Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Anul II
Anul II Microbiologie - cursul 1
Microbiologie
Curs 1
1.X.2007
Microbiologia
este stiinta a studiului vietii;
are ca obiect de studiu microorganismele;
aplicatii practice - tehnici de lucru care permit izolarea si identificarea agentilor
patogeni;
virusurile nu pot fi vazute la microscopul optic (10-9 m) si nu sunt celule;
bacteriile:
- sunt unicelulare si pot fi vazute la microscopul optic (10-6 m);
- nu exista diferentiere tisulara dar exista diferentieri celulare:
*celula vegetativa (activa metabolic);
*sporul – forma rezistenta (inactiva metabolic).
Paradigma = (model) trebuie sa explice starea de boala sau sanatate prin tratament diagnostic.
o anatomo-functionala
*se refera la organism ca ansamblu si structura
*perturbarile de structura si functie se evidentiaza prin diagnostic clinic
o chimica
*se refera la organism ca ansamblu de substante chimice
*modificarile calitative sau cantitative ale unei substante se evidentiaza prin diagnostic de
laborator
o genetica = bio - moleculara
Unelte medicale:
Seruri terapeutice – ser imun
- ser antitetanic – bacilul tetanic produce o toxina
- serul contine anticorpi fata de toxina tetanica (neutralizeaza toxina)
- ser antidifteric – ramane in faringe unde elibereaza toxina
- serul contine anticorpi de neutralizare
ex. Botulism
• toxiinfectie alimentara de tip particular
• spre deosebire de restul – constipatie in loc de diaree
• se trateaza doar cu ser antibiotic
• bacilul botulinic: 8 tipuri (la om 4) – ser specific
Microorganismele
au rol si in sanageneza nu doar in patogeneza
" Streptococcus viridans = sanogen (bacterie comensala din faringe)
" Streptococcus piogenes (β-hemolitic) = patogen
lumea microorganismelor este ubivitara, evolutiva si diversificata (complexa)
Microbiocenoza = ansamblu organizat de microorganisme (care se opun microorganismelor
patogene), gasit pe suprafata sau in interiorul organismului (colon, cavitatea bucala)
organismul uman contine
- 1013 celule eucariote
- 1014 celule procariote
au efecte favorabile in: dospirea painii; fermentatie; putrefactie
1.
Anul II Microbiologie - cursul 1
Istoricul microbiologiei
Fracastoro
- notiunea de carantina (boala se ia prin contagiune)
Karl Linne
Edward Jenner
- introduce vaccinarea antivariolica fara a cunoaste agentul etiologic al variolei (virusul)
- laptarii care aveau contact cu ugerul vacii (deci cu Vaccina) nu dezvoltau boala
- preleveaza substanta de pe ugerul vacii si o inoculeaza oamenilor ⇒ succes
- 1978 – variola considerata eradicata
Louis Pasteur
- a aratat ca viata ia nastere din viata
- studiaza procesul de fermentatie provocat biologic sau chimic si demonstreaza specificitatea de
substrat a acesteia
- a gasit primele posibilitati de sterilizare
Sterilizarea = distrugerea tuturor microorganismelor vii (minim 30 minute)
Dezinfectia = distrugerea microorganismelor patogene
- a izolat bacterii pe mediu de cultura
- a dovedit ca o activitate metabolica se poate dezvolta si in conditii de anaerobioza
- a descoperit vaccinul antirabic
Robert Koch
- a descris pentru prima data bacilul carbunos (antrax): Baccilus antracis
- a descoprit agentii etiologici ai tuberculozei
- scrie „postulatele lui Koch” despre etiologia bolilor infectioase = reguli ce stabilesc specificitatea
etiologica a unei infectii
- determina aparitia chimioterapiei
- bacilul Koch
Paul Ehrlich
- întemeietorul chimioterapiei
- descopera substantele care sunt active pe procariote dar nu si pe eucariote = substante
antibacteriene
- principiul toxicitatii selective
Alexander Fleming
- 1929 - descopera penicilina ce se utilizeaza in terapie din 1940.
- realizeaza diversificarea microbiologiei desprinzandu-se o serie de discipline ce acopera un
camp larg: bacteriologia, virusologia, parazitologia, micologia, algologia, helmintologia,
imunologia.
2.
Anul II Microbiologie – cursul 2
Microbiologie
Curs 2
8.X.2007
Victor Babes - a scris primul tratat de microbiologie valabil si azi „Bacteriile si rolul lor in
anatomia si histologia bolilor infectioase”
- a descris niste protozoare „babesia”
- anatomo-patolog la Budapesta
- a descoperit incluziunile intracitoplasmatice
- s-a ocupat de vibrionul holerei si de antagonismul microbian
- a fost profesor la facultatea de medicina din Cluj (1919-1920)
- profesor de morfopatologie si microbiologie la Bucuresti (din 1887)
- primul care asociaza vaccinul antirabic si seroterapia antirabica (turbare)
Ioan Cantacuzino
- studiaza la Paris
- probleme de imunitate dobandita (de contact)
- introduce vaccinul BCG (Bacil Calmette-Guérin)
- intemeiaza laboratorul de microbiologie si institutul care ii poarta numele
- s-a ocupat de vibrionul holerei si scarlatinei
Microorganismele
Evolutia microorganismelor = este un rezultat al interactiunii dintre modificarile materialului genetic
(prin mutatii, duplicare, transfer de material genetic) si presiunea selectiva
a mediului inconjurator (pastreaza in evolutie acele molecule cu
proprietati ale microorganismelor)
MACROEVOLUTIA – se refera la aparitia de noi genuri, specii, clase determinand diversificarea
formelor de viata
MICROEVOLUTIA – se refera la aparitia unor componente si proprietati noi in interiorul unei
specii. Ex: evolutia mecanismului de rezistenta la antibiotice
BACTERII
- patogenice de ordin I = bacterii patogene care produc imbolnaviri
- comensale (patogenice de ordin II) = pot produce infectii la organismul imun-
compromis (ex: Escherichia coli)
Clasificarea patogenilor in functie de:
Riscul de infectie = probabilitatea ca intr-o situatie de intalnire dintre microorganism si om sa apara
infectia.
Riscul biologic (biohazard) = grad de periculozitate pe care un microorganism il are fata de
organismul uman.
Criterii pentru gradul de periculozitate (risc):
• este patogen pentru om (infectia se manifesta ca boala)
• risc pentru omul de laborator
• risc de raspandire in colectiv
• exista mijloace de tratament si profilaxie
1.
Anul II Microbiologie – cursul 2
Grupa I
- microorganisme putin patogene
- au o probabilitate scazuta de a produce îmbolnavirea
Grupa II
- microorganisme patogene pentru om
- pot produce imbolnavirea cand exista in cantitati crescute
- risc pentru omul de laborator
- pericol scazut de raspandire
- exista mijloace de tratament si profilaxie
- ex: Stafilococcus; Bacillus cereus; Bordetella pertussis ( ⇒ tusea convulsiva), unele Salmonelle,
Treponema palidum ( ⇒ sifilis); Nisseria meningitidis, virusul gripal, virusul herpetic,
Klebsiella
Grupa III
- pot produce boli grave
- risc crescut pentru omul de laborator
- se raspandesc usor in populatie
- exista mijloace de tratament si profilaxie
- ex: bacilul carbunos (antrax), bacilul tuberculos, Brucella, Salmonella typhi, virusul hepatitei B,
HIV, virusul rabic, taxoplasma, Rickettsia typhi ( ⇒ tifos)
Grupa IV
- produc boli grave pentru care gradul de mortalitate e mare
- risc crescut pentru omul de laborator
- raspandire foarte mare
- de obicei nu exista mijloace de tratament iar mijloace de profilaxie sunt putine
- ex: arbovirusuri (care produc encefalite virale), virusul Ebola, virusul Marburg
Organisme celulare:
• unicelulare cu celula :
- de tip procariot: bacterii
- de tip eucariot: fungi, protozoare, alge
• pluricelulare, dintre care pentru medicina prezinta interes: - helminti
- artropode
2.
Anul II Microbiologie – cursul 2
Animal
Vegetal
Protista
- organisme unicelulare de tip eucariot
- alge unicelulare, protozoare
Miceta (Fungi)
- masa de filamente se inlantuie ⇒
hife
- fungi inperfecti (nu formeaza hife)
Procariota
- Cyanobacteria (alge albastre-verzi)
- Archaebacteria (bacterii metanogene,
extrem halofile, termoacidofile)
- Eubacteria (toate bacteriile care
paraziteaza omul = chimiosintetice)
3.
Anul II Microbiologie – cursul 2
- traducere-succesiva in
compartimente diferite
• ARNm – monocistronic si cu viata
lunga
Citoplasma • compartimentata: RE, Ap Golgi, • necompartimentata – absenta
citoschelet organitelor celulare si a
• ribozomi 80S (60S + 40S) citoscheletului
• ribozomi 70S (50S + 30S)
Invelis • mb lipoproteica + colesterol • mb nu contine steroli, cu exceptia
(mb, perete) • nu exista perete celular bacteriilor din genul Mycoplasma
• unele celule au perete rigid format din • peretele celular = obliagatoriu, contine
celuloza sau chitina peptidoglican – mureina
Multiplicare • diviziune sexuata • diviziune amitotica, prin sciziparitate,
• mitotica sau meiotica condusa de un fisiune binara, nu exista apartat
aparat de diviziune celulara mitotic
• uniunea a doua celule germinative • apare fenomenul de sexualitate
haploide conduce la formarea unui primitiva – conjugarea bacteriilor
ou (zigot) diploid
Morfologie bacteriana
• frotiu – germeni omorati, se coloreaza examinare prin imersie
• preparat nativ – contine germeni vii, nu se coloreaza se
examineaza la microscopul optic (MO) ⇒ ne da informatii in
special despre mobilitate
1. Coci
 bacterii sferice
 diametru de 1 μm
4.
Anul II Microbiologie – cursul 3
Microbiologie
Curs 3
15.X.2007
2. Bacili
• dimensiuni
bacili mici: 2-4 μm; 0,4-0,8 μm
bacili mari: 7-11 μm; 0,4-1,2 μm
• forma variata
rotunjite: E. coli
taiate drept: Bacillus anthracis/Bacillus cereus
ascutite: bacilul fusiform
deformate (cu spor sau incluziuni)
*in forma de bat de chibrit: Clostridium tetani
*in forma de racheta de tenis (spor subterminal) :
Clostridium botulinum
*in forma de barcuta (spor central) : Clostridium
sporogenes
• asezare
izolati - enterobacterii
in lanturi - genul Bacillus (antracis, subtilis, cereus)
litere chinezesti (bete de chibrit): Corynebacterium
diphtheriae
in diplo
litere majuscule (pot ramane agatati dupa diviziune):
X, Y, M, L, N, V: Mycobacterium tuberculosis
Cocobacilii au dimensiunea lungimii apropiata cu cea a
latimii ⇒ ex: Brucella, Bordetella, Haemophilus
• antropozoonoze = boli care apar la animale dar care pot trece la om in mod accidental:
*boli profesionale cum ar fi antraxul (bacilul carbunos)
3. Spirili
Pot fi cu :
• o singura tura de spira: virgula – Vibrio (cholerae)
• mai multe ture de spira:
spirili adevarati: celula rigida, citoplasma septata
spirochete
*citoplasma neseptata, celula flexibila, mobilitate
accentuata: rotatie, translatie, flexiune
*ex. Treponema, Leptospira, Borrelia
burgdorferi ( ⇒ boala Lyme)
La bacteriile fara perete celular (Mycoplasma) ⇒ forma variaza in
functie de conditiile de mediu
Exista bacterii:
lipsite in mod natural de perete celular (Mycoplasma)
care iau nastere din coci si bacili prin actiunea
factorilor chimici/fizici (ex. antibiotice, detergenti); dupa disparitia factorilor isi pot
reforma peretele ⇒ formele L (Lister)
fara perete celular obtinute in laborator
*din Gram + ⇒ protoplasti (sub actiunea lizozimului)
*din Gram - ⇒ sfereoplasti (sub actiunea lizozimului si EDTA)
Pleomorfism = fenomen de schimbare a aspectului morfologic la bacterii in functie de
conditiile de mediu
1.
Anul II Microbiologie – cursul 3
Formatiuni obligatorii
1. Nucleoidul
• greu de evidentiat datorita bazofiliei citoplasmei
• Acridine-orange, Feulgen, microscopie in contrast de faza,
microscopie electronica (structura fibrilara)
• nu are mb nucleara
• nu are nucleoli si aparat mitotic
• 1 molecula de ADN dublu catenar, circulara, inchisa covalent, cu
GM = 2,8x109 D, L =1000 μm
• molecula de ADN este suprahelicoidala, suprarasucita
• este compact, legat de mb citoplasmatica prin structuri derivate
din mb: mezozomi (implicati in diviziunea celulara)
• celulele in curs de diviziune - au mai multi nucleoizi (2-4)
• NUCLEOIDUL ESTE: * unicul cromozom ⇒ bacteria este o celula haploida
* sediul ereditati- cromozomul detine informatia genetica pt specie
* exista plasmide – ereditatea extracromozomiala
• Exista antibiotice care actioneaza asupra moleculei de ADN: nitrofuran,
imidazol, rifampicina, quinolone.
