Organizarea structural i

funcional a celulei
animale
Nucleul
Membrana plasmatic
Mitocondria
Organite implicate n sinteza i transportul
macromoleculelor:
Reticulul endoplasmic
Aparatul Golgi
Organite implicate n degradarea intracelular
a macromoleculelor:
Lizosomii
Citoscheletul
NUCLEUL


N U C L E U L
Caracterizare general

Nucleul este cel mai voluminos organit al celulei EK
(6-10% din volumul celulei)
Nucleul ndeplinete funcii fundamentale pentru
existena celulei:
Stocarea i transmiterea informaiei genetice de la o
celul ctre celulele descendente, pe parcursul
diviziunilor celulare succesive
Controlul activitii celulare (nucleul controleaz
funciile metabolice ale celulei prin reglarea transcrierii
genelor)


Nucleul
Nucleus, nuculeus smbure, lb.latin
1831 - Robert Brown (botanist scoian)
a efectuat studii de microscopie optic pe esuturi
vegetale i a descris n detaliu aceast formaiune
intracelular;
a enunat conceptul de celule nucleate.
Din punct de vedere morfologic nucleii din diferite tipuri
de celule prezint variaii privind mrimea i forma.
Forma cea mai comun este cea sferic-elipsoidal.
De regul nucleul ocup n celul o poziie central.
n cadrul organismului uman exist i celule anucleate
(eritrocitele mature, trombocitele).
n nucleu exist 3 categorii majore de molecule: ADN,
ARN i proteine.

Robert Brown
(17731858)
Celule anucleate
Forma cea mai comun este cea
sferic-elipsoidal.
Excepii:
Nuclei cu aspect lobat
De regul nucleul ocup n
celul o poziie central.
Excepie:
Nucleu poziionat periferic
Celul din esutul adipos (adipocit)
Nucleu
Celule din esutul hepatic (hepatocite)
Nuclei
Nucleul este un organit dinamic din punct
de vedere al organizrii structurale
Nucleul prezint dou tipuri de organizri
structurale distincte, corespunztoare celor dou
faze majore ale ciclului celular:
n interfaz nucleul este bine individualizat,
delimitat de nveliul nuclear, nucleolii sunt
vizibili, cromatina este dispersat.
n mitoz nucleul sufer modificri complexe:
condensarea cromatinei sub form de
cromozomi, dezorganizarea nveliului
nuclear i dispariia nucleolilor.

Ciclul celular
Cromozomi i nuclei
I interfaz
M - mitoz
Organizarea structural a nucleului prezint dou
aspecte fundamentale, ce sunt eseniale pentru
nelegerea funciei acestui organit:

Nucleul prezint subcompartimente distincte

Nucleul este un organit dinamic

Structura nucleului n interfaz
EC eucromatina

Hc heterocromatina

G pars granulosa
F pars fibrosa
nucleol
nveliul nuclear
Este format din dou
membrane concentrice:
membrana nuclear extern
membrana nucler intern
ntre cele dou membrane este
delimitat spaiul perinuclear.

Spaiul perinuclear comunic
cu lumenul reticulului
endoplasmic (RE).
Membrana nuclear extern
are ataai ribosomi pe faa sa
citoplasmatic (la fel ca i
membrana RE).



Porul nuclear: structura i rolul n transportul
moleculelor ntre nucleu i citoplasm
- Porii nucleari au fost identificai n nveliul nuclear la toate celulele
eucariote. Numrul de pori nucleari din nveliul nuclear al celulelor de
mamifere variaz ntre 3.000 i 4.000.
- Porul nuclear este un edificiu multimolecular cu structur
complex, cu masa molecular de 125x10
6
daltoni, alctuit din 50 de
tipuri diferite de proteine numite nucleoporine.
1 nveli nuclear
2 componenta inelar
extern
3 componenta
central
4 fibrile convergente
5 fibrile paralele
Complexul porului nuclear prezint la microscopul electronic aspectul
unui poligon cu opt laturi organizat n jurul unui canal central (simetrie
octogonal).

