Transducia-transfer al unei informatii genetice de la o celula la alta prin intermediul unui

vector.
Transferul de material genetic se realizeaz prin intermediul bacteriofagilor moderai. n
momentul
exciziei profagului din cromosomul bacterian el devine virulent, multiplicndu-se i liznd
bacteria
gazd. n cursul acestui proces fragmente de AND bacterian pot fi ntroduse din eroare n
particulele
virale, care la rndul lor se pot integra prin recombinare n cromosomul altei bacterii acest
proces reprezint transducia.Transducia poate fi specializat i generalizat
n timpul replicrii fagului moderat fragmente de AND bacterian pot fi ntroduse din eroare n
particulele
virale. Aceti fagi pot n continuare ntroduce n cromosomul altor bacterii ADN bacterian
capturat
proces de transfer genetic numit transducie. Natura genelor bacteriene transferate poate fi
diferit:
gene din apropierea locului de inserie a fagului (transducie specific) sau fragmente de ADN
bacterian ntroduse din ntmplare n capsida fagului (transducie generalizat).
Transductia reprezinta un transfer de gene cromozomiale de la o celula bacteriana la alta, mediat
de bacteriofagi. Unii bacteriofagi sunt capabili sa transfere orice gena bacteriana (transductie
generalizata) iar altii numai anumite gene (transductia specializata).
Plasmide
Gene de control a replicrii proprii
Gene de interaciune cu alte molecule de ADN
plasmide episomale: capabile s existe autonom i/sau integrat.
recombinare situs specific
Sistem genetic de fertilitate sau de transfer
plasmide conjugante: au operonul Tra
plasmide neconjugante nu au operon Tra
Gene pentru proprieti fenotipice bacteriene: gene structurale
rezisten la antibiotice, la sruri de metale grele (plumb, mercur, argint, arsen), la
detergeni, radiaii, bacteriofagi, colicine
structuri bacteriene: ex. pili la tulpini enteropatogene
proprieti metabolice
codific factorii de patogenitate
invazivitate

 toxine bacteriene ex.

criptice,
nu codific caracter bacterian,
intervin n transfer de material genetic
Importante: plasmidele F, R, col.
Plasmidele F
Episomale, criptice
Recombinare omoloaga
se poate integra n cromozomul bacterian rar
o bacterie din 105 bacterii F+.
Rezult o bacterie Hfr

TRANSDUCTIA-BACTERIOFAGI
entiti infecioase acelulare
Virusuri ale bacteriilor.
Structura:
o molecul de acid nucleic,
protejat de proteine - capsida.
multiplicare => doar prin utilizarea mainriei de sintez a celulei parazitate (bacteria)

generalizat:
orice fragment al cromozomului bacterian.
prin bacteriofagi litici
recombinare omoloag
este mediat de fagii viruleni, litici, care dup ptrunderea n celula bacterian se
multiplic i determin liza celulei gazd.
n timpul lizei celulei bacteriene cromozomul acesteia se fragmenteaz
ocazional: un fragment cu o dimensiune apropiat de cea a genomului fagic se integreaz
n capsida bacteriofagului, n locul genomului fagic.
aceti fagi pot ptrunde n alte celule bacteriene injectndu-le ADN-ul, ce provine de fapt
din genomul celulei donoare. ADN-ul se va integra n cromozomul celulei receptoare prin
recombinare, conferindu-i acesteia caractere noi:
rezistena la chimioterapice,
proprieti ce in de patogenitatea bacteriei etc


localizat (specific):
doar anumite gene, alturate bf. n cz. bacterian.

mediat de fagii temperai.

Dup ptrunderea n celula bacterian a ADN-lui bacteriofagului temperat, acesta se
inser n cromozom prin recombinare sub forma de profag
n anumite condiii are loc un proces de derepresie i genomul bacteriofagic
prsete cromozomul bacterian devenind din nou autonom si iniiaz un ciclu litic
cnd prsete cromozomul bacterian poate detaa din acesta un fragment de ADN
care va rmne legat de genomul bacteriofagic
bacteriofagul va putea intra n alt celul integrndu-se n cromozomul acesteia tot
sub forma de profag.
Fragmentul provenit de la prima celul bacterian poate s codifice diferite caractere
rezistena la antibiotice,
secreia unor enzime, toxine etc., ce se vor manifesta fenotipic la noua bacterie
gazd.
Bacteriofagii-virusuri care pazariteaz bacteriile
Morfologie.
un cap hexagonal alctuit dintr-un nveli proteic caracteristic virusurilor (capsida) i
adpostete ADN
un gt
o prelungire numit picior (coad). Coada este un cilindru rigid nvelit ntr-un manon
proteic asemntor miozinei i se termin cu o plac hexagonal ce conine o enzim de
tipul lizozimului. De placa bazal se aprind 6 fibre cu rol n fixarea bacteriofagului pe
suprafaa bacteriei.
Ingineria genetic
Existena vectorilor (plasmide, bacteriofagi i n ultimul timp descoperirea existenei
unor transpozoni ce se pot transmite de la o celul bacterian la alta) permite transferul
de gene celulei bacteriene, ceea ce consituie baza ingineriei genetice.
Bacteria preferat a ingineriei genetice este E.coli, care n mod natural nu este capabil de
transformare, dar creia prin clonare i s-au introdus n genom cei mai diveri determinani
genetici provenind de la organisme ndeprtate filogenetic, cum sunt omul i animalele.
Prin aceast tehnic se introduc n genomul bacterian gene care codific sinteza unor
substane ca, de exemplu, interferoni, insulin, STH etc., a cror obinere pe cale chimic
ar fi fie imposibil, fie foarte costisitoare

