Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Toate drepturile sunt rezervate autorului; orice parte a prezentei lucrări poate fi copiată,
distribuită prin orice mijloc mecanic sau electronic cu acordul autorului.
Înainte de toate
Călin Mircu,
Coordonator Complex de
Laboratoare de Cercetare Horia Cernescu
Timișoara, 22.01.2018
PREFAȚĂ
PSUEX 5.1
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
Conform recomandărilor ICLC – acronim de la The Committe on Laboratory Animals - o
creștere a gradului de înrudire cu maximum 1% de la o generație la alta.
2
Indicele de productivitate reprezintă numărul mediu de produși înţărcaţi de către fiecare
femelă în fiecare săptămână pe durata vieții reproductive; din punct de vedere aritmetic, se
calculează după relația: IP pui/♀/săpt = (pui înţărcaţi x 7) / zile de utilizare la reproducţie.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 11
1
Față de lumina roșie ochiul uman este de 12 ori mai sensibil decât cel al șoarecelui - ca
urmare, folosirea luminii roșii (de obicei> 600 nm) sau a luminii de sodiu (cu o emisie de vârf în
jurul valorii de 589 -590 nm) permite oamenilor să vadă, dar ar fi la marginea sensibilității
vizuale a șoarecilor.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 13
Sistemul ciclic utilizat de către Falconer (tabelul 5.1.5) diferă față de cel
rotațional prin faptul că, de la o generația la alta, numărul cuștilor
masculilor crește cu o unitate, până când se încheie ciclul.
Tabelul 5.1.3. Sistem de montă rotațional, pentru 3-12 perechi de
reproducători/generație (Metoda Poiley)
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Cuș-
perechi perechi perechi perechi perechi perechi perechi perechi perechi perechi
ca
F M F M F M F M F M F M F M F M F M F M
1 2 3 4 3 4 5 6 3 6 2 7 6 8 7 9 8 10 9 12 10
2 3 1 1 4 5 1 1 6 7 3 8 1 9 4 10 1 11 1 1 11
3 1 2 2 1 1 2 2 5 1 6 1 7 1 8 1 9 1 10 2 12
4 3 2 2 3 3 1 2 7 2 8 2 9 2 10 2 11 3 1
5 3 4 4 2 3 4 3 2 3 2 3 2 3 2 4 2
6 5 4 4 5 4 3 4 3 4 3 4 3 5 3
7 5 1 5 4 5 4 5 4 5 4 6 4
8 6 5 6 5 6 5 6 5 7 5
9 7 6 7 6 7 6 8 6
10 8 7 8 7 9 7
11 9 8 10 8
12 11 9
Notă: Combinațiile sunt identice pentru fiecare dintre generațiile următoare.
Prelucrare după Fox și col., 2017.
În mod normal, acestea sunt mai frecvente în timpul curtării, dar continuă, la
intensitate și frecvențe mai reduse, pe durata împerecherii. Totodată, ca
urmare a feromonilor din urina masculilor, apar influenţe în comportamentul
femelelor; se pot descrie trei efecte importante ale feromonilor masculi
asupra comportamentului femel:
o efectul Lee-Boot - femelele dintr-un grup1 își vor sincroniza ciclurile
estrale care, în lipsa prelungită a feromonilor masculi, se vor
diminua, apărând anestrul.
1
La grupurile mici, de 4-5 femele, poate apărea pseudogestația, iar în grupurile mari, de 30-40
femele/cușcă, se poate manifesta anestrul.
22 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
o efectul Whitten - estrul poate fi indus în trei zile la majoritatea
femelelor unui grup dintr-o cușcă, prin adăugarea urinei sau
așternutului murdar provenite de la un mascul
o efectul Vandenbergh – la tineretul femel crescut împreună cu
masculii haremului se manifestă precocitatea sexuală, pubertatea
apărând mai timpuriu.
o efectul lui Bruce - feromonii unui alt mascul pot preveni
implantarea embrionilor unei femele montate în ultimele 24-48 ore.
Ca urmare, în perioada montei nu se recomandă transferul unei
femele din cușca unui mascul în cușca altui mascul; dacă acest
aspect se întâmplă, estrul poate apărea în aproximativ patru zile.
Efectele Lee-Boot și Whitten pot fi utilizate pentru sincronizarea căldurilor la
șoricioaice. Practic, prin separarea pentru o perioadă a femelelor de mascul
și transferul acestora în cușca masculului, 2/3 din femele pot manifesta estru,
devenind gestante în trei zile.
- măsuri tehnologice premergătoare montei
Tehnologia reproducţiei șoarecilor este asociată particularităților
fiziologice, comportamentale și are drept scop maximizarea numărului de
produși și a calităţii acestora, precum și minimizarea costurilor; punctual,
aceasta presupune:
o optimizarea densității în cușcă și relotizarea femelelor, întrucât
întreţinerea acestora în grupuri mari și perioade îndelungate poate
cauza anestrul, ca urmare a efectului Lee-Boot
Proiect ________
Nr. __________ Procedură ________
♂ ♀♀
DN Proveniența:
CN Specia:
GN Rasă/linie:
Dată Dată Dată
Total Dată Gene- Obser-
formare separare naștere ♀♀ ♂♂
născuți înţărcare rație vații
♂♀ ♂ sau ♀ ♀♀♂♂
1
Manifestarea canibalismului la primipare nu este un fenomen neobișnuit - în situația în care
aspectul se repetă, se recomandă reforma. De regulă, femelele cu instinct matern dezvoltat
transmit descendentelor acest caracter; și reversul situației este adevărat.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 29
Direcţii prioritare:
• Nu se admit la reproducţie șoarecii cu masă corporală sub
limitele admise biologic, cu defecte genetice sau tare
vizibile.
• Introducerea la reproducție se face după vârsta de nouă
săptămâni.
• Excluderea sau reforma femelelor din lotul matcă se face
dependent de prolificitate (cele cu mai puțin de șase pui) și
de numărul parturițiilor (nu mai mult de șase parturiții).
Biologia și înmulțirea șoarecilor consangvini și a celor
cu structură genetică modificată
Obiectiv:
Creșterea și înmulțirea șoarecilor consangvini în vederea
obținerii și reproducerii animalelor homozigote și a șoarecilor cu
structură genetică modificată.
PSUEX 5.2
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
Organismul care reglementează acest aspect este International Committee on Standardized
Genetic Nomenclature for Mice - http://www.informatics.jax.org/mgihome/nomen/strains.shtml.
2
129 pentru liniile 129S6 (cu subtipuri cum sunt 129S6/SvEvTac ș.cl.), AK pentru liniile AKR,
B pentru linia C57BL, B6J pentru tulpinile C57BL/6J, B6N pentru tulpinile C57BL/6N, B10
pentru linia C57BL/10, BR pentru C57BR/CD, C pentru liniile BALB/c, CBy pentru tulpinile
Bailey, BALB/cBy, CWt pentru tulpinile albinotice BALB/cWt, C3 pentru liniile C3H, D1
pentru liniile DBA/1, D2 pentru liniile DBA/2, HR pentru HRS/J, L pentru C57L/J, R3 pentru
RIIIS/J, J pentru SJL, SW pentru SWR.
3
Se adaugă între paranteze litera F, urmată de numărul de generații incestuoase; dacă nu există
informații referitoare la numărul total de generații rezultate din încrucișări incestuoase, acest
lucru se marchează printr-un semn de întrebare, la care se adaugă numărul cunoscut de
generații ulterioare de încrucișări incestuoase – spre exemplu, C3H/HeJ-ruf (F?+25).
4
Codurile sunt alocate de către Institute of Laboratory Animal Research (ILAR); spre
exemplificare, cele mai reprezentative sunt: J pentru The Jackson Laboratory, Rl pentru W.L.
and L.B. Russell, Jr pentru John Rapp, He pentru Walter E. Heston, Mcw pentru Medical
College of Wisconsin, Kyo pentru Kyoto University ș.a.m.d.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 33
1
Ca urmare, hibrizii F1 vor accepta țesuturi din tulpina parentală, cu excepția cazului
incompatibilității cromozomului Y; ca urmare, o grefă de piele de la un mascul din linia
parentală va fi respinsă de un hibrid F1 de sex feminin.
34 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
Tulpina RI se formează prin încrucișarea dintre două linii
consangvine urmată de cel puţin 20 generaţii de încrucișări
incestuoase. Generația F1 se utilizează pentru obţinerea generației
filiale F2 neizogenă, din care sunt selectați aleator indivizi pentru
tulpinile RI. Atunci când consangvinizarea este completă, șoarecii
rezultați din perechi parentale vor fi omogeni din punct de vedere
genetic; practic, fiecare tulpină va fi homozigotă pentru combinații
date de alele provenite de la cele două linii parentale consangvine.
Alelele tulpinilor parentale vor tinde să rămână împreună în liniile
RI, aspect utilizabil în studiile de cartografiere a genomului.
Tulpinile sau liniile consangvine recombinate (RI) sunt denumite prin
abrevieri cu una sau două litere majuscule provenite de la liniile parentale,
cu acronimul liniei materne scris inițial, separat de cel al liniei paterne prin
majuscula X, fără spații intermediare. Spre exemplu, CXB este denumirea
tulpinii RI, provenită din încrucișarea recombinată dintre femelele liniei
BALB/c cu masculii liniei C57BL/6J. În situația în care se creează mai
multe tulpini RI din aceiași genitori, denumirea este urmată de numărul
seriei. Spre exemplu, BXD1, BXD2, BXD3 sunt tulpini RI provenite prin
încrucișările dintre genitorii liniilor C57BL/6 x DBA/2. În cazul studiului
hărților genetice, tulpinile recombinate (RI) se pot încrucișa între ele, astfel
că generația F1 se va numi RIX sau intercross RI. Denumirea produșilor
conține tulpinile recombinate și terminația F1: spre exemplu, tulpina RIX
formată între femelele liniei recombinate BXD1/Ty și masculii liniei
recombinate AXB19/Pgn se va scrie (BXD1/Ty X AXB19/Pgn)F1.
o tulpinile congenice recombinante (RC) sunt formate prin
încrucișarea a două linii consangvine urmate, de obicei1, de două
încrucișări de întoarcere (N3 fiind considerat a fi echivalentul a F6,
încrucișări incestuoase) către una din liniile parentale (tulpina
„receptoare”), urmate ulterior de 14 încrucișări incestuoase (frate x
soră) pentru obţinerea consangvinizării după 20 de generații de
încrucișări incestuoase (F14 + N3 = F20). Tulpinile RC sunt utile în
analiza genetică a sistemelor cu mai multe gene, cum ar fi cele
responsabile de susceptibilitatea la cancer.
Tulpinile RC se denumesc din abrevierile liniilor parentale; linia receptoare
este prima menționată și este separată de cealaltă prin litera "c".
1
Numărul de încrucișări de întoarcere efectuate înainte de începerea încrucișărilor pentru
consangvinizare este determinat de proporția de gene a fiecărei tulpini parentale.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 35
Spre exemplu, tulpina CcS este o tulpină congenică recombinată între linia
receptoare BALB/c și linia donatoare STS; dacă din liniile parentale derivă
mai multe tulpini RC, acestora li se vor adăuga numere seriale CcS1, CcS2,
CcS3 ș.a.m.d.
36 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
o tulpinile coizogene sunt tulpini consangvine în care s-a produs o
mutație genetică; cu excepția mutației, tulpina obținută este identică
cu linia parentală nemutantă. Dacă mutația nu este letală în
genotipurile homozigote, tulpina poate fi menținută prin împerecheri
simple. Dacă mutația afectează în mod negativ performanțele de
reproducere, tulpina coizogenă se menţine prin sisteme speciale de
reproducere; de regulă, se recomandă încrucișări de întoarcere
(back-cross) la linia parentală.
Tulpinile coizogene sunt denumite utilizând simbolul liniei (eventual, al
tulpinii) urmat de cratimă și de simbolul alelelor diferențiate, scrise cu litere
italice; de exemplu, tulpina 129S7/SvEvBrd-Fyntm1Sor are o mutație a genei
Fyn, produsă prin utilizarea liniei de celule AB1 ES, derivată de la
129S7/SvEvBrd. Himerele s-au împerecheat cu 129S7/SvEvBrd, alela fiind
menținută pe această tulpină coizogenă.
o tulpinile congenice sunt asemănătoare celor coizogenice. Tulpina
congenică se creează prin împerecherea unui individ care poartă o
genă de interes, numită gena diferențială, cu un individ dintr-o linie
consangvină. Practic, inițierea tulpinii pleacă de la un descendent
care poartă gena diferențială care se împerechează cu un individ al
tulpinii consangvine standard; tulpina congenică se obține prin
împerecherile de reîntoarcere (back-cross), desfășurate pe durata a
cel puțin 10 generații.
Tulpinile congenice sunt denumite prin compunerea a trei tipuri de
informații. Denumirea începe cu numele complet sau abreviat al liniei
destinatare, separat prin punct de numele sau abrevierea liniei donatoare
(linia sau tulpina în care a apărut alela sau mutația), urmate de cratimă și de
simbolul sau abrevierea alelelor diferențiale introduse de tulpina
donatorului, scrise cu caractere italice. De exemplu, tulpina congenică
B6.AKR-H2k este tulpina provenită din genofondul liniei C57BL/6, dar care
diferă de linia inițială prin introducerea unei alele diferențiale (H2k),
derivată din linia AKR/J.
o tulpinile consangvine segregate - sunt tulpini obținute prin
încrucișarea acelorași părinți (de obicei, încrucișări incestuoase de
tip frate x soră), astfel încât să se menţină de la o generație la alta o
alelă sau o mutație particulară. Tulpina creată permite dezvoltarea
unor modele experimentale, deoarece animalele fie au, fie nu gena
mutantă, sunt în esență identice, cu excepția acelei gene sau mutații.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 37
1
Tg – de la transgenic, iar X oferă informații despre modul inserției materialului genetic în
ADN gazdă: N de la recombinare neomoloagă (nonhomologous recombination), R de la inserția
prin vector recombinat sau H de la recombinarea omoloagă (homologous recombination).
38 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
Se cunosc linii care răspund diferit la: i) factorii de mediu (DBA/2J), în
sensul că indivizii devin hiperreactivi și îşi reduc performanțele reproductive
atunci când are loc scăderea presiunii atmosferice), ii) hrană – șoarecii
BALB/cJ hrăniți cu 11% grăsime în rație au performanțe reproductive mai
bune, în timp ce DBA/2J au performanțe bune la niveluri de 4% grăsime. De
asemenea, sunt linii de șoareci albinotici (BALB/c), obezi (B6.V-Lepob/JRj),
hibrizi sau transgenici, fiecare cu particularitățile lui.
- nevoia proiectului de cercetare
Practic, dependent de nevoia proiectului de cercetare se aleg şoareci
consangvini, hibrizi sau mutanți utilizabili pentru infecții experimentale,
studii imunologice (producerea ascitei și a anticorpilor monoclonali -
BALB/c, NOD-CSID, alergii experimentale – BP/2 BIOZZI), de
metabolism (diabet, obezitate, hiperglicemie sau rezistență la insulină), studii
toxicologice, farmacologice, hematologice, virusologice, neurobiologice,
cardiovasculare (arterioscleroza), oncologice, transgeneză sau transplant
(xeno- și alogrefe).
2.2. Parametrii hematologici și biochimici ai șoarecilor consangvini
au variații dependente de vârstă, sex și linie; șoarecii din liniile BALB
și C57BL, la vârsta de 10 săptămâni, au mediile parametrilor
hematologici și biochimici prezentați în tabelele 5.2.1 și 5.2.2.