2. Citoplasma
• nu e compartimentata datorita absentei organitelor celulare
• are aspect fin granulat datorita prezentei numarului mare de ribozomi – 20.000-40.000/cel:
subunitatea 30S: ARNr 16S + 21 molecule proteice
subunitatea 50S: ARNr 5S + 23S + 34 de molecule proteice
• ARN citoplasmatic – 90% ARNr + ARNm +ARNt
• exista antibiotice care actioneaza asupra ribozomilor: aminozide (ex. Streptomicina), tetracicline,
macrolide (ex. Eritromicina), fenicoli (ex. Cloramfenicol).
• mai contine 3-5000 molecule diferite (de la H2O la acizi nucleici) = lotul celular
• incluzii = depozite de material de rezerva (mai ales la cele mature)
polimetafosfat (Corynebacterium diphtheriae) ⇒ corpusculi metacromatici care
deformeaza capetele bacilului
glicogen – enterobacterii
amidon – Clostridium
vacuole – sferice, cu substante lichide/gazoase
plasmide („cromozom facultativ”) – molecule de ADN mai mici decat cromozomul
mezozomi, lipide si corpusculi Babes-Ernst
2.
Anul II Microbiologie – cursul 3
3. Membrana citoplasmatica
• strat subtire care înconjoara citoplasma (10-15 nm)
• in celulele bacteriene exista o presiune ridicata ce impinge membrana celulara si o face sa devina
aderenta de peretele celular astfel ca e greu de evidentiat
• metode de evidentiere :
1. prin plasmoliza celula se suspenda in solutii hipertonice astfel ca apa iese din celula,
citoplasma se retracta si membrana se desprinde de pe peretele celular putand fi
evidentiata
2. prin indepartarea peretelui celular prin tratare cu enzime:
gram + : lizozim ⇒ protoplasti
gram - : lizozim + EDTA ⇒ sferoplasti
3. prin microscopie electronica (ME)- membrana apare ca fiind formata din straturi
intunecoase dense separate printr-un strat
transparent, mai putin opac
• din punct de vedere chimic:
o proteine 60-70%
o lipide 40-30% ( glicolipide, fosfolipide)
o nu contine steroli (exceptie Mycoplasma)
• modelul structural Singer membrana celulara =
fluid fosfolipidic in care plutesc proteinele sub
forma unor insule, care se gasesc fie pe partea
externa, fie pe partea interna a membranei sau
in grosimea ei. Este un model dinamic care
explica functiile membranei.
• din citoplasma pleaca prelungiri ce leaga nucleoidul de mb = mezozomi: au rol functional (in
diviziunea celulei)
Functiile membranei:
1. bariera osmotica
permeabilitate selectiva: nu permite patrunderea unor molecule cu greutate
moleculara (GM) mai mare decat GM a glicerolului
patrunderea substantelor se face prin:
i. difuziune simpla: se desfasoara lent; fara consum de energie; e folosita pentru
metaboliti cu GM mica si pentru substantele liposolubile
ii. difuziune facilitata: intervin proteine membranare numite carausi; fara
consum de energie
iii. transport activ: cu consum de energie; intervin permeaze care ajuta la
transportul nutrientilor impotriva gradientului de concentratie
iv. translocatie: modificarea chimica a substantelor transportate; are loc cu
ajutorul unor transferaze; are loc unidirectional
2. sediul unor procese bioenergetice – preia functiile mitocondriei
3. intervine in diviziunea celulara (prin mezozomi)
4. sediul proceselor de biosinteza = sediul enzimelor ce intervin in sinteza ADN-ului si in
sinteza peretelui celular
5. functie de secretie-excretie a enzimelor hidrolitice (scindeaza macromoleculele)
o la bacterii Gram +: enzimele sunt secretate in mediul inconjurator
o la bacterii Gram - : enzimele sunt secretate in spatiul periplasmic (intre mb celulara si
mb externa)
6. sediu de actiune -pt. detergenti utilizati ca dezinfectanti (altereaza structura si functia mb)
-pt. unele antibiotice : polimixine, gramicidina
7. sediul unor reactii chemo-tactice la nivelul mb exista receptori chemotactici cu rol de
atractie a unor substante (atractanti) sau respingere (repelenti)
8. motor ciliar = la bacteriile mobile, in membrana se gaseste motorul ciliar
9. membrana asigura transportul unor molecule de ADN cu GM mica permitand transferul de
material genetic intre 2 celule prin fenomenul ce se numeste transformare
10. sediul unor purtatori lipidici (carrier) si ai unor metaboliti esentiali ce intrevin in sinteza
peretelui celular
3.
Anul II Microbiologie – cursul 4
Microbiologie
Curs 4
22.10.2007
4. Peretele celular
• structura de suprafata ce se gaseste peste membrana
• 15-50 nm grosime
• relativ rigid ⇒ mentine forma celulei impotriva presiunii osmotice din celula care variaza intre
5-20 atm
• toate bacteriile au perete celular cu exceptia Mycoplasmei
• evidentiere
plasmoliza
fragmentarea celulei bacteriene cu agenti fizici si chimici; centrifugare studiu la
microscopul electronic (ME)
indepartarea peretelui celular cu ajutorul enzimelor
b) componenta peptidica
- difera cu specia
- formata din lanturi de L si D-aminoacizi legati de acidul N-acetil-Muramic:
monomerul
peptidoglicanului
4. Stratul lipopolizaharidic (LPS) - Strat de suprafata identic cu endotoxina si cu antigenul „O” ale
bacteriilor Gram (–). Este alcatuit din:
lipidul A care e responsabil de toxicitatea pentru organism a
endotoxinelor carora le confera termostabilitate
un polizaharid complex organizat care proemina pe suprafata celulei
format dintr-o portiune centrala (sambure, core) de care se leaga
componente formate din unitati oligozaharidice care se repeta la
suprafata bacteriei (trizaharide liniare; tetra sau pentazaharide
ramificate); unitatile repetitive confera specificitatea antigenului O
3.
Anul II Microbiologie – cursul 4
Formatiuni facultative
- bacteriile ce le au nu le sintetizeaza tot timpul-
1. Capsula
• Strat superficial peste peretele celular, ce inconjoara bacteria
a. Capsula propriu-zisa: e reprezentata de o structura compacta, densa, bine organizata ce
inconjoara strans corpul bacteriei.
evidentiere:
 coloratii speciale: Burri (cu tus de China, capsula nu se coloreaza), Muir
 prin coloratie Gram: daca frotiul este realizat direct din produsul patologic
capsula apare ca o zona necolorata (se decapsuleaza prin coloratie); iar in
caz de frotiu cu o cultura pura, capsula nu se evidentiaza prin coloratie Gram.
 tehnici imunologice: utilizare seruri cu anticorpi care reactioneaza cu
antigenele din capsula ⇒ impingerea capsulei: „fenomen de umflare a
capsulei”
natura chimica
• polizaharidica: Pneumococcus, Klebsiella, Haemophilus (cocobacili),
Bordetella
• proteica: bacilul carbunos (B. antracis) capsula e un polimer de acid D-
glutamic; iar la streptococul β-hemolitic de acid hialuronic
rolul
*factor de patogenitate/virulenta (pneumococii decapsulati nu mai sunt patogeni)
*protectie fata de actiunea combinata litica a anticorpilor si a complementului
*sediul unor antigene (ex. la pneumococ polizaharidul capsular permite
clasificarea pneumococilor in 80 de tipuri antigenice) [pneumococul este pe
locul 2 in etiologia meningitei la copii]
*identificarea pneumococilor ser
anti pneumococic ⇒ umflarea
capsulei
b. unele bacterii pot prezenta un strat mucos format
dintr-o substanta capsulara produsa in cantitate
crescuta in general mai solida si care inconjoara multe
bacterii avand rol de aderare de diferite suprafete.
Unele bacterii au drept invelis un antigen= K/Vi: la
unele Salmonelle
4.
Anul II Microbiologie – cursul 5
Microbiologie
Curs 5
29.10.2007
2. Glicocalixul
• Este o formatiune pe care bacterile o secreta numai in mediul lor de viata (nu si in laborator)
• Reprezentat de o retea de fibre polizaharidice forte lungi care inconjoara bacteria
• In aceasta retea pot fi captate si alte bacterii (alte specii decat cea care elibereaza glicocalixul)
• nu poate fi vazut la microscopul optic, ci doar la cel electronic prin coloratii speciale: rosu de
ruteniu
Roluri:
in aderarea bacteriei de diferite suprafete in organism
¾ aderenta nespecifica: aderarea la diferite tipuri de suprafete
¾ aderenta specifica: aderarea numai la suprafata anumitor tipuri de celule
ex: Streptococcus mutans (din cavitatea bucala) are proprietati de a elibera glicocalix cu ajutorul
caruia adera de smaltul dentar. El are enzime speciale cu care formeaza glicocalix sub 2 forme:
prin actiunea glucozil-transferazei se obtine un polimer de glucoza ⇒ dextran
prin actiunea fructozil-transferazei se obtine un polimer de fructoza ⇒ levan
prin aceste structuri Streptococcus mutans adera de smaltul dentar unde formeaza
colonii de bacterii (pot fi incluse si alte bacterii) incluse in dextran sau levan rezultand palca dentara.
Bacteriile care se gasesc in glicocalix au activitate metabolica si produc pH acid (prin anumiti metaboliti
care acidifica mediul) avand actiune distructiva la nivelul smaltului si determinand aparitia cariei
dentare.
Unele bacterii se pot atasa prin intermediul glicocalixului pe diferite catetere vasculare, pe sonde
sau proteze.
In functie de numarul si prezenta cililor bacteriile pot fi: Examples of bacterial flagella arrangement schemes. A-
o monotriche= cu un flagel la un capat Monotrichous; B-Lophotrichous; C-Amphitrichous; D-
Peritrichous;
o amfitriche= cu 2 flageli (cate unu la fiecare capat)
o lofotriche =cu un manunchi la un capat
o peritriche= cu flageli pe toata suprafata
o atriche= fara flageli (sunt imobile)
• Bacteriile cu multi cili prezinta fenomenul de invazie (ex. Proteus) fiind extrem de mobile.
• Din punct de vedere chimic flagelii sunt de natura proteica = flagelina (asemanatoare miozinei)
= proteina contractila alcatuita din subunitati proteice care agrega si conduc la aparitia unei
structuri tubulare, rasucita helicoidal; (prezinta antigenul H)
• La microscopul electronic a fost observata ultrastructura cilului acesta fiind format din 3 componente:
1.
Anul II Microbiologie – cursul 5
• Rolul cililor:
1. asigura mobilitatea bacteriei = in sens orar
(rostogolire) si antiorar (in linie dreapta)
- combinata cu chemotaxia = miscare dirijata
intr-un gradient de
concentratie a substantelor chimice
- fototaxia; aerotaxia (spre concentratie
crescuta de O2, la aerobe)
2. la nivelul cililor se gaseste antigenul H ciliar
(flagelar) care ne ajuta la identificare
3. poate fi receptor pentru bacteriofagi
*Treponema, Leptospira, Borrelia = genuri fara cili/flageli
dar cu mobilitate foarte mare datorita unui aparat
locomotor intracelular (rotatie/translatie).
4. Pili: formatiuni de suprafata prezente mai ales la bacilii Gram (-) dar si la bacteriile Gram (+).
Sunt prezente atat la bacteriile mobile (patogene) cat si la cele imobile (nepatogene).
Sunt de 2 categorii:
a) sexuali
- prelungiri mai lungi decat pilii comuni, flexibili, se termina in buton
- natura proteica
- numar mic pe celula (1-4)
- au determinism plasmidic: informatia genetica ce codifica acesti pili se gaseste in
plasmide
b) comuni (fimbrii)
- prelungiri foarte scurte (apr0x. 1 μm),
drepte, rigide, vizibile la ME
- se gasesc in numar mare pe celula
bacteriana (100-200)
- informatia genetica pentru sinteza lor
e detinuta in special de cromozomi
- natura proteica: pileina = proteina
formata din subunitati mici care
agrega
- rol: aderare de diferite suprafete in
special epitelii – gonococ,
meningococ
- de multe ori fimbriile se pot prinde de receptorii zaharidici (proteine care au ca ligand o
structura polizaharidica si care au caracter de lectine)
- o specie bacteriana poate avea fimbrii care sa permita aderarea de diferite tipuri de celule
Ex:*mai multe forme de E. coli:
o ETEC = E. coli enterotoxigen care elaboreaza o toxina responsabila de diaree
masiva cu caracter apos, adera de epiteliul intestinal cu ajutorul pililor
o EIEC = E. coli enteroinvaziv
o EHEC = E. coli enterohemoragic
o EPEC = E. coli enteropatogen
2.
Anul II Microbiologie – cursul 5
5. Spori: formatiuni endocelulare, greu colorabile care mai apoi sunt eliberate ca exospori
- sunt o forma de rezistenta a bacteriei (atunci cand o celula vegetativa ajunge in conditii
nefavorabile de mediu, celula trece intr-un spor, care atunci cand ajunge in conditii favorabile redevine
celula bacteriana). Spre deosebire de forma vegetativa (activa metabolic) sporul este inactiv metabolic
aflat in stare latenta (stare criptobiotica).
• 2 genuri cu spori cu importanta medicala: Clostridium (tetani, botulinum) si Bacillus (anthracis,
cereus)
• sporul poate avea diametrul
- mai mic decat al celulei si nu deformeaza celula (Bacillus)
- mai mare decat al celulei pe care o deformeaza (Clostridium)
• Evidentierea:
- coloratii speciale (pentru microscopul optic): verde malaki
si safarina
- in coloratie Gram sporul nu se coloreaza
- microscopie electronica
- microscopie in contrast de faza (preparate native)
• Ultrastructura
o portiunea centrala (core) =protoplastul sporal format
din: nucleoid, citoplasma, mb citoplasmatica; reprezinta
50-70% din substanta uscata a sporului
3.