 Au permis apariia unei noi discipline: diagnosticul molecular reprezentnd

utilizarea probelor de acizi nucleici n diagnosticul bolilor
boli infecioase,
neoplasme,
boli ereditare
O alt aplicaie : amprenta ADN - permite diferenierea indivizilor prin utilizarea
unor fragmente minuscule de esut sau probe de snge

PROTEINE G DE CUPLAJ SI ROLUL LOR IN TRANSDUCTIA SEMNALULUI

BIOLOGIC
Hormonii din clasa hormonilor hidrosolubili (peptidici, catecolamine) nu patrund in
celule, ci interactioneaza cu receptori membranari. Fixarea hormonului pe receptor activeaza un
sistem transductor care transforma semnalul extern (mesager prim) intr-unul intracelular
(mesager secund). Mesagerul secund actioneaza in interiorul celulei initiind evenimente care duc
la activarea sau inactivarea enzimelor, secretie, contractie, sinteza de noi proteine.
Actiuea hormonilor este mediata intern de sisteme transductoare ale mesajerol externe in mesaje
intracelulare. Sistemele transductoare sunt receptori membranari citoplasmatici, nucleari.
Sistemele transductoare sunt: receptorul membranar, sistemul de cuplare a complexului hormonreceptor cu sistemul efectro care genereaza mesagerul intracelular, functia de cuplare o detine o
clasa de proteine denumite proteina G, sistem efector care genereaza AMPc.
Proteinele G oligomerice
Celulele animale contin un numar de proteine G diferite (proteine ce leaga GTP).
Fiecare tip de proteina G leaga un anumit tip de receptor cu un anumit efector enzimatic sau canal
ionic. Proteinele G pot fi clasificate in mai multe grupe pe baza structurii si functiei acestora.
Proteinele G sunt izolate sub forma de heterotrimeri, compusi din subunitatile , si .
Subunitatea contine situsul de legare pentru GTP si de activitate catalitica responsabila de
hidroliza acestei nucleotide. Aceasta subunitate contine de asemenea situsuri de interactiune cu
complexul , cu receptorul si cu enzima efectoare sau canalul ionic.

Caile de transductie a semnalelor intracelulare

Receptorii de suprafata ai celulei au o capacitate specifica de a stimula activitatea unor enzime tin
intracelulare, aceste enzime pot fii legate direct cu receptorii sau indirect prin proteine G.

Ezimele intracelulare servesc ca elemente de semnalizare in procesul de transductie (transmitere)

semnalului.

Semnalul ajunge la nivelul nucleului dupa traversarea membranei plasmatice, unde proteina G- devi
activa si determina activarea altor enzime din nucleu sau din membrana (adenilat ciclaza).

Dintre caile de semnalizea care conecteaza celula la nucleu si determina schimbare in expresia gene
mentionam:
1.

Calea adenozinmonofosfatului ciclin (AMPc). Mesagerii secundari si fosforilarea proteinelor.

AMP-ul se formeaza intr-un proces biochimic din ATP sub actiunea adenilat ciclazei , rezultind AMPc asupra caruiea actioneaza fosfodiesteraza (o enzima specifica) intr-un pr
de fosforilare revenindu-se din nou
-

la AMP. In acest fel akinaza este implicata in activarea a 2 noi enzime:

fosforilazkizana
glicogensintetaza, enzime care intervin in metabolismul glicogenului.

In acest proces fosforilakinaza initial inactiva devine activa printr-un proces de fosforilare si intervine in metabolismul glicogenului si o transforma in glucozo-1- fosfat,
determina formarea AMPc si procesul de contractie musculara si prin glicogensintetaza. In acest fel proteinkinaza A actioneaza asupra ATP, ADP care furnizeaza energ
activarea proteinfosfatazei-1, aceasta la rindul ei poate fii inhibta de catre o proteina inhibitoare fosforilata avand loc o reglare a metabolismului glicogenului la nivelul proces
de contractie musculara.

