Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Analiza și controlul produselor cosmetice din clasa retinoizilor

Determinarea analitică a palmitatului de retinil și a isotretinoinului

1. Retinolul și retinoizii în tratamentul acneei

1.1. Acneea
Mulți dintre pacienții care trec pragul cabinetului de cosmetică nutresc speranța că vor primi o
soluție care să îi ajute în managementul acestei patologii chinuitoare – acneea – iar aspectul tenului lor
va fi semnificativ îmbunătățit. Multitudinea de produse pentru tratamentul acneei de pe piața farmaceutică
și cosmetică face procesul de alegere a celui mai potrivit produs foarte dificil pentru un specialist în
domeniu.
Cel mai frecvent pentru tratamentul acneei se apelează la preparatele medicamentoase topice cu
substanțe active precum retinoizi, antibiotice și peroxid de benzoil, dar uneori se apelează și la tratamente
sistemice hormonale, sau cu antibiotice și isotretinoin, sau chiar la fitoterapie. Pentru a asigura un răspuns
terapeutic de calitate tratamentul acneic trebuie adaptat cunoștințelor actuale despre patogeneza acneei și
mecanismul de acțiune al acesteia. Schema de tratament este necesar a fi inițiată cât mai rapid după apariția
semnelor patologiei și trebuie să fie realizată pentru a preveni cicatricile permanente.
Ca forme de acne cel mai des întâlnită este acneea vulgară cu precădere în rândul adolescenților, dar
și la copii și adulți, iar consecințele asupra imaginii feței determină un puternic impact psihologic asupra
tuturor celor afectați indifferent de vârstă.
Acneea în general este o patologie inflamatorie pleomorfă ce implică unitatea pilosebacee și apare
într-un context complex generat de factori genetici, factori de mediu, niveluri hormonale, imunitate
dobândită și chiar obiceiuri alimentare. Formele clinice pot fi descrise de la mici comedoane până la forme
fulminante. Pentru a se obține rezultate este necesar ca tratamentul să atingă cât mai mulți factori patogeni
considerați a fi implicați.
Acneea prezintă o incidență maximă în timpul adolescenței, afectând peste 80% dintre tinerii cu
vârste între 12 și 24 de ani apariția ei fiind considerată a fi fiziologică în acest grup de vârstă. Datorită
tendinței generale din ultimele decenii de apariție precoce a pubertății, acneea a ajuns să afecteze și copiii
cu vârsta între 7 și 11 ani; de asemenea acneea continuă să fie adesea problematică și la maturitate.
Tratamentul precoce al acneei este esențial pentru a preveni cicatricile postacneice. Eritemul și
hiperpigmentarea postinflamatorie persistă uneori și după rezolvarea leziunilor inflamatorii de acnee.
Dacă acneea este controlată modificările pigmentare se estompează de obicei după câteva luni, dar există
și situații în care ele pot fi permanente. Cicatricile tip ice-pick sau cicatricile hipertrofice cu care pacienții
ajung de multe ori în cabinetele de cosmetică sunt deseori sechele ale acneei nodulochistice.

1.2. Retinolul și retinoizii

Clasa farmacologică: derivați de vitamina A

1
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Clasa retinoizilor cuprinde 2 grupe, retinoizi naturali și sintetici. Retinoizii naturali sunt vitamina A
și derivații ei direcți întâlniți în biochimia organismului, iar clasa retinoizilor sintetici cuprinde o serie de
reprezentanți creați în laborator cu scopul de a îmbunătății calitatea utilizării lor prin scăderea efectelor
secundare și a reacțiilor adverse, dar păstrând efectele terapeutice sau chiar îmbunătățindu-le.
Retinoizii naturali întâlniți în produsele cosmetice sunt:

 retinolul

 retinil-palmitatul - retinolul esterificat cu acidul palmitic (un acid gras natural):

 retinil-aldehida, forma aldehidică a vitaminei A:

 tretinoinul - acidul retinoic cu toate dublele legături în configurație trans, produs fotolabil, utilizat
în tratamentul unor forme de leucemii și în acnee:

Acești retinoizi naturali (cu excepția tretinoinului) sunt întâlniți frecvent în produsele cosmetice de
întreținere zilnică de obicei cu efect anti-aging, care pot fi achiziționate fără prescripție medicală.

Retinolul este considerat cel mai cunoscut derivat de vitamina A fiind implicat în fiziologia dentiției,
sistemului osos și reproducator, a pielii și mucoaselor, a aparatului vizual. În ce privește biochimia la
nivelul pielii, este important de precizat că vitamina A nu acționeaza direct la nivelul pielii, ci pentru a-și
exercita efectul trebuie să traverseze câteva cicluri de metabolizare, ajungând sub formă de acid retinoic.

