Pulsoximetria

Un pulsoximetru afișează procentul de oxigen din sânge. Mai precis, măsoară

procentul din hemoglobină, proteina din sânge care transportă oxigen, este
încărcată. Intervalele normale de Sa O 2 acceptabile pentru pacienții fără patologie
pulmonară sunt cuprinse între 95 și 99%. Pentru o persoană care respiră aerul camerei
la sau aproape de nivelul mării, se poate face o estimare a pO 2 arterială
din citirea monitorului sângelui-oxigen „saturația oxigenului periferic” (SpO 2 ).

Mod de operare
Un pulsoximetru tipic folosește un procesor electronic și o pereche de diode emițătoare
de lumină mici (LED-uri) orientate către o fotodiodă printr-o parte translucidă a
corpului pacientului, de obicei un vârf al degetului sau un lob al urechii. Un LED este
roșu, cu lungimea de undă de 660 nm, iar celălalt este cu infraroșucu lungimea de
undă de 940 nm. Absorbția luminii la aceste lungimi de undă diferă semnificativ între
sângele încărcat cu oxigen și sângele lipsit de oxigen. Hemoglobina oxigenată
absoarbe mai multă lumină în infraroșu și permite trecerea mai multor lumini roșii.
Hemoglobina dezoxigenată permite trecerea mai multor lumini infraroșii și absoarbe
mai multă lumină roșie. LED-urile se succed printr-un ciclu de pornire, apoi de celălalt,
apoi ambele oprite de aproximativ treizeci de ori pe secundă, ceea ce permite
fotodiodei să răspundă separat la lumina roșie și infraroșie și, de asemenea, să se
adapteze pentru baza de lumină ambientală.
Cantitatea de lumină care este transmisă (cu alte cuvinte, care nu este absorbită) este
măsurată și se produc semnale normalizate separate pentru fiecare lungime de undă.
Aceste semnale fluctuează în timp, deoarece cantitatea de sânge arterial care este
prezent crește (literalmente pulsuri) cu fiecare bătăi de inimă. Prin scăderea luminii
minime transmise din lumina transmisă în fiecare lungime de undă, efectele altor
țesuturi sunt corectate, generând un semnal continuu pentru sângele arterial
pulsatil. Raportul dintre măsurarea luminii roșii și măsurarea luminii în infraroșu este
apoi calculat de procesor (care reprezintă raportul dintre hemoglobina oxigenată și
hemoglobina dezoxigenată), iar acest raport este apoi convertit în SpO 2 de către
procesor printr-un tabel de căutare. bazat pe legea Beer – Lambert. Separarea
semnalului servește și pentru alte scopuri: o formă de undă pletismograf („undă pleth”)
care reprezintă semnalul pulsatil este de obicei afișată pentru o indicație vizuală a
impulsurilor, precum și calitatea semnalului și un raport numeric între pulsatil iar
absorbția de bază („ indicele de perfuzie ”) poate fi utilizată pentru a evalua perfuzia.

SpO2=HbO2/(HbO2+Hb)

unde HbO 2 este hemoglobină oxigenată ( oxihemoglobină ) și Hb este hemoglobină

dezoxigenată.
Măsurători derivate

Datorită modificărilor volumelor de sânge din piele, se poate

observa o variație pletismografică în semnalul luminos primit (transmitanță) de către
senzor pe un oximetru. Variația poate fi descrisă ca o funcție periodică, care la rândul
său poate fi împărțită într-o componentă de curent continuu (valoarea de vârf) și o
componentă de curent alternativ (vârf minus jgheab). Raportul dintre componenta de
curent alternativ și componenta de curent continuu, exprimat în procente, este
cunoscut sub numele de indicele de perfuzie (periferic) (Pi) pentru un impuls și are
de obicei un interval cuprins între 0,02% și 20%. O măsurătoare anterioară
numită pulsoximetrie pletismografică(POP) măsoară doar componenta „AC” și este
derivată manual din pixeli de monitor.

Fotopletismograma
 Limba
 Descărcați PDF
 Ceas

Afla mai multe

Acest articol are nevoie de citări suplimentare pentru verificare.

O fotopletismogramă ( PPG ) este o pletismogramă obținută optic, care poate fi

utilizată pentru a detecta modificările volumului de sânge în patul microvascular al
țesutului. Un PPG este obținut adesea utilizând un puls oximetru care luminează pielea și
măsoară modificările absorbției luminii. Un pulsometru convențional monitorizează
perfuzia sângelui în derm și țesutul subcutanat al pielii.
Fotopletismism

PPG reprezentativ preluat de la un pulsometru

al urechii. Variatia amplitudinii provine din
Variatia indusa de respiratie.

Pulsoximetru deget

Cu fiecare ciclu cardiac inima pompează sângele către periferie. Chiar dacă acest impuls
de presiune este oarecum amortizat de momentul în care ajunge la piele, este suficient să
distindeți arterele și arteriolele din țesutul subcutanat. Dacă pulsoximetrul este atașat
fără a comprima pielea, un impuls de presiune poate fi văzut și din plexul venos, ca un
vârf secundar mic.
Modificarea volumului cauzată de pulsul de presiune este detectată prin iluminarea pielii
cu lumina de la o diodă emițătoare de lumină (LED) și apoi măsurarea cantității de lumină
transmisă sau reflectată către o fotodiodă. Fiecare ciclu cardiac apare ca un vârf, așa cum
se vede în figură. Deoarece fluxul sanguin către piele poate fi modulat de mai multe alte
sisteme fiziologice, PPG poate fi, de asemenea, utilizat pentru a monitoriza
respirația, hipovolemia și alte afecțiuni circulatorii. În plus, forma formei de undă PPG
diferă de la subiect la subiect și variază în funcție de locația și modul în care este atașat
pulsoximetrul.
În timp ce pulsioximetrele sunt dispozitive medicale utilizate în mod uzual, PPG derivat
din acestea este rar afișat și este procesat nominal doar pentru a determina ritmul
cardiac. PPG-urile pot fi obținute prin absorbție transmisivă (ca la vârful degetului) sau
prin reflexie (ca pe frunte).
În ambulatoriu, pulsoximetrele sunt purtate în mod obișnuit pe deget. Cu toate acestea,
în caz de șoc, hipotermie, etc. fluxul sanguin către periferie poate fi redus, rezultând un
PPG fără un puls cardiac perceptibil. În acest caz, un PPG poate fi obținut dintr-un puls
oximetru de pe cap, cele mai frecvente locuri fiind urechea, septul nazal, și frunte. PPG
poate fi, de asemenea, configurat ca fotopletismografie multi-site (MPPG), de exemplu,
efectuarea de măsurători simultane de la lobii urechii drepte și stângi, degetele
arătătoare și degetele de la picioare și oferind oportunități suplimentare pentru
evaluarea pacienților cu boală arterială periferică suspectată, disfuncție autonomă,
disfuncție endotelială și rigiditate arterială. MPPG oferă, de asemenea, un potențial
semnificativ pentru extragerea datelor, de exemplu, folosind învățarea profundă, precum
și o serie de alte tehnici inovatoare de analiză a undelor pulsului.
Artefactele de mișcare s-au dovedit a fi un factor limitativ care împiedică citirile exacte în
timpul exercițiului și condițiile de viață libere.

Utilizari
Monitorizarea ritmului cardiac și a ciclului cardiac

Contractia ventriculara prematura (PVC) poate fi vazuta în PPG la fel ca în EKG si în tensiunea arteriala (TA).

Pulsatiile venoase pot fi vazute clar în acest PPG.

Deoarece pielea este atât de bogată perfuzată, este relativ ușor de detectat componenta
pulsatilă a ciclului cardiac. Componenta DC a semnalului este atribuibilă absorbției în
vrac a țesutului pielii, în timp ce componenta AC este direct atribuibilă variației volumului
de sânge în piele cauzată de pulsul de presiune al ciclului cardiac.

Înălțimea componentei AC a fotopletismogramei este proporțională cu presiunea

pulsului, diferența dintre presiunea sistolică și diastolică din artere. După cum se vede în
figura care prezintă contracții ventriculare premature (PVC), pulsul PPG pentru ciclul
cardiac cu PVC are ca rezultat o tensiune arterială cu amplitudine mai mică și un
PPG. Tahicardia ventriculară și fibrilația ventriculară pot fi, de asemenea, detectate.

Monitorizarea respirației

Efectele nitroprusidului de sodiu (Nipride), un vasodilatator periferic, asupra PPG degetului unui subiect
sedat. Asa cum era de asteptat, amplitudinea PPG creste dupa perfuzie si, în plus, variatia indusa de respiratie
(RIV) devine îmbunatatita.

Respirația afectează ciclul cardiac, variind presiunea intrapleurală, presiunea dintre

peretele toracic și plămâni. Deoarece inima se află în cavitatea toracică dintre plămâni,
presiunea parțială a inhalării și expirării influențează foarte mult presiunea pe vena cavă
și umplerea atriului drept.

În timpul inspirației, presiunea intrapleurală scade cu până la 4 mm Hg, ceea ce distrează

atriul drept, permițând o umplere mai rapidă din vena cavă, crescând preîncărcarea
ventriculară, dar scăzând volumul de curse. În schimb, în timpul expirației, inima este
comprimată, scăzând eficiența cardiacă și crescând volumul accident vascular
cerebral. Când frecvența și profunzimea respirației crește, revenirea venoasă crește,
ducând la creșterea debitului cardiac.

Monitorizarea hipo- și hipervolemiei

Shamir, Eidelman și colab. a studiat interacțiunea dintre inspirație și îndepărtarea a 10%
din volumul de sânge al unui pacient pentru depozitarea sângelui înainte de operație. Au
descoperit că pierderea de sânge ar putea fi detectată atât din fotopletismograma dintr-
un puls oximetru, cât și dintr-un cateter arterial. Pacienții au prezentat o scădere a
amplitudinii pulsului cardiac cauzată de reducerea preîncărcării cardiace în timpul
expirației când inima este comprimată.

Efectele unei incizii asupra unui subiect sub anestezie generală asupra
fotopletismografului (PPG) și a tensiunii arteriale (TA).

Monitorizarea tensiunii arteriale

Se pare că FDA a oferit autorizație unui monitor de tensiune arterială fără manșetă bazat
pe fotopletismografie în august 2019.
Fotofletismografie la distanta
Imagistica convențională
În timp ce fotofletismografia necesită de obicei o formă de contact cu pielea umană (de
exemplu, ureche, deget), fotofletismografia la distanță permite determinarea proceselor
fiziologice, cum ar fi fluxul de sânge fără contactul cu pielea. Acest lucru se realizează
utilizând videoclipul feței pentru a analiza modificări subtile de moment ale culorii pielii
subiectului, care nu sunt detectabile pentru ochiul uman. O astfel de măsurare bazată pe
cameră a nivelurilor de oxigen din sânge oferă o alternativă fără contact la
fotopletismismul convențional. De exemplu, poate fi utilizat pentru a monitoriza ritmul
cardiac al nou-născuților sau analizat cu rețele neuronale profunde pentru a cuantifica
nivelurile de stres.

Holografie digitală

Fotopletismismul degetului mare prin holografie digitala în afara axei.

unde pulsatile pe spatele unei broaste masurate prin fotopletismografie holografica în afara axei

Fotofletismografia la distanță poate fi realizată și prin holografie digitală, care este

sensibilă la faza undelor luminoase și, prin urmare, poate dezvălui mișcarea sub-
micronică în afara planului. În special, imagistica pe câmp larg a mișcării pulsatile induse
de fluxul sanguin poate fi măsurată pe degetul mare prin holografie digitală. Rezultatele
sunt comparabile cu pulsul de sânge monitorizat de pletismorfă în timpul unui
experiment de ocluzie-reperfuzie. Un avantaj major al acestui sistem este că nu este
necesar niciun contact fizic cu suprafața țesutului studiat. Cele două limitări majore ale
acestei abordări sunt (i) configurația interferometrică în afara axei care reduce lățimea
de bandă spațială disponibilă a matricei de senzori și (ii) utilizarea transformatei
Fourier de scurtă durată(prin transformată Fourier discretă ) analiză care filtrează
semnalele fiziologice.
imagistica cu laser Doppler a undelor pulsului pe suprafata mainii prin fotofletismografie olografica din
interferometrie digitala pe axa.

Analiza componentelor principale a hologramelor digitale reconstituite din

interferograme digitalizate dobândite la rate peste ~ 1000 de cadre pe secundă relevă
unde de suprafață pe mână. Această metodă este o modalitate eficientă de a efectua
holografie digitală din interferograme pe axă, care atenuează atât reducerea lățimii de
bandă spațială a configurației off-ax, cât și filtrarea semnalelor fiziologice. O lățime de
bandă spațială mai mare este crucială pentru câmpul vizual mai mare al imaginii.
Un rafinament al fotofletismografiei holografice, al imaginii cu laser Doppler holografic,
permite monitorizarea non-invazivă a fluxului sanguin al undelor pulsului în vasele de
sânge ale retinei, coroidei, conjunctivei și irisului. În special, holografia laser Doppler a
fundului ocular, coroida constituie contribuția predominantă la semnalul Doppler laser
de înaltă frecvență. Cu toate acestea, este posibil să se ocolească influența prin scăderea
semnalului de bază mediat spațial și să se obțină o rezoluție temporală ridicată și o
capacitate de imagistică pe câmp complet a fluxului sanguin pulsatil.
Stetoscopul electronic
Pletismograful

Un pletismograf este un instrument pentru măsurarea modificărilor de volum în

interiorul unui organ sau al întregului corp (care rezultă de obicei din fluctuațiile
cantității de sânge sau aer pe care le conține). Cuvântul este derivat din grecescul
"plethysmos" (crescând, mărind, devenind plin) și "graphein" (a scrie).