COMPARTIMENTARA CELULEI EUCARIOTE

Celulele eucariote conin membrane interne care separ diferite medii fermentative, formnd
organite membranare, care ocup aproximativ o jumtate din volumul total al celulei (tab.
4.1). Principalele compartimente membranare sunt reticululendoplasmatic (RE), aparatul Golgi
(AG), lizozomii, peroxizomii, mitocondriile i nucleul. Fiecare dintre acestea
conine un set specific de proteine i ndeplinete o funcie definit. Astfel, n celul se pot realiza
multiple reacii chimice care asigur vitalitatea: asimilarea substanelor din exterior,
sinteza substanelor proprii, metabolismul energetic,autoreproducerea, rennoirea structurilor
celulare, adaptarea la condiiile de mediu, interaciunile cu alte celule. Numrul, forma
organitelor membranare i, n special, compoziia lor chimic difer de la celul la celul, de la
esut la esut.
PROCARIOTELE
Celulele procariote se caracterizeaz printr-o organizare relativ simpl, dar posed toate nsuirile
de baz ale unei celule vii: membran, aparat genetic, aparat enzymatic pentru sinteza
substanelor organice. Membrana plasmatic formeaz un singur compartiment citoplasmatic,

fr o structur intern bine organizat. Conin un singur cromozom (nucleoidul), constituit dintro singur molecul inelar de ADN, fr a prezenta un nucleu bine conturat. Din acest motiv
ele au fost denumite procariote. Principalii reprezentani ai acestei grupe de organisme vii sunt
bacteriile i algele cianofite. Bacteriile sunt procariotele care se ntlnesc cel mai frecvent n
mediul nconjurtor, fiind considerate cele mai mici entiti vii, autonome, guvernate de
informaia coninut n ADN.
Recombinarea genetic la bacterii
Recombinarea materialului genetic ntre diferite cellule bacteriene reprezint sursa de
variabilitate genetic, foarte important pentru selecia lor natural n lupta pentru existen.
Exist trei mecanisme de transfer a materialului genetic de la o celul bacterian la alta:
conjugarea, transducia i transformarea.
Conjugarea reprezint procesul n care dou cellule bacteriene fac schimb de material genetic
prin intermediul pililor. n acest scop contacteaz o bacterie purttoare de
plasmid F (F+) i una lipsit de plasmid (F-). Se consider ca donor de material genetic celula
F+, iar celula F- - acceptor dematerial ereditar. Din celula-donor se transfer o copie
monocatenar a plasmidei F. n celula acceptor molecula monocatenar se transform n
bicatenar i obine form de cerc. Ca rezultat ambele celule se transform n F+ i ncontinuare
pot funciona ca donori de informaie genetic.
Transformarea genetic se caracterizeaz prin ptrunderea n bacterie a moleculelor de ADN din
exteriorulcelulei. Celulele pregtite pentru transformare poart denumirea de celule competente i
pot fi obinute n condiii de laborator prin incubarea la temperature sczute n prezena ionilor de
Ca2+, Cs+etc. Importana practic a transformrii genetice const n posibilitatea introducerii
unor gene de interes (de ex., gena insulinei) n bacterii cu scopul obinerii proteinelor ce pot fi
utilizate n calitate de preparate medicamentoase. n condiii de laborator pentru transformare se
utilizeaz n special plasmidele din familiile R i Col. n condiii naturale s-a descris
transformarea pneumococilor i a E.coli cu ADN circular i liniar. Pentru ca moleculele de ADN
s nu fie hidrolizate de enzimele gazdei ele devin circulare, sau se integreaz n genomul gazdei.
Transducia reprezint transmiterea informaiei ereditare de la o celul bacterian la alta prin
intermediul bacteriofagilor. Bacteriofagii lizogeni sunt capabili s se integreze n genomul celulei
gazde. Sub aciunea factorilor exogeni (radiaie, temperatur, pH), ei se excizeaz din nucleoid
purtnd un fragment al acestuia. Bacteriofagul excizat se multiplic, ceea ce conduce la
distrugerea celulei-gazd. Infectnd alte celule, bacteriofagul transport i informaia
genetic de la celula distrus. Recombinarea genetic la bacterii are i un rol medical. n
primul rnd, este vorba despre posibilitatea obinerii preparatelor farmaceutice prin utilizarea
bacteriilor transformate. Datorit recombinrilor genetice n natur apar populaii de bacterii
patogene rezistente la preparatele medicamentoase, ceea ce pune n dificultate vindecarea
bacteriozelor.
REPLICAREA I REPARAREA ADN