Anul II Microbiologie – cursul 5
Sporogeneza = este un proces complex ce se desfasoara in mai multe etape fiind implicate
aproximativ 200 de gene.
Sporii pot rezista mai multi ani pana la germinare. Germinarea este un proces complex ce se desfasoara
in mai mute etape:
1. incepe cu activarea sporului = aparitia unor mici leziuni pe invelisurile sporale determinate
de aciditatea mediului, de temperaturi crescute si elemente abrazive.
2. initierea germinarii se face datorita factorilor nutritivi din mediu care stimuleaza activitatea
unor autolizine ce actioneaza asupra cortexului, si il indeparteaza (dispare si dipicolinatul de Ca).
Bacteria se imbiba cu apa (rehidratarea sporului) si activitatea metabolica este reluata.
3. cresterea celulei bacteriene cu reluarea activitatii enzimatice (metabolice)
aprox.
80
gene
⎯⎯ ⎯ ⎯⎯→
SPORULARE
spor ⎯⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯ ⎯→
GERMINARE (in conditii favorabile) celula
vegetativa
ROLURI:
• forma de rezistenta la diferiti factori chimici si fizici
• termorezistenta e datorata deshidratarii sporului sau cantitatii mari de dipicolinat de Ca
• rezistenta la alti factori fizici (radiatii, presiune) si factori chimici asigurata de abundenta
proteinelor cu sulf din invelisuri.
• are importanta in clasificarea bacterilor-exista in 2 genuri sporulate
• reprezinta o forma primitiva de evidentiere celulara
• unele specii de bacterii sporulate pot elibera niste produsi extracelulari folositori (ex: antibiotice)
S-a demonstrat ca productia de antibiotice e controlata de gene implicate in etapele initaiale ale
sporularii; aceste gene in celula vegetativa sunt represate.
4.
Anul II Microbiologie – cursul 6
Microbiologie
Curs 6
5.XI.2007
Metabolismul bacterian
Bacteriile sunt organisme unicelulare capabile de o activitate metabolica neintrerupta. Ele cresc,
se divid, isi obtin energia si se diferentiaza spre forme de rezistenta (sporuleaza), se misca si se
adapteaza la mediu. La baza acestei activitati sta metabolismul bacterian reprezentat de toate reactiile
care se desfasoara intr-un organism (o celula).
Microorganismele sunt sisteme vii, deschise, complex organizate, specifice care schimba cu
mediul substante si informatii. Metabolismul celulei bacteriene se suprapune cu metabolismul celorlalte
forme de viata. Bacteriile se incadreaza in unitatea biochimica a lumii vii pentru ca au o unitate de
structura chimica identica cu restul celulelor (aminoacizi, nucleotide, acizi grasi, polizaharide) si pentru
ca au si o unitate de procese metabolice (reactii biochimice).
Metabolismul bacterian poate fi primar si secundar: metabolism secundar
• Metabolismul primar este reprezentat de o succesiune de reactii
chimice necesare cresterii si dezvoltarii unui organism (celula bacteriana).
• Metabolismul secundar este reprezentat de ansamblul de reactii care
duc la formarea unor compusi care influenteaza unele organisme din jur
(le stimuleaza, le inhiba sau le distruge). ex: sub nuc nu creste nimic
Metabolismul este reprezentat de o serie de reactii chimice, catalizate de enzime,
care se desfasoara intr-o anumita succesiune. Este reprezentat de o serie de cai si
cicluri metabolice ce formeaza o retea complexa si variata si care functioneaza metabolism primar
perfect datorita unui control extrem de riguros.
Metabolismul se caracterizeaza prin diversitate determinata de factori fizici, chimici si
substante nutritive foarte diverse care se gasesc in habitatele in care traiesc bacteriile.
1.
Anul II Microbiologie – cursul 6
1. reactii de clasa I sunt reactii degradative si duc la formarea de substante cu 3 pana la 7 atomi de C
= intermediari cheie = schelete de C, energizate de la care se porneste sinteza monomerilor
2. reactii de clasa II → reactii anabolice → conduc la sinteza monomerilor, substante cu un numar
mai mic sau egal cu 60 atomi de C pe molec ⇒ aminoacizi, monozaharide, acizi grasi, nucleotide
3. reactii de clasa III – reactii de polimerizare → conduc la formarea polimerilor biologici
homopolimeri si heteropolimeri :
• periodici/repetitivi: peptidoglicanul (levan → glicocalix)
• aperiodici/nonrepetitivi (proteine, acizi nucleici)
O celula bacteriana este alcatuita din: apa 70%, ioni anorganici: Na+, K+, Ca2+, Mg2+, Fe, P, S;
cataboliti si precursori, lipide si precursori, enzime si vitamine, proteine, ADN (cromozomi)
Nutritia bacteriana - se refera la capacitatea unei bacterii de a folosi substante nutritive din
mediu pentru a creste. Nutritia se refera la sursele de substante
nutritive, energia folosita de bacterie si la modalitatile prin care
substantele ajung in celula bacteriana.
Microbiologie
Curs 7
12.11.2007
2. pH –ul
• majoritatea se dezvolta la pH - 7,2-7,4
• bacterii acidofile - se dezvolta la pH acid (pana la pH= 1)
- ex: Archaebacteria, lactobacilii-pH = 1-5
- fara importanta in patologie
Archaebacteria
vibrionul
holerei
• bacterii acidurice - se dezvolta la pH neutru, dar in urma activitatii metabolice produc acizi care
scad mult pH-ul (<5) si continua sa se dezvolte si la acel pH (Streptococcus
mutans)
Streptococcus
mutans
1.
Anul II Microbiologie – cursul 7
3. Presiunea osmotica
BACTERIILE SUNT OSMOTOLERANTE:
• bacteriile sunt tolerante la variatii mari de presiune osmotica deoarece peretele celular
permite dezvoltarea unei presiuni ridicate
• pentru bacterii cu perete celular subtire Gram (–) presiunea osmotica = 10 atm
• pentru bacterii cu perete celular gros Gram (+) presiunea osmotica = 20 atm
• pentru bacterii fara perete celular (Mycoplasma) presiunea osmotica = 1-2 atm
Exista un interval de permisivitate pentru fiecare factor (care permite multiplicarea bacteriei), in afara
acestui interval efectele pot fi bacteriostatice sau bactericide. La limita superioara a intervalului, bacterile
elibereaza proteine de stres utilizand alte cai metabolice (ex: HSP=Heat Shock Proteins)
5. CO2
• Exista bacterii care izolate din organism necesita cantitati de CO2 mai mari decat cele
produse - bacteriile capneice
6. Radiatii
• UV – efect bactericid - nu au capacitate de penetrare si se folosesc la sterilizarea aerului
si suprafetei de lucru
• γ –se folosesc la sterilizarea instrumentelor de unica folosinta (seringi)
7. O2
• necesar pentru dezvoltarea bacteriilor strict aerobe (acceptor final de electroni)
• toxic pentru bacteriile strict anaerobe
Metabolismul bioenergetic
REACTII DE CLASA I
2.
Anul II Microbiologie – cursul 7
In functie de necesitatea prezentei O2 si efectul toxic pe care acesta il poate avea, bacteriile pot fi:
1. aerobe obligatorii
- se multiplica in prezenta O2 si folosesc respiratia
- in absenta O2 este posibil ca unele bacterii sa se multiplice cu conditia sa existe un
acceptor final de electroni (oxigenul nu este toxic) ex: Pseudomonas
2. microaerofile
- se multiplica la concentratii mici de O2 (5%) si folosesc respiratia
- in absenta O2 nu se multiplica
- O2 poate fi toxic in concentratii mari
- ex: Campylobacter, Helicobacter
3. aerobe – anaerob facultative
- in prezenta O2 – folosesc respiratia si se multiplica
- in absenta O2 – folosesc fermetatia
- O2 nu este toxic
- cele mai multe se gasesc la om (ex: enterobacterii, stafilococul)
4. anaerobe – aerob tolerante
- se multiplica atat in prezenta O2 dar si in absenta O2 folosind fermentatia
- ex: Streptococcus
5. anaerob obligatorii
- nu se multiplica in prezenta O2 si folosesc fermentatia
- O2 este toxic
*Clostridium Gram+ (sporulate)
*Bacteroides Gram- (in colon)
- Metronidazol– actioneaza pe b. anaerobe
3.
Anul II Microbiologie – cursul 7
Biosinteza peptidoglicanuilui: are loc in citoplasma celulei, la nivelul membranei si se ajunge pe acel
primer = peretele celular (peretele celular este primer in propria sinteza)
UDP – N-Ac-Glu
fosfo enol piruvic (PEP)
4.
Anul II Microbiologie – cursul 8
Microbiologie
Curs 8
19.XI.2007
Metabolismul ADN-ului
Molecula de ADN participa la multe cai metabolice ce formeaza metabolismul ADN-ului. Acesta
este matrice pentru exprimarea fenotipica a informatiei genetice.
Metabolismul ADN-ului cuprinde:
• replicarea
• repararea
• restrictia si modificarea
• recombinare genetica
• transcrierea
Structura ADN-ului:
1) Structura primara
• heteropolimer aperiodic si nonrepetitiv
• molecula flexibila care ia diferite forme in spatiu: pliere/rasucire
• format din doua catene polinucleotidice = dublucatenar (la bacterii si
eucariote), dar poate fi si monocatenar (la unele virusuri)
• contine baze - purinice (A; G)
- pirimidinice (T; U - in ARN; C)
• catenele au un capat 5’ cu grupari fosfat si un capat 3’ cu grupari OH libere
• nucleotidele se ataseaza la capatul 3’ deci lantul creste in directia 5’→ 3’
2) Structura secundara
• catene antiparalele (anticomplementare)
• au sens opus
a) Initierea
Incepe la locuri bine determinate, recunoscute de enzime implicate in acest proces (helicaza,
topoizomeraze, ARN-primaza) numite originile replicarii si notate cu „ORI”. Se caracterizeaza prin faptul
ca sunt bogate in A=T. Din acest punct porneste “furculita de replicare”.
Cuprinde mai multe momente :
- este necesara desfacerea duplexului parental pe anumite zone prin ruperea legaturilor de
hidrogen stabilizatoare.
- pe lanturile izolate de ADN se fixeaza imediat proteine de destabilizare a helixului care impiedica
refacerea legaturilor de hidrogen si a structurii dublu helicoidale.
- se realizeaza stabilizarea furcii prin interventia topoizomerazelor (produc o superspiralare)
- asamblarea-proteinelor de replicare (replizom): helicaza
-proteinelor de stabilizare (primazom): primaza, ARN-polimeraza, ADN-polimerazaB
Pentru plasmide si bacteriofagi o molecula de ADN serveste ca matrice pentru sinteza mai multor
molecule. Este posibil la bacterii sa se replice numai o portiune din molecula de ADN.
Replicarea poate fi - bidirectionala (modelul θ – la E. coli) –pentru diviziunea celulei
- unidirectinala (modelul σ) – in transfer (conjugare) la plasmide si cromozomi
b) Elongarea (alungirea)
Reprezinta progresia furcilor pana se parcurge intreaga matrice (punctul terminus situat la 180º
fata de ORI). In timpul elongarii, pe o catena sinteza se face in directia 5’-3’ lantul nou format numindu-
se lant conducator sau director, iar pe cealalta catena sinteza se face tot in directia 5’-3’ dar nu continuu,
lantul nou format numidu-se lant succesor sau intarziat.
c) Terminarea
Se produce atunci cand cele doua furculite de replicare se intalnesc intr-o regiune opusa regiunii
ORI (punctele terminus).Are loc separarea cromozomilor si plasmidelor.
3. Restrictia si modificarea
Fenomene complementare care permit recunoasterea ADN-ului propriu (care va fi protejat si
conservat) de ADN-ul strain (care va fi sectionat si eliminat din celula).
Modificarea: metilarea in anumite locuri a ADN-ului propriu imediat dupa replicare (modifica
baze la locul sau langa locul cu potential de clivare). ADN-ul metilat in pozitii caracteristice este
recunoscut ca propriu.
Restrictia: fenomen complementar la care participa enzime speciale numite endonucleaze de
restrictie; acestea recunosc ADN-ul
nemetilat ca strain si il degradeaza in
fragmente mai mici facandu-l
nefunctional. Endonucleaza de restrictie
este o enzima care recunoaste anumite
secvente de baze azotate (4-8 baze) la
nivelul carora actioneaza = secvente
palindromice (se citesc la fel si de la
stanga si de la dreapta); au capetele
coezive/adezive/lipicioase. Impiedica
invazia ADN-ului strain si este folosita in
clonarea moleculara (tehnologia ADN-
ului recombinant).
Ex: endonucleaza de restrictie EcoR1
3.
Anul II Microbiologie – cursul 8
4. Recombinarea
Reprezinta interactiunea intre doua molecule de ADN care fie provin fie din aceeasi celula
bacteriana fie din doua celule diferite.
Intervine in:
o repararea leziunilor acizilor nucleici
o integrarea sau excizia de plasmide sau genom fagic in/din cromozomul bacterian
o transpozitia elementelor mobile
Consecinte:
• integrarea unei secvente (in intregime) in alta; pentru moleculele de talie aproximativ
egala cu plasmidele se numeste cointegrare
• excizia este un proces invers prin care se face separarea plasmidei din cromozom =
rezolvarea integrarii
2. Recombinarea situs-specifica
Are loc intre molecule total diferite ca secvente cu exceptia unui anumit loc unde secventa este identica.