Pletismograf sau „cutie pentru corp” utilizat

la masuratori pulmonare
Un barbat supus pletismografiei întregului corp.

Un pletismograf modern pentru corp cu ultrasunete

Plămânii
Pletismografele pulmonare sunt utilizate în mod obișnuit pentru a măsura capacitatea
reziduală funcțională (FRC) a plămânilor - volumul din plămâni când mușchii respirației
sunt relaxați - și capacitatea pulmonară totală. [2]
Într-un pletismograf tradițional (sau „cutie de caroserie”), subiectul testat, sau pacientul,
este plasat într-o cameră închisă de mărimea unei cabine telefonice mici, cu o singură
piesă bucală. La sfârșitul expirării normale, piesa bucală este închisă. Pacientului i se cere
apoi să facă un efort inspirator. Pe măsură ce pacientul încearcă să inspire (o manevră
care arată și se simte ca gâfâind), plămânii se extind, scăzând presiunea în plămâni și
crescând volumul pulmonar. La rândul său, aceasta crește presiunea în interiorul cutiei,
deoarece este un sistem închis, iar volumul compartimentului cutiei a scăzut pentru a se
potrivi noul volum al subiectului.

Cu pletismografie fără cabină, pacientul este așezat lângă un dispozitiv de testare pe

desktop și introduce piesa bucală în gura sa. Pacientul face o serie de respirații normale
ale mareelor timp de aproximativ un minut. În timpul acestei respirații de maree, apare
o serie de întreruperi rapide, cu o deschidere și închidere a obturatorului, măsurând
presiunea și volumul. [3]
Abordare metodologică
Legea lui Boyle este utilizată pentru a calcula volumul necunoscut din plămâni. În primul
rând, se calculează modificarea volumului pieptului. Presiunea inițială a cutiei de ori
volumul acesteia este considerată egală cu presiunea cunoscută după extinderea timpului
noul volum necunoscut. Odată găsit noul volum, volumul original minus noul volum este
modificarea volumului în cutie și, de asemenea, schimbarea volumului în piept. Cu aceste
informații, Legea lui Boyle este utilizată din nou pentru a determina volumul inițial de gaz
în piept: volumul inițial (necunoscut) de ori presiunea inițială este egal cu volumul final
de presiunea finală. Pornind de la acest principiu, se poate arăta [4] că capacitatea
reziduală funcțională este o funcție a modificărilor de volum și presiuni după cum
urmează:

Diferența dintre plămânii plini și goi poate fi utilizată pentru a evalua bolile și restricțiile
de trecere a căilor respiratorii. O boală obstructivă va prezenta FRC crescut, deoarece
unele căi respiratorii nu se golesc în mod normal, în timp ce o boală restrictivă va
prezenta FRC scăzută. Pletismografia corporală este deosebit de potrivită pentru
pacienții care au spații aeriene care nu comunică cu arborele bronșic; la astfel de
pacienți diluarea cu heliu ar da o citire incorect scăzută.
Un alt parametru important, care poate fi calculat cu un pletismograf de corp este
rezistența căilor respiratorii. În timpul inhalării, pieptul se extinde, ceea ce crește
presiunea în cutie. În timp ce observăm așa-numita buclă de rezistență (presiunea și
debitul cabinei), bolile pot fi ușor recunoscute. Dacă bucla de rezistență devine plană,
acest lucru arată o conformare defectuoasă a plămânului. O BPOC , de exemplu, poate fi
ușor descoperită datorită formei unice a buclei de rezistență corespunzătoare. [4]
Membre
Unele dispozitive pletismograf sunt atașate de brațe , picioare sau alte extremități și
utilizate pentru a determina capacitatea circulatorie. În pletismografia cu apă, o
extremitate, de exemplu un braț, este închisă într-o cameră plină de apă unde pot fi
detectate modificări de volum. Pletismografia aeriană utilizează un principiu similar, dar
bazat pe o manșetă lungă umplută cu aer, care este mai convenabilă, dar mai puțin
precisă. Un alt dispozitiv practic sunt aparatele de măsurare cu umplutură de mercur
utilizate pentru măsurarea continuă a circumferinței extremității, de exemplu la mijlocul
gambei. Pletismografia de impedanță este o metodă neinvazivă utilizată pentru a
detecta tromboza venoasă în aceste zone ale corpului.
Organele genitale
Un alt tip comun de pletismograf este pletismograful penian . Acest dispozitiv este utilizat
pentru măsurarea modificărilor fluxului sanguin în penis . Deși unii cercetători folosesc
acest dispozitiv pentru a evalua excitația sexuală și orientarea sexuală , instanțele care au
considerat pletismografia peniană hotărăsc în general că tehnica nu este suficient de
fiabilă pentru a fi utilizată în instanță. [5] Un echivalent feminin aproximativ cu
pletismografia peniană este fotofletismografia vaginală , care măsoară optic fluxul
sanguin în vagin. [6]
Utilizare în cercetarea preclinica
Pletismografia este o metodă larg utilizată în cercetarea de bază și preclinică pentru a
studia respirația. Sunt utilizate mai multe tehnici:

Parametri respiratori de la animale conștiente în mișcare liberă:

pletismografie a întregului corp

Pletismografia întregului corp este utilizată pentru a măsura parametrii respiratori la

subiecți conștienți fără restricții, inclusiv cuantificarea bronhoconstricției .
Mărimile standard ale pletismografului sunt destinate studiului șoarecilor, șobolanilor și
cobaiilor. La cerere, pletismografele mai mari pot fi fabricate și pentru alte animale, cum
ar fi iepuri, câini, porci sau primate.

Pletismograful are două camere, fiecare prevăzută cu un pneumotachograf . Subiectul

este plasat într-unul dintre ele (camera subiectului) și celălalt rămâne gol (camera de
referință).
Schimbarea presiunii este măsurată de un traductor de presiune diferențială cu un
orificiu expus la camera subiect și celălalt la camera de referință. [7]

Parametri respiratori de la animale reținute conștiente:

pletismografie cu cameră dublă / cap

Pletismograful cu cameră dublă (dcp) măsoară parametrii respiratori la un subiect

conținut conștient, inclusiv rezistența căilor respiratorii și conductanța. Există diferite
dimensiuni de pletismograf pentru a studia șoareci, șobolani sau cobai.
Configurația head-out este identică cu configurația standard descrisă mai sus, cu excepția
faptului că nu există o cameră head.

Desigur, sigiliul gulerului [ este necesară o explicație suplimentară ] este încă aplicat, astfel încât
camera corpului să rămână etanșă la aer. Cu doar un semnal toracic, toți parametrii pot fi
obținuți, cu excepția rezistenței specifice a căilor respiratorii (SRaw) și a conductanței
specifice a căilor respiratorii (Sgaw).

Rezistența / respectarea animalelor sedate

În pletismografia anesteziată, rezistența pulmonară și complianța dinamică sunt
măsurate direct, deoarece subiectul este anesteziat.

În funcție de nivelul de sedare, subiectul poate respira spontan (configurație SB) sau sub
ventilație mecanică (configurație MT). Un semnal de flux și un semnal de presiune sunt
necesare pentru a calcula conformitatea și rezistența.
Spirometrie

Spirometria (adică măsurarea respirației ) este cea mai frecventă dintre testele funcției
pulmonare (PFT). Măsoară funcția pulmonară , în special cantitatea (volumul) și / sau
viteza (fluxul) de aer care poate fi inhalat și expirat. Spirometria este utilă în evaluarea
modelelor de respirație care identifică afecțiuni precum astmul , fibroza
pulmonară , fibroza chistică și BPOC . De asemenea, este util ca parte a unui sistem
de supraveghere a sănătății , în care modelele de respirație sunt măsurate în timp. [1]
Spirometrie

Bucla Flux-Volum care arata manevra FVC

reusita. Valorile pozitive reprezinta expirarea,
valorile negative reprezinta inspiratia. La
începutul testului, atat debitul, cat si volumul
sunt egale cu zero (reprezentand mai degraba
volumul în spirometru decat în plamani). Urma
se deplaseaza în sensul acelor de ceasornic
pentru expirare urmata de inspiratie. Dupa
punctul de plecare curba se monteaza rapid la
un varf (debitul expirator de varf). (Retineti ca
valoarea FEV1 este arbitrara în acest grafic si
este prezentata doar în scop ilustrativ; aceste
valori trebuie calculate ca parte a procedurii).

Plasă D013147

Cod OPS-301 1-712

TLC Capacitatea pulmonară totală: volumul din plămâni la inflație maximă, suma VC și RV.

televizor Volumul mareelor: volumul de aer deplasat în sau din plămâni în timpul respirației
liniștite (televizorul indică o subdiviziune a plămânului; atunci când volumul mareelor
este măsurat cu precizie, la fel ca în calculul schimbului de gaze, se folosește simbolul
TV sau V T. )

RV Volumul rezidual: volumul de aer rămas în plămâni după o expirație maximă

ERV Volumul de rezervă expirator: volumul maxim de aer care poate fi expirat din poziția
expiratorie finală

IRV Volumul de rezervă inspirator: volumul maxim care poate fi inhalat de la nivelul
inspirațional final

IC Capacitate de inspirație: suma IRV și TV

IVC Capacitate vitală de inspirație: volumul maxim de aer inhalat din punctul de expirație
maximă

VC Capacitate vitală: volumul de aer expirat după cea mai profundă inhalare.

VT Volumul mareelor: volumul de aer deplasat în sau din plămâni în timpul respirației
liniștite (TV indică o subdiviziune a plămânului; atunci când volumul mareelor este
măsurat cu precizie, la fel ca în calculul schimbului de gaze, se folosește simbolul TV
sau V T. )

FRC Capacitatea reziduală funcțională: volumul din plămâni la poziția expiratorie finală

% RV / Volumul rezidual exprimat în procente din TLC

TLC

VA Volumul gazului alveolar

VL Volumul real al plămânului, inclusiv volumul căilor respiratorii conducătoare.

 FVC Capacitatea vitală forțată: determinarea capacității vitale dintr-un efort expirator
forțat maxim

FEV t Volumul expirator forțat (timp): un termen generic care indică volumul de aer expirat
în condiții forțate în primele t secunde

1 FEV Volum care a fost expirat la sfârșitul primei secunde de expirare forțată

FEF x Fluxul expirator forțat legat de o porțiune a curbei FVC; modificatorii se referă la
cantitatea de FVC deja expirată

FEF max Debitul instantaneu maxim atins în timpul unei manevre FVC

FIF Flux inspirator forțat: (Măsurarea specifică a curbei inspiratorii forțate este notată prin
nomenclatură analogă cu cea pentru curba expiratorie forțată. De exemplu, debitul
inspirator maxim este notat FIF max . Dacă nu se specifică altfel, calificatorii de volum
indică volumul inspirat din RV punctul de măsurare.)

PEF Debit expirator de vârf: Debitul expirator forțat cel mai mare măsurat cu un
debitmetru de vârf

MVV Ventilație voluntară maximă: volumul de aer expirat într-o perioadă specificată în
timpul efortului maxim repetitiv

Facand spirometrie

Spirometria generează pneumotachografe, care sunt diagrame care trasează volumul și

fluxul de aer care intră și iese din plămâni dintr-o inhalare și o expirație.

Indicatii

Spirometria este indicată din următoarele motive:

 pentru a diagnostica sau controla astmul [2] [3] [4]

 pentru a detecta bolile respiratorii la pacientii care prezinta simptome de respiratie si
pentru a distinge boala respiratorie de boala cardiaca ca cauza [5]
  pentru a masura reactia bronsica la pacientii suspectati de astm [5]
 pentru a diagnostica si a face diferenta între boli pulmonare obstructive si boli pulmonare
restrictive [5]
 sa urmareasca istoricul natural al bolilor în afectiuni respiratorii [5]
 pentru a evalua afectarea cauzata de astmul profesional [5]
 identificarea celor cu risc de barotraumatism pulmonar în timpul scufundarilor [5]
 sa efectueze evaluarea preoperatorie a riscului înainte de anestezie sau chirurgie
cardiotoracica [5]
 pentru a masura raspunsul la tratamentul afectiunilor pe care spirometria le
detecteaza [5]
 pentru a diagnostica disfunctia corzii vocale .

Contraindicatii
Manevrele expiratorii forțate pot agrava unele afecțiuni medicale. [6] Spirometria nu
trebuie efectuată atunci când individul prezintă:
 Hemoptizia de origine necunoscuta
 Pneumotorax
 Stare cardiovasculara instabila (angina pectorala, infarct miocardic recent etc.)
 Anevrisme toracice, abdominale sau cerebrale
 Cataracta sau interventii chirurgicale recente la ochi
 Chirurgie toracica sau abdominala recenta
 Greata, varsaturi sau boli acute
 Infectie virala recenta sau actuala
 Hipertensiune arteriala nediagnosticata

Testarea spirometriei
Afla mai multe

Aceasta sectiune nu menționează nicio sursă .

Un spirometru modern pe baza de PC USB.