Imagini de microscopie
electronic i modele
computerizate ale structurii
complexelor porilor nuclear.
9-26 nm


(a) subuniti dispuse sub form de coloane ce formeaz
peretele porului
(b) subuniti centrale, fixate de peretele porului, ce
delimiteaz deschiderea porului
(c) subuniti transmembranare ce ancoreaz complexul
n membrana nuclear
(d) subuniti dispuse circular pe cele dou fee ale
complexului, faa nuclear, respectiv faa citosolic, i
care sunt plasate la capetele coloanelor.


Structura porului nuclear
Structura
porului nuclear
De pe cele dou fee ale
complexului porului nuclear se
extind o serie de fibrile, cele
dinspre citosol cu dispoziie
paralel, iar cele de pe faa
nuclear cu dispoziie
convergent.

n regiunea central a porului
exist o reea fibrilar ce
blocheaz difuzia pasiv a
macromoleculelor de
dimensiuni mari.
Citosol
Lumenul
nucleului
Transportul prin porii nucleari
Fiecare por nuclear poate transporta 500-1000 de molecule per
secund, n ambele sensuri. Modul n care se realizeaz
coordonarea acestui trafic bidirecional al moleculelor, astfel
nct s se evite coliziunile i colmatarea porilor este nc
neelucidat.
ntruct controleaz traficul moleculelor ntre nucleu i
citoplasm, porii nucleari joac un rol fundamental n controlul
funciilor celulare.



Fenomenele de transport ce se desfoar la nivelul porilor
nucleari sunt de dou tipuri:
difuzia pasiv pentru moleculele mici,
transportul activ (proces care necesit consum de energie)
pentru moleculele de dimensiuni mari.


Transportul macromoleculelor este selectiv i se
desfoar bidirecional, dinspre citoplasm spre
nucleu (import) sau dinspre nucleu spre citoplasm
(export).

Importul este mediat de semnale de localizare
nuclear (NLS, nuclear localization signal or
sequence)

Exportul este mediat de semnale nucleare de
export (NES, nuclear export signal).


Secvenele de aminoacizi ce funcioneaz ca semnale de
localizare nuclear sunt nscrise n structura proteinei ce
urmeaz s fie transportat n nucleul i formeaz bucle
sau aglomerri pe suprafaa proteinei (pentru a fi
accesibile interaciunii cu receptorii nucleari specifici).
Secvena de aminoacizi ce determin localizarea nuclear
nu este identic pentru toate proteinele nucleare (nu
exist o secven unic).
Primul semnal de localizare nuclear descifrat a fost cel al
antigenului T al virusului SV40 (protein viral necesar
pentru replicarea ADN-ului viral n nucleul celulei infectate)
i const ntr-o secven de aminoacizi bogat n Lys, n
urmtoarea succesiune:

Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val

Semnalele de localizare nuclear (NLS)


Detectarea localizrii antigenului T al SV40 (prin tehnica de
imunofluorescen).
Proteina (antigenul T) ajunge n nucleu doar n condiiile n care semnalul
de localizare nucler este corect (A).
Modificarea semnalului de localizare nuclear nu permite transportul n
nucleu, astfel nct antigenul T rmne n citoplasm (B).


Figure was taken from Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, Garland Pub., N.Y. 1994, Fig 12-13.
Vizualizarea importului proteinelor
nucleare sintetizate n citoplasm,
la nivelul porilor nucleari
Imagine de microscopie
electronic prezentnd
ptrunderea n nucleu a unor
particule sferice de aur coloidal
nvelite cu proteina nuclear
numit nucleoplasmin
(porii nucleari sunt marcai cu
rou).
Lamina nuclear

Lamina nuclear este o reea de natur proteic cu aspect fibros
situat sub membrana nuclear intern, ce formeaz suportul
structural al nucleului (menine forma i d stabilitate nveliului
nuclear).


Ataarea laminei de nveliul nuclear se realizeaz prin
intermediul unor proteine din membrana nuclear intern
i prin ataare de complexele porilor nucleari.
Lamina nuclear interacioneaz direct i cu cromatina,
funcionnd astfel ca punte de legtur ntre ADN i
nveliul nuclear.
Reeaua de filamente este alctuit din proteine numite
lamine nucleare, ce reprezint o clas special de
proteine.
Lamina nuclear este o structur dinamic ce se
dezorganizeaz la intrarea n mitoz i se reorganizeaz
la sfritul mitozei, odat cu refacerea nveliului
nuclear.

