21.16.

Familia Poxviridae
Denumirea pox provine de la cuvntul englezesc pock (pustul, ulceraie). Familia Poxviridae include cele
mai mari i mai complexe virusuri, patogene pentru om i animale, la care produc infecii generalizate, cu erupii
veziculare sau pustulare cutanate (variola, vaccina) sau tumori benigne la om (Molluscum contagiosum) i la
iepure (fibromul Shope).
Poxvirusurile sunt clasificate n 2 subfamilii:
- Chordopoxvirinae, infecioase pentru vertebrate;
- Entomopoxvirinae, infecioase pentru nevertebrate: Melolontha (coleopter), Amsacta moori (lepidopter),
Chironomus (dipter).
In funcie de gazda pe care o infecteaz se disting 8 genuri: Orthopox (variola, vaccina etc.), Parapox (Orf),
Capripox (infecioase pentru ovine, caprine), Leporipox (virusul mixoma, transmis de nar, produce leziuni
tegumentare la anumite genuri de Leporidae; virusul fibromului Shope, transmis de un artropod, produce
papilomul Shope la iepurele de viziun Sylvilagus n America de Nord), Suipox (infecios pentru porc), Avipox
(infecios pentru psari), Molluscipox (produce tumori benigne la om) i Yatapox (produce tumori benigne la
primate). Ultimele dou nu se cultiv.
Structura (fig. 422a). Cel mai studiat este virusul vaccinei, cu form paralelipipedic (caramid cu colurile
rotunjite) i dimensiuni de 220 x 220 x 280 nm. Altele au form elipsoidal, cu dimensiuni de 400 x 230 nm, la
limita de rezoluie a microscopului optic.

Fig. 422a. Reprezentarea schematic a structurii virionului

pox (dup Buller, 1991).

Fig. 422b. Imagine electrono-optic a seciunii virionului vaccinal. n

regiunea central se distinge nucleoidul electronodens. Regiunea central
este acoperit de membrana extern i de nveliul extern, ambele
pluristratificate, x 160 000, original.

Virionul este format dintr-un nucleoid, bine delimitat pe imaginile electrono-optice ale virusului n seciune
frontal, n care se gsete ADN viral, avnd de fiecare parte cte o mas lateral, denumit corp lateral. In virion,
nucleoidul are form de disc biconcav, cu aspect de halter i este acoperit de membrana intern omogen i de
un strat extern alctuit din subuniti cilindrice scurte, cu aspect striat.
Zonele concave ale nucleoidului sunt ocupate de corpii laterali, de natur proteic. La exterior se gsete
membrana extern, de natur lipoproteic, care conine toate fosfolipidele virionului, colesterol i grsimi neutre.
Membrana extern este tapetat cu structuri de form tubular, vizibile la microscopul electronic pe preparatele
colorate negativ (fig. 422 b). La unele tulpini de virus, n diferite substraturi celulare, virionul dobndete un
nveli lipidic extern suplimentar.
Compoziia chimic. Componentele principale ale virionului sunt proteinele (90%), lipidele (5%) i acizii
nucleici (3,2%). Proteinele se solubilizeaz la l00 o n prezena SDS i a unui agent reductor. La electroforeza
bidimensional se disting circa l00 de proteine, dar potenialul de codificare a genomului este mult mai mare.
Numai n nveli se gsesc l0 polipeptide, dintre care 9 sunt glicozilate.
Reprezentanii familiei Poxviridae codific un set de enzime mult mai diversificat n comparaie cu alte virusuri,
unele eseniale pentru desfurarea ciclului de multiplicare, iar altele neeseniale. Dintre cele eseniale fac parte
ARN-polimeraza dependent de ADN, enzimele de prelucrare post-transcriere a ARN (de bonetare i adenilare),
ADN-polimeraza i topoizomeraze ADN (enzime care modific configuraia spaial a ADN, prin ruperea
catenelor, producnd relaxarea ADN suprahelical, n absena unui cofactor energetic). Discontinuitile create prin
clivarea unei catene sunt reunite prin aciunea ligazei, din echipamentul enzimatic al virionului.