Replicarea ADN este procesul molecular prin care se realizeaz copierea exact a moleculelor de
ADN (a secvenei nucleotidice). Datorit replicrii are loc transmiterea exact a mesajului genetic
de la o generaie de celule la alta, astfel toate celulele organismului pluricelular conin aceeai
informaie ereditar.
Procesul de sintez a ADN este, de regul, exact. Dintr-o molecul de ADN se formeaz dou
molecule identice att ntre ele, ct i cu molecula parental. Acest proces are loc datorit
particularitilor de structur ale ADN:
- ADN este bicatenar;
- catenele ADN sunt complementare i antiparalele.
Principalele caracteristici ale replicrii sunt:
sinteza replicativ a ADN-ului este semiconservativ,
deoarece, cel mai des, fiecare din cele dou catene este folosit
ca matri pentru sinteza unei catene noi de ADN;
sinteza este bidirecionat;
polimerizarea nucleotidelor are loc doar n direcia 5 3;
procesul implic participarea mai multor factori proteici.
Aparatul de replicare
Aparatul de replicare include ADN-matri cu punctul de origine, nucleozide trifosfai ct i
proteine pentru despiralizarea helixului de ADN, iniierea replicrii, polimerizarea nucleotidelor
etc.
Proteinele aparatului de replicare
Replicarea ADN implic aciunea mai multor factori proteici i enzime (fig. 7.1).
ADN-helicazele realizeaz despiralizarea i denaturarea local a moleculei de ADN prin hidroliza
ATP. Datorit existenei a dou furci replicative exist dou helicaze care se deplaseaz n direcii
opuse de la punctul de origine a replicrii.
Primaza este enzima cu activitae ARN-polimerazic care iniiaz replicarea ADN prin sinteza
unei secvene de 11-12. ribonucleotide, care este numit primer (ARN-primer).
Helicazele mpreun cu primaza formeaz complexul primozom.
Topoizomerazele de tip I scindeaz legturile fosfodiesterice ale unei catene, relaxnd dublul
helix previnindu-se supraspiralizarea ADN.
Topoizomerazele de tipII taie ambele catene ale duplexului.Proteinele ce se leag de ADN
monocatenar (proteine SSB) - factori ce stabilizeaz catenele de ADN n regiunile
denaturate i mpiedic refacerea structurii dublucatenare prin unirea celor dou catene, sau n
cadrul aceleai catene n regiunile cu secvene palindromice
ADN-polimerazele sunt enzime capabile s sintetizeze catene noi de ADN pe catenele matrie.
Au fost descoperite mai multe clase de ADN-polimeraze: , , , , la eucariote i
I,II i III - la procariote.
Activitatea polimerazic are urmtoarele particulariti:
sinteza se produce doar n direcia 5' 3' prin adugarea
nucleotidului la gruparea 3'-OH a pentozei (fig. 7.3);

 citirea are loc doar n direcia 3' 5';

pentru sintez se utilizeaz precursori trifosfai, care pierd n
reacie dou grupe fosfat;
ADN-polimeraza nu poate iniia sinteza unei catene noi de
ADN, ele au capacitatea doar de a extinde o caten
preexistent de ADN sau ARN-primer.
Mecanismul replicrii
Sinteza ncepe prin despiralizarea catenelor de ADN i formarea furcii de replicare. Fiecare
caten reprezint o matri pentru catena nou format. Despiralizarea este necesar pentru
expunerea bazelor celor dou catene n aa mod ca noile baze s le poat recunoate i s formeze
perechea complementar. Sinteza decurge bidirecional: de la fiecare punct de origine se
formeaz dou furci replicative n direcii opuse fa de origine Replicarea necesit un complex
proteic numit replizom care recunoatere punctul de origine a acesteia i o iniiaz. Proteina /
proteinele de recunoatere (la drojdii sunt cunoscute cinci proteine) se leag de ori i iniiaz
despiralizarea local a ADN n situsul DUE.Complexul multifermentativ, numit replizoma, se
mic dea lungul ADN-ului i efectueaz sinteza pe ambele catene ale furcii. Replicarea ar putea
fi vzut ca creterea continu a celor dou catene de ADN n dublul helix. Este necesar de
accentuat c:
- citirea matriei se efectueaz doar n direcia 3 5;
- sinteza catenei noi se efectueaz doar n direcia 53.
Etapele replicrii
1. Iniierea include urmtoarele procese:
ataarea replizomului la punctul de origine al replicrii i despiralizarea local a helixului
ADN de ctre helicaze;
sinteza ARNprimerului o secven scurt de ribonucleotide de ctre primaz (o enzim cu
actrivitate ARN-polimerazic);
adugarea dezoxiribonucleotidelor complementare matriei la captul 3 al primerului realizat
de ADN polimeraz.
2. Elongarea se caracterizeaz prin alungirea catenelor nou - sintetizate nfptuit de ADNpolimeraz, ce se deplaseaz rapid de-a lungul catenelor de ADN, fcnd posibil sinteza pe
ambele pri ale furcii ntr-un mod coordonat i eficient.
Evenimentele principale sunt:
creterea continu a catenei lider;
sinteza discontinu a fragmentelor Okazaki;
controlul erorilor de mperechere a bazelor n timpul replicrii i nlturarea lor, nfptuit de o
exonucleaza 35 din componena ADN-polimerazei.
3. Terminarea include urmtoarele procese:
nlturarea ARNprimerilor de ctre o component enonucleazic 5 3 a polimerazei;
nlocuirea golurilor de ctre ADN-polimeraz;
unirea capetelor fragmentelor catenelor de ADN sintetizate cu ajutorul ADN-ligazei.

