ENZIMELE

OBIECTIVELE:
1.

Noiune despre enzime i rolul lor biologic. Asemnrile i deosebirile dintre

aciunea enzimelor i a catalizatorilor nebiologici.

2.

Natura chimic a enzimelor. Dovezile naturii proteice a enzimelor. Structura

enzimelor. Centrul activ i centrul alosteric al enzimelor.

3.

Enzimele simple i conjugate. Noiune de holoenzim, apoenzim, cofactor,

coenzim i grup prostetic. Funciile de coenzime ale vitaminelor i
microelementelor. Structura vitaminelor B1, B2, B6, PP, acidului pantotenic,
biotinei, acidului folic i rolul lor ca coenzime.

4.

Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i rolul lui n

formarea i transformarea complexelor intermediare dintre enzim i substrat.
Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale moleculei enzimei i
substratului n procesul de cataliz.

5.

Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica general a

claselor i subclaselor principale de enzime. Numrul de cod al enzimei.

6.

Specificitatea enzimelor (tipurile, exemple).

NOIUNE DE ENZIM
ENZIM

de la grecescul
EN ZYME- n drojdii
Enzime biocatalizatori de natur
proteic
Mresc V reaciilor chimice,
termodinamic posibile

E- acioneaz strict ntr-o anumit consecutivitate i

cu o anumit specificitate

Enzimologietiina,
ce se ocup
cu studierea E

Enzimodiagnostica
- este determinarea

Enzimoterapia
- este utilizarea E,

activittii E,
care se pot modifica n
diverse patologii cu
scop diagnostic.

extrase i purificate sau

sintetizate n laborator,
n tratamentul
diferitor patologii.

Natura chimic a E

1.
2.
3.
4.
5.
6.

E- sunt proteine i posed toate proprietile

fizico-chimice specifice acestor molecule
(solubilitate, proprieti osmotice, sarcin
electric net, denaturare termic)
Dovezile experimentale:
Sunt alctuite din AA
Prezint macromolecule
n ap formeaz sol. coloidale cu propriet. sale
specifice
Prezint electrolii amfolii
Se supun denaturrii
Au fost sintetizate n condiii de laborator din AA
(ribonucleaza, lizozima)

Asemnrile E cu
catalizatorii neorganici
1.
2.
3.
4.

catalizeaz numai reaciile posibile

din punct de vedere energetic
nu modific echilibrul reaciilor
reversibile
nu modific direcia reaciei
nu se consum n procesul reaciilor.

Deosebirile E de
catalizatorii neorganici
1.

2.
3.

Viteza catalizei enzimatice este cu

mult mai mare dect a celei
nebiologice (1 mg de Fe n
componena catalazei poate nlocui
o ton de Fe metalic).
E posed specificitate nalt.
E catalizeaz reaciile chimice n
condiii blnde (presiunea obinuit,
temperatura 37C, pH aproape
neutru).

Deosebirile E de
catalizatorii neorganici
4. E catalizeaz reaciile fr formarea
produselor intermediare
randamentul este de 100%
5. Activitatea E, de aici i reaciile
enzimatice se regleaz.
6. Viteza reaciilor este direct
proporional cu cantitatea E.

Structura enzimelor
Masa molecular a E e de mii de ori mai mare
dect masa molecular a substratului (S)
S sau ligandul, substana asupra creia
acioneaz E
E acioneaz nu cu toat molecula dar cu un
anumit sector denumit centrul activ (CA)
CA - locul care asigur interaciunea E cu S i
transformarea ulterioar a acestuia n P

Particularitile CA
1. este o structur tridimensional unical,

format din radicali ai aminoacizilor

distanai n catena primar proteic;
2. Posed grupri funcionale active (-OH,
-SH, -NH2, -COOH, etc.)

Particularitile CA
3. Are form de adncitur sau cavitate, cptuit
cu AA hidrofobi,unde nu-i acces de ap (ex.
cnd apa este un reagent al reaciei). CA
conine AA polari.
4. Ocup o parte relativ mic din volumul E i
majoritatea resturilor de AA n molecula E nu
contacteaz cu S
5. S relativ slab se leag cu E
6. CA este alctuit din 2 sectoare:

Sectorul de contact (de legare)

Sectorul catalitic

Organizarea funcional a
enzimelor
1.
2.
3.

4.
5.