Genomul poxvirusurilor este o molecul de ADN dublu catenar, linear, care conine l30-300 kbp (85000
kDa la parapoxvirusuri i l85000 kDa la avipoxvirusuri), distribuite n circa 200 de gene. Capetele celor dou
catene au o conformaie n bucl de ac de pr, cu secvene terminale repetate invers, identice, dar orientate pe
catene opuse. Secvenele terminale ale celor dou catene sunt legate covalent i formeaz un lan nucleotidic
continuu. Repetiiile terminale inversate includ secvene codificatoare, ceea ce face ca unele gene s se gsesc la
ambele capete ale genomului. Prin denaturare, molecula devine linear monocatenar. Funcional, genomul este
organizat n circa 180 ORF. Majoritatea genelor eseniale sunt localizate n partea central a genomului, iar genele
neeseniale (favorizeaz multiplicarea in vitro) sunt localizate la capete.
Poxvirusurile, iridovirusurile insectelor i virusul febrei suine africane au o particularitate unic printre
dezoxiribovirusuri: ciclul de multiplicare se desfoar n citoplasm, fiind total independent de nucleul celulei,
deoarece codific aproape toate funciile necesare replicrii genomului. Experimental, s-a demonstrat c
replicarea genomului acestor virusuri are loc i n celulele enucleate cu citocalazina B.
Ciclul de multiplicare (fig. 423). Virionul este nglobat n celul, prin pinocitoz mediat de receptori, a cror
structur molecular nu este cunoscut. Se presupune c factorul de cretere epidermic (EGF) ar avea rolul de
receptor de virus. Prima treapt a dezvelirii este catalizat de proteina de dezvelire ce acioneaz asupra regiunii
centrale i dezorganizeaz componentele stratului extern i a membranei interne. Dezvelirea final a ADN este
catalizat de alte proteine-enzime virale care hidrolizeaz membrana extern i astfel nucleoidul este eliberat din
regiunea central. ADN genomic purificat nu este infecios, deoarece sinteza ARNm este catalizat de ARNpolimeraza dependent de ADN, o enzim din echipamentul virionului.
Expresia genelor are loc n 2 faze: timpurie i tardiv. Genele fiecrei faze au promotori caracteristici.
In etapa timpurie este transcris circa jumtate din setul de gene i se sintetizeaz peste 50 de proteine, printre
care i proteina de dezvelire. n acest stadiu este stopat sinteza macromoleculelor specifice celulei. Genele
timpurii codific enzmele implicate n sinteza nucleotidelor (timidin-kinaza, ribonucleotid-reductaza) i ADNpolimeraza.

Fig. 423. Reprezentarea schematic a ciclului de multiplicare a unui poxvirus (dup Buller i colab., 1991).

Replicarea ADN viral ncepe n primele 6 ore dup infecie i furnizeaz circa l0000 de copii genomice.
Replicarea implic mecanismul self-priming. Genomul celorlalte dezoxiribovirusuri are o singur origine a
replicrii, dar la poxvirusuri, avnd dimensiuni mult mai mari, prezint puncte multiple de iniiere a replicrii, ca
i ADN al celulei eucariote. Replicarea ncepe la ambele capete ale genomului la nivelul inciziilor monocatenare
produse de o DN-az viral i progreseaz prin mecanismul deplasrii uneia dintre catenele parentale. ADN
progen pare a fi sintetizat prin intermediul unor molecule concatemerice mari.
n ciclul de multiplicare, strns legate de replicare, au loc evenimente de recombinare ntre moleculele
genomice ale unor tulpini virale diferite (recombinare legitim) sau recombinare cu molecule de ARN celular
(recombinare nelegitim), fenomen uurat de absena mpachetrii stringente a ADN. Aceast particularitate a
replicrii ofer modalitatea diversificrii informaiei genetice, ceea ce a permis evoluia i dobndirea unor funcii
noi. Virusul ce produce fibromul malign al iepurelui pare a fi recombinant ntre virusul fibromului Shope i
virusul mixoma.

