ANTIBIOGRAMA

Antibiograma: testarea sensibilitii microorganismelor fa de antibiotice

1. Metode calitative

Metoda difuzimetric Kirby-Bauer

Se testeaz sensibilitatea unei tulpini bacteriene izolate.

a. Prepararea inoculului:
- se suspensioneaz 2-3 colonii izolate n ser fiziologic;
- turbiditatea suspensiei se controleaz nefelometric sau comparnd cu tuburi etalon
(conin suspensii de particule latex/sulfat de Ba avnd turbiditate determinat);
- se ajusteaz la 0,5 McFarland (1,5x108 CFU/ml).
b. nsmnare:
- se alege un mediu corespunztor speciei bacteriene testate
Mueller-Hinton pentru majoritatea bacteriilor
Mueller-Hinton cu snge pentru pretenioi (de ex. streptococi)
medii speciale (pentru Haemophilus spp., neisserii)
- se introduce un tampon n suspensia bacterian, se stoarce pentru ndeprtarea
excesului de lichid
- se terge uniform toat suprafaa mediului de 3x
c. Depunerea microcomprimatelor de antibiotice
- se aleg antibioticele care trebuie testate n funcie de specia bacterian testat i n
funcie de localizarea infeciei conform recomandrilor standardelor n vigoare
- se depun discurile de antibiotic la 1,5 cm distan de marginea cutiei Petri i la 3 cm
distan unul fa de cellalt (pot fi depuse max. 7 discuri)
- 15 min. temperatura camerei
d. Incubare
- n funcie de specia bacterian: n atmosfer obinuit sau n atmosfer de CO2 (de
ex. streptococi, neisserii,)
- 35C
- 16-18 ore (n cazul germenilor pretenioi pn la 20-24 de ore)
e. Citirea antibiogramelor
- apare o cultur bacterian confluent, n jurul microcomprimatelor apar zone de
inhibiie (lipsa creterii bacteriene),
- se citesc diametrele zonelor de inhibiie
- se compar diametrele citite cu diametre standard n funcie de antibiotic, cantitatea
de antibiotic din comprimat, specia bacterian testat

Tabel: Exemple de diametre standard, conform standardelor CLSI (Clinical

Laboratory Standards Institute, USA)

Specii Antibiotic Rezistent Intermediar Sensibil

bacteriene sensibil
S. aureus Penicilin 10 U 28 mm - 29 mm

Enterococcus Penicilin 10 U 14 mm - 15 mm
spp.
 - pot aprea fenomene de sinergism/antagonism care reflect diferite mecanisme de
rezisten
- colonii izolate n interiorul zonei de inhibiie: subpopulaii rezistente

f. Interpretarea antibiogramelor:
- Rezultatul se raporteaz: sensibil (S), intermediar sensibil (IS) sau rezistent (R) la
antibioticul testat
- nu se comunic diametrele citite (metod calitativ)
- Se identific fenotipuri de rezisten (presupune cunoaterea rezistenei intrinsece a
bacteriilor + a mecanismelor de rezisten prin care bacteriile pot dobndi rezisten
la diferite antibiotice)

Variabilele care influeneaz rezultatele:

- compoziia mediului (coninut de cationi, timidin)
- pH (optim: 7,2-7,4)
- grosimea gelozei (standard: 4 mm)
- inoculul - 0,5 McFarland
- microcomprimate (valabilitate, coninut, condiii de pstrare)
- timpul, temperatura de incubare
- citirea diametrelor (lumin refractat/reflectat, colonii izolate, prezena unui vl,
margini crenelate)

Control de calitate
- microcomprimatele,
- loturile noi de medii de cultur se testeaz cu tulpini de referin

2. Metode cantitative

Permit stabilirea concentraiei minime inhibitorii (CMI) a unui antibiotic

CMI: cantitatea cea mai mic de antibiotic care inhib complet multiplicarea unei bacterii
Este recomandat testarea cantitativ n urmtoarele situaii:
- cazuri clinice grave (septicemii, endocardite, meningite)
- rezultate incerte cu metoda difuzimetric / sensibilitate nedeterminat
- situaii speciale (de ex. testarea sensibilitii pneumococului la penicilin printr-o
metod cantitativ cnd diametrul zonei de inhibiie la oxacilin este sub 20 mm)
CMI obinut se raporteaz la punctele de ruptur superioare i inferioare date de CLSI

Exemplu: Puncte de ruptur CMI n g/ml pentru ampicilin

Specii bacteriene Sensibil Intermediar Rezistent
sensibil
Stafilococi 0,25 - 0,5
Enterococi 8 16
Enterobacterii 8 16 32
Metoda diluiilor (macro/microdiluie)
- se realizeaz diluii succesive din antibioticul de testat n mediu de cultur lichid
- se adaug cantiti fixe din cultura bacterian cercetat
- incubare 18 ore 35C
- se urmrete apariia culturii n mediul lichid
- CMI: cea mai mic concentraie de antibiotic care nu permite creterea germenilor
(cultur limpede)

Metoda diluiilor n agar

- se realizeaz diluii succesive din antibioticul testat n geloz Mueller Hinton
- se nsmneaz cultur bacterian n spoturi
- citire: CMI concentraia cea mai mic care inhib complet creterea

E-teste
- pe suprafaa mediului de cultur solid i nsmnat se aplic fii din plastic
impregnate cu antibiotic n concentraie crescnd la un capt concentraia este
minim, la cellalt este maxim; gradaiile sunt notate pe fie;
- incubare
- apar zone de inhibiie de form elipsoidal, n dreptul intersectrii cu fia de plastic
se citete CMI