Dispozitiv pentru spirometrie. Pacientul îsi aseaza buzele în jurul muschiului albastru. Dintii merg între noduri
si scut, iar buzele trec peste scut. Un clip de nas garanteaza ca respiratia va curge numai prin gura.

Ecran pentru citirile spirometriei din dreapta. Camera poate fi utilizata si pentru pletismografia corpului .

Spirometru
Testul spirometria se realizează cu ajutorul unui dispozitiv numit spirometru , [7] , care
vine în mai multe soiuri diferite. Majoritatea spirometrelor afișează următoarele grafice,
numite spirograme:
 o curbă volum-timp , care arata volumul (litri) de-a lungul axei Y si timpul (secunde) de-a
lungul axei X.
 o buclă de debit-volum , care descrie grafic rata fluxului de aer pe axa Y si volumul
total inspirat sau expirat pe axa X

Procedură
Testul capacității vitale a volumului forțat de bază (FVC) variază ușor în funcție de
echipamentul utilizat, fie în circuit închis, fie în circuit deschis, dar ar trebui să urmeze
standardizarea ATS / ERS a spirometriei .
În general, pacientul este rugat să respire cât mai adânc posibil și apoi să expire în senzor
cât mai tare posibil, cât mai mult timp posibil, de preferință cel puțin 6 secunde. Uneori
este urmat direct de o inspirație rapidă (inhalare), în special atunci când se evaluează
posibila obstrucție a căilor respiratorii superioare . Uneori, testul va fi precedat de o
perioadă de respirație liniștită înspre și dinspre senzor (volumul mareelor) sau respirația
rapidă (partea inspirațională forțată) va avea loc înainte de expirarea forțată.
În timpul testului, pot fi folosite cleme moale pentru a preveni scurgerea aerului prin
nas. Muștiucurile filtrante pot fi utilizate pentru a preveni răspândirea
microorganismelor.

Limitările testului
Manevra depinde în mare măsură de cooperarea și efortul pacientului și se repetă în mod
normal de cel puțin trei ori pentru a asigura reproductibilitatea . Deoarece rezultatele
sunt dependente de cooperarea pacientului, FVC poate fi doar subestimat, niciodată
supraestimat.
Datorită cooperării necesare pacientului, spirometria poate fi utilizată numai la copiii cu
vârsta suficientă pentru a înțelege și a urma instrucțiunile date (6 ani sau mai mult) și
numai la pacienții care sunt capabili să înțeleagă și să urmeze instrucțiunile - astfel, acest
test nu este potrivit pentru pacienții inconștienți, puternic sedați sau cu limitări care ar
interfera cu eforturile respiratorii viguroase. Alte tipuri de teste ale funcției pulmonare
sunt disponibile pentru sugari și persoane inconștiente.

O altă limitare majoră este faptul că mulți astmatici intermitenți sau ușori au spirometrie
normală între exacerbarea acută, limitând utilitatea spirometriei ca diagnostic. Este mai
util ca instrument de monitorizare: o scădere bruscă a FEV1 sau altă măsură spirometrică
la același pacient poate semnala agravarea controlului, chiar dacă valoarea brută este încă
normală. Pacienții sunt încurajați să înregistreze cele mai bune măsuri personale.

Exemplu de tiparire moderna a spirometrului bazat pe PC.

Testele conexe
Spirometria poate fi, de asemenea, parte a unui test de provocare bronșică , utilizat
pentru a determina hiperreactivitatea bronșică fie la exerciții riguroase, la inhalarea
aerului rece / uscat, fie cu un agent farmaceutic precum metacolină sau histamină .
Uneori, pentru a evalua reversibilitatea unei anumite afecțiuni, se
administrează un bronhodilatator înainte de a efectua o altă rundă de teste pentru
comparație. Acest lucru este denumit în mod obișnuit un test de reversibilitate sau un test
post bronhodilatator (Post BD) și este o parte importantă în diagnosticarea astmului
versus BPOC.
Alte teste complementare ale funcțiilor pulmonare includ pletismografia și spălarea
azotului .
Parametrii
Cei mai comuni parametri măsurați în spirometrie sunt capacitatea vitală (VC),
capacitatea vitală forțată (FVC), volumul expirator forțat (FEV) la intervale temporizate
de 0,5, 1,0 (FEV1), 2,0 și 3,0 secunde, fluxul expirator forțat 25-75 % (FEF 25-75) și
ventilație voluntară maximă (MVV), [8] cunoscută și sub numele de Capacitate
respiratorie maximă. [9] Alte teste pot fi efectuate în anumite situații.
Rezultatele sunt de obicei date atât în date brute (litri, litri pe secundă), cât și în procente
prezise - rezultatul testului ca procent din „valorile prezise” pentru pacienții cu
caracteristici similare (înălțime, vârstă, sex și, uneori, rasă și greutate) . Interpretarea
rezultatelor poate varia în funcție de medic și de sursa valorilor prezise. În general,
rezultatele cele mai apropiate de 100% prezise sunt cele mai normale, iar rezultatele de
peste 80% sunt adesea considerate normale. Au fost publicate mai multe publicații cu
valori prezise și pot fi calculate în funcție de vârstă, sex, greutate și etnie. Cu toate acestea,
revizuirea de către un medic este necesară pentru un diagnostic precis al oricărei situații
individuale.

Un bronhodilatator este, de asemenea, dat în anumite circumstanțe și se face o

comparație pre / post grafic pentru a evalua eficacitatea bronhodilatatorului. Consultați
exemplul tipărit.

Capacitatea reziduală funcțională (FRC) nu poate fi măsurată prin spirometrie, dar poate
fi măsurată cu un pletismograf sau teste de diluare (de exemplu, test de diluare cu heliu).
Valori medii pentru capacitatea vitala fortata (FVC), volumul expirator fortat în 1 secunda (FEV1) si fluxul
expirator fortat 25-75% (FEF25-75%), potrivit unui studiu din Statele Unite din 2007 pe 3.600 de subiecti cu
varsta cuprinsa între 4-80 ani. [10] Axa Y este exprimata în litri pentru FVC si FEV1 si în litri / secunda pentru
FEF25-75%.

Capacitate vitală forțată (FVC)

Capacitatea vitală forțată (FVC) este volumul de aer care poate fi aruncat cu forța după
inspirație completă, [11] măsurat în litri. FVC este cea mai de bază manevră în testele de
spirometrie.
Volumul expirator forțat în 1 secundă (FEV1)
FEV1 este volumul de aer care poate fi suflat cu forța în prima 1 secundă, după inspirație
completă. [11] Valorile medii ale FEV1 la persoanele sănătoase depind în principal de sex
și vârstă, conform diagramei. Valori cuprinse între 80% și 120% din valoarea medie sunt
considerate normale. [12] Valorile normale prevăzute pentru FEV1 pot fi calculate și
depind de vârstă, sex, înălțime, masă și etnie, precum și de studiul de cercetare pe care se
bazează.
Raport FEV1 / FVC
FEV1 / FVC este raportul dintre FEV1 și FVC. La adulții sănătoși, aceasta ar trebui să fie
de aproximativ 70-80% (în scădere odată cu vârsta). [13] În bolile obstructive (astm,
BPOC, bronșită cronică, emfizem) FEV1 este diminuat din cauza rezistenței crescute a
căilor respiratorii la fluxul expirator; FVC poate fi, de asemenea, scăzut, datorită
închiderii premature a căilor respiratorii la expirare, doar nu în aceeași proporție cu
FEV1 (de exemplu, atât FEV1 cât și FVC sunt reduse, dar primul este mai afectat din cauza
rezistenței crescute a căilor respiratorii) . Aceasta generează o valoare redusă (<70%,
adesea ~ 45%). În bolile restrictive (cum ar fi fibroza pulmonară ) FEV1 și FVC sunt
ambele reduse proporțional, iar valoarea poate fi normală sau chiar crescută ca urmare a
scăderii complianței pulmonare.
O valoare derivată a FEV1 este FEV1% prezisă (FEV1%), care este definită ca FEV1 al
pacientului împărțit la FEV1 mediu în populație pentru orice persoană de aceeași vârstă,
înălțime, sex și rasă. [ este necesară o citare medicală ]
Fluxul expirator forțat (FEF)
Fluxul expirator forțat (FEF) este fluxul (sau viteza) de aer care iese din plămâni în timpul
porțiunii de mijloc a unei expirații forțate. Poate fi dat în momente discrete , în general
definite prin ce fracțiune din capacitatea vitală forțată (FVC) a fost expirată. Intervalele
discrete obișnuite sunt 25%, 50% și 75% (FEF25, FEF50 și FEF75), sau 25% și 50% din
FVC care a fost expirat. Poate fi, de asemenea, dat ca o medie a fluxului pe parcursul unui
interval, de asemenea delimitat în general de când rămân fracțiuni specifice din FVC, de
obicei 25-75% (FEF25-75%). Intervalele medii ale populației sănătoase depind în
principal de sex și vârstă, cu FEF25-75% prezentate în diagrama din stânga. Valori
cuprinse între 50-60% și până la 130% din medie sunt considerate normale. [12] Valorile
normale prevăzute pentru FEF pot fi calculate și depind de vârstă, sex, înălțime, masă și
etnie, precum și de studiul de cercetare pe care se bazează.
MMEF sau MEF reprezintă debitul expirator maxim (mediu) și este vârful debitului
expirator preluat din curba debit-volum și măsurat în litri pe secundă. Teoretic ar trebui
să fie identic cu debitul expirator de vârf (PEF), care este, totuși, în general măsurat de un
debitmetru de vârf și dat în litri pe minut. [14]
Cercetări recente sugerează că FEF25-75% sau FEF25-50% pot fi un parametru mai
sensibil decât FEV1 în detectarea bolii obstructive a căilor respiratorii mici. [15] [16] Cu
toate acestea, în absența modificărilor concomitente ale markerilor standard,
discrepanțele în fluxul expirator de nivel mediu pot să nu fie suficient de specifice pentru
a fi utile, iar ghidurile actuale de practică recomandă continuarea utilizării FEV1, VC și
FEV1 / VC ca indicatori ai bolii obstructive. [17] [18]
Mai rar, fluxul expirator forțat poate fi dat la intervale definite de cât rămâne din
capacitatea pulmonară totală. În astfel de cazuri, este desemnat de obicei ca de exemplu
FEF70% TLC, FEF60% TLC și FEF50% TLC. [14]
Flux inspirator forțat 25-75% sau 25-50%
Fluxul inspirator forțat 25-75% sau 25-50% (FIF 25-75% sau 25-50%) este similar cu
FEF 25-75% sau 25-50%, cu excepția măsurătorii luate în timpul inspirației. [ este necesară o
citare medicală ]
Debitul expirator de vârf (PEF)
Valorile normale pentru debitul expirator de varf (PEF), prezentate la scara UE. [19]

Debitul expirator de vârf (PEF) este debitul maxim (sau viteza) atins în timpul expirației
forțate maxim inițiată la inspirație completă, măsurată în litri pe minut sau în litri pe
secundă.
Volumul mareelor (TV)
Volumul mareelor este cantitatea de aer inhalată sau expirată normal în repaus. [ este
necesară o citare medicală ]
Capacitatea pulmonară totală (TLC)
Capacitatea pulmonară totală (TLC) este volumul maxim de aer prezent în plămâni. [ este
necesară o citare medicală ]
Capacitate de difuzare (DLCO)
Capacitatea de difuzie (sau DLCO ) este absorbția de monoxid de carbon dintr-o singură
inspirație într-un timp standard (de obicei 10 secunde). În timpul testului, persoana
inhalează un amestec de gaze de testare care constă din aer obișnuit, care include un gaz
de urmărire inert și CO, mai puțin de un procent. Deoarece hemoglobina are o afinitate
mai mare față de CO decât oxigenul, timpul de reținere a respirației poate fi de doar 10
secunde, ceea ce reprezintă o cantitate suficientă de timp pentru a avea loc acest transfer
de CO. Deoarece cantitatea de CO inhalată este cunoscută, CO expirat este scăzut pentru
a determina cantitatea transferată în timpul timpului de reținere a respirației. Gazul
trasor este analizat simultan cu CO pentru a determina distribuția amestecului de gaze
testate. Acest test va prelua deficiențele de difuzie, de exemplu în fibroza
pulmonară.[20] Acest lucru trebuie corectat pentru anemie (o concentrație scăzută de
hemoglobină va reduce DLCO) și hemoragia pulmonară (excesul de globule roșii din
interstitiu sau alveole poate absorbi CO și crește în mod artificial capacitatea
DLCO). Presiunea atmosferică și / sau altitudinea vor afecta, de asemenea, DLCO-ul
măsurat, astfel încât este necesar un factor de corecție pentru ajustarea presiunii
standard.
Ventilație voluntară maximă (MVV)
Ventilația voluntară maximă (MVV) este o măsură a cantității maxime de aer care poate
fi inhalată și expirată în decurs de un minut. Pentru confortul pacientului, acest lucru se
face pe o perioadă de 15 secunde înainte de a fi extrapolat la o valoare pentru un minut
exprimată în litri / minut. Valorile medii pentru bărbați și femele sunt de 140-180 și,
respectiv, 80-120 litri pe minut. [ este necesară o citare medicală ]
Complianță statică pulmonară (C st )
Atunci când se estimează conformitatea pulmonară statică, măsurătorile de volum de
către spirometru trebuie completate cu traductoare de presiune pentru a măsura
simultan presiunea transpulmonară . Când ați trasat o curbă cu relațiile dintre
schimbările de volum la modificările presiunii transpulmonare, C st este panta curbei în
timpul oricărui volum dat sau, matematic, ΔV / ΔP. [21] Complianța statică a plămânilor
este probabil cel mai sensibil parametru pentru detectarea mecanicii pulmonare
anormale. [22] Se consideră normal dacă este între 60% și 140% din valoarea medie a
populației pentru orice persoană de vârstă, sex și compoziție corporală similare. [12]
La cei cu insuficiență respiratorie acută la ventilație mecanică, „conformitatea statică a
sistemului respirator total este obținută în mod convențional prin împărțirea volumului
mareelor la diferența dintre presiunea„ platoului ”măsurată la deschiderea căilor
respiratorii (PaO) în timpul unei ocluzii la sfârșit. inspirație și presiune pozitivă-
expirativă finală (PEEP) setată de ventilator ". [23]
Valoare aproximativă
Măsurare
Masculin Femeie