Tabelul 5.2.1. Parametrii hematologici la șoareci cu vârsta de 10 săptămâni
BALB/cAnNRj C57BL/6JRj
Parametru UM
masculi femele masculi femele
Eritrocite 106/µL 10,8±0,2 10,5±0,4 10,2±0,2 9,9±0,4
Hematocrit % 60±2 58±2 60±2 58±2
Hemoglobină g/dL 16,4±0,4 16,4±0,6 15,4±0,4 15,2±0,5
Concentrația g/dL 28±1 28±1 26±1 26±1
hemoglobinei
Trombocite 103/µL 1260±216 1137±172 1018±192 946±186
(plachete sangvine)
Leucocite 103/µL 11,4±1,9 11,0±2,8 12,7±3,8 14,9±2,7
Neutrofile 103/µL 1,94±0,49 1,21±0,23 1,00±0,26 0,88±0,25
Limfocite 103/µL 8,69±1,44 8,67±2,28 10,49±3,26 12,44±2,38
Eozinofile 103/µL 0,44±0,17 0,45±0,14 0,59±0,16 0,63±0,24
Monocite 103/µL 0,17±0,07 0,16±0,08 0,16±0,05 0,16±0,05
Bazofile 103/µL 0,00±0,00 0,06±0,06 0,07±0,04 0,12±0,07
Prelucrare după fișe tehnologice - http://www.janvier-labs.com.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 39
Direcţii prioritare:
• Creșterea și întreținerea se face în diferite sisteme, iar
înmulțirea are loc după scheme de reproducție menite a
păstra consangvinitatea liniilor utilizate.
• Nu se admit la reproducţie șoarecii cu defecte sau tare
vizibile.
• Reformarea femelelor din lotul matcă se face dependent de
starea de sănătate și indicatorii reproductivi ai femelelor.
Biologia și creșterea șobolanilor
Obiectiv:
Prezentarea câtorva aspecte privind biologia șobolanilor în
vederea folosirii acestora în proiectele de cercetare științifică
care presupun utilizarea animalelor în proceduri.
PSUEX 5.3
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
S-a demonstrat că există diferențe între diferite linii și tulpini de șobolani; astfel, șobolanii din
linia F344 aud mai bine la intensități sonore de 20 dB și la frecvențe mai mici de 4 kHz, în timp
ce tulpina hibridă FBNF1, la aceleași intensități sonore, aude mai bine la frecvențe mai mari, de
32 kHz.
44 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
2. Particularități genetice:
Structura genetică a șobolanilor utilizați în proiecte de cercetare
depinde de tipul și cerințele proiectelor; de regulă, se utilizează
animale hibride, consangvine sau neconsangvine, obținute din:
- linii de șobolanii neconsangvini (figura 5.3.1)
Cele mai frecvent întâlnite și folosite linii neconsangvine sunt: Albinosul de
Wistar (WIST), Albinosul Sprague-Dawley (SD), Fawn Hooded (FHH),
Long-Evens (LE), Lister (LIS), Zucker (ZUC) etc.; în fapt, aceste linii sunt
utilizate pentru studii de tipul celor prezentate în tabelul 5.3.1. În cazul
șobolanilor neconsangvini, denumirea tulpinilor se formează din acronimul
laboratorului, două puncte și denumirea tulpinii, scrisă cu majuscule. Spre
exemplu, Crl:LE reprezintă numele tulpinii Long Evans provenită de la
Charles River Laboratories. În peste 70% din cazuri se utilizează șobolani
neconsangvini care se obțin prin împerecheri aleatorii între animale care nu
provin din acelaşi cuib în populaţii cu cel puţin 200 indivizi. Ca urmare, în
cazul efectivelor reduse numeric, riscul consangvinizării este mai mare
comparativ cu efectivele mai numeroase. În cazul în care efectivul-matcă este
mai redus numeric, se utilizează împerecherile rotaționale monogame - în
acest fel, coeficientul de consangvinizare va fi ∆F=1/2N, unde N reprezintă
numărul total de animale din efectivul-matcă. Pentru ca un efectiv să poată fi
considerat efectiv-matcă neconsangvin, trebuie să existe un număr suficient
de animale, în aşa fel încât după patru generații de izolare reproductivă,
coeficientul de consangvinizare să rămână ∆ F <1%.
1
Se cunosc multe linii consangvine, cum sunt: A990, AA, AICI, AGA, AGUS, AM, AS2AT,
AVN, B, BB, BBDP, BBDR, BBNB, BC, BDI, BDIV, BDIX, BDVI, BDVII, BG, BI, BIL, BN,
BNW/Jer, BP, BROFO, BS, CAS, CHOC,DEBR, DRU/Uubc, DRY, F344, FDIO/Rrrc, G,
GAERS, GH, GHS, HAA, HCR, HCS, HER, HFJ/Hblac, HIS/NdkRrrc, HMT, Hooded,
IRL/NCr, IS, JC, KB, KH, KND, KX, KYN, LAS, LET, LETO, LEW, LOS/NdkRrrc, M14,
M17, MITE, MNS, MSHRSP/Kpo, MV, NAR, NBR, NE, NEDH, ODS/ShiJcl, OKA,
OXYR/Nov, OXYS/Nov, PA, PAR, PETH, R, RLA, SDDR, SDH, SDJ, SDL, SEL, SHA, TM,
TRMR, TS3, TU, TW, UChB, WCF, WIAR, WKHT, WN, WOK, WOKA, WST, ZDF și ZI.
Sursa: http://bioportal.bioontology.org/ontologies/RS/.
48 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
Denumirea generică pentru tulpinile consomice este generată de LINIA
GAZDĂ - Cromozom LINIA DONATOARE. De exemplu, tulpina SHR-Chr YBN s-a
format prin încrucișări de întoarcere la linia de șobolani hipertensivi
(Spontaneous Hypertensive – SHR), având cromozomul Y, care provine de la
linia Brown Norway (BN).
- șobolani hibrizi
Pentru unele proiecte de cercetare sunt utilizați șobolanii hibrizi F1,
proveniți din două tulpini consangvine; aceștia sunt omogeni genetic, dețin
caracteristicile genetice ale celor două genotipuri parentale, dar nu pot fi
utilizați pentru reproducţie. Denumirea hibrizilor F1 cuprinde denumirea
ambelor linii; spre exemplu, FBNF1 este hibridul F1 dintre femelele F332
(F) și masculul Brown Norway (BN).
1
Pentru hematologie se recomandă ca analiza parametrilor sangvini să aibă loc în ziua
recoltării. Pentru parametrii chimici, de regulă se utilizează serul și plasma care se păstrează la
frigider, doar că trebuie considerat faptul că unele enzime devin instabile prin păstrarea
îndelungată a probei, indiferent de temperatura stocării. În situația în care se utilizează EDTA
pentru obținerea plasmei, unii parametri vor avea valori mai mici (K+ și Ca++).
2
Timpul de protrombină (PT) evaluează activitatea factorilor implicaţi pe calea „extrinsecă” și
„comună” a coagulării: FVII-proconvertina, FX-factorul Stuart-Power, FV-proaccelerina, FII-
protrombina și FI-fibrinogenul.
3
aPTT este un test funcțional care evaluează „calea intrinsecă” (prekalicreina, kininogenul cu
greutate moleculară mare-HK, factorii XII, XI, IX, VIII) și „comună” a coagulării (factorii X,
V, II, I).
MANUAL DE BUNE PRACTICI 51
1
Efectul Bruce sau blocarea gestației este tendința femelei de oprire a implantării zigoților ca
urmare a expunerii la mirosul unui mascul nefamiliar. Efectul a fost observat pentru prima dată
în 1959 de Hilda M. Bruce la șoareci de laborator.
2
Efectul Whitten se produce atunci când feromonii masculini stimulează sincronizarea
căldurilor; acesta se manifestă atunci când un grup de șoricioaice sunt expuse la urina unui
mascul.
3
Efectul Lee-Boot este fenomenul de suprimare sau prelungire a ciclurilor estrale atunci când
femelele sunt adăpostite în grupuri și sunt izolate de masculi.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 55
- înțărcarea puilor
În unitățile experimentale, înțărcarea are loc la vârsta de trei săptămâni,
atunci când se face și sexarea puilor (vezi figura 5.3.4). Dependent de
specificul proiectului de cercetare, se rețin pentru reproducție 10% din
masculi și 25% din femele; puii destinați livrării către alt partener se
sortează în funcţie de masa corporală și se transferă în zona de
carantină/livrare.
- parametrii normali ai creșterii
Principalii indicatorii asociați tehnologiei creșterii tineretului sunt:
o masa la naștere/înțărcare 5-7 / 30-55 g
o vârsta înțărcării 21 zile
o vârsta deschiderii ochilor/urechilor 10-12 / 12-14 zile
o vârsta îmbrăcării cu blană 8-9 zile
o vârsta consumului de furaj solid 11-13 zile
4.3. Înlocuirea efectivului matcă depinde de performanţele
tehnologice, cerințele proiectului, dar și de aspecte care țin de
performanţele reproductive ale femelelor:
- considerente legate de performanța femelelor
Fiziologic, menopauza poate să fie surprinsă după 450-540 zile. Din punct
de vedere tehnologic, decizia reformării are valențe productive.
58 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
Practic, în proiectele care solicită activități de reproducție, motivele pentru
care poate avea loc reforma sunt:
o femelele care în ultimele 18 săptămâni nu au avut patru parturiții
reușite sunt reformate; de asemenea, reforma se poate face după
minimum patru fătări reușite survenite pe durata a 18 săptămâni;
o toate femelele după a 24-a săptămână de la începerea activităţii de
reproducţie, indiferent de performanțele înregistrate;
o femelele care nu au pui înţărcaţi la 45-60 zile de la debutul
activității de reproducţie;
o femelele care la ultima parturiție au avut mai puțin de trei pui.
- considerente tehnologice
Reforma efectivului se realizează cu o frecvență lunară; dependent de durata
vieţii reproductive, reformele lunare sunt:
o la 5 luni longevitate reproductivă 20,0% din efectivul matcă
o la 6 luni longevitate reproductivă 16,7% din efectivul matcă
o la 7 luni longevitate reproductivă 14,3% din efectivul matcă
o la 8 luni longevitate reproductivă 12,5% din efectivul matcă
o la 9 luni longevitate reproductivă 11,1% din efectivul matcă
o la 10 luni longevitate reproductivă 10,0% din efectivul matcă.
Direcţii prioritare:
• Utilizarea șobolanilor în procedurile proiectelor de
cercetare trebuie să considere particularitățile biologice ale
acestora.
• Nu se admit la reproducţie șobolani cu masă sub limitele
admise biologic, cu defecte genetice sau tare vizibile;
reforma are loc conform necesităților, considerentelor
tehnologice apriorice și a performanțelor reproductive
înregistrate.
Biologia și creșterea iepurilor și cobailor
Obiectiv:
Prezentarea câtorva aspecte privind biologia iepurilor și cobailor
în vederea utilizării acestora în proiectele de cercetare științifică
care presupun folosirea acestor specii în proceduri.
PSUEX 5.4
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
Dependent de abilitatea operatorului, iepurii pot fi hipnotizați prin plasarea animalului în
decubit dorsal, cu gâtul întins. Prin mângâierea abdomenului, rata respirației se reduce și
pupilele animalului se contractă. Indiferent de abilitatea operatorului, metoda nu trebuie
utilizată și nu înlocuiește sedarea sau anestezia.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 61
- comportamentul cobailor
Cobaii sunt animale active timp de 20 de ore/zi uneori, pentru perioade de
timp foarte scurte cu mersul, combină somnul. Fără a exista diferențe
comportamentale de la zi la noapte, cobaii sunt animale care evită lumina
intensă. Comportamentul de vocalizare este deosebit de elaborat,
cunoscându-se peste 10 tipuri de semnale. Cobaii își marchează teritoriul
prin conținutul glandelor perianale, prin frecarea regiunii perianale de
pardoseală, iar prin urinarea asupra femelei care nu este receptivă masculul
o marchează ca fiind a lui. De asemenea, femelele nereceptive excretă jeturi
de urină pentru a respinge sau a distrage atenția unor masculi care le
curtează persistent. Comportamentul agresiv se manifestă în special între
masculi și apare la momentul montei, pentru spațiu sau pentru hrană.
Masculii sunt atrași de femelele în estru și de cele aflate la sfârșitul gestației:
femela aflată în estru acceptă masculul și adoptă poziția lordozată
caracteristică.
1
Se cunosc un număr semnificativ de baze de date genomice; astfel, se pot consulta link-urile
http://www.ebi.ac.uk/embl/, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ sau http: // www .ddbj.nig.ac.jp/.
2
Parametrii considerați sunt cei ai rasei Alb neozeelandez, una dintre cele mai utilizate rase.
Este important de subliniat faptul că între indivizi, rase și unități de creștere se pot surprinde
valori care pot fi semnificativ diferite față de valorile prezentate.
64 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
3.1. Scheletul iepurilor reprezintă 7-8% din masa corporală; ca
urmare, manipularea acestora se va face cu grijă, pentru a evita
fracturile membrelor posterioare și ale spatelui.
3.2. Aparatul digestiv al iepurilor și cobailor are particularități
specifice, după cum urmează:
- particularități ale aparatului digestiv la iepuri
Iepurii au o dentiție hipsodontă, cu 26-28 dinți, cu incisivii la care se
manifestă creștere continuă de 10-13 cm / an; nu au canini și, ca urmare,
apare diastema. Frecvența masticațiilor poate ajunge la 120 / minut.
Aparatul digestiv are glande salivare (parotidiene, submaxilare, sublinguale
și zigomatice), esofag cu trei tunici, cu musculatura striată extinsă pe toată
lungimea acestuia. Stomacul reprezintă aproximativ 15-17% din volumul
tubului digestiv și are un conținut foarte acid, cu pH 1,5-2,0, fiind tot timpul
plin; în situația în care s-ar impune vidarea, ar fi nevoie de o dietă totală de
8-9 zile. Intestinul subțire conține 7-12% din volumul tubului digestiv. La
capătul ileonului se află sacculus rotundus (lat. punga rotundă, formațiune
care conţine limfonoduli) care întâlnește colonul (ampula coli) și formează
complexul ileo-ceco-colic. Ileonul se află între corpul cecului și ramura
ascendentă a colonului sub forma literei C, atașat de pliurile peritoneale
(punga rotundă). Cecumul are lungimea de 40 cm și capacitatea de 10 ori
mai mare decât cea a stomacului – conținând 40% din conținutul intestinal
(figura 5.4.2). Colonul proximal și distal însumează 140 cm și conține 20-
40% din conținutul intestinal. La iepurii cu masa de 2,0 kg, masa
gastrointestinală cântărește 400-450 g, iar ficatul are 45-85g; în fiecare zi se
secretă 250 ml bilă. La majoritatea raselor de iepuri se înregistrează:
o rata metabolică zilnică 44-55 kcal/zi/ kg masă vie
o durata tranzitului digestiv 19 ore
o consum zilnic de apă 50-150ml/kg masă corporală
o consum zilnic de furaj 50 g/kg masă corporală
o cantitate zilnică de fecale 15-60 g/zi
Iepurii consumă câte 2-8 grame de furaj în 30 reprize, fiecare a câte 4-6
minute. Spre deosebire de rozătoare, care pot fi coprofage1, la iepuri se
manifestă cecotrofia1.
1
Coprofagia corespunde producerii unui singur tip de excremente, din care o parte se reingeră;
fenomenul este întâlnit la șobolani și porc.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 65
1
Cecotrofia este o particularitate a digestiei la iepuri, care constă în eliminarea a două tipuri de
excremente; tari (cu 58% SU) și moi (cu 27% SU), din care se reingerează doar crotele moi.
66 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
La majoritatea cobailor, animale ierbivore, se înregistrează:
o consum zilnic de apă 10ml/100 g masă corporală
o consum zilnic de furaj1 6-7 g/100 g masă corporală
o necesar vit. C 1,0-2,0 mg/100 g masă vie2.