Exista mai multe mecanisme moleculare cum ar fi integrarea si excizia plasmidelor si profagilor.
Ex: bacteriofagul λ ce paraziteaza E. coli – se integreaza in cromozomul bacteriei intotdeauna intr-o
pozitie caracteristica, intre genele GAL si BIO. Desprinderea se poate face corect sau incorect.
Recombinarea situs-specifica e intalnita si la elementele genetice mobile (EGM) sau transpozabile
(EGT). Acestea sunt molecule de ADN care nu se pot replica singure si au capacitatea de a se deplasa de
pe o molecula pe alta sau in diferite locuri in cadrul aceleiasi molecule. Transpozitia este asigurata de
enzime numite transpozaze, si poate fi replicativa sau nonreplicativa.
4.
Anul II Microbiologie - cursul 9
Microbiologie
Curs 9
26.XI.2007
5. Transcrierea
Este un proces ce se desfasoara in mai multe etape:
1. initierea - intervine enzima ARN-polimeraza ce recunoaste o anumita secventa (promotor)
2. alungirea - are loc citirea in sens 3’-5’ si sinteza in sens 5’-3’
3. terminarea - poate fi ρ-dependenta sau
- ρ-independenta (este implicata proteina ρ [„ro”])
Unitatea de transcriere este operonul, format din:
• gene de structura (detin informatia genetica pentru sinteza)
• secvente semnal = gene reglatoare ce codifica proteine de control
• operatori si promotori de care se leaga ARN-polimeraza (asigura transcrierea)
Gena reglatoare codifica proteine reglatoare (alosterice); acestea au doua locusuri:
- un locus activ - prin care recunoaste cu foarte mare specificitate un operator
- un locus efector - recunoaste si permite atasarea unor molecule mici din mediu (molecule efectoare)
ce are ca si consecinta schimbarea configuratiei proteinelor reglatoare modificandu-le afinitatea
pentru substrat.
Exista doua categorii de proteine reglatoare ce intervin in controlul activitatii operonului:
1. proteine de reglare care atunci cand se fixeaza de operon, inhiba functia ARN-polimerazei si astfel
si transcrierea informatiei pe ARN-ul mesager cat si sinteza de proteine. Sunt proteine
represoare ce exercita un control negativ asupra biosintezei proteice.
2. proteine reglatoare care cand se fixeaza pe regiunea operatoare, favorizeaza activitatea ARN-
polimerazei si implicit transcrierea informatiei genetice pe ARN-ul mesager cat si biosinteza
proteica. Sunt proteine activatoare ce exercita un control pozitiv asupra biosintezei proteice.
Ex: 1. operonul lactozei - are trei gene structurale (z, y, a) ce codifica enzime (vezi desen)
- gena operator si secvente adiacente
Desen foarte important! retineti toate detaliile!
Gena represoare (regulatory
gene) codifica o proteina ce
are afinitate pentru operon.
Dupa ce este sintetizata,
aceasta proteina reglatoare se
fixeaza pe operon, motiv
pentru care ARN-plimeraza
nu se mai poate lega de
promotor si nu se mai poate
deplasa de-a lungul genelor
structurale. Astfel sinteza
proteica nu are loc.
In momentul in care se
introduce LACTOZA in mediu
(inducer molecules) aceasta se
fixeaza de locusul efector al
proteinei reglatoare, care se
desprinde de pe operon. Se
formeaza complexul
represor - lactoza (inactive
represor) care ramane in
citoplasama. Operonul
ramane liber, ARN-
polimeraza se fixeaza pe
acesta si se deplaseaza de-a
lungul genelor structurale,
citeste informatia genetica si
determina sinteza proteica. Se
sintetizeaza β-galactozidaza,
permeaza si acetilaza.
1.
Anul II Microbiologie - cursul 9
Operonul este supus si altor mecanisme de control in care intervine proteina catabolit activatoare ce
functioneaza numai in prezenta ciclic AMP-ului cu care formeaza un complex. Acest complex permite
legarea ARN-polimerazei si deplasarea ei de-a lungul genelor structurale stimuland sinteza proteinei
respective.
Un alt mecanism este cel de represie catabolica a activitatii metabolice, efect datorat glucozei. Daca
glucoza este prezenta in mediu, bacteria nu isi sinetizeaza enzime degradative pentru alte zaharuri.
Pentru formarea acestor enzime este nevoie de ciclic AMP si de proteina catabolit activatoare. In
momentul in care glucoza este transportata in celula pentru a fi utilizata, formarea ciclic AMP-ului
este perturbata. Complexul ciclic AMP – proteina catabolit activatoare nu se mai formeaza astfel ca
este inhibat operonul lactozei si implicit sinteza enzimelor degradative.
2. operonul triptofanului
• este supus unui fenomen de atenuare datorat organizarii ADN-ului
• are gene de structura: se gaseste o proteina leader intre prima gena de structura si operator
• este un mecanism mai eficient
(sigma)
(1, 2, 3, 4)
a. perioada de latenta
b. perioada logaritmica (de multiplicare exponentiala)
c. perioada stationara
d. perioada de declin (descendenta)
A. Perioada de latenta
• numarul de bacterii nu se modifica, fiind egal cu numarul
celulelor inoculate.
• au loc modificari metabolice, bacteriile programandu-si
metabolismul pentru a putea utiliza nutrientii din mediu
• a fost demonstrata de Monod prin fenomenul de
diauxie: a cultivat E. coli intr-un mediu care contine 0,01% glucoza si 0,1%
lactoza. Aspectul curbei de dezvoltare prezinta doua perioade de latenta (A)
demonstrand ca bacteriile sufera doua modificari: cresc pe glucoza iar dupa ce
aceasta se termina bacteriile isi reprogrameaza metabolismul si cresc pe lactoza.
B. Perioada logaritmica
• are o durata variabila influentata de bogatia mediului si de resursele nutritive
• in momentul in care resursele incep sa se reduca permit trecerea in etapa stationara
• caracterizata printr-o multiplicare accentuata a bacteriei
• numarul celulelor creste in progresie geometrica
• bacteriile sunt tinere, au un metabolism activ: sinteza proteica intensa, cantitati mari de ARN
• la microscopul electronic apar cu 2-4 nucleoizi datorita diviziunii rapide
• celulele au cele mai reprezentative proprietati ale speciei respective:
sunt cele mai sensibile la actiunea antibioticelor si a substantelor dezinfectante
au afinitate fata de coloranti
Timpul de generatie la bacterii = timpul ce se scurge intre doua diviziuni (aprox. 20 min)
C. Perioada stationara
• apare un echilibru intre numarul celulelor care se divid si numarul celor care mor
• celulele sunt de obicei mature cu proprietati alterate si morfologie aberanta
• se pot produce modificari ale afinitatii pentru coloranti
• celulele pot prezenta incluziuni in aceasta perioada putand elibera mari cantitati de toxine
D. Perioada de declin
• bacteriile mor la o rata accentuata
• putine celule supravietuiesc pe seama materiei rezultate din moartea celorlalte bacterii
• moartea se datoreaza epuizarii nutrientilor din mediu cat si interventiei enzimelor (autolizine)
• bacterile sunt batrane cu perete celular gros rezistente la factori fizici si chimici si la antibiotice
• au forme aberante iar proprietatile lor nu seamana cu cele ale speciei respective
3.
Anul II Microbiologie – cursul 10
Microbiologie
Curs 10
10.XII.2007
Genetica este stiinta care studiaza ereditatea si variabilitatea speciilor (caracterele speciei sunt
transmise de la parental la descendent). Dupa 1940, dupa descifrarea structurii bacteriene s-a
demonstrat ca intreaga informatie genetica este depozitata la nivelul acizilor nucleici si s-a
descifrat modul de replicare. Genetica se ocupa cu studiul ereditatii si variabilitatii.
Ereditatea studiaza mecanismele prin care sunt mentinute stabile caracterele de specie si prin
care sunt transmise de la parental la descendenti. Este determinata de structura dublu catenara a
ADN-ului si de modaliatea de replicare semiconservativa.
Variabilitatea = fenomen prin care se determina aparitia de noi caractere care permit ca celulele
fiice sa fie diferite de parental. Exista doua categorii de fenomene:
• Variatii genotipice = determinate de aparitia unei modificari in genomul bacterian si se
transmite la descendenti. Apar independent de factorii de mediu ce au rolul doar de a selecta
aceste variatii. Sunt stabile si se transmit la descendenti. Apar prin mutatie, sau transfer de
material genetic intre doua celule.
• Variatii fenotipice = nu apar modificari in genom, ci doar la nivelul caracterelor observabile.
Sunt determinate de factorii de mediu, nu sunt stabile si reprezinta o exprimare diferita
conditionata de mediu. Nu se transmit la descendenti.
Ex: bacilul tuberculos – prezinta in strucura peretelui celular un numar mai mare de lipide (30%)
= alcoolo-rezistenta
Genetica bacteriana studiaza organizarea si functionarea ADN-ului bacterian.
• Genotip = genomul bacterian = totalitatea materialului genetic dintr-o celula bacteriana.
• Fenotip = caracterele observabile = modul de exprimare a informatiei genetice
Avantajele modelului bacterian:
1. timpul de generatie foarte scurt = intr-un timp scurt poate fi urmarita transcrierea
caracterelor la mai multe generatii
2. bacteriile sunt celule haploide usor de analizat
3. pot fi cultivate pe medii de cultura sintetice ce au compozitie bine cunoscuta (cel mai
simplu mediu de cultura trebuie sa aiba o sursa de carbon una de azot si saruri minerale)
4. pot fi purtatoare de virusuri = bacteriofagi – pot fi studiate relatiile dintre genomul
bacteriofagului si genomul celulei.
5. in bacterii se gaseste si material genetic extracromozomial = plasmide si bacteriofagi
Organizarea materialului genetic la bacterii
• Material genetic cromozomial = este reprezentat de cromozom si este sediul ereditatii
cromozomiale care detine informatia genetica pentru caracterele esentiale vietii celulei.
• Material genetic extracromozomial = sediul ereditatii extracromozomiale care codifica
caracterele neesentiale pentru viata celulei dar uneori extrem de importante in patogenitate;
este reprezentat de plasmide si bacteriofagi. Exista elemente genetice mobile (transpozabile)
care au capacitatea de a se deplasa de pe un compartiment pe celalalt.
O parte din materialul genetic este dotat cu capacitatea de autoreplicare (repliconi) – cromozomi,
plasmide, bacteriofagi – in timp ce elementele transpozabile
nu sunt repliconi si se gasesc doar ca parte integranta dintr-un
replicon.
Cromozomul
molecula circulara de ADN bicatenar
GM = 2,8 x 109 Daltoni
4000 perechi de gene (structurale, reglatoare, criptice)
1.
Anul II Microbiologie – cursul 10
Plasmidele
molecule circulare de ADN mai mici decat cromozomul
codifica informatia pentru caractere neesentiale vietii celulei
se numesc si cromozomi facultativi si se gasesc intracelular
exista plasmide cu rezistenta la antibiotice
se pot gasi:
- autonom in citoplasma: se replica independent de cromozom
- integrate in cromozom: se replica odata cu cromozomul
dupa capaciatatea de a media transferul de material genetic pot fi:
- Plasmide conjugante = sunt mari si in numar mic in celula, contin informatia genetica
pentru transfer prin conjugare si operonul TRA (de transfer) putand initia transferul
intre doua celule.
- Plasmide neconjugante = sunt mici si in numar mai mare de copii in celula. Nu pot
initia procesul de conjugare pentru ca nu au operonul TRA. Pot fi transferabile de la o
celula donatoare la una acceptoare prin fenomenul de transformare, transductie sau
prin cointegrare cu o plasmida conjuganta.
Principalele gene care se gasesc intr-o plasmida sunt:
9 gene de autonomie care asigura functiile existentei autonome a plasmidei in celula
bacteriana;
9 gene de excludere a altor plasmide sau a altor elemente extracromozomiale (excluderea se
poate face prin gene de incompatibilitate sau prin gene pentru enzime de restrictie si
modificare);
9 gene care asigura transferul si gene de fertilitate;
9 gene de interactiune cu alte molecule de ADN;
9 gene care codifica o serie de caractere fenotipice (observabile) si de patogenitate;
9 gene care codifica o serie de structuri bacteriene: pili;
Plasmida F = plasmida de fertilitate – se poate gasi autonom in citoplasma (se replica
independent), sau se poate gasi integrata in cromozom (replicarea se face odata cu acesta).
In functie de prezenta plasmidei F, in functie de raportul pe care il au cu cromozomul si de
capaciatatea de facilitare a transferului de gene, celulele se clasifica astfel:
- Celula F+ = are plasmida F in citoplasma (celula masculina – donatoare)
- Celula F- = nu are plasmida F (celula feminina – receptoare)
- Celula Hfr = are plasmida F integrata in cromozom
- Celula F’ = plasmida integrata initial in cromozom se desprinde si poate lua gene din
cromozom
Plasmidele R = plasmide de rezistenta la antibiotice
• conjugante = pot initia procese conjugante pentru ca au operonul de
transfer RTF (factor de transfer al rezistentei)
• neconjugante = nu au operonul RTF si pot fi transferate altor celule
prin transformare, transductie
Plasmidele R au determinanti de rezistenta „r” pentru un numar
variabil de antibiotice (max 8).
Ele reprezinta principalul mijloc de de transmitere a rezistentei la
antibiotice.