Capacitate vitală forțată (FVC) 4,8 L 3,7 L

Volumul mareelor (Vt) 500 ml 390 ml

Capacitatea pulmonară totală (TLC) 6,0 L 4,7 L

Alți parametri

Timpul expirat forțat (FET)

Timpul expirat forțat (FET) măsoară durata expirării în secunde.
Capacitate vitală lentă (SVC) Capacitatea vitală
lentă (SVC) este volumul maxim de aer care poate fi expirat lent după inhalare maximă
lentă.
Presiunea maximă (P max și P i )
Spirometru - ERV în cm (cm 3 ) medie vârstă 20

Masculin Femeie

4320 3387

P max este presiunea asimptotic maximă care poate fi dezvoltată de mușchii respiratori la
orice volum pulmonar și P i este presiunea inspiratorie maximă care poate fi dezvoltată
la volume pulmonare specifice. [24] Această măsurare necesită și transductoare de
presiune. Se consideră normal dacă este de 60% până la 140% din valoarea medie din
populație pentru orice persoană de vârstă, sex și compoziție corporală similară. [12] Un
parametru derivat este coeficientul de retracție (CR) care este Pmax / TLC. [14]
Timpul mediu de tranzit (MTT)
Timpul mediu de tranzit este zona de sub curba debit-volum împărțită la capacitatea
vitală forțată. [25]
Presiunea inspiratorie maximă (MIP) MIP, cunoscută și sub numele de forță
inspiratorie negativă (NIF) , este presiunea maximă care poate fi generată împotriva
unei căi respiratorii ocluse începând cu capacitatea reziduală funcțională (FRC). Este un
marker al funcției și forței musculare respiratorii. [26] Reprezentată prin centimetri de
presiune a apei (cmH2O) și măsurată cu un manometru . Presiunea inspiratorie maximă
este un indice important și neinvaziv al puterii diafragmei și un instrument independent
pentru diagnosticarea multor boli. [27] Presiunile inspiratorii maxime tipice la bărbații
adulți pot fi estimate din ecuația, M IP = 142 - (1,03 x Vârstă) cmH 2 O, unde vârsta este în
ani.[28]

Spectrofotometrie

Spectrofotometria este o ramură a spectroscopiei electromagnetice care se ocupă de

măsurarea cantitativă a reflexiei sau a proprietăților de transmisie ale unui material în
funcție de lungimea de undă. [2] Spectrofotometria folosește fotometre , cunoscute sub
numele de spectrofotometre, care pot măsura intensitatea unui fascicul de lumină la
diferite lungimi de undă. Deși spectrofotometria se aplică cel mai frecvent radiațiilor
ultraviolete, vizibile și infraroșii , spectrofotometrele moderne pot interoga porțiuni largi
ale spectrului electromagnetic , inclusiv raze X , ultraviolete , vizibile , infraroșii, și /
sau lungimi de undă cu microunde .

Spectrofotometru de masa

Spectrofotometru Beckman IR-1, cca. 1941

Beckman Model DB Spectrophotometer (un model cu fascicul dublu), 1960

Spectrofotometru portabil utilizat în industria grafica. [1]

Prezentare generala

Spectrofotometria este un instrument care se bazează pe analiza cantitativă a

moleculelor, în funcție de cantitatea de lumină absorbită de compușii
colorați. Caracteristicile importante ale spectrofotometrelor sunt lățimea de bandă
spectrală (gama de culori pe care le poate transmite prin eșantionul testat), procentul de
transmitere a eșantionului, intervalul logaritmic de absorbție a eșantionului și, uneori, un
procent de măsurare a reflectanței.

Un spectrofotometru este utilizat în mod obișnuit pentru măsurarea transmitanței sau

reflectanței soluțiilor, a solidelor transparente sau opace, cum ar fi sticla lustruită sau
gazele. Deși multe substanțe biochimice sunt colorate, la fel ca în, absorb lumina vizibilă
și, prin urmare, pot fi măsurate prin procedee colorimetrice, chiar și substanțele
biochimice incolore pot fi adesea transformate în compuși coloranți adecvați pentru
reacții cromogene de formare a culorii pentru a produce compuși adecvați pentru analiza
colorimetrică. [3] : 65 Cu toate acestea, ele pot fi, de asemenea, proiectate pentru a
măsura difuzivitatea pe oricare dintre intervalele de lumină listate, care acoperă de
obicei în jur de 200 nm - 2500 nm utilizând diferite controale și calibrări . [2]În aceste
domenii de lumină, sunt necesare calibrări pe mașină folosind standarde care variază în
tip, în funcție de lungimea de undă a determinării fotometrice . [4]
Un exemplu de experiment în care se utilizează spectrofotometria este determinarea
constantei de echilibru a unei soluții. O anumită reacție chimică în cadrul unei soluții
poate apărea în direcția înainte și înapoi, în care reactanții formează produse și produsele
se descompun în reactanți. La un moment dat, această reacție chimică va ajunge la un
punct de echilibru numit punct de echilibru. Pentru a determina concentrațiile respective
de reactanți și produse în acest moment, transmitanța luminii soluției poate fi testată
folosind spectrofotometrie. Cantitatea de lumină care trece prin soluție este indicativă a
concentrației anumitor substanțe chimice care nu permit trecerea luminii.

Absorbția luminii se datorează interacțiunii luminii cu modurile electronice și

vibraționale ale moleculelor. Fiecare tip de moleculă are un set individual de niveluri de
energie asociate formării legăturilor sale chimice și a nucleilor și astfel va absorbi lumina
de lungimi de undă specifice sau energii, rezultând în proprietăți spectrale
unice. [5] Aceasta se bazează pe machiajul său specific și distinct.
Utilizarea spectrofotometrelor se întinde pe diferite domenii științifice, cum ar
fi fizica , știința materialelor , chimia , biochimia , ingineria chimică și biologia
moleculară . [6] Sunt utilizate pe scară largă în multe industrii, inclusiv în semiconductori,
fabricarea cu laser și optică, imprimare și examinare criminalistică, precum și în
laboratoare pentru studiul substanțelor chimice. Spectrofotometria este adesea utilizată
în măsurători ale activităților enzimatice, determinări ale concentrațiilor de proteine,
determinări ale constantelor cinetice enzimatice și măsurători ale reacțiilor de legare a
ligandilor. [3] : 65 În cele din urmă, un spectrofotometru este capabil să determine, în
funcție de control sau calibrare, ce substanțe sunt prezente într-o țintă și exact cât de mult
prin calculele lungimilor de undă observate.
În astronomie , termenul de spectrofotometrie se referă la măsurarea
spectrului unui obiect ceresc în care scala fluxului spectrului este calibrată în funcție
de lungimea de undă , de obicei prin comparație cu o observație a unei stele standard
spectrofotometrice și corectată pentru absorbție. de lumină de atmosfera Pământului. [7]
Istorie
Inventat de Arnold O. Beckman în 1940 [ disputat - discutat ] , spectrofotometrul a fost creat cu
ajutorul colegilor săi de la compania sa National Technical Laboratories fondată în 1935
care avea să devină Beckman Instrument Company și în cele din urmă Beckman Coulter.
Aceasta ar veni ca o soluție pentru spectrofotometrele create anterior, care nu au putut
absorbi ultravioletul în mod corect. El ar începe cu invenția modelului A în care se folosea
o prismă de sticlă pentru a absorbi lumina UV. S-ar constata că acest lucru nu a dat
rezultate satisfăcătoare, prin urmare, în modelul B, a existat o trecere de la o sticlă la o
prismă de cuarț care a permis rezultate mai bune de absorbție. De acolo, Modelul C s-a
născut cu o ajustare a rezoluției lungimii de undă, care a ajuns să aibă trei unități din
acesta produse. Ultimul și cel mai popular model a devenit Modelul D, care este mai bine
recunoscut acum ca spectrofotometru DU care conține carcasa instrumentului, lampă cu
hidrogen cu continuu ultraviolent și un monocromator mai bun. [8]A fost produs din 1941
până în 1976, unde prețul pentru acesta în 1941 a fost de 723 USD (accesoriile ultra-UV
erau o opțiune la un cost suplimentar). În cuvintele laureatului premiului Nobel pentru
chimie Bruce Merrifield , acesta a fost „probabil cel mai important instrument dezvoltat
vreodată spre progresul în domeniul științei”. [9]
Odată ce a fost întrerupt în 1976, [10] Hewlett-Packard a creat primul spectrofotometru
cu matrice de diode disponibil în comerț în 1979, cunoscut sub numele de HP
8450A. [11] Spectrofotometrele cu diode s-au deosebit de spectrofotometrul original
creat de Beckman deoarece a fost primul spectrofotometru controlat cu microprocesor
cu un singur fascicul care a scanat mai multe lungimi de undă la un moment dat în
secunde. Iradiază proba cu lumină policromatică pe care proba o absoarbe în funcție de
proprietățile sale. Apoi, este transmis înapoi prin grilarea matricei de fotodiodă care
detectează regiunea lungimii de undă a spectrului. [12] De atunci, crearea și
implementarea dispozitivelor de spectrofotometrie a crescut imens și a devenit unul
dintre cele mai inovatoare instrumente ale timpului nostru.
Proiecta

Spectrofotometru cu scanare cu un singur fascicul

Există două clase majore de dispozitive: fascicul unic și fascicul dublu. Un

spectrofotometru cu fascicul dublu [13] compară intensitatea luminii între două căi de
lumină, una care conține o probă de referință și cealaltă proba de testare. Un
spectrofotometru cu un singur fascicul măsoară intensitatea luminii relative a
fasciculului înainte și după introducerea probei de testare. Deși măsurătorile de
comparație de la instrumente cu fascicul dublu sunt mai ușoare și mai stabile,
instrumentele cu un singur fascicul pot avea o gamă dinamică mai mare și sunt optic mai
simple și mai compacte. În plus, unele instrumente specializate, cum ar fi
spectrofotometrele construite pe microscopuri sau telescoape, sunt instrumente cu un
singur fascicul datorită caracterului practic.
Din punct de vedere istoric, spectrofotometrele folosesc un monocromator care conține
o rețea de difracție pentru a produce spectrul analitic. Rețeaua poate fi mobilă sau fixă.
Dacă se folosește un singur detector, cum ar fi un tub fotomultiplicator sau o fotodiodă ,
rețeaua poate fi scanată treptat (spectrofotometru de scanare), astfel încât detectorul să
poată măsura intensitatea luminii la fiecare lungime de undă (care va corespunde fiecărui
„pas”). Matrice de detectoare (spectrofotometru matricial), cum ar fi dispozitive cuplate
la încărcare (CCD) sau matrice fotodiodă(PDA) poate fi, de asemenea, utilizat. În astfel de
sisteme, rețeaua este fixă și intensitatea fiecărei lungimi de undă a luminii este măsurată
de un detector diferit din matrice. În plus, majoritatea spectrofotometrelor cu infraroșu
mediu moderne folosesc o tehnică de transformare Fourier pentru a dobândi informații
spectrale. Această tehnică se numește spectroscopie în infraroșu cu transformată
Fourier .
La efectuarea măsurătorilor de transmisie, spectrofotometrul compară cantitativ fracția
de lumină care trece printr-o soluție de referință și o soluție de testare, apoi compară
electronic intensitățile celor două semnale și calculează procentul de transmisie al
eșantionului comparativ cu standardul de referință. Pentru măsurători de reflectanță,
spectrofotometrul compară cantitativ fracția de lumină care se reflectă din probele de
referință și de testare. Lumina de la lampa sursă este trecută printr-un monocromator,
care difractează lumina într-un „curcubeu” de lungimi de undă printr-o prismă rotativă
și scoate lățimi de bandă înguste ale acestui spectru difractat printr-o fantă mecanică de
pe partea de ieșire a monocromatorului. Aceste lățimi de bandă sunt transmise prin
eșantionul de testare.Apoi densitatea fluxului de fotoni (wați pe metru pătrat de obicei)
a luminii transmise sau reflectate este măsurată cu o fotodiodă,dispozitiv cuplat de
încărcare sau alt senzor de lumină . Valoarea transmitanței sau reflectanței pentru
fiecare lungime de undă a probei de testare este apoi comparată cu valorile de transmisie
sau reflectanță din proba de referință. Majoritatea instrumentelor vor aplica o funcție
logaritmică raportului de transmisie liniară pentru a calcula „absorbția” eșantionului, o
valoare care este proporțională cu „concentrația” substanței chimice măsurate.
Pe scurt, succesiunea evenimentelor dintr-un spectrofotometru de scanare este după
cum urmează:

1. Sursa de lumina este stralucita într-un monocromator, difractata într-un curcubeu si

împartita în doua fascicule. Apoi este scanat prin esantion si solutiile de referinta.
2. Fractiunile lungimilor de unda incidente sunt transmise prin, sau reflectate, din esantion
si referinta.
3. Lumina rezultata loveste dispozitivul fotodetector , care compara intensitatea relativa a
celor doua fascicule.
4. Circuitele electronice convertesc curentii relativi în procente de transmisie liniara si / sau
valori de absorbanta / concentratie.