3.3. Aparatul circulator la iepuri și cobai are următoarele
caracteristici și particularități:
- parametrii fiziologici ai aparatului circulator la iepuri:
La iepurii sănătoși, masa cardiacă este de 5,0 g, iar temperatura corporală
este de 38,5-40,0ºC; parametrii fiziologici ai aparatului circulator la iepure
sunt:
o ritmul cardiac 200 - 300 bătăi / min
o tensiunea art. sistolică/diastolică 90-130 / 80-90 mm Hg
o pO2 85-102 mm Hg
o pCO2 20-46 (torr)
o pCO3 12-24 (mmol/l)
o pH-ul sanguin arterial 7,2-7,4.
- parametrii fiziologici ai aparatului circulator la cobai:
La cobaii sănătoși, temperatura corporală este de 37,2-39,5ºC; parametrii
fiziologici ai aparatului circulator la cobai sunt:
o ritmul cardiac 230 - 320 bătăi / min
o tensiunea arterială sit/diastolică 74-94/47-58 mm Hg
o volumul de sânge 3,88-6,96 ml/100 g masă vie
o volumul de plasmă sangvină 3,0 ml/100 g masă corporală.
- parametrii hematologici normali la iepuri și cobai
Valorile acestor parametrii pot fi observate în tabelele 5.4.1-5.4.2; la iepuri,
volumul sanguin este de 4,5-7,0% din masa corporală (45-70 ml/kg masă
corporală, din care 28-50 ml plasmă), iar la cobai volumul sanguin este de
4,5-8,3 % sau din masă vie.
1
De regulă, furaj peletat cu 18-20% proteină și 9-18% celuloză; la acesta se adaugă furaje
fibroase pentru a asigura 35% celuloză în dietă (vezi PSUEX5.5, paragraf 4.4).
2
În cazul femelelor gestante se utilizează 3,0 mg vit. C/100 g masă vie. De cele mai multe ori se
administrează în apă distilată sau deionizată 200-400 mg vit. C / litru, pentru a diminua
oxidarea.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 67
3.4. Aparatul respirator. Plămânii sunt lobați, fiind alcătuiți din trei
lobi la plămânul stâng (lobul cranial cu o porțiune cranială și una
caudală și lobul caudal), și patru lobi la plămânul drept (cranial,
mijlociu, caudal și accesoriu).
1
Raportul BUN (blood uree nitrogen)/creatinină normal este 10-20/1; un raport mai mare de
20:1 sugerează boli pre-renale, iar raportul mai mic de 10:1 sugerează prezența bolii renale.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 69
1
Studiile privind dezvoltarea foliculară și nivelurile de estrogen indică un ciclu de 14-16 zile, cu
12-14 zile perioadă receptivă (niveluri ridicate ale estrogenului), urmată de 1-2 zile perioadă de
refuz (nivel scăzut de estrogen).
2
De regulă, din considerente legate de organizarea activităţilor pe durata zilelor lucrătoare,
femelele sunt montate în ziua a 10-11-a post-parturiție, iar puii se înțarcă la 34-38 zile, pentru
obținerea unor intervale între parturiții de 6 săptămâni (30-31 zile gestația + 10-11 zile pentru
montă = 42 zile).
MANUAL DE BUNE PRACTICI 73
- gestația la iepuroaică
La iepuroaice gestația durează 30-32 zile, fetușii putând fi palpați
transabdominal începând cu ziua a 12 - 14-a după montă. Prin ultrasunete,
gestația se poate confirma de la 7-8 zile.
- cuibul de fătare și parturiția
Iepuroaicele își construiesc cuibul de fătare în cutia special destinată,
amplasată în cușcă, cu o săptămână înainte de data probabilă a fătării.
Cuibul se va construi din așternut și va fi căptușit cu păr propriu.
Iepuroaicele fată un număr de 8 (4-10) pui într-un interval de 30 minute.
Imediat după fătare, iepuroaica taie cordonul ombilical și consumă
învelitorile fetale. Femelele redevin receptive pentru masculi și dacă, se
îndepărtează puii, această receptivitate se manifestă timp de 35 zile.
- lactația și înțărcarea
Alăptarea are loc dimineața și, de regulă, durează 3-5 minute, iepuroaica
având patru perechi de mamele. Înțărcarea puilor de iepuri poate avea loc la
28, 35 sau 42 zile; în cazul reproducţiei semiintensive se obțin 55-65
pui/femelă și an, iar în cazul reproducţiei extensive de la fiecare iepuroaică
se obțin 30-35 pui/an.
4.2. În tehnologia reproducerii la cobai se au în vedere următoarele
aspecte distinctive:
- parametrii biologici și fiziologici la cobai:
o vârsta pubertății (♂♂ / ♀♀) 3-4/1-3 luni
o vârsta/masa primei monte 3-9 luni/450-700 g
o prolificitate 3-4 pui, > la femelele tinere
o durata ciclului estral 16 (13-19) zile, poliestică
o durata gestației 63 (59-72) zile
o durata utilizării la reproducție 27-30 luni.
Din punct de vedere fiziologic, scroafele prezintă semne distincte de
proestrus și estrus. În timpul proestrului, scroafele devin mai active,
devenind interesate de masculi, aplecând trenul posterior și producând un
sunet gutural distinct. Estrul durează 6-11 ore, iar în timpul acestuia scroafa
manifestă lordoză și tumefacția vulvițelor. De regulă, 60-80% dintre montele
efectuate pe durata nopții sunt urmate de gestații.
74 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
- sistemul de montă și monta la cobai
La cobai, copularea este confirmată de prezența unui dop vaginal format din
materia ejaculată. Dependent de proiect, sistemul de montă poate utiliza:
o cupluri monogame (un mascul și o femelă); produce cel mai mare
număr de pui, dar solicită mai mult spaţiu și mai multe animale.
o poligamie, prin monte în harem (un mascul și 4-5 femele). În cazul
haremului, pentru evitarea luptelor dintre masculi, se recomandă
câte un mascul în fiecare cușcă; în acest caz, pentru fiecare femelă
din harem se asigură 0,12 m2.
- sistemul de montă și monta la cobai
Gestionarea grupurilor de animale care alcătuiesc haremurile de cobai se
poate face prin mai multe metode: astfel, haremurile pot fi:
o de tip static, presupunând colonii care sunt menținute împreună pe
toata durata vieții productive, fapt care avantajează reluarea
activității postpartum, obţinerea a 5,0 parturiții/an și creșterea
împreună a nou-născuților.
o de tip dinamic, prin extragerea femelelor aflate în gestaţie avansată
în vederea fătării. După parturiţie scroafele se întorc în harem, în
vederea reluării ciclurilor reproductive; în acest caz se obține o
medie de 3,5 parturiții/femelă și an.
o parturiție și creștere în grup - în acest caz, femelele aflate în
gestație avansată sunt cazate în grupuri armonioase până la
înţărcarea puilor, după care femelele revin în boxa haremului.
- gestația la scroafa cobaiului
La cobăiță, fetușii pot fi palpați transabdominal începând cu ziua a 15-a de
gestație, când se pot simți mărgele cu diametru de 5 mm; din ziua a 25-a
dimensiunea ajunge la 10-15 mm, iar din a 35-a zi - la aproximativ 25 mm în
diametru. Regiunile individuale ale fetușilor pot fi palpate după a 35-a zi a
gestației. Principala cauză a pierderilor de nou născuți sunt toxemiile de
gestație care apar la scroafele primipare, la cele obeze și în gestația târzie.
- parturiția, lactația și înțărcarea puilor
Femele de cobai nu își fac cuiburi de fătare; de regulă, acestea expulzează 2-
5 pui la intervale de 3-7 minute. Femelele permit îngrijirea pasivă, nou-
născuții orfani sau de la femele fără lapte pot fi alăptați de către alte femele
din cuib.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 75
Direcţii prioritare:
• Utilizarea iepurilor și a cobailor în procedurile proiectelor
de cercetare trebuie să aibă în vedere caracterul ușor
stresabil al acestor specii.
• Trăsăturile fiziologice și caracteristicile anatomice ale
iepurilor și cobailor permit realizarea unor modele
aplicabile și valoroase pentru medicina experimentală.
Infrastructuri și facilități pentru întreținerea
rozătoarelor și iepurilor
Obiectiv:
Prezentarea infrastructurii din perspectiva cerințelor specifice
prevăzute în Recomandarea Comisiei Europene nr. 526 din 2007
privind orientările pentru adăpostirea și îngrijirea animalelor
folosite în scopuri experimentale și în alte scopuri științifice.
PSUEX 5.5
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
- șobolanii
Șobolanul de laborator derivă din șobolanul cenușiu sălbatic (Rattus
norvegicus) şi este un animal social. Șobolanii evită spațiile deschise şi îşi
marchează teritoriul cu urină. Mirosul şi auzul sunt foarte dezvoltate, iar
șobolanii sunt deosebit de sensibili la ultrasunete. Vederea la lumina zilei
este redusă, dar vederea la lumină slabă este eficientă, îndeosebi la unele
linii pigmentate. Șobolanii tineri au un comportament pronunțat de explorare
şi adesea se angajează în jocuri sociale (vezi PSUEX5.3).
- cobaii
Cobaii (Cavia porcellus) sunt rozătoare sociale, cărora le place să alerge,
care nu sapă vizuini, dar trăiesc în spații acoperite și pot utiliza vizuinile
construite de către alte animale. Cobaii tind să rămână nemișcați atunci
când aud sunete neașteptate şi se pot panica atunci când survin mișcări
bruște neașteptate. Cobaii sunt extrem de sensibili la relotizări, mutări şi,
drept consecinţă, pot rămâne nemișcați pentru perioade îndelungate de timp
(vezi PSUEX5.4).
- iepurii
Iepurele (Oryctolagus cuniculus) este o specie în mod natural gregară.
Iepurilor trebuie să li se asigure spaţiu adecvat şi un mediu de viaţă
îmbogățit - lipsa acestora putând duce la pierderea activităţii locomotorii
normale şi la anomalii scheletice (vezi PSUEX5.4).
Facilitățile unităților experimentale sunt adecvate cerințelor și
particularităților biologice și comportamentale ale tuturor speciilor de
animale adăpostite.
1
IVC = cuști cu ventilație individuală, acronim de la engl. Individually Ventilated Cages.
80 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
2.3. Umiditatea
Umiditatea relativă din spațiile de întreținere a rozătoarelor este cuprinsă în
intervalul 45÷65%; în cazul iepurilor, aceasta nu depășește 45%, iar la
șobolani nu scade sub 50%. Temperaturile și umiditățile relative din
camerele destinate întreținerii animalelor sunt monitorizate și înregistrate
din jumătate în jumătate de oră, prin intermediul unor stații de măsurare a
parametrilor de microclimat și de către operatorii infrastructurii.
2.4. Iluminatul
Considerând posibilitățile unității, se pot descrie următoarele aspecte
practice privitoare la programul și regimul de lumină:
- programul de lumină
În cazul șoarecilor și șobolanilor, iluminatul este mixt: natural și artificial;
practic, se asigură o sursă de lumină naturală ca îmbogățire a mediului de
viaţă, se asigură o alternanță lumină/întuneric de 12-14/12-10 ore. În cazul
în care lumina naturală nu permite obţinerea unui ciclu lumină-întuneric
corespunzător procedurii sau categoriei de animale, se pot crea programe de
lumină adecvate necesităților biologice ale animalelor1. În cazul cobailor și
iepurilor, lumina asigurată este exclusiv artificială.
- intensitatea luminii
În camerele de creștere, intensitatea luminoasă este de 325-400 lm/m2, la
distanța de 1,0 m față de nivelul pardoselii. Intensitatea luminii din interiorul
cuștilor de întreținere a animalelor poate fi scăzută până la 130 lucși.
Rastelurile cuștilor permit montarea unor paravane sau delimitarea unor
zone mai întunecate, prin care se evită supraexpunerea animalelor la lumină
puternică, reducând riscul degenerării retinei animalelor albinoase.
- utilizarea unor culori din spectrul vizibil
Dacă situația o impune, infrastructura permite utilizarea unor filtre pentru
obținerea luminii de culoare roșie (la lungimi de undă de 610-780 nm), la
frecvențe nedetectabile de către rozătoare; acest aspect poate fi util pe
durata nopții și permite supravegherea activității rozătoarelor.2
1
La linia F344, pe durata creşterii și reproducerii, durata luminii nu trebuie să depășească 13 ½
ore.
2Șobolanii au vederea discromatică, percepând mai greu culoarea roșu. Culoarea verde și
lungimile de undă din domeniul ultravioletelor sunt percepute mai bine (vezi PSUEX5.3).
MANUAL DE BUNE PRACTICI 81
1
Prin POUEX02 se abordează aspectele privind siguranţa și sănătatea în muncă.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 83
- carantina
Carantina este perioada de izolare a unui animal nou introdus în unitate, în
cursul căreia acesta este separat într-un spațiu special, în vederea observării
și stabilirii stării sale de sănătate, cu scopul evitării introducerii de boli
manifestate clinic. Obiectivele carantinei şi izolărilor sunt următoarele:
i). să protejeze celelalte animale din unitate;
ii). să protejeze personalul împotriva zoonozelor;
iii). să încurajeze bunele practici, în paralel cu perioada de aclimatizare.
În funcţie de circumstanțe, întinderea acestor perioade poate varia de la
minimum 2-3 zile la câteva săptămâni1; durata carantinei este stabilită de
către medicul veterinar desemnat al unității, în concordanță cu istoricul
sănătății animalelor de la instituția sursă, instituția beneficiară,
disponibilitatea spațiului și obiectivele cercetării. Carantina este imperios
efectuată atunci când nu se cunoaște starea de sănătate a animalului sau
animalelor în cauză.
- acomodarea și aclimatizarea
Animalele, chiar dacă par sănătoase, trebuie să beneficieze de o perioadă de
acomodare înainte de a fi utilizate în procedurile proiectelor de cercetare.
Acomodarea2 permite animalelor redobândirea homeostaziei afectată de pe
urma stresului de transport şi obișnuirea cu noul mediu şi cu practicile de
creştere şi îngrijire. Durata acomodării depinde de durata transportului, de
semne ale manifestării distresului, de vârsta şi de procedurile la care
animalele vor fi supuse. În cazul transportului prelungit sau la schimbarea
fusurilor orare, perioada de acomodare se prelungește pentru aclimatizarea
animalelor cu noile condiții de viață și ritmul circadian.
- izolarea
Perioada de izolare are drept scop reducerea riscului de infectare a altor
animale sau a oamenilor. Din punct de vedere practic, orice animal suspect
de a fi bolnav sau care prezintă anumite riscuri pentru unitățile
experimentale este extras și adăpostit fie în încăperea destinată carantinei,
fie într-o cușcă izolată.
1
Spre exemplu, la iepuri carantina durează minimum două săptămâni în cazul suspiciunii de
mixomatoză, 4-6 săptămâni în cazul suspiciunii de infecție virală cu ARN sau patru săptămâni în
cazul suspiciunii de infecție cu virusul bolii hemoragice.
2
Acomodarea presupune adaptarea unui organism sau a unui organ la noi condiții fiziologice și
de mediu.
84 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
1
Din punct de vedere practic, la cele 90 cuști (3 rasteluri x 30 cuști) amplasate în rasteluri se
mai pot adăuga încă 40 de cuști, din care jumătate rămân de rezervă, iar cealaltă jumătate se
află în stația de spălare sau la sterilizare.
2
Și în acest caz, la cele 60 cuști (3 rasteluri x 20 cuști) amplasate în rasteluri se mai pot adăuga
încă 30 de cuști, care rămân de rezervă în magazia curată.
90 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
1
Rațiile cu ingrediente naturale nu pot fi utilizate în studii asupra micronutrienților, în studiile
toxicologice sau în studiile care impun utilizarea antigenilor în hrană. În aceste cazuri și atunci
când se cuantifică concentrațiile nutriențior sunt utilizate rațiile cu ingrediente purificate.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 97
1
Șoarecii adulți consumă 4-5 g furaj peletat / zi; există linii care pot consuma zilnic 8 g furaj /
zi. Liniile mari ale șobolanilor consumă 15-30 g furaj/zi, iar cele mai hipometrice 12-15 g.