Lamina nuclear este o structur dinamic ce
se dezorganizeaz la intrarea n mitoz.
Progeria

Maladie genetic extrem
de rar (1 din 8 milioane
de indivizi), caracterizat
prin apariia semnelor de
mbtrnire la vrste
timpurii (mbtrnire
accelerat);
Determinat de mutaii
ale genei ce codific un
anumit tip de lamin
nuclear denumit
lamina A.
Hayley Okines
Matricea nuclear
Studiile privind organizarea intern a nucleului au condus
la identificarea unei reele de natur proteic numit
matrice nuclear, alctuit din proteine denumite proteine
scaffold.
Filamentele matricei nucleare sunt dispuse ntr-o reea
tridimensional ce formeaz n interiorul nucleului o
structur cu rol analog citoscheletului.
Matricea nuclear reprezint sediul unor procese
importante ca replicarea ADN i procesarea precursorilor
mARN (ARN nuclear heterogen - hnARN).
Macromoleculele de ADN se fixeaz de proteinele
scaffold prin intermediul unor secvene polinucleotidice
numite regiuni de ataare la scaffold (SAR, scaffold
associated regions) sau MAR (matrix-attachment
regions). Dei rolul secvenelor SAR nu este foarte bine
precizat se consider c particip la organizarea
cromozomilor i la reglarea transcrierii i replicrii ADN.

Macromoleculele de ADN se fixeaz de proteinele scaffold
(care formeaz un ax de susinere), prin intermediul unor
secvene polinucleotidice numite regiuni de ataare la
scaffold (SAR, MAR).
Proteinele scaffold joaca un rol important in
condensarea cromozomilor.
Nucleul n interfaz
Cromatina

Cromatina

Cromatina reprezint complexul format de ADN-ul nuclear cu
histone i proteine cromozomale nehistonice.
Etimologie: chroma culoare, lb. greac.
Examinarea nucleilor n interfaz prin tehnici de microscopie,
relev aspectul neomogen al cromatinei, fiind evideniate
dou tipuri distincte: eucromatina (cromatina adevrat, de
la eu n limba greac) i heterocromatina (cromatina
diferit, de la heteros n limba greac).
Heterocromatina este o form de cromatin nalt condensat
i inactiv din punct de vedere transcripional
(netranscriptibil), avnd o pondere de circa 10% din genom,
n timp ce eucromatina este o form de cromatin mai puin
condensat i activ din punct de vedere transcripional
(conine secvene de ADN ce sunt transcrise).
Eucromatina
corespunde zonelor clare
Heterocromatina
corespunde zonelor ntunecate
1928 Emil Heitz
(botanist german)
Heterocromatina poate fi clasificat la rndul ei n dou tipuri:
heterocromatin constitutiv, form n care cromatina rmne
permanent condensat i care conine secvene de ADN ce nu sunt
transcrise, i heterocromatin facultativ, form de cromatin
condensat care nu este transcris, cu meniunea c fie s-a fcut
transcrierea ntr-o perioad anterioar, fie se va face ulterior dac
heterocromatina se va transforma n eucromatin sub aciunea unor
factori specifici.
Heterocromatina constitutiv apare n nucleul interfazic sub forma
unor aglomerate localizate la periferia nucleului i n jurul nucleolilor.
Heterocromatina facultativ apare numai n anumite tipuri de celule.
Heterocromatina facultativ a fost descris n cazul inactivrii unuia dintre cei doi
cromozomi X n nucleii celulelor somatice de mamifere, la organismele femele, n
cursul dezvoltrii embrionare timpurii.
Heterocromatina facultativ
Inactivarea cromozomilor X. n faze
embrionare timpurii unul din cei 2
cromozomi X (la organismele
femele) devine inactiv prin
condensare (corpuscul Barr). n
celulele descendente rmne
condensat acelai cromozom X.
Organizarea structural a cromatinei i
nivelurile de compactare
Macromoleculele de ADN se asambleaz cu histonele i
proteinele cromozomale nehistonice ntr-o manier nalt
ordonat ce permite un grad mare de compactare a ADN-ului.
Raportul de condensare specific
interfazei este de 500X.
n condiiile de maxim condensare
din cursul diviziunii nucleare
(metafazei) raportul de
condensare este de 10.000X.
Lungimea ADN n celulele organismului
uman este de aprox. 2 metri, iar nucleul
Interfazic are un diametru de 20-60 m.