Într-un spectrofotometru matricial, secvența este următoarea: [14]

1. Sursa de lumina este stralucita în proba si concentrata într-o fanta
2. Lumina transmisa este refractata într-un curcubeu cu reteaua de reflectie
3. Lumina rezultata loveste dispozitivul fotodetector care compara intensitatea fasciculului
4. Circuitele electronice convertesc curentii relativi în procente de transmisie liniara si / sau
valori de absorbanta / concentratie

Multe spectrofotometre mai vechi trebuie calibrate printr-o procedură cunoscută sub
numele de "reducere la zero", pentru a echilibra ieșirea curentă nulă a celor două
fascicule la detector. Transmiterea unei substanțe de referință este setată ca o valoare de
referință (de referință), astfel încât transmisia tuturor celorlalte substanțe este
înregistrată în raport cu substanța inițială „zero”. Spectrofotometrul convertește apoi
raportul de transmisie în „absorbție”, concentrația componentelor specifice ale probei de
testare în raport cu substanța inițială. [6]
Aplicații în biochimie
Spectrofotometria este o tehnică importantă utilizată în multe experimente biochimice
care implică izolarea ADN, ARN și proteine, cinetica enzimatică și analize
biochimice. [15] Deoarece eșantioanele din aceste aplicații nu sunt ușor disponibile în
cantități mari, acestea sunt adecvate în special pentru a fi analizate în această tehnică
nedistructivă. În plus, eșantionul prețios poate fi salvat utilizând o platformă de micro-
volum în care este necesară doar 1 uL de eșantion pentru analize complete. [16]O scurtă
explicație a procedurii spectrofotometriei include compararea absorbției unei probe
martor care nu conține un compus colorat cu o probă care conține un compus colorat.
Această colorare poate fi realizată fie printr-un colorant, cum ar fi colorantul Coomasie
Brilliant Blue G-250, măsurat la 595 nm sau printr-o reacție enzimatică, așa cum se vede
între β-galactozidază și ONPG (se transformă în galben), măsurată la 420 nm. [3] : 21–
119 Spectrofotometrul este utilizat pentru măsurarea compușilor colorați în regiunea
vizibilă a luminii (între 350 nm și 800 nm), [3] : 65astfel poate fi folosit pentru a găsi mai
multe informații despre substanța studiată. În experimentele biochimice, se alege o
proprietate chimică și / sau fizică și procedura utilizată este specifică acelei proprietăți
pentru a obține mai multe informații despre eșantion, cum ar fi cantitatea, puritatea,
activitatea enzimei etc. Se poate utiliza spectrofotometria. pentru o serie de tehnici, cum
ar fi determinarea absorbției optime a lungimii de undă a probelor, determinarea pH-ului
optim pentru absorbția probelor, determinarea concentrațiilor probelor necunoscute și
determinarea pKa a diferitelor probe. [3] : 21-119 Spectrofotometria este, de asemenea, un
proces util pentru purificarea proteinelor [17]și poate fi, de asemenea, utilizat ca metodă
pentru a crea teste optice ale unui compus. Datele spectrofotometrice pot fi, de asemenea,

utilizate împreună cu ecuația Beer-Lambert, , pentru a determina diverse relații între

transmitanță și concentrație și absorbanță și concentrație. [3] : 21-119 Deoarece un
spectrofotometru măsoară lungimea de undă a unui compus prin culoarea sa, se poate
adăuga o substanță de legare a colorantului astfel încât să poată suferi o schimbare de
culoare și să fie măsurată. [18] Este posibil să se cunoască concentrațiile unui amestec cu
două componente utilizând spectrele de absorbție ale soluțiilor standard ale fiecărui
component. Pentru a face acest lucru, este necesar să se cunoască coeficientul de extincție
al acestui amestec la două lungimi de undă și coeficienții de extincție ai soluțiilor care
conțin greutățile cunoscute ale celor două componente. [19]Spectrofotometrele au fost
dezvoltate și îmbunătățite de-a lungul deceniilor și au fost utilizate pe scară largă în
rândul chimiștilor. În plus, spectrofotometrele sunt specializate pentru măsurarea
valorilor absorbantei lungimii de undă a luminii UV sau a luminii vizibile. [3] : 21–119 Este
considerat a fi un instrument extrem de precis, care este, de asemenea, foarte sensibil și,
prin urmare, extrem de precis, în special în determinarea schimbării culorii. [20] Această
metodă este, de asemenea, convenabilă pentru utilizarea în experimentele de laborator,
deoarece este un proces ieftin și relativ simplu.
Spectrofotometrie vizibila la UV
Articol principal: Spectroscopie ultravioleta-vizibila

Majoritatea spectrofotometrelor sunt utilizate în regiunile UV și vizibile ale spectrului,

iar unele dintre aceste instrumente funcționează și în regiunea cu infraroșu apropiat .
Concentrația unei proteine poate fi estimată prin măsurarea DO la 280 nm datorită
prezenței triptofanului, tirozinei și fenilalaninei. Această metodă nu este foarte precisă,
deoarece compoziția proteinelor variază foarte mult, iar proteinele cu niciunul dintre
acești aminoacizi nu au absorbție maximă la 280 nm. Contaminarea cu acid nucleic poate
interfera, de asemenea. Această metodă necesită un spectrofotometru capabil să măsoare
în regiunea UV cu cuve de cuarț. [3] : 135
Spectroscopia ultraviolet-vizibilă (UV-vis) implică niveluri de energie care excită
tranzițiile electronice. Absorbția luminii UV-vis excită moleculele care se află în starea
fundamentală la stările lor excitate. [5]
Spectrofotometria regiunii vizibile 400–700 nm este utilizată pe scară largă
în știința colorimetriei . Este un fapt cunoscut că funcționează cel mai bine în gama de
0,2–0,8 producători de cerneală OD, companiile de tipografie, furnizorii de textile și mulți
alții, au nevoie de datele furnizate prin colorimetrie. Acestea efectuează citiri în fiecare 5-
20 nanometri de-a lungul regiunii vizibile și produc o curbă de reflectanță spectrală sau
un flux de date pentru prezentări alternative. Aceste curbe pot fi utilizate pentru a testa
un nou lot de coloranți pentru a verifica dacă se potrivește cu specificațiile, de exemplu,
standardele de imprimare ISO.
Spectrofotometrele cu regiuni vizibile tradiționale nu pot detecta dacă un colorant sau
materialul de bază are fluorescență. Acest lucru poate face dificilă gestionarea
problemelor de culoare dacă, de exemplu, una sau mai multe dintre cernelurile de
imprimare sunt fluorescente. În cazul în care un colorant conține fluorescență, se
folosește un spectrofotometru fluorescent bi-spectral . Există două setări majore pentru
spectrofotometre cu spectru vizual, d / 8 (sferic) și 0/45. Denumirile se datorează
geometriei sursei de lumină, a observatorului și a interiorului camerei de măsurare.
Oamenii de știință folosesc acest instrument pentru a măsura cantitatea de compuși
dintr-o probă. Dacă compusul este mai concentrat, mai multă lumină va fi absorbită de
probă; în limite mici, legea Beer – Lambertreține și absorbția dintre probe variază în
funcție de concentrație liniar. În cazul măsurătorilor de tipărire sunt utilizate în mod
obișnuit două setări alternative - fără / cu filtru uv pentru a controla mai bine efectul
strălucitorilor uv din stocul de hârtie.

Spectrofotometru micro-volum METTLER TOLEDO UV5Nano

Probele sunt de obicei preparate în cuve ; în funcție de regiunea de interes, acestea pot fi
construite din sticlă , plastic (regiunea vizibilă a spectrului de interes)
sau cuarț (regiunea de interes a spectrului UV îndepărtat). Unele aplicații necesită
măsurători de volum mic, care pot fi efectuate cu platforme de micro-volum.
Aplicații
 Estimarea concentratiei de carbon organic dizolvat
 Absorbanta specifica ultravioleta pentru metrica aromaticitatii
 Testul lui Bial pentru concentratia pentozelor

Aplicare experimentală
După cum este descris în secțiunea de aplicații, spectrofotometria poate fi utilizată atât
în analiza calitativă cât și cantitativă a ADN-ului, ARN-ului și proteinelor. Analiza
calitativă poate fi utilizată și spectrofotometrele sunt utilizate pentru a înregistra
spectrele compușilor prin scanarea regiunilor cu lungime de undă largă pentru a
determina proprietățile de absorbanță (intensitatea culorii) ale compusului la fiecare
lungime de undă. [5]Un experiment care poate demonstra diferitele utilizări pe care le
poate avea spectrofotometria vizibilă este separarea β-galactozidazei dintr-un amestec
de diverse proteine. În mare parte, spectrofotometria este utilizată cel mai bine pentru a
ajuta la cuantificarea cantității de purificare pe care a suferit-o eșantionul față de
concentrația totală de proteine. Prin efectuarea unei cromatografii de afinitate, B-
galactozidaza poate fi izolată și testată prin reacția probelor colectate cu ONPG și
determinarea dacă proba devine galbenă. [3] : 21-119 În urma acestei testări eșantionul la
420 nm pentru interacțiunea specifică cu ONPG și la 595 pentru un test Bradford,
cantitatea de purificare poate fi evaluată cantitativ. [3] : 21-119 În plus față de această
spectrofotometrie poate fi utilizată în tandem cu alte tehnici, cum ar fi electroforeza SDS-
Page, pentru a purifica și a izola diferite probe de proteine.
Spectrofotometrie IR
Articol principal: Spectroscopie în infrarosu

Spectrofotometrele proiectate pentru regiunea cu infraroșu sunt destul de diferite din

cauza cerințelor tehnice de măsurare din acea regiune. Un factor major este tipul de
senzori de fotos care sunt disponibili pentru diferite regiuni spectrale, dar măsurarea în
infraroșu este, de asemenea, dificilă, deoarece practic totul emite lumină IR ca radiație
termică, în special la lungimi de undă de peste 5 μm.

O altă complicație este că destul de multe materiale, cum ar fi sticla și plasticul, absorb
lumina infraroșie, făcându-l incompatibil ca mediu optic. Materialele optice ideale
sunt sărurile , care nu absorb puternic. Probele pentru spectrofotometrie IR pot fi pătate
între două discuri de bromură de potasiu sau măcinate cu bromură de potasiu și presate
într-o peletă. Acolo unde trebuie măsurate soluțiile apoase, clorura de
argint insolubilă este utilizată pentru a construi celula.
Spectroradiometre
Spectroradiometrele , care funcționează aproape ca spectrofotometrele din regiunea
vizibilă, sunt proiectate pentru a măsura densitatea spectrală a luminanților. Aplicațiile
pot include evaluarea și clasificarea iluminatului pentru vânzări de către producător sau
pentru ca clienții să confirme că lampa pe care au decis să o cumpere se încadrează în
specificațiile lor. Componente:
1. Sursa de lumina straluceste pe sau prin esantion.
2. Proba transmite sau reflecta lumina.
3. Detectorul detecteaza cata lumina a fost reflectata sau transmisa prin esantion.
4. Detectorul converteste apoi cantitatea de lumina transmisa sau reflectata de esantion
într-un numar.