98 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
- rații pentru reproducători
Rațiile destinate reproducătorilor sunt rații mai digestibile (minimum 80%
digestibilitate), cu o densitate energetică mai mare: 3300 ± 100 kcal/kg
energie metabolizabilă, iar caloriile care provin: minimum 26 % din
proteine, minimum 16% din grăsimi și maximum 58% din carbohidrați. Din
punct de vedere al calităţii, rația are: proteină brută - minimum 23%,
grăsime brută - minimum 6,5%, celuloză brută - maximum 4%, cenușă brută
- maximum 8% și minerale până la 2,5%.
- rații pentru cobai
Cobaii consumă 35-70 grame peleți / zi; dimensiunile sunt de minimum 4 mm
diametru și 10 mm lungime. Rațiile destinate reproducătorilor, femelelor în
lactaţie, creșterii și întreținerii sunt rații cu digestibilitate de până în 70% și
cu o densitate energetică de 2480 ± 50 kcal/kg energie metabolizabilă și
calorii care provin din proteine (minimum 26%), grăsimi (minimum 13%) și
carbohidrați (maximum 61%). Din punct de vedere al calităţii, rația trebuie
să aibă proteină brută minimum 18%, grăsime brută minimum 4%, celuloză
brută maximum 16%, cenușă brută maximum 9% și umiditate cel mult 12%
și vitamina C (50 mg acid ascorbic / g furaj).
La iepuri hrănirea este de tip ad libitum. De regulă, iepurii consumă
zilnic 120-300 g furaj peletat, cu dimensiuni recomandate de 4 mm
diametru x 10 mm lungime, administrat la 2-3 zile.
Rațiile destinate reproducătorilor, femelelor în lactaţie, creșterii și
întreținerii sunt rații cu digestibilitate de până în 65% și cu o densitate
energetică de 1980 ± 50 kcal/kg energie metabolizabilă și calorii care provin
din proteine (minimum 23%), grăsimi (minimum 10%) și carbohidrați
(maximum 67%). Din punct de vedere al calităţii, rația trebuie să aibă
proteină brută minimum 14%, grăsime brută minimum 1,5%, celuloză brută
21÷25%, cenușă brută maximum 9% și umiditate cel mult 12%. Dintre
minerale, calciu - 0,75÷1,25%, fosfor cel puțin 0,5% și sare - 0,25÷0,75%.
4.4.2. Adăparea animalelor din cadrul infrastructurii se face ad
libitum: din punct de vedere practic, se consideră următoarele:
- recipientele pentru apă
Pentru administrarea apei în cuștile și țarcurile destinate rozătoarelor și
iepurilor se utilizează flacoane din policarbonat transparent, cu capacități de
la 280 la 1100 ml și cu gradații de la 150 până la 1000 ml.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 99
1
În primele 12 zile, cantitatea de amoniac este nesemnificativă; după această perioadă,
cantitatea de amoniac începe să crească până la 1 ppm. În cazul în care cantitatea de aşternut
administrat este de doar 40 g, respectiv la volumul de 250 ml, creșterea concentrației
amoniacului este de 4 ppm.7
2
De exemplu, talașul provenit de la cedru roșu (Juniperus virginiana), pin (Pinus Ponderosa),
pin alb (Pinus strobus), pin silvestru (Pinus silvestris) și brad Douglas (Pseudotsuga sp.) poate
cauza modificări ale enzimelor hepatice implicate în metabolizarea medicamentelor.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 101
Direcţii prioritare:
• Asigurarea spațiului și incintelor necesare întreținerii
animalelor de laborator în unităţi autorizate sanitar
veterinar este o cerință legală.
• Echipamentele infrastructurii sunt special destinate
utilizării animalelor în proceduri.
• Controlul factorilor de microclimat este o obligație, nu o
opțiune!
Biologia și întreținerea câinilor și pisicilor
Obiectiv:
Prezentarea infrastructurii din perspectiva cerințelor specifice
privind întreținerea carnasierelor prevăzute în Recomandarea
2007/526 a Comisiei Europene privind orientările pentru
adăpostirea și îngrijirea animalelor folosite în scopuri
experimentale și în alte scopuri științifice
PSUEX 5.6
Domeniu de aplicare:
1
Materialul are ca scop prezentarea infrastructurii de adăpostire și îngrijire a animalelor de
companie din cadrul Unităților Experimentale și a facilităților acestora din perspectiva
Directivei EU nr. 63 din 2010 și a Recomandării CE nr. 526 din 2007.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 103
1
Cele mai longevive rase sunt Poodelul, Spitzul japonez, Border terrierul și Spanielul tibetan,
care au o longevitate de 14-15 ani. Cea mai puțin longevivă rasă este Dogul de Bordeaux, care
are longevitate biologică medie de doar 5,2 ani.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 105
1
Raportul BUN (acronim de la engl. Blood Uree Nitrogen)/creatinină normal este de 4-27 la
câine și 4-33 la pisică; un raport mai mare sugerează boli pre-renale, iar raportul mai mic de
atât sugerează boala renală. La interpretarea raportului se va avea în vedere relaționarea
acestuia cu valorile normale sau anormale ale creatininei și ureei.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 109
- la specia felină
La pisici, pubertatea apare 6-9 luni. Ciclul estral are: 1-2 zile proestrus, 4-6
zile până la 9 zile estru (mai mult dacă nu este prezent masculul), cu ovulație
la 25-30 ore după montă. După estru, ciclul estral al pisicilor poate lua două
direcţii: i) dacă pisica ovulează, apare diestrus (cu pseudogestație de 40 zile
sau cu gestație de 60 de zile) și anestrus de 3-4 luni sau ii) dacă pisica nu
ovulează, ciclul se reia din faza de proestrus care, de această dată, durează
8-9 zile. Monta poate fi multiplă (6-7 ori) pe durata a 4 zile. Placenta este
endoteliocorial-regională, iar gestația durează 63-64 zile, fetușii putând fi
palpați transabdominal după 17-25 zile. Pisoii se înțarcă la 7-9 săptămâni.
4.2.Temperatura și umiditatea
Cu toate că pisicile și câinii se adaptează ușor la diverse niveluri de
temperatură, sistemul de ventilație și încălzire asigură temperaturi cuprinse
între 15 şi 21oC. Pentru a susține eforturile de termogeneză în cazul cățeilor
și pisoilor în primele zece zile de viaţă, se asigură încălzire locală
suplimentară în boxa de fătare, prin intermediul unor instalații de încălzire
locală (panouri sau dispozitive radiante). Umiditatea relativă este
controlată, de asemenea, prin intermediul sistemului de ventilație; acesta
permite stabilizarea umidităţii la valori de 45-65%, indiferent de umiditatea
exterioară. Practic, cu toate că pisicile și câinii sunt animale care pot fi
expuse la fluctuații mari ale temperaturii și umidităţii fără a fi afectați,
echipamentele infrastructurii permit stabilirea unor valori situate în limitele
confortului biologic.
4.3. Iluminatul
Unitatea experimentală asigură iluminatul natural în condiţiile ritmului
circadian; pe durata zilei se asigură lumină prin ferestre (cca 19,5 m2) și
prin patru iluminatoare zenitale (care totalizează o suprafață vitrată de cca.
7,5 m2), în fiecare incintă, asigurându-se un indice de iluminat de ¼. Durata
luminii naturale este de 10-12 ore pe zi. În anumite proceduri, pe durata
nopții, în ambele infrastructuri și în tunelurile de comunicare ale pisicilor se
poate păstra un anumit grad de vizibilitate, asigurându-se un iluminat de
noapte cu un nivel scăzut (5-10 lucși), care ține seama de reacția de alarmă
a câinilor și pisicilor.
4.4. Zgomotul
Unitatea gestionează problema zgomotului atât constructiv, cât și prin
controlul surselor de zgomot:
- controlul surselor de zgomote
Zgomotul de fond, generat de funcţionarea continuă a instalației de ventilație
și încălzire, este cuprins în intervalul 55-75 dB; la nivelul animalelor, acesta
se reduce prin faptul că unitățile principale ale CTA-urilor sunt poziționate
în spații în care nu se află animale (camera de intervenții, în cazul câinilor și
camera de recepție, în cazul pisicilor), astfel încât nivelul zgomotelor
percepute de către animale să rămână unul redus.
114 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
5. Sănătatea
În unitatea experimentală câini-pisici animalele sunt întreţinute în
boxe, țarcuri și, doar în anumite circumstanțe, în cuști. Pentru
păstrarea stării de sănătate în cadrul infrastructurii se realizează:
- inspecția și toaletarea animalelor
Animalele sunt supuse inspecției periodice de către medicul veterinar; acesta
efectuează examenul clinic și periodic, recoltează probe pentru examene
paraclinice de la toate animalele nou introduse sau transferate. Inspecţia
animalelor se realizează zilnic, conform procedurii, în vederea identificării
timpurii a semnelor de boală sau a unor posibile tulburări comportamentale.
116 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
În unele situații, introducerea animalelor în proceduri este precedată de
igienizarea și toaletarea acestora (figura 5.6.5) și a spațiului de intervenție
situat în proximitatea boxelor.
- programul de monitorizare a sănătății animalelor și personalului
Dat fiind că manipularea animalelor prezintă un risc potenţial de
contaminare a altor animale şi a personalului, se acordă o atenție specială
respectării procedurii de igienă a animalelor, verificării carnetelor de
sănătate, monitorizării sănătății animalelor (PSUEX4.3) şi supravegherii stării
de sănătate a personalului implicat în activitatea de cercetare .
Carantina, aclimatizarea şi izolarea. În funcţie de circumstanțe, la
introducerea animalelor în unitatea experimentală se recurge la
carantină, aclimatizare și/sau izolare.
- carantina
În unitățile experimentale se introduc doar animale sănătoase și cu carnet de
sănătate vizat la zi de către medicul veterinar curant. Carantina este
imperios necesară atunci când nu se cunoaște starea de sănătate a
animalelor care vor fi utilizate în proceduri.
- acomodarea și aclimatizarea
Animalele, chiar dacă sunt clinic sănătoase, beneficiază de o perioadă de
acomodare și aclimatizare înainte de a fi utilizate în proceduri. Durata
acomodării și aclimatizării depinde de durata transportului, vârsta
animalului, nivelul stresului la care sunt expuse animalele prin schimbarea
mediului social și tipul procedurii în care vor fi utilizate.
- izolarea
Perioada de izolare are drept scop reducerea riscului infecțios; orice animal
suspectat că este bolnav sau că prezintă anumite semne clinice este extras și
adăpostit într-o boxă sau cușcă destinată izolării.
1
Standardele de spaţiu detaliate în tabel se bazează pe valorile necesare pentru câinii de rasă
Beagle, dar ar trebui precizat că rasele de talie mare, precum Saint Bernard sau ogarul
irlandez, au nevoie de spații cu dimensiuni mult mai mari. Conform recomandărilor legislative,
pentru alte rase decât Beagle, standardele de spaţiu ar trebui convenite în consultare cu
personalul veterinar şi cu autoritatea responsabilă. O femelă care alăptează până la 6-9
săptămâni beneficiază de același spaţiu ca o femelă singură cu o greutate echivalentă; incintele
destinate fătării prezintă o platformă înălțată, care permite îndepărtarea față de pui.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 123
Câinii adăpostiți în pereche sau în grup pot fi cazați fiecare în jumătate din
spațiul total disponibil (2,0 m2 pentru un câine sub 20 kg și 4,0 m2 pentru un
câine peste 20 kg) atunci când fac obiectul unor proceduri și izolarea este
esențială scopului științific. Perioada în care un câine este cazat într-un
astfel de spaţiu limitat este redusă la minimum şi nu depășește în nici un caz
3½-4 ore. În aceste condiții, în boxele infrastructurii de cercetare se pot caza
individual opt câini adulți, cu masă corporală de 20 kg sau maximum 16
câini, cu o masă corporală de cel mult 20 kg, dacă sunt cazați în grupuri de
câte doi câini. Dacă procedura se realizează pe câini înţărcaţi cu o masă
corporală mai mică de 5,0 kg, unitatea poate caza 12 câini/boxă, respectiv
96 câini în infrastructură. Pentru animale din categoriile 5-10 kg, 10-15 kg și
15-20 kg unitatea poate adăposti în boxe interioare: 48, 40, respectiv 24
câini în colectivități de 6, 5, respectiv 3 animale.
- la bateriile de cuști pentru pisici și câini
În unele boxe destinate câinilor și pisicilor se află cuști din oțel inoxidabil
care sunt utilizate îndeosebi pentru îmbogăţirea mediului cu platforme de
odihnă, pentru observație, refugiu și intimitate (figura 5.6.9). În unele situații
bine justificate și în general doar ca urmare a unor motive veterinare
(izolare temporară, agresivitate exagerată, până la efectuarea examenului
medical etc), se recurge la izolarea animalelor. Bateriile de cuști din inox nu
sunt și nu pot fi utilizate pentru adăpostirea animalelor în proceduri, dar pot
fi utilizate pe durata activităților de cercetare; caracteristicile constructive
ale acestor baterii de cuști sunt:
o sunt confecţionate din oțel inoxidabil și, pentru pisici, grupează câte
șase cuști, dispuse pe trei niveluri, pe un cadru mobil cu
dimensiunile de 1000 x 640 x 1590 mm
o câinii au două tipuri de baterii, cu dimensiunile: 1490 x 640 x 1580
mm, respectiv 1190 x 640 x 280 cm - fiecare tip de baterie are câte
patru cuști, dispuse pe două etaje (figura 5.6.9)
o la pisici, dimensiunile cuștii sunt 500 x 630 x 500 mm, rezultând o
suprafaţă a pardoselii de 0,32 m2 și un volum de 0,16 m3
o în cazul câinilor, dimensiunile pardoselii pline sunt de 590 x 640
mm, iar a celei cu găuri 745 x 640 mm, rezultând o suprafață de
0,38 m2, respectiv de 0,48 cm2
o toate pardoselile cuștilor sunt acoperite cu material textil pe mai
mult de 70% din suprafață; dacă pardoseala este prevăzută cu
găuri, sub aceasta se află o tavă pentru colectarea eventualelor
resturi rezultate
124 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
6.3.2. Pardoseala
În unitatea experimentală destinată animalelor de companie, pardoselile
boxelor sunt pardoseli calde, lavabile, dezinfectabile și rezistente la uzură,
fiind executate pe o șapă armată, dispusă pe un strat termoizolat. Stratul de
uzură este fie protejat prin vopsea rezistentă la trafic, fie acoperit cu covoare
din policlorură de vinil (PVC, de tip tarkett®).
6.4. Hrănirea
Sub aspectul accesului, conținutului, formei de prezentare și
modalității de păstrare a hranei care urmează a fi administrată
carnivorelor se pot menționa următoarele:
- ambalarea, transportul şi depozitarea hranei sunt realizate în așa
fel încât să evite contaminarea, deteriorarea sau distrugerea;
- este depozitată în magazia pentru furaje, cameră răcoroasă,
întunecoasă, uscată şi lipsită de insecte parazite și rozătoare - hrana
perisabilă este păstrată în camere reci și frigidere;
MANUAL DE BUNE PRACTICI 127
6.5. Adăparea
Animalele au acces permanent la sursa de apă potabilă. Dat fiind că apa
poate fi un vehicul pentru microorganisme, aceasta este periodic analizată
pentru ca riscurile de contaminare să fie minime. Sistemele de adăpare
utilizate permit furnizarea cantității adecvate de apă, pe care o mențin la
calitate corespunzătoare. Fiecare incintă este prevăzută cu un număr de
adăpătoare/boluri concordant numărului de animale cazate. Atunci când se
folosesc sisteme automate de adăpare, acestea sunt controlate, întreţinute şi
curățate periodic, pentru a se evita accidentele, precum colmatările sau
scurgerile accidentale. În cazul în care sunt utilizate cuşti cu fund solid se
acordă o atenție deosebită controlului riscului de inundare și băltire.
