J.

Neamu

P.G. Anoaica

Aplicaii ale radiaiilor electromagnetice n domeniul medical

Abs

1763,98

1239,44 2991,10 1377,59 1053,87 628,69

Editura Medical Universitar Craiova, 2006

Prefa Lucrarea de fa dorete s prezinte problematica electro-magnetismului n fenomenele cu inciden medico-farmaceutic. Sunt coninute astfel noiuni specifice interaciei radiaiei electromagnetice cu substana, ntlnite de studenii facultilor de medicin sau farmacie n cadrul anilor de studiu dar i n viitoarea carier. Fenomenele descrise pornesc de la transportul de substan n cmp elctromagnetic, ajungndu-se la spectrofotometrie sau spectrometrie RMN, exemplificndu-se cu diverse situaii din practica experimental. Ca o caracteristica importanta, prezentarea teoretic urmrete o abordare voit simplificat, enciclopedic, ct mai pe nelesul att al studenilor dar i al viitorilor specialiti cu o carier n cercetarea tiinific. Autorii

CUPRINS:
Prefa .............................................................................................................................2 1. ELECTROLII ........................................................................................................................5 1.1 CONDUCTIVITATEA ELECTROLIILOR......................................................................................5 1.2 GRADUL DE DISOCIERE ...........................................................................................................8 1.3 ECUAIA NERNST ..................................................................................................................11 1.4 POTENIALUL DE DIFUZIE NTR-UN ELECTROLIT NEUNIFORM ................................................12 1.5 CELULE GALVANICE. ELECTROZI REVERSIBILI ......................................................................14 1.6 POTENIALUL DE ELECTROD .................................................................................................18 1.7 TENSIUNEA ELECTROMOTOARE A UNEI CELULE GALVANICE .................................................20 1.8 DETERMINAREA PH-ULUI ......................................................................................................21 1.9 TRANSPORT N CMP ELECTRIC. ELECTROFOREZ ................................................................24 1.9.1 Punctul izolelectric..........................................................................................................24 1.1.2 Mobilitatea electroforetic..............................................................................................25 1.1.1.1 Cmpul electric al unei particule ncrcate.......................................................26 1.10 REACII DE OXIDARE I REDUCERE .......................................................................................29 1.11 APLICAII ALE FENOMENELOR ELECTROCHIMICE N DOMENIUL MEDICAL I FARMACEUTIC ..32 1.11.1 Procese de oxidare i reducere................................................................................32 2. FENOMENE ONDULATORII .............................................................................................35 1.1 INTERFEREN ......................................................................................................................41 1.2 FENOMENE MAGNETICE ........................................................................................................43 1.2.1 Introducere ......................................................................................................................43 1.1.2 Substana n cmp magnetic............................................................................................45 1.3 UNDE ELECTROMAGNETICE...................................................................................................46 1.1.1 Clasificarea undelor electromagnetice ...........................................................................47 1.4 POLARIZAREA LUMINII. APLICAII ........................................................................................50 1.4.1.1 Polarizarea prin reflexie....................................................................................50 1.4.1.2 Polarizarea prin refracie...................................................................................51 1.4.1.3 Birefringena .....................................................................................................51 1.4.1.4 Polarizarea rotatorie ..........................................................................................53 3. NOIUNI DE ATOMIC .....................................................................................................55 3.1 INTRODUCERE .......................................................................................................................55 1.2 MODELUL ATOMIC RUTHERFORD ..........................................................................................55 1.3 IPOTEZE CE CONFIRM COMPORTAMENTUL DUAL, UND-PARTICUL ...................................57 1.3.1 Problema radiaiei corpului negru .................................................................................58 1.1.2 Efectul fotoelectric ..........................................................................................................59 1.1.1.1 Dualismul und - corpuscul ..............................................................................60 1.1.1.2 Relaiile de nedeterminare ale lui Heinsenberg ................................................61 1.1.3 Problema stabilitii atomului. Modelul Bhr ................................................................62 1.4 MODELUL CUANTIC AL ATOMULUI ........................................................................................63 1.4.1 Ecuaia lui Schrdinger. Funcia de und. Orbitali electronici .....................................64 1.1.2 Atomul de hidrogen. Numere cuantice ............................................................................64 1.1.1.1 Orbitalii atomului de hidrogen..........................................................................66 1.1.3 Momentul magnetic orbital i de spin al electronului.....................................................66 1.5 ATOMUL CU MAI MULI ELECTRONI ......................................................................................67 1.1.1 Spinul electronic..............................................................................................................68 1.6 NIVELE ENERGETICE MOLECULARE .......................................................................................71 1.1.1 Spectre de rotaie.............................................................................................................72 1.1.2 Spectre de vibraie...........................................................................................................75 3

1.1.3 Spectre de vibraie - rotaie.............................................................................................77 1.1.4 Spectre electronice. Principiul Franck - Condon ...........................................................80 4. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE. PRINCIPII GENERALE I APLICATIVE ..................................................................................................................................84 1.1 ABSORBIA ENERGIEI DE CTRE MOLECULE (ATOMI)............................................................84 1.1.1 Aparatur utilizat n UV, VIZ i IR ...............................................................................88 1.2 APLICAII ALE METODELOR SPECTROMETRICE DE ABSORBIE N UV, VIZ I IR. ANALIZ CALITATIV /CANTITATIV ............................................................................................................90 1.2.1 Aplicaii ale spectrometriei UV, VIZ...............................................................................90 1.2.1.1 Analiza calitativ ..............................................................................................91 1.1.2 Aplicaii ale spectrometriei n vizibil analiz cantitativ ............................................92 1.1.1.1 Determinri cantitative n UV........................................................................... 93 1.1.3 Aplicaii ale spectrometriei de absorbie n infrarou ....................................................96 1.1.4 Frecvente caracteristice substanelor organice. .............................................................98 1.3 PRINCIPIILE ANALIZEI SPECTROMETRICE CANTITATIVE N IR ..............................................101 1.3.1 Metoda celor mai mici ptrate ......................................................................................101 1.1.2 Metoda CLS (Classical Least Squares).........................................................................103 1.1.2.1 Probe cu un singur constituent........................................................................103 1.1.1.2 Probe cu mai muli constitueni ......................................................................105 1.1.3 Metoda regresiei lineare multiple .................................................................................110 1.4 METODE DE ANALIZ CHEMOMETRIC ...............................................................................112 1.1.1 Metode de analiz multivariat.....................................................................................112 1.1.2 Metoda de analiz a componentelor principale............................................................113 1.1.1.1 Optimizarea metodelor de analiz PLS i PCR ..............................................118 1.5 APLICAII ALE SPECTROFOTOMETRIEI IR N FARMACIE I MEDICIN ..................................129 1.5.1 Aplicaii ale spectrometriei IR la controlul medicamentului ........................................129 1.5.2 Identificarea formelor polimorfe...................................................................................129 1.5.2.1 Spectrul IR , criteriu de identitate a substanelor medicamentoase ................130
1.5.2.1.1 1.1.1.1.2 Identificarea substanelor cu structuri necunoscute .....................................................................130 Identificarea substanelor cunoscute............................................................................................130

1.1.1.2 Spectrul IR criteriu de puritate........................................................................131 1.1.1.3 Determinarea principiilor active din forme farmaceutice. ..............................131 1.1.3 Aplicaii n bio-medicin ...............................................................................................131 1.1.4 Aplicaii ale spectrofotometriei IR n analizele clinice .................................................134 1.1.5 Aplicaii ale spectroscopiei IR n diagnosticul clinic....................................................139 1.1.6 Aplicaii ale spectroscopiei NIR n industria farmaceutic ..........................................142 5. OBINEREA IMAGINII PRIN REZONAN MAGNETIC.....................................147 1.1 INTRODUCERE .....................................................................................................................147 1.1.1 Fenomenele magnetice ..................................................................................................147 1.1.2 Spinul nuclear. Rezonana magnetic nuclear (RMN)................................................152 1.1.3 Numr cuantic magnetic de spin ...................................................................................152 1.1.1.1 Spectrul RMN .................................................................................................156 1.2 POSIBILITI DE UTILIZARE PRACTIC A RMN ...................................................................159 1.2.1 Fenomene de relaxare ...................................................................................................161 1.3 PRINCIPIUL FORMRII IMAGINII ...........................................................................................164 1.3.1 Secvene de achiziie a imaginii ....................................................................................169

Electrolii

1. Electrolii
1.1 Conductivitatea electroliilor Electrolitul este o soluie a unei baze, acid sau sare, avnd o bun conductivitate electric. Ionii existeni ntr-o astfel de soluie au sarcinile notate +(z+e), respectiv (ze), unde z+ i z rezult din valenele ionilor componeni. Condiia de neutralitate a soluiei impune ca sarcina total, n orice punct al soluiei, s fie nul. Matematic aceasta se scrie sub forma relaiei (1.1):
z+ e c+ + z (e) c = 0 (1.1)

unde c+ i c reprezint concentraiile volumice ale ionilor pozitivi, respectiv negativi (particule pe unitatea de volum). Exemplu: n cazul unei soluii de NaCl, deoarece z+ = z = 1, rezult c c+ = c. Pe de alt parte, la dizolvarea CaCl2, aceeai condiie de neutralitate, duce la z+ = 2; z = 1, adic c = 2c+. innd cont de expresia conductivitii electrice = c (z e), rezult relaia:
= c+ (z+ e)2 + + c (z e)2 (1.2)

unde + i sunt mobilitile celor doi ioni. Referitor la valorile concentraiilor ionice, remarcm c ele depind att de cantitatea de substan dizolvat n soluie, ct i de gradul de disociere al acesteia n componente ionice. Considernd cazul disocierii complete, singurele necunoscute ale ecuaiei (1.2) rmn mobilitile ionice. Ele pot fi determinate prin analogia dintre micarea unui ion sub aciunea unui cmp electric i deplasarea unei sfere prin acelai solvent. n ambele cazuri apare o for de frecare datorit vscozitii lichidului a crei mrime este F = v , unde este o constant ce depinde de forma particulei n micare. La un moment dat apare
5

Capitolul 1

echilibru ntre fora electric (Fe) i fora de frecare, ionul deplasndu-se acum cu vitez constant. Aceasta reprezint n fapt viteza de drift, vd:
Fe = Ff = vd
(1.3)

innd cont de expresia vitezei de drift, vd = Fe, ( - mobilitatea ionului respectiv) rezult c = 1/. Fr a intra n detalii, remarcm c Einstein arat c ntre coeficientul , temperatura T i coeficientul D de difuzie a lichidului, exis relaia:
=KT/D
(1.4)

Pe de alt parte, n cazul unei particule sferice, = 6 r (conform forei Stokes) i n acest caz:
D=

KT 6r

(1.5)

n aceste condiii, conductivitatea unei soluii ionice, complet disociate devine:

= c+ (z+ e)2 + + c (ze)2 = c+ (z+ e)2

D+ D + c(ze)2 KT KT

(1.6)

unde ( = D/KT) Un calcul estimativ al mobilitii ionice, n general, poate fi fcut considernd coeficienii de difuzie D+ i D egali cu cel corespunztor moleculelor de ap DH2O = 109 m2/s. n cazul temperaturii de 300K valoarea mobilitii ionice este:
=
10 9 (m 2 / s ) = 2.4 1011 m N-1s-1 23 1.38 10 300( J ) (1.7)

Cu excepia ionilor H+ i OH valoarea mobilitii calculat anterior, este n concordan cu datele experimentale, lucru ce demonstreaz c aproximaia fcut este acceptabil. Discrepana ce apare n cazul ionilor H+ i OH a fost explicat prin valori mai mari ale coeficienilor de difuzie ale acestor ioni, ca urmare a formrii
6

Electrolii

unor legturi de tipul punilor de hidrogen cu moleculele de ap din soluie. O mrime frecvent utilizat n chimie este conductivitatea molar prin relaia:
=/C
(1.8)

, exprimat

unde C este concentraia exprimat n moli/l. Unitatea de msur n acest caz este 1

cm2/mol.

n ceea ce privete variaia conductivitii molare cu temperatura, precizm c ea crete odat cu temperatura, fenomenul fiind datorat micorrii vscozitii mediului n care ionii se deplaseaz. Astfel, innd cont de expresia conductivitii (1.2)-(1.6), se obine:
= e2 (

1 1 + ) +

(1.9)

Relaia anterioar este valabil pentru o soluie n care z+ = z = 1 i (conform relaiei (1.1)), c+ = c = c. Pe de alt parte, avnd n vedere relaia Einstein / Stokes (1.5) obinem: 1 1 const. e2 = ( + )= , 6 r+ r intermediul vscozitii mediului lichid. n continuare vom face un calcul al conductivitii unei soluii complet disociate, aflat la temperatura de 300K. Pentru coeficienii de difuzie s-au folosit valorile existente n literatura de specialitate (tabelul 1-1)
Tabelul 1-1: Coeficieni de difuzie Ion D (m2/s)10-9 + Li 1.03 Na+ 1.33 + K 1.95 H+ 9.33 Ca2+ 0.75 Ion Cl Br I OH SOH42 D (m2/s)10-9 2.03 2.09 2.05 5.27 1.07 (1.10)

ceea ce arat mai clar dependena conductivitii molare de temperatur prin

Astfel n cazul dizolvrii a n moli de KCl n 1l de solvent, concentraiile ionice, n

7

Capitolul 1

cazul dizolvrii complete vor fi:

c = c+ = c = n NA 103 (part / m3)
(1.11)

unde NA numrul lui Avogadro. Folosind relaia (1.11), conductivitatea electric a soluiei devine:
ce 2 D+ ce 2 D = + = 1.5 10-2 (m)-1 KT KT
(1.12)

unde D+ =1.95 10-9 m2/s i D = 2.03 109-9 m2/s. Notm c valoarea experimental a aceleiai soluii, exp = 1.47 10-2 (m)-1, valoare n concordan cu valoarea teoretic. Pn acum am luat n calcul faptul c soluia este complet disociat. n continuare vom trata cazul n care nu toate moleculele sunt disociate.
1.2 Gradul de disociere

Acest fenomen l vom exemplifica pe o soluie electrolitic a unui acid slab. Atunci cnd un acid HA este dizolvat ntr-un solvent, echilibrul dintre moleculele disociate i cele nedisociate este exprimat prin relaia:
AH A + H+ (1.13)

unde A reprezint baza conjugat a acidului. Astfel dac c0 este concentraia iniial a moleculelor de acid, este valabil egalitatea:
c0 = [AH] + [A]
(1.14)

Notm c, de regul, concentraiile de mai sus se exprim n moli/l, astfel nct i concentraiile ionilor pozitivi i negativi vor fi:
c = [A] NA 103 (particule / m3) c+ = [H+] NA 103 (particule / m3)
(1.15) (1.16)

Reamintim conform relaiei (1.1) c dac z+ = z = 1 atunci c+ = c (= c). Deoarece nu toate moleculele de acid sunt disociate, se introduce n acest caz aa numitul grad de disociere , definit prin relaia:
8

Electrolii

[ A ] [ A ] = = [ AH ] + [ A ] C0 Vitezele cu care se desfoar aceste dou procese sunt: - numrul de disocieri pe unitatea de timp:
dN = K1 [AH] dt disoc.

(1.17)

De asemenea, notm c, n soluie se produc att disocieri ct i recombinri.

(1.18)

- numrul de recombinri pe unitatea de timp:

dN = K2 [A] [H+] dt recomb.

(1.19)

unde N reprezint numrul de molecule de tip HA, la un moment de timp, t. Atunci cnd se ajunge la echilibru, vitezele celor dou procese sunt egale astfel nct se obine relaia:
K1 [AH] = K2 [A] [H+] (1.20)

Constanta de echilibru a relaiei, K, devine astfel:

[ A ][ H ] K K= 1 = , K2 [ AH ] i se exprim n aceleai uniti de msur ca i concentraia.

(1.21)

Valorile acestor constante pentru majoritatea acizilor se situeaz n intervalul 10-1mol/l (acizi tari) i 10-10mol/l (acizi slabi). De regul se prefer folosirea unei alte mrimi, pK, definit prin relaia:
pK -log10K (1.22)

innd cont de expresiile gradului de disociere i ale constantei de reacie, se obin relaiile:
[A] = [H+] = C0 [AH] = (1-) C0 (1.23) (1.24) (1.25)

K 2 = 1 C0
9

Capitolul 1

Chiar dac prin rezolvarea ecuaiei de gradul 2 se poate obine valoarea gradului de disociere, exist ns dou cazuri, n care se pot obine expresii analitice mai simple. Cazul I: Atunci cnd C0 << K, adic la concentraii joase. n aceste condiii se obine: K 2 = >> 1 1 C0 n cazul disocierilor complete, cnd se obin relaiile:
=
(1.26)

Din punct de vedere matematic, acest lucru se ntmpl atunci cnd 1, adic C+ C = 1 C0 C0

(1.27)

adic C+ = C C0. O soluie mai exact se obine considernd foarte aproape de valoarea 1:
= 1 - ,
(1.28)

( foarte mic) caz n care se obine: 1 K 2 = = 1 C0 De aceea n acest caz concentraiile ionice devin:
C+ = C C0 (1 - C0/K) (1.30) (1.29)

Cazul II: Atunci cnd concentraia C0 >> K, astfel nct: K 2 = << 1 1 C0 n acest caz este un numr foarte mic, astfel nct 1 - 1. Se obine astfel:
2
(1.31)

K sau C0

K C0

(1.32)

De aceea concentraiile ionice devin:

C+ = C

KC 0

(1.33)

n concluzie n aceste cazuri se obin urmtoarele expresii ale conductivitilor

10

Electrolii

electrice:
= e = e
2 2

D+ + D C0 atunci cnd C0 << K KT KC0 atunci cnd C0 >> K

(1.34) (1.35)

D+ + D KT

Notm c, atunci cnd concentraiile sunt exprimate n moli/l, valorile C0 se vor nlocui cu 103 NA C0.
1.3 Ecuaia Nernst Fenomenele descrise anterior considerau electrolitul ca fiind uniform. De aceea

concentraiile ionice au fost considerate ca fiind constante att n timp ct i n spaiu. Aa cum s-a artat, atunci cnd exist un gradient de concentraie are loc un proces de difuzie din regiunile concentrate spre cele mai puin concentrate. Densitatea curentului de difuzie, Jd, n acest caz se calculeaz cu legea lui Fick:
J d = D dc dx
(1.36)

Reamintim c Jd reprezint numrul de particule ce traverseaz perpendicular, unitatea de suprafa n unitatea de timp, iar concentraia este exprimat n particule / volum. De asemenea, aa cum se observ n relaia (1.36), s-a considerat numai cazul difuziei unidimensionale, orientat de-a lungul axei ox. De data aceasta vom presupune c particulele sunt ncrcate (ioni) i ele se gsesc n prezena unui cmp electrostatic a crei valoare este E. Acest curent se va suprapune peste micarea de difuzie i dac considerm c intensitatea cmpului electric este orientat de-a lungul i n direcia axei ox obinem un curent electric total, J:
J = J d + J E = D dc + cezE dx
(1.37)

innd cont de relaia dintre cmp i potenial se obine:

J = D dc dc d + cezE = K BT cez dx dx dx
11 (1.38)

Capitolul 1

Pentru a nu exista confuzii n exprimarea concentraiei datorate relaiilor anterioare, subliniem c ea reprezint numrul de ioni pe unitatea de volum. Deoarece fora electrostatic depinde de semnul sarcinii, n continuare vom prezenta densitile curenilor corespunztori celor dou tipuri de ioni:
dc d J + ( x) = + K BT + + c+ ez + dx dx dc d J ( x) = K BT c ez dx dx
(1.39)

(1.40)

Relaia (1.39) este scris pentru cationi iar (1.40) pentru anioni, + i sunt mobilitile respective iar z+ i zvalenele corespunztoare. Relaiile de mai sus se numesc ecuaiile de electrodifuzie Nernst-Planck. Ele descriu fenomenele ce au loc n soluii electrolitice neuniforme. De asemenea, cu ajutorul lor se poate calcula densitatea de curent electric datorat celor dou micri (drift i difuzie). Astfel, n cazul ionilor monovaleni:
JE = e(J+ J)
(1.41)

1.4 Potenialul de difuzie ntr-un electrolit neuniform

n cazul n care, un electrolit prezint un salt de concentraie, apare o diferen de potenial electric ntre regiunea de concentraie ridicat i cea de concentraie mai mic. Pentru a exemplifica acest lucru considerm o soluie de NaCl ce prezint iniial un salt de concentraie (c1 > c2). Notm c prin difuzie acest salt va fi remodelat (vezi figura 1-1).

12

Electrolii

x c2

c c1 c2 o
c+

c x

c1

(a)

(b)

Figura 1-1: Exemplu de electrolit neuniform

Fenomenul este datorat difuziei diferite a ionilor de Na+ respectiv de Cl. Astfel, deoarece coeficienii lor de difuzie sunt diferii, D+ = 1.33 10-9 m2/s i D = 2.03 10-9 m2/s profilele concentraiilor vor fi i ele diferite. n cazul considerat, deoarece ionii de Cl vor difuza mai rapid, profilul concentraiei va fi mai abrupt, n timp ce al ionilor de Na+ va fi mai aplatizat. Diferena de concentraie dintre cei doi ioni, ce apare ca urmare a difuziei elimin condiia de neutralitate (1.1), astfel nct n zonele n care c+ > c se acumuleaz o sarcin spaial pozitiv iar n zonele n care c+ < c se va acumula o sarcin spaial negativ. n aceste condiii va aprea un cmp electrostatic i implicit o diferen de potenial electric ntre cele dou regiuni. n cazul considerat, cmpul electric este orientat de la regiunea concentrat c1 spre regiunea diluat c2. Astfel, el va accelera ionii pozitivi (care datorit difuziei sunt mai leni) i va frna ionii negativi (care erau mai rapizi). n felul acesta, dup un anumit timp se ajunge la o stare staionar, n care densitile de curent corespunztoare celor doi ioni sunt egale (J+ = J). Fr a intra n detalii, prin folosirea ecuaiilor Nernst-Planck (1.391.40) se poate
13

Capitolul 1

obine astfel diferena de potenial ntre cele dou regiuni:

= 2 - 1 =

K BT + c2 ln e + + c1

(1.42)

Aa cum era de ateptat semnul acestei diferene de potenial depinde de mobilitatea ionilor implicai. De aceea, atunci cnd mobilitatea cationilor este mai mic dect a anionilor, regiunea mai concentrat devine mai pozitiv (2 < 1), n timp ce n caz contrar, aceeai regiune devine mai negativ. n ceea ce privete valoarea acestui potenial, pentru soluia de NaCl, la un salt al concentraiei c2/c1 = 1/10, rezult un potenial de difuzie = -12.2 mV. Aceleai fenomene au loc i atunci cnd doi electrolii de concentraie i natur diferit sunt separai printr-o barier poroas, ce permite o difuzie lent a ionilor prin ea. Considernd de exemplu cazul a dou soluii, NaCl de concentraie c1 i KCl de concentraie c2, (c2 > c1), formula pentru calculul potenialului de difuzie este:
= 2 - 1 =
K B T ( K Cl )c 2 ( Na Cl )c1 ( K + Cl )c 2 ln e ( K + Cl )c 2 ( Na + Cl )c1 ( Na + Cl )c1

(1.43)

innd cont de valorile mobilitilor ionice (tabelul 1-1) se obine n acest caz (c2 = 10 c1) o diferen de potenial = 0.13 mV. Valoarea obinut este foarte mic i se datoreaz valorilor apropiate ale mobilitilor ionilor de K+ i Cl.
1.5 Celule galvanice. Electrozi reversibili

Un circuit electric format din doi electrozi introdui ntr-un dielectric, sau n dou soluii dielectrice diferite, conectate printr-o jonciune lichid se numete celul galvanic. Un astfel de circuit este reprezentat n figura 1-2:

14

Electrolii

Electrod I Electrolit I

Electrod II

Electrolit II | Jonciune lichid

Figura 1-2: Celula galvanic reprezentare schematizat

Experimental se constat c n anumite condiii, conectarea celor doi electrozi printr-un circuit rezistiv R, duce la existena unui curent electric. Astfel de celule se mai numesc i pile galvanice, fiind ntrebuinate la producerea energiei electrice, adic sunt surse de curent electric. De asemenea, n alte condiii celulele galvanice sunt ntrebuinate la determinarea unor proprieti ale soluiilor coninute, cum ar fi de exemplu concentraia speciilor ionice. Indiferent de tipul aplicaiei o astfel de celul se reprezint: |metal 1|soluie 1||soluie 2|metal 2| Astfel, o reprezentare de forma: |Cu|CuCl2 (c1)||ZnCl2 (c2)|(Zn)| nseamn de fapt c un electrod de Cu este introdus ntr-o soluie de CuCl2 de concentraie c1, n timp ce al doilea electrod, de zinc, se gsete ntr-o soluie ZnCl2 de concentraie c2. Natura curentului care circul printr-o celul de acest tip este diferit: n circuitul exterior avem de-a face cu un curent electronic, n timp ce n soluiile constituente exist un curent ionic. Este evident faptul c la jonciunea dintre cele dou medii, adic la suprafaa electrozilor, tranziia de la un mod de conducie la altul necesit existena unor procese chimice. Acestea vor depinde att de natura electrozilor ct i a soluiilor aflate n contact cu ei. Procesele ce au loc la cei doi electrozi, vor putea fi urmrite prin considerarea unui exemplu de electroliz n care doi electrozi metalici sunt imersai ntr-o soluie
15

Capitolul 1

de HCl. Controlul curentului este asigurat cu ajutorul unei surse de curent continuu (E).
+

A
H
+ +

Cl

Figura 1-3: Componena curenilor n circuitul celulei

Pentru un anumit sens al curentului electric, (reamintim c sensul curentului electric printr-un conductor metalic este invers fa de semnul de deplasare al electronilor de conducie) unul dintre electrozi va ceda soluiei electroni iar cellalt va accepta electroni. Astfel electrodul donor se numete catod (K), n timp ce cellalt se numete anod (A). Astfel, la suprafaa catodului electronii vor neutraliza ionii de H+, ce sunt atrai datorit polaritii negative. La catod, reducere are loc, astfel, o reacie de reducere: H+ + e H H + H H2 n urma acestor reacii, la suprafaa acestui electrod se va forma n final H2 care se degaj. Electronii existeni la nivelul anodului provin n acest caz din reducerea ionilor de Cl, atrai de polaritatea pozitiv a acestuia. La anod, spunem c are loc o reacie de oxidare: Cl Cl + e Atomii de Cl ce se formeaz interacioneaz cu apa formnd acidul clorhidric i oxigenul. 2Cl + H2O 2H+ + 2Cl + O Exist i o alt cale de a obine electroni la nivelul acestui electrod. Presupunnd
16

Electrolii

c anodul este din zinc, ionii acestuia vor fi eliberai n soluie conform ecuaiei: Zn Zn++ + 2e De aceea, n acest caz va avea loc dizolvarea n timp a materialului anodic. n concluzie, procesele ce au loc la nivelul electrozilor depind de compoziia chimic a electroliilor, concentraia lor, materialul electrozilor i de natura electrodului (catod sau anod). n plus, fenomenele depind i de valoarea densitii de curent electric. O categorie special de electrozi o reprezint electrozii reversibili. Pentru a exemplifica acest lucru considerm un electrod de argint, introdus ntr-o soluie de AgNO3. ntre acesta i un alt electrod de referin, se aplic o diferen de potenial de la o surs extern. Curentul electric se nchide prin intermediul unor jonciuni lichide (sifon electrolitic) ce face legtura ntre electroliii celor doi electrozi. Astfel, la o anumit valoare a diferenei de potenial electric, electrodul de argint se comport ca un catod. n acest mod de operare are loc reacia:

e + Ag+ Ag (se depune pe suprafaa electrodului)

|
(adui de sursa de curent)

|
(exist n soluie)

Rezultatul reaciei este diluarea soluiei electrolitice i depunerea de argint metalic pe suprafaa electrodului. Pe de alt parte, modificnd din nou diferena de potenial electric se poate trece n regimul anodic (acceptor de electroni), n care are loc cedarea de ioni Ag+ n soluie conform reaciei:
Ag Ag+ + e (1.44)

n acest mod prin dizolvarea electrodului, concentraia ionilor din soluia electrolitic va crete. n concluzie, n funcie de valoarea tensiunii dintre cei doi electrozi se va desfura reacia (1.44) sau inversa ei. De aceea ei se numesc reversibili. Electrodul prezentat face parte din categoria electrozilor reversibili n raport cu ionii proprii, numii i electrozi reversibili de specia nti.
17

Capitolul 1

Not c exist i o categorie de electrozi reversibili, n raport cu anionul electrodului. Acetia se numesc electrozi reversibili de specia a doua. Cel mai des utilizat electrod de acest tip este cel de argint acoperit cu AgCl i aflat ntr-o soluie ce conine ioni de Cl (cum ar fi de exemplu HCl). n funcie de valoarea diferenei de potenial pot avea loc urmtoarele reacii chimice: AgCl + e Ag + Cl n regim catodic Inversnd curentul electric i folosind acest electrod ca anod, ionii de Cl din soluie interacioneaz cu Ag, formnd pe suprafaa acestuia clorura de argint: Ag + Cl + e AgCl + e
1.6 Potenialul de electrod

n regim anodic

n continuare vom analiza procesele de electrodifuzie ce au loc n cazul unui electrod metalic M, de specia nti reversibil n raport cu ionii si. Aa cum s-a artat n paragraful anterior, la suprafaa acestui electrod au loc simultan reaciile:
M+ + e M M M+ + e (1.45) (1.46)

Presupunnd c electrodul nu este introdus ntr-o diferen de potenial, notm c atunci cnd cele dou reacii se desfoar cu aceeai vitez, transportul net de sarcin electric de la soluie la electrod va fi nul. Deoarece viteza primei reacii depinde de concentraia ionilor din soluie, este evident faptul c echilibrul dintre cele dou reacii are loc la o anumit concentraie cech. a electrolitului. M

+
| |

r E

| | | | |

c < cech.

c = cech

Figura 1-4: Comportarea sarcinilor electrice n vecintatea electrodului. La atingerea echilibrului, sarcina net schimbat ntre soluie i electrod este nul

18

Electrolii

De aceea atunci cnd un astfel de electrod este introdus ntr-o soluie electrolitic a crei concentraie c < cech., reacia (1.46) se va desfura cu o vitez mai mare dect reacia (1.45) figura 1-4. n aceste condiii n apropierea electrodului va aprea un exces de sarcin pozitiv, ce va determina apariia unui cmp electrostatic orientat spre electrod, E. Acest cmp va intensifica deplasarea ionilor M+ spre electrod, ducnd la stabilirea unui echilibru privind transportul net de sarcin pozitiv dintre solvent i electrod. n acest caz sarcina net transportat spre electrod va fi nul. De aceea n acest caz curentul net datorat deplasrii sarcinii ionice prin difuzie i sub influena cmpului electric va fi dat de ecuaia Nernst-Planck (z = 1), (1.39), i va fi nul.
dc d J + ( x ) = + K B T + + c + e dx dx

(1.47)

n urma unor transformri matematice relaia anterioar se scrie:

ln c+(x) + (e/kT) (x) = const. (1.48)

unde x reprezint distana de la electrod la un punct oarecare din soluie, iar (x) este potenialul electric ce apare n vecintatea electrodului. Deoarece relaia este valabil pentru orice punct din soluie, vom alege dou puncte, astfel: primul punct va fi n imediata vecintate a electrodului x = xs 0, unde concentraia ionic este cech. deoarece s-a ajuns la echilibru, iar cel de-al doilea se gsete la distan mare, xB , acolo unde concentraia c+ este egal cu cea a electrolitului c. Se obin astfel relaiile:
ln c+(xB) + (e/kT) (xB) = ln c+(xs) + (e/kT) (xs) (1.49)

innd cont de valorile concentraiilor se obine:

E = (kT / e) ln (c/cech)
(1.50)

ce reprezint diferena de potenial dintre electrod i soluie. n urma unor transformri elementare aceast diferen de potenial poate fi scris astfel:
E = - (kT / e) ln cech + (kT / e) ln c =
= 0E + (kT / e) ln c (1.51)

19

Capitolul 1

unde 0 este o caracteristic a materialului din care este realizat electrodul, numit
potenial de electrod standard. Acesta reprezint potenialul n condiii standard (c =

1M). n acelai timp, E se mai numete i potenialul de electrod. Notm c ecuaia (1.51) a fost dedus ntr-un caz particular (z = 1). n cazul general aceast ecuaie devine:
E = 0E +

kT ln c Ze

(1.52)

i se numete ecuaia lui Nernst. Legat de variaia concentraiei i a potenialului electric n soluie, ele arat ca n figura 1-5:
c+(x) c+(x) = cech. c

0
(x)

xs

xs

Figura 1-5: Dependena concentraiei i potenialului electric de-a lungul soluiei

Aa cum se observ n figura 1-5 exist o regiune de tranziie de la valorile acestor mrimi n imediata apropiere a electrozilor (xs), la valorile lor constante. Grosimea acestui strat de tranziie se numete lungime Debye (D).
1.7 Tensiunea electromotoare a unei celule galvanice

Existena unei diferene de potenial ntre un electrod i electrolitul n care acesta este imersat determin apariia unei tensiuni electromotoare (Eem) ntre bornele unei
20

Electrolii

celule galvanice. Pentru a calcula aceast tensiune considerm cazul din figura 1-6, n care cei doi electrozi de argint sunt introdui n dou soluii de AgNO3 de concentraie c1 i c2. Cele dou compartimente sunt conectate printr-o punte ce conine o sare. Punte de sare A B

c1

c2

Figura 1-6: Celula galvanic interconectat cu o punte de sare

Deoarece suma cderilor de tensiune pe un circuit nchis este nul, se obine:

B A + A (c1 ) + 12 + (c2 ) B = 0 1 24 14 4 4 3 2 3 14 4 2 3
E E1 E2

(1.53)

E = E2 E1 - 12

Deoarece potenialul ce apare la contactul dintre dou lichide de concentraii diferite poate fi neglijat (12 0), cu ajutorul relaiei (1.52) tensiunea electromotoare va deveni:
E E2 +
sau
0

kT kT ln c2 0 1 ln c1 E e e kT ln (c2/c1) e

(1.54)

electrozii fiind identici ( 0 2 = 0 1 ). E E

1.8 Determinarea pH-ului

Determinarea pH-ului unei soluii poate fi realizat prin msurarea diferenei de potenial ce apare ntre doi electrozi, introdui ntr-o soluie analizat. Aceasta se poate realiza cu ajutorul unui electrod de argint, pe care este depus
21

Capitolul 1

AgCl, introdus ntr-o soluie concentrat de HCl (de obicei de concentraie 0.1N ). Sistemul electrod-soluie se gsete ntr-un tub de sticl ce are la partea inferioar o membran, deasemenea din sticl. Printr-un control riguros al compoziiei i al aranjamentului tridimensional al cationilor ce intr n compoziia sticlei (Na+, Ca2+, Li+, Ba2+) aceast membran poate avea un caracter selectiv. De aceea ea permite, n general, numai difuzia ionilor de hidrogen. Notm c aceste membrane sunt ns uor sensibile i la difuzia ionilor de Na. Pentru a diminua acest proces, n compoziia sticlei se introduc ioni de litiu n concentraie ridicat. Cel de-al doilea electrod, folosit la msurarea pH-ului, este un electrod de referin. De obicei acesta este tot un electrod Ag AgCl, aflat ntr-un tub ce conine o soluie KCl de concentraie ridicat. n poriunea inferioar a tubului se gsete un dop ceramic poros, avnd rolul unei jonciuni lichide. Cei doi electrozi se introduc n soluia analizat i sunt conectai la un aparat ce msoar diferena de potenial dintre ei, AB.

A 1 Soluie HCl cH(1) Membran sticl

V 2

KCl

cx soluie test

Figure 1-7: Dispozitivul de msur al pH-ului innd cont c variaia de potenial de-a lungul unui circuit nchis este nul se obine:

AB + E(2) + J2 + J1 + E(1) = 0

(1.55)

unde: E(2) - potenialul de electrod al electrodului 2 (referin); valoarea lui rmne constant.
E(1) - potenialul de electrod al electrodului 1 (referin); valoare ce rmne
22

Electrolii

constant.
J2 - diferena de potenial ce apare la jociunea dintre KCl i soluia testat.

