV. Incluziunile lipidice au diametre cuprinse între 0,2-5 m şi au rol de
depozit energetic. În adipocitele albe incluziunile lipidice pot atinge un diametru de
80 m, ocupă întreg citosolul, împing nucleul la periferie şi conferă astfel celulei
aspectul caracteristic de “inel cu pecete”. Fiziologic, lipidele se depun în citosol în
scopul existenţei unei rezerve de combustibil. Procesul este reversibil, la nevoie
acizii graşi sunt eliberaţi prin hidroliză sub acţiunea lipazelor.
Fig.III.22. Organizarea moleculară a diferitelor clase de lipide
3.4.3. Steroizii sunt lipide care intră în alcătuirea unor substanţe importante pentru
organism: hormoni sexuali, hormoni corticosuprarenalieni, vitamina D, acizi biliari.
Steroizii care posedă o grupare OH se numesc steroli. Reprezentantul cel mai
răspândit este colesterolul. El se găseşte în bilă, creier, glande suprarenale şi alte
ţesuturi. La nivel celular, colesterolul este un important component membranar cu
rol modulator al fluidităţii membranare. El reprezintă aproximativ 20% din lipidele
membranare şi se găseşte în zona hidrofobă a dublului strat lipidic din plasmalemă
(predomină pe versantul extern) şi în endomembrane.
3.4.4. Prostaglandinele sunt o familie de derivaţi ai acizilor graşi care îndeplinesc
o gamă largă de activităţi biologice de natură hormonală sau reglatorie. Cele mai
cunoscute sunt prostaglandinele E1, F1 şi F2 , prescurtat PGE1, PGF1 şi PGF2 .
Sunt sintetizate în toate celulele nucleate din organism şi influenţează
funcţionalitatea oricărui tip celular. Deşi sunt sintetizate în cantităţi minime, au
efecte foarte variate asupra organismului. Sunt implicate în modularea răspunsurilor
hormonale (inducerea menstruaţiei, inducerea avortului în trimestrul II de sarcină),
contribuie la răspunsul antiinflamator, previn ulcerul peptic, au efect
bronhodilatator, influenţează procesul de agregare plachetară, reglează temperatura
corpului, scad tensiunea arterială şi induc contracţia muşchilor netezi.
3.4.5. Fosfolipidele (fosfatide, fosfogliceride) sunt componente majore ale
membranelor celulare; în alte compartimente celulare pot fi găsite doar în cantităţi
foarte mici. Cele mai reprezentative datorită abundenţei lor sunt fosfatidilcolina,
fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinozitolul, fosfatidilglicerolul,
cardiolipina şi plasmalogenii. Structura lor moleculară corespunde perfect funcţiei.
Sunt denumite molecule bimodale sau amfifile deoarece prezintă un cap hidrofil
(reprezentat de gruparea polară) şi o coadă hidrofobă (reprezentată de doi acizi graşi
esterificaţi) (fig.III.23). Moleculele care se pot intercala în structura apei fără a o
perturba energetic, intrând în relaţie cu legăturile de hidrogen sunt hidrofile şi deci
solubile în apă. Din contră, moleculele nepolare rup structura de legături de
hidrogen fără a forma în schimb alte interacţiuni favorabile cu moleculele de apă.
Ele sunt hidrofobe şi deci insolubile.
• Fosfatidiletanolamina şi fosfatidilcolina au gruparea polară formată din
aminoalcoolii etanolamină, respectiv colină. În fosfatidilserină, acidul
fosforic este esterificat cu gruparea hidroxil a aminoacidului L-serina. În
fosfatidilinozitol, gruparea polară este reprezentată de un alcool ciclic cu 6
atomi de carbon, inozitolul. În fosfatidilglicerol capul moleculei este
reprezentat de glicerol.
• Cardiolipina este un fosfolipid înrudit cu fosfatidilglicerolul. Este prezentă în
membranele celulare ale bacteriilor, iar la om în membranele interne
mitocondriale. A fost izolată pentru prima dată din muşchiul cardiac, foarte
bogat în mitocondrii, şi este implicată în scăderea fluidităţii membranare.
Conferă membranelor interne mitocondriale un rol de barieră între spaţiul
perimitocondrial şi matricea mitocondrială.
• Plasmalogenii se deosebesc de celelalte fosfolipide deoarece “coada” este
formată dintr-un acid gras cu lanţ lung şi un lanţ alifatic lung -nesaturat. Ei
alcătuiesc aproximativ 10% din constituenţii membranari şi se găsesc cu
precădere în membranele celulelor musculare şi nervoase.
3.4.6. Sfingolipidele sunt lipide complexe care se găsesc în cantităţi mari în ţesutul
nervos. Ele sunt formate dintr-o moleculă de acid gras, o moleculă de sfingozină şi
o grupare polară. Cele mai abundente sfingolipide sunt sfingomielinele, prezente în
teaca de mielină a nervilor. Alte sfingolipide conţin ca şi grupare polară una sau mai
multe glucide. Dintre acestea fac parte cerebrozidele, galactocerebrozidele,
gangliozidele. Deşi sunt constituente minore ale membranelor celulare, se dovedesc
a avea un rol important într-o serie de funcţii specializate. Astfel, gangliozidele sunt
concentrate îndeosebi în terminaţiile nervoase ceea ce a condus la ipoteza rolului
lor în transmiterea influxului nervos la nivelul sinapselor. Sunt prezente şi în
receptorii pentru acetilcolină precum şi în neurotransmiţători.
3.4.7. Glicosfingolipidele de la nivelul suprafeţei celulare sunt legate de
specificitatea de grup sanguin, dar şi de specificitatea de organ sau ţesut. Aceste
lipide complexe sunt implicate în imunitatea tisulară şi în recunoaşterea
intercelulară, fenomene fundamentale pentru dezvoltarea şi integritatea ţesuturilor.
Celulele canceroase posedă glicosfingolipide caracteristice, diferite de cele
ale celulelor normale. În boala Tay-Sachs, în celula nervoasă are loc o acumulare a
gangliozidului GM2, ca urmare a deficienţei genetice de sinteză a enzimei
responsabile de degradarea acestui compus. Acumulări anormale de
glicosfingolipide se constată şi în alte boli care se datorează unor deficienţe genetice
de sinteză enzimatică (v. tezaurismozele lizozomale).
3.4.8. Lipoproteinele sunt lipide legate de molecule proteice. Sunt constituenţi
frecvenţi ai ţesuturilor, membranelor celulare, nucleilor, dar sunt prezente şi sub
formă circulantă în sânge. Există două tipuri majore de lipoproteine: lipoproteine
de transport şi sistemele de membrană (acestea din urmă vor fi studiate la capitolul
“ membrana celulară”).
Lipoproteinele de transport din plasma umană se împart în patru clase, în
funcţie de densitatea şi dimensiunea particulelor: kilomicroni, lipoproteine cu
densitate foarte mică (VLDL - very low density lipoproteins), lipoproteine cu
densitate mică (LDL - low density lipoproteins) şi lipoproteine cu densitate mare
(HDL - high density lipoproteins).
3.4.9. Lipocromii sunt complexe formate din lipide şi pigmenţi. Exemplul cel mai
reprezentativ este lipofuscina (pigmentul de îmbătrânire) care se acumuleză în
celulele care nu au capacitatea de a-şi exocita corpii reziduali formaţi în urma
procesului de digestie intracelulară.
3.5. ENZIMELE
3.6. HORMONII
Hormonii sunt substanţe complexe elaborate de celulele glandelor endocrine
care alături de enzime şi vitamine au rol de biocatalizatori. Din punct de vedere
biochimic sunt de natură proteică, glicoproteică şi steroizi. Hormonii nu sunt
constituenţi celulari, dar sunt produşi de elaborare ai celulelor eliberaţi în sânge. În
concentraţii foarte mici, hormonii sunt transportaţi spre diferite celule asupra cărora
îşi exercită acţiunea în mod specific. Ei joacă rol de mesageri chimici, reglatori
chimici sau excitanţi funcţionali specifici. De exemplu, tiroxina disociază
fosforilarea de oxidare, scăzând în acelaşi timp sinteza de ATP în cadrul ciclului
Krebs; adrenalina creşte glicogenoliza, transformând fosforilaza b (inactivă) în
fosforilază a (activă) în prezenţa ATP şi a ionilor de magneziu; insulina inhibă
activitatea hexokinazei, enzimă care catalizează transformarea glucozei şi a ATP în
glucozo-6-fosfat şi ADP.
3.7. VITAMINELE
Ca şi hormonii, vitaminele nu sunt componente structurale ale celulelor. Ele
nu pot fi sintetizate în organismul omului şi al animalelor superioare, dar în acelaşi
timp constituie o categorie de substanţe care sunt absolut necesare metabolismului.
Aportul lor este exogen, din raţia alimentară. Din punct de vedere biochimic, ele se
clasifică în hidrosolubile şi liposolubile.
Vitaminele hidrosolubile sunt componente necesare ale unor coenzime, importante
pentru căile metabolice centrale:
Vitamina B1 (tiamina) este componentul activ al tiaminpirofosfatului, coenzimă
necesară pentru decarboxilarea cetoacizilor. Carenţa sa determină la om boala
numită “beri-beri”.
Vitamina B2 (riboflavina) este component al coenzimelor FMN (flavin-mono-
nucleotid) şi FAD (flavin-adenin-nucleotid) care sunt grupările prostetice
transportoare de hidrogen ale unor enzime oxidative.
Acidul nicotinic este component al NAD şi NADP, transportori de electroni ai
dehidrogenazelor. Carenţa sa determină apariţia pelagrei.
Acidul pantotenic este component esenţial al coenzimei A care intervine în oxidări
enzimatice şi metabolismul acizilor graşi.
Vitamina B6 influenţează activitatea transaminazelor.
Biotina este transportor al dioxidului de carbon.
Acidul folic este precursor al enzimei ce intervine în transferul enzimatic al
grupărilor cu un atom de carbon.
Vitamina B12 (cobalamina) este esenţială pentru mecanismele nutriţionale ale
majorităţii animalelor superioare.
Vitamina C (acidul ascorbic) are rol în procesele de hidroxilare. Carenţa sa
determină la om boala numită scorbut.
Vitaminele liposolubile par să nu aibă rol de coenzime, dar îndeplinesc alte funcţii
importante:
Vitamina A cu precursorul său -caroten funcţionează ca pigment receptor
fotosensibil în celulele cu bastonaş.
Vitamina D are o acţiune de tip hormonal asupra activării, legării şi transportului
calciului în intestin şi oase.
Vitamina K este implicată în biosinteza componentelor mecanismelor de coagulare.
Vitamina E (tocoferolul) are activitate antioxidantă prevenind oxidarea acizilor
graşi foarte nesaturaţi; prin aceasta protejează lipidele din membranele biologice
împotriva acţiunii oxigenului molecular. Carenţa determinată experimental,
provoacă la animalele de experienţă sterilitate, pigmentarea brună a lipidelor de
depozit, necroză hepatică, distrofia muşchilor scheletici.
Capitolul IV
MATRICEA EXTRACELULARĂ
Fig. IV.2. Secvenţă dizaharidică repetitivă din componenţa unui GAG nesulfatat
2. PROTEINELE FIBRILARE
Fig. IV.8.
Organizarea în
reţea a fibrelor
elastice.
3. PROTEINELE MATRICIALE
4. MEMBRANA BAZALĂ
Membrana mielinică 18 79 3
Plasmalema cel. hepatice de şoarece 46 34 2-4
Plasmalema eritrocitelor umane 49 43 8
Membr.nucleară a cel. hepatice de şobolan 59 35 2,9
Membrana externă a mitocondriei 52 48 2-4
Membrana internă a mitocondriei 76 24 1-2
Reticulul sarcoplasmatic 67 33
Membrana internă a cloroplastelor 70 30 6
Bacterii Gram + 75 25 10
Tabel V.I. Compoziţia chimică a membranelor celulare (după Guidotti citat de Benga, 1985)
După cum se observă din tabel, cel mai mare procentaj în structura moleculară
a membranelor îl prezintă proteinele şi lipidele. Din punct de vedere al rolului
primordial îndeplinit, proteinele sunt implicate în asigurarea funcţiilor membranare,
pe când lipidele au rol protector, de barieră. Sub aspectul raportului proteine/lipide se
disting trei tipuri de membrane celulare:
a) membranele la care raportul P/L este aproximativ 1/1 sunt membrane de suprafaţă
cu rol funcţional (conferit de proteine) şi cu rol de protecţie (conferit de lipide), de
exemplu membrana plasmatică.
b) membranele la care raportul P/L este aproximativ 2/1 sunt membrane la care rolul
predominant este cel funcţional, de exemplu membrana internă mitocondrială,
cloroplastidială, membranele citoplasmatice ale bacteriilor.
c) membranele la care raportul P/L este aproximativ 1/2 sunt membrane cu rol
predominant de protecţie (barieră), de exemplu teaca de mielină.
Cu cât o membrană are o activitate metabolică mai mare, cu atât ea conţine mai
multe proteine şi mai puţine lipide.
Fig.V.4. Structura
colesterolului. Formula
chimică (A), reprezentare
schematică (B), model
compact (C).
Fig.V.
3. GLICOLEMA (glicocalix)
Cea de-a treia componentă a suprafeţei celulare este situată pe faţa internă a
plasmalemei şi are o grosime de 5-9 nm. Citoscheletul membranar este o
structură exclusiv proteică, vizibilă doar în ME, care solidarizează proteinele
plasmalemale cu proteinele citoscheletului celular.
În microscopia electronică se prezintă ca o reţea fibrilară orientată
neuniform care conferă susţinerea şi flexibilitatea periferiei celulare.
1. FUNCŢIA DE ADEZIVITATE
Fig.VI.3.Organizarea
moleculară a zonulei
• Contactele focale (plăcile de adeziune)
Plăcile de adeziune sunt structuri proteice care fixează celulele la matricea
extracelulară, mai exact la membrana bazală. Organizarea moleculară cuprinde trei
clase de proteine (fig. VI. 4):
a) proteine de ataşare la citoscheletul celular reprezentate de filamente de actină;
b) proteine de ancorare intracelulară: talina, vinculina, α-actinina, filamina;
c) proteine de adeziune transmembranară numite integrine. Domeniul extra celular
al integrinelor transmembranare se fixează la componentele proteice ale matricei
extracelulare, în timp ce domeniile intracelulare se fixează indirect la filamentele
de actină. Fixarea este mediată de proteinele de ancorare intracelulară.
• Hemidesmozomii
Hemidesmozomii au organizarea moleculară a unei jumătăţi de desmozom,
deoarece se află situaţi la polul bazal al celulelor epiteliale, unde au rol de a solidariza
celulele cu lamina bazală. Sunt formaţi dintr-o placă citoplasmatică, tonofilamente şi
integrine care solidarizează placa cu lamina bazală (fig.VI.6).
În concluzie:
1. Grupele proteice care intervin în joncţionarea de ancorare sunt:
- familia cadherinelor care realizează ancorarea de tip celulă-celulă participând
la organizarea zonulei adherens şi a desmozomilor.
- familia integrinelor care realizează ataşarea de tip celulă - MEC, intrând în
organizarea adeziunilor focale şi a hemidesmozomilor.
2. În ambele cazuri are loc o ancorare la elementele citoscheletului celular:
- la filamentele de actină în cazul zonulei adherens şi a plăcilor de adeziune,
- la filamentele intermediare în cazul desmozomilor şi a hemidesmozomilor.
Fig. VI.6. Distribuţia
desmozomilor şi
hemidesmozomilor la
nivelul celulei
absorbante intestinale
Joncţiuni de tip GAP au fost evidenţiate între toate tipurile de celule care
acţionează împreună şi reprezintă principala cale de comunicare intercelulară.
Prezintă multiple roluri.
- cuplarea celulelor prin joncţiuni GAP prezintă o mare importanţă în
embriogeneză. Încă din fazele timpurii (stadiul de 8 celule), celulele sunt cuplate
electric una cu alta. Prezenţa joncţiunilor GAP între aceste celule permite cuplarea
metabolică, reprezentând o importantă cale pentru distribuirea substanţelor trofice,
înainte ca sistemul circulator să se dezvolte. În acelaşi timp, joncţiunile permeabile
participă la recunoaşterea intercelulară, menţinerea gradientului de concentraţie a
unor molecule şi modulează diferenţierea celulară în cadrul embriogenezei.
- joncţiunile permeabile realizează cuplarea electrică în miocard, asigurând astfel
contracţia inimii.
- realizează cuplarea electrică între celulele musculare netede din intestin,
asigurând astfel peristaltismul intestinal.
- au fost puse în evidenţă şi între celulele altor ţesuturi epiteliale: glande
salivare, rinichi, tiroidă, piele etc, unde realizează cooperarea metabolică
intercelulară.
• Sinapsele
Sinapsele sunt dispozitive de comunicare intercelulară care se stabilesc între
celulele nervoase sau între celulele nervoase şi celulele musculare.
Sinapsa, ca joncţiune funcţională între două sau mai multe celule nervoase,
constă în principal din două componente: un versant presinaptic care conduce
impulsul nervos şi un versant postsinaptic care îl primeşte (fig.VI.9).
2.4. Receptorii
Clasificarea microtransportului
Fig.VI.23. Difuziunea
simplă prin ionofori
celulare, cu deplasarea Na+ în celulă şi a Ca++ în afara ei, ambii ioni fiind legaţi la
aceeaşi proteină de transport. Antiportul Na+-H+ se petrece numai în câteva ţesuturi;
o localizare de mare însemnătate este la nivelul tubului contort proximal al
nefronului, unde Na+ se deplasează dinspre lumenul tubului în nefrocit concomitent
cu deplasarea H+ spre lumen. Acest mecanism reprezintă cheia transportului H+ din
lichidele organismului.
3.1.2.3.Transportul activ prin transportorii ABC
Transportorii ABC formează cea mai mare familie de proteine de transport
membranar. Au fost iniţial descrise la bacterii, dar progresele realizate în ultimii
ani în ceea ce priveşte funcţiile lor în membrana eucariotelor, le conferă o
importanţă clinică crescută. Poartă numele de transportori ABC deoarece fiecare
membru al familiei conţine două domenii de legare a ATP (fig.VI.30). Fixarea
ATP determină dimerizarea celor două domenii de legătură a ATP, iar hidroliza
ATP conduce la disocierea lor. Transportorii ABC utilizează fixarea ATP şi
hidroliza sa pentru a transporta molecule de o parte şi de alta a membranei.
Primii transportori ABC identificaţi la eucariote au fost cei care pompează
medicamentele hidrofobe din citosol în mediul extracelular. Unul dintre ei poartă
numele de proteina de rezistenţă multiplă la medicamente (MDR – multidrug
resistance); se crede că supraexpresia acestei proteine în celulele canceroase este
responsabilă de rezistenţa celulelor canceroase la medicaţia citotoxică utilizată în
chimioterapie. Transportorul pompează medicamentul în exteriorul celulei ceea
ce reduce citotoxi citatea acestuia şi conferă rezistenţă celulară la o gamă largă de
substanţe terapeutice. Cercetări recente indică faptul că 40% din cancerele umane
dezvoltă rezistenţă multiplă la medicamente, ceea ce reprezintă un obstacol major
în „bătălia” contra acestei maladii.