Adăpătoarele, bolurile și echipamentele destinate adăpării sunt curățate
periodic și spălate; dacă situația o impune, acestea pot fi sterilizate.
6.8. Manipularea
Proiectele de cercetare care utilizează animale în proceduri presupun
abordarea, contenția și manipularea corectă, dar aceste activități sunt
limitate la minimum cu putință. Pentru a facilita activitatea personalului
și pentru a se reduce stresul animalelor se promovează:
- la câini
Se încurajează contactul social, interacţiunea cu personalul, atenția,
îngrijirea și cooperarea pe durata efectuării procedurilor. Aceste aspecte
sunt benefice pentru animale, pentru personalul unităților experimentale și
pentru demersul științific.
- la pisici
În cazul pisicilor, contactul apropiat cu persoanele care le îngrijesc este
deosebit de important, în special dacă acestea sunt adăpostite individual.
Direcţii prioritare:
• Carnivorele pot constitui modele experimentale animale
aplicabile nevoilor omului.
• Întreţinerea carnivorelor trebuie făcută în acord cu
particularitățile fiziologice și comportamentale ale
animalelor.
• Identificarea și înregistrarea câinilor trebuie să respecte
particularitățile legislației naționale și internaționale.
1
Conform OUG 55/2002 cu modificările şi completările ulterioare, câinii din categoria I, cum
sunt câinii de luptă şi de atac, asimilați prin caracterele morfologice cu câini de tipul Pit Bull,
Boerbull, Bandog şi metişii lor şi cei din categoria a II-a, cum sunt câinii din rasele American
Staffordshire Terrier, Tosa, Rottweiller, Dog Argentinian, Mastino Napolitano, Fila Brazileiro,
Mastiff, Ciobănesc Caucazian, Cane Corso şi metişii lor trebuie înregistrați la Poliție.
Biologia și întreținerea porcilor în unitățile
experimentale
Obiectiv:
Prezentarea infrastructurii din perspectiva cerințelor specifice
privind întreținerea suinelor prevăzute în Recomandarea
2007/526 a Comisiei Europene privind orientările pentru
adăpostirea și îngrijirea animalelor de fermă folosite în proceduri
și în alte scopuri științifice.
PSUEX 5.7
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
Materialul are ca scop prezentarea infrastructurii destinate adăpostirii și îngrijirii porcilor din
cadrul Unităților Experimentale și a facilităților acestora din perspectiva Directivei EU nr. 63
din 2010 și a Recomandării CE nr. 526 din 2007.
2
Sunt considerate rase miniaturale, mini- sau micro- rasele a căror masă corporală la vârsta
adultă nu depășește, în mod normal, valoarea de 60 kg.
132 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
2. Particularități genetice ale porcilor utilizați în cercetare
Utilizarea porcilor în cercetarea biomedicală se face încă din 1940.
Odată cu trecerea timpului, s-au utilizat populații native sau populaţii și
rase de mini-porci destinați cercetării biomedicale; unele dintre rasele
inițiale au dispărut, altele sunt încă utilizate în cercetare. Astfel:
- rase de mini-porci
1
Capitolele referitoare la particularitățile anatomice și fiziologice fac referire la rasele
eumetrice și la această rasă de mini-porci.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 133
Măsurată la nivelul animalelor, viteza curenţilor de aer de 0,17 m/s (în zona
de odihnă) până la 1,15 m/s (în zona de furajare, adăpare sau în zona
murdară) este considerată ca fiind confortabilă pentru animale.
- în adăposturile convenționale
În adăposturile convenționale se permit 10-18 schimburi de aer/oră (față de
cele 12-15 schimburi de aer / oră recomandate); viteza curenților de aer este
de 0,2-0,3 m/s la adulți și 0,1 m/s la tineret (figura 5.7.4, stânga)..
4.2.Temperatura
Dependent de natura cercetării științifice, porcii pot fi întreţinuţi în
mediu cu temperatură uniformă și controlată sau, în mod alternativ, în
structuri versatile, cu facilități în care se pot compensa temperatura
ambiantă mai scăzută, prin asigurarea așternutului uscat, controlul
curenților de aer şi suplimentarea hranei.
142 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
1
A neuromodulation in spinal cord injury (SCI) minipigs – proiect derulat împreună cu
Paracelsus Medizinische Privatuniversität Salzburg, Austria și Universitatea de Medicină și
Farmacie „Victor Babeș”, Timișoara.
2
Wisconsin University și Smitfield Academic Program, proiect de cercetare destinat studiului
factorilor de mediu din adăposturile neconvenționale - Hoop structure for wean to finish pigs -
a summer trial.
3
În anumite proceduri, animalele cu masa corporală redusă care nu beneficiază de aşternut sau
cu consum caloric limitat vor beneficia de temperaturi mai ridicate.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 143
Direcţii prioritare:
• Rasele de mini-porci se pot constitui în modele animale de
mare valoare în proiectele de cercetare care utilizează
animale în proceduri.
• Întreţinerea porcilor se poate face în unităţi convenționale
și neconvenționale; în ambele situații se asigură condiții
sporite de biosecuritate și biosiguranță.
• Acomodarea, manipularea și instruirea animalelor înainte
de începerea proiectelor de cercetare nu este o opțiune, ci
o necesitate.
• Identificarea și înregistrarea animalelor utilizate în
proceduri trebuie să respecte prevederile legislației
naționale și internaționale.
Biologia și întreținerea ecvinelor în unitățile
experimentale
Obiectiv:
Prezentarea infrastructurii din perspectiva cerințelor specifice
privind întreținerea cabalinelor, prevăzute în Recomandarea
2007/526 a Comisiei Europene1 privind orientările pentru
adăpostirea și îngrijirea animalelor de fermă folosite în proceduri
și în alte scopuri științifice
PSUEX 5.8
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
Materialul are ca scop prezentarea infrastructurii destinate adăpostirii și îngrijirii cabalinelor
din cadrul Unităților Experimentale și a facilităților acestora din perspectiva Directivei UE nr.
63 din 2010 și a Recomandării CE nr. 526 din 2007.
156 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
În mediul natural, comportamentul de hrănire se poate desfășura pe toată
durata zilei; cabalinele fiind selective în alegerea tipului de iarbă şi a părții
din plantă pe care o consumă. Ca urmare, păscutul, comportamentul
cotidian normal, se asociază și celui explorator: animalele pasc și se
deplasează în succesiuni frecvente, motiv pentru care pot parcurge distanțe
mari. Având în vedere particularitățile cabalinelor, unitățile experimentale
consideră comportamentul natural, nevoia de a paşte, nevoia de explorare și
mișcare, precum și comportamentul social (figura 5.8.1), asigurând boxe
interioare, culoare și spații largi pentru acces, padocuri înierbate și
suprafețe delimitate pentru a controla tendinţa de evadare.
Comparativ cu animalele de
laborator, cabalinele ar putea să nu
pară a fi modele potrivite pentru
cercetare; cabalinele sunt animale
mari, costisitoare, care solicită
condiții de adăpostire și hrănire
speciale. Totuși, de-a lungul timpului
ecvinele au oferit importante
rezultate în cercetare: au constituit
modele animale pentru cateterizarea
cardiacă (1861), au fost modelele pe
care s-a descoperit importanța
neuro-transmițătorului acetilcolină
(în 1914), sunt modele pentru studiul
infecţiilor virale (virusul herpetic
ecvin - EHV-1, HIV sau HPV),
prevenția difteriei (Corynebacterium
diphtheriae) ș.cl. Figura 5.8.1. Cuplul cal-
călăreț echipat pentru proba
Trebuie subliniat faptul că modelele de sărituri peste obstacole
animale construite pe cabaline
Sportiva Andreea Lupu și iapa Mary,
prezintă particularități deosebite: proprietatea Unităților experimentale
ecvinele au o masă impresionantă, cabaline, concurenți și câștigători ai probei
nu vomită și nu pot respira pe gură, obstacole, nivel E, pe durata competiției
având 30 grupe sangvine, din care ecvestre „Cupa Banatului - 28 mai 2016”.
șapte sunt recunoscute internaţional. Unităţi experimentale cabaline, 2016.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 157
- simțul văzului
Cabalinele au un câmp vizual de 350°; din acesta, 65° este un câmp cu
vedere binoculară și în restul de 285° vederea este monoculară. Se crede că
vederea este de tip dicromatic - cabalinele prezintă celule fotoreceptoare cu
sensibilitate la culorile albastru, galben și roșu (439 nm și 539 nm, fiindu-le
greu să distingă între culorile galben și verde - față de care se manifestă
sensibilitate slabă sau insensibilitate (vezi figura 5.8.2). Cu toate că
acuitatea vizuală pe durata nopții este mai mare decât la om, la trecerea de
la lumină la întuneric sau viceversa adaptarea ochilor cailor solicită timp
mai îndelungat.
- simțul auzului
Simţul auditiv al cailor este bine dezvoltat. Comparativ cu omul, caii pot
percepe sunete mai înalte, cu frecvență de până la 33,5 KHz și cu o
sensibilitate mai bună în intervalul 1-16 KHz. Pavilioanele auriculare ale
calului se mișcă și se rotesc cu până la 180о, fie simultan, fie independent.
Direcţia spre care sunt îndreptate urechile oferă indicii asupra originii sau
zonei din care vine sunetul și spre care este concentrată atenția calului.
- simțul mirosului
Mirosul cailor este mai bun decât al omului; armăsarii au un organ
vomeronasal (organul lui Jacobson) bine dezvoltat. Reflexul Flehman este o
dovadă a celor menționate; când se declanșează, armăsarul ridică capul
orizontal, își îndepărtează buzele înapoi și prezintă incisivii maxilari în
vederea concentrării mirosului feromonilor spre organul vomeronazal.
- simțul tactil
Sensibilitatea tactilă este diferită în diferite regiuni corporale. Spre exemplu,
greabănul, buzele și flancurile sunt regiunile cu cea mai mare sensibilitate.
Vibrizele din jurul nărilor și gurii ajută la obţinerea unor informații în timpul
pășunatului, iar cele din jurul ochilor la orientare în condiţii de întuneric și
vizibilitate scăzută; tunderea sau scurtarea vibrizelor nu este recomandată.
3.5.2. Lichidul cerebrospinal înconjoară și protejează creierul și
măduva spinării; la recoltarea și analiza lui se pot preciza:
- recoltare
Lichidul cerebrospinal este prelevat în mod obișnuit prin puncția articulației
atlanto-occipitale și din zona lombosacrală (figura 5.8.3), conform unor
instrucțiuni de lucru; pentru diagnosticul bolilor cerebrale se preferă
recoltarea din cisterna magna, datorită proximității sale cu creierul.
- caracteristicile lichidului cerebrospinal
Fluidul cerebrospinal trebuie să fie clar și transparent. În mod normal,
compoziția biochimică a acestuia prezintă următoarele caracteristici:
o densitate 1,004-1,008
o proteine totale 40-170 mg/dl
o albumine 24-51 mg/dl
o globuline 3,4-18,4 mg/dl
o creatinin kinază 0-8 UI/l
o lactat dehidrogenază 12-34 UI/l
o glucoză 30-70 mg/dl
o sodiu 140-150 mEq/l
o potasiu 2,5-3,5 mEq/l
o fosfor 0,5-1,5 mg/dl
o calciu 2,5-6,0 mg/dl
o magneziu 1,1-3,0 mg/dl
o pH 7,13-7,36.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 163
- parturiția
Fătarea este precedată de semne prodromale și comportamentale: cu câteva
zile înaintea fătării iapa devine neliniștită, se așează şi se ridică des,
musculatura crupei se relaxează, flancurile se adâncesc, coada devine mai
puţin rigidă, glanda mamară devine hipertrofiată ș.a. Fătarea propriu-zisă
durează cca. 20-40 min, fiind urmată de expulzarea învelitorilor fetale,
retenția placentară fiind relativ rară la iapă. Imediat după fătare, mânzul se
ridică și începe să sugă colostrul; la început consumă 3-4 litri pe zi, după
care ajunge la un consum de 8 -10 litri de lapte pe zi.
4.5. Zgomotul
Spațiile convenționale utilizabile pentru cazarea cailor sunt izolate fonic
adecvat, incinta având pereții perimetrali construiți din materiale
fonoizolante (geamuri de tip termopan) și elementele de închidere
perimetrală ale incintei sunt din panouri tip sandwich, dublate cu zid din
blocuri de zidărie și tencuieli. În spațiile neconvenționale, cu toate că
zgomotul de fond este inevitabil, acesta este redus la minimum cu putință, iar
zgomotele puternice și bruște sunt evitate.
4.6. Sistemele de alarmă
Spațiile destinate adăpostirii cabalinelor și coridoarele de acces spre și
dinspre acestea sunt permanent supuse observației, beneficiind de sisteme
video de supraveghere, înregistrare și stocare a datelor. Față de cele
menționate, infrastructura este prevăzută cu sisteme de detectare și alarmare
în caz de incendiu.
5. Sănătatea animalelor utilizate în proceduri este monitorizată
permanent, atât prin inspecția animalelor cât și prin observarea
comportamentului și indicatorilor bunăstării.
5.1. Menținerea stării de sănătate solicită o abordare generată de
particularitățile speciilor cazate și derivă din caracteristicile generate
de fluxul discontinuu al unității experimentale.
168 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
- la manejul acoperit
Manejul de formă semicilindrică, cu dimensiuni de 46,5x24,5x14,5 m (Lxlxh),
este acoperit cu o învelitoare din prelată. Pardoseala manejului are o
suprafață utilă de 1140 m2 și este construită dintr-un amestec de nisip cu
fibre textile, separate de stratul de drenaj printr-o membrană geotextilă.
Amestecul de materiale din care este confecționata suprafaţa utilă permite
gestionarea aspectelor privitoare la fermitate, amortizare, deformare, recul
și aderență. Suprafața utilă a manejului este delimitată perimetral de o
mantinelă cu pereți din lemn cu înălțimea de 1,35 m; pereții mantinelei sunt
construiți din lemn de esență moale și, pentru asigurarea protecției corpului
călărețului, au o oblicitate de 15о. Elementele de închidere perimetrală sunt
construite din același material ca și învelitoarea manejului; pentru a facilita
controlul circulației curenţilor de aer pereții laterali sunt amovibili.
- pentru structurile neconvenționale
În structura neconvențională pentru exploatarea rumegătoarelor (PSUEX5.9)
se pot organiza 10 boxe pentru cabaline; fiecare boxă poate avea o suprafaţă
de 5,9x3,6 m. Pe durata iernii boxele pot fi prevăzute dispozitive care emit
căldură radiantă (figura 5.8.8).
6.2. Hrănirea
Sub aspectul conținutului, formei de prezentare, modalității de
administrare și păstrare a furajelor destinate cabalinelor, se pot
menționa următoarele aspecte privind:
- normele de hrănire
Alimentația cabalinelor se efectuează conform normelor de hrănire și în
concordanță cu regimul exploatării sau utilizării acestora în proceduri. La
acestea se adaugă aspecte privind bunăstarea și sănătatea, evitându-se
factorii de risc asociabili colicilor şi pododermatitelor. La toate categoriile
de cabaline se evită schimbările bruște ale rației - prin tehnica furajării,
administrarea furajelor nou introduse are loc gradual.
- tehnologia furajării
Tehnologia furajării prevede hrănirea individuală. Furajul grosier este
administrat la nivelul solului, cu excepția fânului de lucernă care se
administrează într-o hrănitoare conică batantă, de tip grătar (vezi figura
5.8.7, dreapta). Pe durata nopții se asigură cantităţi suplimentare de furaj
grosier. Administrarea concentratelor (ovăz și suplimentele energo-vitamino-
mineralice) se face „la scafă” de trei ori pe zi, în cantităţi mici. Pentru
aceste furaje se utilizează hrănitorul din tablă galvanizată amplasat la o
înălțime de 117 cm, sub conul grilajului pentru fibroase. Dat fiind
comportamentul de hrănire al cabalinelor, unitatea experimentală cabaline
asigură atât suprafețe înierbate pentru păscut, cât și acces permanent la
furaj grosier - fân de graminee, fân de leguminoase și paie.