Histonele
Histonele sunt un grup de proteine de mici
dimensiuni, cu caracter bazic (datorat prezenei n
structura lor a unui numr mare a resturi de Lys i
Arg).
Aceast proprietate favorizeaz asocierea lor de
ADN prin atracie electrostatic, de gruprile fosfat
din coloanele glucido-fosforice ale catenelor
polinucleotidice.
Interaciunea histonelor cu ADN-ul nu este
influenat de secvena de nucleotide a ADN.
n celulele eucariote au fost identificate cinci tipuri
principale de histone: H1, H2A, H2B, H3 i H4.

Interaciunea histonelor cu ADN-ul
este de natur electrostatic

Lys Arg
ADN
Structura nucleosomal (fibra de
cromatin de 11 nm)
Structura nucleosomal reprezint primul nivel de
compactare al cromatinei.
Organizarea sub form de nucleosomi este rezultatul
asocierii ADN cu histonele nucleosomale: H2A, H2B,
H3 i H4.
n imaginile de microscopie
electronic nucleosomii apar
sub forma unor particule
discoidale de 11 nm, ce
dau cromatinei aspectul
unui irag de mrgele.

Nucleosomul
Nucleosomul conine un miez proteic format din 8
molecule de histone (octamer de histone) de forma unui
cilindru turtit cu diametrul de 11 nm i nlimea de 5,5
nm, nconjurat de 1,65 ori de ADN-ul dublu catenar
(rsucirii de 1,65 ori n jurul miezului de histone i
corespunde o secven polinucleotidic de 147 perechi
de nucleotide).
Miezul de proteine al nucleosomului (octamerul de
histone) are cte dou copii ale histonelor H2A, H2B,
H3 i H4, numite histone nucleosomale. Nucleosomul
nu conine proteine nehistonice.
Histona H1 nu face parte din structura nucleosomului.


Structura nucleosomului
Particulele nucleosomale succesive sunt separate prin
secvene de ADN spaiator scurt ce poart numele de
ADN de legtur sau ADN linker, a cror lungime
poate s varieze ntre 18 i 80 de perechi de nucleotide
(valoarea medie este de circa 50 perechi de nucleotide).






Formarea structurilor nucleosomale scurteaz lungimea
macromoleculelor de ADN dublu catenar de 3 ori:

Structura solenoid (fibra de cromatin de 30 nm)
Acest mod de mpachetare se
realizeaz prin rsucirea a
ase nucleosomi ntr-o
structur spiralat numit
solenoid.
mpachetare strns este
posibil att datorit implicrii
histonei H1 (histon linker),
ct i interaciunilor dintre
nucleosomii adiaceni.
Pentru fiecare spir a solenoidului 6 histone H1
se asociaz cu 6 particule nucleosomale.
Nivelurile superioare de compactare ale
cromatinei
Nivelul urmtor de mpachetare corespunde organizrii
fibrei de cromatin de 30 nm sub form de bucle de 300nm
fixate de un miez proteic de natur non-histonic, de tip
scaffold.
Nivelul maxim de condensare
a cromatinei corespunde unor
bucle super-rsucite cu dimensiunea
de 700nm (dimensiunea cromatidei
cromozomului mitotic).




n concluzie, formarea cromatinei prin asocierea i
mpachetarea nalt ordonat a ADN-ului cu histonele i cu
alte proteine cromozomale este important att pentru
compactarea ADN-ului pn la nivelul maxim reprezentat
de comozomul metafazic, ct i pentru reglarea accesului
la secvene specifice de ADN n cursul transcrierii i
replicrii.