Centrul alosteric
Este centrul reglator
Fixeaz modulatorul alosteric
Adiionarea modulatorului modific
conformaia enzimei i secundar
activitatea ei
Modulatorul pozitiv activator
Modulatorul negativ - inhibitor

Reglarea alosteric a
activitii enzimatice

Enzime alosterice

Moleculele enzimelor alosterice sunt mai

mari, mai complexe i sunt oligomere
pare
Au cinetica lor viteza reaciilor n
dependen de c% S are form
sigmoidal, dar nu hiperbolic, cauzat
de urmrile interaciunii ntre protomerii
ce leag S n mod cooperativ

Structura enzimelor
Din punct de vedere structural deosebim:
1. E simple alctuite numai din AA
(proteazele, lipazele, ribonucleaza)
2. E conjugate - formate din:
a. partea proteic apoenzim
b. partea neproteic
HOLOENZIM partea neproteic
+apoenzima cu activitate catalitic

PARTEA NEPROTEIC A E
A:

Cnd componenta neproteic

este un ion metalic este
denumit cofactor
n calitate de cofactori apar frecvent
cationii unor metale (Fe2+, Mg, Mn
sau Zn2 i, foarte rar, unii anioni

PARTEA NEPROTEIC A E
B:

Cnd componenta neproteic

este o molecul organic de mici
dimensiuni este denumit
coenzim

Coenzimele
Coenzima

strns legat n structura E

grupare prostetic (FMN; FAD,
biotina, acidul lipoic)
Coenzima slab legat, uor disociabil
cosubstrat (NAD; NADP, coenzima
A)

Rolul metalelor in cataliza

enzimatica
-

Sunt componente eseniale ale centrului catalitic

(activ);
Particip la legarea S i formarea complexului
ES;
Necesare n meninerea structurii 3D a enzimei;

Rolul metalelor in cataliza

enzimatica

Particip nemijlocit la cataliz

(n reactii de transfer de
electroni)
Particip la reglarea activitii E

Ionii de metale cofactori ai E

1.
2.
3.

Dup modul de legare i rolul ionului metalic E

sunt:
Metaloenzime care conin n calitate de
cofactori ioni de metale, strns legai de apoE
Exemple:
Citocromi, peroxidaza, catalaza (Fe)
Citocromoxidaza (Cu)
alcoolDH; carboxipeptidaza (Zn)
E metaloactive a cror activitate crete n
prezena ionului metalic, care leag metalul
slab. Metalele sunt fixate de apoenzim prin
legturi electrostatice la care particip resturile
de AA acizi (Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His)

EXEMPLE DE
METALOENZIME
- Fe-enzime: hem (citocromi, catalaze,
peroxidaze);
- Cu-enzime: citocromoxidaza, superoxiddismutaza, tiroxin-hidroxilaza;
- Mn-enzime: peptidaza, arginaza, izocitratdehidrogenaza;
- Co-enzime: cobalamin-enzime;
- Se-enzime: glutationperoxidaza

Coenzimele (CoE)
1. Sunt parte component a centrului activ
2. Contribuie la stabilizarea conformaiei

enzimei
3. Contribuie la fixarea substratului
4. Particip nemijlocit la actul catalitic

Clasificarea CoE

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

CoE vitaminice

Tiaminice
Flavinice
Nicotinamidice
Piridoxinice
Folice
Cobamidice
Biotinice
lipoice
CoE nevitaminice
1. hemurile de divers natur
2. Nucleotidele
3. Fosfaii monozaharidelor

Coenzimele tiaminice
Derivaii vitaminei
B1

TMP, TDP (TPP)cocarboxilaza, TTP

Rolul:
1. Decarboxilarea
oxidativ a
piruvatului
2. Decarboxilarea
oxidativ a
cetoglutaratului
3. Reacii de
transcetolare

Vitamin B1: Tiamin

Coenzima - Tiamin pirofosfat TPP

Reacia sumar a
decarboxilrii oxidative a
piruvatului cu participarea
TPP (deriv. Vit. B1)

Coenzimele flavinice

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Derivai ai vitaminei B2
FMN i FAD
Rolul:
Particip n reaciile de oxido-reducere:
Dezaminarea AA
Degradarea aldehidelor (aldehidDH)
Degradarea purinelor (xantinoxidaza)
Ciclul Krebs (succinatDH)
Oxidarea AG
DOP (dihidrolipoilDH)

Vitamina B2:
riboflavina

Coenzima Flavin mononucleotidul (FMN)

Coenzim Flavin adenin dinucleotidul (FAD)

Coenzimele flavinice

Reacia de dehidrogenare a
succinatului cu participarea FAD
derivatul vit. B2

Coenzimele
nicotinamidice

Sunt derivai ai vitaminei PP

niacina, niacinamida, B5
se include n structura a 2
Co- NAD i NADP
Rolul
Particip n reaciile de
oxido-reducere
(dehidrogenarea S
transferul unui hibrid ion
(H+ i 2 e). Alt proton
rmne n soluie H+

Vitamina PP:
nicotinamida

Coenzimele nicotinamid adenin dinudleotidul (NAD+)

nicotinamid adenin dinudleotid fosfat (NADP+)

Coenzimele nicotinamidice

Coenzimele nicotinamidice

Reacia de dehidrogenare a
malatului cu participarea
NAD derivatul vit. PP

Coenzimele piridoxinice

1.
2.
3.