Reparaia ADN
Procesul de restabilire a leziunilor din moleculele de ADN careasigur pstrarea intact a
materialului genetic de-a lungul mai multor generaii poart denumirea de reparaie. Acest proces
este caracteristic doar pentru moleculele de ADN i este determinat de particularitile de
structur a acestor molecule: existena a dou catene complementare i antiparalele.
n structura moleculelor de ADN pot surveni dou tipuri de schimbri:
Substituia unui nucleotid. Se afecteaz doar secvena ADN-ului fr a ainfluena structura lui.
Aceste schimbri nu se reflect asupra proceselor de replicare sau transcripie. Ele pot aprea ca
rezultat al erorilor n cadrul replicrii din cauza mperecherii necomplementare a bazelor (de ex.,
C::A) sau datorit transformrilor chimice ale bazelor azotate: (de ex., dezaminarea citozinei duce
la formarea uracilului).
Modificri structurale. Se formeaz ca rezultat al Modificri structurale. Se formeaz ca
rezultat al apariiei legturilor covalente nespecifice ntre nucleotidele aceleai catene sau din
catene opuse. De exemplu, razele ultraviolete (UV) duc la apariia dimerilor timinici legturi
ntre resturile de timin alturate, de pe aceeai caten. Astfel de schimbri pot mpiedica
replicarea i transcripia. Sistemele reparative principale ntlnite la diferite
organisme sunt:
- reparaia direct se ntlnete foarte rar i const n revenirea
moleculei la starea iniial (de ex., prin aminare UC);- fotoreactivarea este este larg
rspndit n natur i const n nlturarea dimerilor pirimidinici cu ajutorul unei enzime
dependente de lumin;
- reparaia prin excizie const n recunoaterea de ctre enzime a fragmentelor denaturate i
nlturarea fragmentului monocatenar defect. Ulterior are loc restabilirea catenei lezate
cu ajutorul ADN-polimerazei, utilizndu-se ca matri catena intact. ADN-ligaza unete
fragmentul nou-sintetizat cu restul moleculei, restabilind integritatea ei (fig. 7.10);
- reparaia prin recombinare const n excizia fragmentului defectat, urmat de importarea
secvenei corespunztoare normale dintr-o molecul omoloag de ADN (fig. 7.11).
Dimerul pirimidinic dup recombinare este nlturat prin mecanismul reparrii prin excizie
- reparaia inducibil SOS - sistemul SOS funcioneaz ca rrspuns la aciunea unor factori de
stres. De exemplu, la E.coli sub aciunea ocului termic sau a apariiei dimerilor pirimidinici
se sintetizeaz abundent proteina RecA-proteaza, cantitatea creia este reglat de activitatea altei
proteine LexA. Proteina LexA este unit la o secven de ADN numit blocul SOS care
blocheaz sinteza enzimelor de reparaie. RecA-proteaza, fiind n cantitate mare, hidrolizeaz
proteina LexA, fcnd posibil activarea unor gene ce codific proteinele de reparaie 123
(aproximativ 15 la numr). Rspunsul celulei se produce foarte rapid n decursul ctorva
minute. n a doua etap se sintetizeaz n exces proteina LexA, care blocheaz sinteza
RecA-proteazei i peste 30-60 minute sistemul de reparare se inactiveaz. Mecanismul de
reparaie SOS intervine n cazul leziunilor masive. Scopul lui este completarea golurilor prin