Nivelurile de
mpachetare
(condensare)
ale cromatinei
n nucleul interfazic eucromatina
este prezent sub forma fibrei de
11 nm i parial sub forma
fibrei de 30 nm.

C R O M O Z O M I I
n momentul intrrii celulei n mitoz cromatina se
condenseaz sub form de cromozomi, structuri
vizibile la microscopul optic.
Aceast condensare puternic este necesar pentru a
permite micarea cromozomilor de-a lungul fusului
mitotic, fr ca macromoleculele de ADN s se
ncolceasc sau s se rup n timpul distribuiei n
celulele fiice.


I interfaz
M - mitoz
Cromozomii sunt formai din ADN i proteine, n proporii
aproximativ egale. Componenta proteic este un
amestec heterogen de proteine, dintre care pot fi
menionate histonele, proteinele scaffold, i o serie de
enzime implicate n replicarea ADN i n transcriere
(ADN- i ARN-polimerazele).
Dup ieirea din mitoz, cromozomii individuali se
decondenseaz ocupnd anumite zone bine delimitate
n interiorul nucleului interfazic numite teritorii
cromozomiale.
Fiecare cromozom este format dintr-o molecul liniar
de ADN.
Un cromozom opereaz ca o unitate structural
distinct, astfel nct o copie a fiecrui cromozom s fie
transmis fiecreia dintre celulele fiice.

Teritorii cromozomiale
Dup ieirea din mitoz,
cromozomii individuali se
decondenseaz ocupnd
anumite zone bine
delimitate n interiorul
nucleului interfazic numite
teritorii cromozomiale.

Cromozomii
n momentul n care ncepe
diviziunea celular fiecare
cromozom este alctuit din dou
uniti longitudinale numite
cromatide.
Cromatidele sunt libere
pe toat lungimea lor,
cu excepia unui singur
punct de contact numit
centromer sau
constricie primar.
Centromer
Cromatide surori
p - braul scurt
q - braul lung
Structura cromozomilor
Un cromozom funcional prezint 3 tipuri de
secvene specializate de ADN:
origine a replicrii reprezint
secvenele nucleotidice de unde ncepe
replicarea ADN.
centromer (constricie primar) -
reprezint regiunea specializat a
cromozomului ce asigur adeziunea celor
dou cromatide, ancorarea i deplasarea
cromozomilor de-a lungul fibrelor fusului
de diviziune i segregarea corect a
cromatidelor n timpul diviziunii celulare.
n timpul diviziunii mitotice la nivelul
centromerului se formeaz tranzitoriu o
structur proteic complex numit
kinetocor.
telomere secvene de la capetele
cromozomului ce confer stabilitate
cromozomilor i mpiedic asocierea lor.
Kinetocorul
Kinetocorul are aspectul unui disc multilamelar i reprezint
locul de ataare al cromozomilor de microtubulii fusului de
diviziune.
Pentru fiecare dintre cele 2 cromatide se formeaz un kinetocor.
Celul uman n diviziune: microtubulii fusului de
diviziune (verde), cromozomii (albastru), kinetocorii
(roz).
Cromozomul are 2 tipuri de brae: p - braul scurt (petit) i
q - braul lung
(1) cromatid; (2) centromer; (3) braul p; (4) braul q
Telomere
Telomerele protejeaz informaia
genetic n timpul diviziunii celulare.
Telomerele se scurteaz pe parcursul
diviziunilor celulare succesive.

Genomul reprezint cantitatea de material genetic ce definete
zestrea ereditar a unui organism.
Cariotipul reprezint totalitatea cromozomilor unui celule,
dispui ntr-un set complet (caracteristic unui individ sau unei
specii) i ntr-un anumit aranjament.
Realizarea cariotipului const n aezarea cromozomilor
microfotografiai dintr-o celul (n metafaz) n ordinea
descresctoare a dimensiunii lor n perechi omoloage.





