DETERMINAREA SENSIBILITATII LA ANTIBIOTICE

ANTIBIOGRAMA
Scopul antibiogramei(ABG) este de a determina
sensibilitatea unui germen la unul sau mai multe
antibiotice in vederea instituirii unei conduite
terapeutice eficiente
In acelasi timp, ABG serveste si la supravegherea
epidemiologica a rezistentei bacteriene, precum si
la identificarea bacteriana
ABG se efectueaza prin tehnici cantitative si
calitative
1.TEHNICI CANTITATIVE
1.1.Determinarea CMI(concentratia minima
inhibitoare)
- CMI=concentratia minima de antibiotic care inhiba
cresterea vizibila a unui germen in 24 de ore
- CMI determina practic efectul bacteriostatic al unui
antibiotic
- Principiu: o incarcatura bacteriana
standardizata(inocul) se pune in contact cu o serie
de concentratii crescande de antibiotic realizand
dilutii in progresie geometrica in baza 2
a. Tehnica dilutiilor in mediu lichid
- Inoculul bacterian se distribuie intr-o serie de tuburi
sau in godeuri ce contin bulion Mueller-Hinton cu
antibioticul in concentratii crescande(0; 0,25; 1; 2;
4; 8;16)
- Inoculul=suspensie dintr-o tulpina bacteriana
diluata de ordinul 10 germeni/ml

- Dupa incubare, CMI este data de tubul/godeul care

contine cea mai mica concentratie de antibiotic la
care cresterea bacteriana nu mai este vizibila
- Metoda are cost ridicat si este laborioasasituatii
de urgenta
b. Tehnica dilutiilor in mediu solid
- Metoda de referinta, folosita pentru cercetari
speciale
- Rezervata laboratoarelor mari
- Antibioticul de concentratie data este incorporat in
mediul gelozat turnat in placi Petri
- Dupa incubare, CMI este determinata prin inhibarea
cresterii pe mediul care contine concentratia cea
mai mica de antibiotic
O tulpina se considera sensibila(S) la actiunea unui
antibiotic atunci cand CMI a antibioticului respectiv
este net inferioara concentratiei sangvine obtinute
dupa administrarea unei doze utilizabile in
terapeutica
- Rezistenta(R) atunci cand CMI a antibioticului
este prea ridicata pentru a putea fi atinsa in vivo
fara a utiliza doze toxice
- Intermediara(i) cand CMI nu poate fi atinsa de
catre o antibioterapie standard, dar ar putea fi
realizata prin doze mari pe cale generala
c. Epsilometrul sau E-testul
- Permite estimarea indirecta a CMI
- Se folosesc bandelete impregnate cu un gradient
exponential continuu din antibioticul de testat

- E-testul asociaza metodele de difuzie cu cele de

dilutie in mediu solid
- Bandeletele se aplica pe suprafata unui mediu
gelozat insamantat in prealabil cu un inocul din
tulpina de testat
- Dupa incubare, inhibitia cresterii se traduce printr-o
elipsa de inhibitie ale carei puncte de intersectie cu
bandeleta definesc CMI
1.2. Determinarea CMB(concentratia minima
bactericida)=cea mai mica concentratie de
antibiotic care omoara o proportie definita de
bacterii intr-un interval de timp si in conditii precise
- Rezervata testarii izolatelor de la bolnavii
imunodeprimati sau cand infectia este situata in
zone greu accesibile
2.TEHNICI CALITATIVE
2.1. METODA DIFUZIMETRICA
- principiu: pe suprafata unei geloze nutritive turnata
intr-o cutie Petri si insamantata uniform cu
suspensia bacteriana de testat aflata in faza de
crestere exponentiala, se depun microcomprimate
de hartie de filtru imbibate cu o cantitate
predefinita de antibiotice pe care le elibereaza intro cantitate fixa, riguros egala
Insamantarea propriu-zisa
- Germenul de testat provine dintr-o cultura pe
mediul lichid sau recoltand cu ansa 5-6 colonii de
pe suprafata unui mediu solid neselectiv dupa
incubare la 37

- Coloniile se suspenda direct, fie in solutie clorurosodica tamponata, cu ph de 7,2, fie in bulion si se
ajusteaza la turbiditatea standard folosind etalonul
5 din scara Mc Farland
- Depunerea inoculului se face fie prin inundare cu
produs, fie cu ajutorul unui tampon de vata steril
care se imbiba cu suspensie bacteriana
- Se depun discurile
Microcomprimatele sunt comercializate de diferite
firme, sunt standardizate, se pastreaza la frigider in
ambalaje perfect etanse
- Se depun la distante de minim 15 mm, de
marginea placii si 30 mm intre centrele a doua
discuri vecine
- Se incubeaza la 37 pentru 24 de ore
- A doua zi se citesc rezultatele
- Diametrele zonelor de inhibitie se raporteaza la
tabele interpretative pentru fiecare substanta
antimicrobiana, permitand transformarea
rezultatelor in categorii de sensibilitate, rezistenta
sau sensibilitate moderata
2.2.CAUZE CE POT INFLUENTA INTERPRETAREA
ANTIBIOGRAMEI
- Continutul in Ca si Mg: concentratiile prea mari
inhiba actiunea aminozidelor, tetraciclinelor si a
polimixinelor
- Continutul in timina: trebuie sa fie fix, altfel
deterioreaza activitatea sulfamidelor
- Ph-ul: influenteaza activitatea mai multor
antibiotice

- Grosimea stratului de geloza: conditioneaza

concentratia sursei de antibiotic; max.4 mm
- Pastrarea microcomprimatelor- in conditii optime
- Densitatea inoculului bacterian-ajustat cu ajutorul
unui etalon de opacitate(scara etalon McFarland)
- Temperatura si durata de incubare- trebuie sa fie
fixe:18-24h la 35-37