Derivai a vitaminei
B6
Co piridoxalfosfat
i piridoxaminfosfat
Rolul:
Transaminarea AA
Decarboxilarea AA
Transsulfurarea

Vitamina
B6 :

Piridoxina

Piridoxal

Piridoxamina

Coenzimele:

Piridoxal fosfat

Piridoxamin fosfatul

Reacia de transaminare a
aminoacizilor cu participarea PALP
i PAMP derivaii vit. B6

Co pantotenice (B3)- HSCoA

biosinteza AG
2. biosinteza Col
3. sinteza corpilor cetonici
4. Oxidarea AG
5. Ciclul Krebs
6. Sinteza aminolevulinatului
7. DOP
8. DO a alfa cetoglutaratului
Transferul grupelor acil
1.

Co biotinice vitamina H
Gluconeogenez (I cale piruvatdecarboxilaza)
Sinteza AG (formarea lui malonil CoA)
Transformarea propionil-CoA n succinil CoA
(oxidarea AG cu numr impar)
Intervine n catabolismul Leu

Co cobamidice B12
-ciancobalamina

1.
2.

Vitamin antipernicioas pentru om i

factor de cretere pentru microorganisme
n ficat sunt 3 compui cobalaminici: meti-;
hidroxo- i deoxiadenozil-cobalamin
Rolul:
Co pentru unele transmetilaze
(homocistein metionin)
Co pentru anumite mutaze (izomeraze)metilmalonil Co A---- succinil CoA

Co folice sau pteridinice

Bc-acidul

folic
Forma activ- acidul tetrahidrofolic
Rol: transferul gruprilor cu un C: metil
(CH3), metilen(-CH2), formil (COH),
formimino (CH=NH)

Mecanismul de aciune al E

Pentru

decurgerea unei reacii este

necesar ca molecula de S i E s
contacteze ntre ele, pentru aceasta e
necesar de contientizarea unei noiuni ca:
Energia de activare este energia
necesar tuturor moleculelor unui mol de
S, care la o anumit t pot s ating starea
de tranziie (corespunztoare apixului
barierii energetice) (KJ/mol; kcal/mol)

Mecanismul de aciune al E
E

- micoreaz energia de activare ale

reaciilor chimice.
Cu ct mai mult scade energie de activare,
cu att mai eficient acioneaz catalizatorul,
i cu att mai mult se accelereaz reacia.

S + E E-S E + P

Energie

Energia de activare a reactiei necatalizate

Energia de activare a reactiei catalizate

Progresul reactiei
Enzimele reduc energia de activare fara sa afecteze energia libera a
reactiei (G). Astfel, enzimele cresc viteza de reactie.

Enzymes
Lower a
Reactions
Activation
Energy

Etapele aciunii
enzimatice
E + S <> ES <> ES* <> EP <> E + P
I et.
III et.
II et.
I et. formarea complexului enzim-substrat (E-S)
II et. cataliza transformarea S n produsul reaciei
(P) de ctre enzim
III et. - eliberarea P de la E

Mecanismul de aciune al enzimelor

Prima etap:
Difuzia S spre E i legarea cu CA al E formarea complexului ES
1. de scurt durat
2. depinde de concentraia substratului i de
viteza lui de difuzie spre centrul activ al
enzimei.

Mecanismul de aciune al
E
Transformarea complexului primar ES n unul
sau cteva complexe activate - ES*, ES** (este
cea mai lent). Are loc dereglarea legturilor S,
ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma
interaciunii grupelor catalitice ale E.
3. Desprirea produselor reaciei de CA al E i
difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP
disociaz n E i P).
2.

Ipoteza lact-cheie (Fischer) i

coincidena forat (Koshland)
Modelul clasic (Emil Fischer) consider c
potrivirea S cu CA al E este analog cu
potrivirea lact-cheie. Acest model
presupune o rigiditate a structurii enzimei n
zona CA.
modelul Koshland, numit centrul activ
indus- potrivire indus , presupune c CA
nu este rigid, c forma acestuia se modific
n momentul legrii S.

Teoria cheie-lact Fisher

Teoria coincidenei
induse - Koshland

Concept ul clasic "lactcheie

E+S-- ES- E+P

Concept ul
coencidenei inductive

coincidena forat
(Kochland)

Mecanismul de aciune al E

1.

2.
3.

4.

La nivel molecular aciunea E poate fi lmurit prin

urmtoarele efecte:
Efectul de orientare a substratelor (CA al E fixeaz S i le
orienteaz ntr-un mod convenabil pentru aciunea gr.
catalitice)
Efectul de deformare a S (dup unirea n CA molecula S se
ntinde, se deformeaz favoriznd scindarea ei)
Cataliza acido-bazic (n procesul fixrii S n CA asupra lui
acioneaz grupele electrofile ale sectorului catalitic, are loc
redistribuirea densitii electronice n S i ruperea legturilor
din S
Cataliza covalent formarea legturilor covalente ntre CA i
S, complexul ES e foarte instabil, uor disociaz elibernd P
reaciei

Clasificarea actual a
enzimelor.

Toate E se mpart n ase clase,

clasele n subclase,
subclasele n subsubclase,
numrul su de ordin.
Ex: LDH - 1.1.1.27
Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de
enzime
Subclasa precizeaz aciunea E - indic
gruparea sau legtura chimic interesat n
reacie
Subsubclasa precizeaz natura acceptorului
care particip la reacii
Denumirea E denumirea S +tipul reaciei
catalizate +aza

Clasificarea actual a enzimelor

1.
2.
3.
4.