Pentru sinteza replicativ a ADN, poxvirusurile codific sinteza a cel puin 2 enzime implicate n metabolismul
nucleotidelor: timidin-kinaza (Tk) i ribonucleotid-reductaza (Rr), cu aceleai semnificaii funcionale pe care
enzimele le au la herpesvirusuri. Gena Tk nu este esenial pentru multiplicarea poxvirusurilor n celulele
cultivate. Tk viral se deosebete de enzima celular, dar confer un avantaj selectiv pentru desfurarea ciclului
infecios n celulele care nu se divid i au o rezerv sczut de acid timidilic. In celule, activitatea Tk crete brusc
dup infecia cu poxvirusuri.
Ribonucleotid-reductaza (Rr) reduce ribonucleotidele la precursori ai sintezei ADN. ADN-polimeraza este
codificat de virus, ceea ce permite desfurarea ciclului de multiplicare n citoplasm. Polinucleotid-ligaza
(enzima ce repar breele n molecula de ADN) crete de 10 ori n faza timpurie a multiplicrii virale.
In faza tardiv a ciclului de multiplicare viral, este transcris restul informaiei genetice. Genele programului
tardiv codific moleculele structurale majore ale virionului. Transcrierea nu este blocat de inhibitorii sintezei
proteice sau ai replicrii ADN, pentru c enzimele catalizatoare sunt proteine structurale ale regiunii centrale a
virionului. Circa 30% din lungimea genomului codific molecule neeseniale pentru ciclul de multiplicare viral.
Dinamica procesului de multiplicare a fost analizat att structural, ct i prin metode biochimice la virusul
vaccinal. Este citocid i pentru c inhib sinteza ADN i a proteinelor celulare, uureaz analiza biochimic a
procesului. Structural, multiplicarea virusului ncepe n incluzii de tip B, n care se gsesc virioni n diferite stadii
de asamblare.
Asamblarea. Virionii progeni se asambleaz n interiorul unor zone ale citoplasmei, difuze sau bine delimitate,
alctuite din material fin-granular, denumite viroplasm. Studiul ultrastructural al multiplicrii virusului vaccinal
a relevat procesul stadial complex al morfogenezei, cu participarea cisternelor aparatului Golgi, care formeaz
nveliul extern al virionilor. Procesul asamblrii, complex i incomplet elucidat, comport edificarea de novo a
unor structuri membranare destinate s nglobeze o parte din materialele viroplasmei (fig. 424).
Creterea, turnover-ul i repararea membranelor celulare se face prin intercalarea componentelor structurale
(proteine, lipide) n structurile preexistente. Biogeneza de novo a membranelor rmne una dintre marile probleme
ale biologiei. Pentru virusurile pox, exist dovada morfologic ce arat c unele componente ale nveliului,
sintetizate sub control viral, ncep s se condenseze n membrane. Membranele sunt asamblate n focare
viroplasmice discrete i rmn separate de membranele celulare.
Membranele virale sintetizate de novo sunt detectabile n matricea viroplasmei i au structur trilaminar, fiind
tapetate la exterior de un strat dens de spiculi. Pe msur ce membranele cresc, ele nconjur ADN nascent i
proteinele acumulate n viroplasm.
Primele structuri detectabile electrono-optic n celulele infectate sunt nite formaiuni semilunare
tridimensionale, ce constau dintr-o membran dubl tapetat cu spiculi proemineni, ce formeaz o bordur n
perie pe suprafaa convex i un material granular, adiacent suprafeei concave. Membranele sunt sintetizate de
novo i nu sunt asociate cu nici-un organit celular, ceea ce semnific faptul c proteinele trebuie transportate de la
locul sintezei, la fabrica de virus. Spiculii confer rigiditate structurilor semilunare i determin dimensiunile
particulei virale imature. Genomul viral i proteinele asociate intr n nveliul imatur, nainte ca acesta s se
nchid complet.

Fig. 424a. Imagine electrono-optic a fabricii de

virus n celulele HEp-2 infectate cu virus pox,
120 000, original.

Fig. 424b. Stadiul iniial al asamblrii virionilor pox implic un proces de membranogenez
(stnga, x 66 000). n dreapta, asamblarea virionilor aglomerai ntr-o fabric de virus, x150 000
(original).

In interiorul structurilor delimitate de membrana dubl, ncepe condensarea nucleoidului. Virionii imaturi
delimitai de membrana dubl asamblat de novo (viitoarea membran intern a virionului matur) sunt
transportai din aria de asamblare spre periferia celulei. Pe acest traseu, virionii se nvelesc cu alte membrane
suplimentare. Studiile cito-imunochimice sugereaz ca virionii imaturi i asambleaz membrana dubl extern la
nivelul reelei trans-Golgi, un compartiment intermediar ntre reticulul endoplasmic granular i cisternele
golgiene. Virionii cu membrana extern dubl (fig. 425, 426), pierd stratul extern al membranei, prin fuziune cu
membrana citoplasmatic, pe msur ce sunt eliberai din celul. Din acest punct de vedere se poate spune ca
poxvirusurile se elibereaz prin nmugurire, dar la contactul cu membrana se pierde un strat al membranei externe.

Fig. 425. Imagine electrono-optic a virionilor pox n seciune. nveliul extern este conferit de membranele cisternelor Golgi, x 180
000, original.

Unele poxvirusuri (cowpox, avipox, etc.) produc incluzii de tip A. Acestea sunt corpi mari, electronodeni ce
conin ribosomi.