Cromatografia

Cromatografia este o tehnică de laborator pentru separarea unui amestec. Amestecul

este dizolvat într-un fluid (gaz, solvent, apă, ...) numit faza mobilă, care îl transportă
printr-un sistem (o coloană, un tub capilar, o placă sau o foaie) pe care este fixat un
material numită faza staționară.Diferenții constituenți ai amestecului au afinități diferite
pentru faza staționară. Diferitele molecule stau mai mult sau mai scurt pe faza staționară,
în funcție de interacțiunile lor cu siturile sale de suprafață. Deci, ei călătoresc la diferite
viteze aparente în fluidul mobil, determinându-i să se separe. Separarea se bazează pe
partiționarea diferențială între fazele mobile și fazele staționare. Diferențele subtile
în coeficientul de partiție al unui compus au ca rezultat retenția diferențială pe faza
staționară și astfel afectează separarea. [1]
Cromatografia în strat subtire este utilizata pentru a separa componentele unui extract vegetal, ilustrand
experimentul cu pigmenti vegetali care au dat numele cromatografiei

Cromatografia poate fi pregătitoare sau analitică. Scopul cromatografiei preparative este

de a separa componentele unui amestec pentru utilizare ulterioară și, prin urmare, este
o formă de purificare . Cromatografia analitică se face în mod normal cu cantități mai mici
de material și este pentru stabilirea prezenței sau măsurarea proporțiilor relative ale
analiților într-un amestec. Cele două nu se exclud reciproc. [2]
Etimologie si pronuntie
Cromatografia, pronunțat / ˌ k r oʊ m ə t ɒ ɡ r ə f i / , este derivat
din greacă χρῶμα croma , care înseamnă " culoare " și γράφειν graphein , care înseamnă
"a scrie". Combinația acestor doi termeni a fost moștenită direct de la invenția tehnicii
utilizate pentru prima dată pentru separarea pigmenților. [3]
Istorie
Articol principal: Istoria cromatografiei

Cromatografia a fost concepută pentru prima dată în Rusia de către omul de

știință originar din Italia, Mikhail Tsvet, în 1900. [4] El a dezvoltat tehnica, a
inventat cromatografia, în primul deceniu al secolului al XX-lea, în primul rând pentru
separarea pigmenților vegetali precum clorofila , carotenii. , și xantofile . Deoarece
aceste componente se separă în benzi de diferite culori (verde, portocaliu și respectiv
galben), acestea au inspirat în mod direct numele tehnicii. Noi tipuri de cromatografie
dezvoltate în anii 1930 și 1940 au făcut tehnica utilă pentru multe procese de
separare . [5]
Tehnica cromatografiei s-a dezvoltat substanțial ca rezultat al activității lui Archer John
Porter Martin și Richard Laurence Millington Synge în anii 1940 și 1950, pentru care au
câștigat Premiul Nobel pentru chimie din 1952 . [6] Au stabilit principiile și tehnicile de
bază ale cromatografiei de partiție, iar munca lor a încurajat dezvoltarea rapidă a mai
multor metode cromatografice: cromatografia pe hârtie , cromatografia de gaze și ceea ce
va deveni cunoscut sub numele de cromatografie lichidă de înaltă performanță.. De
atunci, tehnologia a avansat rapid. Cercetătorii au descoperit că principiile principale ale
cromatografiei lui Tsvet ar putea fi aplicate în multe moduri diferite, rezultând diferitele
varietăți de cromatografie descrise mai jos. Progresele îmbunătățesc continuu
performanțele tehnice ale cromatografiei, permițând separarea moleculelor din ce în ce
mai asemănătoare.
Termeni de cromatografie
 Analit - substanta care trebuie separata în timpul cromatografiei. De asemenea, este în
mod normal ceea ce este necesar din amestec.
 Cromatografie analitică - utilizarea cromatografiei pentru a determina existenta si,
eventual, si concentratia de analiti într-o proba .
 Fază legata - o faza stationara care este legata covalent de particulele suport sau de
peretele interior al tubului coloanei.
 Cromatogramă - iesirea vizuala a cromatografului. In cazul unei separari optime, diferite
varfuri sau modele de pe cromatograma corespund diferitelor componente ale
amestecului separat.

Graficat pe axa x este timpul de retentie si se traseaza pe axa y un semnal (de exemplu
obtinut de un spectrofotometru , spectrometru de masa sau o varietate de alti detectori)
corespunzator raspunsului creat de analitii care ies din sistem. In cazul unui sistem optim
semnalul este proportional cu concentratia analitului specific separat.
 Cromatograf sau aerograf - un instrument care permite o separare sofisticata, de
exemplu separarea cromatografica cu gaz sau cromatografie lichida.
 Cromatografia - o metoda fizica de separare care distribuie componentele pentru a
separa între doua faze, una stationara (faza stationara), cealalta (faza mobila) deplasandu-
se într-o directie definita.
 Eluant (uneori eluant ortografiat ) - solventul sau amestecul de solvent utilizat în
cromatografia de eluare si este sinonim cu faza mobilă . [7]
 Eluat - amestecul de solut (vezi Eluite) si solvent (vezi Eluent) care iese din coloana. [7]
 Efluent - fluxul care curge dintr-o coloana cromatografica. In practica, este folosit sinonim
cu eluat , dar termenul se refera mai precis la fluxul independent de separarea care are
loc. [7]
  Eluite - un termen mai precis pentru solut sau analit . Este o componenta de esantion care
iese din coloana cromatografica. [7]
 Seria eluotropă - o lista de solventi clasificati în functie de puterea lor de eluare.
 Faza imobilizată - o faza stationara care este imobilizata pe particulele suport sau pe
peretele interior al tubului coloanei.
 faza mobilă - faza care se misca într-o directie definita. Poate fi un lichid (LC si
electrocromatografie capilara (CEC)), un gaz (GC) sau un fluid supercritic (cromatografie
supercritic-fluid, SFC). Faza mobila consta în faptul ca proba este separata / analizata si
solventul care muta proba prin coloana. In cazul HPLC , faza mobila consta dintr-un
solvent (i) nepolari, cum ar fi hexanul în faza normala sau un solvent polar, cum ar fi
metanolul în cromatografie în faza inversa, iar proba fiind separata. Faza mobila se
deplaseaza prin coloana de cromatografie (faza stationara) unde proba interactioneaza cu
faza stationara si este separata.
 Cromatografia preparativă - utilizarea cromatografiei pentru a purifica cantitati
suficiente de substanta pentru o utilizare ulterioara, mai degraba decat pentru analiza.
 Timp de retenție - timpul caracteristic necesar unui anumit analit pentru a trece prin
sistem (de la intrarea coloanei la detector) în conditii stabilite. A se vedea, de
asemenea: indicele de pastrare al lui Kovats
 Eșantion - materia analizata în cromatografie. Poate consta dintr-o singura componenta
sau poate fi un amestec de componente. Atunci cand esantionul este tratat în cursul unei
analize, faza sau fazele care contin analitii de interes este / sunt denumite esantion, în
timp ce tot ceea ce nu prezinta interes separat de esantion înainte sau în cursul analizei
este mentionat ca deseuri.
 Solut - componentele probei în cromatografia de partitie.
 Solvent - orice substanta capabila sa solubilizeze o alta substanta si, în special, faza
mobila lichida în cromatografie lichida.
 Faza staționară - substanta fixata pe loc pentru procedura de cromatografie. Exemplele
includ stratul de silice în cromatografie în strat subtire
 Detector - instrumentul utilizat pentru detectarea calitativa si cantitativa a analitilor
dupa separare.

Cromatografia se bazează pe conceptul de coeficient de partiție. Orice partiții dizolvate

între doi solvenți nemiscibili. Când facem un solvent imobil (prin adsorbție pe o matrice
solidă de suport) și altul mobil, rezultă cele mai frecvente aplicații ale
cromatografiei. Dacă suportul matricei sau faza staționară este polar (de exemplu, hârtie,
silice etc.) este cromatografie în fază înainte, iar dacă este nepolar (C-18) este fază
inversă.

Tehnici prin forma patului cromatografic

Cromatografia pe coloană
Informatii suplimentare: Cromatografie pe coloana
Cromatografia pe coloană este o tehnică de separare în care patul staționar se află într-
un tub. Particulele fazei staționare solide sau suportul acoperit cu o fază staționară lichidă
pot umple întregul volum interior al tubului (coloana ambalată) sau pot fi concentrate pe
peretele interior al tubului sau de-a lungul acestuia, lăsând o cale deschisă, nelimitată,
pentru faza mobilă partea de mijloc a tubului (coloană tubulară deschisă). Diferențele în
ratele de mișcare prin mediu sunt calculate în funcție de timpii de retenție diferiți ai
eșantionului. [8] [9] În 1978, W. Clark Still a introdus o versiune modificată a
cromatografiei pe coloană numită flash column chromatography (flash). [10] [11]Tehnica
este foarte asemănătoare cu cromatografia tradițională pe coloană, cu excepția faptului
că solventul este condus prin coloană prin aplicarea unei presiuni pozitive. Acest lucru a
permis efectuarea majorității separărilor în mai puțin de 20 de minute, cu separări
îmbunătățite în comparație cu vechea metodă. Sistemele moderne de cromatografie flash
sunt vândute ca cartușe din plastic preambalate, iar solventul este pompat prin
cartuș. Sistemele pot fi, de asemenea, legate de detectoare și colectoare de fracțiuni care
oferă automatizare. Introducerea pompelor cu gradient a dus la separări mai rapide și la
o utilizare mai mică a solventului.
În adsorbția în pat expandat , se folosește un pat fluidizat, mai degrabă decât o fază solidă
realizată de un pat ambalat. Acest lucru permite omiterea etapelor inițiale de curățare,
cum ar fi centrifugarea și filtrarea, pentru bulionele de cultură sau suspensiile de celule
sparte.
Fosfoceluloză cromatografia utilizează afinitatea de legare a multor proteine de legare
a ADN - ului pentru fosfoceluloză. Cu cât interacțiunea unei proteine cu ADN este mai
puternică, cu atât este mai mare concentrația de sare necesară pentru a elua acea
proteină. [12]
Cromatografia plană
Cromatografia plană este o tehnică de separare în care faza staționară este prezentă ca
sau pe un plan. Planul poate fi o hârtie, care servește ca atare sau impregnat de o
substanță ca pat staționar ( cromatografie de hârtie ) sau un strat de particule solide
răspândite pe un suport, cum ar fi o placă de sticlă ( cromatografie în strat
subțire ). Compuși diferiți din amestecul de probă parcurg distanțe diferite în funcție de
cât de puternic interacționează cu faza staționară în comparație cu faza mobilă. Factorul
specific de retenție ( Rf ) al fiecărui produs chimic poate fi utilizat pentru a ajuta la
identificarea unei substanțe necunoscute.
Cromatografia pe hârtie

Cromatografia pe hartie este în desfasurare

Cromatografia pe hartie

Informatii suplimentare: Cromatografia pe hartie

Cromatografia pe hârtie este o tehnică care implică plasarea unui punct mic sau a unei
linii de soluție de probă pe o bandă de hârtie de cromatografie . Hârtia este plasată într-
un recipient cu un strat superficial de solvent și sigilată. Pe măsură ce solventul crește
prin hârtie, se întâlnește cu amestecul de probă, care începe să călătorească pe hârtie cu
solventul. Această lucrare este realizată din celuloză , o substanță polară , iar compușii
din amestec se deplasează mai departe dacă sunt mai puțin polari. Mai multe substanțe
polare se leagă mai repede cu hârtia de celuloză și, prin urmare, nu călătoresc atât de
departe.
Cromatografie în strat subțire (TLC)
Informatii suplimentare: Cromatografie în strat subtire
Cromatografia în strat subtire

Cromatografia în strat subțire (TLC) este o tehnică de laborator utilizată pe scară largă,
utilizată pentru a separa diferiți biochimici pe baza atracțiilor lor relative la fazele
staționare și mobile. Este similar cu cromatografia pe hârtie . Cu toate acestea, în loc să se
utilizeze o fază staționară de hârtie, aceasta implică o fază staționară a unui strat subțire
de adsorbant cum ar fi silicagel , alumină sau celuloză pe un substrat plat, inert . TLC este
foarte versatil; mai multe probe pot fi separate simultan pe același strat, ceea ce îl face
foarte util pentru screening-ul aplicațiilor, cum ar fi testarea nivelurilor medicamentelor
și a purității apei. [13]Posibilitatea de contaminare încrucișată este redusă, deoarece
fiecare separare se efectuează pe un strat nou. În comparație cu hârtia, are avantajul unor
rulări mai rapide, separări mai bune, o analiză cantitativă mai bună și alegerea între
diferiți adsorbanți. Pentru o rezoluție chiar mai bună și o separare mai rapidă care
utilizează mai puțin solvent, se poate utiliza TLC de înaltă performanță . O utilizare
populară mai veche a fost aceea de a diferenția cromozomii prin observarea distanței în
gel (separarea a fost o etapă separată).
Cromatografia cu deplasare
Principiul de bază al cromatografiei de deplasare este: O moleculă cu o afinitate ridicată
pentru matricea de cromatografie (dislocatorul) concurează eficient pentru siturile de
legare și astfel deplasează toate moleculele cu afinități mai mici. [14]Există diferențe
distincte între deplasare și cromatografie de eluare. În modul de eluare, substanțele apar
de obicei dintr-o coloană în vârfuri înguste, gaussiene. Se dorește o separare largă a
vârfurilor, de preferință până la linia de bază, pentru o purificare maximă. Viteza la care
orice componentă a unui amestec se deplasează pe coloană în modul de eluare depinde
de mulți factori. Dar pentru ca două substanțe să se deplaseze la viteze diferite și, prin
urmare, să fie rezolvate, trebuie să existe diferențe substanțiale în unele interacțiuni între
biomolecule și matricea de cromatografie. Parametrii de funcționare sunt reglați pentru
a maximiza efectul acestei diferențe. În multe cazuri, separarea de bază a vârfurilor poate
fi realizată numai cu eluare în gradient și încărcări reduse pe coloană. Astfel, două
dezavantaje ale cromatografiei în mod de eluție, în special la scara pregătitoare,sunt
complexe operaționale, datorită pompării cu gradient a solventului și un debit redus,
datorită încărcărilor reduse pe coloană. Cromatografia cu deplasare are avantaje față de
cromatografia prin eluție, deoarece componentele sunt rezolvate în zone consecutive de
substanțe pure, mai degrabă decât „vârfuri”. Deoarece procesul profită de neliniaritatea
izotermelor, o coloană mai mare poate fi separată pe o coloană dată, cu componentele
purificate recuperate la concentrații semnificativ mai mari.o coloană mai mare poate fi
separată pe o coloană dată, cu componentele purificate recuperate la concentrații
semnificativ mai mari.o coloană mai mare poate fi separată pe o coloană dată cu
componentele purificate recuperate la concentrații semnificativ mai mari.
Tehnici dupa starea fizica a fazei mobile
Cromatografia gazoasă
Informatii suplimentare: Cromatografia gazoasa

Cromatografia gazoasă (GC), cunoscută și sub denumirea de cromatografie gaz-lichid