- conservarea și păstrarea furajelor
Păstrarea furajelor grosiere are loc în fânar, structură semicilindrică care
permite stocarea a 20-25 tone fân în baloți paralelipipedici (90x37x45cm) cu
masă de 14-16 kg.
174 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
Furajele concentrate (în special ovăzul și porumbul) și suplimentele
energetice și proteino-minerale sunt păstrate în lăzi din lemn și pe rastele în
magazia pentru furaje concentrate, incintă răcoroasă, prevăzută cu sistem de
ventilație și exhaustare a aerului (figura 5.8.10).
6.3. Adăparea
Unitățile experimentale cabaline asigură apă în permanență atât în incintele
închise, cât și în padocurile exterioare, prin intermediul unor adăpătoare
automate cu niplu și cupă. Adăpătoarele sunt protejate de jur împrejur de o
bară din oțel; înălțimea la care se asigură luciul apei este de 115 cm.
6.4. Aşternutul
Aşternutul contribuie la bunăstarea cabalinelor; unitatea experimentală
cabaline utilizează paiele de grâu sau ovăz, deoarece acestea sunt un
substrat pentru comportamentul de hrănire continuă și cel de odihnă. Dată
fiind particularitatea cabalinelor de a consuma furaje fibroase, pe durata
întreținerii se folosesc doar paie lungi, curate, necontaminate cu micotoxine.
Direcţii prioritare:
• Unitatea experimentală permite adăpostirea concomitentă a
opt ecvine.
• Exploatarea și utilizarea animalelor în proceduri se face cu
respectarea particularităților biologice și comportamentale
ale acestora.
• Identificarea și înregistrarea animalelor utilizate în
proceduri respectă particularitățile legislației naționale și
internaționale.
Biologia și întreținerea rumegătoarelor în unitățile
experimentale
Obiectiv:
Prezentarea infrastructurii din perspectiva cerințelor specifice
privind întreținerea rumegătoarelor prevăzute în Recomandarea
2007/526 a Comisiei Europene1 privind orientările pentru
adăpostirea și îngrijirea animalelor de fermă folosite în proceduri
și în alte scopuri științifice.
PSUEX 5.9
Domeniu de aplicare:
Procedura se aplică în cadrul Biobazei
1
Materialul are ca scop prezentarea infrastructurii destinate adăpostirii și îngrijirii
rumegătoarelor din cadrul Unităților Experimentale și a facilităților oferite de acestea din
perspectiva Directivei UE nr. 63 din 2010 și a Recomandării CE nr. 526 din 2007.
178 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
Fiind rumegătoare, bovinele petrec o mare parte a zilei căutând nutreţ,
această activitate fiind urmată de lungi perioade de odihnă și rumegat.
Bovinele sunt docile, curioase și se obișnuiesc rapid cu omul.
Ovinele (Ovis aries) sunt animale erbivore care suportă o gamă largă de
condiţii climatice. În condiţii naturale sau de fermă, ovinele sunt docile,
sociale, rămânând tot timpul aproape de ceilalți membri ai turmei, pe care îi
recunosc individual. Deși preferă coeziunea socială, există variații distincte
între rase; rasele de ovine de munte sunt mai solitare atunci când sunt lăsate
libere. Ovinele preferă să se deplaseze de la întuneric către lumină.
Caprinele (Capra hircus) sunt animale curioase, care interacţionează în
general bine cu oamenii și cu alte specii de animale. La fel ca ovinele,
caprinele trăiesc în grupuri sociale şi sunt afectate de izolarea socială.
Caprele au o abilitate remarcabilă de cățărat și preferă să mestece frunze
decât să pască iarbă. Preferă terenul uscat, nemlăștinos, căldura şi nu
tolerează umiditatea şi vântul; categoriile mai tinere sunt mai sensibile decât
cele adulte.
1
50-70% din ingestă este fermentată cu ajutorul microbilor, înainte de a fi expusă digestiei
sucurilor gastrice propriu-zise.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 181
Din stomac, conținutul gastric trece prin duoden și celelalte părți ale
intestinului subțire - jejun și ileon, fiind supus acțiunii sucurilor
intestinale, pancreatice și bilei ficatului. În intestinul gros, format din
cecum și colon, au loc fermentații, absorbția nutrienților și apei;
eliminarea materiilor fecale se realizează prin pasajul recto-anal.
Dependent de specie, particularitățile tractului digestiv sunt:
- la rumegătoare mari
Întregul tract digestiv al taurinelor are un volum de 350-360 l și o lungime
egală cu de 20 de ori lungimea corporală. Rumenul are cel mai mare volum,
reprezentând 80% din volumul stomacului, cu o capacitate de 115-160 l,
reticulum-ul are 9-10 l, omasum 15-18 l, iar abomasum 19-20 l. Intestinul
subțire are un volum de 60 l și o lungime de 45 m, cecumul 9,5 l și o lungime
de 0,9-1,0 m, iar intestinul gros are 10 m și un volum de 28-30 l.
- la rumegătoare mici
La ovine, volumul tractului digestiv este de 40-45 l, din care volumul
rumenului ocupă 53%, rețeaua 4,3%, omasul 5,3%, abomasul 7,7%
(stomacul având 66,6% din volumul întregului tub digestiv), intestinul subțire
20,5%, cecum 2,6%, iar intestinul gros 10,3%.
Principalii parametri care pot fi asociați fiziologiei digestiei sunt:
- la taurine
o consum furaje (SU) 1 2-2,7% din masa corporală
o consum de apă 6 l/100 kg masă corporală
o secreție salivă 110-180 l/zi
o durata totală a tranzitului 45-50 ore
o pH ruminal 6,6-6,8.
- la ovine
o ingestă 51,7 g SU/kg0,75masa corporală
o consum de apă 3,5-4,7 ml/g SU ingestă
o secreție salivă 6-16 l/zi
o durata totală a tranzitului 50-75 ore
o cantitate fecale 1-3 kg/zi
o pH ruminal 6,5-7,2.
1
Consumul de substanță uscată (SU) este influențat de mulți factori: rasă, calitatea furajului,
temperatura ambientală (±30%), stadiul lactației (±40-60%), gestație etc.
182 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
- la caprine
o ingestă 58,9 g SU/kg masa corporală0,75
o consum de apă 2,7-3,7 ml/g SU ingestă
o durata totală a tranzitului 45-80 ore
o cantitate fecale 0,5-3 kg/zi
o pH ruminal 6,1-6,5.
Rumenul bivolilor conține diferențe semnificative față de cel al altor
rumegătoare; acesta are mai puține protozoare și flagelate dar o populație
mai mare de bacterii, în mod particular de bacterii celulolitice. În plus,
lichidul ruminal al bivolilor are un pH mai ridicat și conține mai mult azot
amoniacal (NH4-N), comparativ cu taurinele.
3.3. Sistemul cardiovascular cuprinde inima, o rețea de vase și
sistemul limfatic.
Funcția principală a inimii este de a transporta substanțe nutritive, oxigen și
deșeuri prin sânge (care reprezintă 7% din masa corporală) sau lichidul
limfatic. Inima, organ cu structură musculară, pompează sângele prin întreg
corpul - sângele este transmis de la inimă prin artere și prin capilare, pentru
a iriga țesuturile organismului, după care este adus înapoi în inimă, prin
vene.
La rumegătoare, sistemul cardiovascular are următoarele caracteristici
și valori ale indicilor hematologici și biochimici:
- parametrii hemodinamici la vaci
o ritmul cardiac 60-80 (70) bătăi/min
o volumul sanguin 52 -57ml/kg
o tensiune sistolică/diastolică 120-150/75-100 mmHg
o densitate sânge venos 1,048 g/ml
o pH plasmă sanguină 7,4.
- parametrii hemodinamici la ovine/caprine
o ritmul cardiac (bătăi/min.) 60-120 / 70-135
o volumul sanguin 55-66,4 / 70-70,6 ml/kg
o presiune diastolică 102 / 101-116 mmHg
o presiune sistolică (mmHg) 91-116 / 117-135
o pH sânge arterial 7,44 / 7,46.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 183
- simțul mirosului
Mirosul rumegătoarelor este bine dezvoltat; organul vomeronasal (organul
Jacobson) le permite acestora să detecteze mirosurile furajului sau cel al
feromonilor. Taurii, țapii și berbecii manifestă reflexul Flehmen (figura
5.9.1), depistând cu ușurință femelele în călduri. La ovine, mirosul este
primul dintre simțuri, care este utilizat în recunoașterea nou-născutului.
- simțul tactil
Sensibilitatea tactilă este diferită în diferite regiuni corporale. Astfel,
receptorii pielii sunt utilizați pentru a detecta presiunea, mișcarea,
temperatura, curentul electric și procesele inflamatorii. Receptorii din gură
sunt utilizați pentru explorare și prelevarea hranei. Bovinele sunt sensibile la
curenți electrici de 3 mA (0,7V), percep temperaturi ambientale extreme,
umiditatea și viteza curenților de aer prin termo- și mecanoreceptori.
Caprinele preferă scărpinatul și mângâiatul, fiind mai puţin ezitante față de
om, comparativ cu ovinele.
Lichidul cerebrospinal înconjoară și protejează creierul și măduva
spinării. La rumegătoarele adulte proprietățile biochimice sunt:
Parametru taurine ovine caprine
o proteine totale (mg/dl) mai puţin de 40 mg/dl
o albumine (mg/dl) 5-20 8-10 14
o glucoză (mmol/l) 3,3 1,7 3,1
o densitate 1,005 1,007 1,006
o pH 7,4-7,6 7,3-7,4 7,3-7,4
4.2.Temperatura
Valorile de confort ale temperaturii depind de diverși factori, cum sunt:
temperatura mediului ambiant, rasă, vârstă, consum caloric, greutate
sau stadiul lactaţiei. Cu toate că rumegătoarele sunt obișnuite cu
temperaturi exterioare scăzute, se recomandă asigurarea unui interval
de 16-27оC. Pentru susținerea termoreglării se vor considera:
- umiditatea relativă redusă
În adăposturile rumegătoarelor, temperaturile pot fi mai joase, dar dacă se
îndeplinesc cumulativ următoarele condiții: umiditatea relativă este scăzută,
nu există curenţi puternici de aer şi dacă animalele beneficiază de o zonă de
odihnă cu suficient aşternut uscat.
- evitarea fluctuațiilor bruște de temperatură
În incintele interioare unde are loc adăpostirea rumegătoarelor devine
importantă evitarea fluctuațiilor şi schimbărilor bruște de temperatură, în
special atunci când animalele sunt transferate între incinte interioare şi
exterioare. Iezii și animalele recent tunse solicită temperaturi ambientale mai
ridicate; ca urmare, aceste categorii sunt atent îngrijite.
- umbrirea incintelor și tunsul lânii
În ambianțele calde, deoarece animalele de fermă pot resimți ușor efectele
stresului termic, se asigură zone de odihnă umbrite și, în cazul ovinelor, se
practică tunsul.
1
Din considerente legate de utilizarea adecvată a spațiului, Unitatea experimentală sugerează
tehnologia întreținerii libere, cu zonă comună de odihnă. În situaţia în care proiectul de
cercetare solicită expres odihna în zone individuale, se pot amplasa cușete. Cușetele individuale
de odihnă se montează cu partea frontală spre aleea de circulație, asigurându-se accesul
dinspre aleea de mișcare/zona de furajare. Practic, pe toată lungimea de 36 m a infrastructurii
se pot amplasa 30 cușete individuale, fiecare cu lăţimea de 120 cm.
198 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
6.2. Hrănirea
Sub aspectul conținutului, formei de prezentare și a modalității de
administrare a furajelor destinate rumegătoarelor, se pot menționa
următoarele aspecte:
- forma de prezentare și distribuția furajului
Unitatea permite hrănirea rumegătoarelor cu amestecuri furajere unice
(AFU), preparate cu ajutorul unui echipament special destinat cântăririi și
amestecării ingredientelor, distribuirii și recoltării resturilor neconsumate
(figura 5.9.6). În plus, la toate speciile și categoriile de animale se pot
administra furaje fibroase. Manipularea baloților de fân, paie sau a silozului
înfoliat se realizează cu încărcătorul polivalent (figura 5.9.5) prevăzut cu
diferite dispozitive auxiliare utilizabile la distribuția furajelor voluminoase
destinate animalelor de fermă.
- tehnologia furajării
Dependent de tipul proiectului de cercetare, furajarea poate fi de tip ad
libitum sau în tainuri. Derularea activităţilor în proiectele de cercetare are
loc doar după perioade de acomodare; totodată, se evită schimbările bruște
ale rației, administrarea furajelor nou introduse făcându-se gradual,
conform particularităților și capacității sistemului digestiv al fiecărei specii.
6.3. Adăparea
Unitățile experimentale care pot fi destinate rumegătoarelor asigură în
permanență apă filtrată. Amplasarea adăpătoarelor cu niplu și cupă este
marginală zonei de odihnă, de regulă, înspre aleea de mișcare și acces la
furaje.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 203
6.4. Aşternutul
Aşternutul fie curgător, fie permanent adânc este din paie lungi de grâu sau
ovăz; acestea constituie un substrat care susține comportamentul de hrănire
și cel de odihnă. Deoarece rumegătoarele pot consuma furaje fibroase,
inclusiv așternutul, pe durata întreținerii se folosesc doar paie lungi, curate,
necontaminate cu micotoxine. Împrospătarea așternutului are loc zilnic,
acoperindu-se zonele umede, iar schimbarea așternutului are loc mai
frecvent la bovine și mai rar la ovine și caprine. Îndepărtarea gunoiului la
taurine are loc periodic, iar la rumegătoarele mici o dată la șase luni sau la
finalizarea proiectului de cercetare; activitatea se realizează cu ajutorul
echipamentelor auxiliare ale utilajului polivalent (figura 5.9.5).
6.5. Curățenia
Unitățile experimentale mențin starea de curățenie (PSUEX4.5), existând un
program zilnic și proceduri corespunzătoare pentru curățenie, evacuarea
gunoiului de grajd și spălarea echipamentelor la jet de apă sub presiune.
Direcţii prioritare:
• Unitatea experimentală taurine permite adăpostirea
concomitentă a 32 animale. Pentru rumegătoare mici se pot
organiza spații în unitatea monogastrice, unde se pot caza
cel puţin trei grupe a câte 32 animale.
• Utilizarea unităților experimentale permite respectarea
particularităților biologice și comportamentale ale
rumegătoarelor.
• Identificarea și înregistrarea animalelor utilizate în
proceduri respectă particularitățile legislației naționale și
internaționale.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 355
18. Castelhano-Carlos, M.J., Baumans, V., The impact of light, noise, cage cleaning and
in-house transport on welfare and stress of laboratory rats. Laboratory Animals,
2009, 43: 311-327.
19. Charan, J., N. D. Kantharia, N.D., How to calculate sample size in animal studies?
J.Pharmacol. Pharmacother. 2013, 4(4): 303–306.
20. Chiurciu V., Faur, A., Dumitrescu E, Cristina, R.T., Mic ghid de utilizare a
medicamentelor la animalele de laborator, păsări ܈și reptile, Medicamentul Veterinar
/ Veterinary Drug 2012, 6(1):37-55.
21. Christensen, S.D., Mikkelsen, L.F., Fels, J.J., Bodvarsdottir, T.B., Hansen, A.K.,
Quality of plasma sampled by different methods for multiple blood sampling in mice.
Lab. Anim. 2009; 43: 65-71.
22. Churchill, G.A., Gatti, D.M., Munger, S.C., Svenson, K.L. The Diversity Outbred
mouse population. Mamm. Genome. 2012; 23:713-718.