Studiile științifice demosntrează că vitamina A prezintă diferite roluri la nivelul pielii precum:

2
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

 rol antioxidant fiind considerată cel mai puternic agent anti-aging prezent ca substanță
activă în produsele de îngrijire
 rol activ în procesul de diminuare a petelor pigmentare, a ridurilor fine și în stimularea
sintezei de colagen, putând fi considerate un ingredient important în reîntinerirea tenului
matur
 rol important în tratamentul acneei comedogenice, datorită diminuării aderenței
keratinocitelor (celulelor care generează stratul ocluziv de la surafața pielii blochând astfel
porii), astfel fiind oprita dezvoltarea punctelor negre sau albe
 rol antiinflamator în afectiuni dermatologice, precum psoriazisul vulgar, unde exercită
actiune de corectare a tulburărilor de diferențiere epidermică

Retinoizii de sinteză:
 Adapalen – compus fotostabil, derivat aromatic al acidului naftoic

 Tazaroten - fotostabil, retinoid acetilenic sintetic, de generația a III-a, aplicat cutanat este
transformat în metabolitul său activ, acidul tazarotenic

 Izotretinoin = fotolabil, forma cis a acidului retinoic, izomerul steric cu tretinoinul (practic
diferă doar stereoizomeria legăturii duble cea mai apropiată de gruparea carboxil)

3
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Indicațiile retinoizilor:
 formele ușoare comedonale de acnee
 în formele moderate papulo-pustuloase de acnee ca linia 1 de tratament atât în monoterapie
cât și în produse de uz topic în care se află alături de alte substanțe active cu rol în tratamentul
acneei (îndeosebi produse antimicrobiene)
 formele severe papulo-pustuloase și nodulare unde sunt indicați împreună cu un antibiotic
oral ± peroxid de benzoil
 întreținerea remisiei formelor de acnee (retinoid topic cu/fără peroxid de benzoil, sau
produse ce conțin combinații ( adapalen + peroxid de benzoil, tretinoin + clindamicină)
 fotoîmbătrânire,
 melasma

Contraindicațiile retinoizilor: în sarcină – s-au observat malformații congenitale la nou-născuții

mamelor care utilizează tretinoin topic în primul trimestru de sarcină; tazarotenul topic a fost declarat
interzis în sarcină astfel este obligatorie consilierea contraceptivă a femeilor aflate la vârsta fertilă, cu
prezentarea unui test de sarcină negativ (în Europa) sau doua teste de sarcină negative (în SUA) înainte
de inițierea terapiei.

Efecte adverse: iritație locală, eritem, xeroză, descuamare

- toți retinoizii pot fi iritanți, însă în unele formulări mai noi se utilizează o tehnologie de încapsulare
în microsfere cu livrare întârziată sau retinoizii sunt încorporați într-un poliol-prepolimer; astfel se reduce
potențialul de iritare și se realizează o concentrație mai mare de produs activ.
- proprietățile iritante ale tazarotenului pot fi reduse la minimum prin utilizarea acestuia pe suprafața
afectată pe o perioadă scurtă, de exemplu aplicare timp de 5 minute și apoi spălare cu o substanță de
curățare delicată.

Precauții de administrare:
- Utilizarea concomitentă a adapalenului/tazarotenului (tretinoinul doar în formulări tip microsfere,
fiindcă este inactivat de peroxidul de benzoil) poate spori eficacitatea peroxidului de benzoil și a
antibioticelor topice prin creșterea penetrării acestor activi în foliculul sebaceu. Prin urmare, pacienții
trebuie sfătuiți să aplice tretinoin înainte de culcare și nu în același timp cu peroxidul de benzoil.
- Retinoizii topici au, de asemenea, proprietăți antiinflamatorii semnificative și, prin urmare, pot fi
folosiți ca monoterapie pentru acneea cu componente inflamatorii atât comedonale, cât și ușoare.
- Studiile pe animale au arătat că adapalenul are proprietăți comedolitice mai ușoare decât
tretinoinul, dar acesta este, de asemenea, și mai puțin iritant.
- Recomandând pacienților să aplice tretinoin în nopți alternative în primele câteva săptămâni de
tratament poate ajuta la asigurarea unei tolerabilități mai mari.
- Pacienții trebuie, de asemenea, avertizați cu privire la expunerea la soare din cauza subțierii
stratului cornos, în special cei ce prezintă orice reacție iritantă. Trebuie recomandată utilizarea regulată a
unei protecții solare.