Deoarece concentraia KCl este foarte ridicat i deoarece mobilitile ionilor de K i Cl sunt aproximativ egale, valoarea acestei tensiuni este foarte mic (vezi relaia (1.54)).
J1 - diferena de potenial ce apare de-a lungul membranei de sticl.

Aceast diferen de potenial (J1) se determin innd cont c la echilibru curentul net datorat ionilor de H+ ce strbat membrana din sticl este nul. De aceea se verific din nou relaia (1.48) care aplicat, conduce la:
ln cH(1) +

e e (HCl) = ln cH(x) + (x) kT kT kT ln [cH(x)/ cH(1)] e

(1.56)

De aceea diferena de potenial ce apare la membrana de sticl devine:

J1 = (x) - (1) =
(1.57)

unde (x) i (1) sunt potenialele electrice de-o parte i de alta a membranei (n soluia analizat respectiv n interiorul electrodului de sticl). n aceste condiii diferena de potenial msurat de voltmetru V va fi:
AB = const. - J1 = const. -

kT ln [cH(x)/ cH(1)] e

(1.58)

n urma unor transformri elementare aceast relaie devine:

AB = const. -

kT ln cH(x) e kT pH e

(1.59)

sau

AB = const. + 2.303

(1.60)

Aa cum se observ aceast diferen depinde linear de pH. Astfel, folosind soluii etalon, dispozitivul poate fi calibrat fiind folosit la msurarea pH-ului unei soluii. n final subliniem c aparatele folosite la msurarea pH-ului (pH-meter) au uneori

23

Capitolul 1

un singur electrod de msur, format ns prin combinarea a doi electrozi de tipul celor prezentai anterior.
1.9 Transport n cmp electric. Electroforez

Fenomenul de deplasare al particulelor, ncrcate electric, sub influena unor cmpuri electrice se numete electroforez. Metoda este folosit frecvent la analiza ionilor metalici, macromoleculelor, particulelor coloidale, particulelor celulare i subcelulare, care atunci cnd se gsesc ntr-o soluie electrolitic poart, n general, sarcin electric. n acelai timp, metoda poate fi aplicat i la analiza unor componeni ce pot fi transformai n particule ncrcate. Electroforeza s-a impus, n special, n domeniul biologic i la analiza componenilor plasmei sanguine. Astfel, prin combinarea unor astfel de tehnologii (tipice electroforezei) cu tehnici imunologice, se poate realiza separarea i identificarea proteinelor serice.
1.9.1 Punctul izolelectric

ncrcarea electric a particulelor biologice aflate n mediul fiziologic este rezultatul a dou procese: a) disocierea unor grupri chimice aflate la exteriorul acestor particule. Astfel, de exemplu n cazul proteinelor, gruprile ce sunt frecvent ionizate sunt COOH i NH2. b) absorbia unor ioni aflai n mediul fiziologic (clorul, de exemplu). Un parametru important, ce influeneaz fenomenul de ncrcare electric, este pH-ul mediului n care aceste particule se afl. Pentru a analiza n continuare aceast influen, vom considera cazul a dou din reaciile de disociere ce au loc frecvent n cazul mai sus menionat:
COOH COO + H+ NH3+ NH2 + H+ (1.61) (1.62)

Fiecare din aceste reacii se caracterizeaz printr-un anumit grad de disociere, a i b, al gruprilor COO, respectiv NH3+:
24

Electrolii

[COO ] a = , [COO ] + [COOH]

b =

(1.63)

[ NH 2 ] , + [ NH 2 ] + [ NH 3 ]

(1.64)

i prin urmtoarele constante de echilibru: [COO ][H + ] ka = , [COOH]

[ NH 2 ][H + ] kb = . + [ NH 3 ] exist urmtoarele relaii:
a =
(1.65)

(1.66)

n urma unor transformri matematice, ntre aceste constante i gradul de ionizare

ka k a + [H + ] kb kb + [H + ]

(1.67)

b =

(1.68)

Considernd cazul unei proteine avnd Na grupri COOH i Nb grupri NH2, este evident c sarcina q a acesteia este:
q = [Nb (1 - b) - Na a] e =

ka [H + ] = [Nb - Na ]e k a + [H + ] k a + [H + ]
H+, adic de valoarea pH-ului mediului respectiv.

(1.69)

Se observ astfel c sarcina electric a proteinei depinde de concentraia ionilor Astfel, la o modificare a pH-ului de la o valoare acid la una bazic, are loc o modificare substanial att a valorii sarcinii, ct i a semnului ei. Exist astfel o valoare a pH-ului la care particulele nu sunt ncrcate electric. Aceasta se numete punct izoelectric i este o caracteristic a particulei respective.
1.9.2 Mobilitatea electroforetic

Particulele ncrcate capt, sub influena unui cmp electric extern, Eext., o
25

Capitolul 1

anumit vitez, ce depinde att de particul ct i de cmp. Viteza micrii n cmp, numit i vitez de drift, vd, se calculeaz cu relaia: r r v = u Eext contrar. Considernd cazul unei particule sferice, de raz r, ce se deplaseaz printr-un mediu lichid avnd vscozitatea , la un moment dat se ajunge la o stare de echilibru ntre fora electrostatic i fora Stokes:
q Eext = 6 r vd
(1.71)

(1.70)

unde u este mobilitatea electroforetic, pozitiv pentru q > 0, i negativ n caz

Rezult c viteza de drift a particulelor este acum:

vd =

q Eext = u Eext 6r
u=

(1.72)

adic

q 6r

(1.73)

Relaia anterioar este aproximativ, deoarece la micarea n cmp, particulele n micare antreneaz un strat de lichid n care se gsesc i alte particule ncrcate (de semn contrar,) ce modific astfel distribuia de cmp electric. De aceea, practic particula se mic ntr-un cmp a crei valoare difer de cea a cmpului aplicat din exterior, Eext. nainte de a prezenta coreciile aplicate formulei vitezei de drift, vom analiza fenomenele ce au loc atunci cnd o particul (aflat n repaus) se gsete ntr-un mediu lichid.
1.9.2.1 Cmpul electric al unei particule ncrcate

n paragraful anterior am prezentat cmpul i potenialul unei sarcini punctiforme. De data aceasta vom analiza cazul unei particule ncrcate electric cu sarcina q i avnd raza a. Dac aceasta se afl ntr-un mediu lichid, a crei permitivitate electric este r, atunci intensitatea cmpului la suprafa este:
26

Electrolii

E=

q 1 2= 0 r 4 0 r a

(1.74)

unde = q/(4a2) este densitatea de sarcin electric. Atunci cnd mediul n care se gsete particula este ionic, n jurul acesteia se formeaz un nor de sarcin electric (format din ioni de semn contrar particulei). Deoarece acetia au tendina de a neutraliza sarcina q a particulei, rezult c sarcina total a norului este -q. Raza acestui nor se numete distan de ecranare Debye, i se noteaz cu D. Notm c, de-a lungul acestui strat, intensitatea cmpului descrete exponenial, iar la distane d >> D, el poate fi chiar neglijat. Fr a i demonstra, precizm c distana Debye este invers proporional cu concentraia speciilor ionice existente n mediul lichid:

e2 1 = zi2 ci () , 2 D 0 r k BT i

(1.75)

unde kB este constanta lui Boltzman, T - temperatura lichidului, zi valena speciei ionice i, ci() - concentraia ionilor din soluie la distan mare (d >> ), ea exprimndu-se n numr de particule pe unitatea de volum. Corelat cu distana Debye, fora ionic a soluiei electrolitice, I, este definit prin relaia:
I=

1 zi2 ci () 2 i

(1.76)

unde ci () este concentraia molar ( ci = ci/NA).

Referitor la sumele ce apar n relaiile (1.751.76), precizm c ele se fac dup toate speciile ionice existente n soluie. innd cont de relaiile de mai sus, se obine:

e 1 8 1 = ( N 0 e )I 2D r 4 0 k BT
unde N0 este numrul lui Avogadro.

(1.77)

Fcnd un calcul al lungimii Debye la o for ionic I0 = 1mol/l, se obine 0D = 3.05 10-8cm. Astfel, n cazul n care I I0 se poate utiliza relaia:
27

Capitolul 1

0D = (3.05 10-8) /

I (cm)

(1.78)

Fr a detalia, precizm c atunci cnd raza particulei este mult mai mare dect D, mobilitatea electroforetic se poate calcula cu relaia:
u=

0 r q 1 1 q D = 4 0 r a 1 + a / D 4 a
(s-a aproximat 1/(1 + x) 1/x dac x >> 1)

(1.79)

Aa cum se observ, relaia obinut n acest caz difer fa de formula obinut n paragraful anterior (1.73). n cazul n care lungimea Debye nu este mult mai mic dect raza particulei, mobilitatea electroforetic se va calcula cu relaia:
u=

0 r f(a/D)

(1.80)

unde, (zeta) - potenial electrocinetic sau potenialul corespunztor planului de alunecare, este n general ceva mai mic dect potenialul de la suprafaa particulei (a) a raza particulei considerat sferic , iar f este aa numita funcie a lui Henry. Cteva valori ale acestei funcii, pentru diferitele valori ale raportului a/D, sunt prezentate n tabelul 1-2:
Tabelul 1-2: Valori numerice - Funcia Henry (a/D) f 0 2/3 0.1 0.668 1 0.683 10 0.83 102 0.972 103 0.997

n aceste condiii, aproximnd din nou (a), vom obine urmtoarea relaie de calcul a mobilitii:
u=

f (a / d ) q 4a 1 + a d

(1.81)

n cazul unei soluii a crei for ionic este ~ 0.1N, pentru o protein globular de raz 30, aflat ntr-un cmp electric ( 1V/cm), se obine o valoare u 10-5 (cm/s) / (V/cm).

28

Electrolii

De aceea, o deplasare a ei de aproximativ 1cm n cmp, va necesita un timp de aproximativ 3 ore.

1.10 Reacii de oxidare i reducere

n paragraful 1.6 am vzut c, la introducerea unui electrod metalic, M, ntr-o soluie ce conine ioni ai acestuia, Mn+, la suprafa se desfoar, preponderent, una din reaciile:
Mn+ + ne M M Mn+ + ne (1.82) (1.83)

De asemenea, ntre acetia i soluie apare o diferen de potenial, a crei valoare se calculeaz cu relaia lui Nernst. Aceast diferen, numit i potenial de electrod, se poate afla prin msurarea diferenei de potenial ntre electrodul de msur i un altul, numit electrod de referin. Acesta are proprietatea c potenialul su nu depinde de concentraia ionilor din soluie, iar valoarea sa a fost aleas, convenional, zero. Cele dou reacii ce se pot desfura la suprafaa electrodului sunt denumite de chimiti reacii de reducere (1.82) i de oxidare (1.83). Astfel, reducerea reprezint adugarea de electroni la o specie chimic, n timp ce oxidarea reprezint eliminarea unor electroni. n aceste condiii, potenialele de electrod, caracteristice celor dou reacii, se vor numi poteniale de reducere, Ered., respectiv de oxidare, Eoxid. (Ered = -Eoxid.). n cazul n care concentraia ionilor din soluie este 1M, aceste poteniale se numesc standard i se noteaz cu E0. De exemplu, n cazul reaciei de oxidare ce are loc la suprafaa unui electrod de zinc, se obine:
Zn2+ + 2e Zn (E0 = 0.763V) (1.84)

innd cont de acestea, n continuare vom face din nou o analiz a unei celule voltaice. De aceea, vom considera urmtoarea celul voltaic: Zn|Zn2+(1M)||Cu+2(1M)|Cu
29

Capitolul 1
e

()
0

(+)
0

Zn

Cu

Zn

2+

1.0M

Cu

2+

1.0M

Figura 1-8: Celula voltaic Zn|Zn2+(1M)||Cu+2(1M)|Cu

Aa cum se observ, practic celula voltaic poate fi considerat ca fiind format din dou jumti de celul, n fiecare avnd loc una din cele dou reacii posibile de oxidare sau de reducere. Referitor la jonciunea ce le separ, ea permite contactul electric ntre cele dou compartimente, fr ns a avea loc un amestec substanial al mediilor lichide. Pentru ca n circuitul exterior s apar un curent electric i pentru ca acesta s se continue prin soluie, este clar c la unul din electrozi va trebui s aib loc o reacie de oxidare iar la cellalt una de reducere. n cazul celulei anterior prezentate (figura 1-8), la nivelul electrozilor au loc urmtoarele reacii:
Zn Zn2+ + 2e (E0 = 0.762V) Oxidare Cu2+ + 2e Cu (E0 = 0.337V) Reducere (1.86) (1.85)

n aceste condiii, tensiunea electromotoare n condiii standard se obin adunnd potenialele corespunztoare celor doi electrozi:
E0celul = 0.76 + 0.34 = 1.10V
(1.87)

Aceast tensiune electromotoare determin o deplasare de sarcin electric egal cu (n F) coulombi, unde n este numrul de electroni transferai (2 pentru exemplul prezentat) iar F - numrul lui Faraday. Lucrul mecanic efectuat acum pentru deplasarea acestei sarcini este: nF E0celul. innd cont de legtura ce exist ntre variaia potenialului Gibbs i lucrul mecanic,
30

Electrolii

G = -n F E0celul,

(1.88)

pentru c reaciile din celul s fie spontane trebuie ca G < 0, adic tensiunea electromotoare a celulei s fie pozitiv (E0celul > 0). De aceea, producerea unor reacii inverse la cei doi electrozi (oxidarea cuprului, E0Cu = -0.337V, i reducerea zincului, E0Zn = -0.763V) ar duce la obinerea unei valori negative a tensiunii electromotoare, E0celul = -1.1V. Evident, astfel de procese nu ar putea avea loc spontan. Valoarea mai mare a potenialului pentru cupru arat c acesta se reduce mai uor. n acelai timp, innd cont de potenialele de oxidare pentru cei doi electrozi, 0.763V (Zn) i 0.337V (Cu) rezult c zincul se va oxida mai uor (avnd potenialul de oxidare mai mare). De asemenea, reaciile de la nivelul electrozilor pot fi combinate, prin eliminarea electronic, ntr-o singur relaie:
Zn + Cu2+ Zn2+ + Cu (1.89)

Chimitii numesc aceast reacie una de tip redox, iar suma dintre potenialul de reducere i cel de oxidare se numete potenial redox.
E0redox = E0oxidare + E0reducere
(1.90)

n cazul menionat (figura 1-8), potenialul redox este, evident, 1.1 V. Reaciile prezentate anterior s-au desfurat n condiii standard, la o temperatur de 25C. n cazul n care condiiile experimentale se abat de la aceast situaie, calculul potenialelor se face cu ajutorului relaiei lui Nernst. Astfel, n cazul unei reacii de reducere de forma:
X + n e- = Y
(1.91)

potenialul de reducere, Ered,. este: RT [Y ] ln Ered. = E red. nF [ X ]

0

(1.92)

innd cont de aceast relaie, modul de calcul al tensiunii electromotoare n cazul unei celule este similar cu cel prezentat anterior.

31

Capitolul 1

1.11 Aplicaii ale fenomenelor electrochimice n domeniul medical i

farmaceutic
Fenomenele electrochimice sunt utilizate frecvent n chimia analitic, la analiza cantitativ a unor substane lichide. De aceea, metodele ce au la baz aceste fenomene se mai numesc i electro-analitice. Astfel, prin folosirea unor electrozi specifici i prin msurarea conductivitii sau a potenialelor acestor electrozi, devine posibil determinarea concentraiei substanei analizate. Prin dezvoltarea unor micro-electrozi foarte sensibili, aceste metode au devenit n ultimul timp foarte competitive. Astfel, metodele se utilizeaz frecvent n analizele de laborator clinic, la determinarea unor substane medicamentoase, sau a unor metabolii. Pe lng sensibilitate, aceti electrozi se remarc i printr-o selectivitate, ei fiind anume potrivii pentru determinarea concentraiei unor specii ionice (electrozi ion selectivi). Un alt avantaj al acestor metode este i n preul relativ mic al aparatelor, comparativ cu celelalte metode (cromatografie, spectroscopie, rezonan magnetic).
1.11.1 Procese de oxidare i reducere

De o deosebit importan este i cunoaterea reaciilor redox, specifice unor medicamente aflate n stare lichid. Deoarece desfurarea lor influeneaz stabilitatea acestor medicamente, este necesar gsirea unor metode pentru a micora viteza lor de reacie. Un parametru ce influeneaz viteza acestora este pH-ul mediului n care este dizolvat substana medicamentoas. De exemplu, vom considera cazul reaciei de oxidare a hidrochinonei, aflat ntr-un mediu apos:

32

Electrolii

OH

+
OH

2H2O

+
O

2H3O

2e

Figura 1-9: Transformarea hidrochinonei (H2Q) n benzochinon (Q)

Conform ecuaiei Nernst (n forma (1.92)), potenialul de oxidare este: RT [H 3O + ]2 [Q] Eoxid. = -E oxid. ln 2F [H 2Q]
0

= -E0oxid. -

RT [Q] RT ln ln[H 3O + ] 2 F [H 2Q] F F

(1.93)

' RT ln[H 3O + ] = - Ea0 -

Semnul minus apare datorit considerrii cazului oxidativ. innd cont c viteza unei reacii de oxidare sau reducere este cu att mai mare cu ct potenialul de oxidare sau reducere este mai mare, rezult c pentru exemplul considerat, prin creterea concentraiei ionilor de H3O+ adic prin micorarea pHului, aceste reacii pot fi inhibate. De aceea, controlul pH-ului medicamentelor lichide este necesar pentru asigurarea stabilitii acestora. Pentru multe din medicamentele de acest tip este necesar existena unor valori mici ale pH-ului. Dintre compuii farmaceutici puternic afectai de reaciile de oxidare i de reducere sunt: acidul ascorbic, riboflavina, vitamina K1, vitamina E, morfina, clorpromazina. La acestea se adaug i grsimile i uleiurile. Valori ale potenialelor standard de reducere ale unor substane medicamentoase sunt prezentate n tabelul:

33

Capitolul 1

Tabelul 1-3: Poteniale standarde de reducere

Vitamina K1 Acidul ascorbic Riboflavin Efedrina

E0'(V) 0.363 0.115 0.136 -0.208 -0.117 0.380 0.791

pH 0.20 5.20 4.58 7.00 5.00 7.00 0.29

O alt modalitate pentru a preveni oxidarea anumitor medicamente este i adugarea unor substane antioxidante. Acestea se oxideaz mai uor dect substanele pe care le protejeaz, consumnd practic oxigenul din recipientul n care se gsete medicamentul. Astfel, oxidarea de exemplu a ionului sulfit decurge dup reacia: SO32- + 2 OH = SO4 + 2e + H2O Valoarea standard a potenialului de oxidare al acestei reacii este 0.93V. Aceasta nseamn c acest ion va proteja orice medicament al crui potenial de oxidare este mai mic dect aceast valoare. i asta deoarece, n cazul mai multor reacii de oxidare, prima care se desfoar este cea cu un potenial de oxidare mai ridicat.

34

Magnetism

2. Fenomene ondulatorii
Prin und se nelege o perturbaie iniiat ntr-un punct din spaiu, numit sursa i care se propag din aproape n aproape cu o vitez finit. n cele ce urmeaz ne vom referi mai ales la undele mecanice i cele electromagnetice. Astfel, n cazul undelor mecanice, perturbaia este de natur mecanic (variaie a presiunii, densitii, etc.), fiind astfel obligatorie existena unui mediu solid, lichid sau gazos prin care unda s se propage. De exemplu, undele sonore, sunt unde mecanice ce se propag printr-un mediu substanial i care sunt percepute de urechea uman. Ele constau din zone de compresiune ale mediului, care alterneaz n mod regulat cu zone de rarefiere. Pe de alta parte, undele electromagnetice constau dintr-o variaie a cmpului electric i magnetic, variaie ce se poate propaga printr-un mediu substanial sau chiar prin vid. Referitor la funciile ce descriu aceste perturbaii, matematicienii au artat c practic orice perturbaie poate fi exprimat printr-o suma infinita de oscilaii armonice, a cror frecven variaz continuu de la 0 la . Menionm c oscilaia armonic este descris printr-o funcie sinusoidal de forma:
(t) = A sin (t + 0)
(2.1)

unde: este o mrime caracteristica mediului prin care unda se propaga (De ex: presiune (P), densitate (), cmp electric (E), magnetic (B), deplasare, etc.);

A amplitudinea oscilaiei; pulsaia oscilaiei;

i 0 faza iniial. De asemenea argumentul funciei sinus, adica (t + 0) se numete faza undei. O alt mrime caracteristic oscilaiei armonice este i perioada, T, definit ca intervalul de timp dup care mrimea va avea aceeai valoare.
35

Capitolul 2

(t) = (t + T)

(2.2)

Din caracterul sinusoidal al funciei, rezult:

T = 2/
(2.3)

T A
0

Figura 2-1: Oscilaia armonic temporal sub form sinusoidal

Cu alte cuvinte, perioada reprezint timpul n care are loc o oscilaie complet, iar numrul de oscilaii complete ce au loc ntr-o secund se numete frecven:
= 1/T
(2.4)

n continuare vom urmri modul n care o perturbaie sinusoidal, iniiat n sursa de oscilaie se propaga din aproape n aproape. Considernd originea sistemului de referin n punctul n care se gsete sursa, vom exprima valoarea mrimi ntr-un punct P aflat la o distanta r. Referitor la forma sursei, vom neglija dimensiunile ei, putnd considernd-o ca fiind punctiform. Analiznd cazul undelor mecanice, perturbaia iniiat n surs se transmite particulelor nvecinate, din aproape n aproape, astfel nct oscilaia n P difer n general prin amplitudine. Concomitent are loc i o ntrziere a micrii oscilatorii, datorit timpului necesar ca unda s se propage din surs n punctul P. De aceea faza undei va fi (t - tP)+ 0 unde tP = r/v, cu v viteza de propagare a undei prin mediul respectiv. n aceste condiii, perturbaia din P este descrisa de ecuaia:
36

Magnetism

(r, t) = A(r) sin [(t - r/v)+ 0)]

(2.5)

Se observa c, la un moment de timp dat, toate punctele aflate la aceeai distan

r de surs au aceeai faz.

Cu alte cuvinte, aceste puncte vor avea aceeai valoare a perturbaiei. De aceea aceste puncte se situeaz pe suprafee sferice, cu centrul n S (surs), aceste unde numindu-se armonice sferice, iar suprafeele respective suprafee de faz constant. n acelai timp cea mai deprtat suprafa de faz se numete frontul undei i reprezint distana maxim faa de surs la care s-a propagat oscilaia initial.

1 , 2 = const. front de und S r P

Figura 2-2: Propagarea undelor sferice

Dac sursa de oscilaie are dimensiuni mari sau dac punctul de observaie P se gsete la distan mare fa de aceasta, atunci suprafeele de faz constant pot fi considerate ca fiind plane, caz n care spunem c exist o und armonic plan, descris de ecuaia:
(x, t) = A sin [(t - x/v)+ 0)]
(2.6)

37

Capitolul 2

1 const.

2 const.

x1 S

A x2

B x

Figura 2-3: Propagarea undelor plane

n expresia anterioara s-a considerat c unda se propaga de-a lungul axei ox cu viteza v. Aa cum se observ, suprafeele de faz sunt plane, perpendiculare pe direcia de propagare. Toate punctele aflate n acelai plan, situat la distanta x de surs, sunt caracterizate prin aceeai faz i amplitudine de oscilaie. innd cont de relaia (2.3), perturbaia devine:
(x, t) = A(x) sin 2

x t + 0 = T vT
(2.7) (2.8)

= A(x) sin 2

t x + 0 T

unde

=vT

Produsul v T, ce apare n urma acestui calcul, se numete lungime de und, . Aceast mrime este o caracteristic esenial a undelor, ea reprezentnd distana parcurs de frontul de und ntr-un timp egal cu perioada de oscilaie. O alta interpretare a acestei mrimi este i distana de-a lungul axei de propagare dintre dou puncte, ce au acelai valoare a perturbaiei.
(x) = (x + )
(2.9)

Cu alte cuvinte, unda se caracterizeaz att printr-o periodicitate temporar T, cat i una spaiala, .
38

Magnetism

(x, t) = (x, t + T) (x, t) = (x + , t)

(2.10) (2.11)

(x, t1)

x1 x3

x2 x4

Figura 2-4: Variaia, de-a lungul axei de propagare ox, a perturbaiei , la momentul arbitrar de timp, t1: (x1, t1) = (x2, t1); x2 - x1 = ; (x3, t1) = (x4, t1); x4 - x3 =

Astfel, dac perioada de oscilaie (T) sau frecvena () (2.4) sunt caracteristici ale sursei de oscilaie, lungimea de und , legat de viteza de propagare (2.8), nglobeaz i caracteristici ale mediului prin care unde se propag.
(x1, t) T

t 1 t3

t 2 t4

Figura 2-5: Variaia n timp a perturbaiei ntr-un punct oarecare, x1: (x1, t1) = (x1, t2); t2 - t1 = T; (x1, t3) = (x1, t4); t4 - t3 = T

Referitor la perturbaia transmis, precizm c mrimea poate fi scalar sau vectorial. De exemplu, n cazul propagrii undelor sonore prin aer, ar putea fi
39

Capitolul 2

presiunea sau densitatea straturilor de aer. Aceste mrimi fiind scalare, avem de a face cu o und scalara. Exist situaii n care perturbaiile sunt de natur vectorial, r r cum este cazul mrimilor E sau B ce caracterizeaz unda electromagnetic. De aceea, o astfel de und se numete vectorial. O caracteristic a undelor vectoriale este i direcia de oscilaie a perturbaiei vectoriale. Astfel daca vectorul oscileaz paralel cu direcia de propagare, unda se numete longitudinal, iar daca oscilaia are loc perpendicular pe aceeai direcie (de propagare), unda se numete transversala. Apare astfel un nou element definitoriu i anume planul de oscilaie. Dac acest plan nu se modific n timpul propagrii, unda se numete plan polarizat.

Z
Figura 2-6: Unda plan polarizat, n care perturbaia oscileaz n acelai plan (XOY) ce conine direcia de propagare

Dac n timpul propagrii perturbaia i schimb direcia de oscilaie, astfel nct extremitatea vectorului descrie un cerc, se spune c unda este polarizat circular. n acest caz frecvena undei corespunde frecvenei de rotaie a vectorului .

40

Magnetism

( x1 , t 3 )

o
( x1 , t 2 ) ( x1 , t1 )

Figura 2-7: Unda polarizat circular, n care perturbaia descrie un cerc situat ntr-un plan perpendicular pe direcia de propagare

n funcie de sensul micrii, daca rotaia vectorului se face spre dreapta, avem polarizare dextrogir, iar n caz contrat levogir. innd cont de acestea, se poate arta c o und plan polarizat poate fi obinut prin compunerea a dou componente polarizate circular, una levogir, iar cealalt dextrogir, ce se rotesc cu aceeai frecven.
L R

Figura 2-8: Unda plan polarizat, ca o compunere de dou unde circular polarizate, levogir respectiv dextrogir

2.1 Interferen

Nedorind o detaliere exclusiv (aceste noiuni depind interesul acestei lucrri), se poate afirma c fenomenul de compunere a doua sau mai multe unde, care se ntlnesc ntr-un punct din spaiu, se numete interferen. Astfel, dac undele ce se ntlnesc sunt n faz, efectul lor se cumuleaz iar fenomenul este constructiv, iar dac ele sunt n opoziie de faz, efectul lor este distructiv putnd fii chiar anulat.
41

Capitolul 2

1 2 = 1 + 2 = 1 + 2

a)

= 1 + 2 = 0

b)

Figura 2-9: Compunerea undelor aflate (cazuri limit): a) n faz constructiv; b) n opoziie de faz distructiv

Fenomenele de difracie apar atunci cnd n calea undelor exista diverse discontinuiti ale mediului, ca de exemplu prezena unor obstacole. La baza acestui fenomen st principiul lui Huygens, conform cruia orice punct al unui front de und poate fi considerat ca o surs secundar punctiform. Suprafaa nfurtoare a acestor unde secundare reprezint o suprafa de faz constant a undei primare. Pentru a urmrii modul de aplicare al principiului, s considerm cazul unei unde sferice, emis de o surs punctiform aflat n S. Considernd c la momentul de timp t frontul undei este S1, noul front de und S2 la momentul de timp t + t reprezint nfurtoarea fronturilor undelor secundare emise de punctele situate pe S1.

42

Magnetism

1 - 2 = = const.

t t + t

S1 S2

Figura 2-10: Propagarea undelor sferice, conform principiului lui Huygens: S1 frontul undei la momentul t; S2 frontul undei la momentul undei t + t

Fenomenul se ntlnete i atunci cnd undele ntlnesc n calea lor deschideri sub forma unor fante (practicate) ntr-un paravan. Atunci cnd, de exemplu, frontul unei unde plane ajunge n dreptul unor astfel de deschideri (de dimensiuni comparabile cu lungimea de und a radiaiei folosite!), conform principiului enunat anterior, apar o serie de noi surse de unde sferice, ce explic apariia n spatele fantelor a unui sistem de maxime i minime ale intensitii radiaiei utilizate, rezultate tocmai prin compunerea noilor unde.

2.2 Fenomene magnetice 2.2.1 Introducere

Aceste fenomene au fost puse n eviden nc din antichitate, prin descoperirea unor minerale magnetite (oxid de fier sub forma de cristale). Ele au proprietatea de a atrage obiecte mici din fier, aflate n imediata lor apropiere. Aceasta nseamn c magnetita manifest, n spaiul din jurul su, anumite proprieti i se spune c aceast substan creeaz un cmp magnetic. De asemenea, s-a observat c acest cmp este mai puternic n apropierea unor (dou) domenii de pe aceste cristale numite poli magnetici. Folosind substane care conin fier, cobalt sau nichel, s-au putut construi artificial magnei. Astfel, un magnet de dimensiuni mici, care se poate roti n jurul unei axe verticale,
43

Capitolul 2

se numete ac magnetic. Dac n vecintatea unui magnet este adus pilitur de fier, se constat c ea se distribuie de-a lungul unor linii curbe nchise, numite linii de cmp magnetic. Aducnd un ac magnetic n diverse puncte din apropierea unui magnet permanent, se constat c el se orienteaz dup direcia tangent la aceste linii. Aceste observaii experimentale au permis descrierea cmpului magnetic printr-o mrime vectorial, r numit intensitatea cmpului magnetic, H ([H]S.I. = A/m). r H1

r H2
Figura 2-11: Liniile de cmp magnetic ntr-un magnet permanent (ies, la exterior, din polul Nord i intr n polul Sud); sunt figurai cei doi poli ai magnetului, dar i intensitatea cmpului magnetic, tangent la liniile de cmp

Frecvent, pentru aprecierea intensitii cmpului magnetic, se folosete i inducia magnetic, a crei formul, n vid, se scrie: r r B = 0 H unde 0 = 410-7H/m (Henry/metru) este permeabilitatea vidului. Fr a detalia, aprofundarea noiunilor magnetice depind interesul acestei cri, precizm c un cmp magnetic poate fi obinut i la trecerea unui curent electric printrun conductor.

(2.12)

44

Magnetism

r B1
I r I

r B
a) b)

r B

r B2

Figura 2-12: Liniile de cmp magnetic n jurul unui conductor liniar lung, (a), sau solenoid (electromagnet) (b) parcurse de curent electric. Sensul acestora este dat de regula burghiului drept

n cazurile descrise n figura (2-12) modulul induciilor cmpului magnetic se calculeaz ( direcia este tangent la liniile de cmp iar sensul este dat de regula burghiului drept,) cu formulele, scrise n cazul vidului:
a) B =

0 I 2r

(2.13)

(r fiind distana fa de conductor, I intensitatea curentului ce-l parcurge.)

b) B =

0 nI 2l

(2.14)

(n fiind numrul de spire ce intr n alctuirea solenoidului, I intensitatea curentului ce-l parcurge; formula este valabil doar pentru intensitatea cmpul magnetic (uniform) din interiorul solenoidului - vezi figura (2-12).)
2.2.2 Substana n cmp magnetic

Un contur circular, de diametru mic, parcurs de curent electric, de intensitate I, se comport ca un magnet, el fiind numit dipol magnetic.
r n r m

Figura 2-13: Dipolul magnetic

45

Capitolul 2

Acesta se caracterizeaz prin momentul de dipol magnetic, definit prin relaia: r r r m = I S = IS n , (2.15) r unde S este suprafaa conturului iar n vectorul normal la contur (regula burghiului drept, n funcie de sensul intensitii). Schimbnd sensul curentului, se va schimba i sensul dipolului magnetic. Prin analogie cu cmpul electric, un astfel de moment, la introducerea ntr-un cmp r magnetic de intensitate H , se orienteaz n sensul cmpului. Energia potenial de interaciune cu cmpul este:
Up = -0 m H

(2.16)

Introducnd diverse substane n cmp magnetic, s-a constatat c ele se comport n mod diferit. Astfel, unele sunt atrase puternic n cmp, n timp ce asupra altora influena cmpului este nesemnificativ. Explicarea magnetizrii se face prin considerarea c n atomi i molecule exist cureni electrici locali, datorai micrii electronilor, cureni ce determin existena unor momente magnetice atomice. n absena unui cmp magnetic, aceste momente magnetice sunt distribuite, datorit agitaiei termice, n mod haotic, astfel nct cmpul magnetic produs de ele se anuleaz, sau, cu alte cuvinte, aceste corpuri sunt nemagnetizate. n prezena unor cmpuri magnetice, n unele cazuri aceste momente se aliniaz paralel, contribuind astfel la crearea unui cmp magnetic suplimentar. Fenomenul se numete magnetizare, din aceasta categorie fcnd parte substanele feromagnetice (Fe, Co, Ni). O alt categorie de substane, la introducerea n cmp, determin obinerea unui cmp magnetic de sens contrar celui aplicat acestea numindu-se substane

diamagnetice. Exista i o categorie cu proprieti intermediare, numite paramagnetice.

2.3 Unde electromagnetice

Orice cmp electric, variabil n timp, produce un cmp magnetic variabil ale cror
46

Magnetism

linii sunt nchise. Pe de alta parte, conform legii induciei electromagnetice, un cmp magnetic variabil n timp, produce la rndul sau un cmp electric variabil, ale crui linii sunt de asemenea nchise. Acest ansamblu, format din cele doua cmpuri care se genereaz reciproc i care se propag n spaiu cu o vitez finit, se numete cmp electromagnetic. Precizam c acest cmp poate fi generat i se poate propaga i n vid, cu o viteza ce coincide cu viteza luminii, c = 3 108 m/s. Pentru un mediu oarecare, viteza de propagare este
v=

c c = r r n

(2.17)

unde r i r sunt permitivitatea electric relativ respectiv permeabilitatea magnetic relativ a mediului, iar n este aa numitul indice de refracie. Deoarece intensitatea cmpului electric i magnetic sunt mrimi vectoriale, acest cmp este vectorial, el r r r fiind de fapt transversal. De fapt vectorii E i B i viteza de propagare v sunt reciproc perpendiculari, alctuind un triedru drept.
Y
E v H
0

H
Figura 2-14: Propagarea undei electromagnetice

2.3.1 Clasificarea undelor electromagnetice

Undele electromagnetice au un domeniu foarte larg al frecvenelor sau al

47

Capitolul 2

lungimilor de und. n acelai timp, innd cont de ipoteza emis de Einstein (1909) i confirmat experimental, conform creia un camp electromagnetic monocromatic (cu aceeai lungime de und) poate fi considerat ca fiind format din fotoni de energie
E=h=c/
(2.18)

cmpul electromagnetic este adesea numit i radiaie electromagnetic. De aceea, o clasificare a undelor se face dup domeniul lungimilor de und sau energiei, astfel (figura 2-15):

- unde radio sau unde hertziene, dup numele fizicianului care le-a studiat Hertz.
Domeniul de lungimi de und al acestora este cuprins ntre 3 104 0.3 m. Sunt generate de circuite oscilante i se folosesc n telecomunicaii, fiind mprite n: unde lungi (30km 750m), unde medii (750m 50m) unde scurte (50m 10m) i ultrascurte (10m 0.3m).

- microundele cu lungimi de und cuprinse n intervalul 0.3 m 0.001 m, se

utilizeaz n radiolocaie ct i n unele metode de analiz a structurii atomilor sau moleculelor.