23. Clark, B.R., Price, E.O., Sexual maturation and fecundity of wild and domestic
Norway rats (Rattus norvegicus). Journal of Reproduction and Fertility. 1981; 63 (1):
215–220.
24. Cloutier, S., Newberry, R.C., Use of a conditioning technique to reduce stress
associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats. Appl. Anim.
Behav. Sci. 2008; 112:158-173.
25. Cristina, R-T, Teușdea, V., Maria Andreșescu, Huțu I., 2009, Ghid legislativ
european – Farmacovigilență și legislația medicamentului veterinar, Editura Mirton,
Timişoara.
26. Dabrowska, B., Harmata, W., Lenkiewicz, Z., Schiffer, Z. and Wojutusiak, R.J.,
Colour perception in cows. Behav. Processes, 1981; 6:1–10.
27. Dahlborn, K., Bugnon, P., Nevalainen, T., Raspa, M., Verbost, P., Spangenberg, E.,
Report of the Federation of European Laboratory Animal Science Associations
Working Group on animal identification, Laboratory Animals 2013; 47: 2–11. DOI:
10.1177/002367712473290.
28. Danneman, P., Suckow, M.A., Brayton, C., 2000, The Laboratory Mouse., CRC
Press.
29. Decun M., Bodnariu A., Experimentarea pe animale în România, analizată din
perspectivă europeană, Revista română de bioetică, 2009, vol. 7(3):17-27.
30. Diehl K-H et al., A good practice guide to the administration of substances and the
removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology 2001;
21: 15-23.
31. Diehl, K.H., Hull, R., Morton, D., Pfister, R., Rabemampianina, Y., Smith, D., Vidal,
J.M., van de Vorstenbosch, C., A good practice guide to the administration of
substances and removal of blood, including routes and volumes. J. Appl. Toxicol.
2001; 21:15-23.
32. Doerning, B.J., Brammer, D,W., Chrisp, C.E., Rush, H,G., Nephrotoxicity of
tiletamine in New Zealand white rabbits. Lab. Anim. Sci. 1992; 42:267-279.
33. Donohue, C., Hobson, B., Stephens, R.C.M, An introduction to anaesthesia, British
Journal of Hospital Medicine, 2013; 74(5):71-72.
34. Dreancă, A., Bel, L., Sevastre, B., Marcus, I., Applications of Rat Grimace Scale
Method in Postoperative Pain Management in Rats, Bulletin UASVM Veterinary
Medicine 2017, 74(1):1-6.
356 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
35. Droc, G., Grigorescu, B., Grigoroiu, M., Tomulescu, V., Tulbure D., Anestezia pentru
chirurgia experimentală la porci, Chirurgia, 2009; 104(3): 259-265.
36. Durschlag M. et. al., Repeated blood collection in the laboratory mouse by tail
incision - modification of an old technique, Physiology & Behavior, 1996;
60(6):1565–1568.
37. Eppig, J.T., Guidelines for nomenclature of mouse and rat strains, International
Committee on Standardized Genetic Nomenclature for Mice, 2016, disponibil la
http://www.informatics.jax.org/mgihome/nomen/strains.shtml.
38. Erb, H.N., A non-statistical approach for calculating the optimum number of animals
needed in research. Lab. Animal., 1996, 25:45-49.
39. Fausto G., Hope for the future: overcoming the DEEP ignorance on the CI
(Confidence Intervals) and on the DOE (Design of Experiments). Science Journal of
Applied Mathematics and Statistics. 2015; 3(3): 99-123.
40. Fay, R.R., 1988, Hearing in vertebrates: a psychophysics databook. Hill-Fay
Associates, Winnetka IL.
41. Fay, R.R., Popper, A.N., 1994, Comparative hearing: mammals. Springer Handbook
of Auditory Research Series. Springer-Verlag, NY.
42. Fernández, I., Peña, A., Del Teso, N., Pérez, V., Rodríguez-Cuesta, J., Clinical
biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the
submandibular vein and retroorbital plexus. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 2010;
49:202-206.
43. Ferris, C.P., Keady T. W. J.,Gordon, F.J., Kilpatrick, D.J., Comparison of a calan
gate and a conventional feed barrier system for dairy cows: feed intake and cow
behaviour Irish Journal of Agricultural and Food Research, 2006; 45(2):149-156.
44. Fischbach, F., 2009, “Blood studies. hematology and coagulation”, A Manual of
Laboratory and Diagnostic Test, 8th ed, Philadelphia.
45. Flecknell P. 2000, BSAVA Manual of rabbit medicine and surgery, Gloucester, UK:
British Small Animal Veterinary Association.
46. Fox R., DeMarco, J. 1990, Moral reasoning: a philosophical approach to applied
ethics, Holt, Chicago.
47. Fox, J.G., Barthold S., Davisson, M., Newcomer, C.E., Quimby, F.W., Smith A.,
2017, The mouse in biomedical research, American College of Laboratory Animal
Medicine 2nd Edition.
48. Gasparini, R., Pozzi, T., Magnelli, R., Fatighenti, D., Giotti, E., Poliseno, G., Pratelli,
M., Severini, R., Bonanni, P., De Feo, L., Evaluation of in vitro efficacy of the
disinfectant Virkon, European Journal of Epidemiology. 1995; 11(2): 193–197.
49. Gert, B., Morality: A new justification of the moral rules, Oxford University Press,
New York, 1988 .
50. Giknis, M.L.A., Clifford, C.B. Clinical laboratory parameters for Crl:WI (Han). (2008)
Charles River Laboratories. http://info.criver.com/flex_content_area/ documents/
rm_rm_r_Wistar_Han_clin_lab_parameters_08.pdf.
51. Green, E.L., 1981, Genetics and probability in animal breeding experiments.
MacMillan Publishers Ltd., London.
52. Grimaldi, C.M., French, D.L., Monoclonal antibodies by somatic cell fusion. Institute
for Laboratory Animal Research Journal 1995; 37(3):125-132
(http://www4.nas.edu/cls/ijhome.nsf).
MANUAL DE BUNE PRACTICI 357
53. Hanson, L.R., Fine, J.M., Svitak, A.S., Faltesek, K.A., Intranasal Administration of
CNS Therapeutics to Awake Mice, J. Vis. Exp.,2013; (74): 4440.
54. Harcourt-Brown, F., 2001,Textbook of rabbit medicine, UK: Butterworth-Heinemann.
55. Hardy, A.R., Quy, R.J., Huson, L,W., Estimation of age in the Norway rat (Rattus
norvegicus) from the weight of the eyelens, J. Appl. Eco. 1983; 20:97–102.
56. Hart, V., Nováková, P., Malkemper, E., Begall, S., Hanzal, V. R., Ježek, M., Kušta,
T. Š., Němcová, V., Adámková, J., Benediktová, K. I., Červený, J., Burda, H., Dogs
are sensitive to small variations of the Earth's magnetic field. Frontiers in Zoology,
2013; 10: 80.
57. Hau, J., Schapiro, S.J., 2010, Handbook of laboratory animal science, Volume I,
Third Edition: Essential Principles and Practices, CRC Press.
58. Hedrich, H., Bullock, G., eds. 2004, The Laboratory Mouse; Elsevier Limited,
Amsterdam.
59. Hedrich, H.J., 2012, The laboratory mouse, Second Edition, Academic Press
Elsevier Ltd. London.
60. Heffner R.S., Heffner H.H, Hearing in domestic pigs (Sus scrofa) and goats (Capra
hircus). Hear Res. 1990, 48(3):231-40.
61. Hem, A., et al. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat,
hamster, gerbil, guinea pig, ferret, and mink. Laboratory Animals; 1998; 32(4):364-
367.
62. Hernndez, A., Martró, E., Matas, L., Martín, V., Ausina, M., Assessment of in-vitro
efficacy of 1% Virkon against bacteria, fungi, viruses and spores by means of
AFNOR guidelines". Journal of Hospital Infection. 2000; 46 (3): 203–209.
63. Heykants, M., Mahabir, E., Estrous cycle staging before mating led to increased
efficiency in the production of pseudopregnant recipients without negatively affecting
embryo transfer in mice, Theriogenology, 2016; 85(5):813-821.
64. Hillyer, E.V., Quesenberry, K.E., 1997, Ferrets, rabbits, and rodents: Clinical
medicine and surgery, New York: WB Saunders Co.
65. Hiromitsu, N., Akihiro, K., et. all. Involvement of urinary bladder Connexin43 and the
circadian clock in coordination of diurnal micturition rhythm. Nature
Communications, 2012, (doi: 10.1038/ ncomms1812).
66. Hoff, J., Methods of blood collection in the mouse, Lab Animal, 2000; 29 (10):47-53.
67. Holmberg H, et al. Impact of blood sampling technique on blood quality and animal
welfare in haemophilic mice, Lab Anim. 2011; 45(2):114-120.
68. Holy, T.E., Guo, Z., Ultrasonic songs of male mice" PLoS, Biology. 2005,
3(12):e386. Washington University.
69. Huber, R.C,, Weber, E.M., Olsson, I.A.S., Mice in standard and furnished cages do
not differ in their short-term behavioural reaction to cage change and mating.
Proceedings of the Tenth FELASA Symposium and the XIV ICLAS General
Assembly and Conference, Cernobbio, Italy, 11-14 June 2007, p. 45-49.
70. Hubrecht, R., Kirkwood, J,. 2010, The UFAW Handbook on the care and
management of laboratory and other research animals, Eight Edition. Wiley-
Blackwell.
71. Hurst, J.L., West, R.S., Taming anxiety in laboratory mice. Nature Methods 2010;
7(10): 825-826.
358 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
72. Ionescu G. coord. 2005, Ghid naţional de biosiguranţă pentru laboratoarele
medicale, Ministerul Sănătăţii, România.
73. Jackson, P.G.G., Cockcroft, P.D., 2007, Clinical examination of farm animals,
Blackwell Science Ltd.
74. Jacobs, G.H., Neitz, J., Deegan, J.F., Retinal receptors in rodents maximally
sensitive to ultraviolet light, Nature, 1991; 353:655-656.
75. Jean, G.St., Yvorchuk-St.Jean, K., Anderson D.E.,. Moore, W.E, Cerebrospinal fluid
constituents collected at the atlanto-occipital site of xylazine hydrochloride sedated,
healthy 8-week-old Holstein calves, Can J Vet Res 1997; 61: 108-112.
76. Johnson P.J., Constantinescu G.M., Satellite article collection of cerebrospinal fluid
in horses, Equine vet. Educ., 2000, 12(1):7-12
77. Kaneko J.J., 2014, Clinical biochemistry of domestic animals, Third Edition
Academic Press.
78. Kassel, R., Levitan, S.A, Jugular technique for the repeated bleeding of small
animals. Science, 1953; 118:563-564.
79. Kavar, T., Dovä, P., Domestication of the horse: Genetic relationships between
domestic and wild horses. Livestock Science, 2008; 116 (1-3):1-14.
80. Keating SCJ, Thomas AA, Flecknell PA, Leach MC (2012) Evaluation of EMLA
cream for preventing pain during tattooing of rabbits: Changes in physiological,
behavioural and facial expression responses. PLOS ONE 7(9): e44437.
81. Kienzle, E,. Further developments in the prediction of metabolizable energy (ME) in
pet food. J Nutr. 2002; 132(6):1796S-8S.
82. Kienzle, E., Opitz, B., Earle, K.E., Smith, PM., Maskell, I.E., Iben, C., An improved
method for the estimation of energy in pet foods, J. Nutr. 1998; 128: 2806S–2808S.
83. Kienzle, E., Schrag, I,, Butterwick, R., Opitz, B., Calculation of gross energy in pet
foods: New data on heat combustion and fibre analysis in a selection of foods for
dogs and cats. J Anim Physiol Anim Nutr (Berl). 2001; 85(5-6):148-157.
84. Klusendorf, S., “Death with a Happy Face: Peter Singer’s Bold Defense of
Infanticide,” Christian Research Journal 2001, 23(3): 25.
85. Krinke, G.J., 2000, The handbook of experimental animals: În The laboratory rat,
Bullock, G., Bunton, T.E., editors. New York: Academic Press.
86. Kuby, J., 2000, Immunology, 4th Edn. W.H. Freeman & Co, New York NY,
(http://www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm).
87. Kurien, B.T., Everds, N.E., Scofield, R.H., Experimental animal urine collection: a
review. Laboratory Animals, 2004; 38:333–361.
88. Laber-Laird, K., 1996, Handbook of Rabbit and Rodent Medicine, Pergamon
Veterinary Handbook Series, Butterworth Heinemann.
89. Langford, D.J., Bailey, A.L., Chanda, M.L., Clarke, S.E., și col., Coding of facial
expressions of pain in the laboratory mouse, Nature Methods, 2010; 7:447–449.
90. Lapchik, V.B.V., Mattaraia, V.G.M., Ko, G.M., 2009, Cuidados e manejo de animais
de laboratório. Sao Paulo, Atheneu.
91. Laus F., Spaterna, A., Faillace, V., Paggi, E., Serri, E., Vullo, C., Cerquetella, M.,
Tese, B., Reference values for hematological and biochemical parameters of mixed
breed donkeys (Equus asinus), Wulfenia Journal, 2015; 22:294–304.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 359
92. Leabu M., Decun M., 2012, Codul etic al cercetării în științele legate de lumea viului,
Autoritatea Națională pentru Cercetarea Științifică Consiliului National de Etică a
Cercetării Științifice, Dezvoltării Tehnologice şi Inovării, Comisia 2: Științe legate de
lumea viului, (https://docs.google.com/ document/d/1PEJI5H_Mos-OOzZ7XX4Ru
9kbWx92-A0LNDbgFFvid84/preview).
93. Lebas, F., Coudert P., Rochambeau, H., Thébault, R.G., 1997. The Rabbit:
Husbandry, health and production, FAO, Rome.
94. Leenars, M., Hendriksen, C.F.M., Critical steps in the production of polyclonal and
monoclonal antibodies: evaluation and recommendation. ILAR Journal. 2005;
46:269-279.
95. Leenars, M.P.P.A., Hendriksen, C.F.M., De Leeuw, W.A., et al.. The production of
polyclonal antibodies in laboratory animals: The report and recommendations of
ECVAM Workshop 35. Alternatives to Laboratory Animals 1999; 27(1):79-102
(http://altweb.jhsph.edu/publications/ECVAM/ ecvam35.htm).
96. Lepage, J.Y., Potel, G., Leveau, J., Barbin, R., Souron, A., Coustiou, A., Protocole
d'anesthesie du porc. Effets de la saignee sur la circulation et I'equilibre acido-
basique. Ann. Fr. Anesth. Reanim., 1984, 3:421.
97. Linzey, A., 2009, Creatures of the Same God: Explorations in Animal Theology,
New York: Lantern Books,
98. Lukas, G., Brindle, S.D., Greengard, P., The route of absorption of intraperitoneally
administered compounds. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1971; 178:562-564.
99. Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, F., Pritchett-Corning, K.R., Manual
restraint and common compound administration routes in mice and rats, J. Vis. Exp.
2012; 67:e2771.
100. Mähler M., Berard, M.M Feinstein, R., Gallagher, G., Illgen-Wilcke, B., Pritchett-
Corning, K., Raspa, M., FELASA recommendations for the health monitoring of
mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental
units, Laboratory Animals 2014, Vol. 48(3): 178-192.
101. Mann, M.D., Crouse, D.A., Prentice, E.D., Appropriate animal numbers in
biomedical research in light of animal welfare considerations. Laboratory Animal
Science 1991, 41:6-14.
102. Manning,P.J., Ringler D.H., Newcomer, C.E., 1994,The Biology of the Laboratory
Rabbit, Second Editon, Academic Press, New York.
103. Marinescu B., Coman, C., Etica în experimentarea pe animale, Revista Română
de Bioetică, 2010, 8(3):96-103.