În cea mai mare parte a celulelor animale a fost evidenţiat un transportor
ABC al reticulului endoplasmic care transportă activ produse de degradare
proteică din citosol în RE. Aceasta este prima etapă a unei căi metabolice cu mare
importanţă în supravegherea celulelor de către sistemul imunitar. Fragmentele
proteice transportate în RE sunt transportate la suprafaţa celulară (via Aparatul
Golgi). Aici ele sunt expuse examinării de către limfocitele T citotoxice care vor
omorî celula dacă recunosc aceste fragmente proteice ca non-self (de natură virală
sau aparţinând oricărui microorganism ascuns în citosol).
Un alt membru al familiei ABC a fost evidenţiat în cadrul studiului
mucoviscidozei – maladie genetică provocată de mutaţia unei gene codante pentru
un transportor ABC cu rol de reglare a canalelor de Cl - din membrana plasmatică
a celulelor epiteliale.
3.2. MACROTRANSPORTUL
(transport în masă, transport prin intermediul veziculelor)
2 O2 + NADPH → 2O 2 + NADP - + H +
Anionul superoxid (O2-) este convertit spontan în H2O2. Din reacţia O2 + H2O2
rezultă hidroxil (OH-) şi oxigenul singlet, ambele foarte reactive şi toxice pentru
bacterii. Malsinteza genetică a oxidazei conduce la apariţia a numeroase focare de
infecţie numite granuloame şi la maladia numită "boală cronică
granulomatoasă". La aceşti bolnavi leucocitele nu pot distruge nici microbii
banali care pătrund în permanenţă în organism.
Deoarece comportă emitere de pseudopode, fagocitoza este un proces
energodependent. Sursa de energie diferă de la un tip de macrofag la altul. Astfel,
macrofagele pulmonare utilizează glicoliza aerobă, în timp ce macrofagele
peritoneale utilizează glicoliza anaerobă.
Fig.VI.31.Ataşarea
particulei la suprafaţa
macrofagului şi
emiterea
de pseudopode
3.2.2. PINOCITOZA
Fig.VI.32. Imagine de
microscopie electronică
care prezintă etapele
formării unei vezicule
• o a doua posibilitate o reprezintă formarea veziculelor neacoperite de
clatrine. Acest mecanism debutează la nivelul unor invaginări profunde ale
plasmalemei numite caveole (fig.VI.33). Caveolele sunt localizate în
membrana plasmatică a majorităţii celulelor şi au capaciatea de a forma
vezicule şi de a le vehicula în citosol. Unele veziculele formate prin pensarea
caveolelor îşi deversează conţinutul la nivelul endozomilor sau în reticulul
endoplasmic. Altele traversează celula şi îşi deversează conţinutul pe faţa
celulară opusă, fenomen numit transcitoză.
Fig.VI. 34. Etapele pinocitozei mediate de receptori pentru LDL (după Alberts, 2002)
Implicaţii medicale
• în mod normal, concentraţia optimă de colesterol liber în citoplasmă inhibă
reciclarea receptorilor sau formarea de noi receptori pentru LDL. În cazul bolii
genetice numită hipercolesterolemie familială are loc o producere exagerată de
receptori pentru LDL, ceea ce va conduce la o acumulare anormală de colesterol
liber în citoplasmă.
• dimpotrivă, dacă receptorii pentru LDL nu se sintetizează, absorbţia LDL este
blocată, colesterolul se acumulează în sânge şi contribuie la formarea de plăci
aterosclerotice în pereţii vaselor. Plăcile aterosclerotice sunt formate din colesterol
şi ţesut fibros; ele determină îngustarea vaselor până la blocarea fluxului sanguin,
fiind responsabile de episoadele ischemice coronariene, cerebrale, pulmonare etc.
3.2.3. TRANSCITOZA
Capitolul VII
CITOPLASMA
SEDIUL MECANISMELOR CELULARE
1. CITOSOLUL
Structură
Studiat în microscopie optică, citosolul numit şi hialoplasmă (gr. hyalos –
sticlă) are un aspect omogen, sticlos şi este aparent nestructurat. Hialoplasma este
monorefringentă optic şi are proprietăţi contractile. Prin coloraţii specifice se pot
observa structuri granulare ca rozete de glicogen, picături lipidice, cristale proteice
şi organite intracitoplasmatice nespecifice. Tinctorial, citosolul are caracter bazofil
la celulele tinere şi caracter acidofil la celulele adulte şi îmbătrânite. Pe preparatele
proaspete necolorate, hialoplasma apare formată din două zone: o zonă perinucleară
populată cu organite şi o zonă periferică săracă în formaţiuni granulare.
Ultrastructură
Cu ajutorul microscopiei electronice de voltaj supraînalt (HVEM
1.000.000V), K. Porter şi colab. (Premiul Nobel 1979) au descris în hialoplasmă
structuri fibrilare subţiri cu un diametru de 4-5 nm, denumite microtrabecule care
formează reţeaua microtrabeculară. Se consideră că ea interconectează elementele
de citoschelet şi organitele celulare într-o singură unitate morfofuncţională,
CITOPLASMA. În ochiurile reţelei microtrabeculare se găsesc apă şi ioni. Mai mult, se
consideră că de microtrabecule s-ar afla legate şi enzimele din citosol ceea ce ar
asigura trecerea substratului de la o enzimă la alta în mod coordonat. Structura sa
dinamică poate suferi modificări reversibile induse de factori diverşi: temperatură,
pH, presiune hidrostatică, inhibitori ai proceselor metabolice celulare.
Proprietăţi fizico-chimice
• hialoplasma este un sistem coloidal heterogen alcătuit din două
faze:
1. faza de dispersie (mediu de dispersie) reprezentată de H2O (70-85%),
molecule solubile şi ioni anorganici: Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Cl-, Fe2+(2-3%),
2. faza dispersată constituită dintr-un ansamblu de molecule organice aflate în
mişcare browniană.
• densitate mai mare ca a apei 1,35- 1,50;
• indice de refracţie 1-1,04;
• pH-7,2;
• realizează dispersia luminii;
• prezintă mişcări browniene şi de sedimentare în câmp gravitaţional şi
centrifugal;
• în funcţie de interacţiile dintre macromoleculele dispersate în faza solubilă sau
de dispersie, hialoplasma se poate afla în stare de gel sau în cea de sol. Starea de
gel se caracterizează prin vâscozitate. Acest fapt se datorează scăderii libertăţii
de mişcare a macromoleculelor organice ca urmare a unor interacţii puternice şi
fixării lor în ochiurile reţelei microtrabeculare. În faza de sol, macromoleculele
se mişcă liber în mediu de dispersie, interacţiile sunt mai slabe, iar hialoplasma
se fluidifică. Remanierea permanentă a legăturilor dintre componentele
macromoleculare ale hialoplasmei explică caracterul reversibil al tranziţiilor sol
↔ gel. Aceste tranziţii sunt influenţate de factori: endogeni: diviziunea celulară,
activitatea metabolică la un moment dat şi exogeni: variaţii ale temperaturii, pH-
ului şi luminii (la celulele vegetale).
Compoziţie chimică
Cea mai mare parte a hialoplasmei este constituită din apă, până la 85%.
Restul de 15% este reprezentat de proteine solubile (enzime) şi insolubile (proteine
de structură), glicogen, lipide, substanţe care participă la metabolismul intermediar:
ARN, monozaharide, aminoacizi, acizi graşi, nucleotide, nucleozide, săruri
minerale.
2. INCLUZIUNILE CITOPLASMATICE
3. ORGANITELE INTRACITOPLASMATICE
Actina este prima structură proteică izolată şi descrisă din muşchiul scheletal.
Mult timp s-a crezut că actina ar fi o proteină care apare exclusiv în ţesutul muscular,
dar ulterior s-a observat că actina este o componentă a tuturor celulelor, reprezentând
5% până la 30% din totalul proteinelor celulelor nemusculare.
În celulele umane şi animale au fost descrise 6 izoforme diferite de actină:
tipul α scheletal în muşchii scheletici, tipul α cardiac în muşchiul cardiac, tipul α
vascular în musculatura netedă a vaselor sangvine, tipul δ enteric în musculatura
netedă a viscerelor, tipul β citoplasmatic şi δ citoplasmatic care se găsesc
preponderent în celulele nemusculare. Diferenţele dintre aceste izoforme constau în
grupările NH2 terminale ale secvenţelor de aminoacizi, având rol în rata
polimerizării monomerilor de actină din aceste tipuri variate de izoforme.
Intracelular, actina se găseşte sub două forme:
a) forma monomerică numită actina G este un polipeptid cu o greutate
moleculară de 43 Kda, de formă globulară, cu diametru de 5,5 nm. Fiecare
moleculă de actină G prezintă locusuri pentru cuplarea ionului de Ca 2+ care
stabilizează conformaţia globulară, pentru ataşarea miozinei, a unei molecule
de ATP şi a proteinelor asociate (fig. VII.2).
Fig. VII.2. Polimerizarea monomerului de actină G cu formarea actinei F
(după Berkaloff)
Miozina a fost descrisă pentru prima dată în celulele musculare, dar astăzi se
ştie că această proteină este o componentă constantă a tuturor tipurilor celulare.
Microfilamentele de miozină au un diametru de aproximativ 7nm şi se
formează prin polimerizarea unei proteine structurale şi contractile, miozina. În
citosol, miozina se găseşte sub formă monomerică şi polimerizată. Molecula de
miozină are o greutate moleculară de aproximativ 460kd. Este alcătuită din două
lanţuri grele de polipeptide cu o greutate moleculară de 200kd fiecare şi din două
perechi de lanţuri uşoare de polipeptide, o pereche având o greutate moleculară de
20 kd, iar cealaltă pereche cu greutatea moleculară de 18kd. Lanţul greu de miozină
are două porţiuni distincte: o porţiune alungită α-helicoidală şi un cap globular.
Porţiunile alungite ale lanţurilor grele sunt răsucite în spirală una în jurul celeilalte,
iar capetele globulare rămân libere. Lanţurile uşoare sunt asociate cu capetele
globulare. În ansamblu, molecula de miozină are o coadă cu o lungime de 134nm şi
un cap bilobat de circa 20nm (fig.VII.6).
Fig.VII.8. Formarea
filamentelor groase de
miozină
Fig.VII.12
Asamblarea
filamentelor
intermediare
(după Goodman)
Implicaţii medicale
• mutaţiile genelor răspunzătoare de sinteza keratinelor determină la om boala
numită epidermoliză buloasă simplă. Boala se datorează desprinderii celulelor
bazale ale epidermului ca urmare a unor traumatisme minore şi se manifestă
prin formarea de vezicule mari la nivelul pielii.
• alte maladii buloase din patologia bucală, esofagiană şi corneeană se
datorează malsintezei keratinelor care se exprimă în mod normal la nivelul
acestor celule epiteliale.
• evidenţierea filamentelor de keratină este utilă în diagnosticul cancerelor
epiteliale (epitelioame) deoarece dau o indicaţie asupra ţesutului de origine al
cancerului şi pot astfel să ghideze opţiunea terapeutică.
Răspândire
Microtubulii se pot găsi liberi în citoplasmă sau formează ansambluri de
microtubuli în unele structuri celulare cum ar fi: axonemele cililor şi flagelilor,
corpusculul bazal al cililor, centriolii, fibrele fusului de diviziune.
Microtubulii din citoplasmă sunt structuri labile, cu o capacitate rapidă de
asamblare şi dezasamblare. Această caracteristică este importantă pentru funcţiile
celulare; de exemplu microtubulii din citoplasmă trebuie să se dezasambleze rapid
când celula intră în diviziune. În acelaşi fel, microtubulii dezasamblaţi trebuie să se
reformeze pentru a forma fusul de diviziune. La rândul lui fusul de diviziune se
dezasamblează, ceea ce este esenţial pentru separarea cromozomilor. De asemenea,
în acelaşi timp, mulţi microtubuli cresc rapid, în timp ce alţii se dezasamblează. În
realitate, media de viaţă a microtubulilor este de 10 minute. Datorită instabilităţii
dinamice, microtubulii conferă citoplasmei o imagine de continuă schimbare. Celula
posedă însă şi mecanisme de stabilizare a microtubulilor din citoplasmă. Unul din
acestea este captarea capătului (+) al microtubulului. Acest lucru se petrece când
celula intră în mitoză, iar unii microtubuli sunt captaţi la capătul (+) de proteinele
din cinetocor.
Funcţiile microtubulilor
1. Funcţie mecanică de menţinere a formei celulare. Se consideră că microtubulii
formează o reţea care modelează celula şi-i redistribuie componentele. Acest lucru
este evident în axonii şi dendritele neuronilor. Experienţele au demonstrat că
distrugerea microtubulilor în celulele musculare conduce la pierderea formei de
coloană şi adoptarea unei forme ovalare (fig.VII.15).
Mişcarea este o caracteristică a materiei vii, mişcarea sau motilitatea celulară fiind o
proprietate de bază a celulei. Doar atunci când se produce moartea celulei dispar mişcările
biologice rămânând doar mişcarea browniană, care este un fenomen fizic.
Mişcările celulare sunt foarte variate. În funcţie de modificarea raporturilor celulare faţă de
mediu, putem distinge trei categorii de motilitate celulară (tabel VII.II.
Fig.VII.19. Imagine de
microscopie electronică a
microvililor de la suprafaţa
celulelor epiteliului intestinal -
enterocite
Fig.VII.20. Imagine de
microscopie optică a
platoului striat (microvilii de
la polul apical al F
enterocitelor) i
g
PS-platou striat
.
Ep-epiteliu intestinal 1
.
I
m
a
g
i
n
e
d
e
m
i
c
r
o
s
c
o
p
Rolul microvililor este de a mări suprafaţa de absorbţie şi de a interveni în i
mod activ în procesul absorbţiei, împingând substanţele absorbite spre interiorul e
celulei. Acest lucru se realizează prin contracţia microfilamentelor de actină şi a e
l
microfilamentelor de miozină din organizarea moleculară a microvilului. e
c
Structura t
În microscopia optică, la polul apical al enterocitelor şi nefrocitelor se poate r
observa o margine distinctă, formată din striaţii verticale. Această structură a fost o
numită platou striat la nivelul enterocitelor şi margine în perie la nivelul n
i
nefrocitelor. Microvilii de la nivelul enterocitelor sunt mai înalţi şi au un aranjament c
mai ordonat faţă de microvilii de la nivelul nefrocitelor din tubii contorţi ai ă
nefronului (fig.VII.20). a
m
i
c
r
o
v
Ultrastructura
În microscopia electronică se observă că microvilii au o grosime de 80 nm şi
o lungime de 1μ, poziţia şi forma acestora fiind menţinută de structura stabilă a
citoscheletului subiacent.
Microvilul este format dintr-un miez de 20-30 filamente de actină, dispuse
paralel de-a lungul axului longitudinal al acestuia. Filamentele sunt solidarizate de
membrana plasmatică printr-un complex de proteine, cum ar fi calmodulinele şi
miozina I care se ataşează pe faţa citoplasmatică a plasmalemei, acest lucru având
rol de suport. Microfilamentele de actină sunt solidarizate între ele prin două
proteine: fimbrina şi vilina. Aceste proteine de legătură se caracterizează prin faptul
că prezintă două situsuri de legare pentru actina F, legarea de situsuri se face în
spirală, grupând astfel filamentele într-un mănunchi paralel. Vilina are o funcţie
secundară, la o concentraţie a Ca2+ mai mare de 10-6M determină separarea
filamentelor de actină. Spre capătul apical al microvilului, mănunchiul de filamente
de actină care prezintă aceeaşi polaritate este ataşat de plasmalemă printr-o proteină
nedefinită.
La polul bazal, filamentele de actină din microvili se termină într-o reţea
perpendiculară de filamente denumită buton terminal. Această structură este
alcătuită din filamente de actină, proteine de legare a actinei şi filamente
intermediare. Proteinele de legare a actinei, spectrina II şi filamentele scurte de
miozină (miozina II), cad perpendicular pe mănunchiul de filamente de actină a
microvilului. Această legătură are rolul de a menţine microvilul în poziţie verticală
(fig.VII.21).
Se presupune că mişcarea întregului mănunchi de filamente de actină, ca şi
contracţia întregului microvil, se realizează prin intermediul interacţiunii actină-
miozină din reţeaua terminală, precum şi prin interacţiunea miozinei cu filamentele
axiale.
Fig.VII.21. Imagine de microscopie electronică a microvililor (stg.)
Aranjamentul mănunchiului de microfilamente de actină şi a proteinelor asociate
care intră în alcătuirea microvilului (dr.)
3.1.3.1. Cilii
Sunt prelungiri multiple localizate la suprafaţa celulelor epiteliale din trahee, bronhii
şi oviduct. În arborele traheo-bronşic cilii sunt implicaţi în curăţirea mucusului de la
acest nivel, iar la nivelul oviductului au rol în deplasarea oului spre cavitatea uterină.
Acest lucru se datorează mişcării cilului care este ciclică, în doi timpi (bătaie-
revenire) cu o durată de 0,1- 0,2 secunde. Mişcarea cililor este regulată şi sincronă,
se propagă în valuri succesive ca "într-un lan de grâu bătut de vânt".
Structură şi ultrastructură
Cilul are o grosime de 0,2-0,5 μm şi câţiva m lungime. Principalele
componente structurale ale cilului sunt:
a) porţiunea liberă sau cilul propriu-zis care proemină la suprafaţa liberă a celulei,
b) corpusculul bazal este un organit intracelular, similar cu centriolul şi reprezintă
originea cilului,
c) rădăcinile cilului sunt fibrile fine care pornesc din corpusculul bazal şi se termină
într-un mănunchi conic localizat în aproapierea nucleului.
În microscopia optică cilii se prezintă sub forma unor filamente subţiri, fine,
care proemină la suprafaţa liberă a celulei. La baza cilului, sub membrana celulară se
observă o bandă fină care se colorează bazofil, determinată de prezenţa corpusculilor
bazali. Aceştia captează colorantul, iar în microscopul optic se vizualizează ca o
bandă continuă (fig.VII.22). De fapt, fiecare cil este asociat cu un singur corpuscul
bazal, care este separat de corpii bazali ai cililor adiacenţi.
În microscopia electronică porţiunea liberă a cilului este formată dintr-un
complex de structuri microtubulare denumit axonemă, îmbrăcat în hialoplasmă şi
membrană celulară. Axonema este o structură complexă care pe lângă microtubuli
mai conţine şi alte proteine ce permit mişcarea cilului. Pe secţiune transversală,
microtubulii din axonemă sunt aranjaţi în dispoziţia "9+2": 9 dublete de microtubuli
aranjaţi circular, periferic, care înconjoară o pereche centrală (fig.VII.23).
Microtubulii centrali sunt compleţi, fiecare este format din 13 protofilamente.