mecanisme de excizie sau recombinare. Acest tip de reparaie nu este ntotdeauna foarte exact, iar
principiul complementaritii nu se respect n toate cazurile. Ca rezultat, moleculele reparate
prin SOS pot conine erori.
La eucariote au fost determinate mai multe gene incluse n procesul de reparaie de
exemplu familia RAD de la drojdii: RAD3 reparaia prin excizie; RAD6 reparaia
postreplicativ; RAD52 reparaia prin recombinare.
La oameni cel mai bine a fost studiat sistemul responsabil de maladia xeroderma pigmentosum
(XP). XP este o boal genetic cu transmitere autosomal recisiv i se caracterizeaz prin
hipersensibilitate la lumina solar, n deosebi la radiaia UV. Boala este determinat de deficiena
mecanismelor de reparaie prin excizie.
Particularitile organizrii genelor la procariote.Genomul procariotelor
Aparatul genetic al procariotelor este reprezentat demolecule circulare de ADN (nucleoid i
plasmide). Genomul procariotelor conine puine secvene necodificatoare. Genele se
caracterizeaz printr-o structur mai simpl i sunt lipsite de introni. Deoarece metabolismul este
intens i necesit modificri rapide n dependen de condiiile de moment ale mediului,
majoritatea genelor implicate ntr-un lan metabolic formeaz uniti transcripionale numite
operoni. Operonul conine un singur promotor la captul 5, mai multe gene structurale (numrul
de gene structurale este egal cu numrul proteinelor implicate n procesul metabolic dat), iar la
captul 3 se afl terminatorul (fig. 8.9). Unii operoni pot conine i alte secvene reglatoare
(secvene operatoare, secvene atenuatoare etc.).
Particularitile organizrii genomului uman
Genomul uman const din ADN nuclear (98%) i AND mitocondrial (2%). Genele acestor dou
sisteme interacioneaz ntre ele i controleaz activitatea organismului uman prin
controlul sintezei proteinelor de structur, enzimelor i proteinelor reglatoare.
Genomul nuclear
Genomul nuclear al celulelor somatice este reprezentat de 46 molecule de ADN, ce corespund
celor 46 de cromozomi monocromatidieni din setul diploid. n nucleul celulelor umane
se conin circa 125000 de gene. Acestea sunt repartizate de-a lungul cromozomului. ntre gene
sunt secvene necodificatoare, reprezentate de spaceri, ADN-satelit. Fiecare cromozom conine
n mediu 3000 de gene .
n genomul nuclear pot exista mai multe copii ale aceleai gene. Grupul de gene, exonii crora
sunt asemntori, codific proteine cu secven i proprieti similare, derivate de la o gen
ancestral, se numete familie de gene. Familiile de gene pot fi repetitive, nerepetitive i
pseudogene.
Familiile de gene repetitive - reprezint repetri ale uneia i aceleiai gene de mai multe ori per
genom. Pot s funcioneze n acelai esut simultan, sau n esuturi diferite
(genele pentru histone, ARNr, ARNt etc.).
Familiile de gene nerepetitive sunt repetiii ale unorgene cu efect similar, dar care se
deosebesc att prin structur, ct i prin modul de aciune (gene pentru globine, HLA etc.). globine. Familia const din patru gene funcionale (, 1, 2,

) i trei pseudogene (, , ). Globina ntr n compoziia hemoglobinei embrionare, iar

globinele n compoziia hemoglobinelor embrionare, fetale i la adult.
Pseudogene sunt secvene rezultate prin duplicare, darcare nu funcioneaz. Sunt genele care
tac. Ele acumuleaz mai multe mutaii i pot rezulta peste o perioad de timp ca membru nou al
familiei, cu proprieti distincte.
Genomul mitocondrial
Genomul mitocondrial este reprezentat de molecule circulare de ADN cu lungimea de 16.6 kb. n
fiecare mitocondrie se conine un numr variabil de molecule n dependen de necesitatea
energetic a celulei. Aproape toate nucleotidele aparin secvenelor codante, secvenele ADN cu
funcii reglatoare fiind foarte mici (ADN mitocondrial al celulelor umane nu conine introni).
Toate genele formeaz dou uniti transcripionale: una pe catena grea cu promotorul HSP i
una pe catena uoar LSP (fig. 8.14). ADN mitocondrial deine 13 gene structurale, dou gene
pentru ARNr i 22 gene pentru ARNt.
Genele structurale codific enzimele implicate n metabolismul energetic. O gen pentru
citocromul b (cit b), trei gene pentru subunitile 1-3 ale citocrom-c-oxidazei (COI-III),
ase gene pentru subunitile 1-6 i 4L ale NADH dehidrogenazei (ND 1-6 i ND4L), dou gene
pentrusubunitile 6 i 8 ale ATP-sintetazei (A6 i A8) (fig.8.14).
Genele pentru ARNr controleaz sinteza a dou tipuri de molecule: ARNr 12S i 16S se asociaz
cu proteinele importate din citoplasm la formarea ribosomilor.ADN mitocondrial codific doar
22 molecule de ARNt.De regul, ARNt mitocondrial recunoate specific doar primele
dou baze ale codonului din molecula de ARNm. A treia poziie
a codonului poate fi ocupat de o alt baz din aceeai clas (purinic sau pirimidinic).
Replicarea ADN mitocondrial nu este limitat la faza de sintez a ciclului celular. Moleculele de
ADN se replic aleatoriu, unele de dou ori, iar altele - nici odat. Totui, n fiecare ciclu celular,
numrul moleculelor de ADN mitochondrial se dubleaz, meninndu-se constant cantitatea de
ADNmt per celul. Genele mitocondriale se transmit pe linie matern.
Transpozonii
Secvenele de ADN capabile s migreze de sine stttori ocupa o nou poziie n genom poart
denumirea de elemente genetice migratoare sau transpozoni. Cei mai simpli
transpozoni au fost depistai la E.coli i constau din gena transpozaza flancat de elemente
repetitive invertate. Ele formeaz o familie cu denumirea de IS (insertion sequences).
De obicei ele se insereaz n locuri int cu o secven specific pentru fiecare transpozon.
Transpoziia poate fi de mai multe tipuri:transpoziie nereplicativ, transpoziie replicativ,
transpoziie conservativ i retrotranspoziie
Transpoziia nereplicativ const n transferarea n ntregime a unui fragment de ADN din
poziia veche n una nou, ca rezultat, adesea apar rupturi bicatenare ale moleculei iniiale.
Cantitatea de ADN, totodat, nu se modific.
Transpoziia replicativ se caracterizeaz prin replicarea transpozonului, dup care copia
obinut se transfer n loc nou. Ca rezultat cantitatea de ADN crete.