- radiaia infraroie se ntinde de la 0,001m la 7.5 10-7 m. Ea se obine n special

ca urmare a proprietii corpurilor nclzite de a emite radiaie termic i este mprit la rndul ei n 3 subdomenii: NIR, MIR i FIR vezi figura 2-15.

- radiaii luminoase (spectrul vizibil), cuprinse n intervalul 400 750 nm, sunt
obinute n urma descrcrilor electrice n gaze sau ca urmare a radiaiei termice a corpurilor incandescente. Ochiul omenesc este sensibil la aceasta radiaie, sensibilitatea maxim fiind situat n jur de 589nm. Aceast lungime de und corespunde radiaiei galbene. Radiaiile monocromatice din acest domeniu spectral produc diferite senzaii de culoare. Ansamblul tuturor acestor radiaii determin senzaia de alb, perceput de ochi. Aceeai senzaie este perceput i prin amestecarea a doua sau mai multe lungimi de unda (culori) numite i culori complementare: rou - verde; galben indigo; violet - verde, galben; albastru - galben; verde, albastru - portocaliu; albastru, verde - rou. n ceea ce privete culoarea corpurilor, menionam c un corp ce reflect
48

Magnetism

uniform toate lungimile de unda va apare alb. El apare ins colorat atunci cnd unele radiaii sunt absorbite, iar altele sunt reflectate. n general culoarea ce se observ este complementara radiaiilor absorbite.

- radiaiile ultraviolete sunt generate n urma descrcrilor electrice luminoase i

au un domeniu al lungimilor de unda cuprins intre 60 400nm.

- radiaiile X sunt produse n tuburi speciale de raze X, n urma bombardrii cu

electroni puternic accelerai pe un anticatod. Domeniul de lungimi de und al acestor radiaii este 10-3nm 60nm.

- radiaii sunt de natur nuclear i se obin n urma proceselor de dezintegrare

radioactiv, a proceselor de fisiune i fuziune nuclear, etc. Lungimea de unda a acestora este 10-14 10-10m.
tranziii electronice vibraie - rotaie rotaie translaie

200 400nm

780nm Vizibil

2500nm NIR

25000nm MID IR Unde FAR IR Microunde radio

X UV

50000cm-1

12820cm-1

4000cm-1

400cm-1

50cm-1 Crete lungimea de und

Crete energia, crete numrul de und

Figura 2-15: Domenii spectrale pentru radiaiile electromagnetice. Clasificare n funcie de variaia energiei (frecven / numr de und) respectiv a lungimii de und.

Ca mrimi de clasificare spectrale aminteam energia, E, lungimea de und, ,

~ numrul de und i frecvena . Legtura dintre aceste mrimi este:

E = h =h

1 1 ~ 1 (nm) (J); = (cm-1); = c T

(2.19)

unde h constanta lui Planck iar T perioada de oscilaie a undei (electromagnetice) respective.
49

Capitolul 2

Acestea se aleg n funcie de ordinul de mrime al domeniului spectral dorit. De exemplu spectrul , X, UV i vizibil este caracterizat cu uurin de (nm), cel
~ infrarou de (cm-1) iar microundele sau undele radio de frecven, (MGhz, etc).

2.4 Polarizarea luminii. Aplicaii

r innd cont c senzaia luminoas este dat de cmpul electric E , acesta

numindu-se i vector luminos, polarizarea luminii se va referii la direciile de oscilaie ale acestui vector. La trecerea atomului dintr-o stare energetic superioara ntr-una inferioar, lumina emis (numit i und elementar) este plan polarizat, adic oscilaiile acestui vector au loc ntr-un singur plan. Pe de alta parte, planurile de oscilaie ale undelor elementare, emise de diveri atomi, au direcii oarecare, astfel nct lumina ce rezult nu are un plan de polarizare specific. Cu alte cuvinte, lumina natural nu este polarizat, oscilaiile vectorului luminos avnd loc dup direcii haotice. innd cont c exist diverse aplicaii ce necesit utilizarea luminii polarizate, s-a cutat gsirea unor mijloace de obinere a acesteia. Dintre acestea, cele mai des utilizate sunt polarizarea prin reflexie, refracie i birefringen.
2.4.1.1 Polarizarea prin reflexie

Experimental s-a constatat c atunci cnd o raza de lumin este incident pe interfaa dintre dou medii transparente, este reflectata sub un unghi egal cu cel de inciden (legea reflexiei). n acelai timp, lumina reflectat este parial polarizat. Exista un anumit unghi de inciden pentru care polarizarea luminii reflectate este total. Acest unghi se numete Brewster i verific relaia:
tg iB= n = n2 / n1 (2.20)

Aceast condiie se obine atunci cnd raza reflectat este perpendicular pe cea refractat.

50

Magnetism

iB

iB

n1 iR n1

n 1 < n2

Figura 2-16: Reflexia brewsterian

Referitor la planul de polarizare al razei reflectate, precizm c el este perpendicular pe planul de incidena (planul format de raza incident i de normala la interfa).
2.4.1.2 Polarizarea prin refracie

Precizam c raza refractat se caracterizeaz printr-un anumit grad de polarizare, prin care oscilaiile vectorului luminos au loc paralel cu planul de inciden. Spre deosebire de raza reflectat, n nici un caz nu se va obine o polarizare total a acestei raze. Totui, pentru o incidena ce verific relaia (2.20), gradul de polarizare este maxim, astfel nct, prin traversarea unei serii de lame paralele, acest grad va fie mult mbuntit.
2.4.1.3 Birefringena

Fenomenul se observ la trecerea luminii prin medii anizotrope, ale cror proprieti depind de orientarea vectorului cmpului electric. Astfel, una dintre proprietile ce depind de direcia de propagare a luminii este viteza. Cu toate acestea, exist, n astfel de medii, una sau dou direcii, de-a lungul crora viteza de propagare nu depinde de orientarea vectorului luminos. Ele se numesc axe optice. n funcie de numrul acestor axe, astfel de cristale sunt denumite uniaxe (cele care cristalizeaz n sistemul ptratic, hexagonul sau romboedric) i biaxe

51

Capitolul 2

(monoclinic, triclinic, ortorombic). Atunci cnd o raz luminoas este incident pe suprafaa unui astfel de cristal se constat producerea a doua raza incidente: - una din raze respect legea refraciei i se numete raza ordinara (O), iar cealalt se abate de la aceast lege, numindu-se raz extraordinar (E). Fenomenul se numete birefringen, iar astfel de cristale se numesc birefringente. Definind drept plan principal, planul format din axa optic a cristalului i raza incident, se constata: - raza ordinar se gsete n planul de incidena, iar vectorul luminos este perpendicular pe planul principal. Adic, cu alte cuvine, aceast raz este polarizat total.

- vectorul luminos al razei extraordinare oscileaz n planul principal.

Din aceste observaii experimentale rezult c orice raz nepolarizat ce intr ntrun cristal birefringent, este descompus n doua raze polarizate total.

I A' ax optic

A O

Figura 2-17: Mersul razei de lumin printr-un cristal birefringent

Aceste cristale sunt folosite la polarizarea luminii, ele prezentnd avantaje fa de metodele prin reflexie sau refracie. Principalul dezavantaj al acestora este ns divergena foarte mic dintre cele doua raze, ceea ce face ca utilizarea lor simultan s fie dificil. De aceea au fost realizate dispozitive ce suprima una din raze. Cea mai des utilizat este prisma lui Nicol, sau simplu Nicol, ce suprima raza ordinar. Un nicol este obinut din dou lamele de spat de Islanda, ce sunt lipite cu balsam
52

Magnetism

de Canada.
2.4.1.4 Polarizarea rotatorie

Exist o categorie de substane, numite optic active, ce au proprietatea de a roti planul de polarizare al luminii, atunci cnd ele sunt strbtute de o raza plan polarizat.
E

Prob optic - activ

Figura 2-18: Rotirea planului de polarizare de ctre un mediu optic - activ

Fenomenul se numete polarizare rotatorie, unele substane rotind planul de polarizare spre stnga (levogire), iar altele spre dreapta (dextrogire). Menionm c stabilirea semnului de rotaie se face prin observarea luminii ce vine de la sursa i trece prin substan. Explicarea fenomenului se face presupunnd c radiaia incident pe prob (linear polarizat) poate fi considerat ca fiind format din dou componente polarizate circular: una, ce se rotete spre dreapta planul de polarizare (dextrogir), iar alta ce-l rotete spre stnga. Frecvenele de rotaie ale acestor componente sunt egale cu frecvena radiaiei luminoase utilizate. Dac indicii de refracie ai acelor dou
53

Capitolul 2

componente (nd, nl) sunt egali, vitezele de propagare prin acestea vor fi de asemenea egale. De aceea, ele vor fi n permanena n faz, astfel nct, prin combinarea lor va rezulta o und situat n acelai plan cu cea incident. Adic, cu alte cuvinte, nu are loc rotirea planului de polarizare, fenomen observat n mediile optic inactive. Cu totul altfel stau lucrurile n mediile optic active, n care indicii de refracie i implicit vitezele de propagare ale celor dou componente sunt diferite. n aceste condiii, unghiul , de rotire al planului de polarizare, verifica relaia:
=

(nl nd) d

(2.21)

Astfel, atunci cnd nl > nd, adic viteza razei dextro este mai mare, aceasta se va propaga mai repede, iar substana va fi dextrogir ( > 0). n caz contrar substana este levogira ( > 0). Formula prezentata anterior poate fi adus n general sub forma:
= [] l d (2.22)

unde d este densitatea probei, [] - rotaia specific i l - lungimea probei. Aceasta relaie este folosit n chimia analitic la determinarea concentraiei soluiilor lichide. Pe de alta parte, rotaia specific fiind o caracteristic a fiecrui compus, ea este folosit drept criteriu pentru stabilirea gradului de puritate al unor compui. Dispozitivul ce are la baza acest principiu se numete polarimetru i este descris pe larg n caietul de lucrri practice.

54

Atomic

3. Noiuni de atomic
3.1

Introducere
Modul de constituire a materiei a reprezentat o veche preocupare a oamenilor de

tiin din toate timpurile. Viziunea asupra acesteia a fost extrem de divers, bazat la nceput pe intuiie, i cristalizat ncetul cu ncetul la un nivel foarte bine fundamentat teoretic. Oricum, cert este c, nc din Grecia antic s-a lansat ideea, dovedit just ulterior, c materia nu este infinit divizabil, adic ea este cuantificabil pn la un anumit punct. Aceast viziune atomist asupra materiei s-a conturat prin mai multe modele, iniial destul de ambigue i aproximative, dar care au evoluat pn la cele acceptate n zilele noastre. Experiena acumulat n timp a concluzionat c materia avea ca structur fundamental atomul, (acesta fiind un fel de piatr de temelie a materiei n stare pur i care, pe baza proprietilor la nivel micro, poate contura proprietile macroscopice ala materiei). ncetul cu ncetul s-a stabilit c atomul are mas proprie, este neutru din punct de vedere electric, iar pe baza informaiilor survenite din chimie (a combinrii acestora, cu rezultatul formrii / sau nu / a moleculelor, a ionizrii, sau pe baza proprietilor soluiilor electrolitice, cunoscute din antichitate) are componente ce-i intr n alctuire: electronii (entitile constituente cu sarcin negativ) i protonii (constituenii de sarcina pozitiv). Cu certitudine ns, atomul de aur nu mai are nimic din nsuirile i modul de a privi aurul la scar macroscopic, dup cum nu putem compara, la modul propriu, un individ cu locuina acestuia. i atunci cum putem s ne imaginm atomul?
3.2

Modelul atomic Rutherford

Unul din modelele incipiente modelul cozonacului cu stafide imagina atomul

ca o sfer, n care componentele erau aproximativ egal distribuite n masa acestuia (cum
55

Capitolul 3

era sugestiv sugerat). Aceast ipotez a fost relativ rapid infirmat de experimentele de mprtiere cu particule (He2+) efectuate de Rutherford. Se constat acum c materia atomic este concentrat ntr-un nucleu foarte mic, de sarcin pozitiv, ce conine, de asemenea, marea majoritate a masei acesteia. Din devierea particulelor s-a calculat de asemenea i sarcina nucleului, constatndu-se c valoarea acesteia corespunde poziiei elementelor n sistemul periodic. Se pune astfel n evidenta numrul atomic (Z) al unui element. n aceste condiii, Rutherford propune un nou model atomic ce consider sarcina pozitiv (protonii) ca fiind concentrat ntr-un nucleu foarte mic i nconjurat de un numr de electroni ce se rotesc n jurul lui. Pentru a neutraliza sarcina pozitiva a nucleului se considera c numrul electronilor este egal cu cel al protonilor. Referitor la dimensiunea atomica, Rutherford consider c mrimea ei este dat de ctre electronii ce graviteaz n jurul nucleului, ntr-un volum mult mai mare dect al nucleului. Mai trziu, n 1920, Hatkins i Rutherford emit, independent unul de celalalt, ipoteza existentei unei particule neutre avnd masa aproximativ egal cu a protonului. Acest lucru a fost necesar pentru a completa deficitul de masa atomic ce rezulta prin aplicarea modelului Rutherford. De altfel, aceast particul ipotetic este descoperit experimental n 1932, de ctre J. Chadwick, fiind numita neutron. Dei modelul lui Rutherford explic o serie de proprieti ale atomilor, conform legilor fizicii clasice existente le vremea respectiv, ar fi trebuit ca electronii s cad pe nucleu. Fenomenul s-ar datora proprietii sarcinii electrice (electronii) aflate n micare accelerat de a emite energie sub forma de cmp electromagnetic. Aceast pierdere continu de energie ar trebui s imprime electronului o traiectorie n forma de spiral, determinnd astfel, n final, cderea electronului pe nucleu. De asemenea, acest proces de cdere pe nucleu ar trebui sa fie accentuat i de fora

electrostatic de atracie dintre nucleul pozitiv i sarcina negativ a electronului.

56

Atomic

Pe de alt parte, modelul propus de Rutherford nu a putut explica spectrul de linii al luminii, emise de tuburile de descrcare (ce conineau diverse gaze). Subliniem c, prin experienele privind descrcarea electric n gaze (aflate la presiuni joase), s-a artat c spectrul luminii emise era discontinuu, fiind format dintr-un numr foarte mare de linii. Rezultatele experimentale au sugerat faptul ca aceste spectre sunt legate de structura atomic. Constatnd c aceste linii sunt proprii fiecrei substane analizate, G.R. Kirchoff i R.W. Bumen (1860) pun astfel bazele unui domeniu important al fizicii acela al

analizei spectrale.
Chiar dac au fost diverse ncercri de a explica mecanismul de aparitie a acestor linii spectrale, nu s-a reuit n aceast perioad dect gsirea unor relaii empirice. Astfel, Balmer, n 1885 propune o relaie unic - relaia lui Balmer - ce permite calcularea poziiei unor linii din ultraviolet i infrarou. ncercrile de a gsi diverse teorii care s explice aceste rezultate au demonstrat c, n general, legile fizicii clasice existente la acea vreme, erau incapabile s descrie fenomenele ce se desfoar la nivel atomic. Meninerea n form clasic a legilor fizicii, aparent plauzibil, dac materia ar fi infinit divizibil, s-ar dovedi inadecvat. Astfel, considernd pri dintr-o substan, din ce n ce mai mici, este firesc ca aceleai legi s le guverneze. Cu totul altfel stau ns lucrurile la nivel atomic; un atom nu se aseamn, n nici un fel, cu o parte macroscopic din respectivul corp. Aceste obstacole au fost depite la nceputul secolului XX printr-o serie de ipoteze

revoluionare pentru acea vreme i care au pus bazele unei noi teorii - mecanica cuantic.
3.3 Ipoteze ce confirm comportamentul dual, und-particul

La nceputul secolului XX existau o serie de probleme neelucidate complet, cum ar fi:

problema radiaiei corpului negru;

57

Capitolul 3

efectul fotoelectric; problema stabilitii atomului.

n continuare, fr o detaliere explicit, ne vom referi pe scurt la aceste probleme.

3.3.1 Problema radiaiei corpului negru

Astfel, la sfritul secolului al XIX-lea, n urma unor msurtori experimentale, s-a stabilit c suprafaa unui corp(ce are anumite proprietati) - numit corp negru - aflat la o anumit temperatur, emite o radiaie electromagnetic, numit i radiaie termic. Maximul acestei emisii este independent de suprafaa i/sau de materialul din care este realizat, fiind ns dependent doar de temperatura termodinamic a acestuia. ntre lungimea de und corespunztoare poziiei acestui maxim max i temperatur a fost stabilit experimental relaia:
max T = 0.2898 cm K = C0, (3.1)

Independena constantei C0 de material i forma suprafeei sugereaz c ne aflm n faa unei constante universale. ncercrile de a interpreta i de a obine constanta C0 pe baza constantelor existente la acea vreme, au fost inutile. Practic, relaia (3.1), numit i relaia lui Wien nu putea fi neleas pe baza legilor fizicii clasice. Pentru a explica aceasta lege, Max Planck renun la conceptele clasice existente pn la acea vreme i presupune ca energia electromagnetic poate fi emisa sau absorbit numai sub forma unor cuante de energie (porii de energie) de mrimea:
E=h (3.2)

unde este frecvena radiaiei electromagnetice emis de corp, iar h, o constant universal ce i poarta numele (constanta lui Planck):
h = 6,626 10-34 Js (3.3)

n felul acesta, la 14 decembrie 1900, Max Planck prezint o demonstraie a legii radiaiei corpului negru.
58

Atomic

Considernd un astfel de corp negru ca fiind format dintr-un ansamblu de oscilatori - atomi i molecule - ce emit i absorb numai radiaie electromagnetic, a crei energie este un multiplu ntreg de h, el pune bazele teoretice ale acestui fenomen prin obinerea cunoscutei legi de distribuie a lui Planck, lege pe care el a obinut-o i s-a dovedit a fi ntr-o perfect concordan cu msurtorile experimentale.
3.3.2 Efectul fotoelectric

n anul 1905, Albert Einstein ajunge la concluzia c unele aspecte ale legii lui Planck pot fi nelese dac se atribuie proprieti corpusculare radiaiei termice. Noul mod de abordare a problemei a reprezentat un pas nainte, fiind astfel posibil i interpretarea unui alt fenomen neelucidat la vremea respectiv i anume efectul fotoelectric. Astfel, experimental se observase c, dac radiaia electromagnetic din domeniul vizibil sau ultraviolet este incident pe suprafaa unui metal, are loc o expulzare de electroni. Aspectul surprinztor al experimentului a constat ns n observarea c energia cinetica a electronului expulzat era independent de intensitatea radiaiei electromagnetice. La vremea respectiv acest aspect era n contradicie cu legile teoriei clasice, potrivit crora, prin creterea intensitii (adic a amplitudinii cmpului electric al radiaiei) ar fi trebuit s creasc i energia electronului emis. Contradicia este eliminata de Einstein n 1905, care consider c radiaia electromagnetic monocromatic sosete n cuante de energie de valoare h. n aceste condiii, Einstein admite de fapt c radiaia electromagnetic are un caracter corpuscular, fiind format din fotoni de energie h. innd cont c pentru a extrage un electron este necesar o energie minima Ex, rezult c electronul va fi expulzat din metal cu o energie cinetica Ec, ce verific relaia:
Ec = h - Ex (3.4)

adic diferena dintre energia fotonului incident i energia de extracie.

59

Capitolul 3

Prin creterea intensitii crete doar numrul fotonilor. Deoarece energia incident a fotonilor incideni se pstreaz constant, energia electronilor emii se va pstra i ea constant, fiind astfel n concordana cu observaiile experimentale. Chiar dac caracterul corpuscular al radiaiei electromagnetice permite explicarea corect a efectului fotoelectric, teoria clasica electromagnetic este meninut n scopul explicrii unor fenomene privind propagarea radiaiei, precum cele de interferen sau difracie. Se emite astfel, pentru prima dat, ideea dualitii unda-corpuscul.
3.3.2.1 Dualismul und - corpuscul

n 1924 Louis de Broglie emite ipoteza conform creia i particulele (electron, proton, neutron, etc.) au un caracter dublu, adic n anumite situaii se pot manifesta ca unde. Aceste unde au fost numite unde de Broglie. Ipoteza este remarcabil, innd cont c la vremea respectiv nu exista o dovada experimental n sprijinul acestei afirmaii. Conform acestei ipoteze, lungimea de und a unei particule de masa m ce se deplaseaz cu viteza v este:
= h / p = h / (mv) (3.5)

Civa ani mai trziu, n 1927, doi fizicieni C.J. Davisson i L.N. Germer obin o prima dovad a caracterului dual al particulelor. Folosind un fascicul de electroni monoenergetici, incideni pe suprafaa unui cristal de nichel, ei pun n eviden fenomenul de difracie, obinnd astfel o prim dovad a caracterului ondulatoriu al acestor particule. n concordanta cu ipoteza de Broglie, n 1929, Estermann i Stern obin primele dovezi experimentale ale difraciei atomilor de heliu i moleculelor de hidrogen. Mai trziu fenomenul este pus n eviden i n cazul neutronilor foarte leni. Toate aceste experimente au permis i obinerea, n afara metodelor de difracie cu raze X, a unor noi metode folosite la investigarea structurii cristalelor i moleculelor. n condiiile n care orice particul se comport ca o und, s-a pus problema descrierii acestei micri ondulatorii printr-o funcie de und, (r, t). Astfel s-a
60

Atomic

acceptat ipoteza emis de Max Born, conform creia, ptratul modulului acestei functii ||2, reprezint densitatea probabilitii de localizare a particulei la momentul t, ntr-un r punct de coordonat r .
3.3.2.2 Relaiile de nedeterminare ale lui Heinsenberg

Spre deosebire de fizica clasic, n care orice variabil ce caracterizeaz un sistem poate fi msurat cu o precizie teoretic orict de bun, n cazul sistemelor microscopice exist o limit fundamental a preciziei cu care mrimile pot fi msurate. Aceast limit a fost stabilit de ctre W. Heisenberg, n 1927, prin stabilirea unor relaii de nedeterminare sau incertitudine. Pentru perechea impuls - coordonat de poziie, aceast relaie este:
x p

h 4

(3.6)

unde x i p sunt erorile n determinarea poziiei i impulsului unei particule. Astfel, dac am ncerca s determinm poziia electronului cu o precizie de 10-9cm, eroarea n determinarea vitezei ar fi aproximativ ~ 1019cm/s, adic o valoare mult mai mare dect viteza ce ar trebui msurat. Notm c relaii similare cu (3.6) pot fi obinute i pentru celelalte componente ale impulsului i vectorului de poziie ale particulei. Heisenberg a artat c momentul de trecere a particulei printr-un punct (t) i energia sa () de asemenea, nu pot fi cunoscute cu orice precizie:
t

h 4

(3.7)

Relaiile de incertitudine prezentate anterior demonstreaz de fapt c, dac se ncearc interpretarea micrii particulelor folosind mrimi clasice (impuls, poziie, etc) atunci precizia cu care acestea pot fi specificate este limitat. n concluzie se poate spune c particulele microscopice nu se comport precum particulele macroscopice. De aceea, micarea particulelor dup o traiectorie clasic este

61

Capitolul 3

un concept ce trebuie abandonat. Principiul enunat permite stabilirea modului de abordare - clasic sau cuantic - al fenomenului analizat. Astfel, dac produsul dintre energie i timp pentru un fenomen, este comparabil cu valoarea constantei Planck, atunci modul de abordare al acestuia trebuie s fie pe cale cuantic. Pe de alt parte, dac acelai produs este mult mai mare dect h, atunci fenomenul poate fi analizat prin legi specifice mecanicii clasice.

3.3.3 Problema stabilitii atomului. Modelul Bhr

Avnd ca punct de plecare rezultatele experimentale privind spectrele atomului de hidrogen, Niels Bhr propune n 1913 un model simplu. Ca i n modelul Rutherford, Bhr presupune ca atomul de hidrogen este format dintr-un nucleu i un electron care se rotete pe diferite orbite. n contradicie cu teoria clasica a electromagnetismului, Bhr postuleaz existenta unor stri energetice bine determinate i stabile, numite stri staionare. Acest postulat reprezint de fapt prima ncercare de cuantificare a energiei atomilor. De asemenea, n cadrul aceluiai model, se consider c atomii emit i absorb energie radiant, atunci cnd ei trec dintr-o stare energetic n alta. Astfel, atunci cnd atomul trece dintr-o stare energetic superioara (E2) ntr-o stare inferioara (E1) va emite un foton de energie h:
h = E2 - E1, (3.8)

n timp ce, la trecerea inversa (E1 E2) este necesar absorbia unui foton de aceeai frecven. Al treilea postulat al lui Bhr consider c momentul cinetic orbital al electronului, datorat micrii de rotaie n jurul nucleului, este cuantificat:
Ln = m0 v r = n

h (n = 1, 2, 3, ) 4

(3.9)

unde: m0 este masa electronului, v - viteza electronului, i r - raza micrii orbitale.

62

Atomic

n felul acesta Bhr calculeaz pentru prima data nivelele de energie ale atomului de hidrogen, En:
En = -

RH n2

(3.10)

unde RH este constanta lui Rydberg. De asemenea sunt calculate i razele micrii orbitale, obinndu-se pentru prima raz Bhr a atomului de hidrogen valoarea:
a0 = 0.53 (3.11)

Chiar dac ipotezele emise de Bhr la acea vreme erau revoluionare, ele au fost acceptate deoarece, folosind modelul propus, s-a reuit pentru prima dat s se calculeze spectrul de radiaie electromagnetic emis de atomul de hidrogen. Dei modelul lui Bhr s-a dovedit a fi n concordan cu experimentele realizate pe atomul de hidrogen i pe ionii hidrogenoizi, teoria propus nu permitea ns explicarea unor atomi mai complicai. De asemenea, chiar n cazul atomului de hidrogen nu a fost posibil calcularea intensitii liniilor spectrale emise. Aceste insuccese se datorau faptului c acest model nc mai pstra ipoteze i concepte din fizica clasic.
3.4 Modelul cuantic al atomului

n perioada 1913 - 1927, ipotezele emise prin considerarea modelului Bhr au captat atenia multor fizicieni. Ei au ajuns la concluzia c, pentru a depi dificultile acestui model, este necesar ndeprtarea de la legile macroscopice ce guverneaz fizica clasic. Punctul culminant al studiilor din aceast perioad a fost publicarea a dou teorii matematice echivalente: mecanica matriceal i mecanica ondulatorie, create de W. Heisenberg (1925), respectiv Erwin Schrdinger (1926). Acestea au stat la baza crerii mecanicii cuantice, teorie fundamental ce explic fenomenele fizice la nivel microscopic.

63

Capitolul 3

3.4.1 Ecuaia lui Schrdinger. Funcia de und. Orbitali electronici

Principala ecuaie a acestei teorii este o ecuaie diferenial cu derivate pariale, numit ecuaia lui Schrdinger:
2 2 2 8 2 m + (E - V) = 0 + + h2 2x 2 y 2z
(3.12)

unde E i V sunt energiile total respectiv potenial ale particulei analizate. Astfel, dac n cazul mecanicii clasice, problema fundamental consta n aflarea poziiei i vitezei unui sistem, n cazul cuantic problema fundamental consta n determinarea soluiei ecuaiei (3.12), adic a funciei de und . Aceast funcie determin probabilitatea ca particula analizat s se afle ntr-un loc

determinat din spaiu.

Menionm c n cadrul acestei teorii nu este posibil trasarea drumului exact parcurs de electron, ca n cazul teoriei clasice! Adunnd astfel probabilitile de localizare ale electronului n diferite puncte din jurul nucleului, se obine ceea ce s-a numit orbital electronic. Acesta trebuie imaginat ca o regiune din jurul nucleului n care exist o mare probabilitate de localizare a unui electron. Descrierea orbitalilor electronilor poate fi comparat cu distribuia gurilor dintr-o int de tragere cu arma. Astfel, dup efectuarea unor operaiuni de tragere, se constat c n jurul unui anumit punct densitatea gurilor este mai mare dect n zonele periferice. Acest lucru sugereaz c o nou lovitur este cel mai probabil s aib loc n apropierea acestui punct. Prin analogie, n cazul atomului se prefer a se reprezenta un orbital printr-o densitate de puncte n spaiul de coordonate (xoyz). Zonele mai dense reprezint n acest caz punctele n care exist o mare probabilitate de localizare a electronului.
3.4.2 Atomul de hidrogen. Numere cuantice

Rezolvnd ecuaia Schrdinger n cazul atomului de hidrogen, se constat c soluia obinut depinde de 3 numere cuantice (n, l, m), n, l, m.
64

Atomic

De asemenea, energia totala a atomului este cuantificat, obinndu-se aceeai formul de calcul ca i n cazul modelului Bhr.

m0 e 4 En = 2 2 2 , 8 0 n h
unde n este numrul cuantic principal, iar 0 - permitivitatea dielectric a vidului.

(3.13)

Se constat c fiecare nivel energetic este degenerat, adic i corespund mai multe funcii de und. Fr a intra n detalii, se arat c numerele cuantice l i m pot lua numai valorile 0, 1, 2, n - 1 respectiv 0, 1, 2, l. Ele se numesc numr cuantic azimutal sau

orbital (l) i numr cuantic magnetic (m).

De aceea, pentru o stare energetic dat, En, numrul orbitalilor caracteristici sunt n numr de:
n 1 l =0 m = l l n 1

m = (2l - 1) = n2
l =0

(3.14)

Fiecare stare a atomului de hidrogen este specificat printr-un simbol ce conine un coeficient numeric, egal cu numrul cuantic principal urmat de o notaie literal a numrului cuantic orbital, astfel:

l = 0, 1, 2, 3, 4, 5 corespunde strilor s, p, d, f, g, h
Astfel, starea ce corespunde lui n = 1 i l = 0 este starea 1s, iar funcia de und corespunztoare este n, l, m = 1, 0, 0. Urmatoarele cazuri sunt prezentate n tabelul 3-1:
Tabelul 3-1: Strile atomului de hidrogen:

n 1 2 3

l 0 0 1 0 1 2 0 1 2 3

m Energie Funcie de und Stare 0 E1 1s 1, 0, 0 0 2s 2, 0, 0; E2 -1, 0, 1 2p 2, 1, -1; 2, 1, 0; 2, 1, 1 0 3s 3, 0, 0; -1, 0, 1 3p E3 3, 1, -1; 3, 1, 0 3, 1, 1 -2, -1, 0, 1, 2 3, 2, -2; 3, 2, -1; 3, 2, 0; 3, 2, 1; 3, 2, 2; 3d 0 4s 4, 0, 0; -1, 0, 1 4p 4, 1, -1; 4, 1, 0 4, 1, 1 E4 -2, -1, 0, 1, 2 4, 2, -2; 4, 2, -1; 4, 2, 0; 4, 2, 1; 4, 2, 2; 4d -3, -2, 0, 1, 2, 3 4f 4, 3, -3; 4, 3, -2;

Nr. orbitali 1 4 9

16

65

Capitolul 3

3.4.2.1 Orbitalii atomului de hidrogen

Reamintim c prin cunoaterea funciei de unda nlm devine posibil gsirea probabilitii de localizare a electronului ntr-o anumit regiune din jurul nucleului Pentru nivelul energetic cel mai sczut, exist un singur orbital 1s, ce are simetrie sferic; semnificaia fizic const n posibilitatea gsirii electronului cu aceeai probabilitate n orice direcie din jurul nucleului. Acest lucru se reprezint printr-o sfera a crei raz este astfel calculat, nct probabilitatea de localizare a electronului n interiorul ei s fie 90-95%. n cazul nivelului urmtor, n = 2, exista n2 = 4 orbitali diferii. Orbitalul 2s are tot o simetrie sferic. Deoarece energia corespunztoare acestei stri este mai mare, atunci i raza acestui orbital este de asemenea mai mare. Practic, pentru fiecare valoare a lui n, exista un orbital de tip s ce prezint simetrie sferica i a crui raz crete odat cu n. n ceea ce-i privete pe ceilali 3 orbitali ce corespund strii n = 2, ei se numesc 2p. Acetia nu au simetrie sferic, electronul gsindu-se cu o probabilitate maxim n 2 zone simetrice faa de nucleu i orientate de-a lungul uneia dintre axele sistemului de referin. Rezult astfel trei orbitali, numii 2px, 2py, 2pz, pentru a accentua astfel orientarea dup axele OX, OY, OZ.

3.4.3 Momentul magnetic orbital i de spin al electronului

Chiar dac teoria cuantic trateaz electronul ca fiind distribuit cu o anumit probabilitate n ntreg spaiul din jurul nucleului, n conformitate cu ipoteza de Broglie aceast particul are i un caracter corpuscular. Aceasta nseamn c electronul i pstreaz i proprietile de particul n micare. Este cunoscut faptul c orice particul ncrcat electric i aflata n micare, genereaz un curent electric care, la rndul sau, va genera un cmp magnetic. Cmpul magnetic datorat micrii electronului n jurul nucleului micarea orbital este reprezentat de momentul magnetic orbital, ale crui valori sunt cuantificate.