Fiecare dublet periferic este alcătuit dintr-un microtubul complet, numit subfibra A
format din 13 protofilamente, de care este ataşat pe o parte un microtubul incomplet
- subfibra B format din 11 protofilamente. Tubulinele α şi β care formează subfibra A
sunt diferite de tubulinele omologe din subfibra B. Aceşti microtubuli dispuşi în
structura "9+2" traversează axonema de la vârful cilului până la baza lui, unde
perechile externe de microtubuli întâlnesc corpusculii bazali. Fiecare pereche de
microtubuli se continuă cu 2 microtubuli din tripleţii corpusculului bazal. Perechea
centrală de microtubuli se termină la capătul superior al corpusculului bazal. De altfel,
o secţiune transversală a corpusculului bazal arată 9 triplete de microtubuli aranjaţi
circular, fără a exista o pereche centrală, pe care o întâlnim la nivelul cilului. (vezi
corpusculul bazal).
Pe lângă microtubuli, axonema cuprinde şi alte proteine absolut necesare
pentru o funcţionare normală a cililor:
• de subfibra A, pe partea opusă subfibrei B, se leagă două braţe proteice dispuse
sub formă de cleşte. Această proteină este numită dineina, are activitate ATP-
azică şi apare în lungul microtubulului la intervale regulate de 24 nm.
• la intervale mai mari, între dubletele vecine se stabilesc legături elastice,
formate din proteine denumite nexine.
• de la subfibra A a fiecărui dublet pleacă fibre radiare; acestea fac legătura cu
o zonă electronodensă care înconjoară perechea centrală de microtubuli. În
felul acesta microtubulii din perechea centrală sunt conectaţi cu dubletele
periferice.
Toate componentele proteice accesorii, braţele de dineină, nexina şi fibrele radiare,
prezintă o periodicitate în lungul microtubulului.
Fig.VII.22. Imagine de
microscopie optică a epiteliului
pseudostratificat din trahee. Cilii
(C) apar subţiri la suprafaţa
celulelor, iar linia întunecată
situată sub plasmalemă este
reprezentată de corpusculii
bazali (CB).
3.1.3.2. Flagelul
La om, singura celulă care posedă flagel este spermatozoidul. Flagelul are o
mişcare ondulatorie, sinusoidală, care determină înaintarea spermatozoidului
(fig.VII.25). La maturitate, spermatozoidul are o lungime de aproximativ 60μ şi este
format din trei porţiuni: cap (5μ), piesă intermediară (5μ) şi flagel (fig.VII.26).
Ultrastructura
În microscopie electronică se observă că flagelul are o ultrastructură
asemănătoare cu cilul, dar mai complexă. Pe secţiune transversală, axonema
flagelului prezintă aceeaşi ultrastructură de tip "9+2"; la nivelul piesei intermediare,
axonema este înconjurată de o coroană de mitocondrii care asigură ATP-ul necesar
mişcării. În cursul spermiogenezei axonema se polimerizează progresiv, pornind din
corpusculul bazal aşezat la baza nucleului. La anumite specii, inclusiv la mamifere şi
om, axonema este înconjurată de 9 fibre dense formate în principal din keratină.
Fibrele dense sunt rigide şi necontractile, iar rolul lor în mişcare este încă necunoscut.
Mişcarea flagelului este determinată de glisarea dubletelor de microtubuli unele în
raport cu altele, energia necesară fiind generată de dineină care are activitate ATP-
azică şi de mitocondriile de la nivelul piesei intermediare.
Implicaţii medicale
Deoarece dineina deţine rolul decisiv în mişcarea cililor şi flagelilor, absenţa
ei determină apariţia "sindromului cililor imobili", denumit şi "sindrom Kartagener".
Acesta este o boală genetică asociată cu afecţiuni respiratorii cronice şi inversia
viscerelor şi a vaselor mari (situs inversus). Mişcarea ciliară este imperfectă sau
chiar absentă, iar ca o consecinţă există un transport ciliar redus sau absent în tractul
traheobronşic. Inversiunea viscerelor poate fi corelată cu absenţa activităţii ciliare în
timpul embriogenezei. O altă ipoteză susţine că polaritatea microtubulilor
citoplasmatici poate influenţa în mod indirect polaritatea organelor. De asemenea,
inversiunea viscerelor poate apărea ca un rezultat a structurii anormale
microtrabeculare. Bărbaţii cu sindrom Kartagener sunt sterili deoarece prin absenţa
dineinei flagelul devine imobil. Femeile cu sindrom Kartagener pot fi fertile, în
aceste cazuri mişcarea ciliară deşi imperfectă, poate fi suficientă pentru a permite
transportul ovocitului şi zigotului în lungul trompei uterine.
2. Corpusculul bazal
La baza fiecărui cil, imediat sub plasmalemă se află corpusculul bazal. Acesta
se formează prin replicarea repetată a centriolilor şi migrarea organitului nou format
spre polul apical al celulei. Corpusculul bazal are rol de organizator al microtubulilor
cilului (fig.VII.29).
Fig.VII.29. Schema
corpusculului bazal şi
relaţia sa cu axonema
cilului (după Goodman).
3.2.1. RIBOZOMII
Structură şi ultrastructură
Ribozomii sunt organite intracitoplasmatice nespecifice, nedelimitate de
endomembrane, cu rol esenţial în coordonarea traducerii codului genetic prin
interacţiunea lor cu ARNm şi cu celelalte molecule necesare biosintezei proteinelor.
Au fost evidenţiaţi în celula animală de G.E.Palade în 1953, motiv pentru care sunt
cunoscuţi şi sub denumirea de « granulele lui Palade ».
Sunt prezenţi în toate celulele cu excepţia hematiei adulte circulante, dar sunt mai abundenţi în celulele
secretorii ale glandelor endocrine şi exocrine. În microscopia optică nu pot fi diferenţiaţi, dar sunt responsabili
de bazofilia citoplasmei celulelor tinere aflate în plină activitate metabolică. În microscopia electronică au
aspect granular, cu diametre de 20-30 nm, la care nu se pot distinge detaliile de organizare (fig.VII.30).
Procariote Eucariote
Constanta de totală 70 S 80 S
sedimentare
subunit. mare 50 S 60 S
subunit. mică 30 S 40 S
ARN r subunit. mare 23 S + 5 S 28 S + 5 S
subunit. mică 16 S 18 S
Proteine % totală 40% 50%
(nr. tipuri)
subunit. mare 34 (L1-L34) 49
subunit. mică 21 (S1-S21) 33
Tabelul VII.III.
Fig.VII.33. Organizarea moleculară a ribozomilor la PK (stg) şi EK (dr)
Originea ribozomilor
Sinteza precursorilor ribozomali are loc în nucleol. Majoritatea tipurilor de
ARN ribozomal provin dintr-un precursor comun, ARN 45S sintetizat pe matriţa de
ADN nucleolar sub acţiunea catalitică a ARN polimerazei I; un singur tip, ARN 5S
la procariote şi ARN 5,8S la eucariote este de producţie nucleară (fig.VII.34).
Fig.VII.34. Etapele formării subunităţilor ribozomale la procariote
(după Berkaloff)
Funcţiile ribozomilor
1. Ribozomii ataşaţi de membranele reticulului endoplasmic sintetizează proteine de
"export" reprezentate de hormoni, anticorpi, enzime.
2. Ribozomii liberi intervin în sinteza proteinelor de structură care participă la
diviziune, la creşterea celulară şi înlocuirea organitelor îmbătrânite (tabel VII.IV).
Structură şi ultrastructură
Reticulul endoplasmic este un organit intracitoplasmatic nespecific, prezent
în toate celulele cu excepţia hematiei adulte, angajat în procesele de sinteză şi
secreţie celulară. Din acest motiv este mai bine reprezentat în celulele secretorii ale
glandelor endocrine şi exocrine şi în alte celule angajate în sinteze.
În microscopia optică, prezenţa ribozomilor ataşaţi reticulului endoplasmic
rugos conferă citoplasmei diferite grade de bazofilie sau pironinofilie. A fost
evidenţiat sub denumiri diferite, funcţie de coloraţia utilizată şi tipul celular cercetat:
- "corpusculi Nissl" în neuroni, pe secţiuni colorate cu albastru de
toluidină;
- "corpi Berg" în hepatocite folosind coloraţia cu albastru de toluidină;
- "ergastoplasma", o zonă bazofilă în endoplasma celulelor
pancreatice;
- "corpi tigroizi" în neuroni, pe secţiuni colorate prin impregnare
argentică.
Fig.VII.37. Prezentarea
schematică a translocării
lanţului polipeptidic prin
membranele RE
Fig.VII.38. Secvenţa semnal şi SRP dirijează ataşarea ribozomului la proteina
translocatoare (după Alberts, 2002)
Fig.VII.39. Glicozilarea
proteinelor în RER
2. Funcţii specifice REN :
2.1. Realizează etape din metabolismul lipidelor
Fiind implicat în biosinteza lipidelor, REN este foarte bine reprezentat în
celulele din corticosuprarenale şi gonade care sintetizează hormoni steroizi, precum
şi celulele din mucoasa intestinală cu rol în absorţie. Aceste celule absorb din
lumenul intestinal amestecul de acizi graşi, monogliceride şi digliceride rezultate din
scindarea lipidelor alimentare sub acţiunea lipazei pancreatice. În REN-ul celulelor
intestinale, din substanţele absorbite se sintetizează trigliceride care se pot evidenţia
chiar în lumenul REN sub formă de chilomicromi (fig.VII.40).
Membranele reticulului posedă sisteme enzimatice care catalizează reacţii
importante din cadrul metabolismului diverselor lipide: acizi graşi, fosfolipide,
colesterol şi derivaţii săi.
a) Sinteza fosfolipidelor are loc sub acţiunea enzimelor localizate în membrana
RE, având centrul activ orientat spre citosol, de unde provin precursorii: acil-CoA şi
glicerolfosfatul. Din două molecule de acizi graşi + glicerol-P rezultă o moleculă de
acid fosfatidic care este încorporat pe versantul extern al membranei RE; ulterior,
prin modificări biochimice, el va genera celelalte fosfolipide de membrană
(fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina şi fosfatidilinozitolul).
Sinteza fosfolipidelor este asimetrică deoarece are loc în stratul extern, citosolic al
membranei RE.
Fig.VII.40. Absorbţia trigliceridelor la nivelul enterocitelor (după Berkaloff)
2.2. Detoxifierea
Detoxifierea reprezintă metabolizarea substanţelor endogene sau exogene
(reprezentate de medicamente, substanţe toxice, poluanţi) în vederea neutralizării
efectelor nocive şi a uşurării eliminării lor. Acesta este motivul pentru care REN este
mai bine reprezentat în celulele celor cinci organe care realizează detoxifierea: ficat,
rinichi, plămân, intestin şi piele. Reacţiile prin care substanţele sunt detoxifiate
constau în: oxidare, hidroliză, reducere sau conjugare (legarea covalentă cu acidul
glucuronic). Prin aceste procese substanţele toxice îşi pierd acţiunea biologică
(inactivare) sau îşi pierd proprietăţile toxice (detoxifiere), devin mai solubile şi deci
se elimină mai uşor. Reacţiile de acest tip sunt importante pentru metabolizarea
sărurilor biliare, a steroizilor, degradarea hemoglobinei şi în metabolismul
medicamentelor (glucuronoconjugarea aspirinei sau hidroxilarea
fenobarbitalului, neutralizarea morfinei, degradarea codeinei).
Inactivarea se realizează de cele mai multe ori prin reacţii de oxidare şi conjugare:
- oxidarea utilizează oxigenul şi NADPH şi este catalizată de NADPH-citocrom
P450 reductază şi citocrom P450.
- conjugarea este realizată prin legarea acidului glucuronic, fie direct de
substanţa ce urmează a fi inactivată (de exemplu acid salicilic), fie indirect,
după ce toxicul a fost oxidat.
Cele mai multe reacţii de detoxifiere sunt oxidări efectuate de către un sistem
enzimatic particular microzomial, sistem care are drept enzimă principală citocromul
P450. Citocromul P450 este o hemoproteină cu maximum de absorbţie a spectrului
luminos la 450 nm. Acest sistem leagă atât O2 cât şi substratul şi trece unul din
atomii de O2 pe substrat (sub forma grupării OH), cel de-al doilea atom al O2 se
combină cu H+ pentru a forma H2O.
Originea RE
Ca şi alte membrane celulare, membranele reticulului endoplasmic sunt structuri aflate în
echilibru dinamic, constituenţii lor fiind reînnoiţi în permanenţă. Reînnoirea se realizează cu viteză
diferită, în funcţie de tipul moleculelor; proteinele mari au un turnover scurt, de 4-5 zile, pe când
cele mici se reînnoiesc la 16-28 de zile. În cursul biogenezei membranelor reticulului, asamblarea
constituenţilor are loc în etape: la început, fosfolipidele şi colesterolul sintetizate la nivelul REN
se dispun în bistrat molecular. Apoi are loc inclavarea proteinelor, fenomen care se realizează
progresiv, pe măsura alungirii bistratului lipidic.
Implicaţii medicale
O caracteristică a REN o reprezintă proliferarea sa marcată în funcţie de
necesităţile crescute de metabolizare a unor substanţe străine. De exemplu,
administrarea à la long a unor medicamente cum este fenobarbitalul induce
proliferarea REN ce se dublează în câteva zile. În urma proliferării sunt induse şi
enzimele implicate în procesele de dezintoxicare şi ca urmare va creşte capacitatea
de metabolizare a REN şi pentru alte medicamente. De aceea, în cazul folosirii unui
tratament cu mai multe medicamente care se metabolizează prin REN este necesară
ajustarea precisă a dozelor administrate pentru a preveni ineficacitatea tratamentului.
Acest proces are la bază inducţia enzimatică care se produce şi în cazul
alcoolului: ingestia cronică de alcool accelerează metabolizarea medicamentelor, în
timp ce ingestia acută de alcool o inhibă. De aici rezultă toleranţa crescută la sedative
a alcoolicului cronic şi intoleranţa în cazul alcoolismului acut.
Inducţia RE este determinată şi de contactul permanent cu anestezicele
(personalul operator) sau de contactul unic dar în doză crescută (persoanele operate).
Paradoxal, o serie de cercetători au arătat că în mecanismul de dezintoxicare
apare un citocrom P448 ca efect a unor agenţi chimici carcinogeni (metil colantren),
citocrom care se pare că activează carcinogeneza.
RE prezintă aspecte diferite în raport cu starea funcţională a celulei. De
exemplu, la un animal bine nutrit, hepatocitele sunt în activitate maximă şi în
citoplasma lor predomină RER, în timp ce la un animal subnutrit în hepatocite
predomină REN. Aceste aspecte prezintă o mare importanţă în morfopatologie.
O altă importanţă practică decurge din faptul că toate leziunile toxice dintr-un
organ sau ţesut conduc la dezorganizări ale RE. După cum lipsa oxigenului afectează
primordial mitocondriile, tot aşa, orice substanţă toxică (otravă sau drog) modifică
ultrastructura şi funcţia reticulului endoplasmic, ceea ce permite stabilirea
diagnosticului de intoxicaţie în practica medico-legală.
3.2.3. APARATUL GOLGI
Structură şi ultrastructură
A fost descris de Camillo Golgi în 1898 ca un “aparat reticular intern” datorită
aspectului de reţea perinucleară observat în ganglionul spinal de pisică, dar mult
timp a rămas pentru unii un artefact. Abia în 1954, microscopia electronică a dovedit
existenţa acestui organit care a mai fost denumit complexul Golgi.
Aparatul Golgi este un organit intracitoplasmatic nespecific, delimitat de
endomembrane, prezent în toate celulele cu excepţia hematiei adulte. Deoarece
reprezintă staţia finală a procesului de sinteză intracelulară este mai bine reprezentat
în celulele secretorii.
În microscopia optică are aspect de reţea perinucleară (a fost observat de către
Voinov la plante în 1935 şi denumit dictiozomi). Localizarea sa depinde de tipul
celular şi de momentul funcţional: în neuroni este dispus perinuclear, în celulele
secretorii exocrine este situat supranuclear, iar în tireocite juxtanuclear.
În microscopia electronică, complexul Golgi prezintă trei compartimente
distincte:
• compartimentul cis reprezentat de zona dinspre reticulul endoplasmic, imatură,
cu convexitatea orientată spre nucleu. La acest nivel se aglomerează veziculele
de tranziţie provenite prin pensarea reticulului endoplasmic, vezicule care conţin
produşii ce vor fi prelucraţi biochimic în aparatul Golgi;
• compartimentul median format din cisterne aplatizate, suprapuse, numite saci
golgieni ;
• compartimentul trans reprezentat de zona dinspre plasmalemă, matură, concavă,
de la nivelul căreia se desprind veziculele de secreţie ce vor fi vehiculate spre
periferia celulei (fig.VII.41).
Fig.VII.41. Prezentarea schematică a compartimentelor golgiene
Compoziţie chimică
Aparatul Golgi conţine proteine de structură şi proteine enzime în proporţie
de 60%, lipide în proporţie de 40%. Enzimele marker sunt tiaminopirofosfataza şi
nucleoziddifosfataza. La nivelul aparatului Golgi se mai află şi alte enzime ca:
glicoziltransferaze, sulfotransferaze, NADH2, NADPH2, citocrom-C-reductaza,
adenilatciclaza, fosfataza acidă, ubiquinona. La nivelul complexului Golgi există o
heterogenitate enzimatică, cu o polaritate distinctă (Palade, 1981):
- compartimentul cis conţine manozidaze pentru îndepărtarea manozei;
- compartimentul median conţine manozidaze care îndepărtează manoza pentru
adăugarea N-acetilglucozaminei;
- compartimentul trans conţine glicoziltransferaze (sialtransferaza, galactozil
transferaza), adenilatciclaza, sulfotransferaze.
Funcţii
1. Rol central în secreţia celulară
Sinteza şi secreţia enzimelor digestive de către porţiunea exocrină a
pancreasului a fost primul model de secreţie celulară studiat prin metode moderne,
de către Palade şi Jamieson. Autorii au injectat aminoacizi radioactivi la cobai şi
după 3 minute au injectat o doză mult mai mare de aminoacizi nemarcaţi pentru a
opri captarea radioactivităţii. S-au sacrificat animalele la diferite intervale de timp;
după câteva minute radioactivitatea a fost găsită în reticulul endoplasmic al celulelor
pancreatice; după 20 de minute s-a găsit în aparatul Golgi; după 2 ore s-a găsit în
veziculele de secreţie (numite şi granule de zimogen fiindcă conţin enzime inactive).
Aceste experienţe au demonstrat secvenţa prin care se deplasează proteinele
secretate din reticulul endoplasmic rugos spre aparatul Golgi şi veziculele de secreţie
(fig.VII.42), au elucidat calea secreţiei celulare, valabilă pentru toate procesele de
secreţie, indiferent de celulă sau substanţele secretate.
Etapele secreţiei celulare, numită şi “ciclul secretor” sau “ciclul lui Palade”
sunt :
• sinteza lanţurilor polipeptidice la nivelul poliribozomilor ataşaţi reticuluilui
endoplasmic rugos;
• transferul şi segregarea proteinelor de export la nivelul reticulului
endoplasmic rugos;
• transferul proteinelor în reticulul endoplasmic neted, care se află în relaţii de
contiguitate cu reticulul endoplasmic rugos;
• formarea de vezicule de tranziţie (microvezicule) de la nivelul reticulului în
zone fără ribozomi ataşaţi ;
• prelucrarea biochimică a proteinelor la nivelul sacilor Golgi;
• desprinderea de vezicule de secreţie la nivelul zonei trans Golgi;
• depozitarea veziculelor în citoplasmă 1-4 ore;
• exocitoza.