Transpoziia conservativ se caracterizeaz prin migrarea fragmentelor de ADN n ntregime

fr a cauza modificri n cantitatea de ADN i fr a produce rupturi.
Retrotranspoziia are loc n dou etape. Mai nti elementul migrator se transcrie, apoi de pe
copia de ARN cu ajutorul revertazei (ADN-polimeraz ARN-dependent) are loc sinteza unei
molecule complementare de ADN. Fragmentul nou format se integreaz n locus nou. Ca efect
are loc creterea cantitii de material genetic.
translocarea poate provoca deleii sau ntreruperi ale genelor, ceea ce cauzeaz inactivarea
genelor;
elementele migratoare servesc ca substrat pentru sistemele de recombinare celular; dou copii
ale aceluiai transpozon n diferite poziii n cromozom pot cauza recunoaterea i mperecherea
incorect a cromozomilor pe parcursul crossingoverului.
Transcrierea
Sinteza proteinelor se realizeaz n dou etape majore: transcripia i translaia.
Prima etap este transcripia sau copierea mesajuluicodificat n ADN, sub forma unei secvene
specifice complementare de nucleotide, intr-o molecul de ARNm. A
doua etap const n: translaia (descifrarea) informaiei copiat de ARNm de ctre moleculele de
ANRt (care fixeaz specific un aminoacid), aezarea aminoacizilor n secvena indicat de
ARNm i legarea lor peptidic.
Sinteza proteinelor este precis controlat n funcie de Transcripia este realizat de enzimele
numite - ARNpolimeraze. Sinteza ARN pe baza matriei ADN se desfoar n direcia 5'3'
dup principiul complementaritii (A=U; T=A; GC; CG). Procesul decurge n mai multe etape
(iniierea, elongarea, terminarea) cu participarea mai multor
componente. Transcripia este reglat de secvene de AND specifice ale promotorului,
terminatorului i alte secvene modulatoare (enhancer, silencer, operator). Secvenele consens
sunt recunoscute de proteine specifice reglatoare, ce interacioneaz cu ARN-polimeraza,
direcionnd, accelernd sau ncetinind procesul.
Transcripia la eucariote
n funcie de ARN-polimeraza care realizeaz transcrierea, eucariote genele se mpart n trei
clase:
Gene de clasa I gene ce codific ARNr 5,8S, 18S, 28S i sunt transcrise de ARN-polimeraza
I. ARN-polimeraza I reprezint activitatea sintetic cea mai mare - aproximativ
50-70%.
Gene de clasa II gene ce codific sinteza lanurilor polipeptidice, transcrise de ARNpolimeraza II (gene structurale). Se apreciaz c 10% din ADN uman este transcris n ARNm.
Enzima mai transcrie cteva gene care codific molecule mici de ARN nuclear (snRNA= smal
nuclear RNA). Activitatea relativ a ARN-polimerazei II este egal cu 20-40%.
Gene de clasa III gene ce codific ARNr 5S i ARNt, transcrise de ARN-polimeraza III.
Activitatea relativ a enzimei respective este egal cu aproximativ 10% din total.

Factori proteici de transcriere:

