Proprietile remarcabile ale enzimelor Enzimele sunt cei mai performani, preci i, stereospecifici catalizatori din toate grupele

de catalizatori. Enzimele (en-in, zima-drojdie) sunt proteine care au capacitatea de a interaciona cu o substan chimic numit substrat i proprietatea de a mri viteza de transformare a acestuia n produi de reacie, dup care acestea se refac i pot fi utilizate ntr-un nou ciclu catalitic. S-a estimat faptul c exist circa 25000 de enzime. Pn n prezent s-au caracterizat aproximativ 3000 de enzime din care 300 s-au obinut n stare cristalin. Enzimele au cteva proprieti remarcabile n comparaie cu alte tipuri de catalizatori. Dintre acestea trei propriet i importante sunt: marea lor putere catalitic, specificitatea i gradul n care activitatea lor catalitic poate fi controlat de o serie de compui naturali. Puterea catalitic Enzimele pot crete viteza de reacie cu pn la 17 ordine de magnitudine. n cele mai multe cazuri o comparaie ntre viteza unei reacii catalizate enzimatic i necatalizat este greu de realizat. Pentru ultima reacie (n absena catalizatorului, enzimei) vitezele pot fi foarte mici i ca atare greu de cuantificat. Cnd aceast comparaie este posibil creterile vitezei de reacie pot fi mai mari de 4 (creatin kinaza), 8 (alcool dehidrogenaza), 9 (triozfosfat izomeraza), 10 (hexokinaza), 11 (fosforilaza) ordine de magnitudine. n unele situaii activitatea enzimatic poate fi masurat la temperatura mai mic (datorit stabilitii reduse a enzimei) comparativ cu reacia necatalizat. Un exemplu l constituie ureaza, prima enzim (din fasole Canavalia ensiformis) care a fost cristalizat n stare pur. Existena enzimei a fost raportat nc din secolul XIX. Experimentele iniiale au fost efectuate de ctre chimistul suedez Jon Jakob Berzelius, cercettorul care a introdus t ermenul de activitate catalitic. Sumner a reuit s izoleze enzima i s o cristalizeze (a fost recompensat cu premiul Nobel in 1947). Ureea este o molecula foarte stabil, care n mod normal hidrolizeaz foarte ncet obinndu-se acidul izocianic i amoniac. Durata reaciei necatalizate este de 3,6 ani la 38 C. Activitatea catalitic a enzimei determin o cretere a vitezei de reacie (n mediu acid) de aproape 14 ordine de magnitudine. n timp ce reacia necatalizat implic o eliminare direct a moleculei de amoniac, enzima probabil catalizeaz o reacie hidrolitic a ionului carbamat (intermediar).

Specificitatea Majoritatea enzimelor au specificitate ridicat att pentru substrat(e) ct i asupra reaciei pe care acesta/acetia o catalizeaz. Exist nsa i cazuri n care enzimele au specificitate sczuta (anumite peptidaze, fosfataze i esteraze)-utilizeaz o gam larg de

substrate care conin legturile respective (legtura peptidic, gruparea fosfoesteric, gruparea esteric). Aceste enzime au rol degradativ (digestie, ex chimotripsina) si nu de biosinteza.

Specificitatea scazut a chimotripsinei scindarea legturilor amidice i esterice

Exist i enzime care prezint o specificitate de grup. Din aceasta categorie face parte hexokinaza, o enzim care catalizeaz fosforilarea unei palete largi de aldohexoze (zaharuri). Fosforilarea glucozei determin o incapacitate de transport a moleculei de monozaharida n/nafara celulei. O grup de enzime intens studiat n ultimele decenii este cea a endonucleazelor (enzime de restric ie). Aceste enzime recunosc o secvena de 4-6 perechi de baze (secven palindromic) din cadrul ADN-ului i cliveaz legturile fosfodiesterice din ambele lanuri. Exist cel puin 400 de endonucleaze care difer prin specificitatea lor. n acest sens, fiecare endonucleaz are specificitate absolut pentru regiunea substratului care este n contact cu situsul catalitic, dei poate aciona asupra mai multor secvene de ADN n cazul n care motivul substratului (secvena) se repet. De exemplu, EcoR I (E. Coli Restriction Endonuclease I) poate scinda ntre nucleotidele G i A, iar Stu I scindeaz ntre nucleotidele G i C (tietura enzimatic a ADN-ului duplex este dreapt )