Fig.VII.42. Etapele ciclului secretor
Structură şi ultrastructură
Lizozomii sunt prezenţi în toate celulele cu excepţia hematiei adulte, dar sunt
mai bine reprezentaţi în celulele implicate în mecanismele de apărare nespecifică
(microfage şi macrofage).
În microscopia optică se evidenţiază prin coloraţii bazice ca APT Drăgan,
Azur II şi prin metode citoenzimatice de evidenţiere a fosfatazei acide (metoda
Gömöri). Apar de aspect granular, cu diametre de 0,25 -1,5 μm.
În microscopia electronică apar delimitaţi de o membrană simplă cu o
grosime de 7-8 nm, trilaminată. Matricea lizozomală prezintă aspecte diferite:
omogenă, fin granulară sau heterogenă, ceea ce conferă un polimorfism lizozomal
în fiecare celulă.
Fig.VII.47. Menţinerea pH
ului acid este realizată de o
ATP ază membranară care
pompează H+ în lizozomi
Originea lizozomilor
Cunoştinţele actuale au demonstrat că formarea lizozomilor este un proces
complex, realizat în multiple etape:
1. Producerea endozomilor tardivi este un mecanism realizat cu participarea
aparatului de sinteză şi secreţie celulară (fig.VII.48):
• enzimele lizozomale se sintetizează la nivelul poliribozomilor ataşaţi RE;
• de aici sunt transportate în lumenul RE, unde li se ataşează oligozaharide N-
linkate;
• în zona cis a aparatului Golgi, una sau mai multe manoze din aceste oligozaharide
sunt fosforilate. Manoza fosforilată la atomul 6 de C reprezintă un semnal chimic
care orientează aceste molecule înspre membranele de pe faţa trans a aparatului
Golgi unde există o proteină receptor numită manozo-6-fosfat (M6P). Acest
receptor se leagă specific de proteinele care au M6P şi care au fost transportate
aici. Regiunile membranare care conţin M6P se segregă în zona trans de unde se
desprind vezicule îmbrăcate în clatrină şi astfel este împiedicată acţiunea litică a
enzimelor lizozomale. Receptorii pentru M6P pot realiza cuplarea cu ligandul
specific (M6P), la un pH neutru, existent în aparatul Golgi. Cuplarea nu are loc
la un pH acid cum este cel din veziculele de sortare. În acest fel, doar în momentul
în care enzimele lizozomale ajung la nivelul veziculelor de sortare vor fi eliberate
de pe receptori în lumen, devenind active.
• ulterior, o fosfatază îndepărtează fosfatul de pe manoză. Astfel, veziculele care
conţin enzimele lizozomale se separă de veziculele de sortare, devenind
endozomi tardivi. Ca şi alţi receptori celulari, receptorii M6P vor fi reciclaţi, acest
mecanism nefiind complet elucidat.
• Veziculele segregate în zona trans îşi pierd învelişul de clatrine devenind
endozomi tardivi.
2. Formarea lizozomilor
Matricea endozomului tardiv are pH 6 şi conţine precursorii inactivi ai
enzimelor (proenzime). Acestea trebuie să treacă printr-un proces de maturare
pentru a deveni active, proces care constă în degradare proteolitică, prin care enzima
inactivă este scurtată devenind astfel enzimă matură, activă. Procesul are loc atunci
când mediul din matricea endozomilor tardivi devine foarte acid, pH ul scade la 5.
Acesta este momentul în care endozomii tardivi dau naştere la lizozomi.
Implicaţii medicale
MITOCONDRIILE
Fig.VII.51. Modificările de
formă a mitocondriilor
in vivo
Fig.VII.55. Structura
ATP sintetazei
c) transportorii specifici
După cum am prezentat anterior, membrana internă prezintă un grad crescut de
impermeabilitate, motiv pentru care transporturile pasiv şi activ trebuiesc
controlate de canale sau transportori specifici de natură proteică sau glicoproteică.
Astfel, au fost studiaţi:
- transportorul ADP-ATP,
- transportorii acizilor dicarboxilici,
- transportorii acizilor tricarboxilici,
- transportorii aminoacizilor,
- transportori pentru acizii graşi,
- transportori pentru fosfat,
- transportori de cationi (de exemplu Ca++),
- transportori pentru CO2 şi O2.
b) Oxidaţia de substrat
Mecanismul de furnizare a energiei presupune oxidarea prin dehidrogenare a
alimentelor (glucide, proteine, lipide), oxidare care se realizează în trei etape:
citoplasmatică, matricială şi membranară.
• Primul nivel de degradare (etapa citoplasmatică)
De la nivelul celulelor adipoase, acizii graşi liberi (AGL) sunt eliberaţi în sânge,
traversează membrana plasmatică şi odată ajunşi în citoplasmă sunt convertiţi la
acetil-coenzima A, care poate traversa membranele mitocondriale.
Glucoza este convertită la piruvat prin intermediul căii glicolitice Embden
Meyerhoff conform reacţiei :
glucoză + 2 NAD+ + 2 ADP2- + 2 Pi
↓
2 molecule piruvat +2 NADH + 2 ATP4- + 2 H+
hepatocite el poate fi utilizat ca precursor al neoglucogenezei. Iniţial, în citosolul hepatocitului acidul lactic este
retransformat în acid piruvic apoi, prin intermediul unui transportor specific al membranei interne, acidul piruvic
pătrunde în matricea mitocondrială, unde este carboxilat la acid oxaloacetic, precursor al neoglucogenezei.
Sinteza citoplasmatică de acizi graşi porneşte de la acetil-CoA matricială care părăseşte matricea prin
naveta citrat. În citoplasmă, acidul citric participă la regenerarea acetil-CoA; în cursul reacţiei, se formează acid
3. Precursorii ureogenezei
La animalele ureotelice (mamifere şi amfibieni adulţi), amoniacul care
provine din degradarea aminoacizilor este transformat în uree. Procesul are loc la
nivelul hepatocitelor, printr-un ciclu de reacţii care se derulează succesiv în matricea
mitocondrială şi citosol, reacţii care constituie “ciclul ureei” (fig.VII.62). În matrice
are loc dezaminarea oxidativă a acidului glutamic cu eliberarea NH3; CO2 cu NH3
formează carbamil fosfatul, care la rândul său împreună cu ornitina, formează
citrulina. Cel de-al doilea grup aminat necesar sintezei de uree provine din acidul
aspartic care în hialoplasmă se combină cu citrulina. Din această reacţie se formează
acidul arginosuccinic care este apoi clivat la acid fumaric şi arginină. În final,
hidroliza argininei determină eliberarea ureei şi reformarea ornitinei, care reintră în
mitocondrie şi ciclul reîncepe. Ornitina şi citrulina traversează membrana internă
mitocondrială prin intermediul unui transportor specific capabil de cotranspot
antiport: intrarea unei molecule de ornitină este condiţionată de ieşirea simultană a
unei molecule de citrulină.
Organizarea ultrastructurală a mitocondriilor asigură compartimentarea
ciclului ureei; amoniacul eliberat în matrice prin dezaminarea acidului glutamic nu
trece în sânge deoarece el este imediat încorporat în carbamil fosfat. Dacă procesul
nu s-ar fi desfăşurat aşa, amoniacul ar fi părăsit hepatocitele şi ar fi ajuns pe cale
sanguină la alte celule, celule ale căror mitocondrii nu conţin carbamil fosfat
sintetază. În aceste condiţii, NH3 s-ar combina cu acidul -cetoglutaric, formând
acid glutamic; ar apărea astfel un deficit de acid -cetoglutaric care ar conduce la
inhibiţia ciclului Krebs, cu efecte toxice pentru celulă.
4. Precursorii biosintezei aminoacizilor şi porfirinelor
Unii intermediari ai ciclului Krebs, care provin din degradarea aminoacizilor,
reprezintă în acelaşi timp precursori pentru sinteza de noi aminoacizi. Aceşti
aminoacizi sunt consideraţi neesenţiali deoarece nu este necesară furnizarea lor prin
aport alimentar. Din reacţia acidului -cetoglutaric cu amoniacul, rezultă acid
glutamic, glutamină şi prolină. Prin transaminarea acizilor piruvic şi oxaloacetic cu
acid glutamic, se formează alanină, respectiv acid aspartic. Aceste sinteze au loc în
citoplasmă după ce precursorii au fost exportaţi din matricea mitocondrială fie în
mod direct prin transportori specifici (acidul -cetoglutaric şi acidul piruvic), fie
indirect prin intermediari (acidul oxaloacetic prin intermediarul acid citric).
Sinteza porfirinelor are loc în etape succesive care se derulează în matricea
mitocondrială, citosol şi membrana internă mitocondrială. Ea debutează în matrice
cu condensarea succinil-CoA cu serina şi formarea acidului -aminolevulinic;
reacţiile următoare se derulează în citoplasmă. Inserţia fierului la nucleul porfirinic
şi deci formarea hemului, are loc la nivelul membranei interne mitocondriale sub
acţiunea unei ferochelataze situate la acest nivel. Mitocondria participă deci la prima
şi la ultima etapă a biosintezei hemului, grup prostetic din componenţa a mai multor
proteine şi a citocromilor lanţului respirator.
Fig.VII.62. Participarea mitocondriilor hepatice la ureogeneză
Ipoteza endosimbiontului
Numeroasele asemănări morfologice şi biochimice dintre mitocondrii şi
celulele procariote au sugerat ipoteza că mitocondria a evoluat din bacterii care au
fost endocitate cu mai mult de 1 miliard de ani în urmă. Se presupune că stabilirea
unei relaţii simbiotice între celulele eucariote primitive cu metabolism anaerob şi o
bacterie capabilă de a realiza fosforilarea oxidativă a devenit necesară odată cu
apariţia oxigenului în atmosferă. Acest eveniment ar fi avut loc cu aproximaţie acum
1,5 x 109 ani, înainte ca regnurile animal şi vegetal să se separe.
Conform teoriei endosimbiontului, bacteria endocitată şi-a pierdut peretele
celular ale cărui glicoproteine erau responsabile de patogenitate, s-a “învelit” cu o a
doua membrană (membrana externă) pentru a-şi asigura compartimentarea de citosol
şi a început să genereze energia necesară tuturor mecanismelor metabolice ale
“gazdei” sale. La rândul său, celula eucariotă furnizează mitocondriei cea mai parte
a proteinelor de care aceasta are nevoie pentru a-şi îndeplini funcţiile.
Deşi iniţial a fost acceptată cu entuziasm, la ora actuală această ipoteză este controversată. Contraargumentele sunt din ce în ce mai
numeroase: mitoribozomii au constantă de sedimentare diferită faţă de ribozomii bacterieni; citoplasma eucariotelor nu este un sistem anaerob
cum presupune teoria simbiotică, membranele reticulului endoplasmic prezentând citocromi transportori de electroni la oxigen; citosolul conţine
o dismutază care catalizează formarea apei oxigenate din radicalul superoxid. La ora actuală se consideră că în cursul evoluţiei, eucariotele şi-au
format capacitatea de a utiliza oxigenul, chiar înainte de apariţia mitocondriilor.
Continuitatea mitocondrială
Noile mitocondrii apărute în celulă se formează prin diviziunea mitocondriilor
preexistente. Din punct de vedere morfologic, ea se realizează prin două mecanisme:
segmentarea şi partiţia şi este precedată de replicarea ADNmt. Segmentarea are loc
prin ştrangularea progresivă la nivel median, urmată de fuziunea membranelor de o
parte şi de alta a brazdei de ştrangulare. Partiţia debutează cu alungirea unei criste
mitocondriale care conduce la împărţirea matricei în două compartimente distincte;
apoi membrana externă se invaginează la nivelul acestei criste particulare şi
formează o constricţie din ce în ce mai profundă, care sfârşeşte prin a separa
mitocondria în două (fig.VII.65).
Fig.VII.66. Etapele
importului de
proteine
mitocondriale din
citosol în matrice
Fig.VII.66. Etapele importului de proteine mitocondriale din citosol în matrice
(după Cruce)
Fig.VII.67. Etapele
importului de
proteine
mitocondriale din
citosol în membrana
internă şi spaţiul
intermembranar.
Mecanismul sortării
conservative.
(după Cruce)
PEROXIZOMII
Fig.VII.69. Imagine de
microscopie electronică de
transmisie: peroxizomi în
celula hepatică.
Formaţiunea electrono-
densă cu localizare
centrală reprezintă
cristaloidul de uratoxidază
(după Daniel S.Friend
citat de Alberts, 2002)
Atât proteinele care participă la formarea membranei peroxizomului cât şi enzimele
matriciale sunt sintetizate de poliribozomii liberi din citoplasmă şi apoi sunt importate în
peroxizomi. Semnalul de import matricial este reprezentat de o secvenţă de trei aminoacizi,
localizată la una dintre extremităţile C- sau N- terminale a proteinelor. Faptul a fost demonstrat
experimental: dacă la o proteină citosolică care în mod normal nu este destinată peroxizomilor se
ataşează această secvenţă semnal, proteina va fi importată în peroxizomi.
Până la ora actuală au fost identificate 23 de proteine structurale, numite peroxine, care
participă la edificarea peroxizomilor şi aproximativ 60 de enzime care participă la realizarea
funcţiilor lor. Importul proteinelor este mediat de receptori situaţi pe faţa citosolică a membranei
peroxizomale, capabili de a recunoaşte secvenţele semnal ale proteinelor destinate peroxizomilor.
Noii peroxizomi se formează din precursorii peroxizomali, prin creşterea şi fisiunea
acestora (fig.VII.70).
Fig.VII.70. Model de
biogeneză a noilor peroxizomi
Funcţii
Peroxizomii utilizează oxigenul molecular şi peroxidul de hidrogen pentru a realiza reacţii
oxidative:
1. Producerea H2O2 cu scop de detoxifiere
Peroxizomii utilizează oxigenul molecular pentru a elimina atomii de hidrogen din substanţe
organice specifice (R); aceste reacţii oxidative conduc la formarea peroxidului de hidrogen (H2O2):
RH2 + O2 → R+ H2O2
H2O2 generată prin aceste reacţii este folosită de catalază pentru oxidarea substraturilor:
fenoli, acid formic, formaldehidă şi alcool. Reacţia de peroxidare se derulează conform formulei:
H2O2 + R' H2 → R '+ 2H2O.
Reacţiile oxidative se desfăşoară în special în ficat şi rinichi unde are loc procesul de
detoxifiere a diferitelor molecule toxice care intră apoi în circulaţia sanguină. În acest fel, mai mult
de 25% (după unii autori 50%) din etanolul băut este oxidat la acetaldehidă; peroxizomii consumă
pentru aceasta 10% din oxigenul folosit de ficat.
Apa oxigenată este toxic celular deoarece formează radicali liberi care influenţează negativ
proteinele şi acizii nucleici. Din această cauză, H2O2 în exces este oxidată de catalază conform
reacţiei: 2 H2O2 → 2 H2O + O2.
Reacţia este considerată a fi o “supapă de siguranţă” pentru inactivarea agentului oxidant
(H2O2) în cazul unui aport insuficient de donori de hidrogen R'H2 reprezenat de substanţele cu grad
crescut de toxicitate.
2. Oxidarea acizilor graşi
Una dintre funcţiile majore ale reacţiilor oxidative realizate de peroxizomi este degradarea acizilor
graşi. În procesul numit β oxidare, lanţurile alkil a acizilor graşi sunt scurtaţi secvenţial cu câte 2
atomi de carbon/ciclu şi convertiţi în acetil CoA; acesta este apoi exportat din peroxizomi în
citosol pentru a fi folosit în reacţiile biosintetice. Caracteristic peroxizomilor este faptul că
oxidează acizii graşi cu lanţ lung de atomi de carbon, iar când lanţul s-a scurtat la 6 atomi de carbon
urmează oxidarea în mitocondrii, deci peroxizomii colaborează cu mitocondriile în oxidarea
acizilor graşi.
3. Sinteza plasmalogenilor
În general plasmalogenii reprezintă 10% din lipidele membranare, dar sunt cele mai abundente
fosfolipide din structura tecii de mielină. Iniţierea sintezei lor are loc la nivelul peroxizomilor.
Defectele de sinteză ale plasmalogenilor explică apariţia unui mare număr de boli neurologice
(vezi implicaţii medicale).
Implicaţii medicale
• Defectele de import ale proteinelor peroxizomale conduc la o severă deficienţă de funcţie
a acestui organit. Maladia poartă denumirea de sindrom hepato-cerebro-renal Zellweger şi
este determinată de o mutaţie la nivelul genei care codifică o proteină intrinsecă a
membranei peroxizomale (peroxizom assembly factor-1) cu rol de receptor al enzimelor
peroxizomale. Bolnavii ai căror celule conţin peroxizomi “goi”, prezintă hipotonie
neonatală severă, acumulări de lipide în masa cerebrală, hepatomegalie cu ciroză, chiste
renale, tulburări neuro-senzoriale (cataractă, atrofie optică, surditate), criptorhidie la băieţi
şi hipertrofie clitoridiană la fetiţe, anomalii scheletice şi dismorfism facial. Deoarece toate
funcţiile peroxizomale sunt deficitare, maladia este letală, conducând la deces înaintea
vârstei de un an.
• Alterarea funcţiei peroxizomale de oxidare a acizilor graşi cu lanţ lung de atomi de carbon
conduce la apariţia bolilor numite adrenoleucodistrofii (adrenoleucodistrofia X-linkată şi
adrenoleucodistrofia neonatală autozomală). Sunt boli genetice grave caracterizate prin
manifestări neurologice determinate de distrugerea progresivă a substanţei albe din
sistemul nervos (creier, măduvă şi nervi) şi a medulosuprarenalei. Aterarea structurii
mielinei determină alterarea transmiterii mesajelor neuronale la toate nivelele. Astfel,
bolnavii dezvoltă progresiv paralizie totală, incapacitate de vorbire şi alimentare normală,
incontinenţă sfincteriană, cecitate (orbire), surditate, pierderea simţului tactil etc.
În aceeaşi categorie se încadrează maladia Refsum determinată de acumularea în sânge şi
ţesuturi a acidului fitanic. Acidul fitanic este un acid gras provenit din aport alimentar;
provine în principal din degradarea clorofilei, se găseşte în vegetale şi produsele animalelor
erbivore (carne, lapte, unt etc.). În mod normal este degradat prin oxidare numai în
peroxizomi (nu şi în mitocondrii unde are loc oxidarea majorităţii acizilor graşi) fiind
catalizată de fitanoil-CoA hidroxilază. Absenţa enzimei determină imposibilitatea
degradării acidului fitanic. Expresia clinică a bolii constă în principal în retinită
pigmentară, neuropatie periferică, ataxie cerebeloasă şi manifestări dermatologice
(ihtioză).
• Acatalasemia este o altă boală genetică determinată de absenţa sintezei catalazei. După
cum am prezentat anterior, catalaza catalizează reacţile de producere a H2O2 care la rândul
său oxidează o serie de substraturi toxice pentru organism. Malsinteza catalazei determină
imposibilitatea oxidării alcoolului şi fenolilor.