A. Factori de transcriere generali proteine care recunoscsecvenele consens ale promotorului,
punctul de iniiere a transcripiei (+1) i interacioneaz cu ARN-polimeraza II.
Aceste proteine sunt implicate n iniierea i direcionarea, elongarea i terminarea procesului la
toate genele de clasa II.
B. Factori de transcriere specifici proteine care recunosc secvene specifice ale promotorilor
genelor ce se exprim n anumite esuturi (de ex., receptorii hormonali steroidici, care
transport hormonii ce regleaz sinteza anumitor tipuri de proteine). Sunt implicai n activarea
anumitor gene (decondensarea cromatinei, eliberarea promotorului i activarea factorilor de
transcriere generali).
Mecanismul transcrierii
Transcripia este un proces ce se desfoar n mai multeetape: iniierea, elongarea, terminarea.
Produsul primar al transcripiei este o molecul de ARNm-precursor. Aceast
molecul este rezultatul polimerizrii ribonucleotidelor dup principiul complementaritii de pe
catena 3'5' (catena anticodogen) a moleculei de ADN.
Iniierea. Un factor decisiv pentru iniierea procesului de sintez a ARN este recunoaterea
primului nucleotid care va fi citit (+1). Punctul de start al transcripiei este determinat de
poziia secvenelor consens ale promotorului, iar ARNpolimeraza este responsabil doar de
sinteza ARN. Promotorul i punctul de start al transcripiei sunt recunoscute de factorii
proteici de transcripie (pentru iniierea transctipiei se formeaz un complex din circa 20 proteine
diferite). Pentru recunoaterea promotorului genei care va fi transcris este necesar
decompactizarea secvenelor respective de ADN, care este nrulat n jurul unor octamere de
histone formnd nucleozomul. Pentru a se realiza transcripia unei catene de ADN, aceste
structuri se modific, lund o dispoziie liniar, prin desfacerea celor dou uniti simetrice ale
miezului nucleozomului.
Moleculele histonice rmn ataate numai la una din catene, permind desfacerea local a
celeilalte catene de ADN i, deci, producerea transcripiei. Aceasta se realizeaz cu ajutorul
factorilor specifici de transcripie.
Elongarea. Primul eveniment al acestei etape const n modificarea configuraiei complexului
proteic de transcripie. Astfel, se elibereaz de la ARN-polimeraza II factorii TFIIB i
TFIIE rmnnd ataat TFIIF i FTIIH. Factorul TFIIH este considerat factor de elongare, avnd
activitate de helicaz ATPdependent, kinaz i poate fi implicat n repararea ADN.
ARN polimeraza II citete catena de ADN 3'5' i polimeraz n direcia 5'3' cu o rat de 30
nucleotide/sec. La nceputul fazei de elongare la ARN- polimeraz se ataeaz TFIIS care deine
rol n prevenirea eliberrii premature a ARN-polimerazei. n spatele ARN-polimerazei, de-a
lungul catenei de ARN se deplaseaz un factor proteic de eliberare. La promotor rmn ataate
urmtoarele proteine: FTIID, FTIIA i proteina intensificatoare. Acestea sunt necesare pentru
ataarea altor molecule de ARN-polimeraz II care vor sintetiza alte lanuri de ARN, pn la
recepionarea semnalelor reglatoare care blocheaz transcripia.

Terminarea transcripiei. Cnd ARN-polimeraza ajunge la secvena terminatorului transcrie i

secvena palindromic. Molecula de ARN imediat formeaz o bucl care ncetinete deplasarea
ARN-polimerazei (fig. 8.2). n consecin, polimeraza este ajuns de factorul de eliberare ceea ce
condiioneaz disocierea complexului ADN, ARN, ARN-polimeraz.
Processingul ARN
Produsul primar al transcripiei nu poate fi imediat transportat n citoplasm. n primul rnd,
ARNm precursor conine secvene necodificatoare (introni), n al doilea rnd
poate fi uor scindat de ARN-aze. Pentru a preveni degradarea, are loc prelucrarea capetelor
moleculei, iar intronii sunt nlturai. Totalitatea reaciilor de modificare a ARNm precursor
poart denumirea de maturizarea ARNm sau processing. Aceste procese se desfoar n nucleu i
sunt catalizate de enzime specifice. Etapele processing-ului sunt urmtoarele:
prelucrarea captului 5' (cap-are), prelucrarea captului 3'(poliadenilare), nlturarea intronilor
(splicing).
Splicing-ul
nlturarea intronilor din ARNm precursor i unirea exonilor are loc n nucleu, cu participarea
unui complex enzimatic denumit splicesom. Componentele acestui complex
sunt reprezentate de moleculele mici de ribonucleoproteide nucleare (snRNP), notate U1 U6.
Intronii sunt recunoscui dup secvena GU la captul 5' i secvena AG la extremitatea 3'.
La eucariote exist mai multe tipuri de splicing.
Splicing constitutiv prin care se nltur toi intronii, iarexonii sunt unii n ordinea n care
erau dispui n gen.
Splicing alternativ are loc prin selecia exonilor i/sau eliminarea difereniat a intronilor.
Astfel, de pe un ARNm precursor pot fi obinute mai multe variante de ARNm i respectiv mai
multe tipuri de proteine. n diferite esuturi i/sau la diferite perioade de dezvoltare pot fi
sintetizate proteine diferite de pe aceeai gen
Splicing prin amestec de exoni (exon shuffling) moleculele de ARNm se pot forma prin
schimbarea ordinii
exonilor. Se ntlnete foarte rar.
Trans-splicing formarea unei molecule de ARNm din ctevamolecule de ARNm precursor,
sintetizate de pe gene diferite. Se ntlnete la tripanosome, la unele nematode i trematode.