Ex: streptococul β-hemolitic a ramas fidel penicilinei = nu se
face antibiograma
Plasmide care codifica substante cu actiune antimicrobiana/antibacteriana (Klebsiella →
Klebocine, Piocianic → Piocine, Stafilococ → Stafilocine)
Plasmide bacteriocianogene – in ecologia microbiana (in alcatuirea microbiogenozei)
Plasmide de patogenitate (de virulenta)
- codifica toxine bacteriene = enterotoxina de la stafilococ; toxina exfoliativa
- codifica adezine – caracter de invaziditate
Plasmide metabolice – implicate in metabolism
Plasmide care produc tumori la plante
Plasmide care codifica serorezistenta bacteriana – rezistenta la actiunea bactericida a
serului
Plasmide criptice – nu codifica nici un caracter.
2.
Anul II Microbiologie – cursul 11
Microbiologie
Curs 11
17.XII.2007
1. Ciclul litic
la bacteriofagii salbatici
mecanism de liza asemanator lizozimului celular
dupa intrarea acidului nucleic in celula, acesta se exprima prin sinteza:
" acidului nucleic patogen
" proteinelor capsidale
proteinele capsidale se asambleaza (incapsidarea acidului nucleic) formand bacteriofagi maturi care
parasesc celula prin liza ei
1.
Anul II Microbiologie – cursul 11
2. Ciclul lizogen
la bacteriofagii temperati
informatia pentru multiplicarea vegetativa a bacteriofagului este represata de o proteina represoare
codificata de bacteriofag
segmentul de material genetic al bacteriofagului se insera in cromozomul bacteriei
Profag = bacteriofag integrat in bacterie (in cromozomul bacteriei)
- celula care poarta profagul se numeste celula lizogenizata
Ex: bacilul difteric = profagul β-TOX
- bacteriofagul se poate integra la intamplare in cromozom, sau poate
recunoaste o zona specifica din cromozom in care se va integra
Ex: bacteriofagul λ – paraziteaza E. coli si se integreaza intotdeauna intre
genele GAL si BIO
- bacteriofagul codifica o nucleaza capabila sa taie acidul nucleic al celulei in
segmente egale cu materialul genetic al bacteriofagului ⇒ celula lizogenizata
- la un moment dat se poate desprinde:
" corect = acidul nucleic al profagului trece in citoplasma unde se
multiplica vegetativ si apoi se elibereaza profagi prin liza celulei
" incorect = acidul nucleic al bacteriofagului ia o portiune din acidul
nucleic al celulei bacteriene
2.
Anul II Microbiologie – cursul 11
*transpozonii (TN)
o EGM mai lungi si mai complexe care ajung pana la 80.000 pb si sunt flancate de
secventele de insertie
o prezinta si alte gene ce codifica anumite caractere fenotipice noi cum ar fi
rezistenta la antibiotice sau la unele metale grele
o sunt marginite de secventele de insertie (IS)
Transpozitie:
• replicativa – originalul ramane, copia se deplaseaza
• nereplicativa – originalul se deplaseaza
Clasificarea transpozomilor
1. Transpozoni de clasa I
se deplaseaza de la un loc la altul fara ca transpozitia sa fie precedata de replicare
Ex: transpozomii - simpli IS
- compusi: au gena pentru transpozaze dar si alte gene
2. Transpozoni de clasa II
• transpozitia se face cu replicare
• modalitate de amplificare a materialului genetic
• transpozonul ramane la locul initial si o copie a lui ajunge in alt loc
Enzime : transpozaza; enzime cu capaciatea de a media cointegrarea
in alta molecula = cointegrat-rezolvaza
3. Transpozoni de clasa III
secvente de nucleotide ce poarta un intreg genom de bacteriofag
de fiecare data cand apar, rezultatul transpozitiei este o mutatie
Importanta:
1. in variabilitate (EGM pot ingloba gene adiacente)
2. EGM pot functiona ca virusuri oncogene ce pot produce modificari genetice ce stau la baza
mutatiilor
3. fac sa nu mai existe delimitare neta intre cele doua componente, cromozom si material
extracromozomial
Mobile genetic elements in the Cell (left) and in what ways they can be acquired (right).
3.
Anul II Microbiologie – cursul 12
Microbiologie
Curs 12
07.I.2008
1. Mutatia: este o modificare in secventa de nucleotide care apare brusc, rar, spontan si se transmite
la descendenti.
Celula care sufera mutatia se numeste celula mutanta, fiindu-i afectata o parte din genom si
avand proprietati diferite fata de cea parentala. Mutatia poate sa apara in cromozom dar si in materialul
genetic extracromozomial si poate afecta orice proprietate a bacteriei. Dintr-o celula mutanta poate lua
nastere o populatie de celule mutante care poate supravietui cu celelalte celule, le poate inlocui sau poate
sa dispara datorita mediului nefavorabil. Mutatia este independenta de factorii de mediu care au doar rol
de selectie a mutantelor. Mutatia are un caracter spontan.
Caracterul spontan si rolul de selectie al mediului este demonstrat prin doua teste:
1. testul fluctuatiei populatiilor Luria-Delbrück
2. testul insamantarii replicative efectuat de sotii Lederberg
Din punct de vedere cantitativ mutatia poate fi caracterizata prin:
1. rata de mutatie: ce reprezinta probabilitatea ca o anumita mutatie care vizeaza un anumit
caracter sa apara intr-o celula bacteriana in timpul unei diviziuni. Poate fi de 1 x 10-7 pana la 1 x
10-8. Pare sa fie controlata genetic si adaptata la un anumit nivel optim de fortele evolutiei.
2. frecventa mutatiilor: este reprezentata de numarul sau cantitatea de celule mutante care se
gasesc intr-o populatie bacteriana privind anumite caractere fenotipice. Este raportul dintre
numarul de celule mutante si numarul total de celule din populatia bacteriana. Poate fi de 1 x 10-5
pana la 1 x 10-10. Este influentata de rata mutatiei si de momentul in care apare mutatia.
1.
Anul II Microbiologie – cursul 12
Mecanismul de aparitie a mutatilor induse (determinate de agenti mutageni chimici sau fizici)
Tipuri de mutatii:
1. dupa modul de aparitie pot fi: spontane sau induse
2. dupa marimea leziunii pot fi: - punctiforme (prin tranzitie sau transversie)
- extinse (genice sau plurigenice) prin deletie, inversie, insertie
3. dupa efectul mutatiei asupra traducerii in proteine:
¾ mutatie cu sens gresit – sinteza unui alt aminoacid decat cel initial, rezultand alta proteina
¾ mutatie cu acelasi sens – nu apare o modificare in structura proteinei (un aminoacid
poate fi codificat de mai multi codoni astfel ca schimbarea unei baze poate duce la
formarea unui codon ce codifica acelasi aminoacid)
¾ mutatie non sens – codoni non sens ce determina oprirea sintezei proteice (codon STOP=
UGA, UAG, UAA)
4. in raport cu exprimarea fenotipica:
¾ mutatie perceptibila = schimbari de diferite grade ale caracterelor fenotipice (observabile)
¾ mutatii silentioase = nu se exprima fenotipic
¾ mutatii letale
5. in raport cu parentalul salbatic (cu informatia initiala):
• mutatii inainte: celula mutanta castiga, pierde sau isi modifica o functie in raport cu
parentalul (difera de parental printr-o proprietate)
• mutatii inapoi: readuc parentalul salbatic prin:
o reversmutatie (numai in cazul mutatiilor punctiforme)
o mutatii supresoare - intragenice sau intergenice
Tipuri de mutante
Oricare dintre proprietatile unei bacterii poate fi modificata:
9 mutante morfologice – ex: dintr-o celula cu capsula se poate forma una acapsulara iar dintr-una
cu cili se poate forma una fara cili
9 mutante biochimice – utilizeaza sau nu un anumit substrat
9 mutante metabolice
de virulenta (3 colonii foarte virulente = Bacilul tuberculos, Bacilul difteric, Bacilul
carbunos)
de patogenitate
de cultura
9 mutante conditionat letale: al caror caracter letal nu se exprima decat in anumite conditii de
mediu (de regula stabilite de catre experimentator)
Ex: mutantele termosensibile: folosite in prepararea vaccinurilor – virusul gripal are mutante ce
se replica la 300
2.
Anul II Microbiologie – cursul 12
Materialul genetic al celulei receptoare se numeste endogenom iar cel care provine din celula
donatoare se numeste exogenom.
1. Transformarea = transfer de ADN liber (rezultat din liza celulei sau extras chimic) intre o
celula donatoare si o celula receptoare. Este cel mai vechi mecanism descoperit (in 1928) de Griffith
printr-un experiment. A inoculat la soarece (pneumococul S = capsulat - produce imbolnaviri; R=
necapsulat):
• pneumococ S III care va
produce pneumonie si moartea
soarecelui
• pneumococ R II care nu omoara
soarecele
• pneumococ S III omorat prin
caldura care nu omoara soarecele
• pneumococ S III omorat +R II
viu – omoara soarecele, de la
care se va recolteaza pneumococ
S III capsulat ⇒ se observa
transformarea tipului R in S
care produce imbolnavirea
3.
Anul II Microbiologie – cursul 13
Microbiologie
Curs 13
14.I.2008
3. Conjugarea bacteriana = fenomen de transfer al materialului genetic intre doua celule (donator
si receptor), ce se face prin intermediul unor punti de legatura realizate intre pilii sexuali.
Pilii pot fi :
• comuni – ce au proprietati de aderare
• sexuali (in numar de 1-4) – ce au un determinism plasmidic (plasmida poate fi in citoplasma
sau integrata in cromozom)
Celula donatoare Celula receptoare
F+ sau Hfr F−
Operonul Tra este operon de transfer. Plasmida ce contine operonul Tra initiaza fenomenul de conjugare
= plasmie conjugante. Plasmidele mici ce nu contin operonul Tra; se numesc plasmide neconjugante care
pot fi transferate prin fenomenele de transformare si transuctie.
Conjugarea:
1.
Anul II Microbiologie – cursul 13
La bacterile Gram (+) conjugarea este diferita. Are loc transferul de material genetic fara puntea de
legatura formata de pilii sexuali. Celulele receptoare nu au plasmida; ele secreta substante numite
feromoni de sex cu rol de atractie. Nu s-a observat formarea unei punti de legatura.
Antibiotice
Antibioticele = chimioterapice
Antibioticele sunt obtinute pe cale naturala in timp ce chimioterapicele sunt obtinute prin sinteza dar au
acelasi mecanism de actiune si acelasi spectru de actiune.
Denumirea provine de la antibioza = fenomen de antagonism bacterian (bacterii care secreta
substante ce omoara alte bacterii)
PAUL EHRLICH:
Este parintele chimioterapiei ca stiinta
A observat ca unii coloranti se fixeaza selectiv pe bacterii. A studiat 10.000 de substante pentru
actiunea antibacteriana si a descoperit o substanta activa (606 = Salvarsan) care s-a dovedit a fi
toxica pentru Treponema pallidum.
Introduce principiul toxicitati selective - un chimioterapic trebuie sa fie toxic pentru celula
bacteriana si mai putin toxic pentru celula eucariota (sa nu atace celula eucariota).
A descris aparitia fenomenului de rezistenta al bacteriei fata de antibiotice.
2.
Anul II Microbiologie – cursul 13
DOMAGK:
Introduce sulfamidele (cele rosii); Prontozilul – pentru tratamentul infectiilor cu streptococ
Este intemeietorul chimioterapiei moderne si influenteaza evolutia imbolnavirilor scazand
mortalitatea.
FLEMING:
Descopera penicilina in 1929 pe cultura de stafilococi; aceasta a fost purificata abia in 1940 de catre
Florey si Chain.
concentratie
toxica pentru
organism
antibiotic
Penicillin culture
3.
Anul II Microbiologie – cursul 14
Microbiologie
Curs 14
26.02.2008
1.
Anul II Microbiologie – cursul 14
4.
Anul II Microbiologie – cursul 15
Microbiologie
Curs 15
04.III.2008
Mecanismele cromozomiale:
Mutatia = modificare in secventa de nucleotide a ADN-ului cromozomial care apare rar, spontan,
brusc, se transmite la descendenti, e stabila iar factorul de mediu are rol de a selecta mutanta.
Rezistenta determinata de mecanismele cromozomiale se raspandeste lent. Prin mutatie apare rezistenta
la un singur antibiotic = monorezistenta. Poate sa apara fata de orice antibiotic si la aproape toate
speciile. (pentru unele bacterii reprezinta principalul mecanism prin care se dobandeste rezistenta –
ex:bacilul tuberculos)
Mecanisme extracromozomiale:
Plasmidele R
9 molecule circulare de ADN mai mici decat cromozomul = cromozom
facultativ
9 conjugante care au determinanti de rezistenta (1→ 8), pot media procesul de
transfer prin conjugare si au un factor de transfer al rezistentei RTF
9 neconjugante nu au capacitatea de a media transferul prin conjugare, ele se
transmit prin transductie
9 se pot transmite (castigarea rezistentei) - orizontal (la specii neinrudite)
- vertical
9 se raspandesc epidemic
1.
Anul II Microbiologie – cursul 15
Indiferent de mecanismul genetic prin care este gastigata rezistenta la antibiotice, din punct de vedere
chimic aceasta e asigurata prin trei mecanisme:
1. Secretia de enzime care degradeaza/inactiveaza antibioticul, astfel incat acesta nu isi mai
poate desfasura activitatea. A fost evidentiat pentru β-lactamine, aminozide, macrolide, cloramfenicol si
este principalul mecanism de rezistenta. Enzimele eliberate de bacterie actioneaza asupra antibioticelor
aflate inafara bacteriei.