• Condrodisplazia punctuală rizomelică de tip I este o maladie genetică determinată de
mutaţia genei care codifică peroxina 7 (receptorul citosolic al proteinei PTS2). Malsinteza
acestui receptor determină deficienţa de funcţie peroxizomală în celulele sistemului osos
şi sistemului nervos. Boala se manifestă prin retard mental şi încetinire a creşterii osoase a
humerusului şi femurului. Maladia poate fi depistată în stadiu neonatal, iar copiii care o
prezintă nu depăşesc vârsta de 10 ani.
Capitolul VIII
NUCLEUL
1. CICLUL CELULAR
Fig.VIII.2. Succesiunea
fazelor ciclului celular
la eucariote şi modificările
cantitative ale materialului
genetic.
Fig.VIII.3. Punctele
de control ale
ciclului celular
(după Alberts)
.
1.6. Sistemul de control al ciclului celular
Desfăşurarea corectă a evenimentelor ciclului celular este condusă de un
sistem de control care are rolul de a activa în timp util enzimele şi proteinele
responsabile de realizarea fiecărui proces, precum şi de a le dezactiva odată ce
procesul s-a încheiat. Pe de altă parte, sistemul de control trebuie să se asigure că
fiecare perioadă a ciclului celular a fost încheiată înaite ca faza următoare să înceapă;
de exemplu el trebuie să se asigure că replicarea întregului ADN nuclear a fost
finalizată înainte ca mitoza să debuteze. De asemenea trebuie să ţină cont de
semnalele venite din mediul extracelular, precum cele care stimulează proliferarea
atunci cînd este nevoie de un număr mai mare de celule. Sistemul de control are un
rol important şi în reglarea numărului de celule în cadrul unui ţesut; alterarea
controlului este considerată astăzi una dintre cauzele transformării maligne.
Principala clasă de proteine aparţinând sistemului de control al ciclului
celular este reprezentată de serin-treonin kinaze, notate Cdk deoarece sunt kinaze
dependente de cicline (cyclin-dependent protein kinase), enzime capabile să activeze
proteinele ţintă prin fosforilare. Activitatea acestor kinaze oscilează pe parcursul
ciclului celular ceea ce determină variaţii ciclice ale fosforilării proteinelor care
participă la iniţierea sau reglarea evenimentelor majore ale ciclului celular:
replicarea ADN şi mitoza. De exemplu, creşterea activităţii Cdk la începutul mitozei
conduce la accentuarea fosforilării proteinelor cu rol de control asupra condensării
cromozomilor, fragmentării membranei nucleare şi asamblării fusului de diviziune.
Variaţiile ciclice ale Cdk sunt controlate de un complex proteo-enzimatic care
cuprinde ciclinele şi factorii modulatori ai complexului cicline-Cdk.
1.6.1. Ciclinele
Principalele proteine de reglare a Cdk sunt reprezentate de cicline, proteine
care se leagă de moleculele de Cdk şi le activează (fig.VIII.4). Denumirea de cicline
provine de la faptul că spre deosebire de Cdk care rămân constante, aceste proteine
parcurg un ciclu de sinteză-degradare pe parcursul ciclului celular; asamblarea
ciclică, activarea şi dezasamblarea complexelor cicline-Cdk sunt evenimente pivot
care coordonează ciclul celular. Complexele proteice cicline-Cdk sunt alcătuite din
două subunităţi: o subunitate catalitică – cdk şi o subunitate cu rol reglator – ciclina.
Fig.VIII.4. Cele două componente
importante ale sistemului de
control a ciclului celular.
Interacţiunea ciclină - Cdk are ca
rezultat declanşarea evenimentelor
caracteristice ciclului celular. Fără
ciclină, Cdk este inactivă.
Un alt mecanism pentru reglarea cdk implică familia de proteine numite CKI
(cyclin-dependent kinase inhibitors) reprezentate de p16, p15, p18 şi p19 (familia
INK4) şi p21, p27 şi p57 (familia Cip/Kip). Aceaste proteine se leagă specific la cdk
inhibând legarea lor de cicline şi în acest fel impiedică declanşarea proliferării
celulare. Genele care conduc la sinteza acestor proteine sunt considerate a fi gene
supresoare ale tumorilor, fiind frecvent alterate în cancere (tabel VIII.I).
2. NUCLEUL ÎN INTERFAZĂ
Formarea nucleului este considerată a fi unul dintre cele mai importante salturi
în evoluţia materiei vii. El este prezent în toate celulele, cu excepţia hematiei adulte
circulante, îndeplinind următoarele funcţii:
• Prin intermediul ADN-ului asigură sinteza, conservarea şi transmiterea
informaţiei genetice în succesiunea generaţiilor celulare şi totodată asigură
specificitatea lumii vii;
• Prin intermediul proceselor de transcripţie şi translaţie asigură reglarea şi
controlul proceselor vitale.
În funcţie de etapa ciclului celular pe care o parcurge, nucleul are un mod de
prezentare diferit şi o funcţie diferită:
• nucleu metabolic în interfază
• nucleu genetic în timpul mitozei.
2. 1. CARACTERE MORFOLOGICE
VN
RN/C = -------- unde, VN = volumul nuclear,
Vc –VN VC= volumul celular.
Acest raport este acelaşi pentru un anumit tip celular. Raportul nucleo-
citoplasmatic prezintă variaţii largi cuprinse între 1/3 până la 1/20. Raportul este
constant în favoarea nucleului la limfocite şi monocite. La celulele tinere (blaşti) şi
la cele maligne în care activitatea metabolică este intensă, nucleul este mai mare şi
citoplasma mai redusă (raport în favoarea nucleului). Celulele adulte şi îmbătrânite
prezintă un raport invers, în favoarea citoplasmei. Evaluarea acestui raport permite
aprecierea stării de sănătate sau patologie celulară precum şi aprecierea vârstei
celulei.
2.2.1.1. Ultrastructură
Izolarea celei mai mari părţi a ADN-ului celular în nucleu reprezintă
diferenţa majoră dintre celulele eucariote şi celulele procariote. Această izolare
este realizată de către învelişul nuclear sau membrana nucleară (fig.VIII.10).
Învelişul nuclear determină formarea unui compartiment nuclear şi a unui
compartiment citoplasmatic, realizând astfel separarea fenomenelor nucleare
(autoreplicarea semiconservativă a ADN şi transcripţia ARN) de fenomenele
citoplasmatice (translaţie, traducerea şi sinteza proteinelor).
Studiile de microscopie elecronică au permis caracterizarea structurii
fundamentale a învelişului nuclear care apare format din 2 membrane concentrice
(externă şi internă) care se află în continuitate una cu cealaltă, precum şi cu reticulul
endoplasmatic. Cele două membrane sunt separate între ele de un spaţiu cu o grosime
de aproximativ 15 nm, denumit spaţiu perinuclear care comunică cu lumenul
reticulului endoplasmatic. În locurile unde membrana externă fuzionează cu
membrana internă, se formează porii nucleari.
Fig.VIII.10. Invelişul
nuclear. Cele două
membrane nucleare sunt
penetrate de pori
nucleari şi se continuă
cu lumenul reticulului
endoplasmatic.
Implicaţii medicale. S-a constatat o legătură între mutaţiile genelor care codifică
proteinele laminei nucleare şi o serie de maladii ereditare familiale:
• Distrofia musculară Emery Dreifuss este determinată de mutaţia genei codante
pentru emerină sau mutaţia genelor pentru laminele de tip A. Boala se caracterizează
prin distrucţie musculară acompaniată de cardiomiopatie cu tulburări de conducere
şi poate determina moartea subită cardiacă.
Gena codantă pentru laminele de tip A este alterată şi în alte maladii precum:
• Lipodistrofia de tip Dunningan. Boala dubutează la pubertate şi este caracterizată
prin pierderea progresivă a ţesutului adipos în regiuni localizate ale corpului
(trunchi, membre), concomitent cu creştere depunerilor de lipide la nivelul feţei,
spatelui. Maladia se asociază cu achantozis nigricans (pigmentarea regiunii axilare),
hirsutism (pilozitate corporală excesivă) şi ovar polichistic.
• Displazia acro-mandibulară este o maladie genetică cu transmitere autozomal
recesivă, manifestată clinic prin malformaţii osoase, dismorfism cranio-facial,
lipodistrofie parţială şi îmbătrânire precoce;
• Maladia Charcot Marie Tooth este o neuropatie periferică ereditară caracterizată
prin atrofie musculară şi neuropatie senzitivă progresivă cu atingere bilaterală şi
simetrică a membrelor, amiotrofie şi deficit motor, abolirea reflexelor
osteotendinoase.
• Progeria sau sindromul prematur Hutchinson Gilford este o maladie genetică
rară, determinată de mutaţiile genelor LMNA care se traduce prin diminuarea
cantitativă a laminei A sau prin alterări calitative ale proteinei numită progernă.
Aceste anomalii conduc la alterarea anvelopei nucleare, perturbând funcţia normală
a celulelor şi diviziunea lor; repararea şi reînnoirea ţesuturilor va fi alterată, ceea ce
determină o îmbătrânire patologică. Boala se manifestă de la naştere la ambele sexe,
se caracterizează prin accelerarea procesului de îmbătrânire şi conduce la deces în
jurul vârstei de 15 ani.
• Lipodistrofia indusă medicamentos. Numeroase studii au demonstrat că
administrarea triplei terapii utilizată în tratamentul infecţiei HIV alterează maturarea
prolaminelor nucleare. Ca urmare, pacienţii prezintă manifestări lipodistrofice.
2.2.3. Cromatina
2.2.3.1. Clasificarea cromatinei
În interfază, cromatina este forma relaxată, desfăşurată a cromozomilor. În
timpul diviziunii celulare, cromatina se reorganizează, se condensează luând
aspectul caracteristic cromozomilor.
În funcţie de starea de condensare şi rolul îndeplinit pe parcursul interfazei,
cromatina se clasifică în :
• eucromatina, forma relaxată, activă din punct de vedere transcripţional;
gradul scăzut de spiralizare permite transcripţia informaţiei genetice pe ARN
ceea ce va conduce la sinteza proteinelor. În microscopia optică se colorează
slab bazofil, tinctorialitatea redusă se datorează gradului scăzut de spiralizare.
Predomină în nucleii celulelor tinere cu intensă activitate metabolică, numiţi
nuclei eucromatici. În microscopia electronică are aspect fin granular.
Eucromatina cuprinde genele care codifică sinteza proteinelor responsabile de
structura şi funcţia tipului celular respectiv în diferite perioade de activitate
metabolică. Se subclasifică în :
a) eucromatina activă reprezentată de zonele care codifică proteinele care
asigură structura şi funcţia (viaţa bazală) celulei;
b) eucromatina permisivă reprezenată de zonele care codifică proteine
sintetizate ca răspuns celular la semnale modulatoare. Această fracţiune a
eucromatinei nu este în permanenţă activă, dar poate fi activată de către
mesageri (ex.hormoni).
• heterocromatina, cromatina înalt condensată şi inactivă din punct de vedere
transcripţional. Datorită gradului ridicat de spiralizare, heterocromatina nu
permite copierea mesajului pe ARN şi deci nu va conduce la sinteza
proteinelor pe care le codifică. Ea reprezintă aproximativ 90% din cromatina
nucleară. În microscopia optică se colorează intens bazofil datorită gradului
crescut de spiralizare şi se prezintă sub formă de mase neregulate ataşate foiţei
interne a membranei nucleare sau ataşate nucleolului. Se găseşte în cantitate
crescută în nucleii celulelor îmbătrânite cu activitate metabolică redusă.
Datorită gradului crescut de tinctorialitate, aceştia poartă numele de nuclei
hipercromi sau picnotici. În microscopia electronică apare sub formă de grunji
de aspect neregulat, electronodenşi.
În funcţie de rolul îndeplinit în formarea cromozomilor, heterocromatina se
subclasifică în:
a) heterocromatina constitutivă este condensată în permanenţă pe parcursul
interfazei. În mitoză intră în alcătuirea celor 22 de perechi de cromozomi
autozomi şi se localizează în jurul centromerilor şi la telomere.
b) heterocromatină facultativă este condensată pe perioada interfazei numai
în anumite tipuri celulare şi pe perioade restrânse ale dezvoltării celulare.
Genele care aparţin acestei fracţiuni de cromatină nu se exprimă decât în cazul
în care are loc despiralizarea, cu transformarea heterocromatinei în
eucromatină.
Din heterocromatina facultativă face parte formaţiunea descrisă de Barr şi
Bertram (1949) sub denumirea de cromatină sexuală sau corpuscul Barr.
Cromatina sexuală este prezentă în 20% din celulele sexului feminin şi în mod
normal lipseşte la sexul masculin. Ea reprezintă o heterocromatinizare
interfazică a unuia din cromozomii X care devine inactiv din punct de vedere
genetic; inactivarea se produce în a 14-15 zi de la fecundaţie la embrionul de
sex feminin. Cromatina Barr se poate pune în evidenţă în celulele mucoasei
bucale unde apare de formă lenticulară, ataşat de membrana internă a
nucleului, în neuroni unde este ataşat nucleolului şi în polimorfonuclearele
neutrofile, unde are forma unui "băţ de tobă" (drumstick) ataşat de unul dintre
lobii nucleului (fig.VIII.19). Evidenţierea corpusculului Barr (de regulă pe
frotiul de sânge) este utilizată în orientarea diagnosticului anomaliilor
cromozomiale numerice gonozomale de tip sindrom Turner (45,X0), sindrom
triploX (47,XXX) şi sindrom Klinefelter (47,XXY). Diagnosticul de
certitudine necesită efectuarea cariotipului.
Caracteristica sexului masculin o reprezintă cromozomul Y. Acesta poate fi
evidenţiat prin microscopie de fluorescenţă, după colorare cu quinacrină sub
forma unui corpuscul intens fluorescent numit şi corpuscul F (fluorescent). A
fost descoperit de Pearson în 1970 şi este utilizat în diagnosticul anomaliilor
cromozomiale legate de cromozomul Y.
Fig.VIII.19. Relaţia
dintre detaliile
moleculare ale
codului genetic
conţinut în ADN
şi cromozom
Fig.VIII.20. Schema de
organizare
supramoleculară a
nucleozomului. Detalierea
componentelor
moleculare
(după Alberts)
Nucleozomul este format dintr-un miez proteic numit octamer pe care se
dispune o dublă spiră de ADN dublu catenar.
- octamerul poartă această denumire deoarece este format din 8 molecule, câte
două din fiecare din proteinele histonice H2A, H2B, H3, H4. Histona H1 este
implicată în legarea nucleozomilor.
- lungimea ADN-ului care înconjoară octamerul este de 146 de perechi de
nucleotide, iar a filamentului total de ADN din alcătuirea nucleozomului, de
aproximativ 200 perechi de nucleotide (fig.VIII.20).
Microscopia electronică a demonstrat că în celulele vii, cromatina adoptă
rareori forma despiralizată de „mărgele pe sârmă” cu o grosime a filamentului de 11
nm (similară cu înălţimea nucleozomului). Cea mai mare parte a filamentelor de
cromatină au o grosime de 30 nm, modul de dispunere al nucleozomilor nefiind încă
cunoscut. Totuşi, din multele modele propuse, modelul „în zig-zag” este considerat
cel mai coerent la ora actuală (fig.VIII.21a). Mai mult, se consideră că modelul „în
zig-zag” are un aspect dinamic, modificându-se în permanenţă datorită acţiunii
proteinelor ataşate ADN-ului de legătură intercromozomială (fig.VIII.21.b).
2.2.4. Nucleolul
2.2.4.2. Ultrastructură
Nucleolul nu rezintă o membrană proprie. Din punct de vedere ultrastructural
sunt descrise 4 componente:
- centru fibrilar;
- componenta fibrilară densă formată din ADN cromozomial care joacă rol de
organizator nucleolar. Genele ribozomale sunt grupate în regiuni cromozomiale
numite organizatori nucleolari sau NOR (nucleolar organiser region). Numărul
genelor ribozomale variază, fiind în jur de câteve sute la mamifere; la om există
aproximativ 400 de cópii. În timpul mitozei, materialul genetic nucleolar este
antrenat în spiralizarea cromozomilor şi aceste gene se dispun la nivelul
constricţiilor secundare ale cromozomilor din perechile 13, 14, 15, 21, 22.
Numele de „organizatori nucleolari” provine din faptul că în telofază, odată cu
despiralizarea cromozomilor, ele participă la reorganizarea nucleolilor în nucleii
celulelor fiice.
- componenta granulară dominantă din punct de vedere cantitativ, reprezentată de
precursorii ARN-urilor ribozomale, ARN-uri ribozomale mature, subunităţi
proteo-ribozomale ;
- componenta amorfă care umple spaţiul dintre celelalte componente.
Aparatul replicării
Replicarea ADN implică un număr mare de enzime dar şi proteine care nu
prezintă activitate enzimatică. Enzimele şi proteinele implicate în replicare formează
o structură multiproteică numită replizom care se asamblează la nivelul furcii de
replicare numai în momentul iniţierii sintezei ADN.
1. Primozomul este un complex enzimatic care se deplasează de-a lungul furcii,
separă cele două lanţuri şi ataşează primerii de ARN pentru sinteza fragmentelor
Okazaki ale catenei tardive. Este format din:
- ADN helicazele separă catenele dublului helix şi continuă să se deplaseze
pe o singură catenă (fig.VIII.26). Existînd două catene cu orientări diferite vor exista
şi două helicaze care desfac catenele din dublul helix.
- ADN primaza iniţiază sinteza de ADN prin ataşarea unor secvenţe scurte
de ARN, formate din 5-8 ribonucleotide numite primeri.
2. ADN polimerazele. Enzimele cu rol în sinteza noilor catene pe catenele parentale
(template) sunt ADN polimerazele. La procariote au fost denumite ADN polimeraza
I, II, III, iar la eucariote α,β,γ. La eucariote ADN polimeraza α se deplasează în
direcţia 5'→3' şi ataşează nucleotidele în mod continuu pe catena prioritară şi
discontinuu (fragmentele Okazaki) pe catena tardivă. Pe lângă activitatea sintetică,
ADN polimeraza are două subunităţi cu activitate nucleazică:
a) După ce a avut loc sinteza fragmentelor Okazaki, ADN polimeraza digeră
primerii de ARN şi îi înlocuieşte cu dezoxinucleotide complementare.
b) ADN polimeraza are şi rolul de a corecta erorile mecanismului replicării
care pot apare în molecula de ADN prin introducerea unei baze necomplementare.
3. ADN ligaza. După ce fragmentele Okazaki au fost sintetizate şi primerii lor
digeraţi, ADN ligaza uneşte fragmentele şi realizează continuitatea catenei tardive.
4. Proteinele SSB (single strand DNA binding) sunt proteine care se leagă de ADN
monocatenar şi au rolul de a stabiliza catenele de ADN în regiunile desfăcute şi de
a împiedica refacerea structurii dublu catenare, favorizând astfel funcţia de matriţă
a catenelor. Ele fac parte din categoria proteinelor auxiliare (chaperone proteins).