66

Atomic

Practic, pentru fiecare micare orbitala (caracterizat de numrul cuantic l) exist 2l + 1 valori ale numrului cuantic magnetic (m). n aceste condiii, proiecia momentului magnetic orbital dup o ax paralel cu intensitatea cmpului magnetic extern, H, este:
z = -m

eh = -mB 2m0

(3.15)

unde = h / (2), m0 - masa electronului, iar B - magnetonul Bohr. n 1922, Stern i Gerlach, n ncercarea de a msura momentele magnetice ale unor atomi, au ajuns la rezultate contradictorii. Astfel valorile calculate ale momentelor magnetice, innd cont de micarea orbital a electronilor, nu erau n concordana cu valorile obinute experimental. n aceste condiii Uhlenbeck i Goudsmit (1925) au emis ipoteza existenei unei micri suplimentare, de spin.
3.5

Atomul cu mai muli electroni

Rezolvarea exact a ecuaie Schrdinger poate fi fcuta numai n cazul atomului de

hidrogen sau al ionilor hidrogenoizi (adic un singur electron adiional). Gsirea unei soluii aproximative n cazul atomilor cu mai muli electroni necesit considerarea unor aproximaii. Astfel, neglijnd interaciunile dintre electroni, putem considera c fiecare electron se gsete de fapt ntr-un cmp electrostatic generat de cei Z protoni ai nucleului. De asemenea, se considera c acest cmp este parial ecranat (diminuat) de prezena electronilor situai n vecintatea nucleului. Electronii avnd acelai numr cuantic principal (n) se gsesc la aceeai distana fa de nucleu, avnd astfel aceeai energie, ei formnd astfel un strat electronic sau ptur. Aceste straturi se noteaz cu litere mari, dup cum urmeaz:

n = 1, 2, 3, 4, 5, corespunde K, L, M, N, O,
Electronii aparinnd aceluiai strat sunt caracterizai fiecare printr-un numr
67

Capitolul 3

cuantic orbital, l. Toi electronii care au acelai numr cuantic orbital vor forma un substrat. innd cont de valorile posibile ale lui l, fiecare strat conine n substraturi. Deoarece pentru fiecare valoare a lui l exista 2l + 1 valori ale numrului cuantic magnetic, vor exista 2l + 1 posibiliti de aranjare a electronilor pe aa numiii orbitali. innd cont de valorile lui l, rezult n2 orbitali. Referitor la modul de aranjare a electronilor pe orbitali, notm c aceasta se face n conformitate cu principiul lui Pauli. Conform acestui principiu, ntr-un atom sau o molecul nu pot exista doi electroni care s se gseasc n aceeai stare cuantic, avnd toate numerele cuantice egale. Deoarece electronii ce aparin aceluiai orbital au deja numerele cuantice n, l, m egale, ei se vor diferenia practic prin numerele cuantice magnetice de spin (ms = 1/2). De aceea, fiecare orbital va fi ocupat de maximum doi electroni. n concluzie, fiecare strat va conine maxim 2n2 electroni. Referitor la modul de simbolizare a substraturilor, acesta se realizeaz prin trei simboluri: - primul simbol cifr indic numrul cuantic principal; - al doilea, liter mare indic numrul cuantic orbital (conform conveniei prezentate ntr-un paragraf anterior, asemntor cazului atomului de hidrogen); - al treilea este un exponent cifr ce indica numrul de electroni din substrat; Notam ca straturile i substraturile complet ocupate se numesc nchise sau complete. Ele se caracterizeaz prin absena momentelor totale orbitale i de spin. Astfel, atomii care au straturi complete nu prezint moment dipolar i nu vor atrage sau ceda uor electroni. De aceea, unii atomi, cum sunt, de exemplu, gazele rare, nu sunt activi din punct de vedere chimic.
3.5.1 Spinul electronic

Astfel, pe ling micarea electronului n jurul nucleului, numit i micare orbital, electronul se caracterizeaz i printr-o micare de rotaie proprie, n jurul axei sale,

68

Atomic

numita i micare de spin. innd cont de legtura curent electric cmp magnetic, cele dou micri vor determina existena i a unor momente magnetice orbitale i de spin. Aceast micare suplimentar a electronului ofer explicaia despicrii unor linii de emisie ce se observ n spectrul unor metale alcaline. Astfel, analiznd linia galben a sodiului, cu un spectrograf de mare rezoluie, s-a constatat c ea este format de fapt din dou linii spectrale, una la 588.9953nm, iar cealalt la 589.5930nm aa numitul dublet al sodiului. Aceasta nseamn c unul dintre nivelele de energie ale electronului este scindat n dou subnivele. innd cont c separarea energiilor n nivele este datorat numerelor cuantice, este clar c era necesar introducerea unui numr cuantic suplimentar. Menionm c, atunci cnd s-au realizat aceste experimente, singura micare presupus posibil a electronului era cea orbital, iar rezolvarea ecuaiei Schrdinger determina obinerea unei singure linii galbene. Acest nou numr cuantic cerea introducerea unei micri suplimentare, de aceea S. Goudsmit i G.E. Uhlenbeck introduc un nou grad de libertate, imaginnd electronul ca o sfer aflat n micare de rotaie n jurul axei proprii. Aceast micare este echivalent cu existena unui moment cinetic de spin, ale crui proiecii dup o axa oz au dou valori posibile /2, i a unui moment magnetic de spin, ce are, de asemenea dou valori, corespunztoare sensurilor de rotaie ale electronului. Valoarea absolut a proieciei momentului magnetic de spin se numete magneton:
B =

eh 2m0

(3.16)

Dei aceast valoare a fost pentru prima dat calculat de tefan Procopiu i publicata n 1913, ea a fost gsit ulterior i de fizicianul Niels Bhr. innd cont ca ideile lui Bhr erau larg rspndite n lumea fizicienilor i chimitilor din acea perioad, din pcate a fost adoptata denumirea de magneton Bhr. Chiar dac ipoteza rotaiei electronului n jurul axei era n contradicie cu unele legi

69

Capitolul 3

din fizic, existena momentului de spin a fost pus n evidenta de numeroase experimente. De asemenea, pe baza micrii de spin, au fost explicate i structurile de multiplet ale liniilor spectrale. Considerarea acestei micrii a explicat i multe din fenomenele magnetice ce caracterizeaz materialele feromagnetice. Referitor la aa numitul raport magneto-mecanic (adic raportul dintre proiecia momentului magnetic propriu, sz i momentul cinetic de spin, Sz) se obine:

eh z 2m0 e = s = = h Sz m0 2

(3.17)

Se constat c aceast valoare este dublul valorii ce se obine n cazul micrii orbitale a electronului - fenomen numit anomalie de spin. Chiar dac micarea de spin nu are un corespondent clasic, adic nu poate fi explicata prin considerarea unor micri macroscopice, spinul a fost justificat din punct de vedere teoretic de ctre Dirac. Momentele magnetice orbitale l (ale cror valori sunt cuantificate, 2l + 1 valori) i de spin, s, se compun vectorial intr-un moment rezultant, j. Practic, electronul se caracterizeaz i printr-un numr cuantic intern j, ce ia toate valorile cuprinse n intervalul (l - s), (l + s). Ex: (l = 1, s = -1/2 j = 1/2 s = +1/2 j = 3/2 n cazul atomilor multielectronici, proprietile electronilor se explic prin existena unui numr cuantic orbital, L i a unuia de spin S, obinute, fiecare prin nsumarea numerelor cuantice li i i, corespunztoare fiecrui electron. Fcnd aceeai sum i dup numerele cuantice interne, se obine numrul cuantic rezultant, J, ce ia valori cuprinse ntre (L-S) i (L+S). Se obin astfel urmtoarele valori ale momentelor cinetice:
70

Atomic

PL = PS = PJ =

L( L + 1) h moment cinetic orbital;

S (S + 1) h moment cinetic de spin;

J ( J + 1) moment cinetic total.

n mod identic are loc i cuplarea momentelor magnetice corespunztoare fiecrui electron: l =
l (l + 1) B moment magnetic orbital al unui electron;

s = 2 s ( s + 1) B moment magnetic de spin; Numrul 2 ce apare n expresia momentului magnetic de spin este datorat anomaliei de spin. n aceste condiii, momentul magnetic total al atomului devine:
J = g J ( J + 1) B (3.18)

unde g este factorul Land.

3.6

Nivele energetice moleculare

Dac n cazul atomilor nivelele energetice sunt datorate numai configuraiei

electronice, n cazul unei molecule strile energetice sunt mai complexe ele fiind datorate i micrilor de rotaie - vibraie. Considernd o molecul format din n atomi, configuraia acesteia este cunoscut dac tim toate cele 3n coordonate ale fiecreia. Spunem, n acest caz, c molecula are 3n grade de libertate. Orict de complex ar fi micarea moleculei, n cadrul mecanicii se arat c micarea poate fi descompus n: translaie a centrului de mas al moleculei, rotaie n jurul a 3 axe perpendiculare i vibraii ale atomilor constitueni. innd cont de numrul de coordonate ce descriu o astfel de micare, rezulta: i) micarea de translaie este descris de trei grade de libertate; ii) micarea de rotaie este descrisa de 3 grade de libertate (molecula neliniar, sau 2 grade n cazul moleculei liniare). n cazul moleculei lineare, rotaia n jurul axei proprii nu schimb configuraia moleculei, rmnnd astfel numai dou grade de
71

Capitolul 3

libertate de rotaie. iii) restul gradelor de libertate: 3n - 5 (molecul linear), 3n - 6 (molecul neliniar) aparin micrii de vibraie a moleculei. n aceste condiii energia total a unei molecule devine:
E = Etrans + Erotatie + Evibratie + Eelectronilor (3.19)

Dintre acestea, energia de translaie este singura care nu este cuantificat, astfel nct tranziiile ntre nivelele energetice moleculare au loc datorit modificrii micrii de rotaie, vibraie i a configuraiei electronice.
3.6.1 Spectre de rotaie

Pentru analiza acestei micri, vom considera cazul unei molecule biatomice ce efectueaz o micare de rotaie n jurul unei axe ce trece prin centrul de masa (CM)al moleculei.
m2 m1 CM r1 r2

Figura 3-1: Rotaia unei molecule biatomice n jurul unei axe ce trece prin CM

Considernd c cei doi atomi se rotesc cu o viteza unghiulara , energia cinetica a moleculei este:
E = I 2, unde I = m1 r12 + m2 r22 (3.20) (3.21)

reprezint momentul de inerie al moleculei n raport cu centrul de mas CM, m1, m2 masele celor doi atomi, r1, r2 - distantele dintre atomi i centrul de mas. n cazul mecanicii, aceast situaie este numit i problema celor dou corpuri, i se rezolv considernd c micarea celor doi atomi n raport cu CM este echivalent cu micarea unui punct material, de masa (numit mas redus), n raport cu un

72

Atomic

sistem de axe aflat n poziia n care se gsete unul dintre atomi. Cu alte cuvinte, aceast micare este echivalent cu rotaia unui punct material de mas pe un cerc de raza a = r1 + r2. Masa se numete mas redus i se calculeaz cu relaia: = m1m2 m1 + m2
(3.22)

n aceste condiii, energia de rotaie devine:

E = I 2, unde I = a2 (3.23) (3.24)

nlocuind aceasta energie n execuia Schrdinger, n cazul mecanicii cuantice se demonstreaz ca energia de rotaie este de forma:

h2 h2 Erotaie = j(j + 1) = j (j + 1)= B j (j + 1) 2I 8 2 I unde j este numrul cuantic de rotaie i ia valorile j = 0, 1, 2, 3, 4 . Cu alte cuvinte, nivelele energiei de rotaie sunt cuantificate. Se obine astfel urmtoarea diagram a energiei:
E3 j=3

(3.25)

12B E2 6B 2B E0 j=1 j=0 j=2

E1

Figura 3-2: Dispunerea nivelelor energetice de rotaie

Aa cum se observ, pe msura creterii numrului cuantic de rotaie, nivelele consecutive se deprteaz din ce n ce mai mult, unul fat de altul. innd cont c valorile corespunztoare acestei energii sunt relativ mici (
73

Capitolul 3

0.01eV), rezult c aceste nivele pot fi populate chiar i la temperaturi joase. n ceea ce privete variaia numrului cuantic, exist urmtoarele cazuri:
j > 0 absorbie de energie; j < 0 emisie de energie.

Diferena de energie dintre nivele poate fi absorbit i de la o radiaie electromagnetic de frecventa , caz n care procesul se numete absorbie radiativ. n acelai timp, deoarece nivelele superioare au un timp de via mai mic, moleculele pot trece pe nivele inferioare, emind un foton de frecvent , proces numit emisie radiativ. n ambele cazuri are loc relaia:
h = Ej - Ej' (3.26)

unde Ej > Ej'. Se demonstreaz, n cadrul mecanicii cuantice, c, la absorbia radiativ, variaia numrului cuantic de rotaie ndeplinete aa numita regul de selecie j = 1. De aceea, la trecerea de pe nivelul j j + 1, frecvena radiaiei absorbite ndeplinete condiia:
hj, j+1 = Ej+1 - Ej = B[(j + 1)(j + 2) - j(j + 1)] (3.27)

hj, j+1 = 2B(j + 1) h c/j, j+1 = 2B(j + 1)

j1, j +1 =

2B (j + 1) hc

(3.28)

Se obin astfel urmtoarele benzi de rotaie, echidistante:

1,1 = 0 12 = 1, 1,3 = 2 14 = 3,

2B hc 4B hc 6B hc 8B hc

Tranziia 0 1; Tranziia 1 2; Tranziia 2 3; Tranziia 3 4.

74

Atomic

Trebuie precizat ca, mrimile inverse lungimilor de unda, adic -1 se numesc numere de unda. Referitor la tipul radiaiei electromagnetice absolute, precizam c ea se situeaz n domeniul microundelor. Metoda ce are la baz absorbia radiaiei din acest domeniu se numete spectrometrie de microunde i este folosita la msurarea distanelor interatomice ale unor molecule. Msurnd astfel frecventa de absorbie a unei linii spectrale folosind relaiile prezentate anterior, se poate determina momentul de inerie al moleculei, I, i apoi distana interatomic a.
3.6.2 Spectre de vibraie

Vibraia unei molecule poate fi analizata considernd din nou cazul moleculei biatomice n care, aa cum am precizat anterior, micarea celor doi atomi poate fi redus la micarea unui punct material de mas . Micarea de vibraie atomic este datorat forelor de repulsie i atracie ce predomin la distane interatomice mici respectiv mari. De aceea se poate alege un model mecanic, n care legtura dintre atomi este modelat printr-un resort de constant elastic k. n aceste condiii, frecvena de vibraie a moleculei este
0 =
1 2 k

(3.29)

innd cont de expresia energiei poteniale de interaciune elastic: Vp = k r2 (r fiind variaia distantei interatomice) se demonstreaz c energia de vibraie este cuantificat i are expresia:
Ev = (v + ) (3.30)

unde v = 0, 1, 2, 3, este numrul cuantic de vibraie, iar =2o este pulsaia. Adic, cu alte cuvinte aceasta energie ia valori ce sunt echidistante: E0 = 1/2 E1 = 3/2 E2 = 5/2 v = 0; v = 1; v = 2;
75

Capitolul 3

E3 = 7/2

v = 3.

innd cont de regula de selecie v = 1, rezulta ca spectrul de linii va trebui sa conin o singura linie, Figura 3-3: h = Ev+1 - Ev
1 = vib 0 c

Rezult astfel ca aproximaia oscilatorului armonic nu este situaie foarte aproape de realitate. Adic energia potenial elastic, figura 11.8, nu aproximeaz bine interaciunea dintre atomi. Up

Eabs a 0 r v=3 v=2 v=1 v=0

Figura 3-3: Energia potenial de tip elastic

0 / c

-1

innd cont de alura energiei poteniale pentru molecula de hidrogen (valoare ce a putut fi calculat) s-a ncercat gsirea unor formule care s aproximeze ct mai bine valorile energiei de interaciune interatomic. Dintre acestea, cea mai cunoscuta este formula lui Morse:
Up = D (1 ea-r)2 - D (3.31)

76

Atomic

Up

rmin

rmax r v=3 v=2 v=1 v=0

-D
Figura 3-4: Energia de vibratie n aproximaia Morse

nlocuind acest potenial n ecuaia Schrdinger se obine urmtoarea relaie de calcul a energiei de vibraie:
Evib. = h0 [(v + )2 y (v + )2] (3.32)

unde y este aa numitul parametru de anarmonicitate. n aceste condiii, termenul suplimentar ce apare n expresia energiei face ca nivelele de vibraie s nu mai fie echidistante. innd cont c regulile de selecie admit, pe lng v = 1 (probabilitate maxim) i tranziii v = 2, 3, 4, , rezult c benzile de absorbie de data aceasta vor fi diferite. De asemenea, se observ c prin creterea numrului cuantic, amplitudinea de vibraie crete, astfel nct, la un moment dat distana interatomic devine infinit. Acest caz corespunde disocierii moleculei, i se obine prin absorbia unei energii egale cu D (energia de disociere).
3.6.3 Spectre de vibraie - rotaie

innd cont c energia de vibraie este mult mai mare dect cea de rotaie, nseamn c molecula poate absorbi un foton de energie mai mare dect cea

77

Capitolul 3

corespunztoare diferenei dintre dou nivele de vibraie. Practic, diferena de energie este folosit pentru excitarea unui nivel de rotaie: Ev' + Ej Ev' h Ev (a) h = Ev' - Ev h' Ev'

Ev (b) h = Ej + Ev' - Ev

Figura 3-5: Tranziie energetic: a) vibraie pur; b) vibraie cuplat cu rotaie

n aceste condiii, spectrele obinute nu vor fi de vibraie pur. Ele vor fi de fapt spectre mixte, de rotaie - vibraie. j=4 j=3 j=2 j=1 j=0 R
j = +1

v+1

Q
j = 0

P
j = 1

j=3 j=2 j=1 j=0

Figura 3-6: Nivele energetice de rotaie-vibraie

Fr a intra n detalii, regulile de selecie n acest caz sunt:

v = 1 absorbie; j = 1; v =-1 emisie; j = 1;
78

Atomic

De aceea, numrul de und al radiaiei absolute n cazul unei astfel de tranziii se obine astfel:
h = Ej' + Ev' - Ej - Ev = (Ev' - Ev) + B [j'(j' + 1) - j (j + 1)] -1 = -1v + (3.33) (3.34)

B [j'(j' + 1) - j (j + 1)] hc

unde -1v = (Ev' - Ev)/(hc) este numrul de und, ce corespunde vibraiei pure v v'. innd cont de regulile de selecie, rezult:
-1 = -1v + 2

B j (j + 1) hc B j hc

(3.35)

(dac j = j' - j = 1, j = 0, 1, 2, 3, ) i -1 = -1v - 2 (3.36)

(dac j = j' - j = -1, j = 1, 2, 3, 4, )

Unde -1v este numrul de und ce corespunde tranziiei vibraionale v v + 1. Se obine astfel o band de absorbie corespunztoare tranziiei vibraionale -1v, ncadrat de o parte i de alta de o structur de benzi egal distanate. Aceste structuri sunt datorate micrii rotaionale a moleculei, formnd ramura pozitiva (j = 1) sau ramura R, respectiv ramura negativ j = -1 sau ramura P.

Energia absorbit

Ramura Q

Ramura P \

/ Ramura

-1v - 2

B hc

-1v

-1v + 2

B hc

-1v

Figura 3-7: Spectru de rotaie - vibraie (dependenta intensitii absorbite, funcie de numrul de und al radiaiei electromagnetice)

79

Capitolul 3

De asemenea, tranziia n care se modific doar starea de vibraie se mai numete i ramura Q a spectrului, aceast band fiind interzisa n cadrul moleculelor biatomice. Referitor la domeniul lungimilor de und, n care aceste benzi se observ, precizm c el este situat n infrarou. Numerele de unda ce corespund acestor maxime depind de modul de vibraie al gruprii chimice, ce intra n componenta moleculei. De aceea poziia acestor maxime permite identificarea unui compus chimic. Metoda ce are la baza obinerea acestui spectru se numete spectroscopie de absorbie n IR, fiind o metoda frecvent utilizata la analiza calitativa a compuilor chimici.
3.6.4 Spectre electronice. Principiul Franck - Condon

Excitarea electronilor pe nivele de energie superioare necesit energii cu mult mai mari dect n cazul nivelelor de rotaie - vibraie. Acest lucru se poate face prin absorbia unui foton din domeniul vizibil sau ultraviolet, n urma cruia au loc tranziii ale electronilor de pe un orbital pe altul. Electronii implicai n aceste tranziii se pot gsi de exemplu pe orbitalii legturilor simple (orbitali de legtur ) de unde pot trece pe orbitalii de anti-legtur *. Aceti din urma orbitali sunt neocupai n stare fundamental dar care pot fi ocupai n stare excitat. Un alt tip de tranziie electronic poate avea loc de pe orbitalii legturilor duble care sunt orbitalii de tip pe orbitalii de antilegatur corespunztori
*.

n plus, exist i electroni ce se gsesc pe orbitalii ce nu intr n legtur, de tip n. De aceea pot apare tranziii de tip n * i n *, tranziii ce sunt caracteristice unor atomi ce au electroni neparticipani. Deoarece aceste tranziii necesit energii mici, ele se vor situa la lungimi de und mari. Precizam ca cea mai mare energie este implicat n tranziii *. Ele pot apare la lungimi de und foarte mici (ultravioletul lui Schumann), domeniu ce este dificil de obinut experimental.
80

Atomic

Benzile de absorbie ce se obin n urma acestor tranziii, numite i spectre electronice, sunt folosite la analiza calitativ dar mai ales cantitativa a unor compui chimici. Metoda experimental ce permite obinerea acestor benzi se numete spectrometrie de absorbie n ultraviolet i vizibil UV-VIS, ea fiind frecvent folosit n cadrul laboratoarelor de chimie analitic i controlul medicamentului. Energia mare a radiaiilor din acest domeniu spectral face ca n urma tranziiilor s aib loc o slbire a legturii prin micorarea constantei de for, k, sau chiar o rupere a ei. De aceea, n urma excitrii electronice, distana interatomic, adic geometria moleculei n stare final, poate fi diferit de cea iniial. Exist, n cadrul mecanicii cuantice, un principiu ce limiteaz n general tranziiile ce modific geometria moleculei. Este vorba despre principiul Franck-Condon, conform cruia acele tranziii ce au loc atunci cnd molecula se gsete ntr-o stare comun att formei iniiale ct i a celei excitate electronic. Conform acestui principiu au o probabilitate maxim acele tranziii n urma crora distanele interatomice n starea iniial i final sunt aceleai. Pentru a exemplifica modul de aplicare a acestui principiu, vom considera, pentru nceput, tranziiile ce apar atunci cnd tria forei de legtur n starea fundamental este egal cu cea n starea excitat. n aceste condiii, curbele de energie potenial vibraional sunt identice. n plus, distanele interatomice corespunztoare minimelor sunt aceleai n ambele stri curbele fiind deplasate doar pe axa ordonatei cu o valoare a energiei egal cu cea a tranziiei electronice. De aceea, este evident c pentru a nu se modifica distanele interatomice, cele mai probabile tranziii sunt acelea ce au loc fr o modificare a strii vibraionale. Deoarece majoritatea moleculelor se gsesc n starea v = 0, atunci cea mai intens band va fi aceea corespunztoare v = 0 v' = 0. Cu o probabilitate mai mic pot avea loc i tranziii v = 0 v' = 1, v = 0 v' = 2, ns intensitatea acestor benzi este mult mai mic. Referitor la poziia acestor din urm benzi, precizam c ele necesit energii de excitaie mai mare, de aceea poziia lor n spectru va fi la lungimi de und mai mici dect cea corespunztoare benzii
81

Capitolul 3

principale 00. E v = 3 v = 2 v = 1 v = 0 v=3 v=2 v=1 v=0 r (a) (b)

03 02 01 00

Eabs

Figura 3-8: Tranziiile vibraionale i dispunerea maximelor de absorbie (fore de legtur egale)

Cealalt situaie corespunde cazului n care, prin modificarea strii electronice are loc o micorare a triei forei de legtur. n acest caz, energia de vibraie n starea excitat este deplasat i pe axa absciselor (datorit micrii forelor de atracie, echilibrul va avea loc la distane interatomice mai mari). n plus, amplitudinea de vibraii va fi mai mare, astfel nct curba strii excitate va fi mai deschis. n funcie de gradul de micorare al forei de legtur, pentru a fi n acord cu principiul enunat anterior, cea mai probabil tranziie electronic are loc acum cu modificarea strii de vibraie a moleculei. Pentru exemplul din Figura 3-9 tranziia cea mai probabil are loc din poziia extrem (x2) a strii v = 0 n poziia corespunztoare elongaiei minime a strii v = 1.

82

Atomic

E v = 3 v = 1 v = 0 v=2 v=1 v=0 x2 r 03 02 01 00 Eabs

Figura 3-9: Tranziiile vibraionale i dispunerea maximelor de absorbie (fore de legtur diferite)

Practic, n urma acestei tranziii nu are loc modificarea distantei interatomice, de aceea ea are loc cu o probabilitate maxim, iar banda corespunztoare (01) va fi cea mai intens. Evident, n spectru, de o parte i de alta a acestei benzi pot s apar i altele, ns cu o intensitate mai slab.

83

Capitolul 4

4. Metode spectrometrice de absorbie. Principii generale i aplicative

Aceste metode au la baza proprietatea substanelor de a absorbi selectiv radiaii electromagnetice - spectrometrie de absorbie. Ele fac parte din categoria metodelor de analiza optic, ce au la baza interaciunea dintre radiaiile electromagnetice cu substana. Spectrele de absorbie, adic cantitatea de energie electromagnetica absorbita funcie de lungimea de unda, se obin prin folosirea unor aparate speciale numite spectrofotometre. n funcie de domeniile spectrale ale fascicolului de radiaie electromagnetica, exista urmtoarele metode spectofotometrice: a) spectrofotometria n ultraviolet (UV) ( 185 - 400 nm ); b) spectrofotometria vizibil (VIZ) (400 - 700 nm ); c) spectrofotometria n infrarou (IR) (> 700 nm ). Fr a intra n detalii, n continuare vom prezenta principalele aspecte generale ale acestor metode.
4.1

Absorbia energiei de ctre molecule (atomi)

Sub aciunea unei radiaii electromagnetice o molecula(atom) poate trece dintr-o

stare energetica E0 intr-o stare superioara E1, absorbind o cantitate de energie (h) egala cu diferena dintre cele doua nivele:
h = E1 - E0 (4.1)

Modificarea strii energetice are loc fie prin excitarea energiei electronilor de pe diferite nivele (spectrofotometria n vizibil i ultraviolet), fie prin modificarea energiei de vibraie i rotaie (spectofotometria n IR). La baza fenomenului de absorbie sta legea fundamentala a absorbiei:
A = log

1 = cb T

(4.2)

unde: A = absorbana mediului

84

Spectrometrie IR

T = transmisia sau transmitana c = concentraia mediului b = grosimea mediului msurata n lungul direciei de propagare a radiaiei. Aceasta lege numit i legea Bouguer - Lambert - Beer, arat c absorbia unui sistem depinde i de un factor intensiv numit absorbtivitatea molar sau coeficient molar de absorbie, caracteristic fiecrei specii atomice sau moleculare. n acelai timp, absorbtivitatea molar depinde i de lungimea de und a radiaiei electromagnetice ce strbate sistemul. Frecvent utilizat este i absorbana specifica, la o anumita lungime de unda. Aceasta reprezint absorbanta unui strat de soluie cu grosimea de 1 cm ce conine 1g de substana n 100 ml.
1% De aceea, aceasta mrime se noteaz A1cm . Cunoscnd valoarea absorbantei

specifice se poate calcula concentraia substanei de analizat folosind relaia:

c= A 1% A1cm

(4.3)

unde A absorbana probei msurat n aceleai condiii experimentale (aceeai lungime de unda i aceeai grosime de 1 cm a probei). Menionam ca adesea, n locul absorbantei se folosete noiunea de extincie, caz n care A se nlocuiete cu E. n ceea ce privete unitatea de msura a absorbtivitatii molare, ea depinde de modul de exprimare a concentraiei soluiei analizate. Astfel, pentru concentraia soluiei este exprimat n mol/L, absorbitivitatea se va exprima n Lmolcm 1 .
3. 1 Metode spectrofotometrice de absorbie

Aceste metode au la baza proprietatea substanelor de a absorbi selectiv radiaii electromagnetice - spectrofotometrie de absorbie. Spectrele de absorbie se obin prin folosirea unor aparate speciale (spectrofotometre). Cantitatea de energie electromagnetica absorbita depinde de structura i de numrul moleculelor sau atomilor substanei cu care fascicolul de

85

Capitolul 4

radiaie interacioneaz.
Alegerea solventului

Un rol foarte important n msurtorile spectrofotometrice l are alegerea solventului. Modul de alegere al solventului trebuie s in cont de capacitatea de dizolvare a substanei analizate, de transparena sa la domeniul de radiaie al aparatului, de volatilitatea sa, etc. n cazul domeniului vizibil i ultraviolet apropiat, alegerea solventului este simpl, transparena acestuia n vizibil fiind observat cu ochiul liber. Cel mai important solvent pentru substanele anorganice este apa, ea fiind transparent pn n ultravioletul ndeprtat. n cazul substanelor organice se folosesc metanolul, etanolul, cloroformul, hexanul, heptanul, octanul sau ciclohexanul. Principalii solveni utilizai n msurtori spectrofotometrice UV sunt prezentai n tabelul urmtor:
Tabelul 4-1: Tipuri de solveni (UV):

Solventul hexan heptan isooctan dimetileter etanol 2-propanol metanol ciclohexan acetonitril dioxan diclormetan triclormetan tetraclormetan dimetilsulfoxid benzen piridina propanona

Pentru (nm) dect 199 200 202 205 207 209 210 212 213 216 233 247 257 270 280 306 331

86

Spectrometrie IR

n acelai timp solvenii trebuie s fie puri, deoarece impuriti la cantiti foarte mici pot determina apariia unor benzi de absorbie foarte intense, ce pot astfel masca sau influena benzile substanelor analizate. De asemenea, folosirea solvenilor foarte volatili cum este de exemplu eterul etilic poate duce la erori datorate modificrii concentraiei soluiei n urma procesului de volatilizare. Probele necesare analizelor spectrale n IR ale substanelor lichide i solide se pregtesc de asemenea sub form de soluie. Aceasta deoarece benzile de absorbie corespunztoare vibraiilor de valen i de deformare prezint de regul coeficieni de absorbie mari. De aceea, sunt necesare aproximativ 0.55 mg substana care se dizolv n solveni de puritate spectral obinndu-se astfel soluii de concentraie 15%. Deoarece fiecare solvent are anumite benzi de absorbie n infrarou, trebuie precizat c nu exist un solvent care s poat fi utilizat n bune condiii pe ntreg domeniul IR. n cazul analizei IR a substanelor solide cel mai des utilizat solvent este KBr.
Cuve sau celule pentru susinerea probelor:

Aceste containere pentru probe trebuie realizate din materiale transparente pentru radiaiile electromagnetice din domeniul spectral de interes. Astfel sticlele silicoase pot fi utilizate pe un domeniu cuprins ntre 200-350 nm. Pentru domeniul UV (< 350nm) frecvent utilizat este cuarul, el fiind transparent i n domeniul vizibil ct i n IR. n domeniul IR frecvent utilizate sunt materialele cum ar fi halogenurile alcaline (NaCl, KBr, CsBr, CsI). Pentru analiza probelor lichide n domeniul IR trebuie inut cont de capacitatea de dizolvare. Astfel dac materialele din care sunt confecionate ferestrele cuvelor sunt solubile n H2O, lichidele de cercetat nu trebuie s conin ap. n cazul soluiilor apoase pot fi folosite cuve cu ferestre AgCl, As2S3, i sau KRS (material realizat dintr-un amestec de iodur i bromur de taliu). Chiar dac aceste substane prezint
87

Capitolul 4

o transparen mai mic ele nu se dizolv n ap. Referitor la forma cuvelor este necesar ca ferestrele lor s fie perfect normale pe direcia de propagare a radiaiei. Se elimin astfel pierderile de energie prin reflexie. Cele mai uzuale celule folosite n UV i VIZ au o grosime de 1 cm. n cadrul analizei n IR grosimea celulelor de lichide este n general mai mic. O atenie deosebit trebuie acordat aezrii corecte a acestor celule cu suprafeele transparente perpendiculare pe direcia de propagare a radiaiei. Deoarece amprentele, grsimile i alte substane aflate pe pereii cuvelor modific semnificativ transmisia celulei, este necesar splarea lor nainte i dup folosire.
4.1.1 Aparatur utilizat n UV, VIZ i IR

Schema de principiu a unui spectrofotometru de absorbie cuprinde urmtoarele elemente: - surs de radiaii electromagnetice - monocromator - compartimentul probelor - receptor - sistem de evaluare

Sursa de radiatie

monocromator

Compartim. probelor

receptor

Sistem de evaluare

Figura 4-1: Schema unui spectrofotometru de absorbie

Fr a intra n detalii, subliniem c sursa de radiaie electromagnetic este acea parte dintr-un spectrofotometru care furnizeaz radiaiile electromagnetice necesare obinerii spectrului. n ultimul timp laserul este frecvent utilizat ca surs de radiaii n spectrometria optic. Spectrometria laser reprezint totalitatea instrumentelor i a metodelor de
88

Spectrometrie IR

analiz spectral ce folosesc proprietari specifice radiaiei laser: acordabilitatea n lungimea de und, fiind astfel posibil folosirea lui n toate intensitatea mare a radiaiei laser emise precum i producerea unei energii extrem divergenta foarte mica a fascicolului laser determina posibilitatea utilizrii domeniile spectrometriei optice de mare n volume foarte mici, favorizeaz astfel analiza de urme fibrelor optice pentru transportul radiaiei laser. Devine astfel posibila analiza medicamentelor n timpul procesului de fabricaie. n ultimul timp majoritatea aparaturii spectrofotometrice este cuplata la un sistem de calcul (calculator). Calculatorul a adus o contribuie deosebita acestui domeniu extinznd astfel posibilitatea acestei tehnici de cercetare i deschiznd pe de alta parte domenii cu totul noi. De exemplu: unele benzi foarte apropiate dintr-un spectru IR sau UV mpiedica precizarea lungimii de unda corespunztoare tranziiilor respective. n etapa de nceput a spectrofotometriei estimarea acestor lungimi de unda era aproximativa i se realiza prin descompunerea vizuala a benzilor suprapuse. Folosind avantajele calculatorului acest lucru se poate realiza printr-un procedeu matematic numit deconvoluie. n acelai timp extensia scalei spectrometrului pe ordonate i interconversia absorban / transmitan pot fi uor realizate n momentul n care spectrul a fost achiziionat i memorat. De asemenea, netezirea spectrelor este o operaie matematica frecvent efectuata asupra unui spectru nregistrat, n scopul eliminrii efectului nedorit datorat zgomotului. Obinerea spectrului diferena reprezint o cale foarte eficienta de a elimina unele benzi de absorbie ale solventului, matricei sau suportului probei, punnd astfel n evidenta modificri uoare ale compoziiei probelor analizate. n momentul n care cele doua spectre sunt memorate pe suportul fizic al calculatorului, aceeai operaie este extrem de simpla. n acelai timp calcularea primei i celei de-a doua derivate a spectrului reprezint
89

Capitolul 4

o cale eficienta de separare i de localizare a maximelor benzilor de absorbie: astfel prima derivata a spectrului se anuleaz pentru lungimile de unda ce corespund unui maxim de absorbie, n timp ce derivata a doua are valori negative acolo unde n spectru apar maxime, valori pozitive n punctele de minim i se va anula n punctele de inflexiune. Deoarece minimele derivatei a doua sunt nguste i bine precizate i deoarece nlimea lor este proporional cu absorbana din spectrul original, devine astfel posibila folosirea acestei derivate i n scopuri analitice. n acelai timp, prin dezvoltarea unor algoritmi de cutare rapid i prin existena unor biblioteci electronice de spectre ale unor substane etalon, devine posibila realizarea unei analize calitative foarte eficiente. De asemenea, prin dezvoltarea unui algoritm rapid de transformat Fourier a unui spectru, se dezvolt astfel un nou domeniu de aplicaii: spectrofotometria cu transformat Fourier (FT). Spectrometrele cu transformata Fourier au reprezentat un salt calitativ deosebit n construcia acestei categorii de aparate. Aceasta tehnica a mbuntit considerabil raportul semnal-zgomot relativ mic obinut n cazul spectrometriei de absorbie moleculara n infrarou (FTIR). Devine astfel posibil analiza unor probe a cror concentraie este foarte mica.
4.2 Aplicaii ale metodelor spectrometrice de absorbie n UV, VIZ i IR.

Analiz calitativ i cantitativ

4.2.1 Aplicaii ale spectrometriei UV, VIZ

Spectrometria de absorbie n ultraviolet i vizibil este frecvent ntlnit n controlul medicamentelor la: 1. Analiza calitativa a substanelor medicamentoase. 2. Identificarea i controlul puritii unor substane. 3. Dozarea unor substane din amestecuri.

90

Spectrometrie IR

4. Analiza echilibrelor n soluii formnd combinaii complexe, determinarea constantei de stabilitate sau instabilitate, ordinul unei reacii, gradul de polimerizare, interaciuni posibile. n continuare vom prezenta o serie de termeni i noiuni specifice acestui domeniu de absorbie: cromofori grupare covalent nesaturat datorita creia are loc absorbia electronic. auxocromi grupare saturat care, ataat unui cromofor, modific lungimea de und i intensitatea maximului de absorbie. deplasarea batocroma sau deplasarea spre rou, reprezint deplasarea maximului de absorbie spre lungimi de unda mai mari. deplasarea hipocroma sau deplasarea spre albastru, reprezint deplasarea maximului spre lungimi de unda mai mici. efect hipercromic creterea intensitii de absorbie efect hipocromic descreterea intensitii de absorbie.