4
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

- S-a demonstrat că gelul cu adapalen 0,1% are o eficacitate mai mare sau egală cu gelul cu tretinoin
0,025% cu tolerabilitate mai mare. Este disponibil la o concentrație de 0,1% atât în gel și cremă fără alcool,
cât și în gel 0,3%. S-a demonstrat că gelul de adapalene 0,3% are o eficacitate similară gelului tazarotenic
0,1% cu tolerabilitate crescută. Este disponibil și un agent topic combinat care conține adapalen (0,1% sau
0,3%) și 2,5% peroxid de benzoil.
- Tazarotenul s-a dovedit a fi mai eficient decât tretinoinul 0,025% gel și tretinoinul 0,1% gel
microsferic.
Vitamina A (retinol și esterii lui) se găsește în produse cosmetice formulate ca seruri sau creme (Figura
1): crema Gerovital prevenire riduri (Retinol film molecular 2%), crema Gerovital regenerare avansată
((Retinol film molecular 3%), ser facial (1% retinol) cremă Nuo Derm (0.3% Retinol).

5
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Figura 1. Produse cosmetice cu vitamina A

1.3. Determinarea analitică a retinolului și a esterilor lui

Conform Farmacopeei Europene (EPh), ediția 10, vitamina A se referă la un amestec de substanțe
cu structură chimică similară (Figura 2), care se găsesc în țesuturile animale și posedă activitate biologică
asemănătoare. Principala și cea mai activă din punct de vedere biologic este trans-retinolul (toate dublele
legături sunt în configurația trans). Vitamina A este în general utilizată sub forma esterilor acetat,
propionat și palmitat.

6
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Figura 2. Structurile chimice ale substanțelor de tip Vitamina A

Activitatea vitaminei A se exprimă în echivalenți de retinol (ER), 1 ER corespunde activității a 1

mg trans-retinol sau în unități internaționale (UI). O UI de vitamina A este echivalentă cu activitatea a
0.300 µg trans-retinol, a 0.344 μg acetat de retinil, a 0.359 μg propionat de retinil și a 0.359 μg palmitate
de retinil. 1 mg retinol este echivalent cu 3333 UI.

Proprietăți fizico-chimice
Acetat de retinil (retinol acetat): cristale de culoare galben deschis, p.t. 60 ºC
Propionat de retinil (retinol propionat): lichid uleios maro-roșcat
Palmitatului de retinil (palmitat retinol): solid de culoare galben deschis, asemănător cu o grăsime
sau lichid galben uleios dacă este topit (p.t. 26 ºC).
Solubilitate: esterii retinolului sunt practic insolubili în apă, solubili sau parțial solubili în etanol
absolut și miscibili cu solvenți organici.
Vitamina A și esterii săi sunt foarte sensibili la acțiunea aerului, agenților oxidanți, acizilor, luminii
și căldurii.
Pentru evaluarea purității Farmacopeea Europeană prevede calcularea raportului absorbanțelor la
două lungimi de undă, după cum urmează:
A300 /A326 – maxim 0.6
A350 /A326 – maxim 0.54
A370 /A326 – maxim 0.14
Soluția căreia i se măsoară absorbanțele la lungimile de undă specificate se prepară astfel: 25 -100 mg
substanță cântărită la balanța analitică se dizolvă in 5 mL pentan și se diluează cu 2-propanol la o
concentrație de 10 până la 15 UI/mL.

Dozare
Farmacopeea Europeană prevede dozarea retinolului și a esterilor acestora prin spectrofotometrie
de absorbție. Soluției preparate în modul prezentat mai sus i se măsoară absorbanța la lungimea de undă

7
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

326 nm, iar valoarea absorbanței se va utiliza pentru calcularea activității vitaminei A (în UI/g) aplicând
relația:

𝐴326 ∙ 𝑉 ∙ 1900
100 ∙ 𝑚

unde A326 – absorbanța măsurată la 326 nm;

m – masa de substanță analizată în g;
V – volumul total la care s-a realizat diluția pentru obținerea concentrației 10 până la 15 IU/mL;
1900 – factorul de conversie al absorbanței specifice a esterilor retinolului în UI/g

Analiza palmitatului de retinil prin spectrofotometrie de absorbție

Principiul metodei. Caracteristici spectrale.