104. Matthews, J., 1999, Diseases of the Goat, Blackwell Science, Oxford.
105. Maurer, B.M., Döring, D., Scheipl, F., Küchenhoff, H., Erhard, M.H., Effects of a
gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans. Appl.
Anim. Behav. Sci. 2008; 111:329-341.
106. McAnulty P.A., Dayan A.D. Ganderup N.C., Hastings, K.L., 2012, The Minipig in
Biomedical Research, CRC, Press Taylor & Francis Group, Boca Raton London
New York.
107. Minea, O.M., Kedikilwe, K., Ndebel, R.T., Nsoso, S.J., Sheep–goat hybrid born
under natural conditions, Small Ruminant Research, 2000; 37(1-2):141-145
108. Neitz, J., Jacobs, G.H., Reexamination of spectral mechanisms in the rat (Rattus
norvegicus), Journal of Comparative Psychology, 1986, 100:21-29.
360 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
109. Nemzek, J.A., Bolgos, G.L., Williams, B.A., Remnick, D.G., Differences in normal
values for murine white blood cell counts and other hematological parameters based
on sampling site. Inflamm. Res. 2001, 50: 523-527.
110. Neves, S.M.P., Filho, J.M., Menezes, E.W., 2013, Manual de Cuidados e
Procedimentos com Animais de Laboratório do Biotério de Produção e
Experimentação da FCF-IQ/USP, São Paulo FCF-IQ/USP.
111. Olsson. A.S., Dahlborn, K.,2002, Improving housing conditions for labora-tory mice:
a review of ‘environmental enrichment’. Laboratory Animals.
112. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan R, Blood sample collection in small
laboratory animals J. Pharmacol Pharmacother. 2010, 1(2): 87–93.
113. Pass D, Freeth G. The rat. Anzccart News. 1993;6:1-4.
114. Phillips, C.J.C, 1993, Cattle behaviour. Farming Press Books, Wharfdale Rd,
Ipswich, U.K.
115. Poole T., 2006, The UFAW Handbook on the care and management of laboratory
animals. 7th ed. British: Blackwell Science.
116. Quesenberry, K., Carpenter, J.W., 2012. Ferrets, rabbits, and rodents: Clinical
medicine and surgery, 3rd Edition, Elsevier Saunders, St Louis.
117. Radostits, O.M., Gay, C.C., Blood, D.C., Hinchcliff, K.W. 2000, Veterinary Medicine,
9th edn, W.B. Saunders, London.
118. Ralph B.. Dell, R.B., Holleran, S., Ramakrishnan, R., Sample Size Determination,
ILAR J. 2002; 43(4): 207–213.
119. Reeb-Whitaker, C.K., Paigen, B., Beamer, W.G., Bronson, R.T., Churchill, G.A.,
Schweitzer, I.B., Myers, D.D., The impact of reduced frequency of cage changes on
the health of mice housed in ventilated cages. Laboratory Animals., 2001, 35:58-73.
120. Reed S.M., Bayly W.M., Sellon, D,C., 2004, Equine internal medicine, Second
editon, Saunders, USA.
121. Rehbinder, C., Alenius, S., Bures, J., de las Heras, M., Greko, C., Kroon P.S.,
Gutzwiller, A., FELASA recommendations for the health monitoring of experimental
units of calves, sheep and goats, Laboratory Animals, 2000, 34:329-350.
122. Rehbinder, C., Baneux, P., Forbes, D., van Herck, H., Nicklas, W., Rugaya, Z.,
Winkler, G., FELASA recommendations for the health monitoring of breeding
colonies and experimental units of cats, dogs and pigs , Laboratory Animals, 1998,
32:1-17.
123. Reynolds, M. Plasma and blood volume in the cow using the T-1824 hematocrit
method. American Journal of Physiology 1953, 173:421-427
124. Robertson, S.A., Eberhart, S., Efficacy of the intranasal route for administration of
anesthetic agents to adult rabbits. Lab. Anim. Sci. 1994, 44:159-65.
125. Romanovsky, A.A., Kulchitsky, V.A., Simons, C.T., Sugimoto, N. Methodology of
fever research: why are polyphasic fevers often thought to be biphasic? Am. J.
Physiol. 1998; 275:R332-338.
126. Rosenbaum, M.D., Woude, S.V., Johnson T.E., Effects of Cage-Change
Frequency and Bedding Volume on Mice and Their Microenvironment, J. Am.
Assoc. Lab. Anim. Sci. 2009, 48(6): 763–773.
127. Rusu, V., 2010. Dicționar medical, Ediția a IV-a. Editura Medicala, București.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 361
128. Schnell, M.A., Hardy, C., Hawley. M., Propert. K.J., Wilson, J,M., Effect of Blood
Collection Technique in Mice on Clinical Pathology Parameters. Hum. Gene. Thera,
2002; 13:155-162.
129. Senguptal P., The Laboratory Rat: Relating Its Age With Human's, Int. J. Prev. Med.
2013, 4(6): 624–630.
130. Sharp P., Villano J., 2013, The Laboratory Rat, Second edition, CRP Press, USA.
131. Sherwin, C,M., The motivation of group-housed laboratory mice to leave an
enriched laboratory cage. Animal Behaviour, 2007.
132. Silver, L.M., 1995, Mouse genetics: concepts and applications. Oxford University
Press. Disponibil la www.informatics.jax.org/silver/ în 15 decembrie, 2017.
133. Sirois M., 2015, Laboratory Procedures for Veterinary Technicians, Sixth Edition,
Elsevier Mosby, St Louis.
134. Snedecor, G.W,, Cochran, W.G., Statistical Methods. 8th Ed. Ames: Iowa State
Press, 1989.
135. Sotocinal S.G., Sorge, R.E., Zaloum, A., Tuttle, A.H., Martin, L.J., The Rat Grimace
Scale: A partially automated method for quantifying pain in the laboratory rat via
facial expressions, Molecular Pain 2011; 7:55-64.
136. Southwood, L.L., 2013, Practical guide to equine colic, First Edition, Wiley-Blackwell,
Published by John Wiley & Sons, Inc.
137. Standel, P.R., Corrow, D.J., 1988. How to estimate the size and growth of an inbred
mouse colony. The Jackson Laboratory internal document. The Jackson Laboratory.
Biology of the laboratory mouse. New York (NY): Dover, 1976.
138. Stevens, C.E., Hume, I.D., 1995, Comparative Physiology of the vertebrate digestive
system, Cambridge, United Kingdom. Cambridge University Press.
139. Stills, H.F, Adjuvants and antibody production: Dispelling the myths associated with
Freund’s complete and other adjuvants. ILAR Journal. 2005, 46:280-293
140. Story. D., Is “Animal Rights” a Biblical Concern? Christian Research Journal,
2014:37(2), (http://www.equip.org/article/is-animal-rights-a-biblical-concern/).
141. Suckow, M., Stevens, K., Wilson, R., editors, 2012, The Laboratory Rabbit, Guinea
pig, hamster, and other rodents, 1st edition. Elsevier, Oxford, UK.
142. Swindle, M. Michael, and M. Michael Swindle. 2007, Swine in the laboratory:
surgery, anesthesia, imaging, and experimental techniques. Boca Raton: CRC
Press.
143. Talhada, D., Andrade, A., Faustino-Rocha, A.I., Teixeira-Guedes, C.I., Teixeira,
J.H., Arantes-Rodrigues, R., Vasconcelos-Nóbrega, C., Gil da Cost, R., Oliveira,
P.A., Recommendations for urine and urinary bladder collection in chemical
carcinogenesis assays with rodents, Scandinavian Journal of Laboratory Animal
Science, 2015; 41(8):1-8.
144. Telkänranta, H., Marchant-Forde, J.N., Valros, A., Tear staining in pigs: a potential
tool for welfare assessment on commercial farms. Animal. 2016; 10(2):318-325.
145. Turner, P.V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M.A., Administration of substances to
laboratory animals: routes of administration and factors to consider. JAALAS. 2011;
50:600-613.
146. Turner, P.V., Pekow, C., Vasbinder, M.A., Brabb, T., Administration of substances to
laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute
preparation. JAALAS. 2011; 50:614-627.
362 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
147. Van Loo, P.L.P., Van Zutphen, L.F.M, Baumans, V., Male management: coping with
aggression problems in male laboratory mice. Laboratory Animals 2003, 37: 300-
313 (http://tinyurl.com/64qcrdx).
148. Vanderlip, S.L. 2003, The guineea pig Handbook, Barron’s Educational Series, Inc.
New York.
149. Wagner, E.J., Manning, P.J., 1976, The biology of the Guinea pig, Academic Press,
New York.
150. Ward J.D., 2008, A manual for laboratory animal management – Manuals in
biomedical research – vol 5. Ed. World Scientific, Singapore.
151. Washington, I., Hoosier, G., 2012, Clinical biochmestry and hemathology, în: The
laboratory rabit, guinea pig, hamster, and other rodents. Elsevier, USA.
152. West, C.D., The relationship of the spiral turns of the cochela and the length of the
basilar membrane to the range of audible frequencies in ground dwelling
mammals. Journal of the Acoustic Society of America, 1985; 77:1091-1101.
153. Wolfmaier, Thomas G. 1999. Designing for the color challenged: a challenge,
Internet Technical Group (itg) on-line newsletter. https://www.hf.faa.gov/b
webtraining/ visualdisplays/ HumanVisSys7b.htm.
154. Zimmermann, F., Weiss, J., Reifenberg, K., 2000, Breeding and assisted
reproduction techniques, în: The laboratory rat . Eds Krinke, G., Bullock, G., Bunton,
T., Academic Press, New York.
155. Zletner A., 2013, Handling, Dosing and Training of the Göttingen Minipig, Ellegaard
Göttingen Minipigs, https://studylib.net/doc/8668145/handling--dosing-and-training-
of-the-g%C3%B6ttingen-minipig
1. http://oacu.od.nih.gov/training_resources/rodent_restraint.htm
2. http://popamarian.googlepages.com/sp_06_erori_putere_efect_2006.pdf
3. http://profs.info.uaic.ro/~val/statistica/StatGloss.htm
4. http://www.acuc.berkeley.edu/guidelines/mouse_breeding.pdf
5. http://www.genengnews.com/gen-news-highlights/crispr-gene-therapy-via-skin-
grafts-treats-obesity-and-diabetes-in-mice/81254755
6. http://www.informatics.jax.org/greenbook/frames/frame2.shtml
7. http://www.upstate.edu/dlar/pdf/anesthesia_analgesia_guidelines.pdf
8. https://littlemissourihomestead.wordpress.com
9. https://sunflowerblossombenchgoats.com
10. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK43321/
11. https://www.research.uky.edu/division-laboratory-animal-resources.
MANUAL DE BUNE PRACTICI 365
1. http://oacu.od.nih.gov/training_resources/index.htm
2. http://oacu.od.nih.gov/training_resources/rodent_administration.htm
3. http://oacu.od.nih.gov/training_resources/rodent_restraint.htm
4. http://www.ahwla.org.uk/site/tutorials/BVA/BVA07-GPig/GPig.htm
5. http://www.ahwla.org.uk/site/tutorials/BVA/BVA07-GPig/GPig.html
6. http://www.ahwla.org.uk/site/tutorials/BVA/BVA08-Rabbit/Rabbit.html
7. https://oacu.oir.nih.gov/training-resources
8. https://www.youtube.com/watch?v=3nyiQZp_O44
9. https://www.youtube.com/watch?v=6RbkK72QxEo
10. https://www.youtube.com/watch?v=AA3dwfmqQLM
11. https://www.youtube.com/watch?v=BswOfHSpA6o
12. https://www.youtube.com/watch?v=DttE13X6UOk
13. https://www.youtube.com/watch?v=I0aZIt8AjKg
14. https://www.youtube.com/watch?v=iiNmlm-M9Lc
15. https://www.youtube.com/watch?v=mFPno7eii-k
16. https://www.youtube.com/watch?v=niEX-Uxam1c
17. https://www.youtube.com/watch?v=nmb8bkWAQNg
18. https://www.youtube.com/watch?v=pZcdhztW2zs
19. https://www.youtube.com/watch?v=tswJHgni2oQ
20. https://www.youtube.com/watch?v=ZBPVvRZvIEw.
366 UNITĂȚI EXPERIMENTALE
8. Cuprins
Volumul 1.
Capitolul 1. Unitățile experimentale 7-8
1.1. Procedură operațională de organizare internă 9-23
1.2. Unitatea experimentală animale de laborator 24-36
1.3. Unitatea experimentală cu exploatare convențională 37-56
Capitolul 2. Etică și responsabilități în cercetarea care 57-58
utilizează animale în proceduri
2.1. Rolul și responsabilitatea specialiștilor care propun, aprobă 59-65
și verifică utilizarea animalelor în proceduri
2.2. Principii și aspecte ale eticii cercetării în științele vieții 66-77
2.3. Clasificarea severității procedurilor 78-86
Capitolul 3. Prezentarea, aprobarea și verificarea 87-88
proiectelor de cercetare
3.1. Formalități administrative pentru aprobarea și verificarea 89-96
propunerilor de proiecte de cercetare
3.2. Propunerea de studiu pe animale (ASP-ul) 97-107
3.3. Rezumatul cu caracter nontehnic al proiectului 108-111
3.4. Cadrul logic al proiectului (MCL-ul) 112-116
3.5. Testarea ipotezelor statistice ale proiectelor care utilizează 117-124
animale în proceduri
Capitolul 4. Premisele cercetării pe animale 125-126
4.1. Marcarea, identificarea, înregistrarea și mișcarea 127-133
animalelor utilizate în proceduri
4.2. Bariere sanitare, biosiguranță și biosecuritatea unității 134-143
4.3. Programul de monitorizare a sănătății animalelor utilizate în 144-159
proceduri
4.4. Dezinfecția, decontaminarea și deratizarea incintelor, 160-176
spațiilor și echipamentelor unității experimentale
4.5. Gestionarea deșeurilor în unitățile experimentale 177-192
4.6. Sacrificarea animalelor utilizate în proceduri 193-196
4.7. Neutralizarea deșeurilor prin incinerare 197-204
MANUAL DE BUNE PRACTICI 367
Volumul 2
Capitolul 5. Biologia, creșterea și întreţinerea 7-8
animalelor utilizate în proceduri
5.1. Biologia și înmulțirea șoarecilor neconsangvini 9-30
5.2. Biologia și creșterea șoarecilor consangvini și a celor 31-42
cu structură genetică modificată
5.3. Biologia și creșterea șobolanilor 43-59
5.4. Bilogia și creșterea iepurilor și cobailor 60-75
5.5. Infrastructuri și facilități pentru întreţinerea 76-101
rozătoarelor și iepurilor
5.6. Biologia și întreţinerea câinilor și pisicilor 102-130
5.7. Biologia și întreținerea porcilor în unitățile 131-154
experimentale
5.8. Biologia și întreţinerea ecvinelor în unitățile 155-176
experimentale
5.9. Biologia și întreținerea rumegătoarelor în unitățile 177-204
experimentale
Cap.6. Tehnici, manopere și proceduri de 205-206
monitorizare asociate utilizării animalelor în
cercetare
6.1. Recunoașterea, evaluarea și atenuarea stresului, durerii 207-234
și suferinței
6.2. Manipularea, restricția mișcărilor și contenția 235-249
rozătoarelor
6.3. Manipularea, restricția mișcărilor și contenția 250-267
animalelor cu talie mică și mijlocie utilizate în
proceduri
6.4. Administrarea medicației la rozătoare și iepuri 268-284
6.5. Recoltarea probelor de sânge de la rozătoare și iepuri 285-300
6.6. Explorări ale funcției renale și tehnici de recoltare a 301-313
probelor de urină
6.7. Anestezia și analgezia animalelor utilizate în proceduri 314-340
6.8. Obținerea anticorpilor la rozătoare și iepuri 341-355
7. Bibliografie 356-367
8. Cuprins 368-369
368 UNITĂȚI EXPERIMENTALE