5.
6.

Oxidoreductaze, catalizeaz reaciii de oxido-reducere;

Transferaze, catalizeaz transferuri grupelor
funcionale de la un S la altul (metil, amino, acil,);
Hidrolaze catalizeaz scindri de legturi covalente cu
adiionarea apei ;
Liaze, catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr
adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile
inverse.
Izomeraze, catalizeaz toate tipurile de transformri n
cadrul uneia i aceleai molecul ;
Ligaze (sintetaze), catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu hidroliza legturilor
macroergice (utilizarea ATP).

Clasificarea enzimelor.
- catalizeaz reaciii de oxidoreducere;
-catalizeaz transferuri
grupelor funcionale de la un S
la altul (metil, amino, acil,);
-catalizeaz scindri de
legturi covalente cu
adiionarea apei ;
-catalizeaz ruperea leg. C-C,
C-S i C-N; fr adiionarea
apei, adiia la legturi duble
i reaciile inverse.

-catalizeaz toate tipurile de

transformri n cadrul uneia
i aceleai molecul ;
- catalizeaz formarea de legturi
ntre carbon i O, S, N, cuplate cu
hidroliza legturilor macroergice
(utilizarea ATP).

6 clase de Enzime
1. Oxidoreductaze
catalizeaz reaciii de oxido-reducere

Dehidrogenaze
Oxidaze, Peroxidaze, Catalaze Hidroxilaze,
Reductaze
-

2. Transferaze
1.

catalizeaz transferuri grupelor funcionale

de la un S la altul (metil, amino, acil)

Transaldolaze si transcetolaze
-Acil-, metal-,glicozil- si aminotransferaze
-Kinaze

3. Hidrolaze
catalizeaz scindri de legturi covalente cu
adiionarea apei

Esteraze , -Glicozidaze -Peptidaze

-Fosfataze, -Tiolaze , -Ribonucleaze

4. Liaze
catalizeaz ruperea leg. C-C, C-S i C-N; fr
adiionarea apei, adiia la legturi duble i reaciile
inverse.

4. Liaze
-Decarboxilaze
-Aldolaze
-Hidrataze

5. Izomeraze

catalizeaz toate tipurile de transformri n

cadrul uneia i aceleai molecul

Racemaze
-Epimeraze
-Izomeraze
-Mutaze

5. Izomeraze

5. Izomeraze

6. Ligaze (sintetaze)
catalizeaz formarea de legturi ntre carbon i O,
S, N, cuplate cu hidroliza legturilor
macroergice (utilizarea ATP).

Sintetaze
-Carboxilaze

Specificitatea
este capacitatea unei enzime de a selecta dintr-un
numr mare de S unul particular,
-

-este condiionat de complimentaritatea

conformaional i electrostatic ntre CA al E i S.

S1

S4
S2

Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de

reactii sau transformarea unui anumit S

Specificitatea:
1.Specificitatea

de reacie:
enzimele catalizeaz un anumit tip de
reacie ce st la baza clasificrii lor: o
reacie redox, un transfer a unei grupe
funcionale, formarea unei legturi, etc.

2. Specificitatea de substrat a
enzimelor
I. Specificitatea absolut de substrat
enzima catalizeaz transformarea
doar a unui singur substrat

Specificitatea de substrat
a enzimelor
II. Specificitatea relativ de substrat
enzima catalizeaz transformarea
unei grup numeros de substane cu
diferit structur chimic n acelai
mod
Ex. citocromul P450 hidrolizeaz
cteva mii de substane

Specificitatea de substrat
a enzimelor
specificitate

relativa de substrat
- asigura transformarea unui grup de
substante inrudite chimic i se
intlnete n diferite ipostaze:

Specificitatea de substrat
a enzimelor
III. Specificitatea absolut de grup
E catalizeaz transformarea unui grup de
substrate analogice structural (ADH - unui
grup de alcooli monohidroxilici, recunoscind
gruparea OH

Specificitatea de substrat
a enzimelor
IV. Specificitatea

relativ de grup
enzima catalizeaz transformarea unei
anumite grupe sau legturi chimice din
diverse substane chimice
Ex. pepsina hidrolizeaz legturile peptidice
formate de gruprile carboxilice ale
aminoacizilor aromatici Phe, Tir i Trp

Specificitatea relativ de
grup

V.Specificitate
stereochimic
-

E catalizeaz transformarea numai a unuia

din stereoizomerii posibili (D sau L; sau
numai a izomerului cis- sau trans-).
Ex: Amilaza scindeaz legturile 1-4
glucozidice din amidon sau glicogen i nu
influeneaz asupra legturilor din
celuloz.

PROPRIETILE
ENZIMELOR

Obiectivele:
1.
2.
3.
4.
5.

6.
7.

8.
9.
10.