4.2.1.1 Analiza calitativ

Absorbia energiei din domeniul vizibil i ultraviolet implica tranziia electronilor de pe orbitalii , , n din starea fundamentala pe stri excitate. Fr a intra n detalii, tranziiile electronice caracteristice benzilor de absorbie din domeniul UV-VIZ sunt prezentate n figura de mai jos. De asemenea, tipul tranziiilor electronice n cazul unor legturi simple i duble neconjugate, frecvent ntlnite n structura unui compus chimic sunt prezentate n tabelul urmtor:
Tabelul 4-2: Tipul tranziiilor electronice n cazul unor legturi simple i duble

Legtura -C - C- C H -O- N -SC = O C = O C = C

Tipul tranziiei n n n n n

(nm) 150 150 185 195 195 190 300 190

n spectrele moleculelor organice exista 4 tipuri principale de benzi de absorbie:

91

Capitolul 4

1. benzile R (radicalice) datorate unor tranziii n - ale unor grupri cromofore izolate, caracterizate prin absorbante mici. 2. benzile K (conjugate) apar la molecule cu legturi duble conjugate i se datoreaz unor tranziii cu extincii mari. 3. benzile B (benzenoide) datorate unor tranziii i n- din molecule aromatice i heterociclii aromatici. 4. benzile E (etilenice) se datoreaz sistemelor formate din legturi conjugate ciclic cu tranziii n i fiind caracteristice moleculelor aromatice. Unele structuri electronice par a avea un caracter mai mult sau mai puin polar dect n starea fundamental, iar n unele cazuri tranziiile electronice rezult dntr-o redistribuire a electronilor n interiorul moleculei. Spectrofotometria n UV poate fi utilizata la determinarea structurii, identitii i puritii substanelor medicamentoase. Absorbia luminii n ultraviolet reprezint o caracteristica a produsului pur. Pentru identificarea substanelor medicamentoase pure se recomanda fie compararea spectrului UV al substanei de determinat cu cel obinut n aceleai condiii experimentale pentru aceeai substana n stare pura, fie se indic lungimile de unda la care se nregistreaz maximele i minimele de absorbie ale spectrului obinut ntrun anumit solvent i ntr-o anumit concentraie, precizndu-se valoarea coeficienilor de extincie, a coeficienilor de extincie molar, etc.
4.2.2 Aplicaii ale spectrometriei n vizibil analiz cantitativ

Dac soluia substanei de analizat, ntr-un solvent adecvat, prezint o coloraie stabil n anumite intervale de timp, pH, temperatur, ea poate fi evaluat n cadrul determinrilor calitative i cantitative, din domeniul vizibil al spectrului. De asemenea, metoda de determinare n vizibil poate fi extinsa i la un numr de substane necolorate, care ns, prin complexare chimic cu diferii reactivi, dau compui ce absorb radiaie n acest domeniu. n cazul determinrilor experimentale, ntr-o prim etapa se va analiza variaia
92

Spectrometrie IR

absorbantei cu lungimea de und alegndu-se acea lungime de unda ce corespunde unei extincii maxime. Ulterior se studiaz i se ntocmete graficul variaiei absorbantei cu concentraia, determinat la lungimea de und aleas. Dup trasarea acestei variaii, numit curb de etalonare, se poate determina concentraia necunoscut, printr-o operaie de extrapolare. Trasarea curbei de etalonare este realizata n scopul determinrii intervalului de concentraii pe care este valabil legea de absorbie Bouguer Lambert Beer. Frecvent se utilizeaz o tehnic mult mai simpla, prin care se msoar absorbanta A1 la o anumit lungime de und. Calcularea concentraiei necunoscute C1 se face dup ce s-a determinat absorbanta A2 a unei soluii de referina, de concentraie cunoscut, C2, msurat n condiii similare: C1=(A1/A2)*C2 Aceast metod este corect atta timp ct valoarea lungimii de und la care se efectueaz msurtoarea se gsete pe un interval pe care legea de absorbie este liniara.
4.2.2.1 Determinri cantitative n UV

Spectrofotometria UV se poate folosi i la determinarea cantitativa fie a substanei pure ca atare, fie a componentelor unui amestec cu sau fr separarea lor prealabil. a) Dozarea substanelor pure ca atare. Daca se cunoate valoarea E1cm1% sau A1cm1% la max se poate msura extincia (E) unei probe i se calculeaz concentraia procentual dup formula:
p% = E 100 1% E1cm (4.4)

b) Dozarea substanelor medicamentoase din forme farmaceutice dup separarea lor prealabil Pentru dozarea unor principii active n UV este necesar n unele cazuri separarea

93

Capitolul 4

lor din comprimate, drajeuri, supozitoare prin dizolvare selectiv, filtrri, extracii cu solveni nemiscibili. c) Dozarea substanelor medicamentoase din forme farmaceutice fr separarea lor prealabil. n cazul n care un component prezint o absorbie maxima n UV, care nu este interferata de prezenta celorlalte componente, aceasta poate fi determinat direct fr separarea lui din amestec. n cazul n care 2 componente au maxime ce se suprapun i spectrele lor n UV se acoper parial, acestea pot fi determinate una n prezenta celeilalte pe mai multe cai. 1) cale de rezolvare a amestecurilor binare, ternare n care spectrele individuale se suprapun parial, se bazeaz pe obinerea unui sistem de ecuaii matematice, din care se calculeaz concentraiile respective. Metoda se bazeaz pe faptul ca extinciile a 2 sau mai multe substane sunt aditive n msura n care legea lui Bouguer Lambert - Beer este respectat. Astfel, absorbia total (A) pentru mai multe componente este dat de relaia: A = 1bc1 + 2bc2 + Pentru ca aceast relaie s poat fi aplicat trebuie ca toate determinrile sa se fac n cuve de aceeai dimensiune i s se determine coeficienii molari de absorbie
, ai diferitelor componente. Acetia se determin din curbele lor de absorbie

individual, la aceeai lungime de und pentru fiecare component. Concentraiile individuale se pot determina prin efectuarea a dou sau mai multe msurtori, la dou sau mai multe lungimi de und (1, 2, , i) pentru care coeficienii molari de extincie sunt cunoscui (1, 2, , i). Pentru dou componente (P + Q) se lucreaz la doua lungimi de unda corespunztoare maximelor celor 2 componente din amestec. n cazul n care grosimea stratului absorbant este de 1 cm, absorbiile amestecului la 1 i 2 sunt date de relaiile: A (P + Q)1 = 1p Cp + 1Q CQ

94

Spectrometrie IR

A (P + Q)2 = 2p Cp + 2Q CQ Coeficienii 1, 2 se refer la 1 i 2, iar CP i CQ sunt concentraiile necunoscute care se pot calcula astfel:
CP = CQ =
Q 1Q A( P + Q) 2 2 A( P + Q)1 ; Q 1Q 2P 2 1P

1P A( P + Q) 2 2P A( P + Q)1 ; Q 1P 2 2P 1Q

n cazul n care n amestec avem trei componente, se va lucra la trei lungimi de und. De fapt, numrul concentraiilor necunoscute trebuie sa fie egal cu cel al ecuaiilor. De aceea, numrul lungimilor de unda la care se msoar trebuie sa fie egal cu cel al componentelor din amestec. n concluzie, spectrofotometria de absorbie electronic se utilizeaz frecvent n cadrul metodelor pentru determinarea calitativ i cantitativ a substanelor medicamentoase sau din forme farmaceutice. Dezavantajul aplicrii acestei metode la determinarea substanei active din amestecuri complexe, const n necesitatea izolrii i separrii substanei active de celelalte substane auxiliare, care pot interfera metoda prin aditivitatea absorbiilor lor. O nou tehnica spectrofotometric difereniala (E) elimin interferenele i prezint avantajul unei citiri directe a absorbiei substanei active, anulndu-se absorbia produselor de degradare sau a altor substane auxiliare care nsoesc produsul periodic. Aceasta metod poate fi aplicata tuturor substanelor care pot suferi modificri spectrale reproductibile sub aciunea pH-ului sau a unor reactivi. Aplicarea metodei
E necesit cunoaterea reaciei de ionizare, de oxidare sau de reducere, care st la

baza modificrilor spectrale pe care le sufer substanele de analizat sub aciunea pHului sau a diferiilor reactivi.

95

Capitolul 4

4.2.3 Aplicaii ale spectrometriei de absorbie n infrarou

Regiunea din spectrul electromagnetic cuprins ntre 2-25m, numit i regiunea infrarou - IR, prezint o deosebita importanta n analiza cantitativ i n special calitativ. Astfel, pe lng spectrele corespunztoare tranziiilor electronice, moleculele se caracterizeaz prin spectre ce corespund tranziiilor energetice, corespunztoare micrii de rotatei i vibraie. Spre deosebire de reprezentarea n UV sau vizibil, spectrele IR au pe abscis numrul de und, exprimat n cm-1. Acesta reprezint inversul lungimii de und, exprimat n centimetrii. n cazul moleculei biatomice, exista un singur tip de micare de vibraie, n lungul legturii de valen. Ele se numesc vibraii de valen, notndu-se prescurtat cu . Existena mai multor atomi crete numrul posibilitilor micrilor de vibraie. n acest caz, micarea de vibraie este mult mai complex. Se vorbete, n acest caz, despre vibraii normale, ce nu modifica centrul de greutate al moleculei. Numrul acestor vibraii depinde de numrul n al atomilor constitueni, fiind: 3n-5 pentru moleculele liniare i 3n-6 pentru cele neliniare. Referitor la tipul micrii, subliniem c, pe lng micarea n lungul legturii, care poate fi simetrica sau antisimetric, n cazul moleculelor poliatomice (n > 3) apar i vibraii n urma crora se modific unghiul dintre legturii. Este cazul aa numitelor vibraii de deformaie, notate prescurtat cu . De asemenea, subliniem c, cu cat o molecul este mai simetric cu att numrul vibraiilor active n IR este mai mic. Ca exemplu, n figura 4-2 sunt date formele vibraiilor normale pentru molecula de ap i cea de bioxid de carbon.

96

Spectrometrie IR

CO2 H2O 1

Figura 4-2: Vibraiile de valen i vibraiile de deformaie ale moleculelor H2O i CO2

De asemenea, notm ca nu exist doi compui organici care s aib acelai spectru n IR. De aceea, spectrul IR a devenit un criteriu de identificare al fiecrei substane, asemntor amprentelor digitale la oameni. Astfel, domeniul sub 1500cm-1 fiind caracteristic fiecrei substane organice a fost numit regiunea amprentei digitale. Apariia unor benzi suplimentare fa de spectrul substanei pure, permite identificarea unor impuriti. Avnd n vedere larga utilizare a spectrometriei IR la determinarea structurii, n continuare vom prezenta cteva frecvene caracteristice ale unor grupri organice.

97

Capitolul 4

4.2.4 Frecvente caracteristice substanelor organice. a) Hidrocarburi parafinice.

n categoria alcanilor cele mai importante benzi de absorbtie se datoresc gruprilor CH3 i CH2. Astfel, grupa CH3 poate avea doua vibraii de valen simetric (2872cm-1) i antisimetric (2962cm-1) i dou vibraii de deformaie simetric (1380cm-1) i antisimetric (1460cm-1). n ceea ce privete grupa CH2, aceasta prezint 2 vibraii de valen: simetric (2853cm- 1) i antisimetric (2926cm-1), alturi de 4 vibraii de deformaie, dintre care 2 n plan: forfecare (1467cm- 1) i legnare n plan (720cm- 1) iar celelalte dou n afara planului: legnare (1300cm- 1) i torsionare.

b) Hidrocarburi cicloparafine

Vibraiile de valen sunt asemntoare cu cele ale alcanilor, n timp ce vibraia de forfecare are valori puin diferite: 1455 cm-1 n ciclopentan; 1460 cm-1 n ciclohexan; 1467 cm-1 n parafine.
c) Hidrocarburi etilenice

Vibraiile de valen CC apar la 1974 cm-1 n acetilena simpl, ntre 2100-2140 cm-1 la acetilenele monosubstituite i intre 2100-2260 cm-1 la acetilenele disubstituite. Vibraiile de valent CH apar ntre 3310-3320 cm-1 (n soluie) sub forma unor benzi intense i specifice. Referitor la vibraia de deformaie, aceasta determin benzi intense cuprinse ntre 610-680 cm-1. d) Hidrocarburi aromatice. n acest caz benzile corespunztoare vibraiilor de valen ale legturii C-H se gsesc n regiunea 3000-3100 cm-1 Vibraiile de deformaie ale legturii CH ce au loc n afara planului (CH) apar n benzen la 671cm-1. Referitor la vibraiile de valen C-C ele apar la 1487 cm-1 n
98

Spectrometrie IR

benzenul nesubstituit. e) Derivai halogenai. Legtura C-X, unde X este halogen prezint frecvene mai mici dect leg C-H ca urmare a creterii masei reduse. De exemplu: C-F = 1000-1400 cm-1,C-Cl=600-800cm-1,C-Br=500-600cm-1,C-I 500cm-1 n plus, frecvenele acestor legturi variaz i dup natura atomului C (primar, secundar, teriar) legat de X, iar n cazul derivailor halogenai ciclici, dup modul de legare al halogenului.
f) Alcooli

Compuii hidroxilici prezint o banda caracteristica la 3600-3650cm-1, corespunztoare vibraiei de valen O-H. Datorit formrii de legturi de hidrogen, moleculele de alcooli se asociaz, ducnd la apariia n spectrul IR a unei benzi largi la 3200-3400cm-1. Banda corespunztoare vibraiei de valen COH apare la alcooli ntre 1000-1250 cm-1
g) Fenoli

Frecvena vibraiei de valene OH este cuprins ntre 3594-3615 cm-1. Ea apare la o frecven mai mic dect n alcooli, ca urmare a conjugrii electronilor neparticipani ai oxigenului, cu electronii aromatici. h) Eteri Deoarece gruparea C-O are aproximativ aceeai mas redusa cu ceea a gruprii C-C, rezult c benzile eterilor apar n aceeai regiune, deosebindu-se nsa prin intensitatea lor. n eterii alifatici saturai, vibraia de valen C-O-C apare la 10701150cm-1 (antisimetric) i 940cm-1 (simetric). n eterii nesaturai i aromatici, frecvena legturii =C-O apare la 1200-1260 cm-1 iar n eterii ciclici, vibraiile legturii C-O-C nu se manifest la o frecven constant. De aceea, exist compui cu spectre caracteristice dup mrimea ciclului: epoxizii, vibraii de inel ntre 75099

Capitolul 4

1280cm-1, eterii cu ciclu de patru la 970-980 cm-1.

i) Compuii organici ai sulfului.

Legtura S-H apare n regiunea 2550-2600cm-1 i depinde de natura radicalului legat de sulf, n timp ce legtura C-S determin o band foarte slab, cuprins ntre 600-700cm-1. Legtura S=O din sulfoxizi apare la 1050 cm-1iar grupa SO2 prezint o band intens la 1140-1160 cm-1, corespunznd vibraiei simetrice i alta la 13001350cm-1 corespunztoare vibraiei antisimetrice.
j) Amine

Benzile cele mai caracteristice sunt datorate vibraiilor gruprilor -NH2 i NH. n aminele primare, vibraiile NH simetrice dau o band la 3400cm-1, n timp ce vibraiile NH antisimetrice apar la 3500cm-1 Trecnd de la seria alifatic la cea aromatic, se observ o cretere a frecvenei vibraiei NH. Ea este datorat unui efect de hibridizare; ca urmare a conjugrii electronilor neparticipani de la azot cu electronii -aromatici. n aceste condiii legtura devine mai puternic, iar frecvena va crete. n aminele secundare, se manifest o singur frecven NH, ntre 3300-3550cm-1. Referitor la vibraiile de deformaie, NH, ele apar la 1650-1640cm-1 i la 650-900 cm-1, iar vibraiile de valen, C-N apar intre 1030-1190cm-1. n cazul compuilor ce conin gruparea NH3 apare o band lat cuprins ntre 3030-3130 cm-1 ce corespunde vibraiei simetrice i antisimetrice.
k) Compuii carbonilici

Prezint o banda intens caracteristic n regiunea 1650-2000 cm-1, care se datoreaz vibraiei de valen a gruprii carbonil. Prezena acestei benzi este influenat de mai muli factori: efectele inductive i de conjugare ale substituenilor, formarea de legturi de hidrogen, tensiunea n ciclu, etc.

100

Spectrometrie IR

4.3

Principiile analizei spectrometrice cantitative n IR

La baza determinrilor cantitative n infrarou, st aceeai lege de absorbie

Bouguer Lambert Beer. n infrarou avem ns posibilitatea de a alege dintre benzile multiple care intr n componenta spectrului fie pe cea mai intensa sau respectiv pe aceea care se refera la o anumita grupare din molecula. Aplicarea acestei legii, corelat i cu cunoaterea exact a coeficientului de extincie al unei benzi caracteristice, permit determinri exacte ale concentraiei sau a gradului de puritate al unui compus. n cazul amestecurilor de 2 sau 3 componente se alege banda caracteristic fiecreia cu condiia ca acestea s nu se suprapun sau sa nu se interfereze parial. Fr a detalia, menionam c dozarea spectrometrica se realizeaz, fie prin interpolarea pe curbele de etalonare fie prin directa comparare a absorbiei probei cu cea a standardului utilizat. n continuare vom prezenta cteva din metodele utilizate n analiza cantitativ, a unor amestecuri de substan, prin spectroscopie IR.

4.3.1 Metoda celor mai mici ptrate

ntlnit n literatura de specialitate sub denumirea de Least Squares Regression aceasta este una dintre cele mai simple metode matematice, folosit n analiza spectrometric cantitativ. Ea const n obinerea unei ecuaii sau a unor serii de ecuaii, care vor fi folosite la determinarea cantitativ a unor amestecuri de substane. Aceasta se face cu ajutorul unor probe numite i standarde, ce reflect ct mai fidel compoziia chimic a probelor necunoscute, ce urmeaz a fi msurate. Aceste standarde sunt realizate prin amestecarea unor substane (n stare pur), ale cror concentraii sunt astfel alese nct s acopere intervalele de variaie ale concentraiei probelor necunoscute. n plus spectrele acestora sunt obinute n condiii identice cu probele ce urmeaz a fi msurate, fiind apoi salvate n format digital. Menionm c aceast metod se aplic atunci cnd benzile de absorbie ale
101

Capitolul 4

constituenilor nu se suprapun. n literatura de specialitate aceste benzi se spune c sunt well-resolved, concentraia unui constituent, putnd fi exprimat printr-o relaie simpl de forma:
Ca = B2 a ( Aa ) + B1a Aa + B0 a
2

(4.5)

Ca concentraia constituentului; Aa absorbanta corespunztoare unei benzi; Bsa (s=0,1,2) coeficienii de calibrare. n condiiile n care att standardele, ct i probele necunoscute conin mai muli constitueni, pentru fiecare component este valabil o ecuaie similar, dar ai crei coeficieni de calibrare sunt diferii. Chiar dac legea LambertBeer stabilete o relaie liniar dintre concentraie i absorban, ecuaia propus are o dependen ptratic, pentru a lua n considerare i eventualele nelineariti ce apar n cazul unor absorbane mari. innd cont c, pentru fiecare constituent, este necesar obinerea a maximum trei coeficieni (n cazul dependenei ptratice), rezult c practic va fi suficient existena a cel puin trei standarde. Pentru a mbunti precizia acestor determinri, numrul de probe tip standarde este insa mult mai mare. Ca metodologie de calcul, menionm c variabila dependent, n cazul de fa concentraia probelor standard, se distribuie pe axa ordonatelor, n timp ce variabila independent (absorbana) se distribuie pe axa absciselor. Ecuaia ce aproximeaz datele experimentale, adic coeficienii de calibrare, se vor calcula prin metoda celor mai mici ptrate. Metoda const de fapt n calcularea distanelor pe vertical dintre punctele msurate i punctele de pe curba corespunztoare ecuaiei de calibrare. Aceste distane se numesc reziduuri, iar curba optim este aceea pentru care suma ptratelor acestor reziduuri este minim. n concluzie curba de regresie (ptratic sau linear) este acea curb care trece prin norul de puncte format de perechile (concentraie, absorban) corespunztoare
102

Spectrometrie IR

unui constituent ce apare n fiecare standard, i care minimizeaz distana dintre date i curb. Impunnd aceast condiie, pentru fiecare constituent, se vor determina coeficienii de calibrare, iar ecuaia obinut, va putea fi folosit la determinarea cantitativ a unei probe similare cu cea a standardelor, dar a crei concentraie este necunoscut. Chiar dac aceast metod este simpl, ea fiind cu uurin implementat n softul de achiziie al multor spectrofotometre att n vizibil, ultraviolet ct i infrarou, ea introduce ns erori atunci cnd benzile de absorbie ale constituenilor se suprapun.
4.3.2 Metoda CLS (Classical Least Squares) 4.3.2.1 Probe cu un singur constituent

Msurtorile spectrofotometrice cantitative au la baz existena unei relaii de dependen linear ntre patru variabile diferite: absorbana A, coeficientul de extincie , drumul optic al radiaiei electromagnetice prin prob b i concentraia constituenilor, C, din prob:

A = bC
constant, relaia anterioar poate fi scris astfel:

(4.6)

Atunci cnd, n majoritatea msurtorilor, drumul optic poate fi considerat

A = k C
unde k este o constant ce include att coeficientul de extincie ct i drumul optic. Utiliznd o prob etalon de concentraie cunoscut Cetalon, prin msurarea absorbanei la o anumit lungime de und , aceast constant se poate determina astfel:

Aetalon k = C etalon

(4.7)

De aceea, dozarea unei probe cu aceeai compoziie chimic s-ar putea realiza,

103

Capitolul 4

prin msurarea absorbanei n condiii similare (aceeai lungime de und, acelai drum optic i de preferat acelai aparat):
x A Cx = k

(4.8)

De asemenea, menionm c este necesar ca proba s conin o singur component, transparenta n domeniul de lungimi de und, al radiaiei electromagnetice utilizate. Chiar dac proba necunoscut are aceeai compoziie cu cea a probei etalon, folosirea relaiei anterioare introduce ns o serie de erori datorit unor factori ce nu pot fi complet eliminai din procesul de msur: zgomotul electric al aparaturii, erori ce apar n procesul de realizare al probei etalon, deriva liniei de zero etc.
1,0 K=tg()=9.66 0,8

A
0,6 0,4 0,2 0,0 0,00

0,02

0,04

0,06

0,08

0,10

concentratie

Figura 4-3: Curba de calibrare dependenta absorbanei unei benzi, funcie de concentraie

Eliminarea acestor erori este posibil prin folosirea mai multor etaloane, urmat de calcularea prin metoda celor mai mici ptrate, a dreptei ce aproximeaz (interpoleaz) cel mai bine datele experimentale. Determinarea constantei k, const n acest caz n obinerea pantei (tg ) dreptei de etalonare, operaie numit n cadrul matematicii, regresie linear. Precizm c

104

Spectrometrie IR

softurile de achiziie a spectrelor au n componena lor i module de calcul al coeficienilor dreptei de calibrare.

4.3.2.2 Probe cu mai muli constitueni

Problema devine mai complicat, atunci cnd n prob exist cel puin doi constitueni ce absorb n spectrul de lungimi de und al radiaiei. Determinarea concentraiilor necunoscute, necesit n acest caz existena unui numr de ecuaii egal cu cel al constituenilor ce absorb radiaie. Benzile de absorbie nu se suprapun Atunci cnd benzile de absorbie ale acestora nu se suprapun ecuaiile ce permit calibrarea i dozarea unei astfel de probe sunt:
a A = k C a
1 1

(4.9)

A = k b C b
2 2

unde 1, 2 sunt lungimile de und corespunztoare, a dou benzi de absorbie pentru constituentul A, respectiv B figura 4-4. Folosind probe etalon, pentru fiecare constituent n parte, se poate determina prin regresie linear, pantele dreptelor de etalonare (Ka1, Kb2), ce vor sta la baza determinrii concentraiei unei probe, ce va conine de data aceasta ambii constitueni. Menionm c n prob pot exista i ali constitueni cu condiia ca acetia s nu absoarb n domeniul spectral al radiaiei utilizate.

105

Capitolul 4

Figura 4-4: Benzile de absorbie a doi constitueni (A, B) i ale amestecului acestora

Benzile de absorbie se suprapun Situaia prezentata anterior se ntmpl destul de rar n aplicaiile spectrofotometrice. De regul, constituenii din prob au numeroase benzi ce se suprapun parial sau total. n acest caz, pe baza aceleiai legi Lambert Beer, se poate ine ns cont de faptul c absorbanele unor amestecuri sunt aditive. De aceea, n cazul a doi componeni A i B figura 4-5, ecuaiile ce vor sta la baza procesului de calibrare sunt:
a A = k C a + k b C b
1 1 1

(4.10)

a A = k C a + k b C b
2 2 2

Urmtorul pas este rezolvarea sistemului de ecuaii. Pentru aceasta se apeleaz la metodele de calcul specifice algebrei lineare, ce constau n scrierea matriceal a sistemului de ecuaii.

106

Spectrometrie IR

Figura 4-5: Benzile de absorbie, a doi constitueni A i B, ce se suprapun

Chiar dac acest calcul este destul de laborios, scrierea matriceal prezint avantajul unei soluionri rapide a problemei, prin folosirea calculatoarelor. De aceea n cazul unei singure probe etalon ce conine numai doi constitueni, ecuaiile prezentate se scriu astfel:
A ka 1 = 1 A a 2 k 2

k b C a k b Cb
1

(4.11)

sau
A= K C

(4.11')

unde:

K este o matrice (22), numit i matricea de etalonare a metodei; C - matricea concentraiilor probelor etalon; A - matricea absorbantelor.

Referitor la matricea K, ea conine n acest caz, numai constantele de etalonare, ce se obin prin folosirea unui singur etalon i a dou lungimi de und. Aceste lungimi de unda, corespund unor benzi de absorbie ale celor doi constitueni. Obinerea ei rezult printr-un simplu calcul algebric de forma:
K = AC 1

(4.12)

unde C 1 este matricea invers a concentraiilor constituenilor din proba etalon. Menionm c pentru a calcula inversa unei matrici este necesar ca ea s fie
107

Capitolul 4

ptratic, adic numrul de coloane s fie egal cu numrul de rnduri (n cazul de fa matricea C fiind de tip (21). De aceea o variant de calcul, posibil din punct de vedere matematic, este folosirea urmtoarei relaii:
K=AC(CC) 1

(4.13)

unde C este transpusa matricei concentraiilor. Chiar dac folosirea unui singur etalon i a dou lungimi de und, este o variant comod din punct de vedere al timpului de calcul, ea nu este ns recomandat, datorit erorilor inerente ce pot s intervin n procesul de msur. De aceea se recomand utilizarea unui numr mai mare de etaloane, citirea fcndu-se la mai multe lungimi de und. De fapt numrul minim al lungimilor de und utilizate trebuie s fie mai mare dect cel al constituenilor din prob. innd cont de avantajul oferit de tehnica de achiziie a spectrelor, se utilizeaz de regul ntreg spectrul de lungimi de und achiziionat. n aceste condiii, pentru un numr n de probe etalon, respectiv n cazul a p, lungimi de und achiziionate, relaia anterioara poate fi scris matriceal astfel:
A 11 A 12 M A p 1

A21 A22 M A2p

K K K K

An1 k11 An2 M M = M Anp k1p

k21 M M K

K M M K

km1 C11 M M M M knp Cm1

K M M K

K M M K

C1n M M Cmn

(4.14)

Folosirea ntregului spectru achiziionat prezint avantajul obinerii unui efect de mediere a rezultatelor obinute. Practic, n acest caz, prin calcularea matricei K, se pot obine spectrele extinciilor fiecrui constituent, fiecare coloan a acestei matrici reprezentnd un astfel de spectru. Menionm c prin creterea numrului de etaloane, aceste spectre se aproprie tot mai mult de cele ale constituenilor n stare pur.

108

Spectrometrie IR

Principalul dezavantaj al metodei este ns necesitatea calibrrii metodei pentru fiecare constituent din prob. Cu alte cuvinte este necesar cunoaterea integral a compoziiei etaloanelor i n plus probele ce vor fi analizate trebuie s aib aceeai compoziie chimic. n concluzie etapele parcurse n realizarea unei analize cantitativ folosind metoda CLS sunt: 1) realizarea unor etaloane, cu aceeai compoziie chimic cu a probelor ce urmeaz a fi analizate. Ele pot s conin i ali constitueni numai dac acetia nu absorb (sunt transpareni) la ntreg spectrul de radiaie utilizat. 2) msurarea spectrelor de absorbie ale acestor probe etalon, adic aflarea matricei A. 3) cunoscnd concentraiile constituenilor din probele etalon (C), se determin matricea de calibrare K. 4) msurarea spectrului de absorbie al probei ce urmeaz a fi dozat. Subliniem c este necesar ca acest spectru s fie nregistrat la aceleai valori ale lungimilor de und, adic cu aceeai rezoluie spectral ca i n cazul etaloanelor. 5) cunoscnd matricea de calibrare, se determin concentraiile constituenilor din prob. Menionm c aceste calcule sunt n general destul de laborioase, necesitnd folosirea tehnicii de calcul i existena n general a unor programe specializate n analiza cantitativ. n cazul n care nu dispunem de un astfel de program, o soluie salvatoare este folosirea unor programe specializate n calculul matriceal, cum ar fi de exemplu MatLab. Aceast soluie este aplicabil innd cont c majoritatea softurilor ce achiziioneaz spectrele, permit salvarea valorilor msurate i ntr-un format de tip text (cu extensia *.dat sau *.csv). n acelai timp programele mai sus menionate au posibilitatea de a memora sub form matriceal valorile salvate ntr-un fiier de acest tip.
109

Capitolul 4

4.3.3 Metoda regresiei lineare multiple

Metodele de analiz cantitativ, necesit n general cunoaterea concentraiei tuturor constituenilor ce intr n componena standardelor. Aceasta deoarece, pe baza legii BouguerLambertBeer, absorbana unui amestec este egal cu suma absorbanelor fiecrui constituent din prob. innd cont c exist situaii cnd este necesar dozarea numai a anumitor componente dintr-un amestec, au fost puse la punct noi metode de analiz cantitativ. O astfel de metod este i metoda regresiei lineare multiple sau Inverse Least Squares (ILS). Ea mai este cunoscut n literatura de specialitate i sub denumirea de metoda matricii P. Punctul de plecare al acestei metode este rearanjarea legii LambertBeer sub forma:
C= A = PA b
(4.15)

Fr a intra n detalii, acest artificiu matematic permite ca n cazul dozrii a doi constitueni A i B dintr-un amestec, s fie valabile relaiile:
C a = A Pa + A Pa
1 1 2 2

(4.16)
2

C b = A P + A P
1 1 2

unde A , A sunt absorbanele probei, corespunztoare a dou lungimi de und 1,

1

2, iar C , C sunt concentraiile celor doi constitueni A, respectiv B. b a

Aa cum se observ, n acest caz, concentraia poate fi scris ca o serie de termeni ce conin absorbana la diferite lungimi de und. De fapt pentru a determina concentraiile, este necesara calcularea coeficienilor matricii P. O atenie deosebit trebuie acordat alegerii acestor lungimi de und, ce trebuiesc alese n regiunea din spectru n care constituentul respectiv aduce o contribuie major la spectrul de absorbie al amestecului. Fcnd apel la scrierea matriceal, matricea P se poate calcula cu relaia:
110

Spectrometrie IR

P = C A( A A)-1

(4.17)

unde C i A sunt matricele corespunztoare absorbantei i concentraiilor probelor etalon. Majoritatea softurilor ce au la baz aceast metod, pentru a gsi acele lungimi de und specifice fiecrui constituent de interes, folosesc o serie de algoritmi foarte performani. Practic acetia au rolul de a selecta din ntreg spectrul achiziionat, o serie de puncte i de a evalua contribuia pe care absorbanele corespunztoare unui anumit constituent o are asupra spectrului ntregului amestec. innd cont de numrul mare de posibiliti, n alegerea acestor puncte de interes (numrul total al punctelor nregistrate, ce depinde de rezoluia de scanare poate s ajung frecvent la 2000), rezult c metoda este n general consumatoare de timp, aceasta reprezentnd de fapt i principalul ei dezavantaj. Etapele realizrii unei analize cantitative folosind metoda ILS sunt: 1) 2) 3) stabilirea compoziiei chimice a probelor ce urmeaz a fi analizate; stabilirea constituenilor ce urmeaz a fi dozai; pregtirea standardelor. Acetia trebuie s aib o compoziie chimic

similar cu a probelor ce se vor analiza, fiind ns necesar numai cunoaterea concentraiilor constituenilor ce prezint interes. Concentraiile acestora trebuie s acopere ntreg intervalul posibil de valori, care s-ar putea gsi n proba analizat; 4) 5) 6) 7) nregistrarea spectrelor de absorbie ale acestor standarde; selectarea lungimilor de und de interes, pentru fiecare constituent i nregistrarea spectrului probei de concentraie necunoscut; avnd calculat matricea P, n urma unor calcule matriceale se determin

calcularea matricei P;

concentraia constituenilor care au fost calibrai. Pe lng avantajul calibrrii doar a constituenilor de interes, metoda prezint i o serie de dezavantaje cum ar fi: - numrul lungimilor de und selectate pentru fiecare constituent nu trebuie s depeasc numrul standardelor. Astfel cerina de a avea un numr sporit de lungimi
111

Capitolul 4

de und, care determin o mbuntire a acurateei metodei, atrage dup sine necesitatea de a avea un numr mare de standarde. - timpul mare consumat n alegerea lungimilor de und pentru fiecare constituent.
4.4 Metode de analiz chemometric

Aa cum s-a menionat anterior, domeniul de aplicabilitate al legii Bouguer Lambert Beer, n analiza cantitativ, este extrem de limitat. Folosirea acestei legi necesit ndeplinirea unor condiii, de ctre probele analizate respectiv instrumentul de msura: probele s fie transparente la domeniul de lungimi de und utilizat; substana analizat s nu prezinte benzi de absorbie, care s interfere cu cele ale solventului sau ale altor componente existente n prob; substana analizat s nu interacioneze chimic cu solventul sau alte substane din prob; probele s fie stabile n timp; raportul semnal / zgomot al instrumentului de msur trebuie s fie suficient de mare, iar detectorul de radiaie electromagnetic s aib un rspuns linear, la o variaie a energiei incidente. Aceste condiii reprezint obstacole n analiza cantitativ a unor amestecuri, prin metode spectrofotometrice, o parte dintre ele putnd fi depite doar prin folosirea unor metode matematice complexe. Indiferent de tipul metodei, cu excepia metodei ILS, toate celelalte necesitau cunoaterea concentraiei tuturor constituenilor din probele standard, ce stau la baza etalonrii.
4.4.1 Metode de analiz multivariat

Efectele fizice, ce introduc erori n procesul de msur pot fi parial anulate, prin folosirea avantajului oferit de achiziia i prelucrarea informaiilor (absorbanta, transmisie) corespunztoare fiecrei lungimi de und, din spectrul probei analizateanalize multivariate.
112

Spectrometrie IR

Folosind datele msurate la ct mai multe lungimi de und i la un numr mult mai mare de probe standard, exist posibilitatea ca erorile s se anuleze, astfel nct rezultatul msurtorii s fie ct mai aproape de valoarea real. Aceste proceduri matematice, sunt ntlnite n literatura de specialitate n cadrul unei discipline numita chemometrie. Introdus prin anii '80, chemometria are un domeniu de aplicabilitate mai larg, fiind definit ca o disciplin chimic ce utilizeaz metode matematice i statistice n scopul obinerii unor informaii maxime din analiza unor date experimentale. Ea se aplic ndeosebi n situaia n care teoria disponibil n acel moment, nu este suficient pentru soluionarea unor probleme, ce au multe variabile aflate n relaii necunoscute. Exemple de astfel de probleme ntlnite n chimie sunt: obinerea structurii chimice din analiza spectral sau clasificare spectral, clasificarea unor probe (cluster analysis), predicia unor proprieti chimice din analiza structurii (QSAR) i analiza cantitativ a unor amestecuri complexe sau metode multivariate. Strategia acestor metode consta n parcurgerea urmtoarelor etape:

achiziionarea datelor; generarea unui model matematic, ce are la baz metode statistice sau reele neuronale; interpretarea parametrilor modelului realizat; aplicarea modelului la o nou situaie.

n continuare vom face o prezentare a unor metode multivariate utilizate n analiza spectrofotometric calitativ i cantitativ. innd cont c suportul matematic al acestor metode este destul de complicat, vom prezenta numai noiunile strict necesare nelegerii i aplicrii lor n condiii optime.
4.4.2 Metoda de analiz a componentelor principale

Metoda de analiz a componentelor principale (Principal Component Analisys),

113

Capitolul 4

cunoscut i sub acronimul PCA, st la baza multor metode chemometrice de analiz spectrofotometric att cantitativ ct i calitativ. Ea se afl implementat n multe din softurile de achiziie i de prelucrare a rezultatelor obinute n urma msurtorilor spectro - foto - cromatografice. Astfel avnd la baz, spectrele msurate ale unor etaloane, aceast metod const n gsirea unor spectre de variaie sau componente principale, ce modeleaz ct mai bine caracteristicile eseniale ale etaloanelor. Menionm c spectrul unei probe se obine ca urmare a variaiei a diferii factori cum ar fi: constituenii din amestec, interaciunile dintre constitueni, modificarea condiiilor externe, variaii ale parametrilor instrumentelor de msur sau zgomotul electric. Dintre aceti factori, influena cea mai mare este dat de variaia concentraiei constituenilor din amestec. Astfel folosind metode matematice complexe i sofisticate, a cror explicaie depete nivelul acestei lucrri, pe baza spectrelor probelor etalon (n numr de n) se obine un set, mai restrns, de componente principale sau factori.

Figura 4-6: Spectrele setului de etaloane folosit la calibrarea modelului

Acetia au urmtoarele proprieti: a) fiecare spectru din setul de etaloane poate fi obinut printr-o sum ponderat a componentelor principale. Ponderile cu care se amplifica fiecare factor pentru a obine etaloanele se numesc scoruri, Figura 4-7.