Palmitatul de retinil prezintă, în soluție metanolică, o bandă de absorbție (Figura 3), maximul
absorbanței fiind notat la lungimea de undă 322 nm. La această lungime de undă și în acest solvent,
valoarea absorbanţei specifice ( A1cm
1%
) este 1050 dL/(g·cm), iar cea a absorbtivităţii molare (ε) este

35590 L/(mol·cm), valorile acestor parametri stând la baza determinărilor cantitative ale activului
cosmetic din formulările cosmetice și farmaceutice.

Solvent
Metanol
Mărime
λmax 322 nm
1%
A1cm
1050
dL/(g·cm)
ε
35590
L/(mol·cm)

HW Dibbern, Ed. UV and IR spectra. Pharmaceutical substances (UV & IR) and pharmaceutical and cosmetic excipients
(UV & IR. 2002, Editio Cantor Verlag)

8
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

322 nm

Figura 3. Spectrul de absorbție al palmitatului de retinil (0.5 mg/dL) în metanol

Descrierea metodei

Materiale

- metanol de puritate analitică/spectrofotometrică

- spectrofotometru cu dublu fascicul şi cuve de cuarţ de 1 cm
- baloane cotate de 50 ml şi 25 mL
- balanţa analitică semimicro
- pipetă automată cu volum de 1 mL

Procedura analitică pentru analiza palmitatului de retinil materie primă pt uz cosmetic

Soluția supusă analizei conține minim 1 milion de UI de vit A (1 UI = 0.550 µg) palmitat per gram. In
vederea analizei cantitative se cântărește la balanța analitică semimicro o cantitate cuprinsă între 20 si 25 mg
(masa se notează cu precizie) soluție de palmitat de retinil într-un balnon cotat de 50 mL, peste care se adăugă
metanol, se agita și apoi se completează balonul la semn cu același solvent. Se calculează concentrația soluției

9
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

astfel obținute (c t). 1 mL din această soluție se introduce intr-un balon cotat de 25 mL si se completează balonul
la semn cu metanol. Se obțin 3 astfel de soluții (se lucrează in triplicat).
Spectrul de absorbţie al soluţiilor este scanat în domeniul spectral 220-380 nm. Se măsoară
absorbanţa acestor soluţii la 322 nm fată de metanol (referinţă) în scopul determinării conţinutului de
palmitat de retinil.

Interpretarea rezultatelor

1. Calcularea concentrației de palmitat de retinil se va realiza folosind relația Lambert- Beer :

1%
𝐴 (𝜆) = 𝐴1𝑐𝑚 (𝜆) ∙ 𝑐% ∙ 𝑑

A( )
Cexp % 
A ( )  d
1%
1cm

unde Cexp reprezintă concentraţia procentuală determinată experimental (în g/dl), d este grosimea cuvei
utilizate (1cm).

2. Tinând cont de factorul de diluție se calculează concentrația soluției supusă analizei.

3. Se raportează cexp. la ct şi se calculează:
a. Regăsirea procentuală (R %)
 Cexp 
R%    100
 Ct 

b. Abaterea procentuală (a %)

𝑎, % = 𝑅% − 100%

10
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

1.4. Determinarea analitică a isotretinoinului

Isotretinoinul sau acidul 13-cis-retinoic este o substanță oficinală in Farmacopeea Europeană ediția
10 (Isotretinoimun).
Formulă moleculară: C20H28O2
Masa moleculară : 300.4 g/mol
Număr CAS: [4759-48-2]

Proprietăți fizico-chimice

 se prezintă sub formă de pulbere critalină galbenă sau portocaliu deschis

 este practic insolubilă în apă, solubilă în clorură de metilen, cloroform, , puțin solubilă în
etanol (96%), alcool isopropilic si propilenglicol 400
 este sensibilă la actiunea aerului, luminii și temperaturii, mai ales în soluție
 p.t. 174-175 ºC

Determinare cantitativă

Farmacopeea Europeană prevede dozarea isotretinoinului prin titrimetrie acido-bazică în mediu

neapos: 0.200 g substanță se dizolvă în 70 mL acetonă și se titrează cu hidroxid de tetrabutilamoniu 0.1M
în 2-propanol, determinând punctul de echivalență potențiometric.
1 mL de hidroxid de tetrabutilamoniu 0.1M în 2-propanol corespunde la 30.04 mg C20H28O2.