Etapele transcripţiei
Deoarece transcripţia are loc numai în direcţia 5′→3′, numai una din cele două catene de
ADN va acţiona ca matriţă pentru ribonucleotidele care se vor ataşa conform principiului
complementarităţii şi vor forma ARN-ul nou sintetizat.
1. Etapa de iniţiere cuprinde recunoaşterea de către ARN-polimerază a genei care trebuie
transcrisă, precum şi a locului din care începe copierea informaţiei, numit situs start sau
promotor. Promotorul reprezintă o secvenţă din ADN care conţine informaţia pentru
iniţierea sintezei ARN şi stabileşte care din cele două catene de ADN va fi transcrisă.
Secvenţa de recunoaştere a acestui promotor este regiunea „TATA box“ (secvenţă în care
alternează timina cu adenina). După legarea ARN-polimerazei la promotor are loc
desfacerea dublului helix al ADN, secvenţele de nucleotide fiind astfel expuse
(fig.VIII.28).
2. Etapa de elongaţie în care ARN polimeraza înaintează despiralizând helixul ADN şi
expunând succesiv alte baze pentru „citire”. Astfel, lanţul de ARN se extinde cu câte un
nucleotid în sens 5'→3'. Ansamblul format de porţiunea de ADN aflat în transcriere şi
moleculele de ARN ataşate de genă poartă numele de „unitate de transcriere” şi apare la
microscopul electronic ca o frunză de ferigă (fig.VIII.29).
3. Etapa de terminare. Sinteza ARN încetează în momentul în care ARN polimeraza întâlneşte
semnalul de terminare (stop). Ea se desprinde de pe ADN, eliberând în acelaşi timp şi
molecula de ARN transcrisă. ADN-ul se reface sub formă de dublu helix.
Fig.VIII.28. Etapele sintezei ARN
Fig.VIII.29. Aspectul în „frunză de ferigă”: transcrierea simultană a unei gene
de către mai multe ARN polimeraze
Metabolismul posttranscripţional
ARN nou sintetizat prin transcripţie este numit ARN transcris primar. Înainte de a părăsi
nucleul, moleculele de ARN transcris primar vor suferi unele modificări:
a) adiţia la capătul 5' a unui nucleotid G-metilat, proces numit “5'- capping”, cu rol
important în iniţierea sintezei proteice, dar şi de a asigura protecţia moleculei de ARN
care este transcrisă.
b) adiţia la capătul 3' a unui lanţ poli-A, format din 100-200 nucleotide cu adenină.
Secvenţa genelor din genomul procariotelor corespunde în întregime cu secvenţa
aminoacizilor din proteina pe care au codificat-o. La eucariote, unitatea transcriptibilă a genei este
formată din două grupuri de secvenţe:
– exoni sau secvenţe informaţionale, transcrise în ARN precursor, conţinute de ARNm şi care
se regăsesc în secvenţa aminoacizilor din proteină;
– introni sau secvenţe non-informaţionale, transcrise în ARN precursor, dar care nu se mai
regăsesc în ARNm şi nici în secvenţa aminoacizilor din proteină (fig.VIII.30).
ARN transcris primar conţine toată secvenţa nucleotidelor copiată de pe ADN, atât introni
cât şi exoni. Prin procesul de “RNA-splicing” (ARN-procesare), secvenţele non-informaţionale
(introni) vor fi eliminate, iar secvenţele informaţionale (exoni) vor fi legate unul de celălalt. În
urma acestui proces, rezultă molecula de ARNm matur care, fiind formată numai din exoni, este
mult mai mică (cca. 500 – 3.000 nucleotide) decât transcriptul primar (cca. 50.000 nucleotide).
Ulterior, ARNm matur trece în citoplasmă, unde participă la sinteza proteinelor.
Fig.VIII.31. Reprezentarea
schematică a situsurilor de
ataşare pe mica şi marea
subunitate ribozomală
Faza de iniţiere se realizează în etape succesive (fig.VIII.32):
• La eucariote, ARNt iniţiator transportă întotdeauna metionina (la
procariote, formil-metionina). În acest fel, toate lanţurile polipeptidice în
formare prezintă la extremitatea N-terminală acest aminoacid. La sfârşitul
sintezei lanţului polipeptidic, metionina va fi eliminată de o protează
specifică, ceea ce explică faptul că nu toate proteinele încep cu metionina.
• ARNt iniţiator se ataşează pe subunitatea mică ribozomală. Odată cu ARNt
iniţiator are loc ataşarea unor proteine numite factori de iniţiere la
eucariote (eIF) şi a unei molecule de GTP.
• Subunitatea mică se ataşează pe ARNm şi începe să se deplaseze în direcţia
5’→3’ în căutarea primului codon AUG; deplasarea este
energodependentă, realizându-se cu consum de ATP.
• Ajunsă la nivelul AUG, subunitatea mică pierde factorii de iniţiere şi
consumă GTP pentru a ataşa subunitatea mare. Ribozomul devine în acest
fel complet.
• Subunitatea mare se ataşează în aşa fel încât ARNt iniţiator să se plaseze
pe locusul P (peptidil). Locusul A (aminoacil) este încă liber.
• În citoplasmă, un alt ARNt fixează specific un aminoacid împreună cu care
formează un aminoacil-ARNt. Acesta se va ataşa pe locusul A.
• Subunitatea mare se deplasează spre capătul 3’ cu lungimea unui codon,
fenomen numit translocare. În acest fel, ARNt iniţiator se plasează pe
locusul E (eliberare), primul aminoacil-ARNt se plasează pe locusul P, iar
locusul A rămâne liber pentru ataşarea unui alt aminoacil-ARNt.
• Între metionină şi primul aminoacid are loc formarea primei legături
peptidice, catalizată de peptidiltransferază.
b) Faza de elongare constă în inserţia succesivă de aminoacizi şi formarea de
legături polipeptidice între aceştia.
Mecanismul se derulează în cicluri de ataşare a unui nou aminoacil-ARNt pe
locusul A, translocarea subunităţii mari şi formarea legăturii polipeptidice. La
sfârşitul fiecărui ciclu locusul A rămâne liber (fig.VIII.33).
Aminoacidul nou inserat este dictat de codonul liber corespunzător locusului
A al ARNm. Pentru inserţie mai sunt necesare o moleculă de GTP şi o proteină
solubilă din citosol numită primul factor al elongării (EFтu). La legarea aminoacil-
ARNt de locusul A se produce hidroliza GTP, iar GDP şi primul factor al elongării
sunt eliminaţi. Apoi GTP se reface prin acţiunea celui de al doilea factor al elongării
(EFтs) şi ca urmare se reface complexul GTP - primul factor de elongare necesar
pentru a începe o nouă inserţie.
Translocarea necesită energie, eliberată prin hidroliza a celei de-a treia
molecule de GTP cât şi prezenţa celui de-al treilea factor al elongării numit
translocază (EFG). Ciclul elongării se poate repeta deoarece de fiecare dată la
sfârşitul celor trei timpi locusul A devine vacant. În dreptul său se va afla de fiecare
dată un alt codon care poate fi recunoscut de aminoacil ARNt-ul cu anticodon
complementar, deci un alt aminoacid se va lega în lanţul peptidic
Fig.VIII.32. Fazele
etapei de iniţiere
3. REPRODUCEREA CELULARĂ
3.1. AMITOZA
Amitoza este diviziunea caracteristică celulelor procariote. Ea poate să apară şi la celulele
eucariote în condiţii patologice: la celulele neoplazice şi în regenerările cu defect.
Dimensiunile reduse ale bacteriilor favorizează diviziunile rapide. În condiţii optime,
atunci când mediul de cultură este bogat în factori de creştere, celulele procariote au capacitatea
de a se divide la fiecare 20 de minute, astfel că în mai puţin de 11 ore se poate forma o colonie
de 5 miliarde de celule (număr aproximativ egal cu populaţia actuală a Terrei). Capacitatea
crescută de diviziune permite bacteriilor să se adapteze rapid la modificările mediului
înconjurător.
Genomul celulelor procariote este reprezentat de o singură moleculă de ADN circular,
format din aproximativ 4x106 perechi de baze. La unele tipuri bacteriene ADN-ul este ancorat de
invaginaţiile membranei plasmatice, numite mezozomi. În timpul diviziunii nu s-au evidenţiat
condensări sau decondensări ale materialului genetic.
În celulele procariote, diviziunea ADN-ului bacterian şi a citoplasmei se
derulează cuplat într-o manieră directă. În timp ce ADN-ul se replică, cele două cópii
ale cromozomului bacterian sunt ataşate de membrana plasmatică pe situsuri
specifice. Îndepărtarea şi separarea lor are loc în mod progresiv pe măsura creşterii
suprafeţei învelişului bacterian dintre situsurile de ataşare (fig.VIII.39). Membrana
plasmatică situată între situsuri creşte progresiv, se invaginează şi formează un sept
transversal care va conduce la separarea celulelor fiice; în acest fel, fiecare dintre ele
va conţine un singur cromozom.
Factorii care influenţează ritmul de desfăşurare al diviziunii directe sunt:
factorii nutritivi din mediu, temperatura, pH-ul, concentraţia ionică, precum şi
prezenţa oxigenului (pentru bacteriile cu metabolism aerob).
Atunci când condiţiile de mediu sunt improprii supravieţuirii, unele bacterii
au capacitatea de a se proteja prin convertirea metabolismului într-o stare dormantă;
se formează în acest fel structuri inerte, numite spori. Procesul de formare al sporilor
începe prin separarea cromozomului nou replicat şi migrarea lui spre unul din polii
celulei. Are loc o învaginare asimetrică a membranei plasmatice care va conduce la
separarea cromozomului şi a unei mici cantităţi citoplasmatice de restul celulei.
Compartimentul nou format este ulterior înconjurat de învelişuri care vor forma un
perete gros, protector (fig.VIII.40). Sporul suferă un proces de deshidratare care îi
va permite supravieţuirea timp de mai mulţi ani,în condiţii nefavorabile de mediu.
Atunci când mediul devine favorabil, în câteva ore sporul devine capabil de
germinare. Rehidratarea citoplasmatică şi pierderea învelişului de protecţie va
determina activarea metabolismului celular.
b) Modificări nucleare
• La debutul profazei, volumul nucleului creşte uşor.
• Cromozomii apar sub forma unor filamente alungite, cu spiralizare minoră, relaxată.
Condensarea materialului genetic se accentuează progresiv, cromozomii apar formaţi
din două cromatide unite la nivelul centromerului, cu cromomere vizibile.
• Începe fragmentarea învelişului nuclear.
• Începe fragmentarea nucleolilor, fragmentele numite “organizatori nucleolari” fiind
antrenate în spiralizarea cromozomilor care aparţin perechilor 13, 14, 15, 21, 22.
C. METAFAZA
D. ANAFAZA
Anafaza debutează cu clivajul longitudinal al cromozomilor la nivelul centromerului, fenomen
care conduce la partajarea cromozomilor în două loturi identice. Acest stadiu este caracterizat de
două evenimente distincte (fig.VIII.44):
a) migrarea cromozomilor spre poli determinată de scurtarea progresivă a microtubulilor
cinetocorieni;
b) alungirea fusului de diviziune prin alungirea microtubulilor polari.
• Cromozomii anafazici. Până la sfârşitul metafazei, cromozomii sunt formaţi din două
cromatide; debutul anafazei este marcat de separarea cromatidelor la nivelul constricţiei
primare. Fiecare cromatidă, devenită autonomă, conţine aceeaşi informaţie genetică pe care
a prezentat-o celula-mamă în faza G1 a ciclului său celular. Deci mecanismul clivării face
ca fiecare cromatidă să devină un cromozom independent; altfel spus, fiecare cromozom
metafazic, bicromatidian, dă naştere la doi cromozomi anafazici, unicromatidieni. Ca
urmare a depolimerizării progresive a microtubulilor cinetocorieni, fiecare cromozom
“frate”, migrează spre câte un pol al fusului de diviziune; deplasarea cromozomilor este
sincronă şi se realizează cu o viteză mai mare la debutul anafazei, pentru ca mai apoi, pe
măsura apropierii de poli, viteza de deplasare să încetinească. Sfârşitul anafazei este marcat
de ajungerea cromozomilor la polii fusului, unde fiecare “lot “ formează o reţea densă la
nivelul căreia cromozomii sunt greu de recunoscut individual.
• Fusul anafazic. Deplasarea cromozomilor anafazici spre poli se însoţeşte de modificarea
numărului şi lungimii microtubulilor fusoriali. După cum am arătat anterior, microtubulii
cinetocorieni devin din ce în ce mai scurţi, datorită depolimerizării progresive care se
derulează la capătul polar. În cea de a doua parte a anafazei, microtubulii polari se alungesc,
fusul devine mai îngust, iar polii se îndepărtează.
E. TELOFAZA
Telofaza începe atunci când cele două garnituri cromozomiale au atins polii fusului de
diviziune. Ea este marcată de două evenimente majore: reconstituirea nucleilor celor două celule
fiice (care capătă în mod progresiv un aspect interfazic) şi finalizarea citodierezei.
a) Modificări nucleare
• Învelişul nuclear. Anvelopa nucleară începe să se reformeze încă de la sfârşitul
anafazei; reconstrucţia ei este progresivă şi se finalizează în cursul telofazei.
Refacerea membranei debutează prin ataşarea de vezicule şi lamele scurte de
reticul endoplasmic la suprafaţa reţelei de cromozomi; simultan, componente ale
laminei nucleare se interpun între reţeaua cromozomială şi elementele reticulului
endoplasmic; unirea progresivă a acestor elemente, conduce la formarea unei
membrane continue. Este posibilă şi reutilizarea unor fragmente din vechea
membrană nucleară care au fost dispersate în citoplasmă în premetafază. Porii
membranari apar precoce, pe măsura reedificării învelişului nuclear. Spaţiul
perinuclear este la început de dimensiuni variabile, dar devine regulat la sfârşitul
telofazei.
• Volumul nucleului este mic la sfârşitul telofazei, conform cu valorile
corespunzătoare raportului nucleo-citoplasmatic al celulelor fiice în faza G1.
• Cromozomii. Concomitent cu refacerea membranei nucleare în jurul reţelei
cromozomiale, materialul genetic suferă o despiralizare progresivă care va
conduce la reformarea aspectului interfazic al cromatinei. Despiralizarea
cromozomilor se însoţeşte de reluarea activităţii lor metabolice – începerea de
noi transcrieri.
• Nucleolul se reformează pe seama organizatorilor nucleolari.
b) Modificări citoplasmatice
• Microtubulii telofazici. La debutul telofazei, microtubulii polari se
depolimerizează începând de la nivelul polilor. Microtubulii interzonali se
apropie progresiv, fuzionează şi formează un fascicol unic, înconjurat de o
substanţă densă (fig.VIII.45).
• Vâscozitatea citoplasmei creşte.
• Citodiereza. Partajarea citoplasmei în cele două celule fiice este un mecanism
complex care debutează la sfârşitul anafazei şi continuă pe tot parcursul
telofazei. Citodiereza debutează la sfârşitul anafazei cu apariţia unei depresiuni
concentrice la nivelul ecuatorului celulei-mamă. La începutul telofazei, pe faţa
citoplasmatică a citoscheletului membranar începe polimerizarea filamentelor
de actină care vor forma progresiv un inel contractil; la formarea acestuia
participă şi alte proteine asociate: -actinina şi miozina. Prin contracţie
progresivă, inelul contractil va conduce la sfârşitul telofazei la separarea
celulelor fiice. Acesta este momentul care încheie diviziunea celulară şi totodată
momentul de debut al unui nou ciclu celular pentru fiecare dintre celulele nou
formate.
Fig.VIII.45. Schema derulării telofazei şi a citodierezei celulelor animale
a) sfârşitul anafazei; b)debutul telofazei;
c) sfârşitul telofazei; d) separarea celulelor fiice.
3.2.3.1.Factori stimulatori
1. Factori proprii celulari
a) Raportul nucleo-citoplasmatic a fost mult timp considerat factorul esenţial în
determinismul mitozei. În cursul ciclului celular volumul citoplasmei creşte mult
mai rapid decât cel al nucleului; în acest fel, nucleul devine incapabil de a
"controla" un volum de citoplasmă mult crescut, motiv pentru care celula este
"obligată" să intre în diviziune. La baza teoriei conform căreia diviziunea
serveşte la menţinerea echilibrului între volumul nucleului şi cel al citoplasmei
stau experienţele care au demonstrat că amoebele cărora li s-a îndepărtat o parte
din citoplasmă nu se mai divid.
b) Semnalele citoplasmatice care stimulează replicarea ADN-ului. Existenţa
acestora a fost indirect pusă în evidenţă prin experienţe de hibridare somatică,
dar natura lor nu a fost încă precizată. Experienţele au demonstrat că un nucleu
prelevat dintr-un neuron adult (care în vivo şi-a pierdut capacitatea de diviziune),
introdus în citoplasma unui zigot care în prealabil a fost enucleat, începe să îşi
mărească volumul şi intră în faza S. În aceste condiţii este de presupus că
citoplasma zigotului conţine factori capabili de a iniţia diviziunea. Existenţa
semnalelor citoplasmatice care sunt responsabile de debutul condensării
cromatinei cu formarea cromozomilor a fost evidenţiat şi prin experienţe de
hibridare somatică a unei celule aflată în faza M a ciclului celular cu o celulă
aflată în faza G1 sau G2; în acest caz, materialul genetic al acestor celule a început
să se condenseze.
2. Factori extracelulari
a)Reglarea proliferării celulare în sânul organismului se manifestă sub
mai multe aspecte:
• hepatectomia parţială stimulează proliferarea celulelor hepatice, care au în mod
obişnuit un ritm scăzut de proliferare. Această proliferare accentuată se opreşte
atunci când masa normală a ficatului a fost restabilită. Acelaşi control al
diviziunilor se manifestă la nivelul epidermului în condiţiile cicatrizării;
• localizarea celulelor asigură de asemenea un control asupra ritmului mitotic.
Astfel, în epiderm care este pluristratificat, se divid doar celulele din stratul cel
mai profund, care vin în contact cu lamina bazală care acoperă dermul. Celulele-
fiice migrează progresiv spre suprafaţa pielii şi se încarcă cu keratină. Dacă
celulele din stratul profund pierd contactul cu lamina bazală, îşi pierd
concomitent capacitatea de diviziune;
• hormonii (hormoni de creştere, tiroidieni şi sexuali), factorii de creştere (EGF
etc.), vitaminele (în special cele din grupul B), reprezintă factori ce intervin în
controlul proliferării celulare in vivo.
b) Factori exogeni fizici (temperatura, radiaţiile şi lumina) precum şi chimici
(fitohemaglutinina, concavalina) influenţează derularea şi/sau viteza de derulare a
ciclului celular. O creştere a temperaturii cu câteva grade (24˚C la 45˚C) activează
ritmul mitozei, pe când absenţa luminii provoacă o încetinire a acestuia. Radiaţia X
determină un blocaj al sintezei de ADN.
Lungimea unui cromozom metafazic variază între 1,5 µ (cel mai mic), până
la 8 µ (cel mai mare).