Fig. 426. Entomopoxvirus n celulele glandelor salivare de Chironomus sp. n stnga, civa virioni imaturi, nenvelii. n dreapta,
incluzii dense n coninutul crora se disting virioni, 100 000, original.

La electroforeza bidimensional, extractele virus-free din celulele infectate evideniaz numeroase polipeptide
structurale sintetizate n exces, dar i numeroase proteine solubile, biologic active, neeseniale, care interfer cu
mecanismele de aprare a gazdei, au rol n virulen sau ndeplinesc ambele funcii. Astfel s-a identificat
hemaglutinina, o protein a nveliului, dar prezent i n stare liber n citoplasma celulei infectate. Foarte
importante sunt proteinele din categoria viroceptorilor. Termenul semnific produse genice virale care au
omologie funcional cu receptorii celulari de citokine (receptorul pentru IFN-, receptorul pentru IL-l,
receptorul pentru TNF), inhibnd mecanismele de aprare a gazdei, stimulate de citokine. Moleculele omologe
receptorilor de citokine codificate de poxvirusuri se gsesc numai n form solubil, nefiind componente
structurale ale virionilor.
O alt categorie de molecule codificate de poxvirusuri sunt cunoscute sub denumirea de virokine. Termenul
reunete molecule codificate de genele virale, care au omologie funcional cu citokinele i influeneaz funciile

celulare ntr-un mod asemntor. Poxvirusurile codific omologi ai EGF, un factor de cretere a endoteliului
vascular, un inhibitor al serin-proteazei (serpin) ce inhib activarea citokinelor i diminueaz procesul inflamator,
proteine de legare a complementului (receptorul pentru C 4), proteine ce inhib exprimarea moleculelor CMH I pe
suprafaa celulelor, diminund recunoaterea lor de ctre limfocitele Tc. Printre proteinele care moduleaz
citokinele este o protein inhibitoare a ICE (proteaza care genereaz forma activ a IL-1), un receptor solubil
pentru IL-1 care inhib legarea IL-1 (dar nu legarea lui IL-1 sau IL-1-ra) de receptorul celular pentru IL-1.
Prin complexitatea lor biochimic, prin diversitatea enzimelor pe care le conin, poxvirusurile se abat mult de la
modelul general de structur a celorlalte virusuri. Faptul c ele se multiplic n citoplasm, fr participarea
enzimelor nucleare este o reflectare a complexitii lor funcionale. Dei complex i diferit de a celorlalte
virusuri, structura lor nu ntrunete particularitile sistemelor biologice.
Variola este prima viroz controlat prin vaccinare i singura eradicat. Variola produs de virusul slbatic
produce o erupie (rash) sistemic, febril, dup o perioad de incubaie de 10-14 zile. Dup incubaie, n 1-2 zile
se produce erupia tegumentar sistemic cu distribuie centrifug: pe mucoasa bucal, fa, extremiti i mai
puin pe trunchi. Erupia este macular, dar evolueaz n forma pustular i vezicular. Leziunile fac crust i cad
la 14 zile.
Vaccinarea cu virusul vaccinal este eficient profilactic, dar produce uneori complicaii generalizate (200
cazuri la un million de vaccinai).
Parapoxvirus produce infecii la ovine, caprine, bovine. Omul se infecteaz la contactul cu animalele infectate.
La caprine i ovine, parapox produce dermatita pustular contagioas (orf). Infecia se face prin leziuni
tegumentare. Dup infecie se produce hipertrofia i proliferarea celulelor epidermice i infiltrarea leucocitelor.
Molluscum contagiosum (MC) este o tumor benign a pielii asemntoare unui neg, la copiii preadolesceni,
dar poate s apar la adulii imunocompeteni, rspndit la populaia de pe ntreg globul. MC este considerat ca
o infecie specific omului. Nu exist dovada transmiterii infeciei la animale, dei leziuni asemntoare s-au
identificat la cal. Leziunile MC sunt globulare sau ovalare cu diametrul de 2-5 mm, pot s apar pe toat suprafaa
corpului, cu excepia epiteliului palmar i a mucoaselor i pot fi asociate cu foliculii piloi. Leziunile sunt mai
severe la imunocompromii i la cei cu dermatit atopic. Tumorile sunt rezultatul unui proces hiperplazic, strict
limitat la stratul epidermic al tegumentului (de aceea sunt clasificate ca acanthoma) i sunt asemntoare
foliculilor de pr. Din zona central a leziunii se elibereaz un fluid vscos cu resturi celulare n care se gsesc
virioni. Fluidul disemineaz virusul infecios. Dac nu sunt perturbate mecanic leziunile MC persist ntre 6 luni
i 5 ani la gazdele imunocompetente. Pot s dispar spontan, probabil sub aciunea efectorilor imunitari. Dac
sunt lezate mecanic, leziunile se vindec mai repede, dar favorizeaz suprainfecia bacterian. MCV este un
indicator al stadiului tardiv al SIDA.
Virusul este transmis prin contactul cu exudatul descrcat din leziunile traumatizate prin aciune mecanic i
prin contactul direct cu obiectele contaminate. MC este puin contagios, iar pentru infecie, doza inoculat trebuie
s fie mare. Se transmite prin contact sexual dac leziunile sunt situate pe sau n vecintatea organelor sexuale.
Virusul ptrunde n epiderm prin microleziuni. Dup o perioad de incubaie cu durat variabil, uneori lung,
prin hipertrofia epidermei se formeaz pustule, apoi un nodul ce se extinde n derm, dar membrana bazal rmne
intact. n celulele infectate ale stratului bazal se formeaz incluzii pline cu virioni. Prin mbtrnire, celulele
migreaz spre suprafa i sunt nlocuite prin hiperplazia stratului bazal (sunt produse mai multe celule dect cele
care se pierd). Celulele care produc MCV sunt hipokeratinizate, dovada unui proces de difereniere anormal.
Leziunea este delimitat de o capsul conjunctiv. Histologic, leziunea MCV conine conglomerate de celule
epiteliale hiperplazice ntr-o indentaie central, organizate n foliculi, n care se multiplic virusul. ntreaga
leziune are aspectul unui folicul pilos, n care prul este nlocuit de conglomeratul celular.
In leziunile MC lipsesc efectorii imunitari, n special macrofagele specifice esutului tegumentar (celulele
Langerhans). Absena efectorilor imunitari se datoreaz sintezei unui factor codificat de virus care blocheaz
imigrarea neutrofilelor i a moleculelor omologe CMH I, care blocheaz prezentarea antigenelor virale i o fac
nedetectabil antigenic.
Virusul MC nu a fost cultivat, dar induce ECP specific n fibroblastele umane primare i n cele imortalizate.
ECP devine evident dup 4 ore i atinge intensitatea maxim la 24 de ore: o proporie semnificativ a celulelor se
detaeaz din monostrat, se rotunjesc i se agreg. La 48-72 ore de la infecie, celulele ader de substrat, dar i-au
pierdut morfologia caracteristic i dobndesc aspectul epitelioid. ECP nu este indus n celulele tratate cu
cicloheximid (un antibiotic inhibitor al sintezei proteinelor - inhib alungirea catenei polipeptidice) i nici de
preparatul MCV inactivat prin iradiere, ceea ce denot c MCV transcrie ARNm timpuriu.