Farmacopeea Statelor Unite ale Americii indică determinarea cantitativă a isotretinoinului tot prin
titrimetrie acido-bazică în mediu neapos, dar folosind alt solvent protofil și alt reactiv de titrare comparativ
cu PhE: aproximativ 240 mg isotretinoin (masă căntărită acurat) se dizolvă în 50 mL dimetilformamidă,
se adaugă 3 picături de albastru de timol in dimetilformamidă și se titrează cu metoxid de sodiu 0.1N până
la colorație verzui.
1 mL de metoxid de sodiu 0.1N corespunde la 30.04 mg C20H28O2.

Acțiune framacologică: antiacneic

Farmacotoxicologie: retinoizii administrați oral sunt teratogeni; retinoizii cu aplicare topică sunt
contraindicați la gravide și la femeile care doresc să rămână insărcinate

11
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Forme farmaceutice
 capsule moi conținând 5; 8; 10; 16; 20; 40 mg isotretinoin
 gel și cremă

12
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Determinarea cantitativă a isotretinoinului prin spectrofotometrie de absorbție

Principiul metodei. Caracteristici spectrale

În soluție metanolică, isotretinoinul prezintă o bandă de absorbție cu maxim de absorbanță la 346

nm (Figura 4a). Valoarea absorbanţei specifice ( A1cm
1%
) la 346 nm în metanol este 1280 dL/(g·cm), iar cea
a absorbtivităţii molare (ε) este 38400, L/(mol·cm), valorile acestor parametri putând sta la baza
determinărilor cantitative ale activului cosmetic din formulările cosmetice și farmaceutice.

Solvent
Metanol
Mărime
λmax 346 nm
1%
A1cm
1280
dL/(g·cm)
ε
38400
L/(mol·cm)

346 nm

(a)
13
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

(b)
Figura 4. Spectrul de absorbție al isotretinoinului în metanol (0.31mg/dL) (a) și 10 µg/mL (b)

Descrierea metodei

Materiale

- metanol de puritate analitică

- spectrofotometru cu dublu fascicul şi cuve de cuarţ de 1 cm
- baloane cotate de 25 mL şi 10 mL
- balanţa analitică semimicro
- pipetă cu volum de 1 mL şi 5 mL

Procedura pentru prelucrarea formei farmaceutice

Conținutul unei capsule moi de 10 mg (20 mg) se transvazează cantitativ într-un balon cotat de 50
mL (100 mL), se adaugă metanol, se agită și se completează balonul la semn cu metanol. 1 mL din soluția
obținută se supune diluției la balon cotat de 25 mL folosind metanol ca solvent. Soluției obținute în urma
diluției i se scanează spectrul de absorbție în domeniul spectral 220 – 450 nm și se măsoară absorbanța
acesteia la 346 nm fată de metanol (referinţă) în scopul determinării conţinutului de isotretinoin.

Interpretarea rezultatelor

1. Calcularea concentrației de isotretinoin se va realiza folosind relația Lambert-Beer:

14
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

1%
𝐴 (𝜆) = 𝐴1𝑐𝑚 (𝜆) ∙ 𝑐% ∙ 𝑑

A( )
Cexp % 
A ( )  d
1%
1cm

unde Cexp reprezintă concentraţia procentuală determinată experimental (în g/dL), d este grosimea cuvei
utilizate (1cm).

2. Ținând cont de factorul de diluție se calculează concentrația soluției supusă analizei.

3. Se raportează cexp. la ct şi se calculează:

a. Regăsirea procentuală (R %)
 Cexp 
R%    100
 t 
C

b. Abaterea procentuală (a %)

𝑎, % = 𝑅% − 100%

4. Consultăm prevederile Farmacopeii Române referitoare la capsule

Conform FR X, secțiunea Dozare: Pentru capsule cu conținut declarat în substanță activă pe

capsulă de 10 mg până la 100 mg, este permisă o abatere de ±7,5%.

15
 Analiza produsului dermatocosmetic – Lucrare practică 5-6

Concluzia analizei: capsulele analizate corespund/ nu corespund prevederilor FR X în ceea ce

privește conținutul în substanță activă.

Referințe bibliografice:
1. HW Dibbern, Ed. UV and IR spectra. Pharmaceutical substances (UV & IR) and pharmaceutical and
cosmetic excipients (UV & IR. 2002, Editio Cantor Verlag)
2. *** European Pharmacopoeia, ed.10 online, 2020
3. *** Farmacopeea Română, Ed. X., Editura Medicală, 1993
4. Harry G. Brittain (Editor) Profiles of Drug Substances, Excipients and Related Methodology. Nasr Y.
Khalil, Ibrahim A. Darwish, Abdulmohsen A. Al-Qahtani, Chapter Five – Isotretinoin. Academic
Press, Volume 45, 2020, ISSN 1871-5125

16