Identificarea cromozomilor umani se face pe baza morfologiei lor, utilizând
criterii precis codificate în conferinţe internaţionale de standardizare. Pe baza
lungimii cromozomului, a poziţiei centromerului, a existenţei sateliţilor şi
constricţiilor secundare, a modelului de benzi, cele 23 de perechi de cromozomi se
clasifică în 7 grupe notate de la A la G, obţinându-se cariotipul uman (fig.VIII.48).
Fig.VIII.48.
Cariotip normal
bandat Giemsa
pentru sexul
masculin
3.3. MEIOZA
Meioza I
1. Profaza I este lungă, poate dura ani şi poate fi subdivizată în 5 stadii succesive: leptoten,
zigoten, pachiten, diploten, diachinezis (fig.VIII.49).
a) Leptoten (gr. leptos = subţire). În acest stadiu are loc debutul spiralizării cromatinei, care
va conduce la individualizarea unor cromozomi lungi şi subţiri; spiralizarea este încă laxă,
cu excepţia unor puncte îngroşate numite cromomere. Secvenţializarea cromomerelor în
lungul cromozomilor este specifică şi permite caracterizarea acestora. Extremităţile
cromozomilor, numite telomere, rămân ataşate de foiţa internă a membranei nucleare prin
intermediul unei structuri specializate numită "placă de ataşare". În acest stadiu
cromozomii sunt bicromatidieni, iar cele două cromatide surori sunt plasate foarte aproape
una de cealaltă, dând impresia unui cromozom unicromatidian. Cromatidele apar vizibil
separate doar spre sfârşitul profazei.
b) Zigoten (gr. zigos = cuplu). În acest stadiu, cromozomii omologi se recunosc, se apropie şi
se aliniază faţă în faţă, în aşa fel încât genele alele să corespundă; progresiv ei intră în
contact, la început din loc în loc formând sinapse (chiasme sau complexe sinaptonemale),
apoi pe toată lungimea lor (fig.VIII.50). Fiecare asociere de doi cromozomi omologi
constituie astfel un bivalent. Concomitent cu asocierea cromozomilor omologi are loc
continuarea spiralizării materialului genetic, astfel că în microscopia optică ei apar mai
intens coloraţi, mai scurţi, mai bine individualizaţi. În general, cromozomii sexuali nu
formează bivalenţi, dar pot prezenta moduri particulare de asociere.
c) Pachiten (gr. pakhus = gros). Acest stadiu este în general foarte lung. Cromozomii continuă
să se spiralizeze, devenind din ce în ce mai scurţi şi mai groşi; acum, cele două cromatide
apar net individualizate şi se poate recunoaşte poziţionarea centromerilor. Pachitenul are o
importanţă deosebită deoarece el reprezintă etapa în care are loc primul “amestec” al
informaţiei genetice, aşa numitul crossing-over, ale cărui consecinţe citologice se pot
observa doar în stadiile următoare. Transmiterea încrucişată a informaţiei genetice este
realizată la nivelul chiasmelor de o formaţiune de natură proteică, numită nodul de
recombinare care are capacitatea de a desprinde o genă de pe o cromatidă paternă şi a o
transfera pe locul omolog de pe cromatida maternă; în acelaşi timp, de aici preia gena
corespunzătoare şi o transferă pe locusul rămas gol al cromatidei paterne (fig.VIII.51).
Fig.VIII.49. Reprezentarea schematică a etapelor profazei I
Fig.VIII.50. Realizarea sinapselor intercromozomiale pe parcursul profazei I
Fig.VIII.51. Nodulul de
recombinare în cadrul
complexului sinaptonemal
Meioza II este etapa în care cele două celule haploide rezultate din prima diviziune suferă fiecare
o a doua diviziune, care se comportă ca o mitoză homotipică, de data aceasta pentru 23 de
cromozomi (fig.VIII.52).
1. Profaza II este o etapă scurtă în care cromozomii încep să se spiralizeze şi să formeze fiecare
câte două cromatide unite la nivelul unui centromer. Restul
modificărilor nucleare şi citoplasmatice sunt identice cu cele din profaza mitozei.
2. Metafaza II. Fusul de diviziune este complet format, cromozomii ating maximum de
spiralizare şi se dispun în planul ecuatorial.
3. Anafaza II. Centromerii se dedublează, are loc clivajul longitudinal, iar cromozomii deveniţi
unicromatidieni migrează spre polii fusului de diviziune.
4. Telofaza II se caracterizează prin refacerea învelişului nuclear şi a nucleolilor, despiralizarea
materialului genetic, depolimerizarea fusului de diviziune şi realizarea citodierezei: cele două
celule haploide vor da naştere fiecare la câte două celule haploide.
După modul de desfăşurare, cea de a doua diviziune meiotică este considerată a fi o mitoză
equaţională.
Fig.VIII.52. Derularea meiozei după profaza I
3.3.2. Aspectele moleculare ale meiozei
• Faza S. Ca şi în cazul unei mitoze clasice, în celulele care urmează să intre în meioză sinteza
de ADN este activă. În această fază, celula iniţială îşi dublează cantitatea de material genetic,
trecând de la 2n ADN la 4n ADN. Până la debutul meiozei, din punct de vedere al cantităţii de
ADN, nucleul este deci tetraploid.
• Prima diviziune meiotică. În timpul fazei G2 cantitatea de ADN se menţine 4n, astfel încât în
timpul primei diviziuni nucleul iniţial dă naştere la doi nuclei care conţin fiecare 2n ADN şi
care intră în etapa G1 a interfazei. Interfaza dintre cele două diviziuni meiotice nu prezintă
fază S, deci nu are loc duplicarea cantităţii de ADN.
• A doua diviziune meiotică. În cele două celule fiice, cantitatea de 2n ADN rămâne constantă
până în anafaza II. După telofaza II, cele 4 celule-fiice rezultate conţin fiecare o cantitate egală
de n ADN.
• Bilanţul global al meiozei. În concluzie, cu pornire de la o celulă diploidă (2n cromozomi,
meioza conduce la formarea a 4 celule haploide (n cromozomi). Fenomenele nucleare din
timpul meiozei pot fi rezumate după cum urmează:
1. În mitoza reducţională are loc trecerea unui nucleu diploid care posedă:
- 2n cromozomi, 2 cromatide/ cromozom, 4n ADN,
↓
la 2 nuclei haploizi care posedă fiecare:
- n cromozomi, 2 cromatide / cromozom, 2n ADN.
2. În mitoza equaţională are loc trecerea de la 2 nuclei haploizi care posedă:
- n cromozomi, 2 cromatide / cromozom, 2n ADN,
↓
la 4 nuclei haploizi, care posedă fiecare:
- n cromozomi, o singură cromatidă / cromozom, n ADN
La începutul meiozei, fiecare bivalent este constituit din doi cromozomi omologi, unul de
origine maternă, celălalt de origine paternă. Din acest punct de vedere, pe plan genetic, meioza
permite realizarea a două fenomene:
- schimbul de material ereditar între cei doi cromozomi omologi, de origini diferite şi
- segregarea aleatorie în fiecare celulă sexuală a cromozomilor de origine maternă şi paternă.
Din această cauză, putem afirma că meioza nu favorizează doar transmiterea caracterelor
ereditare, ci în acelaşi timp realizează diversificarea acestor caractere în sânul speciei.
După cum am amintit, în anafaza I, segregarea cromozomilor este aleatorie; repartiţia în
cele două celule fiice se realizează la hazard, una dintre ele având un număr mai mare de
cromozomi de origine maternă, iar în cealaltă vor predomina cei de origine paternă. În funcţie de
numărul haploid al cromozomilor într-o specie dată, numărul combinaţiilor posibile poate fi foarte
mare. Astfel, la om (n = 23) numărul de combinaţii posibile este de 223, ceea ce înseamnă
8.388.608; în aceste condiţii, probabilitatea ca toţi cromozomii de aceeaşi origine (maternă sau
paternă) să se regăsească în aceeaşi celulă este extrem de mică.
Cele două fenomene: segregarea aleatorie şi crossing-overul contribuie la încrucişarea
informaţiei genetice şi joacă un rol fundamental în fenomenele de adaptare, selecţie naturală şi
evoluţie. Ca fenomen asociat dar şi complementar fecundaţiei, meioza contribuie la producerea de
noi indivizi, diferiţi faţă de genitori, diferiţi între ei, unici în istoria umanităţii.
1. Faza de multiplicare
După ce au migrat şi s-au localizat la nivelul ovarelor, ovogoniile încep să se
multiplice printr-o serie de mitoze equaţionale. La om, multiplicarea are loc până
într-a 15 săptămână de viaţă intrauterină a fătului de sex feminin. Se apreciază că în
ovarele unui făt de 5 luni se găsesc aproximativ 4 milioane de ovogonii.
3. Faza de maturare
Faza de maturare constă în continuarea meiozei, deci parcurgerea fazelor
ulterioare diplotenului.
a) Prima diviziune meiotică dă naştere la două celule haploide diferite din punct de
vedere morfologic: o celulă de talie mare - ovocitul de ordinul II şi o celulă mică -
primul globul polar. La specia umană, la sfârşitul primei diviziuni meiotice are loc
ponta ovulară sau ovulaţia, reprezentată de expulzia ovocitului de ordinul II şi
captarea sa de pavilionul oviductului (trompei uterine); acest fenomen se produce de
regulă la fiecare 28 de zile, alternativ dintr-un ovar şi din celălalt, de la pubertate
până la menopauză. Se apreciază că numărul total de gameţi produşi de o femeie în
perioada genital activă este de maximum 500.
b) A doua diviziune meiotică. Imediat după ce a fost captat de către trompa uterină,
ovocitul de ordinul II intră în a doua diviziune meiotică, pe care o parcurge până în
metafază unde rămâne blocat. Continuarea şi finalizarea celei de a doua diviziuni
meiotice are loc numai în cazul în care ovocitul de ordinul II este activat de către un
spermatozoid. Fecundaţia are loc în tractul genital feminin şi este posibilă timp de
24 de ore de la ovulaţie. Ovocitul de ordinul II care ajunge să finalizeze cea de a
doua diviziune meiotică, va da naştere la două celule haploide: o celulă de talie mare
care va permite amfimixia – ovotida şi un al doilea globul polar destinat degenerării
(fig.VIII.54).
4. Foliculii ovarieni
a) Foliculii primordiali sau primari. Ovocitul I blocat în etapa diploten a primei
diviziuni meiotice se înconjoară de un strat de celule foliculare şi alcătuieşte astfel
un folicul primordial. La naştere, fetiţa prezintă un mare număr de foliculi
primordiali dispuşi în zona periferică a ovarelor (fig.VIII.55). Un mare număr dintre
ei vor degenera mai ales la pubertate şi vor fi resorbiţi. Începând de la pubertate, în
prima zi a ciclului sexual, un număr mic de foliculi primordiali se angajează într-un
proces de maturare foliculară. Maturarea constă în creşterea numărului de straturi de
celule foliculare cu dispoziţie concentrică. Maturarea foliculului are loc concomitent
cu creşterea de volum a ovocitului de ordinul I şi conduce la formarea unui folicul
plin sau folicul primar limitat de o membrană (membrana lui Slavjanski).
b) Foliculii secundari. Celulele foliculare continuă să se multiplice, ţesutul
conjunctiv se condensează în jurul membranei Slavjanski formând teci concentrice.
Ansamblul care ia naştere poartă denumirea de folicul secundar. Cei mai mulţi dintre
aceştia vor suferi un proces de atrezie, conducând la realizarea unor formaţiuni
atretice cu rol endocrin. Alţii, puţini la număr, îşi vor continua maturaţia.
c) Foliculii terţiari sau cavitari. În evoluţie, celulele foliculare se separă generând
un antrum sau cavitate. În acest stadiu, ovocitul I este înconjurat de zona pellucida,
de natură mucopolizaharidică, cu o grosime de 15-20μ. În general, unul singur dintre
aceşti foliculi ovarieni ajunge la maturitate.
d) Foliculul matur sau folicul de Graaf. Foliculul matur poate atinge 10-15mm în
diametru şi proemină vizibil la suprafaţa ovarului. El conţine un ovocit de ordinul I
care şi-a încheiat prima diviziune meiotică şi a dat naştere unui ovocit de ordinul II
şi primului globul polar care rămâne ataşat de zona pellucida a ovocitului de ordinul
II.
e) Ponta ovulară. Maturarea foliculului are loc în prima parte a ciclului sexual.
Ovulaţia se produce de regulă în cea de a 14-a zi a ciclului menstrual. Ea are loc prin
ruperea tecilor foliculare şi expulzarea ovocitului de ordinul II şi a lichidului
folicular. Restul foliculului format din celule foliculare şi teci va avea o evoluţie
diferită în funcţie de evoluţia ovocitului II. Dacă acesta se maturează prin fecundare,
foliculul restant va forma un ansamblu cu caracter secretor (secreţie de progesteron)
numit corp galben; în cazul în care nu se produce fecundaţia, restul foliculului va
suferi un proces de degenerescenţă cu formarea unei cicatrici sidefii numită corp
alb.
Fig.VIII.54. Stadiile ovogenezei
Fig.VIII.55. Schema etapelor evolutive ale foliculilor ovarieni
3.4.2. SPERMATOGENEZA
1. Faza de multiplicare
Spermatogeneza se desfăşoară în tubii seminiferi testiculari. Multiplicarea spermatogoniilor localizate pe
membrana bazală a tubilor este un proces continuu. Ea începe în perioada fetală, devine foarte activă la pubertate şi
continuă până la senescenţă. Pe măsură ce se înmulţesc, celulele sunt împinse spre lumenul tubului seminifer. Unele
dintre ele îşi încetează multiplicarea şi se angajează într-un proces de creştere; acestea poartă denumirea de
spermatocite de ordinul I. La periferie, tubii seminiferi prezintă celule cu rol de susţinere, nutriţie şi maturare a
celulelor sexuale care poartă denumirea de celule Sertoli. Celulele sexuale rămân ataşate strâns de celulele Sertoli
2. Faza de creştere.
Faza de creştere a spermatogenezei are o durată scurtă. Creşterea de volum a spermatocitelor de ordinul I
este perceptibilă dar, comparativ cu creşterea ovocitelor, acumularea substanţelor de rezervă este modestă.
3. Faza de maturare
Această fază se derulează începând de la pubertate şi constă în realizarea meiozei şi a spermiogenezei.
a) Meioza. Spermatocitele de ordinul I reprezintă celulele de la care debutează meioza. După prima diviziune
meiotică (reducţională) fiecare spermatocit de ordinul I (diploid) va da naştere la două spermatocite de ordinul
II (haploide). Cea de a doua diviziune meiotică (mitoză equaţională) se produce rapid şi fiecare spermatocit de
ordinul II dă naştere la câte două spermatide (haploide). Deci per total, fiecare spermatocit de ordinul I dă naştere
la 4 spermatide surori care rămân un timp legate prin punţi citoplasmatice (fig.VIII.56).
Fig.VIII.56. Etapele spermatogenezei
Spermatida este o celulă de aspect poligonal şi nucleu veziculos. În citoplasmă sunt prezente multiple organite:
aparat Golgi, centrozom, mitocondrii etc. În timpul procesului de maturare, morfologia acestora se modifică
- aparatul Golgi va păstra strict funcţia de biogeneză a lizozomilor a căror fuziune va conduce la formarea
acrozomului, cu dispunere supranucleară;
- centrozomul migrează spre polul posterior al nucleului, iar din centriolul distal va începe polimerizarea progresivă
a axonemei flagelului;
- mitocondriile vor migra progresiv în sens distal şi se vor dispune în manşon în jurul axonemei piesei intermediare
a flagelului;
- nucleul se condensează, îşi micşorează volumul şi capătă un aspect dens;
- pe măsură ce corpul celulei se alungeşte, citoplasma în exces se desprinde sub forma unui corp rezidual care este
fagocitat de către celulele Sertoli (fig.VIII.58).
Fig.VIII.58. Secţiune
transversală prin tubul
seminifer
a) Morfologie. La maturitate spermatozoizii ating o lungime de aproximativ 60μ şi sunt formaţi din patru porţiuni:
- capul cu un diametru longitudinal de aproximativ 5μ, are forma unei alune aplatizate anterior. Nucleul ocupă
aproape în întregime celula şi este înconjurat de un strat subţire de citoplasmă. Cromatina este foarte densă în
microscopia electronică. La nivel anterior, nucleul este înconjurat pe 2/3 din suprafaţa sa de acrozom.
- colul cu o lungime de 5μ, este alcătuit dintr-o zonă subţire citoplasmatică care înconjoară un centriol proximal cu
dispoziţie transversală şi baza flagelului.
- piesa intermediară cu o lungime de 5μ, conţine axonema înconjurată de manşonul mitocondrial şi o peliculă fină
citoplasmatică.
- coada prezintă la interior axonema, iar la exterior membrana celulară. Împreună cu piesa intermediară alcătuieşte
aparatul de mişcare al spermatozoidului care poartă numele de cinetid.
b) Activitatea spermatogenă. Deoarece volumul mediu al unei ejaculări este de 3cm3, iar numărul spermatozoizilor
este de aproximativ 60.000-120.000/mm3, se apreciază că la o singură emisie sunt eliminaţi aproximativ 300 de
milioane. În mod normal, sperma cuprinde şi o mică proporţie de spermatozoizi malformaţi (bicefalici,
microcefalici, biflagelaţi etc.), dar pentru a avea o putere fecundantă adecvată această proporţie nu trebuie să
depăşească 20%. Atunci când proporţia spermatozoizilor atipici depăşeşte 50% vorbim despre teratospermie.
c) Factori care afectează spermatogeneza. Producţia de spermatozoizi este influenţată de factori externi cum sunt:
- temperatura - spermatogeneza se desfăşoară normal atunci când testiculele sunt coborâte în scrot, deci la o
temperatură inferioară temperaturii corpului. Dacă coborârea acestora nu are loc sau are loc târziu, celulele
germinale suferă un proces de degenerescenţă. Maladia poartă denumirea de criptorhidie (bilaterală sau
unilaterală) şi dacă este bilaterală conduce la sterilitate prin azoospermie (absenţa spermatozoizilor). De asemeni,
un puseu de temperatură de 40˚C poate declanşa o azoospermie cu caracter tranzitor.
- lumina - la animalul de experienţă s-a demonstrat că expunerea la lumină puternică determină o creştere a
producerii de spermatozoizi, proces datorat relaţiei sistem nervos central-hipotalamus-hipofiză.
- starea de nutriţie - carenţele nutriţionale în acizi graşi precum şi lipsa aportului de vitamina A şi E provoacă o
scădere a producţiei de spermatozoizi.