O trasatur distinct a multor reacii catalizate de enzime este stereospecificitatea, capacitatea acestora de a recunoate numai un izomer geometric sau optic. n majoritatea cazurilor, enzimele recunosc unul dintre cei doi enantiomeri. Din acest motiv n organism se ntlnesc cu precdere L-aminoacizi i D-monozaharuri. D-aminoacid-oxidazele (sursa: rinichiul de porc), enzime specifice aminoacizilor din seria D, sunt capabile sa converteasc aceti compui in cetoacizi. L-aminoacid-oxidazele (enzime din veninul de arpe) catalizeaz conversia L-aminoacizilor la cetoacizi. Exista nsa i alte situaii n care specificitatea este dictat de sursa din care enzima este izo lat. De exemplu, lactat dehidrogenaza din muchi este activ fa de L(+)-lactat, pe cnd cea din Lactobacillus plantarum convertete D(+)lactatul la piruvat. La polul opus se afl racemazele, enzime care acioneaz asupra ambilor enantiomeri cu formarea de amestecuri racemice. De exemplu, alanil-racemaza poate aciona asupra ambilor izomeri optici ai alaninei, reacie care conduce ntotdeauna la un racemic.

Factori care influeneaz activitatea catalitic Activitatea catalitic a enzimelor poate fi controlat de o serie de factori: pH, trie ionic, temperatur, de ioni sau de alte molecule. Influenta pH-ului Activitatea unei enzime depinde de pH-ul din mediu din dou motive: prezena, n centrul activ al enzimei, de grupe donoare sau acceptoare de protoni i de meninerea amsamblului structural enzimatic. Majoritatea enzimelor au un pH optim n mediu neutru. Enzimele care prefer condiii extreme, ca pepsina i fosfataza alcalina, trebuie testate n domeniul de pH adecvat. Tria ionic i soluiile tampon Tria ionic potrivit pentru msurarea activitii enzimatice este dictat de molaritatea soluiei tampon utilizate. Cel mai frecvent se folosete concentraia de 0,1 M, valoare care reprezina o trie ionic mic comparativ cu aceea ntlnit n celul. O trie ionic ridicat (1 M) poate conduce la inactivarea enzimei, cu unele excepii (organismele termofile i halofile). Natura ionilor din solu ia tampon poate fi un factor determinant pentru inactivarea sau destabilizarea enzimelor. Soluiile tampon avnd n

componen substane de natur organic pot fi mai stabile, dar n majoritatea cazurilor trebuie cutat tamponul potrivit pentru fiecare enzim. De exemplu, n cazul folosirii fosfatului de potasiu trebuie s se tie faptul c tamponul are capacitate de legare pentru cationi. Tris, un alt co mpus folosit la prepararea solu iilor tampon, poate uneori dezactiva enzimele. Alaturi de compatibilitatea tampon-enzima trebuie s se considere i capacitatea de tamponare optim (ntre 1-2 uniti de pH). Temperatura Odata cu creterea temperaturii, viteza micrii moleculelor crete cu un factor de 2-3 la fiecare 10 grade. n schimb, odat cu creterea temperaturii apare tendina proteinelor de a se denatura i implicit a se dezactiva. Cofactorii Cofactorii metalici n general, pentru o activitate corespunztoare, enzimele au nevoie de o component neproteic (cofactor). Un grup de cofactori sunt ionii metalici. n cele mai multe cazuri ionii metalici stabilizeaz conformaia enzimei n forma catalitic activ. Carboxipept idazele, enzime care catalizeaz scindarea legturii peptidice la capatul C-terminal al substratului, necesit ioni de zinc pentru activitatea catalitic. ndepartarea zincului (prin complexare cu EDTA) poate avea drept consecin inactivarea enzimei. Kinazele, enzime care transfer o grupare -fosforil de la ATP la o molecul acceptor, necesit ionii de magneziu care se leag, n acest caz, de substrat (ATP) i nu de enzim. Ureaza contine ioni de nichel, fapt care a fost dovedit la 50 de ani de la cristalizarea enzimei. Cofactorii organici A doua clas de cofactori este reprezentat de cofactorii organici (marea partea sunt derivai ai vitaminelor B) ce interacioneaz slab cu apoenzimele. ntre cele dou componente se formeaz legturi slabe de tipul punilor de hidrogen, interac iuni hidrofobe. Cofactorii legati strns (prin legaturi covalente) poart denumirea de grupri prostetice. O enzim care conine un cofactor sau o grupare prostetica poarta numele de holoenzima, iar una in care cofactorul este indepartat apoenzima. Principalele coenzime de natur alifatic sunt glutationul, acidul lipoic i acidul ascorbic. O enzima dependenta de glutation este glutation-homocistin-transdehidrogenaza si permite formarea puntilor disulfidice prin conversia cisteinei in cistina. Glutationul redus (G-SH) poate fi oxidat reversibil sub actiunea glutation-reductazei. Aminotransferazele, enzime care intervin n calea metabolic de degradare a aminoacizilor, conin piridoxal-fosfatul n calitate de coenzim. Unii cofactori sunt ataati tranzitoriu la diverse enzime i astfel joac rol de cosubstrat. Nicotin adenin dinucleotidul (NAD+) i nicotin adenin dinucleotid fosfatul (NADP+) sunt exemple de cosubstrate. De exemplu, NAD+ este un agent de oxidare n reacia catalizat de alcool dehidrogenaza (ADH):