Cinetica enzimatic. Influena concentraiei enzimei i a substratului, a pH-ului

i a temperaturii asupra activitii enzimatice.
Principiul determinrii activitii enzimelor. Unitile de activitate a enzimelor.
Inhibiia activitii enzimelor (specific i nespecific, reversibil i ireversibil,
competitiv, necompetitiv i noncompetitiv).
Reglarea activitii enzimelor (proteoliz parial, reglarea alosteric,
autostructurarea cuaternar, reglarea covalent).
Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice,
compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimelor n celul. Importana
principiului de retroinhibiie.
Izoenzimele particularitile structurale i funcionale, valoarea lor
biomedical.
Deosebirile n componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele
organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni
(enzimodiagnosticul).
Metodele de obinere i purificare a enzimelor. Cromatografia de afinitate.
Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor imobilizate
n medicin.

Factorii care influieniaz

activitatea E
Temperatura
pH
Concentraia

S
Concentraia E
electroliii

Termolabilitatea (t)
E

sunt termolabile
t optim a E din organism
- 35 - 40 C
odat cu creterea t cu
10C (dac lum punctul
de plecare 0 ) - V
reaciei enzimatice
sporete de 1,5 ori,
atingnd max la t 40C.
Majorarea de mai departe
duce la micorarea
activitii enzimatice denaturarea proteinei.

Termolabilitatea (t)
Unele

Ea
microorganismelor
termofile sunt active la t
de 80C
La t joase E se
inactiveaz (excepii:
catalaza: activitate max la
t=0 C)

Termolabilitatea (t)
v

reaciei odat cu
t este nterpretat prin
prisma "energiei de
activare".
Pentru fiecare E se
poate stabili o t optim
la care V atinge
valoarea max, mai
departe V scade din
cauza denaturrii.

Aciunea pH asupra activitii

enzimatice

Fiecare E are pH
optim propriu
(manifest activitate
max).
Majoritatea E celulare
au pH-ul optim- 6-8
(7,4)
excepii: hidrolazele
acide lizozomale pH=
5;
MAO din membrana
MC externa pH= 10.

Aciunea pH asupra activitii

enzimatice

1.
2.

3.

La E digestive pH
optim este cel al
sediului lor de
aciune:
Pepsina pH 1,5
2,
Amilaza
pancreatic - pH
7,2,
Tripsina - pH 7,88,0

Aciunea pH asupra
activitii enzimatice

Aciunea pH asupra
activitii enzimatice

1.
2.
3.

pH optim e dependent
de:
gradul de ionizare a
grupelor funcionale,
afinitii E fa de S,
stabilitii E.

Aciunea pH asupra activitii

enzimatice

In CA al E se afl grupri
ionizabile, acide sau bazice.
Acestea interacioneaz
direct cu ionii H+ si OH-,
rezultatul fiind creterea
sau scderea gradului lor
de disociere, acionnd ca
adevrai inhibitori ai E
(amilaza n sucul gastric).
Ionii H+ si OH- au un efect
denaturant asupra E - rup
legturile, ce determin
structura teriar.

Aciunea pH asupra
activitii enzimatice
Deci mrind sau
micornd pH-ul
mediului, se poate
regla activitatea
catalitic a E.
Dependena activitii
E de variaia pH-ului curb n forma de
clopot.

[E]

n condiii standard 2 mol de E ntr-o anumit

perioad de timp vor transforma de 2 ori mai
multe molecule de S dect 1 mol de E (relaie
direct proporional).

[S]
Grafic se reprezint sub
form de o curb de tip
hiperbolic.
n perioada iniial a
reaciei V crete pe
msur ce crete [S]. La
un moment dat cnd CA al
E se ocup de S V nu
mai crete. Ea rmne
constant i corespunde
V max a reaciei.
n cazul E alosterice
curba reprezint un
aspect sigmoid

[S]
Analiza curbei
hiperbolice arat c ea
reprezint 3 zone:
a. V de reacie crete
proporional cu c% S
b. Creterea este mai
ncet
c. V de reacie nu mai
crete

Aceast curb este numit curba lui MichaelisMenten i se exprim prin ecuaia:
[S]
V=Vmax x
_________
Km +[S]

unde: V-V reaciei la un moment dat

Vmax- viteza max
Km-constanta lui Michaelis Menten
[S] C% molar a S

Km-constanta lui Michaelis

Menten
Km- este acea concentraie de S pentru
care v de reacie este jumtate din Vmax.
Km reflect afinitatea E pentru S i anume
cu ct Km este mai mic cu att afinitatea
este mai mare i invers.

Ecuaia lui LineweawerBurk:

Din

curba lui
Michaelis Menten nu
poate fi determinat V
max (deoarece nu se
pot atinge c% infinite
ale substratului).
Se procedeaz la
linearizarea ecuaiei,
obinndu-se ecuaia
lui LineweawerBurk:

1
Km
1

V0 Vmax[S] Vmax

Ecuaia lui Lineweawer- Burk:

Mecanismele de activare
aE
Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea
2. specifice
Se activeaz la:
1. majorarea concentraiei S cnd este
insuficient
2. majorarea cantitii E
3. introducerea Co cnd sunt insuficiente
4. Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu

Mecanismele de activare a E
Deosebim urmtoarele tipuri de reglare a
activitii enzimatice:
1. Reglare covalent - proteoliza limitata
2. Reglare covalent fosforilare/
defosforilare
3. Autostructurarea cuaternar
4. Alosteric
5. Reactivare
-

Reglarea covalent
- Proteoliz limitat
Unele enzime (proteine) se sintetizeaz n forma
neactiv de precursor proenzime (zimogeni)
Exemplu:
1) enzimele digestiei: pepsinogenul,
chimotripsinogenul, tripsinogenul, proelastaza,
procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in
stomac i duoden.
2) coagularea singelui e determinat de cascada de
reacii cu activitate proteolitic;
3) hormonii proteici (insulina);
4) proteinele fibrilare (colagenul).

Proteoliz limitat
-este

scindarea unui sector al catenei

n rezultatul creia E se
restructureaz i se formeaz CA.
H+
Pepsinogen ------pepsin
-42AA

Importana biologic a
prezenei formelor neactive
Zimogenii sunt produse la locurile de sintez
(mucoasa gastric pentru pepsinogen,
pancreasul pentru toate celelalte), activrile se
produc la locul de aciune (stomac, intestin
subire)
1. Protejaz de proteoliz proteinele celulelor
productoare de E.
2. Este o forma de rezerv a E, care rapid pot fi
activate i intervin n reacie.

Reglarea covalent - fosforilaredefosforilare

unele

E sunt active n forma fosforilat, iar

altele n forma defosforilat.
Ex.:
glicogen fosforilaza activ n forma
fosforilat;
glicogen sintaza este activ n forma
defosforilat

Reglarea covalent fosforilare-defosforilare

Reaciile de fosforilare sunt catalizate de kinaze
specifice.
E-OH + ATP -------- E-O-P +ADP
Defosforilarea are loc sub aciunea fosfotazei specifice
E-OP +H2O------- E-OH +H3PO4

Autostructurarea cuaternar
Este caracteristic E ce posed structur
cuaternar
Fiecare protomer n parte nu e activ
La asamblarea lor se modific conformaia
fiecrui protomer i corespunztor se modific i
conformaia CA, devenind astfel favorabil pentru
fixarea i transformarea S

CA

EE

s
AlloM

Inhibiia activitii enzimelor

Deosebim:
1. inhibiie

nespecific (T, pH, agenii

denaturrii )
2. inhibiie specific
Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil.
La o inhibiiie reversibil - inhibitori se
fixeaza slab, necovalent de E

inhibiiia ireversibil
I covalent se fixeaz de E cu formarea EI
nedisociabil.
Exemple: Diizopropilfluorfosfatul (toxina
neuroparalitica) se fixeaz de OH-serinei n CA a
acetilholinesterazei (scindeaz acetilcolina) cu
formarea E neactive.
n rezultat se menine efectul acetilcolinei n
permanen ce duce la paralici muscular i
moarte.
- ionii metalelor grele (Hg, Pb) inhib gruparea SH
a multor E; acidul iodacetic- inhib ribonucleaza

Inhibiie ireversibil

Tipuri de inhibitie
Deosebim:
1. Inhibiie

competitiv
2. Inhibiie necompetitiv
3. Inhibiie prin exces de S
4. Inhibiie alosteric

Inhibiia competitiv
I

se aseamn dup structur cu S.

Apare o competiie dintre I i S pentru CA.
Nu e posibil simultan fixarea S i a I.
E va fixa pe acel competitor care se afl intro concentraie mai mare.
E+I ---- E
Este o inhibiie reversibil- I poate fi nlturat
cu adugarea n exes a S.

Inhibiia competitiv

Inhibiia competitiv
Inhibiia

competitiv
diminueaz v
catalizei:
nu modific V max,
dar crete mult Km,
micornd
afinitatea E pentru
S.

Lineweawer- Burk

Inhibiia competitiv
Exemplu:

inhibiia SDH cu malonat (SDH

-oxideaza succinatul in fumarat).
Malonatul inhib aceasta E datorit
asemnrii cu S.
Sulfamidele substituie acidul p-aminobenzoic din a. folic, indispensabil pentru
creterea microorganismelor, mpedicnd
dezvoltarea lor (antibacterian)

inhibiia

enzimei (SDH)cu malonat. SDH oxideaza

succinatul in fumarat)
Malonatul inhiba aceasta E datorita asemanarii cu S.
Particularitatea principal a acestui tip de inhibiie
este c poate fi nlturat cu adugarea n exes a
S(succinat).