(GLC), este o tehnică de separare în care faza mobilă este un gaz. Separarea
cromatografică a gazelor se efectuează întotdeauna într-o coloană, care este de obicei
„ambalată” sau „capilară”. Coloanele împachetate sunt caii de lucru de rutină ai
cromatografiei cu gaze, fiind mai ieftine și mai ușor de utilizat și oferind deseori
performanțe adecvate. Coloanele capilare oferă, în general, o rezoluție mult superioară și,
deși mai scumpe devin din ce în ce mai utilizate, în special pentru amestecurile complexe.
Mai mult, coloanele capilare pot fi împărțite în trei clase: coloane tubulare deschise cu
strat poros (PLOT), tubulare deschise acoperite cu perete (WCOT) și coloane tubulare
deschise acoperite cu suport (SCOT). Coloanele PLOT sunt unice într-un mod în care faza
staționară este adsorbită de pereții coloanei,în timp ce coloanele WCOT au o fază
staționară care este legată chimic de pereți. Coloanele SCOT sunt într-un fel combinația
celor două tipuri menționate într-un mod în care au particule suport aderate la pereții
coloanei, dar acele particule au faza lichidă legată chimic de ele.[15] Ambele tipuri de
coloane sunt realizate din materiale non-adsorbante și inerte chimic. Oțelul inoxidabil și
sticla sunt materialele obișnuite pentru coloanele ambalate și cuarț sau siliciu topit
pentru coloanele capilare.
Cromatografia gazoasă se bazează pe un echilibru de partiție a analitului între o fază
staționară lichidă solidă sau vâscoasă (adesea un material lichid pe bază de silicon) și un
gaz mobil (cel mai adesea heliu). Faza staționară este aderată la interiorul unui tub de
sticlă sau de siliciu topit (de obicei 0,53 - 0,18 mm diametru interior) sau a unei matrici
solide în interiorul unui tub metalic mai mare (o coloană ambalată). Este utilizat pe scară
largă în chimia analitică ; deși temperaturile ridicate utilizate în GC îl fac nepotrivit
pentru biopolimeri sau proteine cu greutate moleculară mare (căldura le denaturează),
întâlnite frecvent în biochimie , este foarte potrivit pentru utilizare în
domeniul petrochimic , monitorizarea mediului șiremedierea și domeniile chimice
industriale . De asemenea, este utilizat pe scară largă în cercetarea chimică.
Cromatografie lichidă

Aparat HPLC preparativ

Cromatografia lichidă (LC) este o tehnică de separare în care faza mobilă este un
lichid. Poate fi realizat fie într-o coloană, fie într-un plan. Cromatografia lichidă actuală
care utilizează în general particule de ambalare foarte mici și o presiune relativ ridicată
este denumită cromatografie lichidă de înaltă performanță (HPLC).
În HPLC proba este forțată de un lichid la presiune ridicată (faza mobilă) printr-o coloană
care este împachetată cu o fază staționară compusă din particule de formă neregulată sau
sferică, un strat monolitic poros sau o membrană poroasă. HPLC este împărțit istoric în
două sub-clase diferite bazate pe polaritatea fazelor mobile și staționare. Metodele în
care faza staționară este mai polară decât faza mobilă (de exemplu, toluenul ca fază
mobilă, silica ca fază staționară) sunt denumite cromatografie lichidă în fază normală
(NPLC) și opusul (de exemplu, amestecul de apă-metanol ca mobil fază și C18
( octadecilsilil ) ca fază staționară) este denumită cromatografie lichidă în fază inversă
(RPLC).
Tehnicile specifice din această rubrică largă sunt enumerate mai jos.

Cromatografia de afinitate
Informatii suplimentare: Cromatografia de afinitate

Cromatografia de afinitate [16] se bazează pe interacțiunea selectivă non-covalentă între

un analit și molecule specifice. Este foarte specific, dar nu foarte robust. Este adesea
folosit în biochimie la purificarea proteinelor legate de etichete. Aceste proteine de
fuziune sunt marcate cu compuși precum His-tags , biotină sau antigeni , care se leagă în
mod specific de faza staționară. După purificare, unele dintre aceste etichete sunt de
obicei îndepărtate și se obține proteina pură.
Cromatografia de afinitate utilizează adesea afinitatea unei biomolecule pentru un metal
(Zn, Cu, Fe etc.). Coloanele sunt adesea pregătite manual. Coloanele tradiționale de
afinitate sunt folosite ca etapă pregătitoare pentru eliminarea biomoleculelor nedorite.

Cu toate acestea, există tehnici HPLC care utilizează proprietăți de cromatografie de

afinitate. Cromatografia de afinitate a metalelor imobilizate (IMAC) [17] [18] este utilă
pentru a separa moleculele menționate mai sus pe baza afinității relative pentru metal
(adică Dionex IMAC). Adesea aceste coloane pot fi încărcate cu metale diferite pentru a
crea o coloană cu o afinitate vizată. [19]
Cromatografia fluidelor supercritice
Articolul principal: Cromatografia fluidelor supercritice

Cromatografia fluidelor supercritice este o tehnică de separare în care faza mobilă este
un fluid peste și relativ aproape de temperatura și presiunea sa critică.

Tehnici prin mecanism de separare

Cromatografia cu schimb de ioni
Informatii suplimentare: Cromatografia cu schimb de ioni

Cromatografia cu schimb de ioni (denumită de obicei cromatografie cu ioni) folosește un

mecanism de schimb de ioni pentru a separa analiții pe baza sarcinilor lor respective. De
obicei, este realizat în coloane, dar poate fi util și în modul plan. Cromatografia cu schimb
de ioni utilizează o fază staționară încărcată pentru a separa compușii încărcați,
inclusiv anioni , cationi , aminoacizi , peptide și proteine . În metodele convenționale faza
staționară este o rășină schimbătoare de ioni care transportă grupări
funcționale încărcatecare interacționează cu grupuri încărcate opus ale compusului de
reținut. Există două tipuri de cromatografie cu schimb de ioni: schimb de cationi și schimb
de anioni. În cromatografia cu schimb de cationi, faza staționară are sarcină negativă, iar
ionul schimbabil este un cation, în timp ce, în cromatografia cu schimb de anioni, faza
staționară are sarcină pozitivă, iar ionul schimbabil este un anion. [20] Cromatografia cu
schimb de ioni este utilizată în mod obișnuit pentru purificarea proteinelor
folosind FPLC .
Cromatografia de excludere a mărimii
Informatii suplimentare: Cromatografie de excludere a marimii

Cromatografia de excludere a mărimii (SEC) este, de asemenea, cunoscută sub numele

de cromatografie cu permeație pe gel (GPC) sau cromatografie cu filtrare pe gelși separă
moleculele în funcție de mărimea lor (sau mai exact în funcție de diametrul lor
hidrodinamic sau de volumul hidrodinamic). Moleculele mai mici pot intra în porii
mediului și, prin urmare, moleculele sunt prinse și eliminate din fluxul fazei mobile.
Timpul mediu de ședere în pori depinde de dimensiunea efectivă a moleculelor de analit.
Cu toate acestea, moleculele care sunt mai mari decât dimensiunea medie a porilor din
ambalaj sunt excluse și, prin urmare, nu suferă în mod esențial retenție; astfel de specii
sunt primele eluate. Este, în general, o tehnică de cromatografie cu rezoluție redusă și,
prin urmare, este adesea rezervată pentru etapa finală de „lustruire” a unei purificări. De
asemenea, este util pentru determinarea structurii terțiare și a structurii cuaternarede
proteine purificate, mai ales că poate fi efectuată în condiții de soluție nativă .
Separare cromatografică de adsorbție în pat extins
Informatii suplimentare: adsorbtie în pat extins

O coloană de adsorbție cromatografică în pat expandat (EBA) pentru un proces de

separare biochimică cuprinde un distribuitor de lichid de egalizare a presiunii având o
funcție de auto-curățare sub o placă de sită de blocare poroasă în partea de jos a patului
extins, un ansamblu de duză din partea superioară având o funcție de curățare în spate în
partea superioară a patului extins, o distribuție mai bună a lichiorului materiei prime
adăugată în patul extins, asigurându-se că fluidul trecut prin stratul de pat expandat
prezintă o stare de curgere a pistonului. Stratul de pat expandat afișează o stare de
curgere a pistonului. Coloana de separare cromatografică cu pat expandat are avantaje
de a crește eficiența de separare a patului expandat.

Cromatografia cu adsorbție în pat expandat (EBA) este o tehnică convenabilă și eficientă

pentru captarea proteinelor direct dintr-o probă brută neclarificată. În cromatografia
EBA, patul așezat este mai întâi extins prin fluxul ascendent al tamponului de echilibrare.
Furajul brut, un amestec de proteine solubile, contaminanți, celule și resturi celulare, este
apoi trecut în sus prin patul expandat. Proteinele țintă sunt captate pe adsorbant, în timp
ce particulele și contaminanții trec. O modificare a tamponului de eluare menținând în
același timp fluxul ascendent are ca rezultat desorbția proteinei țintă în modul cu pat
expandat. Alternativ, dacă fluxul este inversat, particulele adsorbite se vor stabili rapid și
proteinele pot fi desorbite de un tampon de eluție. Modul utilizat pentru eluare (pat extins
versus pat stabilit) depinde de caracteristicile furajului. După eluare,adsorbantul este
curățat cu o soluție predefinită de curățare în loc (CIP), cu curățare urmată fie de
regenerarea coloanei (pentru utilizare ulterioară), fie de depozitare.

Tehnici speciale
Cromatografie în fază inversă
Articol principal: Cromatografie în faza inversa
Cromatografia în fază inversă (RPC) este orice procedură de cromatografie lichidă în care
faza mobilă este semnificativ mai polară decât faza staționară. Se numește astfel deoarece
în cromatografia lichidă în fază normală, faza mobilă este semnificativ mai puțin polară
decât faza staționară. Moleculele hidrofobe din faza mobilă tind să se adsorbe la faza
staționară relativ hidrofobă. Moleculele hidrofile din faza mobilă vor tinde să elueze mai
întâi. Coloanele de separare cuprind de obicei un lanț de carbon C8 sau C18 legat de un
substrat al particulelor de silice.

Cromatografie de interacțiune hidrofobă

Interacțiunile hidrofobe între proteine și matricea cromatografică pot fi exploatate
pentru a purifica proteinele. În cromatografia de interacțiune hidrofobă, materialul
matricei este ușor substituit cu grupări hidrofobe. Aceste grupări pot varia de la grupări
metil, etil, propil, octil sau fenil. [21] La concentrații mari de sare, lanțurile laterale
nepolare de pe suprafață pe proteine „interacționează” cu grupările hidrofobe; adică
ambele tipuri de grupuri sunt excluse de solventul polar (efectele hidrofobe sunt mărite
de puterea ionică crescută). Astfel, proba este aplicată pe coloană într-un tampon care
este foarte polar. Eluantul este de obicei un tampon apos cu concentrații scăzute de sare,
concentrații crescânde de detergent (care perturbă interacțiunile hidrofobe) sau
modificări ale pH-ului.
În general, cromatografia cu interacțiune hidrofobă (HIC) este avantajoasă dacă proba
este sensibilă la modificarea pH-ului sau la solvenții duri utilizați în mod obișnuit în alte
tipuri de cromatografie, dar nu și la concentrații mari de sare. În mod obișnuit, cantitatea
de sare din tampon este variată. În 2012, Müller și Franzreb au descris efectele
temperaturii asupra HIC folosind albumina de ser bovin (BSA) cu patru tipuri diferite de
rășină hidrofobă. Studiul a modificat temperatura pentru a efectua afinitatea de legare a
BSA pe matrice. S-a ajuns la concluzia că temperatura ciclului de la 50 la 10 grade nu ar fi
adecvată pentru a spăla efectiv toate BSA din matrice, dar ar putea fi foarte eficientă dacă
coloana ar fi utilizată doar de câteva ori. [22] Utilizarea temperaturii pentru a efectua
schimbarea permite laboratoarelor să reducă costurile la cumpărarea sării și să
economisească bani.
Dacă se vor evita concentrații mari de sare, împreună cu fluctuațiile de temperatură,
puteți utiliza un hidrofob mai mult pentru a concura cu proba dvs. pentru a o elua. [sursă]
Această așa-numită metodă independentă de sare a HIC a arătat o izolare directă a
imunoglobulinei umane G (IgG) de ser cu randament satisfăcător și a folosit Beta-
ciclodextrina ca concurent pentru a deplasa IgG din matrice. [23] Acest lucru deschide în
mare măsură posibilitatea utilizării HIC cu probe sensibile la sare, deoarece știm că
concentrațiile mari de sare precipită proteinele.
Cromatografie hidrodinamică
Cromatografia hidrodinamică (HDC) este derivată din fenomenul observat că picăturile
mari se mișcă mai repede decât cele mici. [24] Într-o coloană, acest lucru se întâmplă
deoarece centrul de masă al picăturilor mai mari este împiedicat să fie la fel de aproape
de părțile laterale ale coloanei ca picăturile mai mici din cauza dimensiunii lor globale
mai mari. [25] Picăturile mai mari vor elua mai întâi din mijlocul coloanei, în timp ce
picăturile mai mici se lipesc de părțile laterale ale coloanei și eluează ultima. Această
formă de cromatografie este utilă pentru separarea analiților prin masa , dimensiunea,
forma și structura molară atunci când este utilizată împreună cu detectoare
de împrăștiere a luminii , viscometre și refractometre .[26] Cele două tipuri principale de
HDC sunt tubul deschis și coloana ambalată . Tubul deschis oferă timpi de separare
rapidă pentru particulele mici, în timp ce coloana HDC ambalată poate crește rezoluția și
este mai potrivită pentru particulele cu o masă moleculară medie mai mare