Cariotipul uman
Conform Standardului Internaional de
Nomenclatur Citogenetic, cariotipul
uman este redat prin numrul total de
cromozomi (46) urmat de formula
comozomilor de sex (XX pentru femeie
i XY pentru brbat), de exemplu
46, XX i respectiv 46, XY.
Cariotipul uman are 23 de perechi de
dintre care 22 perechi de autozomi i o
pereche de heterozomi (cromozomii ce
determin sexul unui organism, denumii
i gonozomi).
Cariotipurile sunt studiate pentru a
determina aberaiile cromozomiale.
Cariotip normal de brbat
46, XY
Cariotip de femeie (46, XX)
Cromozomii au fost marcai fluorescent cu fluorocromi de diferite
culori. Datorit marcrii fluorescente difereniate toate perechile de
cromozomi pot fi vizualizate i identificate simultan.

Aberaii cromozomiale
Exist 2 categorii principale de aberaii
cromozomiale:
Numerice
Structurale
Anomaliile numerice presupun pierderea i/sau
ctigul unui cromozom ntreg sau a mai multor
cromozomi.
Cea mai comun anomalie numeric
autozomal este trisomia 21 (Sindromul Down).
Cea mai frecvent anomalie numeric
heterozomal (a cromozomilor de sex) este
sindromul Klinefelter (47, XXY).
Anomalii numerice autozomale
Sindromul Down (Trisomia 21 - prezena unei extra copii a
cromozomului 21, o celul are 3 n loc de 2 copii ale
cromozomului 21 n nucleu)
Incidena (1: 1000 nou-nscui)
Trsturi fizice caracteristice: corp
scurt i ndesat, faa turtit, urechi
cu aspect modificat, dini atipici,
aspect facial mongoloid, tonus
muscular sczut
Retard mintal moderat
Factori de risc: vrsta naintat a
prinilor, istoricul familial de
sindrom Down
Anomalii ale cromozomilor de sex (heterozomi,
gonozomi)
Sindromul Klinefelter (47,XXY) - anomalie
cromozomial numeric, cu o inciden de aproximativ
1:600 / 1:800 nou-nscui de sex masculin ce rezult din
prezena unui cromozom X
suplimentar la sexul masculin.
Nucleul n interfaz
Nucleol










N U C L E O L U L
Nucleolul este o formaiune intranuclear decelabil n interfaz
(vizibil la microscopul optic).
Nucleolul este sediul producerii subunitilor ribosomale.
Nucleul celulelor somatice umane conine n mod obinuit cte
un nucleol pentru fiecare set de cromozomi, astfel c majoritatea
celulelor umane somatice (diploide) prezint doi nucleoli.
Nucleolul nu este delimitat de membrane, ci este organizat n
aria regiunilor cromozomale ce conin gene codificatoare pentru
ARN-urile ribosomale.
Morfologia nucleolului
Din punct de vedere morfologic n nucleol au fost
evideniate trei regiuni distincte:
centrul fibrilar
zona fibrilar dens
zona granular
Genele pentru rARN sunt localizate i transcrise n
centrul fibrilar i n zona fibrilar dens.
Prelucrarea rARN i asamblarea cu proteinele
ribosomale este iniiat n zona fibrilar dens i
continu n zona granular unde se formeaz
subunitile ribozomale, gata de a fi exportate n
citoplasm.

Mrimea nucleolului depinde de activitatea metabolic a
celulei.

Imagini de microscopie electronic (fibroblast uman):
(A) nucleul
(B) nucleolul
Tehnici de vizualizare a nucleului:
1. Microscopia optic
- microscopia optic convenional
- microscopia de fluorescen
- microscopia cu contrast de faz
2. Microscopia electronic
- Transmisie (TEM)
- Scanning (SEM)


Imagine de microscopia electronic (TEM)
Imagine de microscopia electronic (SEM)
Vizualizarea cromozomilor mitotici prin
microscopie optic convenional
Imagini de microscopie de fluorescen
Coloraie Hoechst Coloraie DAPI
Imagini de microscopie de fluorescen
C O N C L U Z I I
Morfologia nucleului prezint dou aspecte fundamentale:
1. Nucleul prezint compartimente distincte la nivelul crora
se desfoar procese specifice,
2. Nucleul este un organit dinamic, cu dou tipuri de
organizri structurale i funcionale, corespunztoare celor
dou faze majore ale ciclului celular.