Ex: β-lactamazele secretate de bacteriile gram (-) si gram (+) desfac inelul β-lactam ce
determina inactivarea medicamentului
Bacteriile gram (+) = elibereaza β-lactamazele in afara bacteriei si vor actiona asupra
antibioticelor inainte ca acestea sa ajunga la bacterie; ex:penicilinazele hidrolizeaza penicilinele
In faringe se poate cantona streptococul β-hemolitic sensibil la penicilina, si deasemenea se poate
cantona stafilococul aureus care elibereaza penicilinaze ce inhiba antibioticul inainte sa ajunga la
streptococ. La bacterile gram (+) enzimele sunt codificate de plasmid.
Bateriile gram (-) elibereaza enzime in spatiul periplasmic astfel ca antibioticul trebuie sa ajunga
in spatiul periplasmic pentru a fi inactivat. Enzimele au determinism cromozomial.
Fenotip de rezistenta = comportamentul unei tulpini bacteriene fata de un ansamblu de antibiotice
care se testeaza simultan si care apartin unei singure familii.
Ex: aminoglicozidazele – actioneaza asupra aminozidelor si au determinism plasmidic.
Exista trei tipuri: aminozid transferaze, aminozid acetil transferaze, aminozid nucleotidil transferaze;
Ex: cloramfenicolul – inactivat de acetil-transferaza care produce acetilarea lui in prezenta acetil-CoA;
Ex: macrolide – inactivate de esteraze (pentru eritromicina) si acetil-transferaze (pentru alte macrolide);
2.
Anul II Microbiologie – cursul 16
Microbiologie
Curs 16
11.III.2008
Virusologia
Au adus contributii importante in domeniul virusologiei: Löeffler – Frosch, Twort – d’Hérélle,
Rous. Parintele virusologiei este considerat Ivanovski care in 1892 descrie boala frunzelor de tutun si
demonstreaza ca agentul infectios nu este o bacterie.
Virusurile participa in oncogeneza, au efecte teratogene, sunt agenti etiologici ai unor infectii
permanente, infectii virale ce se pot transforma in infectii cronice.
Trasaturi generale:
nu au organizare celulara
au un singur tip de acid nucleic (ADN sau ARN – niciodata ambele tipuri) ce alcatuieste genomul
viral. Genomul viral este sediul informatiei genetice virale ce se adauga in celula parazitata sau o
inlocuieste complet = virusurile realizeaza un parazitism la nivel genetic. Virusurile cu ARN sunt
singurul caz in care depozitul informatiei se face la nivelul ARN-ului.
sunt paraziti obligatorii ai celulelor vii
sunt lipsiti de activitate metabolica = inerte din punct de vedere metabolic, nu au enzime si nu dispun
de sisteme energetice proprii astfel ca nu pot realiza activitate metabolica proprie.
virusul aduce in celula parazitata informatia necesara pentru sinteza componentelor virale iar celula
parazitata pune la dispozitie precursorii si energia necesara sintezei.
odata intrat in celula parazitata virusul se poate integra in cromozomul acesteia sub forma de
provirus si poate ramane sub aceasta forma vreme indelungata. Uneori informatia genetica din
provirus se poate exprima si poate duce la transformarea tumorala a celulei
se multiplica doar in interiorul celulei
Virionii = particule virale mature extracelulare, libere, cu toate caracterele morfologice, structurale si
biochimice. Sunt un pachet de gene responsabile de persistenta virusului in natura si de transmiterea lui
de la o persoana la alta. Sunt particule virale inerte metabolic, incapabile de multiplicare. Pentru
multiplicarea in celula, virionii se dezagrega, si elibereaza in celula molecula de acid nucleic, care detine
informatia necesara pentru sinteza de noi virioni.
Virus = notiune mai larga, cuprinde virionii dar si stadiile intracelulare ale multiplicarii virale
Viroid = a fost descris la plante in 1971 = molecula de acid nucleic (ARN) cu caracter de infectiozitate
Prioni = proteine cu caracter de infectiozitate (nu s-au descoperit molecule de acid nucleic atasate);
produc boli degenerative ale SNC (boala vacii nebune – encefalopatia spongiforma bovina).
este de obicei dublu catenara (exceptie: la parvovirusuri = Parvoviridae – monocatenara); ARN-ul este
monocatenar (exceptie: reovirusuri = Reoviridae – dublu catenar). Acizii nucleici se afla in cantitati
reduse la unele virusuri (virusul gripal - 1% ARN) fata de altele (virusul poliomielitei - 50% ARN). Tipul
de acid nucleic este criteriu major utilizat in clasificare. Acidul nucleic poate fi linear, circular sau
superhelicoidal. Poate fi nesegmentat (format dintr-un singur segment) sau poate fi segmentat (in 8
segmente la virusurile gripale, in 10-12 segmente la reovirusuri si din 5 segmente la arenavirusuri).
Polaritatea catenei:
9 de polaritate pozitiva = cand patrunde in celula parazitata e recunoscut functional ca
ARN-mesager si poate fi tradus in proteine
9 de polaritate negativa = catena fara sens = nu va fi recunoscut astfel ca in prima etapa trebuie sa se
sintetizeze o catena complementara de polaritate pozitiva
Acidul nucleic prezinta infectiozitate numai dupa eliberarea din particula virala.
2. Proteine virale: sunt in numar variabil (3 pana la 30-40) in functie de virus.
Proteine majore:
Proteine capsidale – alcatuite din formatiuni structurale sau biochimice identice numite protomere.
Aceste protomere sunt formate dintr-un singur tip de polipeptid sau uneori din 3, 4 tipuri de
polipeptide. Nu se vad la microscopul electronic. Protomerele se asociaza si formeaza capsomere =
unitati morfologice care se vad la microscopul electronic. Numarul lor este acelasi pentru oricare
specie a unei familii.
De invelis - proteina M formata din subunitati repetitive
- glicoproteiene din peplos (peplomere)
Din core (sambure)
Proteine minore: sunt enzime virale care intervin in replicarea virala: transcriptaze si replicaze virale,
proteine
3. Lipide virale: sunt prezente la virusurile invelite. Sunt preluate din membranele (citoplasmatica sau
nucleara) ale celulei gazda. Sunt glicolipide sau fosfolipide.
4. Carbohidratii se gasesc in cantitate mica in peplomerele virale, au caracter de antigenitate.
Dimensiunile virusurilor
Virusurile au dimensiuni mici, de ordinul nanometrilor. Exista virusuri:
• mici = 20-27 nm (Parvoviridae, Picornaviridae)
• medii = 40-70 nm (Togaviridae)
• mari = 150-300 nm (Paramyxoviridae, Arenaviridae, Poxviridae)
2.
Anul II Microbiologie – cursul 16
Forma virusurilor – deriva din arhitectura virala (tipul de simetrie si prezenta sau absenta invelisului
viral). Formele pot fi variate:
¾ sferice : virusuri gripale
¾ aspect nisipos: Arenaviridae
¾ roata cu spite: Reoviridae
¾ obuz/glont: virusul rabic
¾ coroana solara: Coronaviridae
¾ caramida/piscot: Poxviridae
Clasificarea se face dupa sistemul LHT (Lwoff, Horne, Tournier) care cuprinde toate virusurile
Criterii majore de clasificare: Criterii minore de clasificare:
1. tipul de acid nucleic (ADN/ARN); 1. ARN segmentat sau nu
2. tipul simetriei (helicoidala/cubica); 2. numarul capsomerelor
3. prezenta sau absenta invelisului 3. diametrul helixului
4. ARN-ul/ADN-ul dublu sau mono catenar
Prin sumarea criteriilor majore se delimiteaza:
Virusuri cu ADN Virusuri cu ARN
invelite invelite
Virusuri cu simetrie cubica Virusuri cu simetrie cubica
neinvelite neinvelite
invelite invelite
Virusuri cu simetrie helicoidala Virusuri cu simetrie helicoidala
neinvelite neinvelite
In cadrul acestor grupe se delimiteaza:
• Familii de virusuri: desemnate prin sufixul „–viridae”
• Subfamilii de virusuri: desemnate prin sufixul „–virinae”
• Genuri de virusuri: desemnate prin sufixul „–virus”
• Specie de virusuri: desemnate prin denumire binominala internationala (ex: Paramyxovirus influenzae)
1. Virusuri cu ADN
Virusuri cu simetrie cubica invelite Virusuri cu simetrie cubica neinvelite
Herpetoviridae: ADN dublucatenar, 162 capsomere Parvoviridae: ADN monocatenar 32 capsomere,
- virus herpes simplex tip 1 (oral) si 20nm. Ex: virusuri adenoasociate (AAV); B19 (ce
tip 2 (genital) produce eritem infectios = boala eruptiva)
- virusul varicella zoster: varicela la Papovaviridae: ADN dublucat. 72 capsomere, 50nm
copii respectiv zona zoster la batrani - virusuri ale papiloamelor (negi; veruci)
- virusul Epstein Barr (EB) – - virusuri ale poliomei
mononucleoza infectioasa - virus vacuolizat (SV40) = virus simian
- virusul citomegalic – citomegalia
- la om: v. JC→encefalopatia multifocala progresiva
- virusul herpes 6, 7, 8 virusul varicella v. BK→izolat din urina la persoanele cu
- virusul herpes simian zoster transplant renal
Reprezentanti oncogeni:
- virusul Luke: adenocarcinom renal la broasca Acum exista o alta impartire:
- virusul neurolimfomatozei Marek la pui Papilomaviridae – virusuri ale papiloamelor
- virusul Hinze: limfom la iepure Poliomaviridae – virusul SV40: produce vacuole in
culturi celulare, tumori la animale
Hepadnaviridae: - virusul polioma-like
- virusul hepatitei B (HBV) 42 nm, Adenoviridae:ADN dublucat. 252 capsomere,80nm
ADN partial dublucatenar; singurul - dau infectii ale cailor respiratorii
virus cu ADN al hepatitelor; poate - febra faringoconjunctivala
produce cancer hepatic primitiv. - faringita acuta febrila
- exista peste 47 de tipuri antigenice dintre care
tipurile 40, 41, 42 produc boli diareice, altele
HVB
conjunctivita hemoragica.
Virusuri cu simetrie helicoidala invelite Virusuri cu simetrie helicoidala neinvelite
Poxviridae: sunt cele mai mari (100-300 nm) -nu prezinta interes in patologia umana
Gen orthopoxvirus - v. variolei (vaccinabil) = sunt bacteriofagii
Gen parapoxvirus - v. nodulilor laptarilor
- v. variolei la vaci
Neclasificati:
- virusul Molluscum contagiosum care cauzeaza tumori
cutanate benigne
- v. simian IABA car poate trece la om
3.
Anul II Microbiologie – cursul 16
2. Virusuri cu ARN
Virusuri cu simetrie cubica invelite Virusuri cu simetrie cubica neinvelite
Togaviridae:ARN monocatenar nesegmentat; 40- Picornaviridae: ARN monocat. 32 capsomere, 27 nm
70 nm; 32 capsomere Gen enterovirus – rezistent la pH acid
Gen Alfavirus- encefalite ce se transmit prin tantar -v. poliomielitei 1, 2, 3
Gen rubovirus- v. rubeolei se transmite pe cale -v. Coxsackie B: 6 tipuriantigenice - determina
respiratorie pleurodinia si encefalomiocardita la nou-nascuti
Flaviviridae -v. Coxsackie A:24 tipuri antigenice - determina
-v. febrei galbene herpangina=faringe eritematos (la copil mic) si boala
-v. bolii Denga mana-picior-gura
-v. encefalitogene transmise de tantar sau capusa Ambele tipuri (A si B) produc pareze, paralizii si
-v. hepatitei C (VHC) apartine genului Hepacivirus meningite asepice.
-v. hepatitei G (VHG) -v. Echo: 32 de tipuri
-enterovirus 68 si 71
Retroviridae contin reverstranscriptaza atasata Gen Hepavirus
genomului viral si doua catene de ARN identice; -enterovirus 72=VHA ⇒ hepatita A
Trei subfamilii: Gen Rhinovirus - peste 120 de tipuri antigenice
- Oncovirinae: v. leucemiei/sarcoamelor aviare - produc guturai, rinita, corize
- Lentivirinae: v. imunodeficientelor bovine (BIV), Gen Cardiovirus si genul Aphtovirus nu produc infectii
simiene(SIV) si umane (HIV1 si HIV2) la om
- Spumavirinae Caliciviridae: 30-40nm, aspect de caliciu
-v. hepatitei E (VHE)
-v. Norwalk like produce boli diareice la copii
Astroviridae: ARN monocatcatenar, dimens. mici
- v. gastroenteritelor
Reoviridae: ARN dublucat. segmentat, capsida dubla
Gen Reovirus 1, 2, 3 – produc enterite la sugari si
infectii respiratorii (faringita, rinita)
Gen Orbivirus (arbovirusuri)
Gen Rotavirus
Gen Coltivirus – v. febrelor de Colorado
4.
Anul II Microbiologie – cursul 17
Microbiologie
Curs 17
18.III.2008
Multiplicarea virusurilor
Virusurile sunt paraziti obligatorii ai celulelor vii. Multiplicarea lor are loc numai in celula vie.