Bibliografie
Bugert J. J.2008. Molluscum Contagiosum virus, n vol. Encyclopedia of Virology, third edition, Editor Brian W.
J. Mahy, Marc H. V. Van Regenmortel, AP.
Baxby D. 1990. Poxviruses, n vol. Topley and Wilsons Principles of Bacteriology, Virology and Immunity, 8th
Ed. M. Tom Parker, Lesslie H. Collier.
Moss B. 1990. Poxviridae and Their Replication, n vol. Virology, Sec. Ed., edited by B. N. Fields, D. M. Knipe
et al., Raven Press, Ltd, New York.
Fenner F. 1990. Poxviruses, n vol. Virology, Second Edition, edited by B. N. Fields, D. M. Knipe et al., Raven
Press, Ltd, New York.
Moss B. Poxviridae: The Viruses and Their Replication, n vol. Fields Virology, Second Edition, edited by B. N.
Fields, D. M. Knipe, P. M. Howley et al., Lippincott - Raven Publishers, Philadelphia.
Buller R. M., Palumbo G. J. 1991. Poxvirus pathogenesis Microbiol. Rev., 1991, 55 (1) : 80-122.
Mihescu Gr. 1985. Inhibition of some deoxyriboviruses replication cycle in tannic acid pretreated cells. Rev.
Roum. Biol. 30, 2, 175-179.
Mihescu Gr., Micalencu D., Ionescu M. D. 1980. Ultrastructural aspects of vaccinia virus morphogenesis in
L-23 line cells. Rev. Roum. Biol. 25, 1, 69-73.
Mihescu Gr., Gavril L.1988. A poxvirus in salivary glands of Chironomus plumosus. Rev. Roum. Biol. 33, 1,
15-20.