Nomenclatura enzimelor Clasificare general n general denumirea unei enzime se face prin adugarea sufixului aza la numele substratului asupra cruia ac ioneaza (ureaza) sau are legatur cu reacia catalizat (lactat dehidrogenaza catalizeaz dehidrogenarea lactatului cu ob inerea piruvatului). Denumirea enzimelor se face pe trei paliere. Primul palier cuprinde o denumire uzual, mai puin stiinific, care se bazeaz pe denumirile triviale ale enzimelor (enzima galben, catalaza, papaina, tripsina) i are n vedere evoluia n timp a cunotinelor legate de enzimele respective. Oricum, multe enzime (ex. catalaza care mediaz descompunerea apei oxigenate) au nume care nu sunt n concordan cu funcia pe care acestea o manifest n decursul reac iei enzimatice. Al doilea palier se bazeaz pe tipul reac iei catalizate de enzime. Astfel, exist 6 tipuri majore de reacii enzimatice: 1. reacii de oxido-reducere catalizate de oxidoreductaze; 2. reacii de transfer a unor grupe (grupri fosfat, resturi de peptide), catalizate de transferaze; 3. reacii hidrolitice (hidroliza esterilor, hidroliza legturilor C-X, adiia apei la legtura dubl) catalizate de hidrolaze; 4. reactii de eliminare n care legatura dubl este format, catalizate de liaze; 5. reacii de izomerizare, catalizate de izomeraze; 6. reaciile de formare a unor legturi chimice (C-C), pe baza energiei consumate de o surs de energie (uzual ATP), catalizata de ligaze (sintetaze). 1. Oxidoreductazele Oxidoreductazele sunt enzime implicate n procese de oxidare biologica i catalizeaz reacii bimoleculare:

Aox + B red

Ared + B ox

Denumirea enzimelor din aceast clas se realizeaz prin includerea denumirii donorului i acceptorului de hidrogen urmate de termenul oxidoreductaza (donor:acceptor-oxidoreductaza). n situaia n care acceptorul de hidrogen este oxigenul se apeleaz la termenul de oxidaz. Astfel, denumirea sistematic a alcooldehidrogenazei, enzim care catalizeaz reacia de oxidare reversibil a etanolului, este alcool:NAD+oxidoreductaza (alcoolul = acceptor, NAD+ = donor). Alcool dehidrogenaza joac un rol important n procesele de fermentaie alcoolic. n biochimia clinic aceast enzim se utilizeaz la estimarea concentraiei alcoolului etilic n snge sau urin. 2. Transferazele Trasferazele sunt enzime care intervin n reaciile biochimice n care are loc transferul unei grupe de pe un substrat (donor) pe un al doilea substrat (acceptor). Aceste enzime au o pondere ridicat (30% din totalul enzimelor). Aminotransferazele sunt enzime care catalizeaz reacia unui -aminoacid cu un cetoacid, conducnd la formarea unui aminoacid diferit i a unui cetoacid diferit.

Aspartat-aminotransferaza (L-aspartat: -cetoglutarat- aminotransferaza sau glutamat-oxaloacetat-trasaminaza, TGO) catalizeaz reacia L-aspartatului cu cetoglutarat. TGO este ntlnit n mai multe esuturi: miocard, ficat, muchi scheletici, rinichi, pancreas, esut cerebral, splin, fiind astfel un indicator mai puin specific al funciei hepatice.

Analog transaminarea L-alaninei are loc sub aciunea alanin-aminotransferazei (Lalanin--cetoglutarat- aminotransferaza sau glutamat-piruvat transaminaza, TGP). TGP este o enzim ce se gasete n ficat, dar n cantiti mici se mai poate regsi n rinichi, inim i muchi. n condiii normale, nivelul de TGP din snge este sczut. Atunci cnd ficatul este afectat, enzimele TGP sunt eliberate n sistemul sangvin, n general nainte ca alte simptome evidente s apar, precum icterul (nglbe nirea ochilor i a tegumentelor).

Abilitatea acestor enzime de a forma legturi C-C i noi enantiomeri poate fi exploatat n reaciile de biotransformare utilizate n sinteza organic. Glicoliza anaerob debuteaz cu fosforilarea hexozelor (D-glucoza, D-manoza, Dfructoza, sorbitolul, D-glucozamina). Aceasta reacie este catalizat de hexokinaza (ATP:D-hexozo-6-fosfotransferaza). Glucokinaza (ATP:D-glucozo-6-fosfotransferaza), enzima prezent n celulele canceroase, particip numai reac ia de fosforilare a D-glucozei cu formarea 6-fosfat-Dglucozei. Metiltransferazele, enzime prezente n metabolismul intermediar, au rolul de a transfera radicalul metil de la un substrat la altul.

