Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
07 Spectrofotometrie
07 Spectrofotometrie
(4.1)
Numele
spectral
metodei
Gama-terapie
(cobaltoterapie)
Informaii
(aciuni) directe
Informaii (aciuni)
Semnificaii
indirecte
clinice
Absorbia
radiaiilor n
esuturi
Distrugerea celulelor
(preponderant cele
canceroase)
Terapia
cancerului
Scintigrafia
nregistrarea
emisiei de
radiaii
Determinarea distribuiei
radioizotopilor introdui
n organism
Diagnostic
funcional al
organului
Radiografie
Absorbia
radiaiilor X n
esuturi
Diagnosticarea
fracturilor,
fisurilor etc.
Tomografie
computerizat cu
raze X
Absorbia
razelor X n
esuturi
Imagini a oricrei
seciuni prin corp
esuturi dense)
UV,vizibil,
IR
Spectrofotometrie
Absorbia
Determinarea
Diagnosticarea
acestor radiaii concentraiilor diferitelor diferitelor
de
ctre molecule
maladii
(ex.
molecule
diabetul)
Vizibil, IR
Oximetrie
Absorbia
Determinarea raportului
radiaiilor roii Coxihemoglobin/Chemoglobin total
i infraroii de
ctre snge
Monitorizarea
gradului de oxigenare a sngelui
Microunde
Rezonan
Absorbia
Urmrirea proceselor n
electronic de spin microundelor
care apar radicali liberi
(RES)
de
ctre
radicalii liberi
aflai n cmp
magnetic
Se sper c se
vor putea urmri
procesele metabolice
Radiounde
Tomografie
de
rezonan
magnetic nuclear
(RMN)
de
vizualizare
Imagini
cu
detalii de ordinul
milimetrului mai
ales pe esuturi
bogate n ap
(moi)
Absorbia
Imagini
a
oricrei
radioundelor de seciuni prin corp
ctre nucleele
de
hidrogen
plasate n cmp
magnetic
Desigur cnd vrem s caracterizm n ntregime metoda vom utiliza toate criteriile. De
exemplu, metoda pe care o vom utiliza se numete spectrofotometrie de absorbie n domeniul
vizibil pe macroprobe.
Informaiile obinute cu aceast metod pleac de la legea absorbiei luminii scris sub forma:
I = I010-cd (legea BEER-LAMBERT)
(4.2)
I
I0
(4.3)
(4.4)
E
d
unde:
C concentraia substanei, msurat n mol/l
- coeficient de extincie, msurat n 1/mol*cm.
De asemenea, putem observa c
(4.5)
3. Mod de lucru
Vom folosi un spectrofotometru n domeniul vizibil, soluii de acridin-orange, etalon (cu
concentraii cunoscute), soluii cu concentraii ce urmeaz a fi determinate i eprubete
calibrate.
Schema bloc a unui spectrofotometru este reprezentat n Fig. 4.1:
S = sursa de radiaii care trebuie s emit toate din domeniul investigat (n cazul nostru este
un bec cu incandescen ce emite lumin alb).
M = monocromator, alege din ce emite sursa o singur (poate fi cu prism, cu reea de
difracie sau filtre).
B = solventul (blanc) folosete la etalonarea de T=100%
P = proba pentru care msurm E (sau T)
D = detectorul transform lumina n curent electric n cazul nostru este o fotocelul dar la
aparatele mai performante poate fi un fotomultiplicator sau fotodiod.
A = amplificator
I = nregistrator, microampermetru gradat n uniti liniare de transmisie i uniti logaritmice
de extincie.
Citirile se vor face n regiunea 420-540 nm cu citiri din 10 n 10 nm. Pentru o citire se
introduce n cuva aparatului eprubeta cu apa distilat (solventul). Se alege din butonul 1
Comutatorul 2 n poziia 0 obtureaz fanta dinspre prob a aparatului astfel nct la fotocelul
nu ajunge lumin. n aceste condiii aparatul ar trebui s indice T = 0. Dac nu indic aducem
acul indicator la 0 din butonul 3. Cu comutatorul 2 n poziia I se deschide drumul luminii
prin eprubeta cu solvent spre fotocelul. Vom considera c solventul nu absoarbe lumina (sau
nu ne intereseaz ce absoarbe) astfel nct ce iese din solvent va fi considerat I0 aparatul de
msur trebuind s indice T = 100%. n cazul n care acest lucru nu se ntmpl vom aduce
acul indicator n dreptul indicaiei 100 din butonul 4. Dup ce am efectuat reglrile de 0 i 100
Cu datele msurate vom trasa curbele de absorbie [E = f()] pentru fiecare soluie n
parte dar pe acelai grafic. Fiind soluii de aceeai natur ar trebui ca forma curbelor s nu
difere dar nlimea lor s fie cu att mai mare cu ct concentraia soluiei este mai mare.
Pentru AO vom putea observa prezena a dou maxime relative la 465 i 494 nm. Aceasta
indic prezena n soluii a dou specii moleculare. Cel de-al doilea, prezent practic singur la
concentraii mici, se datorete monomerului de AO n timp ce al doilea (a crei amplitudine
relativ crete cu creterea concentraiei soluiei) se datorete dimerului de AO. Proporia
celor dou specii moleculare poate fi modificat i prin modificarea temperaturii. La
temperaturi mai mari va predomina monomerul iar la temperaturi mai mici dimerul.
Modificarea pH-ului unei soluii de AO duce la apariia unui echilibru ntre alte dou specii
moleculare monomerul nedisociat de AO predominant la valori mici ale pH-ului
(max = 494nm) i cationul de AO predominant la ph mare ( max = 434nm). Curbele de
absorbie ale soluiei de AO trasate la valori ale ph-ului diferite se intersecteaz n acelai
punct n dreptul valorii = 450nm. Acest punct se numete punct izosbestic i el indic
existena a dou specii ce se schimb una n alta n funcie de valoarea parametrului care
variaz (n cazul nostru pH-ul).
Pentru determinarea concentraiei necunoscute se traseaz graficul E = f(c) cu valorile
extinciei corespunztoare unuia din maximele relative (de exemplu cel de la 494 nm sau la
valori apropiate). Pe grafic se pune apoi valoarea Ex a extinciei soluiei de concentraie
necunoscut msurat la aceeai lungime de und. Prin interpolare sau extrapolare pe grafic se
va afla apoi concentraia. Chiar dac vom trasa graficul folosind aceleai date valoarea
concentraiei obinute poate fi uor diferit deoarece trasarea lui este relativ arbitrar. Pentru
trasarea obiectiv a graficului se poate folosi metoda celor mai mici ptrate.