In celula infectata de virus patrunde numai acidul nucleic, capsida ramanand la suprafata celulei. O
celula in care patrunde un virus este diferentiata biochimic, si uneori morfologic, datorita faptului ca
se pot induce o serie de stari: producerea de virioni si distrugerea celulei; integrarea genomului viral in
cel al celulei (ceea ce cauzeaza infectii persistente). Multiplicarea are loc numai dupa dezorganizarea
virionului cu eliberarea acidului nucleic care patrunde in celula si aduce informatia genetica necesara
pentru sinteza componentelor virale (proteinele capsidale si acidul nucleic viral), iar celula parazitata
este cea care pune la dispozitie aparatul de sinteza, energia si precursorii necesari sintezei. Virusurile
nu se multiplica, ele sunt replicate in celula. Genomul viral directioneaza metabolismul celular spre
producerea de noi virioni, numiti virioni progeni. Se realizeaza astfel un metabolism viral.
Virusul care infecteaza celula poate fi:
• virus complet: are gene structurale, gene pentru multiplicare, gene de control ale replicarii virale, gene care
nu sunt absolut necesare replicarii (are informatia genetica necesara desfasurarii tuturor etapelor replicarii);
• virus defectiv: nu are sau nu functioneaza genele de replicare (nu contine tot pachetul de gene pentru
multiplicare fie natural fie in urma unor fenomene de rezistenta
Celula gazda poate sa fie:
• sensibila: celula prezinta receptori pentru virus si va putea fi infectata de acesta
• rezistenta: celula nu prezinta receptori pentru virus si nu va putea fi infectata
Tropismul unei celule (este conditionat de prezenta sau absenta receptorilor pentru virusuri)
• celula permisiva: permite derularea tuturor etapelor de multiplicare virala (virusul se poate atasa de celula,
patrunde in celula iar celula infectata asigura virusului toate procesele metabolice necesare multiplicarii).
• celula nonpermisiva sau celula nonrepetitiva care nu permite derularea tuturor etapelor de replicare virala.
Producerea de noi virioni = infectie. Poate fi:
• productiva rezultand virioni progeni (celula este susceptibila, permisiva, iar virusul e complet);
• abortiva cand nu rezulta virioni progeni (celula este susceptibila, permisiva, iar virusul defectiv) sau (celula
este susceptibila, nonpermisiva, iar virusul este complet).
Multiplicarea virala este un aspect al relatiei dintre virus si celula si relatia dintre virus si organism
reprezentata prin imunitate (mediata celular).
Multiplicarea virala:
Etape: 1. initiale: (de initiere a infectiei): atasare, penetrare si decapsidare
(dezvelire) = eliberarea acidului nucleic din invelisul viral;
2. faza de eclipsa - biosinteza componentelor virale (ADN, proteine)
- in celula parazitata nu se poate detecta nimic
3. faze terminale - asamblarea = maturarea particulei virale
- eliberarea virionilor progeni din celula infectata
1. Faze initiale - chimioterapicele antivirale trebuie sa ajunga in celula ele actionand in aceste etape.
a) Atasarea – se face daca celula are receptori (are tropism) iar daca celula este rezistenta nu poate
fi infectata. La inceput atasarea se face intamplator prin legaturi slabe. Apoi se realizeaza o legatura
stransa datorita unor straturi de suprafata ale celulei si virionului si datorita unei complementaritati
intre structurile membranei si structurile virale.
Exisa receptori specifici:
Ex: - virusul HIV → receptorul = CD4 de pe limfocitul T-helper (dar si alte celule pot fi infectate)
- virusul gripal→ receptorul = glicoproteine
- virusul poliomielitei → receptorul = proteine aflate numai pe celulele de la om si maimuta
Virusurile pot folosi si receptori utilizati in alte scopuri:
- virusul rabic → foloseste receptorii pentru acetilcolina din SNC
- virusul Ebstein-Barr → care foloseste receptorii pentru complement de pe limfocitul B
- virusul HIV, Rhinovirusurile → au ca receptor o molecula de adeziune intercelulara (ICAM)
1.
Anul II Microbiologie – cursul 17
In culturile celulare virusurile induc un efect citopat (ECP), citocid sau noncitocid:
A) Efect noncitocid
• formarea de sincitii (celule gigante multinucleate) = sincitiile au rol in diagnosticul infectiilor virale
Ex:Paramyxoviridae, HIV si uneori Herpetoviridae
• formarea de incluziuni celulare (intracitoplasmatice sau intranucleare) datorate unei sinteze in
exces a componentelor virale care raman neasamblate
Ex: pentru virusul rabic → incluziuni patognomonice – virusul se multiplica in nucleu
incluziuni intracitoplasmatice = corpii Babes-Negri – in neuroni;
pentru Herpeto-, Papova-, Adenovirusuri → incluziuni intranucleare
B) Efect citocid = litic –determina liza celulelor infectate: Picornaviridae, Poxvirusuri, unele herpetice
CHIMIOTERAPICE ANTIVIRALE
Actioneaza in diferite etape ale multiplicarii virale, si nu respecta principiul toxicitatii selective
actionand atat asupra strucurilor virale cat si asupra celulei gazda motiv pentru care in prezent exista
un numar mic de chimioterapice antivirale.
1. Chimioterapice care actioneaza in fazele initiale:
- AMANTADINA si derivatul metilat RIMANTADINA pentru virusul gripal A
efecte secundare: cefalee, varsaturi
- OSELTAMIVIR, ZANAMIVIR – inhibitori ai neuraminidazei
2. Chimioterapice care actioneaza in faza de eclipsa:
A. Chimioterapice care inhiba sinteza acizilor nucleici: B) Chimioterapice care inhiba
Pentru a deveni activi trebuiesc fosforilati de catre enzime (kinaze)
celulare/virale si inhiba replicarea Herpetoviridaelor (HSV, VZV)
sinteza proteinelor:
Analogi de baze
purinice
Ara-A = Vidarabina (adenozin arabinozid) • in etapa de transcriere =
Analogi de baze azotate
3.
Anul II Microbiologie – cursul 18
Microbiologie
Curs 18
25.03.2008
Relatiile ecologice ale microorganismelor
Ecologia este ramura biologiei ce studiaza relatiile dintre organism si microorganisme si relatiile
acestora cu mediul inconjurator. Exista 60 de genuri bacteriene cu importanta in patologia umana.
Biocenoza = ansamblu de specii bacteriene care se gasesc intr-un
sector.
Biotop = sector ocupat de o biocenoza.
Ecosistem = ansamblu dintre biocenoza si biotop.
1. Relatii intre microorganisme
de indiferenta
de sinergism (potentarea efectelor pe care le au impreuna)
de simbioza (isi potenteaza efectele unele altora)
de antagonism
2. Relatii intre microorganisme si mediu
Simboza ☺
3. Relatii intre microorganisme si organismele superioare:
Exista 2 categorii de microorganisme:
• Saprofite = traiesc utilizand materia moarta si anorganica si nu au actiune nociva asupra organismului
• Parazite = traiesc in stransa legatura cu materia vie, sunt strict parazite si se dezvolta numai pe seama
organismelor vii si pot merge pana la parazitism obligatoriu intracelular (Ricketsiile, Clamydiile). Pot fi
facultativ parazite, putand folosi si materie moarta.
Pentru relatia principala care duce la infectii, microorganismele parazite sunt de doua feluri:
• Bacterii cu patogenitate certa = patogene de ordin I – prezenta lor in organism determina aparitia bolii
(Bacillus anthracis, Treponema pallidum) si pot depasi rezistena naturala;
• Bacterii oportuniste = patogene de ordin II – sunt conditionat patogene si se gasesc in mod normal in
diferite locuri in organism dar daca parasesc locul pot produce infectii fie prin scaderea rezistentei
organismului fie isi depasesc rezistenta. Astfel produc imbolnaviri cand gasesc conditii propice.
Bacteriile au evolutie rapida deoarece au material genetic extracromozomial.
Organismul are mecanisme de aparare impotriva bacteriilor ce produc infectii:
• Mecanismele de rezistenta naturala (nespecifice si innascute)
• Mecanismele de imunitate dobandita = actioneaza asupra agentului care a deteriminat-o
- Umorala = anticorpi = imunglobuline;
- Celulara = limfocite T, limfokinele, macrofagele;
Bacterii comensale = folosesc aceleasi resurse nutritive ca si organismul
organizate in ansamblu fiind in echilibru dinamic perfect (ocupa cavitaiile naturale; pe piele:
Comensalism ☺
Staphylococcus epidermidis);
formeaza microbiocenoze: ex: nazala, bucala, faringiana, vaginala, uretrala (bacterii de vecinatate), la
nivelul colonului unde este diferita in functie de varsta si alcatuita din bacterii anaerobe nesporulate,
Gram(-) Ex: genul Bacteroides (90-95%), E. coli, Candida, Proteus.
Starea normala se numeste eubioza iar cand intervin modificari apare starea de disbioza.
Rol:
- Mentinerea starii de sanatate – demonstrat pe animale aseptice
- Dezvoltarea organelor limfoide
- Dezvoltarea tractului digestiv
INFECTIA - totalitatea proceselor ce apar (la nivelul homeostaziei) ca urmare a patrunderii agentului
infectios
- conflict intre microorganisme care intervin prin factori de patogenitate si organism care se
apara prin mijloace de aparare (rezisenta naturala, imunitatea dobandita). Infectia poate fi data de bacterii cu
patogenitate certa sau de bacteriile comensale. Poate sa se manifeste clinic (apar simptome, semne = boala
infectioasa) sau poate evolua fara simptome, inaparenta clinic (ex: hepatita A). Nu toate bolile infectioase
sunt transmisibile (ex:botulismul).
INFECTIA → SPECIFICITATEA ETIOLOGICA = legatura dintre un microorganism si o infectie
(o anumita boala e produsa de un microorganism)
Posulatele lui Koch (sunt valabile si azi cu mici exceptii)
1. un agent infectios trebuie sa fie prezent la persoana infectata si trebuie sa lipseasca de la persoanele
sanatoase. Leziunile produse sunt in concordanta cu prezenta bacteriei in diferite teritorii ale org.
1.
Anul II Microbiologie – cursul 18
CRITICA: agentul infectios nu poate fi evidentiat la toate cazurile de boala
ex: infectii persistente lente → purtator sanatos (Staphylococcus aureus);
2. agentul etiologic trebuie sa poata fi izolat in laborator si sa poata fi intretinut prin treceri succesive
prin medii de cultura;
CRITICA: nu toti agentii infectiosi au putut fi cultivati in laborator → ex: bacilul leprei
3. agentul infectios izolat de la bolnav trebuie sa reproduca infectia umana la
animale de laborator si de la animal sa poate fi din nou izolat.
CRITCA: nu toti agentii infectiosi pot sa reproduca boala la animale
ex: scarlatina, rujeola, gonoreea, febra tifoia;
- unii agenti infectiosi pot sa reproduca boala la animale ex: → difteria Mycobacterium leprae
4. trecerea prin infectii trebuie sa fie urmata de instalarea unei imunitati specifice fata de agentul
infectios care a dat imbolnavirea;
CRITICA: trecerea printr-un abces, flegmon nu determina instalarea imunitatii → ex: gonoreea;
Microbiologie
Curs 19
1.IV.2008
1.
Anul II Microbiologie – cursul 19
B) Endotoxinele:
9 sunt legate de celula bacteriana iar evidentierea se poate face prin distrugerea celulei sau prin extractie
chimica;
9 sunt lipopolizaharide asemanatoare antigenului O;
9 sunt termorezistente (stabile);
9 actioneaza in cantitati de mg;
9 nu induc anticorpi neuralizanti;
9 nu se transforma in anatoxine;
9 au mecanism de actiune nespecific (acelasi mecanism de actiune)
9 in doze mici determina aparitia unor fenomene iar in doze mai mari a altor fenomene ca de exemplu
CID = coagulare inravasculara diseminata.
Autovaccin: in infectiile urinare cu E. coli.
4. Agresinele (impedinele) – permit bacteriei evadarea de sub controlul mecanismelor de aparare
antiinfectioasa.
Mecanisme de scapare de sub control:
1. structura cu actiune antifagocitara
2. exista bacterii serorezistente
3. rezistenta metabolica = capacitatea organismului de a sustrage unele oligoelemente de care au nevoie
bacteriile (ex: Fe)
4. bacteriile au capacitatea de a se opune si mecanismelor de imunitate dobandita prin eliberarea de
proteaza care degradeaza IgA secretorii de la nivelul mucoaselor.
5. variatia antigenica (ex: gonococ)
Apararea antiinfectioasa = prin doua categorii de mecanisme
1. rezistenta naturala
2. imuntatea dobandita - umorala = anticorpi
- mediata celular = limfocitele T, limfokinele, macrofagele;
1. Rezistenta naturala – mecanism genetic innascut caracteristic de specie (are determinism genetic)
Sunt boli care le fac - numai oamenii = antroponoze: gonoreea, scarlatina;
- numai animalele
- si omul si animalele = antrax
2. Mecanisme de rezistenta naturala
• Bariere anatomice: cutanate, mucoase – prima linie de aparare care impiedica patrunderea µorg.