decât daltoni . [27] HDC diferă de alte tipuri de cromatografie, deoarece separarea
are loc doar în volumul interstițial, care este volumul care înconjoară și între particule
într-o coloană ambalată. [28]
HDC împărtășește aceeași ordine de eluare ca și cromatografia de excludere a
mărimii (SEC), dar cele două procese variază încă în multe feluri. [27] Într-un studiu care
compară cele două tipuri de separare, Isenberg, Brewer, Côté și Striegel folosesc ambele
metode pentru caracterizarea polizaharidelor și concluzionează că HDC, cuplat
cu dispersia multianghiulară a luminii (MALS), realizează o distribuție mai precisă
a masei molare în comparație cu off- linia MALS decât SEC într-un timp semnificativ mai
mic. [29] Acest lucru se datorează în mare măsură SEC fiind o tehnică mai distructivă din
cauza porilor din coloană care degradează analitul în timpul separării, care tinde să aibă
impact asupra distribuției masei. [29]Cu toate acestea, principalul dezavantaj al HDC
este rezoluția scăzută a vârfurilor de analit, ceea ce face ca SEC să fie o opțiune mai viabilă
atunci când este utilizată cu substanțe chimice care nu sunt ușor degradabile și unde
eluția rapidă nu este importantă. [30]
HDC joacă un rol deosebit de important în domeniul microfluidicelor . Primul aparat de
succes pentru sistemul HDC-on-a-chip a fost propus de Chmela și colab. în
2002. [31] Proiectarea lor a reușit să realizeze separări folosind un canal lung de 80 mm
pe scara de timp de 3 minute pentru particule cu diametre cuprinse între 26 și 110 nm,
dar autorii au exprimat nevoia de a îmbunătăți parametrii de retenție
și dispersie . [31] Într-o publicație din 2010 a lui Jellema, Markesteijn, Westerweel și
Verpoorte, implementarea HDC cu un flux bidirecțional recirculant a dus la o rezoluție
înaltă, separare bazată pe dimensiuni, cu doar un canal lung de 3 mm. [32]Având un canal
atât de scurt și o rezoluție ridicată a fost văzut ca deosebit de impresionant, având în
vedere că studiile anterioare au folosit canale cu lungimea de 80 mm. [31] Pentru o
aplicație biologică, în 2007, Huh și colab. a propus un dispozitiv de sortare microfluidic
bazat pe HDC și gravitațional, care a fost util pentru prevenirea particulelor potențial
periculoase cu diametrul mai mare de 6 microni să pătrundă în sânge atunci când se
injectează substanțe de contrast în ultrasunete . [33] Acest studiu a făcut, de asemenea,
progrese în ceea ce privește sustenabilitatea mediului în microfluidice, din cauza lipsei
de componente electronice exterioare care conduc fluxul, care a venit ca un avantaj al
utilizării unui dispozitiv bazat pe gravitație.

Cromatograf bidimensional GCxGC-TOFMS la Facultatea de chimie din GUT Gdansk , Polonia , 2016

Cromatografia bidimensională
În unele cazuri, selectivitatea oferită de utilizarea unei coloane poate fi insuficientă
pentru a oferi rezoluția analiților în probe complexe. Cromatografia bidimensională are
ca scop creșterea rezoluției acestor vârfuri prin utilizarea unei a doua coloane cu
proprietăți fizico-chimice ( clasificare chimică ) diferite. [34] [35] Deoarece mecanismul de
reținere pe acest nou suport solid este diferit de prima separare dimensională, poate fi
posibilă separarea compușilor prin cromatografie bidimensională care nu se distinge
prin cromatografie unidimensională. Mai mult, separarea pe a doua dimensiune are loc
mai repede decât prima dimensiune. [34]Un exemplu de separare bidimensională TLC
este în cazul în care proba este observată la un colț al unei plăci pătrate, dezvoltată, uscată
la aer, apoi rotită cu 90 ° și de obicei reamenajată într-un al doilea sistem de
solvenți. Cromatografia bidimensională poate fi aplicată separărilor GC sau
LC. [34] [35] Această metodă de separare poate fi utilizată și într-o abordare de tăiere a
inimii, [36] în cazul în care regiunile specifice de interes pe prima dimensiune sunt
selectate pentru separare de a doua dimensiune sau într-o abordare
cuprinzătoare, [34] [35] unde toți analiții din prima dimensiune suferă separarea a doua
dimensiune.
Cromatografie simulată pe pat mobil
Informatii suplimentare: pat mobil simulat

Tehnica patului mobil simulat (SMB) este o variantă a cromatografiei lichide de înaltă
performanță; este folosit pentru a separa particulele și / sau compușii chimici care ar fi
dificil sau imposibil de rezolvat altfel. Această separare crescută este cauzată de un
aranjament de supapă și coloană care este utilizat pentru a prelungi faza staționară la
infinit. În tehnica patului mobil de cromatografie preparativă, intrarea de alimentare și
recuperarea analitului sunt simultane și continue, dar din cauza dificultăților practice cu
un pat în mișcare continuă, a fost propusă tehnica simulată a patului mobil. În tehnica
simulată a patului mobil în loc de a mișca patul, poziția de intrare a probei și pozițiile de
ieșire ale analitului sunt mutate continuu, dând impresia unui pat în mișcare. Adevărata
cromatografie cu pat mobil (TMBC) este doar un concept teoretic. Simularea sa,SMBC se
realizează prin utilizarea unei multitudini de coloane în serie și a unui aranjament
complex de supape, care asigură alimentarea probei și solventului, precum și prelevarea
analitului și a deșeurilor în locațiile corespunzătoare ale oricărei coloane, permițând
comutarea la intervale regulate a intrării probei. într-o direcție, intrarea solventului în
direcția opusă, schimbând în același timp pozitiile analitului și decolării deșeurilor.

Cromatografie gazoasă cu piroliză

Piroliza - cromatografia gazoasă - spectrometria de masă este o metodă de analiză
chimică în care proba este încălzită până la descompunere pentru a produce molecule
mai mici care sunt separate prin cromatografie gazoasă și detectate folosind
spectrometria de masă.
Piroliza este descompunerea termică a materialelor într-o atmosferă inertă sau în vid.
Eșantionul este pus în contact direct cu o sârmă de platină sau plasat într-un eșantion de
cuarț și încălzit rapid la 600-1000 ° C. În funcție de aplicație se utilizează temperaturi și
mai ridicate. Trei tehnici diferite de încălzire sunt utilizate în pirolizatorii reali: cuptor
izotermic, încălzire inductivă (filament Curie Point) și încălzire rezistivă folosind
filamente de platină. Moleculele mari se scindează în cele mai slabe puncte și produc
fragmente mai mici și mai volatile. Aceste fragmente pot fi separate prin cromatografie
gazoasă. Cromatogramele pirolizei GC sunt de obicei complexe deoarece se formează o
gamă largă de produse de descompunere diferite.Datele pot fi utilizate fie ca amprentă
pentru a dovedi identitatea materialului, fie datele GC / MS sunt utilizate pentru a
identifica fragmente individuale pentru a obține informații structurale. Pentru a crește
volatilitatea fragmentelor polare, diferiți reactivi de metilare pot fi adăugați la o probă
înainte de piroliză.

În afară de utilizarea pirolizatoarelor dedicate, piroliza GC a probelor solide și lichide

poate fi efectuată direct în interiorul injectoarelor cu vaporizator de temperatură
programabilă (PTV) care asigură încălzire rapidă (până la 30 ° C / s) și temperaturi
maxime ridicate de 600-650 ° C. Acest lucru este suficient pentru unele aplicații de
piroliză. Principalul avantaj este că nu trebuie achiziționat niciun instrument dedicat, iar
piroliza poate fi efectuată ca parte a analizei de rutină a GC. În acest caz, trebuie folosite
căptușeli de intrare GC cuarț. Pot fi obținute date cantitative și se publică și rezultate bune
ale derivatizării în interiorul injectorului PTV.

Cromatografie lichidă cu proteine rapide

Informatii suplimentare: Cromatografie rapida pe lichid cu proteine

Cromatografia lichidă cu proteine rapide (FPLC), este o formă de cromatografie lichidă

care este adesea utilizată pentru a analiza sau purifica amestecurile de proteine. Ca și în
alte forme de cromatografie, separarea este posibilă deoarece diferitele componente ale
unui amestec au afinități diferite pentru două materiale, un fluid în mișcare („faza
mobilă”) și un solid poros (faza staționară). În FPLC faza mobilă este o soluție apoasă sau
„tampon”. Debitul tamponului este controlat de o pompă cu deplasare pozitivă și este în
mod normal menținut constant, în timp ce compoziția tamponului poate fi variată prin
extragerea fluidelor în proporții diferite din două sau mai multe rezervoare externe. Faza
staționară este o rășină compusă din margele, de obicei din agaroză reticulată, ambalate
într-o coloană cilindrică de sticlă sau plastic.Rășinile FPLC sunt disponibile într-o gamă
largă de mărimi de mărgele și liganzi de suprafață, în funcție de aplicație.

Cromatografie contracurent
Informatii suplimentare: Cromatografie contracurent

Cromatografia de contracurent (CCC) este un tip de cromatografie lichid-lichid, în care

atât fazele staționare cât și cele mobile sunt lichide, iar faza staționară lichidă este
menținută stagnată de o forță centrifugă puternică.

Cromatografie contracurent hidrodinamic (CCC)

Principiul de funcționare al instrumentului CCC necesită o coloană constând dintr-un tub
deschis înfășurat în jurul unei bobine. Bobina este rotită într-o mișcare giratorie cu axa
dublă (un cardioid), ceea ce face ca un câmp de gravitație variabilă (G) să acționeze
asupra coloanei în timpul fiecărei rotații. Această mișcare determină coloana să vadă o
etapă de partiționare pe rotație și componentele probei separate în coloană datorită
coeficientului lor de partiționare între cele două faze lichide nemiscibile utilizate. Există
multe tipuri de CCC disponibile astăzi. Acestea includ HSCCC (High Speed CCC) și HPCCC
(High Performance CCC). HPCCC este cea mai recentă și mai performantă versiune a
instrumentelor disponibile în prezent.

Cromatografie hidrostatică în contracurent sau cromatografie de partiție centrifugă (CPC)

Informatii suplimentare: Cromatografie de partitie centrifuga
În instrumentul CPC, coloana constă dintr-o serie de celule interconectate prin conducte
atașate la un rotor. Acest rotor se rotește pe axa sa centrală creând câmpul centrifugal
necesar pentru menținerea fazei staționare în loc. Procesul de separare în CPC este
reglementată numai de compartimentarea soluți între fazele staționare și mobile,
mecanism care poate fi ușor descrise cu ajutorul coeficienților de partiție ( K D ) de
soluți. Instrumentele CPC sunt disponibile comercial pentru separări de laborator, pilot
și la scară industrială, cu diferite dimensiuni de coloane, de la aproximativ 10 mililitri
până la 10 litri de volum.
Cromatografie periodică contracurent
Informatii suplimentare: Cromatografie periodica în contracurent

Spre deosebire de cromatografia contra-curent (vezi mai sus), cromatografia periodică în

contracurent (PCC) utilizează o fază staționară solidă și doar o fază mobilă lichidă. Astfel,
este mult mai asemănător cu cromatografia convențională de afinitatedecât pentru a
contracara cromatografia curentă. PCC folosește mai multe coloane, care în timpul fazei
de încărcare sunt conectate în linie. Acest mod permite supraîncărcarea primei coloane
din această serie fără a pierde produsul, care deja străpunge coloana înainte ca rășina să
fie complet saturată. Produsul descoperit este capturat în coloana (coloanele)
următoare. Într-un pas următor coloanele sunt deconectate unele de altele. Prima
coloană este spălată și eluată, în timp ce celelalte coloane sunt încă încărcate. Odată ce
prima coloană (inițial) este reechilibrată, aceasta este reintrodusă în fluxul de încărcare,
dar ca ultima coloană. Procesul continuă apoi într-un mod ciclic.
Cromatografia chirală
Cromatografia chirală implică separarea stereoizomerilor. În cazul enantiomerilor,
aceștia nu au diferențe chimice sau fizice în afară de a fi imagini oglindă
tridimensionale. Cromatografia convențională sau alte procese de separare sunt
incapabile să le separe. Pentru a permite separările chirale să aibă loc, fie faza mobilă, fie
faza staționară trebuie să fie ele însele chiralizate, oferind afinități diferite între
analiți. Coloanele HPLC de cromatografie chirală (cu o fază staționară chirală) atât în fază
normală, cât și în fază inversă sunt disponibile comercial.
Cromatografie apoasă în fază normală
Cromatografia în fază normală apoasă (ANP) se caracterizează prin comportamentul de
eluare al modului clasic de fază normală (adică în care faza mobilă este semnificativ mai
puțin polară decât faza staționară) în care apa este una dintre componentele sistemului
de fază mobilă solvent. Se distinge de cromatografia lichidă de interacțiune hidrofilă
(HILIC) prin faptul că mecanismul de retenție se datorează mai degrabă adsorbției decât
partiționării. [37]