3. Hidroxilaze Sunt enzime care catalizeaz reacia de scindare a substratului cu participarea apei. Hidrolazele pot fi grupate n funcie de natura legturii chimice pe care acestea le scindeaz. Lipaza este o esteraz, triacilglicerol-acil-hidrolaz, i este implicat n scindarea hidrolitic a triacilglicerolilor (grsimilor) din alimente n scopul absorb iei acestora la nivelul intestinului. Lipaza este produs n special de pancreas, dar poate fi i la nivelul cavitii bucale sau stomacului. Dei majoritatea oamenilor produc lipaza pancreatic exist situaii n care nivelul de lipaza este mai sczut (fibroza cistic, boala Crohn, boli autoimune ale intestinului subire). Fosfomonoesterazele (alcalin sau acid) acioneaza asupra monoesterilor acidului ortofosforic (i fosfoproteinelor), dar nu diesterilor. Fosfataza acida este denumirea generica pentru enzimele care hidrolizeaza gruparea fosforica dintr-o varietate de substrate naturale sau artificiale. Enzima este prezenta in majoritatea celulelor eucariote unde are rolul de a recicla gruparile fosfat.

n catabolismul polizaharurilor intervin amilazele (asupra amidonului i glicogenului) sau celulazelor (substratul este celuloza). -Amilaza (diastaza, glicogenaza) sau -1,4-D-glucan-glucanohidrolaza catalizeaz scindarea hidrolitic a legturilor -1,4-glicozidice din amidon/glicogen cu formarea unor fragmente mai mici (dextrine). -Amilaza sau -1,4-D-glucan-maltohidrolaza cliveaz legturile -1,4-glicozidice (ndeprtnd resturile de maltoza de la capete) de la capetele nereductoare ale substratului polizaharidic. -Amilaza se gsete n special n seminele plantelor i n cartofii dulci. Legturile -1,6-glicozidice sunt scindate de izoamilaza (glicogen-6-glucanglucohidrolaza). -Amilaza (glucoamilaza sau -1,4-D-glucan-glucohidrolaza), o exoamilaz utilizat n industrie, catalizeaz hidroliza legturilor -1,4-glicozidice din amidon/glicogen (de la captul neredus al polizaharului) cu formarea de glucoz. Comparativ cu celelalte amilaze ( sau ) -amilaza este mai activ n mediu acid (pHul optim este de 3).
Fosfolipazele scindez legturile esterice din fosfolipide. Fosfolipaza A (lecitinaza A, 1acilhidrolaza) se ntlnete n veninul de cobr, prostat, pancreas, splin, glandele salivare i actioneaz asupra fosfatidilcolinelor scindnd restul de acid gras din poziia cu formare de lizolecitine: Lecitina, fosfatidilcolina, este o

component de baz a creierului i esuturilor nervoase (sub forma digliceridelor legate de colina prin intermediul legarurilor esterice). Fosfolipaza B (lecitinaza B, 2-fosfatidil-colina-acilhidrolaza), enzima ntlnit n ficat, pancreas i microorganisme scindeaz dou legturi esterice cu formare de glicerolfosfatidil-colina. 5. Izomerazele Izomerazele sunt enzime ce catalizeaz reacii de izomerizare. n funcie de tipul reaciei catalizate, izomerazele pot fi mprite n racemaze, epimeraze, cis-transizomeraze, tautomeraze. Aminoacid-racemazele sunt enzime care catalizeaz conversia L-aminoacizilor la D-aminoacizi. Cele mai studiate aminoacid-racemaze sunt alanin-racemaza, metioninracemaza, glutamat-racemaza. Maleat-izomeraza (maleat cis-trans izomeraza) catalizeaz conversia acidului maleic la acidul fumaric.

Gluco-fosfat izomeraza este o enzim implicat n glicoliza anaerob care catalizeaz conversia glucozo-1-fosfat n glucozo-6-fosfat. 6. Sintetazele (ligazele) Liagazele catalizeaz reaciile de formare a unor legturi C-C sau C-heteroatom. Reaciile enzimatice sunt de regul endoterme (bazate pe hidroliza ATP-ului sau GTPului) n procesul de sinteza a proteinelor are loc activarea aminoacizilor cu ajutorul aminoacil-ARNt sintetazei. Acetil-CoA sintetaza (Acetat-CoA ligaza) catalizeaz reacia de biosinteza a acetilCoA. n urma reaciei se formeaz o legtur C-S: