Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
DETERMINAREA CONCETRAIEI SOLUIILOR PRIN SPECTROFOTOMETRIE DE ABSORBIE N DOMENIUL VIZIBIL 1. Scopul lucrrii Determinarea concentraiei unei soluii de acridin-orange prin msurarea extinciei (la corespunztoare maximului de absorbie) cu ajutorul unui spectrofotometru n domeniul vizibil. 2. Principiul lucrrii Spectrofotometria reprezint o clas larg de metode de investigare. Ea face parte dintr-o clas i mai mare i anume clasa metodelor spectrometrice. Orice metod spectrometric nregistreaz i msoar spectre n general electromagnetice. Un spectru reprezint totalitatea valorilor unei mrimi ce caracterizeaz un sistem. n cazul unui spectru electromagnetic acesta reprezint totalitatea lungimilor de und (frecvenelor) pe care un sistem le poate emite sau absorbi. Atunci cnd un sistem absoarbe radiaii electromagnetice el trece pe un nivel energetic superior iar cnd emite pe unul inferior. Condiia (de rezonan) ce trebuie ndeplinit este: h=Es-Ei unde Es = energia nivelului superior, Ei = energia nivelului inferior, iar = frecvena radiaiei. Din condiia de rezonan rezult c sistemele pot absorbi aceleai radiaii pe care le pot i emite. Vom obine deci, practic, aceleai informaii fie c analizm ce emite sistemul fie c nregistrm ce absoarbe. Dac lungimile de und emise sau absorbite au valori ntr-un domeniu cvasicontinuu obinem spectre de benzi iar dac variaz discontinuu sunt spectre de linii. Spectrele de linii sunt n general specifice substanelor n stare atomic n timp ce spectrele de benzi sunt, n general, specifice substanelor n stare molecular. Din legea absorbiei luminii: I=I010-cd (legea BEER-LAMBERT) unde I0 = intensitatea luminii incidente pe prob, I = intensitatea luminii emergente din prob, = coeficient specific de absorbie zecimal (depinde de natura substanei i de lungimea de und a luminii incidente), c = concentraia substanei absorbante, d = grosimea probei se poate defini extincia (E): E = lg
I0 = cd I
Din definiia extinciei se vede c putem determina concentraia unei substane msurnd extincia. Pentru ca precizia msurtorii s fie ct mai bun extincia trebuie msurat la lungimea de und () corespunztoare maximului de absorbie al substanei. Stabilirea maximului de absorbie se face trasnd curba de absorbie E=f(). Stabilind lungimea de und la care substana prezint maximul de absorbie putem trasa graficul E=f(c) cu valorile extinciei msurate la corespunztoare maximului de absorbie. Graficul trebuie s fie o dreapt care trece prin origine. Odat trasat graficul putem determina concentraia necunoscut prin msurarea extinciei soluiei la aceeai i interpolare sau extrapolare pe grafic. n locul trasrii graficului putem determina ecuaia dreptei de regresie (metoda celor mai mici ptrate) E=a+bc cu ajutorul programului existent pe calculator iar apoi vom determina concentraia necunoscut prin nlocuirea extinciei corespunztoare n ecuaia dreptei.
43
Descrierea aparaturii Schema bloc a unui spectrofotometru este reprezentat n Fig. 25:
Fig. 25 Schema bloc a spectrofotometrului S = sursa de radiaii care trebuie s emit toate din domeniul investigat (n cazul nostru este un bec cu incandescen ce emite lumin alb). M = monocromator, alege din ce emite sursa o singur (poate fi cu prism, cu reea de difracie sau filtre). B = solventul (blanc) folosete la etalonarea de T=100% P = proba pentru care msurm E (sau T) D = detectorul transform lumina n curent electric n cazul nostru este o fotocelul dar la aparatele mai performante poate fi un fotomultiplicator sau fotodiod. A = amplificator I = nregistrator, microampermetru gradat liniar n pentru transmisie i logaritmic pentru extincie.
Fig. 26 a) Spectrofotometrul Spekol 3. Mod de lucru cu spectrofotometrul Spekol 1. din butonul 2 se alege (pentru trasarea curbelor de absorbie se vor face msurtori ntre 430 i 530 nm cu citiri din 10 n 10 nm). 2. n cuva aparatului se introduce eprubeta cu solventul (apa distilat) 3. se pune comutatorul 1 pe poziia 0 4. din butonul 3 se regleaz acul aparatului de msur pentru a indica transmisia T=0 % 5. se pune comutatorul 1 pe poziia I 6. din butonul 4 se regleaz acul aparatului de msur la indicaia T=100 % 7. se introduc pe rnd eprubetele cu soluii i se citete extincia E pe scala de sus a aparatului de msur (scal logaritmic de la dreapta la stnga) 8. se repet toate operaiile pentru celelalte
44
Se pornete aparatul din butonul de pornire i se ateapt circa 5 minute pentru ca aparatul s i fac verificrile 1. din butonul 3 se alege modul absorban (extincie) 2. se introduce eprubeta cu ap distilat (B) 3. din butoanele 1 se alege lungimea de und (se vor face citiri ntre 430 i 530 nm din 5 n 5 nm) 4. se apas butonul 2 (aparatul va face automat reglrile de 0 i 100) 5. se introduc pe rnd eprubetele cu soluii iar pe ecranul nregistratorului (I) se citesc absorbanele (extinciile) sau se printeaz prin apsarea butonului 4 6. se modific lungimea de und i se repet toate operaiile Interpretarea rezultatelor Pe aceeai hrtie se traseaz graficele E=f() pentru fiecare soluie. Soluiile fiind de aceeai natur forma graficelor trebuie s fie aceeai i curbele trebuie s aib un maxim la aceeai lungime de und. Cu valorile extinciei corespunztoare (aceeai pentru soluii indiferent de concentraie) la care sau obinut maximele de absorbie se traseaz graficul E=f(C). Pe grafic, prin interpolare sau extrapolare, se determin concentraia necunoscut. Cu rezultatele individuale obinute de fiecare student se va face calculul erorilor (cu ajutorul programului de prelucrare statistic).
45
Cu programul de regresie se calculeaz parametrii a i b ai ecuaiei E=a+bC, iar apoi se calculeaz concentraia necunoscut. n final se compar concentraia calculat cu cea determinat grafic.
Metode spectrofotometrice utilizate n medicin: Numele Informaii Informaii (aciuni) metodei (aciuni) Indirecte Directe Distrugerea celulelor Gama-terapie Absorbia (preponderent cele (cobaltoterapie) radiaiilor n canceroase) esuturi Scintigrafia nregistrarea Determinarea distribuiei emisiei de radiaii radioizotopilor introdui n organism Radiografie Absorbia Imagini ale organelor radiaiilor X n interne dense (esut esuturi osos) Tomografie Absorbia razelor Imagini a oricrei seciuni computerizat cu X n esuturi prin corp raze X Spectrofotometrie Absorbia acestor Determinarea radiaii de ctre concentraiilor diferitelor molecule molecule Oximetrie Absorbia Determinarea raportului radiaiilor roii i Coxihemoglobin/Chemoglobin infraroii de ctre total snge Rezonan Absorbia Urmrirea proceselor n electronic de microundelor de care apar radicali liberi spin (RES) ctre radicalii liberi aflai n cmp magnetic Detalii privind procesele Tomografie RMN Absorbia n care sunt implicate funcional radioundelor de (local) ctre nuclee cum aceste nuclee ar fi P31, Na23, F119 Imagini in seciune prin Imagistica prin Absorbia tomografie de radioundelor de corp, orientate sub orice ctre nucleele de unghi rezonan hidrogen plasate magnetic nuclear (IRM, n cmp magnetic RMN) Absorbia Spectroscopia Informaii privind prin rezonan radioundelor de metabolii (creatina, magnetic in vivo ctre nuclee cum colina, N-acetilaspartat, ar fi H1, (MRS) P31, lactat etc.), suprapuse pe imagine anatomic Na23, Fl19 Semnificaii Clinice Terapia cancerului
Diagnostic funcional al organului Diagnosticarea fracturilor, fisurilor etc. Imagini cu detalii de ordinul milimetrului (mai ales pe esuturi dense) Diagnosticarea diferitelor maladii (ex. diabetul) msurnd concentraii Monitorizarea gradului de oxigenare a sngelui Se sper c se vor putea urmri procesele metabolice
Informaii privind procese tumorale; cnd gradul de malignitate crete, cresc nivelele de colin, lactat i scad NAA i creatinina. Aplicaii n patologia sistemului nervos, prostata.
46
DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE TENSIUNE SUPERFICIAL 1. Scopul lucrrii Determinarea coeficientului de tensiune superficial pentru o substan tensioactiv folosind stalagmometrul Traube. 2. Principiul lucrrii Tensiunea superficial este cauzat de atracia dintre moleculele de lichid. In volumul de lichid fiecare molecul interacioneaz cu moleculele vecine prin fore egale pe toate direciile, rezultanta acestor fore fiind nul. La suprafaa lichidului moleculele nu sunt la fel de intens atrase de moleculele mediului (gaz, vid sau alt lichid) de deasupra lichidului i ca urmare toate moleculele din stratul superficial sunt supuse unei fore de atracie rezultant indreptat spre interior, care este echilibrat numai de rezistena lichidului la compresiune. Suprafaa stratului superficial, acioneaza n multe cazuri ca o membran elastic, ca de exemplu la baloanele de spun. Lichidul va alege acea form pentru care energia dat de interaciunile moleculelor n contact va fi minim, adic va alege suprafaa minim, deoarece astfel se asigur un numr minim de vecini, deci de interaciuni. Acest fapt explic forma picturilor i a suprafeelor libere de lichid. Aceste fore de tensiune superficial explic comportarea lichidelor pe diverse suprafee solide. Forele n punctele de contact ale lichidului cu celelalte medii determin unghiurile de contact dintre lichid i celelalte medii. Unghiul de contact este mrginit de tangenta la suprafaa lichidului i suprafaa solidului. Meniscurile concave au unghiul de contact mai mic de 900 iar meniscurile convexe au unghiurile de contact mai mari de 900.
Fig. 27 Lichidele care ud suprafeele au forele rezultante de atracie (dintre moleculele de lichid-lichid, lichid-solid, lichid-gaz) orientate n sensul intinderii lichidului
Fig. 28 Lichidele care nu ud suprafeele au forele rezultante de atracie (dintre moleculele de lichid-lichid, lichid-solid, lichid-gaz) orientate n sensul strngerii lichidului ca ntr-o membran
Fig. 29 Forele de interaciune dintre moleculele din stratul superficial dau rezultante orientate spre volumul de lichid, comportndu-se ca o membran elastic
Fig. 30 Plutirea unui obiect usor pe suprafaa unui lichid se datoreaz echilibrului dintre greutatea lichidului i forele de tensiune superficiale laterale, care sunt paralele cu suprafaa n punctul de contact cu lichidul
Experimental se dovedete c forele de tensiune superficial depind numai de lungimea conturului de contact dintre dou medii diferite l, constanta de proporionalitate fiind numit coeficient de tensiune superficial . F= l
47
Fora de tensiune superficial este tangent la suprafaa lichidului n contact cu alt mediu i perpendicular pe conturul de contact. Se poate calcula energia potenial superficial nglobat n stratul superficial cu ajutorul lucrului mecanic efectuat pentru a mri suprafaa stratului superficial pna la S: L= - S Din formule se poate deduce coeficientul de tensiune superficial ca fiind egal cu lucrul mecanic necesar pentru mrirea suprafeei libere a unui lichid cu o unitate. = - L/S Coeficientul de tensiune superficial se msoar n N/m i se gsete n tabele pentru diverse lichide. Acest coeficient scade cu cresterea temperaturii. Dintre toate lichidele, cu excepia mercurului, apa are cel mai mare coeficient de tensiune superficial =73x10-3 N/m. Presiunea la suprafee curbe de lichid
Fig. 31 Pelicula de lichid i forele de tensiune superficial Forele de tensiune superficial, care acioneaz asupra unei pelicule de lichid, determin o presiune suplimentar, conform ecuaiei Young-Laplace:
1 1 + p = R R 2 1
unde p este diferena de presiune pe feele peliculei i R1 i R2 sunt razele de curbura ale peliculei.
Fig. 32 Imaginea lichidului n contact cu un perete solid. Fora rezultant (a forelor de coeziune i de adeziune) este perpendicular pe suprafaa lichidului, n apropierea peretelui: lichidul nu ud; b) lichidul ud Suprafaa curba a lichidului exercit o presiune suplimentar pozitiv sau negativ, dup cum suprafaa este convex sau concav. De exemplu ntr-un tub capilar de sticl introdus n mercur, nivelul mercurul rmne sub nivelul mercurului din exteriorul tubului i invers, urc n cazul unui tub de cupru, ca n Fig. 33.
48
Fig. 33 Acelai lichid poate s ude un material i s nu ude altul Ascensiunea lichidului ntr-un vas capilar este dat de formula lui Jurin, dedus pornind de la egalitatea greutii coloanei de lichid din vas cu forele de tensiune superficial: h=2 cos/(gr) unde este densitatea lichidului, cos este unghiul de racordare i r este raza tubului capilar. Tensiunea superficial scade n general cu creterea temperaturii lichidului, atingnd o valoare critic de 0 la temperatura critic. La dizolvarea unui solvit n ap, coeficientul de tensiune superficial al acesteia poate s rman neschimbat, s creasc usor sau s scad, n funcie de structura molecular a solvitului. Astfel zaharul n soluie nu are nici un efect, srurile anorganice mresc tensiunea superficial, alcoolul reduce tensiunea supeficial, surfactanii reduc tensiunea superficial pn la o valoare minim sub care nu mai au nici un efect. Substanele care micoreaz tensiunea superficial a apei se numesc tensioactive. Substanele care dizolvate n ap mresc sau nu-i modific tensiunea superficial a apei, se numesc tensioinactive. Traube consider c tensioactivitatea substanelor din seria omoloag (alcooli, acizi organici) este cu att mai pronunat cu ct lanul atomilor de carbon este mai lung. Importana tensiunii superficiale n biologie Fenomenele superficiale joac un rol important la nivelul alveolelor pulmonare. Stratul superficial al apei care cptuete alveolele pulmonare are tendina s strng lichidul i ca urmare s expulzeze aerul din alveole. Exist nsa celulele epiteliale specializate (celule epiteliale alveolare de tip II), care ocup 10% din suprafaa alveolelor pulmonare i secret un surfactant agent tensioactiv de suprafa care reduce mult tensiunea superficial. Surfactantul este un amestec complex de fosfolipide, proteine, ioni. Componentul responsabil pentru scderea tensiunii superficiale este dipalmitoil-lecitina, care nu se dizolv n lichidul alveolar ci se rspndete pe suprafaa acestuia deoarece molecula sa are o parte hidrofil ndreptat spre lichidul alveolar i o parte hidrofob orientat spre aerul alveolar. Se formeaz astfel o fa lipidic hidrofob, care are tensiunea superficial de la 1/12 la 1/2 din tensiunea superficial a apei pure, (73x10-3 N/m). Pentru alveolele de 100m, cptuite cu surfactant pulmonar normal, presiunea determinat de tensiunea superficial (p2/r) este de 3 mmHg iar fr surfactant presiunea este de 13,5 mm Hg. Aceast reducere asigur presiunea transpulmonar necesar meninerii plmnilor n stare de expansiune n timpul respiraiei, cnd suprafaa alveolar a plmnului variaz cu 7 m2 . Unele lichide biologice au proprietatea de a-i reface tensiunea superficial scazut datorit prezenei unor substane tensioactive, proprietate numit de tensiotampon, ntlnit i la serul i plasma din snge. Fenomenul se datoreaz prezenei ionilor de Ca++ din snge, care formeaz compleci insolubili netensioactivi cu substana tensioactiv, precum i datorit moleculelor proteice, care adsorb substana tensioactiv. Prin aceste mecanisme homeostatice plasma pastreaz aproximativ constant tensiunea superficial.
49