114

Spectrometrie IR

Figura 4-7: Descompunerea unui spectru etalon n doua componente principale (PC1 i PC2)

b) chiar dac fiecare dintre factori, este obinut pe baza informaiilor existente n ntreg setul de calibrare, cu toate acestea ei sunt independeni sau necorelai unul fa de altul. Cu alte cuvinte contribuia unui factor, la obinerea unui spectru etalon nu este afectat de prezena sau absena oricrui alt factor. Modul de descompunere al spectrelor etalon, n factori, poate fi urmrit pe diagrama din Figura 4-8, unde s-a considerat existena unui set de n spectre etalon, fiecare fiind format prin achiziionarea a p puncte de msur. innd cont de scrierea matriceal, procesul de descompunere n factori poate fi scris astfel: A=SF unde A - setul de spectre etalon; F - matricea factorilor sau componentelor principale; S - matricea scorurilor.

Figura 4-8: Descompunerea matriceala a spectrelor de calibrare

n relaia anterioar s-a considerat c din setul de n, spectre etalon se obin f

115

Capitolul 4

componente principale. Fr a avea o semnificaie fizic direct, aa cum se observ, componentele principale au alura unor spectre. Ele se calculeaz pe baza variaiilor ce intervin n valorile absorbanelor probelor etalon. De aceea orice artificiu de calcul ce pune n eviden variaii ntre spectrele etaloanelor va mbunti modelul de calibrare. Practic nainte de a ncepe algoritmul de obinere al acestor componente, din fiecare spectru se va elimina spectrul mediu al probelor etalon, figura 4-7. n felul sunt mai bine puse n eviden, diferenele dintre spectre. Astfel fiecare spectru poate fi refcut prin adunarea la valoarea medie, a componentelor principale nmulite cu scorurile corespunztoare. Realiznd o descompunere similar i pentru matricea concentraiei constituenilor din amestec, se obine algoritmul unei metode frecvent utilizate n analiza cantitativ. Aceast metod ntlnit n literatura de specialitate sub denumirea de Partial Least Squares (PLS) realizeaz simultan att descompunerea spectral ct i cea a concentraiilor din amestec. Procedeul poate fi urmrit schematic n figura 4-8, n care s-a considerat existena a n probe etalon i a m constitueni. Menionm c exist dou versiuni ale algoritmului PLS: PLS 1 i PLS 2, fr ca intre ele sa existe diferene majore. Astfel PLS 2 realizeaz o descompunere spectral pentru toi constituenii din amestec. Aceasta nseamn, c n acest caz, se va obine un set de factori spectrali i unul de scoruri pentru ntreg setul de spectre etalon. Cu alte cuvinte factorii calculai nu sunt optimizai, pentru fiecare constituent n parte. Dei acest algoritm este mai rapid, el poate introduce o serie de erori n cazul unor amestecuri complexe. Pe de alt parte algoritmul PLS 1, calculeaz un set de factori spectrali i de scoruri, pentru fiecare constituent de interes din amestec. Chiar dac prin acest procedeu se obine o cretere substanial a timpului de calcul, precizia n predicia concentraiei constituenilor din amestec este mult mbuntit. n acelai timp algoritmul PLS 1 prezint avantaje considerabile atunci cnd este
116

Spectrometrie IR

utilizat la dozarea unor constitueni, ale cror concentraii din amestec variaz foarte mult. De exemplu un constituent poate varia n intervalul 60 80 %, n timp ce altul poate lua valori cuprinse ntre 0.2 0.4 %, caz n care PLS 1 reprezint cea mai bun alegere. Principalele avantaje ale metodei PLS sunt: att procesul de descompunere ct i de regresie se desfoar ntr-o singur etap, factorii spectrali obinui fiind n legtur direct cu constituenii din amestec; metoda poate fi aplicata pentru amestecuri foarte complexe, n care este suficienta numai cunoaterea concentraiei constituenilor de interes, din probele etalon; n unele cazuri, modelul obinut n urma operaiei de calibrare, poate fi folosit i la predicia unor probe contaminate, cu constitueni ce nu au fost prezeni n procesul de calibrare. Cele mai importante dezavantaje, ce intervin prin aplicarea acestei metode sunt: timpul de calcul este mai mare dect n cazul altor metode, n special pentru PLS 1; deoarece att factorii ct i scorurile, nu au o semnificaie fizic direct, aceste modele sunt abstracte, fiind astfel mai dificil de interpretat; necesit, aa cum vom vedea, un numr destul de mare de probe etalon; procesul de calibrare i/sau de realizare efectiv a probelor etalon este dificil, deoarece trebuie evitat o dependen linear ntre constitueni. Aceasta nseamn c, n setul de etaloane nu trebuie s existe amestecuri n care de exemplu doi constitueni A i B s fie prezeni n acelai raport. Cu alte cuvinte, obinerea acestor etaloane nu se poate face prin diluii succesive ca n metodele clasice. De aceea este important ca valorile concentraiei constituenilor de interes s fie ct mai aleatoriu distribuite, pe ntreg intervalul posibil de variaie al concentraiilor O alt metod de analiz cantitativ, ntlnit frecvent n literatura din domeniu este i regresia componentelor principale PCR (Partial Component Regression). Pentru a realiza un model de analiz cantitativ a unor constitueni dintr-o prob,
117

Capitolul 4

aceast metod mbin procedeul de descompunere spectral n factori realizat de PCA cu procedeul de regresie caracteristic metodei ILS. Astfel spre deosebire de metodele clasice, ce au la baz legea Lambert Beer al cror algoritm const n regresia concentraiei constituenilor n funcie de rspunsul spectroscopic, metoda PCR realizeaz regresia concentraiilor n funcie de valorile scorurilor, obinute n urma descompunerii spectrale. Fr a intra n detalii referitoare la algoritmul de calcul al acestei metode, prezentm avantajele acestei metode: nu necesit selecia lungimilor de und, aa cum era necesar n cadrul metodei ILS, putnd fi astfel utilizat ntreg intervalul spectral de lungimi de und. n felul acesta se poate obine un efect de mediere ce poate face modelul mai puin susceptibil fa de zgomotul spectral metoda poate fi folosit doar la predicia anumitor constitueni, de interes, din proba. i n acest caz este necesar ca aceti constitueni s fie prezeni n probele etalon. n unele cazuri la fel ca n metoda PLS, PCR poate prezice concentraiile unor probe contaminate cu impuriti ce nu au fost prezente n etaloane. Dintre principalele dezavantaje ale metodei amintim: timpul de calcul este mai mare dect al metodelor clasice (CLS, ILS); modelele sunt mai complexe i mai dificil de interpretat; necesit un numr mare de etaloane; procesul de calibrare este dificil, deoarece i n acest caz trebuie evitat linearitatea dintre concentraiile constituenilor.
4.4.2.1 Optimizarea metodelor de analiz PLS i PCR

Calitatea rezultatelor obinute n urma analizei cantitative depinde foarte mult de optimizarea condiiilor necesare obinerii unui model de calibrare ct mai corespunztor. De aceea analistul trebuie s in cont de factori ca de exemplu: alegerea unui set optim de probe etalon, selecionarea unui numr corespunztor de
118

Spectrometrie IR

factori principali, detecia i eventuala eliminare a probelor necorespunztoare, alegerea intervalului optim al lungimilor de und pe care s se fac calibrarea. n continuare ne vom referi asupra fiecruia dintre factorii enunai anterior.
Setul de probe etalon

Unul dintre principalele dezavantaje ale metodelor de analiz cantitativ multivariat este numrul mare de probe etalon necesare obinerii modelului de calibrare. Acest numr este cu att mai mare cu ct amestecul supus analizei are un numr mai mare de constitueni de interes. De aceea, n cazul unor amestecuri complexe, numrul lor poate ajunge la cteva sute. De fapt, cu ct acest numr este mai mare cu att erorile statistice sunt mai mici. Chiar dac nu exist o regul privind numrul optim de probe etalon, n cazul unui singur constituent modelul va conine cel puin 10 etaloane, pentru 2 constitueni 20 .a.m.d. De fapt, avnd n vedere c numrul maxim de factori ce poate fi obinut este dat de dimensiunea minim a matricei A, format din spectrele absorbanelor etaloanelor, rezult c un model ce conine 20 de etaloane va putea calcula numai 20 de factori. n acelai timp, trebuie reinut faptul c nu toate probele din setul de etaloane sunt folosite pentru obinerea ecuaiilor de calibrare. Astfel, cel puin o prob este folosit pentru validarea modelului de calibrare, adic pentru a calcula erorile statistice ale modelului obinut. De aceea, practic numrul de factori este mai mic dect cel al probelor etalon, fiind egal de fapt cu numrul probelor folosite efectiv la calibrarea metodei, n. Dependena numrului de factori, de cel al probelor folosite la calibrarea metodei, apare numai n cazul n care numrul punctelor din spectru, p, folosite la calibrare este mai mare dect cel al probelor. Astfel, n cazul unui numr mare de probe - de ordinul sutelor - menionm c numrul factorilor poate fi limitat i de numrul punctelor din spectru. Cu alte cuvinte, acest numr este de fapt mai mare dect minimul dintre p i n. Un alt factor de care trebuie inut cont, este i intervalul de variaie al
119

Capitolul 4

concentraiilor de interes, ce trebuie s acopere toate variaiile posibile ale concentraiei probei necunoscute. Chiar dac modelul poate uneori extrapola chiar i n afara acestui interval, pentru o metod de calibrare acest lucru nu este ns recomandat. Aceasta nseamn c un model ar trebui s conin att probe de concentraie mic ct i unele de concentraie mare. Obinerea unui interval ct mai larg al concentraiilor constituenilor de interes este o operaie dificil atunci cnd setul de calibrare este format din probe reale, adic colectate direct din natur, i dozate prin alte metode mai precise, cum ar fi de exemplu cele cromatografice. n acest caz exist n general o tendin ca probele s varieze foarte puin, fiind de aceea necesar colectarea unui numr ct mai mare. De aceea, practic, pentru a obine un set corespunztor este, n unele cazuri, necesar colectarea a sute de astfel de probe. Alt aspect de care trebuie inut cont este faptul c aceste etaloane trebuie s aib o compoziie chimic ct mai aproape de cea a probei necunoscute. Chiar dac procesul de etalonare, necesit numai cunoaterea concentraiei constituenilor de interes, etaloanele trebuie s conin ns toate substanele ce pot apare n proba necunoscut. Foarte important este, de asemenea, evitarea aa numitei coliniariti a constituenilor de interes. Un set de probe etalon este coliniar atunci cnd raportul concentraiei a cel puin doi dintre constituenii de interes se pstreaz constant n toate probele. Spre deosebire de metodele clasice, acest fenomen introduce erori semnificative n analiza cantitativ multivariat. Aceasta deoarece, n cazul metodelor multivariate, nu se caut obinerea unei corelaii ntre concentraiile constituenilor i rspunsul spectral, A = f(c), ca n cazul metodelor clasice. n schimb n acest caz, conteaz corelaia dintre variaia de concentraie i modificrile ce apar n spectru. De aceea, atunci cnd constituenii sunt coliniari, modelele multivariate nu pot face distincie ntre probele etalon iar procesul de
120

Spectrometrie IR

calibrare devine inutil. Un set coliniar de probe s-ar obine dac iniial s-ar realiza un etalon n care toi constituenii sunt foarte concentrai, urmnd ca restul de etaloane s se obin prin diluii succesive. Acest procedeu, folosit frecvent n metodele clasice univariante este total neadecvat n cazul metodelor multivariate deoarece, n acest caz, nu exist variaii ntre constituenii din setul de combinare. De fapt n acest caz spectrele folosite la etalonare sunt dependente, adic ele pot fi obinute prin nmulirea spectrului probei concentrate cu un numr subunitar. De aceea, practic n urma calibrrii rezult numai un singur factor. Pentru a evita o astfel de situaie, o soluie ar fi reprezentarea grafic a concentraiei unui constituent n funcie de a celuilalt, figura 4-9.

Figura 4-9: Exemplu de model de calibrare n care concentraiile a doi constitueni 1 si 2 au o dependen linear. O astfel de situaie trebuie evitat n timpul calibrrii metodei

Astfel atunci cnd punctele de pe diagram, au tendina de a se aeza pe o dreapt

121

Capitolul 4

nseamn c valorile concentraiilor sunt coliniare. Obinerea unui model corespunztor se obine atunci cnd aceast reprezentare are alura unui nor, figura 4-10.

Figura 4-10: Exemplu de model de calibrare n care concentraiile a doi constitueni 4 si 5 nu variaz linear

Selectarea componentelor principale

Determinarea numrului optim de factori este o problem dificil i extrem de important n analiza prin metodele PCR i PLS. Reamintim c rolul acestor factori este acela de a modela variaiile ce exist ntre spectrele folosite la calibrarea metodei. Dac numrul lor este prea mic, deoarece nu exist termeni suficieni pentru a modela variaiile ce apar n spectru, erorile legate de predicia concentraiei constituenilor de interes vor fi mari. Practic primii factori care se obin n urma calibrrii sunt cei mai importani, ei modelnd variaiile cele mai mari ce pot apare ntr-un spectru i care sunt date de
122

Spectrometrie IR

modificarea concentraiilor de interes. Factorii ulteriori ncep s modeleze variaii din spectru care nu au o legtur cu concentraiile constituenilor, cum ar fi de exemplu zgomotul spectral, variaia liniei de baz, variaii n procesul de obinere al etaloanelor, modificrile condiiilor experimentale, etc. Astfel, includerea lor n modelul de calibrare poate duce la rezultate eronate. De aceea este important a stabili un numr optim al factorilor care s modeleze numai variaiile concentraiilor constituenilor de interes. Din nefericire, nu avem la dispoziie o indicaie clar, direct, asupra modului de calcul al numrului optim de factori. Exist ns o serie de metode ce pot ajuta la stabilirea acestui numr. O indicaie privind valoarea acestuia (numrul optim de factori) se obine prin calcularea, pentru fiecare set de factori, a erorilor PRESS (Prediction Residual Error Sum of Squares). Practic pentru un numr fixat de p factori, se calculeaz erorile de predicie a concentraiilor (cunoscute) constituenilor din etaloane: PRESS = c ip, j c i , j
i =1 j =1 n m

unde n este numrul de probe din setul de etaloane i m numrul de constitueni; cpi,j concentraia calculat prin aplicare modelului de calibrare, avnd p factori i ci,j concentraia constituentului j (cunoscuta ) din etalonul i. n cazul a doi constitueni, suma dubl se scrie:
PRESS = (c c ) + (c c ) 1444 24444 4 3
1,1 p 1,1 2 1, 2 p 1, 2 2 etalon1 etalon 2 64444 4444 7 8 2 2 ,1 2 ,1 2 2, 2 2,2 2 + (c p c ) + (c p c ) + (c 3,1 c 3,1 ) + ... p

Cu ct aceast valoare este mai mic, cu att acurateea modelului de calibrare este mai bun. Calculnd i reprezentnd grafic aceste erori, funcie de numrul de factori se obine o curb ce are alura din figura 4-11. Dei aceasta reprezint cea mai simpl metod de testare a unui model de
123

Capitolul 4

calibrare, ea nu este foarte des utilizat.

nr. factori
Figura 4-11: Dependenta erorilor PRESS (self-predicie) funcie de numrul de factori ai modelului de calibrare. Asa cum se observa prin creterea numrului de factori aceste erori scad

Principalul inconvenient al metodei self-predicie, este utilizarea ntregului set de etaloane, att la calibrare ct i la prezicerea concentraiei constituenilor. De aceea, aceste erori scad prin creterea numrului de factori dnd falsa impresie c toi factorii modeleaz numai variaiile de concentraii, fr ns a modela i alte variaii, cum ar fi de exemplu zgomotul spectral. n locul acestei metode, se utilizeaz o variant mai performant, care este ns mai consumatoare de timp. Ea se numete cros-validare. Conform acestei metode, fiecare etalon este scos succesiv din ntregul set de calibrare, fiind astfel folosit la prezicerea concentraiilor constituenilor. Un astfel de exemplu este reprezentat n figura 4-12 unde se observ c pn la maxim 7 factori erorile PRESS scad odat cu adugarea unui nou factor n modelul de calibrare. De la aceast valoare, aa cum se observ, aceste erori ncep s creasc - ceea ce

124

Spectrometrie IR

sugereaz c ncepe un proces de adugare de factori, care nu modeleaz variaiile concentraiilor. Este evident c prin introducerea acestor noi factori, ncepe de exemplu modelarea zgomotului spectral, astfel nct predicia concentraiilor va fi afectat de erori mai mari.

nr. factori
Figura 4-12: Dependenta erorilor PRESS(cros-validare) funcie de numrul de factori ai modelului de calibrare. Aa cum se observa de la un anumit numr de factori aceste erori pot sa i creasc

Foarte important pentru acurateea modelului este detecia probelor eronate i eliminarea acestora din modelul de calibrare. Pstrarea lor n cadrul modelului ar afecta grav predicia probelor de concentraie necunoscut. Menionm c aceste probe etalon eronate sau outlier, provin din msurtori incorecte i/sau schimbarea condiiilor exterioare (temperatur, umiditate, etc.), dar mai ales din procesul de realizare a etaloanelor (concentraii ale substituenilor incorect evaluate). O alt cauz ar putea fi i introducerea eronat a valorilor concentraiilor n programul de analiz multivariat.
125

Capitolul 4

Aceste probe de tip outlier, se gsesc prin calcularea concentraiei reziduale (Rc), definit ca diferena dintre valoarea msurat la realizarea etaloanelor, c, i cea prezisa cp dup stabilirea numrului optim de factori: Rc = c - cp

Fi =

(n 1)Rci

Rcj
j i

unde i este numrul probei testate i n numrul total de etaloane. O alt metod de detecie este calcularea reziduurilor spectrale. La fel ca i n cazul concentraiilor reziduale i acestea se calculeaz tot dup stabilirea numrului optim de factori. Menionm, c atunci cnd are loc predicia concentraiei unei probe se calculeaz de fapt un set de scoruri. Cu ajutorul acestora i al factorilor deja calculai se poate reconstrui spectrul probei. Astfel, spectrul rezidual se definete prin relaia: Rs = (Ak - Akp)2
k =1 p

unde Ak reprezint absorbana n punctul k al spectrului probei(msurat ) iar Akp absorbana n punctul k al spectrului, calculat cu ajutorul scorurilor i al factorilor. Reprezentnd grafic aceast mrime n funcie de numrul probei, se poate obine o reprezentare cum este de exemplu cea din figura 4-13. Pe acest grafic se observ c proba 45 are un spectru rezidual mult diferit fa de cel al restului de etaloane, sugernd c ar putea fi un outlier.

126

Spectrometrie IR

nr. prob
Figura 4-13: Reprezentarea grafica a reziduului spectral, calculat pentru fiecare proba din setul de etalonare. Aa cum se observa proba 45 se abate de la comportamentul general, fapt ce sugereaz ca aceasta proba ar putea fi un outlier.

Selectarea regiunii spectrale

Unul din avantajele metodelor ce au la baz componentele principale este posibilitatea utilizrii n procesul de calibrare a ntregului interval de lungimi de unde, realizndu-se astfel un efect de mediere asupra rezultatelor experimentale, al crei efect este mbuntirea preciziei modelului de calibrare. Cu toate acestea, se constata c eliminarea unor regiuni din spectru poate duce la mbuntirea performanelor. n acelai timp, reducerea numrului de puncte ce apare ca urmare a acestei operaii reduce i memoria necesar calculatorului pentru a stoca datele i implicit va duce la o micorare a timpului de calcul. Pe de alt parte, includerea n modelul de calibrare a unor regiuni n care constituenii nu absorb, nu aduce nici un beneficiu metodei. De aceea, este necesar ca experimentatorul s aib suficiente informaii privind benzile de absorbie ale constituenilor de interes. Concomitent este util i cunoaterea unor informaii privind benzile de absorbie ale unor eventuale impuriti ce ar putea fi incluse n probele necunoscute.
127

Capitolul 4

Excluderea lor din modelul de calibrare ar pune modelul n imposibilitatea de a detecta eventualele probe de tip outlier. n alegerea acestor regiuni experimentatorul este ajutat de o serie de proceduri matematice, una dintre ele fiind i de calculare a unor coeficieni de corelaie ntre absorbane i concentraii, pentru fiecare constituent n parte i la fiecare lungime de und din spectrul achiziionat. Un astfel de coeficient este reprezentat n figura 4-14, pentru un amestec etanol / ap. Aa cum se observ, valorile acestuia difer de-a lungul intervalului de lungimi de unda.

Figura 4-14: Dependena coeficientului de corelaie, R, al spectrului FT-IR al unui amestec etanol/apa Aa cum se observ benzile 1100-1020 cm-1, 1450-1275 cm-1 si 29802740 cm-1 sunt puternic corelate (valori apropiate de 1)

De fapt, valorile coeficienilor de corelaie sunt cuprinse ntre -1 i 1. Astfel, regiunile din spectru caracterizate de valori foarte apropiate de valoarea 1 sunt regiuni n care constituentul respectiv absoarbe. Cu alte cuvinte, de-a lungul acestei regiuni o cretere a concentraiei constituentului duce i la o cretere a absorbanelor.n acelai timp, atunci cnd coeficientul de corelaie este zero de-a lungul unei regiuni, nseamn c pentru constituentul respectiv nu exist o corelaie ntre concentraie i absorban, regiunea respectiv putnd fi exclus din calibrare.
128

Spectrometrie IR

Menionm c exist i regiuni corelate negativ. Aceasta nu nseamn c ele nu pot fi utilizate n procesul de calibrare - o valoare negativ sugernd c o cretere a concentraiei constituentului determin o micorare a absorbanei i invers. Micorarea absorbanei prin creterea concentraiei unui substituent nu constituie o abatere de la legea Lambert - Beer. Ea trebuie neleas innd cont c probele sunt obinute prin amestecarea unor constitueni. Astfel, creterea concentraiei unui constituent poate nsemna micorarea concentraiei altui constituent. Dac acest din urm constituent are un coeficient de extincie mai mare, coeficientul de corelaie va fi negativ.
4.5 Aplicaii ale spectrofotometriei IR n farmacie i medicin 4.5.1 Aplicaii ale spectrometriei IR la controlul medicamentului

Obinerea i analiza spectrului IR al unei substane reprezint un mijloc de determinare a structurii, a degradrii ei chimice, a identitii, puritii i evalurii ei cantitative. Spectrul n infrarou al unei substane este o caracteristic a moleculelor ce intr n componena ei, care nu se repet la o alt substan, orict de mult ar semna structurile lor, dar care este identic pentru substanele cu structuri identice. Dac n spectrele a doi compui identici exist diferene ale poziiei i intensitii relative a benzilor, farmacopeele recomand fie recristalizarea ambilor compui din acelai solvent i repetarea msurtorilor n stare solid, fie dizolvarea probelor n acelai solvent i obinerea spectrelor n aceleai condiii experimentale.
4.5.2 Identificarea formelor polimorfe.

Aceasta reprezint una dintre cele mai importante aplicaii ale spectrofotometriei n IR. Fiecare polimorf are parametrii si fizici proprii, care determin diferenele dintre ei n stare solid. De aceea, metodele de determinare au la baz tocmai aceste diferene existente n stare solid. Dintre aceste metode amintim: difracia cu raze X, analiza termic, spectrometrica IR i msurarea solubilitii sau vitezei de dizolvare.
129

Capitolul 4

4.5.2.1 Spectrul IR , criteriu de identitate a substanelor medicamentoase

Deoarece benzile de absorbie n infrarou sunt mult mai nguste dect cele obinute n vizibil sau ultraviolet, spectrul IR permite o identificare mult mai sigur. Chiar dac numrul mare al benzilor fundamentale, al armonicelor complic analiza spectrului, acestea reprezint ns avantaje n diferenierea i identificarea unor substane. n analiza experimental ne ntlnim frecvent cu doua cazuri diferite: - identificarea substanelor cu structuri cunoscute - identificarea substanelor cu structuri necunoscute. 4.5.2.1.1 Identificarea substanelor cu structuri necunoscute n acest caz are loc analiza i atribuirea benzilor diferitelor grupe fundamentale prin compararea spectrului IR al substanelor necunoscute cu spectrul unei substane cunoscute. Operaia de identificare a spectrului substanelor necunoscute este uurat, n condiiile existentei unor biblioteci de spectre, n format electronic. 4.5.2.1.2 Identificarea substanelor cunoscute Se realizeaz prin compararea spectrului substanelor de determinat cu cel al substanei de referin aflat n aceleai condiii experimentale. n acelai timp, metoda permite i o identificare a omologilor aceleiai clase.
Tabelul 4-3: Identificarea substanelor medicamentoase prin spectrometria n IR

Denumirea substanei Ampicillinum natricum Ampicilinum trihydratum Chloramphenicoli palmitas Cloxacillinum natricum Erythromycini lactobionas Erythromycini propionas Kanamycini sultas Meticillinum natricum Oxacillinum natricun Phenoxymethyl penicillinum

Conditii de dozare Dispersie n KBr Dispersie n KBr Dispersie n KBr Dispersie n parofena lichida Dispersie n parofena lichida Dispersie n parofena lichida Dispersie n KBr Dispersie n KBr Dispersie n KBr Dispersie n KBr

130

Spectrometrie IR

4.5.2.2 Spectrul IR criteriu de puritate.

Apariia unor benzi suplimentare fa de spectrul substanelor pure permite decelarea unor impuriti. Sensibilitatea metodei variaz dup natura impuritilor. Cunoscnd spectrul substanei pure, se poate afla spectrul impuritii prin diferen.
4.5.2.3 Determinarea principiilor active din forme farmaceutice.

Valabilitatea testului de identificare depinde n mare msur de puritatea produselor. De obicei se impune extracia sau separarea principiilor active din forme farmaceutice, De aceea soluiile extractive se supun unor cristalizri repetate a produsului, nainte de obinerea spectrului IR

4.5.3 Aplicaii n bio-medicin

Principalul inconvenient al aplicarea spectroscopiei IR, la investigarea structurii sistemelor biologice este prezena apei. Astfel, frecvenele de vibraie corespunztoare gruprilor de interes C = N, C = O, N H sau O H sunt adesea mascate de benzi largi ale moleculei de ap, centrate pe frecvenele de 1600 sau 3400cm-1. De aceea, aplicarea spectroscopiei prin transmisie IR, la analiza sistemele biologice apoase, este posibil numai n cazul unor dimensiuni optice foarte mici, de ordinul a ctorva m i n condiiile unor concentraii ridicate ale constituenilor de interes. Pe de alt parte, existena unor drumuri optice foarte mici introduce o serie de erori n procesul dozrii acestor substane. Un alt inconvenient este solubilitatea relativ mic a unor macromolecule sau tendina acestora de a forma agregate, care mprtie radiaia IR, introducnd astfel false absorbii n spectrele achiziionate prin transmisie. O soluie salvatoare, studiat intens n ultimii ani, este renunarea la modul de lucru prin transmisie i trecerea la operarea prin reflexie. Aceasta a fost posibil prin
131

Capitolul 4

dezvoltarea dispozitivelor ATR (Atenuated Total Reflection), ce a redus simitor drumul optic al radiaiei IR prin prob. Precizm c acest tip de dispozitiv poate fi folosit att la analiza probelor solide ct i a celor lichide. De asemenea, datorit drumului optic foarte mic, n cele mai multe cazuri analiza poate fi realizat pe substana pur. n cazul spectroscopiei IR a probelor apoase, o soluie mai puin costisitoare este ns eliminarea apei din prob. Aceasta const n picurarea pe un suport transparent (IR) a 5 - 50l de lichid. Proba astfel obinut se introduce ntr-o etuv, la o temperatur de 100 - 110C, operaie prin care se elimin apa i se obine un film uscat sub forma unei pelicule foarte subiri, ce poate fi analizat prin transmisie. Dei aceast metod este uor de aplicat, ea ridic unele probleme atunci cnd substanele de interes din prob se pot descompune la aceast temperatur. Pe de alt parte, n cazul analizelor cantitative, datorit imposibilitii realizrii unor filme de grosime constanta, aceast metod ridic o serie de probleme. Ele pot fi ns eliminate prin adugarea n probe a unor substane a cror concentraie s fie pstrat constant att n etaloane ct i n probele supuse analizei. Precizm c substana introdus trebuie s aib cel puin o band de absorbie intens, care s nu interfere cu cele ale constituenilor de interes din prob. Prin folosirea unor metode chemometrice, aceast band este folosit pentru a detecta eventualele variaii ale intensitii acesteia, care n acest caz ar putea apare numai datorit variaiei de grosime a filmelor. O parte din aceste inconveniente pot fi ns eliminate si prin trecerea la un domeniu spectral n care coeficienii de extincie sunt mult mai mici. Acest domeniu, utilizat frecvent n ultimii ani, este infraroul apropiat (NIR). Dei el este cuprins ntre 780 - 2500nm, n scopuri analitice se utilizeaz n special regiunea 2000 2500nm, care include cele mai intense benzi ale constituenilor de interes practic. Menionm c prin trecerea la acest domeniu drumurile optice prin prob pot ajunge la lungimi de ordinul a 0.5 - 2.5mm sau chiar mai mult. De aceea, procesul de
132

Spectrometrie IR

pregtire a probelor se simplific foarte mult. Spectroscopia NIR se utilizeaz tot mai frecvent ntr-o gam de aplicaii diverse din domeniul medical i farmaceutic, cum ar fi: cercetrile din domeniul radiologiei cardiovasculare, analize clinice, diagnosticul unor boli, procesul de formulare i control al medicamentelor, etc. Recentele dezvoltri i progrese n domeniul transmisei prin fibre optice ct i dezvoltarea continu a soft-urilor de analiz chemometric, fac din aceast tehnic o metod eficient i rapid de investigare a proprietilor fizico - chimice ale substanei. Principalele avantaje ale spectroscopiei NIR n raport cu alte metode de analiz sunt: 1. exist posibilitatea realizrii unor analize rapide (sub o secund); 2. tehnica poate fi n anumite condiii noninvaziv i nedistructiv; 3. de obicei nu sunt necesare metode de pregtire a probelor; 4. costul per analiz este sczut deoarece nu necesit utilizarea unor reactivi; 5. prin prelucrarea spectrelor, pot fi extrase proprietile fizico chimice ale acestora; 6. limitele de detecie pot fi foarte sczute; De-a lungul timpului tehnicile de analiz prin aceast metod au evoluat foarte mult. Astfel, n perioada de nceput investigaiile spectroscopice NIR erau foarte apropiate de metodele spectroscopice specifice domeniului ultraviolet - vizibil. De fapt primele aparate erau spectrometre UV -VIZ ce puteau opera i n domeniul infrarou apropiat. Aceste aparate funcionau n transmisie iar probele erau analizate prin dizolvarea lor n soluii lichide. Principalul solvent utilizat era tetraclorura de carbon. Acum, prin folosirea noilor spectrometre NIR, devine posibil analiza formelor farmaceutice aflate n faz final sau chiar analize biologice in vivo. n continuare, fr a intra n detalii, vom descrie cteva posibile aplicaii ale
133

Capitolul 4

spectroscopiei IR si NIR, n domeniul medical i farmaceutic

4.5.4 Aplicaii ale spectrofotometriei IR n analizele clinice

Determinarea concentraiilor constituenilor din ser, este frecvent utilizat n diagnosticul unor boli ale organismului uman. Dei majoritatea testelor clinice vizeaz compuii organici existeni n ser, pentru ase dintre acetia spectrele lor IR sunt distincte, iar concentraiile lor sunt suficient de mari pentru a putea fi detectai prin metode spectroscopice tabelul 4-4.
Tabelul 4-4: Constituenii din snge ce pot fi dozai prin metode spectrofotometrice IR

Constituent Proteine totale Albumina Uree Glucoz Colesterol Trigliceride

Interval de concentraie 60 - 83g/l 32 - 48g/l 7 - 18mg/dl (2.5 - 6.4mMol/l) 65 108mg/dl (3.6 - 5.8mMol/l) 150 235mg/dl (3.9 6.1mMol/l) - brbai 141 219mg/dl (3.6 5.7mMol/l) - femei 48 189mg/dl (0.5 - 2.1mMol/l) - brbai 40 117mg/dl (0.45 - 1.3mMol/l) - femei

Figura 4-15: Spectre IR ale unor constitueni din ser [2]. Spectrele pentru uree(e), glucoza (c), albumine (b) au fost achiziionate pe soluii apoase (drum optic 6m, spectrul apei s-a eliminat prin scdere), in timp ce pentru ceilali constitueni,colesterol (d), (a) au fost obinute pe soluii de tetraclorur de carbon.

134

Spectrometrie IR

Aceti compui sunt proteinele totale, albumina, ureea, glucoza, colesterolul i trigliceridele, iar spectrele lor IR sunt prezentate n figura 4-16.

Figura 4-16: Spectru IR al serului(a) si al apei(b) (celula de lichide,drumul optic 6m ).In poriunea inferioara se observa spectrul diferena(c) dintre cel al serului si al apei [2]

Printr-o pregtire adecvat a unui set de etaloane i prin utilizarea unor metode de analiz chemometric (PLS, PCR) aceti compui pot fi dozai cu o precizie bun att n IR ct i n NIR - tabelul 2.2.
Tabelul 4-5: Dozarea unor constitueni din ser in MIR(IR mediu), NIR (A-drum optic 0.5mm;B-2.5 mm) [2] Compus Metoda Regiune Nr. factori Erori (mMoli/L) 0.58 9501200 cm-1 9 Glucoza ATR 0.41 10 Film MIR 9251250 cm-1 1.3 13 NIR B 20622353 nm

Colesterol

ATR Film MIR NIR B ATR Film MIR NIR A

Trigliceride

Uree

NIR B ATR

2800-3000 cm-1 1100-1300,17001800,2800-3000 cm-1 20622353 nm 1001500, 17001800 cm-1 9001500, 17001800, 28003000 cm-1 16351800, 20352375 nm 20622353 nm 1130-1800 cm-1 135

8 11 13 13 7 8 13 20

0.22 0.28 0.32 0.11 0.23 0.19 0.11 0.48

Capitolul 4

Film MIR NIR A Albumine NIR B FILM MIR NIR B NIR A ATR Film MIR NIR A NIR B

Proteine totale

1400-1800 cm-1 1324-1800, 23042370nm 2062-2353nm 1100-1800 cm-1 2062-2353 nm 2178,2206 nm 1350-1700 cm-1 900-1800 cm-1 2064, 1440 nm 2062-2353 nm

13 11 12 12 7 12 3 13 14 14

1.1 0.8 0.8 2.2 2.0 1.1 1.4 2.8 1.7 2.3

Rezultatele prezentate n tabelul de mai sus au fost preluate din literatura de specialitate [2] pentru obinerea lor fiind necesar realizarea unui set de aproximativ 200 de probe etalon. Menionm c, n cazul utilizrii dispozitivului ATR, o atenie deosebit trebuie acordat procesului de curare al cristalului ATR (ZnSe). Astfel, dup fiecare msurtoare, acesta trebuie sa fie splat cu detergent, ap distilat i apoi cu etanol. n final, cristalul urmeaz a fi uscat in jet de azot sub presiune. De asemenea, n timpul msurtorilor temperatura celulei de msur este de preferat a se menine la o temperatur a crei valoare va fi 37 0.02C. n ceea ce privete analiza prin transmisie, precizm c, datorit coninutului ridicat de ap, probele se vor pregti sub form de filme uscate. Eliminarea erorilor datorate variaiei de grosime se poate face prin realizarea unor amestecuri 50: 50 ser / soluie apoas de tiocianat de potasiu. Amestecurile astfel obinute se mprtie n cantiti mici (5l) pe suprafaa unor supori transpareni (Si, BaF2), dup care sunt introduse n etuv pentru a se elimina apa. Folosirea tiocianatului de potasiu este util deoarece acesta are o band de absorbie la 2060cm-1, distinct fa de cea a celorlali constitueni, vezi figura 2.3.

136

Spectrometrie IR

Figura 4-17: Spectrul in transmisie IR al unui film (ser ) [2]. Probele au fost amestecuri 50: 50 ser / soluie apoas de tiocianat de potasiu. Banda de absorbie a SCN-1 (2060 cm-1) a fost folosit pentru a elimina erorile datorate variaiilor de grosime ale probelor standard.