- se opun mecanic prin pastrarea integritatii
- se opun chimic prin enzime (mucoasa conjunctivala – lizozim, cavitatea bucala – saliva);
• Varsta: mecanisme de rezistenta naturala;
• Factorii hormonali: infectii mai frecvente la persoanele cu diabet zaharat;
• Rezistenta nutritionala: redistribuirea oligoelementelor (sechestrarea Fe);
• Factori celulari si tisulari: proteine, acizi grasi, enzime lizozomale;
• Fagocitoza;
• Inflamatia;
FAGOCITOZA = capacitatea de digestie ce apare in
urma patrunderii unui agent infectios in organism;
descrisa de Metchnikoff (1900);
Celule implicate in fagocitoza:
• fagocitele profesioniste = factorii principali de
inglobare si digerare a particulelor straine
-ex: PMN-neutrofile, celulele sistemului
mononuclear fagocitar (SMF)
- migreaza dirijat spre locul unde sunt prezente
particulele straine
- au receptori pentru fragmentul C al
complementului si pentru Ig G
- au pe suprafata lor receptori pentru fragmentul
C3 si C1 al complementului
- sunt capabile de mecanisme puternic microbicide
• fagocitele amatoare = neprofesioniste
- nu au capacitatea de a ingloba si a digera; nu au capacitatea de migrare; nu au pe suprafata receptori;
sunt reprezentate de celulele reticulocitare, endoteliale, fibroblastice.
2.
Anul II Microbiologie - cursul 20
Microbiologie
Curs 20
8.IV.2008
Etapele fagocitozei
1. chemotaxia – influentata de factori ce tin de bacterie sau factori ce tin de organismul gazda
2. atasarea – este intamplatore
– bacteriile au structuri ce impiedica atasarea astfel ca ele trebuiesc pregatite pentru fagocitoza,
proces numit opsonizare – prin mecanisme specifice sau nespecifice.
3. inglobarea = emiterea de pseudopode formandu-se vezicule in care ajunge agentul infectios. Acest proces
se desfasoara cu consum de energie.
4. digerarea: fagozomul + lizozomii → fagolizozomi → are loc digestia.
Mecanismele microbicide
a) dependente de O2
1. mieloperoxigenaza (enzima stocata in PMN neutrofile)
in prezenta H2O2 si a pH-ului acid determina formarea
de compusi halogenati cu efect bactericid;
2. explozia respiratorie = cale metabolica de respiratie
dormanta → formarea de compusi cu efect bactericid;
b) independente de O2
1. proteine bazice = antibiotice eliminate in organismul
uman (= defensine) – in granulatiile PMN de origine
animala;
Rezultatele fagocitozei:
a) digerarea particulelor straine;
b) initiaza raspunsul imun;
c) fagocitele sunt distruse uneori – cand numarul de bacterii inglobat este prea mare, sau cand bacteriile au factori
de patogenitate;
d) bacteriile pot supravietui – determinand infectii cronice (ex: Mycobacterium tuberculosis, Brucella).
INFLAMATIA
- modificari vasculare, celulare, umorale;
- semne Celsiene (rubor, color, tumor, dolor si functio leza);
• reactia de aparare defensiva;
• procese care incearca sa blocheze agentul infectios acolo unde a patruns (reactie locala);
• uneori leziunile pot depasii limitele (apar si fenomene generale nervoase sau endocrine);
1. inflamatie acuta (de scurta durata) – aglomerarea la locul infectiei a neutrofilelor, cu acumulare de puroi;
2. inflamatie cronica (de durata) – celulele se acumuleaza (celulele sistemului mononuclear fagocitar dupa
care apar granulocitele).
Modificari vasculare:
Vasodilatatie;
Staza circulatorie – cu modificarea dispozitiei celulelor endoteliale, cresc permeabilitatea vasculara cu
extravazarea plasmei in tesuturi (= aparitia tumorului). Mai trec si:
9 fibrinogen → retea de fibrina ce izoleaza agentul infectios;
9 factori bactericizi: complementul, ce este activat pe cale clasica sau alternativa amplificand
reactia inflamatorie;
9 anticorpi, care impreuna cu complementul => eliminarea agentului infectios.
Modificari celulare:
- aderenta celulelor leucocite de endoteliul vascular = marginatie leucocitara;
- primele celule care ajung la locul inflamatiei sunt PMN neutrofile;
- ajung si celule din SMF, mastocite, bazofile, trombocite care fuzioneaza, si o serie de mediatori ai inflamatiei
care se gasesc in stare inactiva in celule sau se gasesc ca precursori. Unii mediatori actioneaza local sau la
distanta: - histamina, serotonina
- derivati ai acidului arahidonic activati pe doua cai: ciclooxigenaza → prostaglandine, tromboxani
lipooxigenaza → leucotriene
Fenomene generale (cunoscute sub numele de sindrom umoral al inflamatiei):
- aparitia unei proteine, proteia C reactiva;
- creste VSH-ul;
- hiperfibrinemie;
- distribuirea diferita a electrolitilor
Apararea antiinfectioasa: - rezistenta naturala nespecifica
- sistemul imun
1.
Anul II Microbiologie - cursul 20
SISTEMUL IMUN
Specificitate: capaciatatea de a raspunde specific la antigene diferite ca structura (cu mici diferente);
Memorie: odata ce a intalnit un antigen, sistemul imun isi aduce aminte, si la o noua intalnire raspunde diferit.
Sistemul imun face diferenta dintre self si non-self:
• in cursul dezvoltarii face cunostinta cu structurile proprii organismului si nu mai raspunde la acestea:
- raspunde negativ = toleranta imunologica;
- daca raspunde pozitiv = boli autoimune (nu recunosc structuri proprii organismului);
• este stimulat in prezenta antigenului
Antigenul = substanta straina care e capabila sa determine un raspuns imun umoral (anticorpi) sau celular.
Imunogenul = are doua proprietati:
Imunogenitate – capacitatea de a declansa un raspuns imun
Specificitate – capacitatea de a reactiona cu efectorii imunitari
Antigen complet = are ambele proprietati
Jumatate de Antigen = haptena = nu are decat una din proprietati – specificitatea. Substantele cu rol de
haptena reactioneaza cu anticorpii dar nu genereaza un raspuns imun (ex: hormonii steroizi, sulfamidele). In
organism se cupleaza cu o proteina cheie si formeaza un antigen complet ce determina un raspuns imun.
¾ Imunogenitatea este conditionata de o serie de factori:
Conditii - filogenetice: cu cat o substanta este mai indepartata taxonomic de organism cu atat e mai imunogena;
- fizico-chimice: ◘ GM – ca sa fie antigen trebuie sa aiba GM>10.000 daltoni (exista unele exceptii);
◘ Complexitatea structurala (chimica) – cele mai bune antigene sunt proteinele, dar si
polizaharidele pot fi antigene (ex: polizaharidul capsular de la pneumococ; antigenul O din peretele celular la
bacteriile Gram (-); antigenul H – in cili, flageli; acizii theicoici la bacteriile Gram(+)); lipidele nu pot fi antigene.
◘ Remanenta in organism – antigenul trebuie analizat de sistemul imun
- de gazda – imaturitatea sistemului imun (la nou-nascut sist. imun nu are capacitatea de a raspunde fata
de bacteriile capsulate, de aceea sunt frecvente infectiile produse de pneumococ sau de Haemofilus inluenzae;
- calea de patrundere (subcutanata, intravenoasa, parenterala, digestiva)
- doza: prea mare => instalarea tolerantei / prea mica => nu exista raspuns
- administrarea de adjuvanti = substante minerale.
¾ Specificitatea = complementaritatea intre epitop si paratop
Epitop = parte a unui antigen; are conformatie spatiala perfecta pentru a se lega de anticorpi;
Paratop = parte a unui anticorp care recunoaste un epitop.
Un antigen are un numar variabil de epitopi: (pana la zeci de epitopi diferiti)
ex: la moleculele proteice = 5-7 aminoacizi (epitopi secventiali, epitopi de contiguitate)
la polizaharide = 4-6 zaharuri
Exista epitopi comuni ai unor antigeni diferiti. Calea Clasica Activarea complementului Calea Alternativa
Prezenta epitopilor comuni explica reactiile
incucisate. Complexe imune Activatori nespecifici
Superantigen = antigen care spre Ag-Ac
deosebire de antigenele conventionale are
proprietati de a se lega direct de moleculele de
C1 C3b + B + D
MHC de clasa 2 de la suprafata APC (celule
prezentatoare de antigen), realizand o punte de
C1
unire cu limfocitele T. Superantigenul C3bBb
C3
stimuleaza eliberarea unor citokine care C44a C2 (C3 convertaza)
C2b
amplifica raspunsul imun. ex: toxinele (7 toxine +P
ale stafilococului, exfoliativa). Antigenul este C4b2a C3
C3 b Bb P
(C3 convertaza)
preluat in organism de APC-uri dar C3 convertaza
stabila
superantigenul nu are nevoie de preluare, C 3a + C 4b2a3b C5 C 3bBb (C )
3b n P
(C5 convertaza) (C5 convertaza)
determinand raspunsul imun (se leaga direct de Mb. celulara
MHC II de la suprafata APC-urilor → punte de C5a C5b
scindarile enzimatice inceteaza
Microbiologie
Curs 21
15.IV.2008
Antigenul este caracterizat prin imunogenicitate si prin specificitate. Poate fi Ag complet sau haptena.
Moleculele naturale precum proteinele, polizaharidele, GP, GL, mai slab si acizi nucleici, sunt Ag. Intre
aceste grupe de Ag exista doua deosebiri importante care se refera:
• la varietatea, diversitatea de epitopi (determinanti antigenici);
• la numarul de copii ale unui epitop pe molecula.
1) Moleculele polizaharidice sunt:
9 monodeterminante (varietate mica de E = 2-3);
9 polivalente (numar mare de copii);
9 sunt Ag timoindependente, pentru care raspunsul in Ac nu necesita cooperarea limfocitelor B
(LB) cu limfocitele T – helper (LTH) deoarece Ag polivalent este capabil sa stimuleze singur
expansiunea clonala a LB (expansiune clonala = multiplicare si diferentiere a unor clone).
2) Moleculele de proteine sunt:
9 multideterminante (varietate mare de determinanti de specificitate);
9 monovalente;
9 sunt Ag timodependente – raspunsul in Ac necesita cooperarea intre clona de LB stimulata de Ag
pe deoparte si LTH pe de alta parte.
Epitopii pot fi:
• de continuitate (secventiali), recunoscuti de LT si
LB;
• de contiguitate (conformationali) recunoscuti de LB
dar nu si de LT!!!
Heterogenitatea Ig – baze genetice atribuite lui Tonegawa (1987 – Nobel). Organizarea genelor Ig in
AND germinal este discontinua: (desen)
Ag de HC se deosebesc prin :
1) determinism genic:
Molecule de clasa I: Molecule de clasa a IIa: codificate de
codificate de genele HLA-A, HLA-C, HLA-B; genele DR DQ DP, subregiuni plasate pe
regiunea HLA-D.
3.
Anul II Microbiologie - cursul 21
2) structura biochimica
- heterodimeri compusi din lant greu - heterodimeri formati din 2 lanturi α si β legate
(transmembranar) si lant usor; β2 microglobulina necovalent;
(este aceeasi pe toate celulele; numai extracelular). - ambele lanturi sunt transmembranare;
Are 3 domenii extracelulare (α1, α2, α3) cu domenii - fiecare lant are 2 domenii extracelulare α1, α2 si
variabile care formeaza locul de prezentare al Ag la β1, β2.
T cell receptor(TCR). Este ancorat in celula prin
portiunea transmembranara
3) repartitia pe celule
- pe suprafata tururor celulelor nucleate din - se gasesc numai pe suprafata celulelor implicate
organism cu exceptia: celulelor musculare striate, in RI si pe cele care prezinta Ag;
celulelor hepatice, celulele SN (pe care sunt fie - in procesele inflamatorii si alte celule pot exprima
absente, fie exprimate in cantitate foarte scazuta; Ag HLA clasa aIIa.
in stari inflamatorii si aceste celule pot exprima
cantitati crescute de Ag HLA clasa I
4) functia lor
- sunt asociate cu LTCTX CD8+ (sunt tinta pentru - sunt asociate cu LT CD4;
CD8 care distrug celulele care au pe suprafata Ag - au rolul de a prezenta Ag LTH CD4+ care va
clasa I; recunoaste Ag exogen numai daca este cuplat cu o
- au rol in respingere a grefelor (recunosc Ag proteina de clasa a IIa;
endogene); - au rol in cooperarea celulelor in RI.
MHC(Major Histocompatibility Complex) sunt:
• molecule esentiale pentru recunoasterea si prezentarea Ag => rol in elaboarea RI;
• au importanta in transplanturi;
• restrictia MHC – diferenta esentiala intre LT si LB in modul de recunoastere a Ag! LB! LT!
• asociere intre anumite Ag si predispozitia spre diverse boli.
Limfocite T Limfocite B
Celula precursoare Aceeasi
Maturare timus Bursa F + echiv (maduva osoasa
hematogena)
% in sange 70-80% 30-20%
Markeri prezenti pe suprafata CD2 + CD3 pe toate CD19 CD20 CD21
Iar CD4 si CD8 – caracterizat
subpopulatiilor
Receptorul pt Ag este format din Lanturi α si β IgM si IgD monomeri
O populatie redusa γ, σ
Expansiunea clonala in prezenta Prezenta in ambele cazuri
Ag specific recunoscut de
receptori
Actiunea mitogenilor nespecifici (PHA)phytohaemagglutinin (LPS)Lipopolysaccharide
(substante ce pot determina (ConA)concanavalin A (PPD)Purified Protein Derivative
proliferarea nespecifica a
populatiilor de limfocite)
Functia populatiilor de limfocite - LTCD4 intervin in special in - eliberarea de Ac cu functii
HTT si in stimularea RI, functie diferite;
helper; - opsonizante.
- LTCD8 cu functii citotoxice si
functii supresoare ce pot duce
la blocarea imunitatii umorale
si a imunitatii mediate celular.
In realizarea RI participa LT, LB, celulele SMF prin interrelatii directe (cel-cel) si indirecte (produsi
solubili).
5.