- expunerea la radiaţii ionizante - spermatogoniile prezintă o sensibilitate crescută la expunerea la radiaţiile
ionizante. Se estimează că o doză de 100-300 rad poate determina o sterilitate definitivă. Expunerea la doze
inferioare determină diminuări importante ale puterii fecundante.
d) Mobilitatea şi puterea de fecundaţie
Spermatozoizii devin mobili în căile genitale masculine când vin în contact cu secreţiile epididimare,
prostatice şi ale veziculelor seminale. Propulsia le este asigurată de mişcările ondulatorii ale flagelilor, iar energia
necesară realizării mişcării este furnizată de mitocondriile piesei intermediare, care utilizează ca şi combustibil
fructoza conţinută în lichidul seminal. Viteza de mobilizare este de aproximativ 2mm/minut (la o temperatură de
35˚C). Mobilitatea spermatozoizilor poate fi influenţată şi de alţi factori de mediu ca de exemplu pH-ul (pH-ul
alcalin favorizează viteza de deplasare, iar cel acid o inhibă, pH-ul optim este de 7,5), prezenţa ionilor de Mg 2+ are
efect stimulant, pe când a ionilor de Ca2+ inhibă deplasarea. Motilitatea este inhibată de prezenţa ionilor de Cu 2+
previne eliberarea prematură a enzimelor acrozomiale. Stabilitatea membranară se realizează în special la nivelul
epididimului, prin adsorbţia de glicoproteine care au rolul de a “masca” situsurile antigenice de suprafaţă şi asigură
“imunitatea” spermatozoizilor faţă de eventualele agresiuni la care sunt expuşi în timpul pasajului în căile genitale
feminine.
În condiţii experimentale favorabile, spermatozoizii pot supravieţui 2-8 zile, îşi păstrează puterea
fecundantă 4-5 zile şi mobilitatea timp de 8 zile. In vitro, pot fi conservaţi prin congelare în azot lichid la –196ºC
3.4.3. FECUNDAŢIA
Amfimixia
După penetrarea nucleului spermatozoidului în citoplasma ovocitului, cele
două materiale genetice au următoarea evoluţie:
- lotul haploid de cromozomi materni se înconjoară de o anvelopă nucleară şi
formează un nucleu voluminos, de aproximativ 20 μ, care poartă numele de
pronucleu femel;
- nucleul spermatozoidului devine sferic, îşi creşte volumul la aproximativ 20μ,
prezintă numeroşi nucleoli şi poartă denumirea de pronucleu mascul;
- modificările nucleare sunt riguros sincronizate şi se desfăşoară paralel. Orice
întârziere în evoluţia unui pronucleu se însoţeşte de o încetinire a evoluţiei
celuilalt;
- cei doi pronuclei migrează în citoplasma oului unul spre celălalt, întâlnirea
realizându-se de regulă în regiunea centrală a oului. În această perioadă, fiecare
dintre pronuclei îşi realizează replicarea ADN (faza S);
- anvelopele nucleare ale pronucleilor vin în contact intim dar nu fuzionează;
nucleolii dispar, iar cromozomii se individualizează;
- anvelopele nucleare se fragmentează, cele două loturi cromozomiale (matern şi
patern) se amestecă; este momentul care marchează finalizarea amfimixiei şi
intrarea în metafaza primei diviziuni de segmentare a oului fecundat
(fig.VIII.60).
Consecinţele fecundaţiei
• Refacerea numărului diploid de cromozomi. În momentul debutului primei
diviziuni de segmentare, oul posedă 2n cromozomi bicromatidieni şi 4n cantităţi
de ADN.
• Determinarea sexului genetic al individului. În momentul amfimixiei, sexul este
determinat de cromozomul sexual adus de pronucleul mascul.
• Aspecte genetice. Fecundaţia este un mecanism complementar meiozei care
asigură transmisia programului ereditar şi amestecul informaţiilor individuale
în cadrul speciei. Ea marchează debutul unuia dintre cele mai importante
fenomene biologice, embriogeneza, în cursul căruia are loc dezvoltarea
zigotului cu formarea unui nou individ.
1. PROLIFERAREA CELULARĂ
• Culturile celulare pe suport. Se pot utiliza suporturi de sticlă neutră (cutii Petri,
suprafeţe extinse ca în cazul culturilor de celule în vederea fabricării vaccinurilor).
Multiplicarea celulelor normale are loc continuu, până în momentul în care întreaga
suprafaţă a plăcii a fost acoperită în monostrat. Celulele normale posedă capacitatea de
a-şi opri multiplicarea atunci când vin în contact unele cu altele sau cu pereţii vasului.
Proprietatea se numeşte inhibiţie de contact. Ea este o formă de manifestare a
fenomenelor de recunoaştere celulară, în care un rol important îl au glicoproteinele din
membrane.
Celulele maligne nu posedă inhibiţie de contact, ceea ce face ca multiplicarea
lor să nu fie stopată, ea continuă atâta timp cât celulele se află într-un mediu nutritiv,
determinând straturi suprapuse sau tumorete (fig.IX.3).
TABEL IX.I
Diferenţierea ţesuturilor şi organelor cu pornire de la foiţele embrionare
1. Generalităţi
Viaţa celulelor comportă mai multe faze: stadiul de celulă tânără, adultă,
îmbătrânită (senescentă), agonică şi stadiul de moarte celulară. Fiecare stadiu este
preludiul stadiului următor.
Îmbătrânirea este rezultatul modificărilor acumulate în organismele vii, de la
naştere până la moarte. Procesul de îmbătrânire al organismului este rezultatul
îmbătrânirii fiecărui sistem component în parte: îmbătrânirea moleculelor, a celulelor,
a ţesuturilor şi organelor. Îmbătrânirea celulară este un proces ce se desfăşoară diferit
pentru diferite tipuri celulare. Celulele cu ritm rapid de diviziune au un mecanism de
îmbătrânire diferit de cel al celulelor care nu se divid.
4. Apoptoza
Astăzi, se consideră că moartea celulară este determinată de un proces autoreglat
genetic, denumit apoptoză; termenul a fost folosit pentru prima dată de J.Fr.Kerr şi
colaboratorii, este preluat din greaca veche şi semnifică "căderea frunzelor din pom".
Cercetările în domeniul geneticii au demonstrat că în urma unui oarecare număr de
diviziuni (care diferă de la un tip celular la altul), au loc modificări structurale majore
ale ADN, care perturbă funcţia celulară şi pot determina transformarea malignă a
celulei. Pentru a preântâmpina acest fenomen, celula dispune de mecanisme de oprire
a diviziunilor, respectiv de oprire a ciclului celular. Oprirea ciclului celular, determină
implicit îmbătrânirea şi moartea celulară.
Din punct de vedere fiziologic, celula dispune de un “program de sinucidere”, care se
activează atunci când moartea celulară devine necesară pentru binele “comunităţii”. Celulele
“nedorite”, în exces faţă de necesar, sau alterate genetic, infectate viral ori o parte din celulele cu
o rată înaltă de reînnoire, se autoelimină din ţesuturi prin declanşarea unui program de inducere a
morţii, program care rezidă în ele însele. Fenomenul este prezent şi la organismele unicelulare.
Este descrisă “moartea altruistă” a unor celule bacteriene care este produsă cu scopul de a nu pune
în pericol colonia bacteriană. Acest act de “sinucidere” este considerat a fi o modalitate normală
de evoluţie în cadrul vieţii celulare. El a fost dovedit atât în circumstanţe fiziologice
(embriogeneză, turnover normal tisular, atrofie indusă hormonal), cât şi patologice (boli
neurologice degenerative, afecţiuni autoimune, oncogeneză, patologie toxicologică şi virală).
Astfel, apoptoza sau “moartea fiziologică” este o formă de moarte celulară care permite înlocuirea
celulelor lezate, bătrâne sau nedorite, fără să producă leziuni la nivelul celulelor adiacente şi fără
să antreneze mecanisme inflamatorii, intervenind astfel în menţinerea normală a turnoverului
celular.
Procesul de menţinere al homeostaziei ţesuturilor este asigurat de două
mecanisme de importanţă majoră: proliferarea celulară şi apoptoza. Ele sunt procese
care dispun de căi comune de reglare, determinate genetic, prin modularea ciclului
celular în oricare din fazele sale evolutive.
Moartea celulară programată participă la edificarea citoarhitecturii complexe,
în cele mai diferite regiuni ale organismului (fig.X.1). În cursul embriogenezei,
fenomenul de moarte celulară programată permite conturarea formei organelor prin
eliminarea celulelor în exces. Se pare că pentru organismele eucariote, generarea
unui număr de celule mai mare decât necesarul, urmat de eliminarea celulelor în
exces, este mai uşor de controlat decât generarea unui număr prestabilit de celule.
a) Criterii de diagnostic
În practică, apoptoza poate fi diagnosticată şi în microscopia optică, dar
microscopia electronică realizată prin tehnici standard este mai adecvată pentru
diagnosticul acestui fenomen. În ţesuturi apoptoza afectează de obicei celule
izolate şi nu se însoţeşte de fenomene inflamatorii de vecinătate, spre deosebire de
necroză. Instalarea apoptozei la membrii unor populaţii celulare este asincronă,
motiv pentru care fazele procesului pot fi observate în majoritatea secţiunilor. În
celule modificările ultrastructurale se derulează în faze consecutive (fig.X.2):
1. Modificările nucleare reprezintă prima dovadă clară a instalării apoptozei. Are
loc condensarea cromatiniană, care se derulează progresiv până la scindarea în
mase net delimitate, ataşate foiţei interne a anvelopei nucleare. Masele
cromatiniene prezintă contururi relativ netede, sunt electronodense omogene sau
fin granulare. În multe cazuri, porţiunea fibrilară nucleolară formează o masă
electronodensă, rotund-ovalară, situată pe marginea internă a maselor de
cromatină condensată. Se produc înmuguriri nucleare, care conduc în mod
progresiv la fragmentarea nucleului în 2-3 mase nucleare, bine delimitate de un
înveliş dublu.
2. Citoplasma condensează, iar pe suprafaţa celulei apar protuberanţe de diferite
dimensiuni. Condensarea citoplasmatică care însoţeşte apoptoza este evidentă în
ţesuturi, unde celulele apoptotice dense se disting clar de celulele vecine,
neafectate.
Procesele nucleare şi citoplasmatice se derulează concomitent şi conduc
progresiv la fragmentarea celulei în corpuri apoptotice care rămân ataşate
punctiform. Condensarea şi înmugurirea celulei pentru a forma corpuri
apoptotice, durează câteva minute.
3. Corpii apoptotici conţin de regulă un fragment nuclear cu cromatina localizată în
semicercuri periferice bine delimitate şi o zonă de citoplasmă condensată, cu
organite bine conservate. Numărul, structura şi dimensiunea corpilor apoptotici
depind de tipul şi dimensiunea celulară; celulele cu citoplasmă voluminoasă, vor
conduce la formarea unui număr mai mare de corpi apoptotici, dintre care numai
o parte vor conţine fragmente nucleare .
4. Degradarea corpilor apoptotici. În ţesuturi cea mai mare parte dintre corpii
apoptotici sunt rapid fagocitaţi de către macrofage sau de celulele vecine.
Endocitoza şi digestia se desfăşoară conform etapelor clasice, sub acţiunea
enzimelor lizozomale ale celulelor ingeratoare. După digestie, corpii apoptotici
sunt reduşi la reziduri nedigerabile, greu de recunoscut. Degradarea corpilor
fagocitaţi durează câteva ore.
5. Corpii apoptotici care nu sunt fagocitaţi suferă modificări degenerative,
asemănătoare cu cele din necroză.
Fig.X.2. Prezentarea schematică comparativă a modificărilor celulare care caracterizează
procesele de necroză şi apoptoză (după J.F.R.Kerr şi colab.)
1-celulă normală, 2-debutul apoptozei prin segregarea cromatinei, 3-formarea corpilor
apoptotici, 4-fagocitarea corpilor apoptotici, 5-digestia corpilor apoptotici de către
lizozomi, 6-reziduuri rezultate în urma digestiei, 7-fragmentarea cromatinei cu apariţia
densificărilor matricei nucleare şi balonizări mitocondriale în cadrul necrozei, 8-
dezintegrarea membranelor şi a organitelor, cu menţinerea configuraţiei celulare
Fig. X.3. Celulă apoptotică (stg) şi celulă fagocitară (dr) care înglobează corpii apoptotici
(după Dana Davis)
b) Metabolismul energetic
Sub aspect biochimic, apoptoza reprezintă un proces energodependent, precis controlat.
Diminuarea cantităţii de ATP exportate dinspre matricea mitocondrială către citosol, reprezintă
una dintre caracteristicile morţii celulare. Experienţele de evaluare a funcţiei mitocondriale în
timpul procesului de apoptoză (prin tehnica de citometrie în flux) au demonstrat menţinerea
potenţialului ∆ al membranelor mitocondriale în primele stadii ale morţii celulare induse. În
stadiile avansate ale procesului, odată cu începerea alterărilor ADN-ului nuclear, s-a observat o
importantă scădere a potenţialului ∆ψ. Experimentul a condus la ipoteza că mitocondriile ar trebui
privite ca “tabloul celular de comandă” de la care se face “comutarea” spre comportamentul de
“sinucidere celulară”.
Pe de altă parte, unele experienţe au examinat posibilitatea ca moleculele de
ATP extracelular să inducă apoptoza şi liza osmotică. Excesul de ATP ar putea
determina activarea unor protein-kinaze, controlate la rândul lor de protein-
fosfataze.
c) Ionii de calciu
Homeostazia intracelulară a calciului este menţinută prin mecanisme
complexe localizate şi realizate la nivel membranar (variate tipuri de canale şi
pompe ionice), precum şi la nivelul organitelor intracitoplasmatice care pot stoca
şi/sau elibera Ca2+; endomembranele acestor organite realizează o compartimentare
celulară în teritorii cu concentraţii controlate ale calciului ionic. În acelaşi timp, se
cunoaşte la ora actuală participarea certă a ionilor de calciu ca mesageri “secunzi”
în mecanismul de transmitere intracelulară a mesajelor, precum şi rolul lor în diferite
procese de răspuns celular.
Există numeroase studii referitoare la participarea ionilor de calciu la procesul
de apoptoză. Oscilaţiile concentraţiei ionilor de calciu pot avea un ecou funcţional
semnificativ asupra unei largi game de ţinte moleculare (fig.X.5).
• Activarea canalelor ionice de clor dependente de concentraţia de calciu, se
presupune că ar permite un eflux accelerat de clor, ceea ce va determina pierderea
de apă din sectorul intracelular. Acest lucru va conduce la condensarea
citosolului.
• Creşterea concentraţiei de calciu liber intracelular poate activa o serie de
mecanisme enzimatice:
- Fosfolipaza A2 odată activată, eliberează fosfatidilcolina, xantina,
lizofosfolipide, eicosanoizi. Lizofosfolipidele sunt compuşi toxici celulari, iar
xantina poate facilita fenomenele de peroxidare a lipidelor, ceea ce va agrava
leziunile membranare şi va conduce la fenomene autolitice.
- Proteaze neutre – calpaina odată activată de creşterea concentraţiei ionilor de
calciu, are capacitatea de a cliva proteine citoscheletale (fodrina, vimentina).
Acest fapt va conduce la modificarea de volum a celulei, formarea veziculelor
plasmalemale, precum şi la alte manifestări morfologice asociate apoptozei.
Proteaze activate de calciu, pot determina şi clivajul enzimatic al proteinelor
din componenţa matricei nucleare (familia laminelor).
- Endonucleazele sunt implicate în modificarea materialului cromatinian. Au
fost identificate: nucleaza NUC 18 (localizată în nucleu), DN-aza I (localizată
în RER, Ap.Golgi şi veziculele secretorii mici) şi alte Ca 2+/Mg2+ -
endonucleaze. DN-aza I pare a fi enzima responsabilă, în cea mai mare parte
de formarea fragmentelor oligonucleozomale de ADN.
- NO sintaza este o altă enzimă care poate fi activată de calciu. Inhibiţia
glicolizei şi a unor procese de reparare a ADN-ului, provocate de eliberarea
unor cantităţi crescute de oxid nitric (NO), ar putea agrava deficitul energetic
celular.
- Activarea transglutaminazelor. TTG este o enzimă dependentă de calciu care
catalizează formarea de punţi prin cuplarea lizinei cu glutamil. Activitatea
de cuplare duce la formarea unor structuri rigide, insolubile, în timpul formării
corpilor apoptotici. Stabilizarea structurilor membranare, previne alterarea
membranară precoce în fazele iniţiale ale apoptozei, iar în faza finală
realizează atragerea conţinutului citoplasmatic în corpii apoptotici (ieşirea
conţinutului citoplasmatic în spaţiul extracelular ar putea produce inflamaţie).
• Alterările conformaţionale ale proteinelor care leagă ionii de calciu ar putea
explica dezorganizările citoscheletului în cursul apoptozei. Aceste modificări
reprezintă punctul iniţial în formarea veziculelor plasmalemale (“blebbing”).
• Creşterea concentraţiei ionilor de calciu şi a ionilor de fosfor determinate de
scăderea sintezei de ATP mitocondrial, crează condiţii favorabile apariţiei unor
nuclee de precipitare care conduc la formarea cristalelor de apatită.
Fig.X.5. Intervenţia calciului liber citosolic în modularea mecanismelor apoptozei
d) Radicalii liberi
Stresul oxidativ a fost examinat ca un alt potenţial mecanism de modulare a
unor procese celulare asociate apoptozei.
Experimental s-a demonstrat că în procesul de apoptoză are loc eliberarea
unor radicali liberi (radical superoxid, peroxizi lipidici, oxid nitric, radicali hidroxil),
concomitent cu scăderea marcată a antioxidanţilor intracelulari (glutation redus).
Experimental s-au demonstrat: mobilizarea ionilor de calciu sub acţiunea unor
radicali liberi, diminuarea sintezei acestor compuşi instabili în stadii incipiente ale
apoptozei în timus, inhibarea apoptozei prin agenţi oxidanţi etc. Pe de altă parte însă,
au existat experimente în care a fost indusă moartea celulară in vitro în condiţii în
care concentraţia oxigenului a fost menţinută la valori care exclud posibilitatea
formării unor radicali liberi ai acestuia. Pentru a putea stabili ponderea rolului
prezenţei radicalilor liberi în declanşarea apoptozei sunt necesare experimente şi
investigaţii suplimentare.
stadiile primitive până la organismele evoluate. Această observaţie a sugerat ideea că atât proliferarea celulară
cât şi moartea celulară prin apoptoză fac uz de aceleaşi “maşinării moleculare”. Faptul că celulele cu ritm înalt
al ciclului celular au o rată scăzută a apoptozei, iar proliferarea tumorală implică chiar apariţia unor mutaţii care
orientează spre blocarea apoptozei, a condus la concluzia existenţei unui al treilea mecanism conex, de data
Rolul telomerazelor
După un număr definit de diviziuni celulare, celulele somatice intră în senescenţă.
Acest număr de diviziuni, constant pentru acelaşi tip celular este controlat de
structuri specializate localizate la extremităţile cromozomilor numite telomere.
Aceste structuri se scurtează la fiecare parcurgere a ciclului celular, scurtare care
determină acumularea de anomalii genetice. De regulă, scurtarea telomerelor este
unul dintre factorii determinanţi ai părăsirii ciclului celular şi activarea apoptozei.
In celulele germinale, scurtarea cromozomilor este evitată graţie unei enzime
numite telomerază; aceasta compensează reducerea taliei telomerelor. Introducerea
telomerazelor în celulele somatice creşte considerabil durata lor de viaţă. In marea
majoritate a cancerelor a fost observată activitatea telomerazelor. Se poate considera
că reducerea taliei telomerelor are un efect de supresie tumorală, iar activitatea
telomerazică este un marker molecular al cancerului.