Inhibiia necompetitiv
Inhibitorul

nu se aseamn ca structur cu S
I i S se leag simultan cu E dar locusurile sint
diferite (I nu se leag n CA)
E+S+I--------- ESI
Acest tip de inhibiie nu se nltur prin exces
de substrat.
I necompetitivi scad V max dar nu afecteaz
Km

Inhibiia necompetitiv

Inhibiia necompetitiv
Lineweawer- Burk

Inhibiia necompetitiv
Ex:

cianurile, CO se fixeaz cu Fe 3+
din citocromoxidaz ---se ntrerupe
LR
I poate fi nlturat de substane care l
leag numite reactivatori

I i S se leag simultan cu E n locusuri diferite

Mrirea concentraiei de S nu micoreaza inhibiia.

Cei

mai de vaz inhibitori de acest tip n celulele vii sint

produsele intermediare ale metabolismului, care reversibil se
fixeaz la unele E reglatoare i modific activitatea lor.

Inhibiia
uncompetetiv

se leag la
complexul ES,
E+S----ES +I----ESI
Micoreaz i Km
i Vmax

Inhibiia uncompetitiv
Lineweawer- Burk

Alte tipuri de inhuibiie

inhibiia

prin modificarea covalent a

moleculei E - prin fosforilare pe baza
ATP-ului.
Unele E fosforilate pierd activitatea de
exemplu enzima glicogensintaza
Inhibiia prin exces de S n CA se
fixeaz simultan surplus de S ce nu
poate fi transformat. Este o inhibiie
reversibil nlturarea S

Inhibiie

alosteric - inhibitorul (efectorul) se leag n

centrul alosteric al enzimei, modificnd conformaia
moleculei (structura teriar) ce are ca consecin
deformarea centrului activ.

E
S CA
CA E

M
Allos

Retroinhibiie

Izoenzimele- izoE

1.
2.
3.

forme moleculare multiple ale E, ce catalizeaz

aceeai reacie chimic, dar difer prin structur,
proprieti fizice, chimice i cinetice
Diferite forme de izoE se pot gsi:
mpreun (LDH din ficat);
n esuturi diferite (fosfotaza acid n prostat i
hematii);
sau n diferite compartimente ale aceleiai celule
(MDH MC i Cit)

IzoE difer ntre ele prin:

1.
2.
3.
4.
5.

sarcina electric (ce permite separarea

lor prin electroforez);
V max de cataliz,
sensibilitatea fa de modulatorii allos;
pH-optim de aciune;
termolabilitate, au afinitate diferit fa
de S.

STRUCTURA IZOE
Sunt E oligomere, cu structur cuaternar,
alctuite din cel puin 2 protomeri diferii
Ex. LDH (lactat piruvat)
Prezint un tetramer, alctuit din 2 tipuri de
subuniti (H inim; M- muchi) n
diferite raporturi; codificate de gene
diferite.
HHHH inim; HHHM;HHMM; HMMM;
MMMM muchi

Izoformele lactat dehidrogenazei (LDH)

LDH-1 (4H) - in inima
LDH-2 (3H1M) - in sistemul reticuloendotelial
LDH-3 (2H2M) - in plamani
LDH-4 (1H3M) - in rinichi
LDH-5 (4M) - in ficat si muschiul striat

(H este tipul de monomer intalnit in inima, iar M este monomerul caracteristic

izoenzimei hepatice si musculare)

Rol in diagnosticul medical

indicand distrugeri celulare

ROLUL izoenzimelor
n controlul metabolic ( faciliteaza adaptarea
metabolismului in diferite esuturi.)
Ex: in miocard predomina H4 (inhibat de piruvat) orienteaz oxidarea piruvatului pe cale aeroba.
M4 este activat de catre piruvat i orienteaz
transformarea piruvatului pe cale anaerob spre lactat.
2. n diagnosticul unelor stri patologice (variaia diferitor
forme de izoE)
1.

LDH

1.
2.

Norma- 100-190U/L
Creterea de LDH 1 i LDH2:
infarctul miocardic
anemia hemolitic/ megaloblastic
LDH5 crescut - afeciuni hepatice,
necroza hepatic

Exemple de izoenzime:
1. Creatinfosfokinaza

-2 tipuri de monomeri:
M-Muscle i B brain
2. LDH
3. MDH
4. Aldolaza
5. Fosfataza alcalin
6. Fosfataza acid

Creatinfosfokinaza (CPK)

CPK M2

Muchi
scheltic

Miodistrofii

CPK MB

Muchi
cardiac

Miocardiop
atii

Creier

Ischemii
cerebrale

CPK B2

Sistemele
polienzimatice

Fiecare celul a organismului conine

setul su specific de E.
Unele se gsesc n toate celulele, altele
sunt prezente doar n anumite celule
sau anumite compartimente celulare.
Funcia fiecrei E, nu este izolat, ci
strins legat de funcia altor enzime.
Astiel din E aparte se formeaza sisteme
polienzimatice sau conveiere.

Tipurile de organizare a
sistemelor polienzimatice
Se cunosc urmatoarele tipuri de
organizare a sistemelor
polienzimatice:
1. - funcional,
2. - structural-funcional
3. - mixt.