Rezultatele existente in literatura de specialitate, arat c dozarea spectroscopic IR este mai precis dect n domeniul NIR, spectrul IR fiind mai bogat n benzi dect cel corespunztor infraroului apropiat. Astfel, n regiunea 950 - 1290cm-1 exist numeroase benzi de absorbie, ce corespund unor vibraii de ntindere ale gruprii CO, n timp ce n domeniul NIR exist o singur band corespunztoare gruprii CH i situat la 2270nm. De asemenea precizm c dozarea acidului uric sau a creatininei este imposibil datorit concentraiilor sczute din plasm. innd cont c dozarea glucozei este unul dintre cele mai importante teste, se fac ncercri pentru dozarea acestui compus in vivo [3]. Deoarece radiaia NIR are o adncime de ptrundere n organism de ordinul mm sau chiar mai mult, se caut ca prin utilizarea unui sistem de fibre optice, spectroscopia NIR s poat fi utilizat la dozarea in vivo a glucozei din snge. n principiu, analiza spectroscopic a sngelui in vivo permite dozarea glucozei, iar erorile ce pot aprea n IR ct i n NIR sunt prezentate n tabelul 2.3.

137

Capitolul 4

Tabelul 4-6: Dozri IR, NIR ale glucozei din snge [3] Metod IR IR NIR Drum optic Interval spectral Erori(mMoli/l)

ATR ATR 1mm

750 1500cm-1 950 1200cm

-1

0.9 0.8 2.1

1515 1818nm 2062 2353nm

Aa cum se observ, erorile n acest caz sunt mai mari dect la dozarea n ser, fenomen datorat mprtierii radiaiei electromagnetice pe celulele de snge. Pentru ca aceste metode s fie acceptate din punct de vedere clinic, erorile trebuie s fie n general mai mici de 0.3 mMoli/l. n concluzie, precizm c dac dozarea glucozei n ser, poate fi acceptat ca o metod clinic, n cazul dozrii direct din snge metoda trebuie mbuntit. n ceea ce privesc analizele spectroscopice din urin datele din literatura arata ca exist posibilitatea dozrii IR si NIR a ureei i creatininei. n cazul proteinelor, erorile de determinare obinute prin aplicarea metodelor chemometrice fiind n general de ordinul a 0.2g/l, metoda spectroscopic nu poate fi folosit n acest caz la analizele clinice. Aceasta deoarece o variaie a concentraiei acestora cu doar 0.1g/l ar putea fi considerat un indiciu al apariiei unor disfuncii renale. Referitor la analiza spectroscopic a salivei, spectrele obinute[2-4] arat existena att a unor constituenii proteici ct i a ionului tiocianat (SCN) a crei band situat la 2060cm-1,poate fi folosit pentru dozarea acestui compus prin simpla aplicare a legii Bouguer - Lambert - Beer. Acest lucru este posibil deoarece, aa cum se observ n 2.4 aceast band este izolat, adic ea nu se suprapune peste banda unui alt constituent.

138

Spectrometrie IR

Figura 4-18: Spectru IR al unui film uscat (saliva) [2].Se observa din nou maximul corespunztor ionului SCN-1

De aceea, dozarea acestui compus se poate realiza cu relaia:

cSCN = - 0.001 + 0.65A (2060cm-1)

(4.18)

unde A este absorbana a 5 l de saliv pregtit sub forma unui film uscat, avnd un diametru de 4mm.
4.5.5 Aplicaii ale spectroscopiei IR n diagnosticul clinic

n ultimul timp se constat o folosire tot mai frecvent a spectroscopiei FTIR n diagnosticul unor boli. Acest lucru a fost posibil prin dezvoltarea microspectroscopiei FTIR (FTIR - MC), metod ce are la baz cuplarea tehnicilor de microscopie cu cele spectroscopice. n felul acesta se obine un instrument performant ce poate fi folosit att la vizualizarea ct i analiza chimic a esuturilor si celulelor organismelor. Folosind aceast tehnic, R.A. Shaw i colaboratorii, au utilizat cu succes metoda la diagnosticul unor artrite pe baza spectroscopiei NIR a lichidului sinovial. De asemenea, au fost raportate i diagnosticate apariia unor diferite forme de cancer la plmni, colon i sni. Acest lucru este posibil deoarece, prin nregistrarea spectrelor IR sau NIR pot fi puse n eviden variaii foarte mici, datorate apariiei unor boli.
139

Capitolul 4

Aceste variaii, imperceptibile la o simpl inspecie vizual pot fi puse n eviden prin folosirea unor metode de analiz discriminant. La baza acestor metode st n general definirea unor clase de spectre, fiecare clas fiind obinut de la pacieni cu aceeai afeciune. Exist i o clas normal, ce conine spectre ale unor probe ce provin de la pacieni sntoi. O dat ce aceste clase au fost definite, prin achiziionarea unui nou spectru se poate stabili apartenena noului pacient la una din clasele existente. Astfel, Petrich W. i colaboratorii, folosind tehnica FTIR - MC combinat cu aplicarea unor soft-uri de analiz diferenial prin clusteri, reuete depistarea unor infecii pe baza analizei spectroscopice a unor componente din snge (globule roii, albe i plasm). Spectre FTIR - MC ale acestor trei componente sunt prezente n Figura 4-15 n cazul unor pacieni sntoi. n Figura 4-16 sunt prezente spectrele pentru aceleai componente n cazul unor pacieni ce au apendicit acuta. Aa cum se observ, modificrile din spectru intervin, n special, n vibraiile corespunztoare gruprilor fosfat, ce intr n componena globulelor albe ce conin acizi nucleici. De aceea, aceast component din snge poate fi folosit la depistarea unor eventuale infecii. Analiza FTIR - MC poate fi folosit i la obinerea spectrelor unor esuturi sau celule animale, vegetale sau umane. n felul acesta exist posibilitatea diferenierii ntre diferite specii de microbi sau bacterii. De asemenea, pot fi analizate din punct de vedere chimic i procesele de interacie medicament - receptori, sau pot fi puse n eviden fazele evoluiei unei boli.

140

Spectrometrie IR

Figura 4-19: Spectre IR, obinute cu un microscop FTIR [11], ale unor componente din snge: globule albe (a), globule roii (b) plasma(c), in cazul unor pacieni sanatosi

141

Capitolul 4

Figura 4-20: Spectre IR, obinute cu un microscop FTIR ale unor componente din snge: globule albe (a), roii (b) si plasma (c) n cazul unor pacieni sntoi i a unora ce au apendicit acut. Regiunea expandat este caracteristic vibraiilor simetrice de ntindere ale gruprilor fosfat, care se modifica n urma apariiei bolii.

4.5.6 Aplicaii ale spectroscopiei NIR n industria farmaceutic

Sunt binecunoscute aplicaiile metodelor spectrofotometrice IR, la analiza calitativa i cantitativa a materiilor prime utilizate n industria farmaceutica. Daca n perioada de nceput aceste metode erau folosite n principal la identificarea unor compui, in ultimul timp, prin dezvoltarea algoritmilor chemometrici, aceste metode se folosesc tot mai frecvent si in analiza cantitativa a amestecurilor. Referitor la analiza spectroscopica NIR, deoarece exista puine date raportate in lucrrile de specialitate ale autorilor din tara noastr, n continuare vom prezenta cteva aplicaii ale utilizrii ei, in domeniul farmaceutic. Primele aplicaii ale spectroscopiei NIR au nceput acum 30 de ani n domenii precum agricultura i industria alimentar unde aceast metod a fost iniial folosit
142

Spectrometrie IR

n analize calitative. Acceptarea ei ca metod de analiz n industria farmaceutic a avut loc n ultimii ani, atunci cnd i n acest domeniu s-a pus problema eliminrii unor metode de analiza consumatoare de timp i resurse financiare. Domeniul cel mai des utilizat este si in acest caz, acela al identificrii substanelor utilizate la realizarea medicamentelor. Pn la diversificarea acestor metode, cele mai frecvente analize erau teste de analize chimice, microscopice sau instrumentale (cromatografia n strat subire, spectroscopie IR). Spectroscopia NIR introduce insa avantajul posibilitii unor investigaii n timpul desfurrii proceselor tehnologice de fabricaie. Astfel, spectrul obinut este comparat cu o serie de spectre referin iar, prin folosirea unor algoritmi chemometrici, se realizeaz identificarea substanei analizate. Acelai procedeu poate fi folosit i la identificarea unor sau identificare unor comprimate. De asemenea, prin dezvoltarea i implementarea unor metode de analiz multivariat, devine posibil i analiza cantitativ a amestecurilor. Problema era necesar a fi soluionat deoarece n acest domeniu au loc suprapuneri de benzi de vibraie. Tot prin aceeai tehnic pot fi identificate diverse forme cristaline ale substanelor bioactive. Dezvoltarea unei astfel de metode era utila deoarece, fiecare astfel de form se caracterizeaz printr-un anumit grad de stabilitate mecanic, termic sau printr-o anumit biodisponibilitate. Menionm c exist i alte metode de identificare, cum ar fi, de exemplu RMN, difracia de raze X, DSC (Differenial Scanning Calorimetry) care necesita insa existenta unei aparaturi mult mai costisitoare. De asemenea, menionam ca exista si unele metode specifice acestui domeniu spectral, cum ar fi de exemplu folosirea unor tehnici de spectroscopie NIR prin reflexie, la determinarea dimensiunii particulelor unor substane. O alt aplicaie este folosirea acestor tehnici, pentru a monitoriza gradul de
143

Capitolul 4

uniformitate al amestecurilor de substane active i excipieni, folosite la formularea produselor farmaceutice solide. Metodele clasice de monitorizare erau de tip invaziv, ele constnd n colectarea unor cantiti de substane din diferite puncte ale omogenizatoarelor. Acestea erau ulterior analizate prin metode HPLC i spectrometrie UV, iar gradul de uniformitate se stabilete n urma realizrii unor analize cantitative. Aceste metode convenionale sunt ns susceptibile la apariia unor erori ce intervin prin procesul de colectare al probelor din omogenizatoare. n aceste condiii, simultan cu mbuntirea procedurilor de colectare s-a cutat i dezvoltarea unor tehnici neinvazive.

Figura 4-21: Montaj experimental folosit la analiza vizuala si spectroscopica, a monitorizrii gradului de uniformitate al amestecurilor substane active-excipieni: C (camera video), L (lampa IR), FOP (fibra optica), S (spectrometru NIR), F (fereastra), O (omogenizator).

Dintre acestea, spectroscopia NIR ndeplinete aceste condiii i, n plus, este o metod rapid i ieftin. Astfel, prin montarea pe un omogenizator a unor ferestre transparente n NIR safir, Hailey i colaboratorii reuetc s aplice aceast tehnic la controlul gradului de uniformitate al unui amestec acid salicilic - lactoz. Oprind omogenizatorul la diferite momente de timp, cu ajutorul unui spectrometru NIR i a unui dispozitiv de fibre optice, Figura 4-21, sunt achiziionate prin reflexie, spectrele ce corespund amestecurilor existente, n vecintatea ferestrelor de safir.

144

Spectrometrie IR

Prin compararea intensitii benzilor de absorbie ale acestor spectre se poate astfel stabili momentul la care se va opri procesul de omogenizare. Un alt domeniu de aplicaie este analiza microorganismelor ce pot apare n unele lichide farmaceutice. Astfel, multe din soluiile injectabile conin substane active( de exemplu proteine ) care se descompun la temperaturile nalte, ce rezult n urma unor procese de sterilizare termic. n acest caz, n scopul eliminrii unor eventuale microorganisme, substanele active i excipienii trec, naintea procesului de condiionare, printr-un sistem de filtre. De aceea, pentru aceste produse meninerea stabilitii i asigurarea unui anumit grad de sterilitate reprezint condiii ce trebuie riguros controlate. Cea mai simpl metod pentru a testa sterilitatea const n incubaia produsului injectabil pe o perioad de timp, suficient pentru ca microorganismele existente s se dezvolte i astfel s fie analizate printr-o simpl inspecie vizual. Principalul inconvenient al metodei este ns timpul relativ mare necesar pentru ca probele s fie analizate vizual. n acelai timp, exist i metode prin care soluiile sunt ndeprtate din recipieni i supuse unor analize microbiologice care, de foarte multe ori, pot fi imprecise, laborioase i consumatoare de timp. De aceea a fost necesar gsirea unei metode analitice care s permit detecia unor cantiti mici de microorganisme, fr a fi necesar existena unei perioade mari de incubaie. Astfel, J.Galante i M. Brinkley propun, n 1990, utilizarea spectroscopiei NIR prin mprtiere, pentru identificarea i dozarea microorganismeor din fluidele farmaceutice. Avantajul incontestabil al acestei tehnici const n posibilitatea explorrii neinvazive a fiecrui produs farmaceutic. n acelai timp, energia relativ mic a fotonilor din acest domeniu (~ 1eV) nu poate dezintegra proteinele cu aciune farmaceutic, ce se pot gsi n soluiile analizate. Astfel, prin folosirea unui sistem de fibre optice, radiaia electromagnetic
145

Capitolul 4

monocromatic aflat n domeniul 1100 - 1360nm este direcionat spre prob. Eventualele microorganisme din prob vor mprtia aceast radiaie care, prin intermediul unui sistem optic adecvat (sfer integratoare) va fi detectat i analizat. Folosind metode de analiz chemometrica, metoda propus a fost capabil s fac distincie ntre diferite clase de microorganisme i s determine concentraia lor. Pentru aceasta este necesar realizarea unui set de spectre etalon pentru fiecare tip de microorganism ce ar putea exista n aceste soluii injectabile. Acestea se pot obine prin cultivarea unor microorganisme precum Candida albicaus, Aspergillus niger i Pseudomonas aeruginosa.

146

5. Obinerea imaginii prin rezonan magnetic

5.1 Introducere

Rezonana magnetic nuclear (RMN) a fost prevzut teoretic nc din 1936 de ctre C. Garter i realizata practic n 1946 de F. Bloch i independent de E. M. Purcel, este utilizat prima oar n chimie, la investigarea structurii compuilor organici. Aparatele care realizau acest lucru se numesc spectrometre RMN. Prin dezvoltarea unor tehnici care sa permit localizarea unor zone de interes, aceste aparate se utilizeaz cu succes i n studiile clinice. Bazele utilizrii fenomenului RMN n imagistica medicala, sunt puse n 1972, cnd Lauterbur, independent de Mausfield, obin prin aceasta metod primele imagini n doua dimensiuni. ntlnita n literatura de specialitate sub denumirea MRI (Magnetic Resonance Imaging), metoda este foarte complex, aplicarea i folosirea eficienta a ei necesitnd folosirea unor cunotine din magnetism, cmp electromagnetic i matematic. Principiul metodei: pacientul este introdus intr-un cmp magnetic puternic, peste care se suprapune un cmp electromagnetic de radio-frecventa (RF). Cele dou cmpuri sunt create cu ajutorul unui magnet i respectiv a unor antene poziionate n vecintatea esuturilor investigate. La o anumita frecvena a cmpului radio, moleculele de apa din esuturile investigate, absorb energie electromagnetica. Dup un timp aceasta energie este eliberata sub forma unor unde electromagnetice, ce sunt recepionate, analizate i prin folosirea unui computer transformate n imagine. Pentru o mai buna ntelegere a metodei, vom face n prima parte o descriere a principalelor fenomene implicate n MRI.
5.1.1 Fenomenele magnetice

Au fost puse n evidenta nc din antichitate prin descoperirea unor minerale, numite magnetite (oxid de fier sub forma de cristale) care au proprietatea de a atrage obiecte mici de fier, ce sunt aduse n apropierea lor. nseamn ca magnetitul

147

Capitolul 5

nzestreaz spaiul din jurul sau cu anumite proprietari i se spune ca acesta creeaz un cmp magnetic. De asemenea, s-a observat ca acest cmp este mai puternic n apropierea unor zone de pe aceste corpuri, numite poli magnetici. Folosind substane care conin fier, cobalt sau nichel s-au construit magnei permaneni. Astfel, un magnet de dimensiuni mici, care se poate roti n jurul unei axe verticale, se numete ac magnetic. Daca n vecintatea unui magnet este adusa pilitura de fier, se constata ca ea se distribuie de-a lungul unor linii curbe nchise, care s-au numit linii de cmp magnetic. Aducnd n diverse puncte din apropierea unui magnet permanent un ac magnetic, se observa ca el se orienteaz dup direcia tangentei la aceste linii. Aceste observaii experimentale au permis descrierea cmpului magnetic printr-o mrime vectoriala (caracterizata prin direcie, sens i valoare sau modul), numit inducie magnetic B. Unitatea de msur adoptata n Sistemul Internaional, pentru aceasta mrime, a fost tesla (T). n general, valoarea induciei magnetice n diverse puncte din vecintatea unui magnet este diferita, caz n care spunem ca avem un cmp magnetic neuniform. Exista diverse geometrii ale magneilor, pentru care ntr-o anumita regiune din spaiu, cmpul magnetic poate fi considerat, ntr-o prima aproximaie, ca fiind constant, adic uniform. O noiune des utilizata n rezonanta magnetica este aceea de gradient de cmp. Un gradient de cmp apare atunci cnd inducia magnetica i schimb valoarea de-a lungul unei direcii din spaiu. Gradienii utilizai n RMN sunt liniari, ei fiind orientai dup cele trei direcii (OX, OY, OZ) i se noteaz cu Gx, Gy respectiv Gz. Este important a se face distincia ntre direcia cmpului magnetic (care n cazul RMN se pstreaz constanta, fiind paralela cu axa OZ a sistemului de referina) i direcia acestor gradieni. Astfel, existena unui gradient de cmp Gx, nu nseamn ca are loc o modificare a direciei cmpului magnetic extern. Inducia este orientata tot
148

Capitolul 5

de-a lungul axei OZ, modificndu-se doar valoarea ei n puncte de pe axa OX. Daca modificarea induciei de-a lungul axe OX este liniara, spunem ca avem un gradient liniar. Cmpul magnetic este caracterizat de liniile de cmp (reprezentate cu punct) i vectorul inducie magnetic, B. Prin fiecare punct, trece o singura linie de cmp. Sensul unei linii este indicat de polul nord al acului magnetic. Pentru magnet, cmpul magnetic este neuniform, fiind mult mai intens n apropierea polilor magnetici (liniile sunt mai dese). n cazul unui cmp uniform, liniile de cmp magnetic i vectorii inducie sunt echidistante i paralele. Valoarea gradientului este data de modificare induciei pe unitatea de lungime. Astfel, existenta unui gradient Gx=10 mT/m sugereaz ca de-a lungul axei OX inducia magnetic crete cu 10 mT, pe o distanta de 1 m. n cazul n care valoarea ar fi negativ, inducia ar scdea cu aceeai cantitate. Chiar dac cea mai simpl metod de obinere a cmpurilor magnetice este utilizarea magneilor permaneni, ei nu se folosesc n tehnicile RMN. Aceasta deoarece, pe de o parte, induciile obinute n acest caz (mai mici de 0.2T) sunt insuficiente pentru observarea fenomenului RMN i, pe de alta parte, datorit modificrii intensitii cmpului, cu temperatura mediului exterior. n aceste condiii se utilizeaz diferite configuraii de bobine, parcurse de un curent electric (fizicianul H. C. Oersted a observat pentru prima data n 1820 ca un conductor parcurs de curent electric genereaz un cmp magnetic). Modificnd intensitatea curentului prin bobine, se pot obine induciile cerute de condiia de rezonanta magnetic nuclear. Din pcate, valorile mari ale curentului, determin inevitabil o cretere a temperaturii, ce duce la instabiliti ale cmpurilor magnetice. De aceea n ultimul timp se utilizeaz tot mai des magneii supraconductori. Bobinele acestor magnei sunt realizate din materiale supraconductoare care au proprietatea ca, n apropierea temperaturii de 0 K, i reduc brusc rezistenta electrica. Se obin, n aceste condiii, valori ale induciei magnetice superioare celor obinute
149

Capitolul 5

prin alte metode i mult mai stabile n timp. Proprietile magnetice ale substanelor se explic n fizic prin considerarea c, la nivel atomic i molecular, exista cureni electrici ce determina apariia cmpurilor magnetice. Aceti cureni se obin prin deplasarea particulelor constituente ale atomilor (electroni, protoni). Pe lng micarea pe traiectorie, numit i orbit (cum este cazul electronilor) aceste particule au i o micare de rotaie n jurul axei lor. Aceasta se mai numete i micare de spin, i care determina apariia unui cmp magnetic. n aceste condiii, protonul n micarea de spin poate fi considerat ca un magnet elementar, a crui ax coincide cu axa de rotaie. Pentru a caracteriza din punct de vedere magnetic aceasta micare, se asociaz protonului o mrime vectorial numita
moment magnetic de spin, notat de obicei, cu .

Chiar daca neutronul, se manifesta ca fiind neutru din punct de vedere electric, poseda totui un moment magnetic de spin diferit de zero. n nucleele mai grele dect ale atomului de hidrogen, momentele magnetice de spin ale protonilor i neutronilor se combina intr-un mod complicat formnd momentul magnetic de spin nuclear. O alta noiune necesara nelegerii procesului MRI, este cmpul electromagnetic. Pus n evidenta experimental, prima oara de ctre Heinrich Hertz, reprezint ansamblul cmpurilor electric i magnetic, care i modific valorile i se genereaz reciproc. Dac printr-un conductor trece un curent electric variabil n timp, n jurul lui apar cmpuri electrice i magnetice, de asemenea variabile n timp. Cmpul electromagnetic astfel produs, pierde legtura cu conductorul ce l-a creat (numit antena) i se propaga n spaiu cu o viteza foarte mare (viteza de propagare a undelor electromagnetice n vid este egala cu viteza luminii(3 108 m/s). Spunem n acest caz c avem o und electromagnetic. O caracteristica a undelor electromagnetice este frecvena de oscilaie a cmpului electromagnetic notata, de obicei cu . Ea se msoar n hertzi (Hz) i reprezint numrul de oscilaii ale cmpului electric sau magnetic efectuate ntr-o
150

Capitolul 5

secund. Deoarece toate undele electromagnetice pot fi considerate ca fiind constituite din cuante de energie, constituind un flux de particule (fotoni), ele se mai numesc i radiaii electromagnetice. Energia acestor particule este E = h unde h este o constanta universala (constanta lui Planck). Cea mai uzual mprire a undelor electromagnetice se face dup frecven n: unde radio, microunde, radiaii X, radiaia ultraviolet, radiaia infraroie. n cazul metodelor RMI se utilizeaz unde radio (RF) cu frecventa cuprinsa n intervalul 110MHz. Dac o astfel de unda, are o durata de existenta finita se mai numete i puls electromagnetic. Pulsurile RF, utilizate n MRI, au n componenta lor oscilaii de frecvente diferite. Diferena dintre frecvena maxim i cea minima formeaz banda de frecvene WB (wide band). Dac, pentru producerea cmpului electromagnetic se utilizeaz conductoare parcurse de cureni electrici variabili n timp, detecia lor are la baza inducia electromagnetic. Fenomenul este pus n eviden pentru prima oara de fizicianul M. Faraday i consta n apariia unei tensiuni induse, ntr-un circuit electric, aflat n general ntr-un cmp magnetic variabil n timp. n cazul aparatelor RMI, generarea i detecia cmpurilor RF se realizeaz de obicei cu acelai sistem de bobine ce nconjoar esuturile analizate. Tensiunea indus n aceste bobine are alura unei sinusoide amortizate n timp i este caracterizata de trei parametri:

frecventa de oscilaie - aceeai cu cea a cmpului electromagnetic care a generat-o amplitudinea - valoarea maxima a tensiunii. Aceast mrime descrete n timp. panta descreterii amplitudinii, T*. Punctele de maxim ale tensiunii induse, se afla

situate pe o curba descresctoare de tip exponenial, ce poate fi modelata printr-o funcie de tipul e-t/T* (e=2.71). Astfel, cu cat valoarea parametrului T* este mai mare, cu att descreterea amplitudinii tensiunii este mai lent.
151

Capitolul 5

Atunci cnd bobinele de detecie (recepie), sunt introduse intr-o suprapunere de cmpuri electromagnetice de frecvente diferite, tensiunea indusa are o forma complex, fiind formata dint-o suprapunere de unde sinusoidale de amplitudini i frecvente, de asemenea diferite. n acest caz se obinuiete ca reprezentarea semnalului funcie de timp, sa fie nlocuita cu reprezentarea amplitudinii semnalului n funcie de frecventele componente. Aceasta trecere ntre cele doua reprezentri diferite se realizeaz printr-o operaie matematic special numit transformata Fourier. Orice semnal complex, f(t), poate fi descompus ntr-o suma de semnale sinusoidale de frecvente i amplitudini diferite. Extragerea acestor amplitudini i frecvente se realizeaz printr-o procedura matematic numit transformat Fourier prin care se trece de la reprezentarea unui semnal n funcie de timp f(t), la reprezentarea n funcie de frecventele sinusoidale ce o compun f(). n cazul metodei MRI procedura este realizata de un calculator performant, fiind esenial n obinerea imaginii. Fiecare punct al esutului investigat determina un semnal ce are o anumita amplitudine, frecventa i faza. Acestea sunt extrase din semnalele captate de bobine, cu ajutorul metodei FT. Informaia astfel obinut este folosita la construirea imaginii (faza i frecvena sunt folosite pentru localizarea punctului n planul seciunii investigate, iar amplitudinea pentru stabilirea contrastului)

5.1.2 Spinul nuclear. Rezonana magnetic nuclear (RMN)

5.1.3 Numr cuantic magnetic de spin

Dac am considera practic electronul ca o sfer care se rotete n jurul axei proprii, va avea loc generarea unui cmp magnetic a crui orientare va depinde de sensul de rotaie.
152

Capitolul 5

De aceea, micarea de spin a electronului se caracterizeaz printr-un numr cuantic de spin (s = 1/2), n timp ce cmpul magnetic generat se caracterizeaz printr-un numr cuantic magnetic de spin ms = 1/2 (pentru cele dou orientri posibile). Astfel, proiecia momentului magnetic de spin, dup o direcie oz, este:
sz =

eh = B 2m0

(5.1)

Asemntor electronului, protonul se caracterizeaz i el printr-o micare de spin care va genera un moment magnetic de spin. Deoarece masa protonului este mult mai mare dect cea a electronului, magnetonul nuclear,
N =

eh , 2m p

(5.2)

este cu mult mai mic (de aproximativ 1836 de ori ct este raportul maselor celor doua particule). n acelai timp, dei neutronul nu are sarcin electric, el posed totui un moment magnetic! Acest paradox a fost explicat considernd c, pentru un scurt timp, neutronul este disociat ntr-un proton i o alt particul negativ (mezon), al crui moment magnetic este superior protonului. n aceste condiii, fr a detalia, momentul mecanic de spin al nucleului este cuantificat, exprimndu-se prin relaia:
PI =

J ( J + 1)

(5.3)

n timp ce momentul magnetic se calculeaz cu:

I = PI = gn I ( I + 1) N

(5.4)

unde I este numrul cuantic de spin nuclear, - raportul giromagnetic i gn - factorul giromagnetic nuclear. Dei modul de mperechere a spinilor protonilor i neutronilor este destul de complicat, mrimea numrului I poate fi obinuta pe baza unor reguli semiempirice: Astfel, dac nucleul conine un numr par de protoni i neutroni, spinurile acestora se compenseaz, numrul cuantic de spin fiind I = 0. De aceea, aceste nuclee nu au
153

Capitolul 5

moment magnetic i, conform celor discutate n paragraful dedicat fenomenelor magnetice, ele nu interacioneaz cu cmpul magnetic; Daca numrul de protoni sau de neutroni este impar, atunci valoarea maxim a lui este un numr impar de 1/2; Atunci cnd att numrul de protoni ct i cel de neutroni sunt impare, valoarea lui este un numr par de 1/2, adic valori de forma 1, 2, 3, 4. n prezena unui cmp magnetic extern, de intensitate H, momentele magnetice nucleare tind s se orienteze paralel cu cmpul. z r H

r I

Figura 5-1: Precesia Larmor rotaia momentului magnetic nuclear n jurul cmpului magnetic extern

De fapt, datorit agitaiei termice, aceast aliniere nu este perfect, astfel nct ele efectueaz o micare de rotaie n jurul cmpului, numit i precesie Larmor (vezi figura (5-1)). innd cont de expresia energiei poteniale de interaciune, a momentului magnetic cu cmpul, se obine:
E = -0 I H = -0 I H cos = -0 Iz H

(5.5)

Pe de alt parte, din considerente cuantice, proiecia momentului magnetic pe axa cmpului ia valori discrete:
Iz = gn mI N

(5.6)

154

Capitolul 5

unde mI este numrul cuantic magnetic nuclear i poate lua 2I + 1 valori cuprinse n intervalul (-I, I) Considernd cazul atomului de hidrogen pentru care I = 1/2, vor exista numai dou orientri posibile ale momentului magnetic, corespunztoare celor dou numere cuantice, mI = -1/2 i mI = 1/2. Energiile ce corespund celor dou orientri vor fi:
E1 = - 0 N H gn (mI = ) E2 = 0 N H gn (mI = -)

(5.7) (5.8)

innd cont de tendina de orientare paralel n cmp, rezult c nivelul de energie minim (mI = ) corespunde orientrii n direcia lui H (vezi figura (5-2.a)). z r H0 mI =
r I

z r H0

- gnn

r I

gnn

mI = -

(a)
Figura 5-2:

(b)

De aceea, se poate considera c exist dou nivele de energie, ntre care exist o diferen:
E = E2 - E1

(5.9)

E2 E E1
Figura 5-3: Nivele de energie datorate interaciunii cu cmpul magnetic extern

155

Capitolul 5

n starea fundamental, protonii se vor gsi n starea de energie joas, E1, trecerea pe nivelul superior fiind posibil prin absorbia unei cantiti de energie egal cu diferena E. Aceast energie ar putea fi absorbit de la un cmp electromagnetic de frecvena , atunci cnd este ndeplinit aa numita condiie de rezonana magnetic nuclear, RMN:
h =E= 0 N gn H

(5.10)

Se obine astfel valoarea frecvenei de rezonan,

= 0 N gn H / h,

(5.11)

5.1.3.1 Spectrul RMN

Reprezentnd grafic intensitatea energiei absorbite n funcie de intensitatea cmpului magnetic, atunci cnd se ndeplinete condiia RMN, nucleele absorb energie de la cmpul electromagnetic, iar graficul astfel obinut va conine o band de absorbie. Acest grafic se numete spectru RMN, iar n cazul nucleelor de hidrogen arat ca n figura (5-3):
Iab

H0

Figura 5-4: Spectrul RMN al protonului

Acest fenomen i gsete aplicabilitatea n elucidarea structurii compuilor organici, deoarece cele mai multe combinaii organice au n structura lor atomi de hidrogen. Dei condiia de rezonan s-ar putea obine i prin modificarea frecvenei cmpului electromagnetic, din punct de vedere practic este mai comod s se modifice treptat intensitatea cmpului magnetic. Trebuie precizat c intensitatea cmpului magnetic n care se gsete nucleul nu este identic cu cea aplicat din exterior, Hext.
156

Capitolul 5

Se poate considera c valoarea intensitii locale a cmpului verific relaia:

H = Hext + He

(5.12)

unde He este cmpul magnetic generat de nveliul electronic al nucleului. Acesta va depinde i de modul n care protonul este legat n molecul. Cu alte cuvinte, intensitatea la care se produce rezonana poart informaii despre structura chimic a compusului analizat. De aceea, spectrul RMN este deosebit de util n analiza calitativ. Referitor la intensitatea cmpului magnetic, He, precizm c ea este datorat efectului diamagnetic exercitat de electronii din jurul nucleului. De aceea, cmpul magnetic extern este parial ecranat de prezena acestora, iar gradul de ecranare depinde de felul cum nucleul (protonul) este legat n molecula. Frecvent utilizat n explicarea spectrului RMN este cazul alcoolului etilic. n acest compus, atomul de hidrogen legat cu cel de oxigen este cel mai puin ecranat. De aceea, primul maxim(H1) ce apare la valori mici ale cmpului magnetic corespunde gruprii OH. Din punct de vedere al gradului de ecranare urmeaz protonii gruprii CH2 i CH3.

Iab

H1

H2

H3

Figura 5-5: Spectrul RMN al alcoolului etilic

Pe de alt parte, aa cum este firesc, intensitatea benzilor este direct proporional cu numrul atomilor de hidrogen. Folosirea poziiei maximelor la identificarea unui compus nu este recomandat, datorit variaiilor de poziie ce pot s apar la modificarea unor parametri precum cmpul magnetic sau frecvena.

157

Capitolul 5

Deoarece meninerea acestor parametri la valori constante nu poate fi realizat, se prefer msurarea distanelor dintre aceste maxime i unul ales drept referin (sau standard). n alegerea standardului trebuie inut cont ca spectrul su s aib un singur maxim, ct mai ngust, ct mai intens i de preferin s fie poziionat la una din extremitile axei ox a spectrului. Frecvent utilizat este tetrametilsilanul (abreviat TMS, formula (CH3)4Si) n care exist un maxim intens, datorat prezentei celor 12 atomi de hidrogen. Fiind puternic ecranai, maximul se obine la valori mari ale intensitii cmpului magnetic extern. De menionat c standardul este fie introdus n aparat, anterior analizei probei (standard extern), fie este dizolvat n prob (standard intern). n aceste condiii, poziiile diferitelor grupri se exprim prin deplasarea chimica , definit astfel:
=

H (standard ) H (grupare) 106 (ppm) H (standard )

(5.13)

unde H(standard) este valoarea intensitii cmpului corespunztor standardului i H(grupare) este valoarea intensitii cmpului corespunztoare gruprii analizate. Datorit diferenelor foarte mici ntre intensitile cmpului magnetic, se prefer exprimarea n pri per milion - ppm. Fr a detalia, aceste aspecte urmnd s fie analizate n cadrul disciplinei de chimie analitic, precizm c valorile acestor deplasri sunt cunoscute, ele fiind folosite la identificarea gruprilor moleculei analizate. n ceea ce privete dispozitivul experimental, componenta principala este magnetul, n interiorul cruia se introduce proba care trebuie s fie lichid. Aceasta deoarece, n cazul solidelor benzile de absorbie sunt foarte lungi, metoda nefiind potrivit analizei calitative.

158

Capitolul 5

5.2 Posibiliti de utilizare practic a RMN

Rezonana magnetic nuclear are la baza doua fenomene: rezonanta (transferul de energie intre doua sisteme care oscileaz cu aceeai frecventa) i magnetismul nuclear. Cele doua sisteme, ntre care are loc transferul de energie, sunt n acest caz cmpul electromagnetic i specia nuclear, aflata ntr-un cmp magnetic extern. n legtur cu specia nuclear, prezint interes pentru imagistica nuclear atomul de hidrogen. De aceea, adesea aceasta rezonanta se mai numete i rezonanta protonului. Corpul uman conine aproximativ 70% ap. Fiecare molecul are asociai 2 atomi de hidrogen covalent legai de un atom de oxigen. Exist n organismul adultului, aproximativ 5 1027 nuclee de hidrogen, care n absena cmpului magnetic extern, au o orientare haotica, a momentele magnetice individuale. n prezena unui cmp magnetic extern de inducie B, aceste momente tind s devin orientate n direcia cmpului sau n sens contrar acestuia, adic paralel respectiv antiparalel. Cele dou orientri sunt rezultatul existentei a dou stri energetice, asociate interaciei dintre momentul magnetic i cmpul magnetic. Alinierea paralel corespunde unei stri energetice mai sczute, n timp ce alinierea antiparalel corespunde unei stri energetice mai ridicate. Daca sistemul nu are energie termic (adic se afla la zero grade Kelvin) toate momentele magnetice ar avea o configuraie paralel. La temperatura camerei ns, populaia protonic, este distribuit ntre cele dou stri energetice dup o lege, frecvent ntlnit n fizic, legea Boltzmann. n termeni practici, aceasta nseamn ca populaiile din strile paralel i antiparalel sunt aproape egale. Din fiecare milion de nuclee sau momente magnetice plasate ntr-un cmp magnetic de 1.5 T, la 25 grade Celsius, n medie doar 5 vor fi preferenial paralel aliniate cu cmpul. Dei spunem ca sunt aliniate cu cmpul magnetic extern, momentele magnetice
159

Capitolul 5

nucleare nu pot ns rmne statice, ci mai degrab se rotesc, n jurul direciei cmpului magnetic, analog unor titireze mecanice. Aceast micare se numete precesie. Frecventa de precesie, numita i frecventa Larmor (fL fL =B unde depinde de mrimea induciei cmpului magnetic extern i este data de ecuaia Larmor: este factorul giromagnetic, care pentru hidrogen are valoare /2 = 42. 57x106 Mhz/T. Astfel, la o inducie de 1.5 T spinul protonic efectueaz o micare de precesie n jurul direciei cmpului magnetic, cu o frecventa de 63.86 Mhz. La nivel macroscopic, ansamblul de momente magnetice nucleare formeaz magnetizarea (M) probei. Ea reprezint de fapt suma tuturor momentelor magnetice din 1m3 de substan. Aceast mrime este direct proporional i cu concentraia protonic. n cazul celor doua orientri posibile ale momentului magnetic, amplitudinea magnetizrii, este dat de excesul momentelor magnetice aliniate paralel sau antiparalel cu cmpul aplicat. Astfel, dac numrul momentelor aliniate paralel este mai mare dect cele orientate antiparalel atunci magnetizarea este orientat n direcia i sensul cmpului. Deoarece magnetizarea i inducia sunt mrimi vectoriale, este necesar a introduce un sistem de coordonate. Prin convenie, axele carteziene sunt definite astfel nct cmpul magnetic aplicat definete direcia pozitiva Z. Magnetizarea M poate fi descrisa iniial, ca avnd componentele carteziene Mx=0, My=0, Mz=M0. n continuare vom analiza, efectul datorat interaciunii unui cmp electromagnetic RF cu protonii de hidrogen, aflai la rndul lor n cmpul de inducie B. Acest cmp RF provine de la o antena (bobina) aflata n vecintatea esutului analizat i care este parcursa de un curent variabil n timp. Astfel, dac frecventa cmpului RF este egala cu frecventa de precesie Larmor a protonilor - adic este ndeplinit condiia de rezonan magnetic nuclear - ei vor
160

Capitolul 5

absorbi o cantitate de energie E = h trece n orientarea antiparalel.

( frecvena cmpului electromagnetic RF).

Practic, protonii cu orientare paralel i vor modifica poziia, avnd tendina de a Pentru un puls cu durata magnetizarea este deviata de la direcia induciei cu un unghi dat de ecuaia: (radiani)= B Pulsurile RF sunt de obicei descrise n termenii unghiurilor lor de deviere a magnetizrii. De exemplu, un puls RF 900 produce o deviere a vectorului magnetizare cu 900 fa de direcia iniial. Astfel, dac magnetizarea era orientata n sensul axei OZ, n urma acestui puls ea se va gsi n planul transversal, XY; n timp ce un puls RF1800 determin orientarea magnetizrii n sensul negativ al axei OZ. n cazul pulsului RF 90, vectorul magnetizare nu va rmne fix, ci va efectua o micare de rotaie n acest plan, cu o frecven egala cu cea Larmor. Rotaia vectorului M este analog precesiei momentelor magnetice individuale descrise mai devreme. Cum acest vector se rotete n plan transversal, cmpul magnetic asociat se va roti i el n acelai plan. n aceste condiii, ntr-o bobin a crei ax este paralela cu planul transversal, se va induce o tensiune electric. Amplitudinea curentului indus va fi proporional cu amplitudinea componentei transversale a vectorului magnetizare, care o vom nota cu Mxy. Practic, aceeai bobin, folosita pentru a transmite pulsurile excitatoare RF, poate fi folosita i ca antena, pentru a detecta curentul indus de componenta transversala a magnetizrii. Pulsul de tensiune, indus n bobina imediat dup aplicarea pulsului RF 900, este ntlnit n literatura de specialitate sub numele de semnal FID (Free Induction Decay).
5.2.1 Fenomene de relaxare

Exista dou procese distincte care determin micorarea n timp a semnalului

161

Capitolul 5

FID. n primul rnd, prin aplicarea pulsului RF 90, echilibrul alinierii iniiale a momentelor magnetice (paralele cu inducia) este distrus. De aceea, dup anularea pulsului RF, momentele magnetice vor tinde s se realinieze cu cmpul magnetic principal restabilind astfel acest echilibru. n aceste condiii, componenta transversala a magnetizrii se va micora, ducnd la descreterea n timp a amplitudinii semnalului FID. Acest proces, numit relaxare longitudinala, necesit eliberarea surplusului energiei acumulate de la cmpul RF, prin interaciuni ale spinilor cu atomii sau moleculele vecine - interaciuni spin reea. n urma relaxrii longitudinale, magnetizarea probei se va orienta din nou n sensul induciei magnetice. Pe durata acestui proces, componenta longitudinala, Mz, a magnetizrii creste (are loc reconstrucia ei), n timp ce componenta transversal va scdea. Procesul de reconstrucie a componentei longitudinale a magnetizrii Mz (t) poate fi reprezentata printr-o curba exponeniala de tipul: Mz (t) = M0 (1-exp(-t/T1)) - unde T1 se numete timp de relaxare longitudinala, iar M0 este valoarea maxim a magnetizrii. Practic cu cat magnetizarea longitudinal, n momentul aplicrii pulsului de RF 90, este mai mare cu att i amplitudinea semnalului indus va fi de asemenea mai mare. Daca timpul dintre pulsuri ar creste de 5 ori, componenta longitudinala a magnetizaiei ar fi n proporie de 99% reconstruita. Aceasta este explicaia teoretica a legii "5xT1" care este utilizat, de obicei, pentru asigurarea unei refaceri complete a componentei longitudinale a magnetizaiei dintre doua pulsuri excitatoare succesive. Analiznd semnalul FID se constata ca el scade rapid n timp (zeci de milisecunde). Aceasta nseamn c, pe lng procesul de relaxare longitudinal (care dureaz de ordinul secundelor) i care, prin micorarea componentei transversale atenueaz semnalul, mai exist un alt proces de atenuare, mult mai rapid.
162

Capitolul 5

Practic, se iniiaz un proces de defazare al spinilor (adic nu se mai rotesc toi cu aceeai frecven) ce va contribui esenial la micorarea componentei transversale. Se spune n acest caz ca spinii pierd coerena. n aceste condiii componenta transversal, scade exponenial dup o lege de forma: Mxy(t) = Mxy (0) exp(-t/T2*) unde Mxy (0) este componenta magnetizrii transversale la momentul t = 0 (imediat dup anularea pulsului) iar T2* este constant de timp ce reflect viteza cu care are loc pierderea coerenei. Deoarece frecventa de precesie Larmor depinde de cmpul magnetic, nseamn c, la nivel microscopic vor avea loc variaii locale ale induciei. Chiar dac magnetul asigur un cmp uniform, exist totui factori perturbatori, cum ar fi de exemplu prezenta pacienilor, ce determin neuniformiti ale cmpului. Diferitele esuturi ale organismului se magnetizeaz diferit, determinnd astfel variaii locale ale induciei magnetice. Pe lng astfel de variaii de cmp, care sunt spaial dependente, exist fluctuaii haotice ale cmpului magnetic, care sunt asociate interaciei momentelor magnetice ale nucleelor individuale. Este cazul interaciunilor spin - spin. Astfel, fiecare nucleu produce un cmp magnetic suplimentar slab, ce va perturba cmpul magnetic extern. n acest caz, momentul magnetic are o precesie mai rapid sau mai lent (frecvena de precesie depinznd de valoarea induciei) i devine defazat fata de celelalte momente magnetice din sistem. Viteza cu care faza este pierduta prin aceste interacii spin-spin, este guvernat de o scdere exponeniala cu o constanta de timp T2, timp de relaxare spin-spin. Acest timp este caracteristic fiecrui esut i este slab dependent de modificarea cmpului magnetic extern.

163

Capitolul 5

5.3 Principiul formrii imaginii

Imaginea obinut prin RMN se obine din analiza semnalelor electrice produse de cmpurile electromagnetice, emise de protonii esuturilor analizate. Amplitudinea acestor semnale este direct proporional cu magnetizarea transversal ce caracterizeaz punctele de emisie, iar frecventa lor este egala cu frecventa de precesie Larmor. Pentru a putea obine imaginea, ar trebui sa obinem poziia acestor puncte i contrastul lor. Dac cmpul magnetic extern ar fi pstrat uniform, frecventa acestor semnale ar fi egale (frecventa Larmor corespunztoare micrii de spin fiind aceeai). n aceste condiii este practic imposibil obinerea de informaii privind poziia punctelor surs. Aflarea poziiei devine insa posibila prin suprapunerea peste cmpul magnetic uniform, a unor gradieni de cmp, orientai dup anumite direcii. n aceste condiii, frecventele de precesie Larmor ale zonelor analizate, difer de-a lungul direciei gradientului. Aplicnd transformata Fourier asupra semnalului electric obinut n aceste caz, este posibil extragerea frecventelor Larmor iar cunoscnd gradientul se poate astfel determina poziia punctelor. n felul acesta, s-ar obine imaginea punctelor aflate de-a lungul direciei gradientului de cmp. Imaginile obinute prin RMN sunt de doua feluri: bidimensionale (sau 2D) i tridimensionale sau 3D. Unitatea de baz ce caracterizeaz o imagine 2D este pixelul, dimensiunea unei imagini fiind reprezentata de numrul de pixeli Nx i Ny, existeni dup cele doua direcii transversale OX respectiv OY. Astfel, o imagine de 256x256, nseamn c este format dintr-un numr de 64537 pixeli. Cu cat numrul punctelor ce intra n componenta unei imagini este mai mare, cu att spunem ca rezoluia spaiala este mai bun. Atunci cnd aceti pixeli au i o a treia dimensiune se obine unitatea de baza a unei imagini 3D, numita voxel. n ceea ce privete dimensiunile acestor uniti, ele sunt corelate cu dimensiunile cmpului de vedere imagistic i respectiv cu grosimea d a seciunii analizate.
164

Capitolul 5

Astfel volumul unui voxel este:

Volum_voxel= d
Dx Dy , Nx Ny

unde Dx, Dy sunt dimensiunile cmpului de vedere dup cele dou direcii. n literatur aceste termen este ntlnit sub denumirea FOV (field of view) i este cuprins intre 20-40cm. El reprezint de fapt dimensiunile regiunii din esutul investigat ce apare pe ecranul aparatului. Obinerea unei imagini de calitate, necesit att stabilirea unei rezoluii spaiale ridicate (prin creterea numrului de pixeli dup cele doua direcii) cat i obinerea unui raport semnal zgomot, SNR (signal/noise rate) cat mai mare. Msurarea unei mrimi este n orice domeniu influenata de o serie de factori perturbatori, de erori. Totalitatea acestor factori reprezint, zgomotul (noise), care n cazul metodei MRI i face simit prezena printr-o cretere a dimensiunii pixelilor. n literatura de specialitate din aceste domeniu, fenomenul este ntlnit sub numele de creterea granulaiei fiind datorat aciunii a doua cauze principale: i) micarea aleatoare a ionilor moleculari, ce intr n componena corpului uman (o sarcina ncrcat aflat n micare genereaz cmp electromagnetic); ii) rezistenta electrica a bobinelor de detecie. Din pcate zgomotul nu poate fi eliminat complet, astfel nct, se caut soluii pentru ca semnalul util, emis de tranziiile spinilor nucleari, sa fie mult mai mare dect semnalul perturbator, adic cu alte cuvinte sa avem un raport SN cat mai mare. Acest raport are o dependenta multipla fiind direct proporional cu volumul unitii de imagine (voxel) i cu numrul de msurtori.
SNR Volum _ voxel Nx Ny n

unde Nx i Ny sunt - numrul de pixeli dup axa OX respectiv OY - iar n este numrul de excitri. innd cont de relaia ce definete volumul unui voxel, cat i de faptul ca zgomotul este direct proporional cu lrgimea de banda BW a cmpului RF, se obine urmtoarea relaie de dependen:
165

Capitolul 5

SNR

Dx Dy n d Nx Ny BW

n imagistica medical suntem adesea confruntai cu necesitatea de a obine ct mai multe detalii dintr-o imagine. Acest lucru necesit micorarea dimensiunilor cmpului vizual (Dx i Dy) i/sau creterea numrului de pixeli dup cele doua direcii (Nx respectiv Ny). Analiznd relaia de mai sus se constata ca ambele variante duc, din pcate, la o micorare a raportului SN. De aceea, n funcie de scopul urmrit de operator, pentru a nu micora considerabil acest raport, se poate mari numrul de excitaii, n. Din pcate, n acest caz, va creste timpul de achiziie al imaginii, existnd posibilitatea apariiei unor erori datorate micrii pacientului. O soluie ar fi, n acest caz, utilizarea unor tehnici rapide de achiziie a imaginii. O alta problema ce apare frecvent n metodele de imagistica medical este existenta artefactelor. Acestea reprezint structuri ce apar pe imagine. Ele nu sunt datorate structurii anatomice a organelor investigate. n general ele apar prin micarea pacientului sau a existentei unor micri fiziologice (micarea respiratorie, fluxul sanguin, micarea cordului). Dei s-au dezvoltat diverse tehnici, eliminarea lor complet nu este posibil. Esenial este identificarea lor din imaginile RMI, evitnd astfel stabilirea unui diagnostic medical eronat. Exista dou metode principale folosite n achiziionarea unei imagini: metoda reconstruciei din proiecie (proiection reconstruction - PR) i metoda transformatei Fourier bidimensionale (2D FT). Prima dintre ele, folosita n cazul CT, consta n achiziionarea unor proiecii ale obiectului investigat, urmat de refacerea imaginii tridimensionale prin folosirea unor algoritmi numerici speciali. Aceast metod a fost folosita n primele ncercri de obinere a imaginilor prin rezonana magnetic. n general se prefer folosirea metodei transformatei Fourier bidimensional, ce
166

Capitolul 5

prezint o serie de avantaje. Comparativ cu prima metod, 2DFT este mai puin influenata de neomogenitatea cmpului magnetic, de existenta artefactelor de micare, prezentnd un raport SN mai bun. n cazul metodei 2DFT se achiziioneaz imagini plane. Selecia unei seciuni transversale se realizeaz prin aplicarea unui gradient de cmp Gz, orientat de-a lungul axei z. innd cont ca precisa Larmor depinde de valoarea induciei, spinii aflai de-a lungul acestei direcii, vor avea propria frecventa de precesie. Pentru a realiza selecia seciunii A (de grosime z), proba va trebui iradiat cu un puls RF de 90, ce va trebui sa aib un spectru de frecvente cuprins intre f1si f2 (adic sa fie format dintr-o suprapunere de sinusoide cu frecventele cuprinse n acest interval). Aceste valori sunt de fapt frecvente Larmor ce corespund celor doua fete ale seciunii considerate. Gradientul astfel aplicat de-a lungul direciei z, este numit gradient de selectare a seciunii (gradient slice selection). Practic, prin aceast operaie are loc numai rotirea cu 90 a spinilor existeni n seciunea selectata, De aceea semnalele recepionate vor proveni numai din aceasta seciune. n ceea ce privete grosimea z a feliei selectate, ea poate fi calculata cu relaia z = 2
BW , unde BW, este lrgimea de banda a pulsului RF iar Gz este gradientul de Gz

selecie a seciunii. Grosimea feliei selectate este direct proporional cu lrgimea de banda a pulsului RF i invers proporional cu gradientul de cmp. De aceea modificarea acestora duce la creterea sau micorarea ei. Pana n acest moment, spinii existeni n felia selectata, se rotesc cu aceeai frecventa. Deoarece undele emise au aceleai frecvente, n acest caz imaginea nu poate fi obinuta. Pentru a obine totui o imagine, sub forma unei matrici de Nx Ny pixeli, spinii vor fi supui unor gradieni orientai, dup axele Ox i Oy ale planului selecionat.
167

Capitolul 5

Astfel pentru o perioada de timp se aplica un gradient de cmp Gy. Deoarece acesta duce la o modificare a induciei i implicit a frecventei Larmor de-a lungul axei Oy, spinii aflai n cmpuri magnetice mai intense se vor roti mai repede. Se spune n acest caz ca ei au un ctig de faz (adic de unghi de rotaie). La ntreruperea gradientului ei se vor roti din nou cu aceeai frecven, dar pstrnd faza (unghiul) ctigat anterior. Gradientul Gy astfel utilizat, poarta numele de gradient de codare a fazei. n acest moment spinii existeni de-a lungul unei linii ce corespunde matricei de pixeli, au toi aceeai faz. Pentru a putea face o distincie i intre acetia, se aplica un nou gradient, de data aceasta orientat dup axa Ox, Gx. Acest al treilea gradient se pstreaz pe durata achiziionrii semnalului de ecou i are rolul de a coda dup frecvena, spinii situai de-a lungul liniilor. Acest din urma gradient, este ntlnit n literatura de specialitate sub denumirea de gradient de citire sau de codare a frecventei. n aceste condiii fiecare pixel, ce alctuiete imaginea, poate fi caracterizat printr-o frecventa i printr-o faza a micrii de rotaie. Reprezentnd aceste valori (frecvena, faza) ntr-un spaiu bidimensional (plan) se obine ceea ce se numete n literatura spaiul K. Folosind transformata Fourier, informaia existenta n acest spaiu este folosita pentru obinerea unei imagini formata din Nx Ny pixeli. Pentru ca acest lucru sa fie posibil o secvena de lucru se repeta pentru Ny valori distincte ale gradientului de codare a fazei. n aceste condiii timpul necesar obinerii unei imagini devine: T=TRNyn unde n este numrul de excitaii succesive. Deoarece reducerea zgomotului se poate efectua printr-un proces de mediere asupra semnalelor achiziionate este de preferat a se realiza mai multe excitaii. Astfel daca timpul de repetiie este de 1s, rezoluia imaginii de 256x256 puncte i se realizeaz 2 excitaii, timpul de obinere al acestei imagini este: T=22561=512
168

Capitolul 5

secunde. Daca este necesara obinerea mai multor seciuni, timpul total creste considerabil. De aceea pentru micorarea lui se prefera fie alegerea unei rezoluii inferioare sau folosirea unor tehnici de achiziie mult mai rapide. Exista de asemenea posibilitatea realizrii unei achiziii simultane a semnalelor ce provin de la un volum. Imaginea se obine n acest caz printr-o transformata Fourier tridimensionala (3DFT). Pentru a realiza acest lucru pe direcia z se modifica gradientul de Nz ori (Nz reprezint numrul de seciuni achiziionate din volumul investigat), astfel nct timpul de achiziie devine: T=TRNyNzn n acest caz devine necesara folosirea unor tehnici de achiziie, al cror timp de repetiie sa fie de ordinul ms. Avantajul acestei metode const n posibilitatea ca dup expunerea pacientului, sa poat fi obinuta imaginea oricrei seciuni din acest volum. Procedeul este util n analiza unor articulaii sau a coloanei, cnd pentru a stabili diagnosticul este necesara obinerea imaginii unor seciuni cu diverse nclinri.
5.3.1 Secvene de achiziie a imaginii

Una din caracteristicile eseniale ale metodei MRI, comparativ cu alte tehnici imagistice, este posibilitatea asigurrii unui contrast foarte bun chiar i intre esuturile moi. Astfel daca n CT, acest contrast era realizat doar prin diferena ntre densitile electronice (care variaz doar cu cteva procente ntre esuturile moi), n cazul rezonantei magnetice exista trei proprietari (densitate protonica, timp de relaxare longitudinala T1, i timp de interaciune spin-spin T2). Toi acest parametri, trebuie folosii n scopul obinerii unei imagini de calitate. Chiar daca densitile protonice pentru unele esuturi sunt apropiate ca valoare, exist diferene mari ntre timpii de relaxare. Pentru ca aceste diferene sa poat fi observate i pe imaginile achiziionate, n funcie de secvena utilizata, operatorul are

169

Capitolul 5

la dispoziie o serie de parametrii (timpul inter-puls (TR), timpul de excitaie (TE), timpul de inversie (TI) etc) care permit obinerea unui contrast i a unei imagini de calitate. n aceste condiii, alegerea secvenei potrivite i stabilirea corecta a parametrilor ce o caracterizeaz, sunt etape eseniale n stabilirea corecta a diagnosticului medical. De aceea n continuare se va face o scurt prezentare a unor secvene de achiziie de imagini. Aa cum s-a prezentat anterior, folosirea unui puls RF de 90 (ce rotete magnetizarea n planul transversal) determina obinerea pulsului de tensiune FID, a crei amplitudine scade n timp. Principalul obstacol ce mpiedic folosirea FID-ului, n obinerea imaginii, este apariia sa imediat dup pulsul de radio-frecventa, fiind astfel mascat de acest puls, a crei amplitudine este mult mai mare. Din aceast cauz, s-au dezvoltat diverse tehnici de achiziie prin care se ncearc o ntrziere a semnalului FID, adic obinerea unui ecou. Una dintre cele mai des utilizate secvene este secvena spin-ecou SE. n cadrul acestei metode se aplica iniial un puls RF de 90, ce va roti magnetizarea de la direcia OZ (paralela cu cmpul) la o direcie din planul transversal XY. n acest moment apare semnalul FID a crei amplitudine va scdea n timp, datorita procentului de relaxare transversala. Dup un timp t, intre spinii (care se rotesc) apare o diferena de viteza de rotaie. Astfel, spinii mai rapizi (R) vor fi n faa celor mai leni (L). n fizic se spune n acest caz ca are loc o defazare, spinii mai rapizi avnd un avans de faz (adic de unghi de rotaie). n acest moment se aplica pulsul RF de 180 ce va roti cu 180 aceti spini. Practic ei vor rmne n acelai plan transversal, numai ca va avea loc o schimbare a ordinii de rotaie, spinii cei mai leni fiind de data aceasta n faa. Deoarece acest puls nu modifica vitezele de rotaie, dup acelai timp t, spinii rapizi ii vor ajunge pe cei leni i va avea loc regruparea lor. n acest moment se ndeplinete condiia de coerenta de faza i va apare semnalul
170

Capitolul 5

ecou(SE). Timpul la care apare acest semnal se numete timp de ecou, TE, (echo time) Dup atenuarea semnalului de ecou, aceasta secvena poate fi reluata. Timpul care separa cele doua pulsuri succesive de 90, se numete timp de repetiie TR. Reamintim ca pentru mbuntirea raportului SN, aceeai secvena poate fi reluata de mai multe ori, preul pltit fiind ns, creterea timpului de achiziie a imaginii. Pentru a observa influenta parametrilor secvenei SE, la obinerea unei imagini, sa presupunem ca dorim vizualizarea a doua esuturi (A i B) cu proprietari fizice distincte. Vom considera ca esutul A are timpul de relaxare longitudinala (T1), i densitatea de protoni NH mai mari dect ale esutului B. n ceea ce privete timpul T2, vom considera ca situaie este inversa. Aceasta nseamn ca dup excitarea cu pulsul RF de 90 magnetizarea longitudinala a esutului A, revine mai greu la valoarea de saturaie. Densitatea mai mare n protoni determina ca magnetizarea de saturaie a esutului A sa fie mai mare. n ceea ce privesc timpii T2, magnetizarea transversala a esutului A, revine mai repede la valoarea zero. De exemplu, alegerea unor timpi de repetiie i de ecou scuri (comparativ cu T1 respectiv T2), determina obinerea unui contrast intre cele doua esuturi, datorat diferenelor n magnetizarea longitudinala. n acest caz se spune ca s-a obinut o imagine cu contrast T1. Notm ca obinerea unui contrast bun nseamn existenta unei diferene cat mai mari intre magnetizrile transversale ale celor dou esuturi. Totodat esutul B va apare mai luminos n imaginile RM (deoarece magnetizarea sa transversala este mai mare). Pentru timpi de repetiie lungi i TE scuri, contrastul apare n acest caz datorita densitii protonice, iar esutul A n acest caz apare mai intens (avnd o concentraie protonic mai mare). Contrastul este cu att mai bun cu ct exista o diferena mai mare n concentraiile celor doua esuturi.
171

Capitolul 5

n cazul n care att TR cat i timpul de excitaie sunt lungi, contrastul este datorat factorului T2. n cazul considerat, n funcie de valoarea lui TE magnetizarea transversala a esutului B poate fi mai mare dect a esutului A. De aceea exista posibilitatea ca n acest caz, esutul B sa apar mai intens. n concluzie, n funcie de proprietile fizice ale esuturilor analizate, se poate opta pentru una din cele trei variante (contrast T1, T2 sau datorat densitii protonice). Deoarece timpii de repetiie sunt corelai cu T1 iar timpii de excitaie cu T2 i innd cont ca (T1>T2), exista n secvena SE, o perioad mare de timp nefolosit. Aceasta stare de ateptare este folosita n tehnicile SE, fie la obinerea altor ecouri sau la achiziionarea altor seciuni. Este vorba despre aa numita secvena ecou multiplanar, ce permite achiziionarea mai multor seciuni pe durata aceluiai timp de repetiie. Secvena de achiziie SE are dezavantajul unui timp de repetiie mare, necesar pentru ca magnetizarea longitudinala sa ajung la valori, care s asigure existenta unui semnal i a unui contrast bun. Pe de alta parte, n anumite cazuri este necesara suprimarea semnalelor provenite de la anumite esuturi. Este cazul grsimilor a cror micare determina apariia unor semnale nedorite (artefacte). De aceea s-a dezvoltat o tehnica de achiziie inversie reversie, IR, (Inversion Recovery). Secvena inversie - reversie (IR) const dintr-o succesiune de trei pulsuri: - un puls iniial de 180 ce va roti magnetizarea n sens invers cmpului magnetic(n acest caz magnetizarea va avea o valoare negativa) - un puls de 90 ce va roti spinii cu 90 grade. - un puls de 180 ce va determina ca i n cazul secvenei SE, o refazare a spinilor, n scopul producerii ecoului. Intervalul de timp dintre primul puls de 180 i cel de 90 se numete timp de inversie (TI). Dup ncetarea aciunii pulsului iniial de 180, vectorul magnetizare, aflat n sens invers cmpului magnetic, se va roti din nou spre poziia iniial (paralel). n cazul
172

Capitolul 5

acestui proces la un moment dat el se va gsi n planul transversal. Dac n acest moment este iniiat pulsul de 90, spinii se vor roti spre direcia cmpului i vor da un semnal nul. Astfel prin alegerea corespunztoare a timpului de inversie se poate anula semnalul ce provine de la un anumit esut. n cazul grsimilor, folosirea unui timp de inversie scurt de aproximativ 150 ms anuleaz semnalul emis. Metoda este ntlnita n aceste condiii sub numele de STIR (Short TI Inversion Recovery). De asemenea, n anumite situaii este necesara i anularea semnalului provenit de la lichidul cefalorahidian, caz n care secvena se numete FLAIR (Fluid Attenuated Inversion Recovery). La creterea timpului de inversie contrastul ntre esuturi creste i el. De asemenea exista situaii cnd magnetizarea unor esuturi are valori negative, (n momentul aplicrii pulsului RF 90). Dac imaginea format tine cont de valorile negative ale magnetizrii longitudinale spunem ca avem o imagine real. Imaginile reale ale unor esuturi, au un puternic contrast negru (magnetizri negative) i alb pentru cazul magnetizrilor pozitive. esuturile suprimate vor avea un contrast gri, asemntor imaginii de fond. n cazul imaginii modul, n formarea imaginii nu se tine cont de semnul magnetizrii longitudinale. Practic conteaz numai modulul acestei mrimi iar n acest caz, esuturile suprimate vor avea un fond negru pe imaginea RM. Principalul dezavantaj al metodei este acela ca, pentru anumite secvene, esuturi diferite pot avea contraste foarte apropiate (cazul secvenei 3). n ceea ce privete evoluia tehnicilor de achiziie, se caut gsirea unor soluii care sa scurteze timpul de investigare, fr ns a scdea eficienta examenului. Reducerea timpului este necesara n cazul pacienilor cu stare generala grava i/sau pentru eliminarea unor artefacte ce provin de la micrile lor. De asemenea, micorarea timpului de achiziie ofer posibilitatea unor investigaii n timp real, cum ar fi cazul studiilor cardio. Din acest motiv n ultimul timp o atenie deosebit a fost acordata tehnicilor ce folosesc n locul pulsurilor RF de 90, pulsuri
173

Capitolul 5

care sa determine o deviere a magnetizrii cu un unghi mai mic. n felul acesta se scurteaz considerabil procesul de inversie longitudinal al magnetizrii. Principalul dezavantaj al acestor metode este insa raportul SN mai mic dect n cazul metodelor clasice (fenomen datorat micorrii semnalului util prin micorarea componentelor transversale a magnetizrii). Practic prin micorarea unghiului de nclinare, magnetizarea transversala scade, iar cea longitudinala creste. De asemenea, pentru obinerea ecoului, se utilizeaz o defazare forat a spinilor urmat de o refazare deasemenea forat. Aceasta se realizeaz cu ajutorul unui gradient de cmp negativ, respectiv pozitiv. Timpul de achiziie prin aceste metode scade considerabil, imaginea obinuta fiind denumita imagine gradient ecou. Tehnica folosit este ntlnit sub numele de FLASH (Fast Low Angle Shot) sau GRASS (Gradien Reccaled Acquisition n Steady State). n aceste tehnici operatorul are n plus posibilitatea modificrii unghiului de nclinare i evident a timpului de repetiie i ecou. Pe msur ce mbuntirile aduse acestor tehnici duc la creterea raportului SN, ele vor fi tot mai des utilizate n investigaii.

174

Capitolul 5

CUPRINS:
Prefa 2 1. ELECTROLII ........................................................................................................................5 1.1 CONDUCTIVITATEA ELECTROLIILOR......................................................................................5 1.2 GRADUL DE DISOCIERE ...........................................................................................................8 1.3 ECUAIA NERNST ..................................................................................................................11 1.4 POTENIALUL DE DIFUZIE NTR-UN ELECTROLIT NEUNIFORM ................................................12 1.5 CELULE GALVANICE. ELECTROZI REVERSIBILI ......................................................................14 1.6 POTENIALUL DE ELECTROD .................................................................................................18 1.7 TENSIUNEA ELECTROMOTOARE A UNEI CELULE GALVANICE .................................................20 1.8 DETERMINAREA PH-ULUI ......................................................................................................21 1.9 TRANSPORT N CMP ELECTRIC. ELECTROFOREZ ................................................................24 1.9.1 Punctul izolelectric..........................................................................................................24 1.9.2 Mobilitatea electroforetic..............................................................................................25 1.9.2.1 Cmpul electric al unei particule ncrcate.......................................................26 1.10 REACII DE OXIDARE I REDUCERE .......................................................................................29 1.11 APLICAII ALE FENOMENELOR ELECTROCHIMICE N DOMENIUL MEDICAL I FARMACEUTIC ..32 1.11.1 Procese de oxidare i reducere................................................................................32 2. FENOMENE ONDULATORII .............................................................................................35 2.1 INTERFEREN ......................................................................................................................41 2.2 FENOMENE MAGNETICE ........................................................................................................43 2.2.1 Introducere ......................................................................................................................43 2.2.2 Substana n cmp magnetic............................................................................................45 2.3 UNDE ELECTROMAGNETICE...................................................................................................46 2.3.1 Clasificarea undelor electromagnetice ...........................................................................47 2.4 POLARIZAREA LUMINII. APLICAII ........................................................................................50 2.4.1.1 Polarizarea prin reflexie....................................................................................50 2.4.1.2 Polarizarea prin refracie...................................................................................51 2.4.1.3 Birefringena .....................................................................................................51 2.4.1.4 Polarizarea rotatorie ..........................................................................................53 3. NOIUNI DE ATOMIC .....................................................................................................55 3.1 INTRODUCERE .......................................................................................................................55 3.2 MODELUL ATOMIC RUTHERFORD ..........................................................................................55 3.3 IPOTEZE CE CONFIRM COMPORTAMENTUL DUAL, UND-PARTICUL ...................................57 3.3.1 Problema radiaiei corpului negru .................................................................................58 3.3.2 Efectul fotoelectric ..........................................................................................................59 3.3.2.1 Dualismul und - corpuscul ..............................................................................60 3.3.2.2 Relaiile de nedeterminare ale lui Heinsenberg ................................................61 3.3.3 Problema stabilitii atomului. Modelul Bhr ................................................................62 3.4 MODELUL CUANTIC AL ATOMULUI ........................................................................................63 3.4.1 Ecuaia lui Schrdinger. Funcia de und. Orbitali electronici .....................................64 3.4.2 Atomul de hidrogen. Numere cuantice ............................................................................64 3.4.2.1 Orbitalii atomului de hidrogen..........................................................................66 3.4.3 Momentul magnetic orbital i de spin al electronului.....................................................66 3.5 ATOMUL CU MAI MULI ELECTRONI ......................................................................................67 3.5.1 Spinul electronic..............................................................................................................68 3.6 NIVELE ENERGETICE MOLECULARE .......................................................................................71 3.6.1 Spectre de rotaie.............................................................................................................72 3.6.2 Spectre de vibraie...........................................................................................................75 175

Capitolul 5

3.6.3 Spectre de vibraie - rotaie.............................................................................................77 3.6.4 Spectre electronice. Principiul Franck - Condon ...........................................................80 4. METODE SPECTROMETRICE DE ABSORBIE. PRINCIPII GENERALE I APLICATIVE ..................................................................................................................................84 4.1 ABSORBIA ENERGIEI DE CTRE MOLECULE (ATOMI)............................................................84 4.1.1 Aparatur utilizat n UV, VIZ i IR ...............................................................................88 4.2 APLICAII ALE METODELOR SPECTROMETRICE DE ABSORBIE N UV, VIZ I IR. ANALIZ CALITATIV /CANTITATIV ............................................................................................................90 4.2.1 Aplicaii ale spectrometriei UV, VIZ...............................................................................90 4.2.1.1 Analiza calitativ ..............................................................................................91 4.2.2 Aplicaii ale spectrometriei n vizibil analiz cantitativ ............................................92 4.2.2.1 Determinri cantitative n UV...........................................................................93 4.2.3 Aplicaii ale spectrometriei de absorbie n infrarou ....................................................96 4.2.4 Frecvente caracteristice substanelor organice. .............................................................98 4.3 PRINCIPIILE ANALIZEI SPECTROMETRICE CANTITATIVE N IR ..............................................101 4.3.1 Metoda celor mai mici ptrate ......................................................................................101 4.3.2 Metoda CLS (Classical Least Squares).........................................................................103 4.3.2.1 Probe cu un singur constituent........................................................................103 4.3.2.2 Probe cu mai muli constitueni ......................................................................105 4.3.3 Metoda regresiei lineare multiple .................................................................................110 4.4 METODE DE ANALIZ CHEMOMETRIC ...............................................................................112 4.4.1 Metode de analiz multivariat.....................................................................................112 4.4.2 Metoda de analiz a componentelor principale............................................................113 4.4.2.1 Optimizarea metodelor de analiz PLS i PCR ..............................................118 4.5 APLICAII ALE SPECTROFOTOMETRIEI IR N FARMACIE I MEDICIN ..................................129 4.5.1 Aplicaii ale spectrometriei IR la controlul medicamentului ........................................129 4.5.2 Identificarea formelor polimorfe...................................................................................129 4.5.2.1 Spectrul IR , criteriu de identitate a substanelor medicamentoase ................130
4.5.2.1.1 4.5.2.1.2 Identificarea substanelor cu structuri necunoscute .....................................................................130 Identificarea substanelor cunoscute............................................................................................130

4.5.2.2 Spectrul IR criteriu de puritate........................................................................131 4.5.2.3 Determinarea principiilor active din forme farmaceutice...............................131 4.5.3 Aplicaii n bio-medicin ...............................................................................................131 4.5.4 Aplicaii ale spectrofotometriei IR n analizele clinice .................................................134 4.5.5 Aplicaii ale spectroscopiei IR n diagnosticul clinic....................................................139 4.5.6 Aplicaii ale spectroscopiei NIR n industria farmaceutic ..........................................142 5. OBINEREA IMAGINII PRIN REZONAN MAGNETIC.....................................147 5.1 INTRODUCERE .....................................................................................................................147 5.1.1 Fenomenele magnetice ..................................................................................................147 5.1.2 Spinul nuclear. Rezonana magnetic nuclear (RMN)................................................152 5.1.3 Numr cuantic magnetic de spin ...................................................................................152 5.1.3.1 Spectrul RMN .................................................................................................156 5.2 POSIBILITI DE UTILIZARE PRACTIC A RMN ...................................................................159 5.2.1 Fenomene de relaxare ...................................................................................................161 5.3 PRINCIPIUL FORMRII IMAGINII ...........................................................................................164 5.3.1 Secvene de achiziie a imaginii ....................................................................................169

176