Organizarea funcional
enzimele sunt asociate n sistemul polienzimatic
cu ajutorul metaboliilor, care difuzeaz de la o
enzim la alta.
produsul reaciei primei E servete drept S
pentru E urmtoare etc.
Ex.: glicoliza. Toate enzimele participante la
glicoliza sunt n stare solubil, legtura se face
doar prin intermediarii metabolici.

E1
E2
E3
E4
A---------------- B------------- C---------- D---------- P

Organizarea structuralfuncional
E sunt fixate prin legturi slabe pe o protein
central, care poate fi chiar una din E.
Proteina central dispune de un bra care
fixeaz S i l duce la E1, care l transform n
P1;
P1devine S2 , braul l preia i l duce la E2, care
l transform n P2.
Avantajul este c braul duce de fiecare dat S la
E corespunztoare, potrivindu-l cu mare
exactitate pe CA, ceea ce asigur n ansamblu o
vitez mai mare dect cea corespunztoare
aciunii E neasociate.

Organizarea structuralfuncional
Ex.-

complexul polienzimatic
piruvatdehidrogenazic, constituit din 3 E
i 5 Co
sintetaza acizilor grai constituit din 7
E legate structural de PPA, care n
ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a
AG.
E se pot aranja n lan, fixndu-se de MB.
Ex.enzimele LR, care particip la transferul
de H+ i e.

Tipul mixt de organizare

reprezint

o mbinare a ambelor tipuri de

organizare, adic o parte din sistemul
polienzimatic are organizare structurala,
iar cealalta parte - organizare funcional.
Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime
sunt asociate n complex structural
(complexul 2-oxoglutaratdehidrogenazic),
ar alt parte se leag funcional prin
metaboliii de legtur.

Unitile de msurare a activitii E

1 UI cantitatea de E care catalizeaz
transformarea unui mol de S ntr-un minut n
condiii standard
2. 1 Cat (catal) cantitatea de E care catalizeaz
transformarea unui mol de S ntr-o secund n
condiii standard(1U.I.=16,67 nkat)
Condiiile standard - pHul ~ 7,0; t = 25C;
p = 1 atm;
C substratelor 1 M.
1.

1 cat = 6 107 UI
1 UI = 16.67 10-9 cat

Unitile de msurare a activitii E

Activitatea

specific reprezint
numrul de uniti enzimatice per mg
de protein-enzim
AS= Nr UI/mg protein
Este expresia puritii unei enzime

Metodele de separare i
purificare ale E

1. Dializ

2. Salifiere

3. Cromatografie
4. Gel-filtrare

5. Electroforez

Cea mai eficient

cromatografia de afinitate

Metodele de determinare a
activitii E
Viteza reaciei este proporional
cu
1.Viteza consumului substratului
2.Viteza formrii produsului
3.Viteza transformrii coenzimei

Cantitatea substanei respective

se determin colorimetric.

Deosebirea privind componena

enzimatic a organelor i esuturilor.
Enzimele organospecifice.
Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular:
n citoplasm (LDH, aldolaza),
n MC * glutamatdehidrogenaza),
n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin).
Acestea E n norm n plasm se gsesc n c% foarte
mici.
La afeciunile celulare activitatea acestor E n plasm
este brusc mrit.

Utilizarea E n practica
medical
Preparatele farmaceutice contemporane sunt
asociate i conin ca regul urmtoarele enzime:
tripsin,
chimotripsin,
lipaz,
amilaz,
pancreatin,
bromelain,
papain,
rutin (vit. P).

Utilizarea E n practica medical

Efectele
exercitate de preparatele enzimatice

1.De substituie (E digestive)

2.Fibrinolitic i trombolitic
3.Antiedematic
4.Analgezic
5.Antiinflamatoare
6.Imunomodulatoare

Terapia cu enzime

Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc

efecte importante i specifice.
Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor
ca medicaie e:
- distribuie redus n organism, dependena de
dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare
(prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de
receptori i fixate n anumite locuri
- posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul
avnd tendin de a capta i reine proteinele
strine;
- inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive
n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le
scurteaza de asemeni actiunea;
- potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot
genera reacii de hipersensibilizare adesea grave i
pot inactiva enzima.

Tehnici propuse pentru optimizarea

proprietilor terapeutice ale
enzimelor.
- prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei,
folosit n leucemie
- metode de obinere a enzimelor imobilizate.
De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate
insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin
ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in
cursul polimerizarii.
Aceste preparate catiga rezistena la enzimele
proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi
alterate proprietile farmacocinetice.
Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu
polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai
glutaminasparaginazei sau ribonucleaza, enzime cu efect
antitumoral.

Tehnici propuse pentru optimizarea

proprietilor terapeutice ale
enzimelor.
- incapsularea enzimelor in lipozomi microsfere cu membrana bistratificat
lipido- proteic, in hematii umane sau in alti
transportori celulari.
- Noile forme obinute prezint un potenial
de ntire tisular.
- De ex. in cazul unor boli genetice cauzate
de deficitul unor enzime lizozomale se
impune o terape de substituie, enzima
trebuind intit direct in lizozomi.