Efectele materiale specifice ale particulelor uzate ce induc inflamatia și osteoliza osului la suprafata

interosoasa a implantului: Un studiu realizat pe sobolani

Rezumat: ?? Particulele produse din articulațiile protetice pot juca roluri critice în reacțiile
inflamatorii periprotetice și osteoliză.

Obiectivul acestui studiu a fost de a cuantifica și compara răspunsul la resturile de uzură din diferite
biomateriale la interfața os-implant într-un model de genunchi de șobolan.

Metode:

Șaizeci de șobolani au fost împărțiți în aliaje de titan (Tie6Ale4V), crom de cobalt (CoCr), ceramică
(Al2O3), polietilenă cu masă moleculară ultraînaltă (UHMWPE) și grupuri de control (salină
tamponată cu fosfat), fiind 12 animale per grup.O tijă de titan fara suport a fost implantată în
femurul distal drept al fiecărui șobolan, urmata de injecții intraarticularela nivelul genunchiului cu
particule de biomateriale timp de până la 16 săptămâni. Scanarea cu tomografie computerizată a fost
efectuată lunar și în momentul sacrificării pentru a determina densitatea osoasă la nivelul interfeței
osul-implant. Evaluările histologice au fost efectuate pentru a cuantifica reacțiile inflamatorii locale

Rezultatele: particulele CoCr au condus la cele mai severe scăderi ale densității osoase. UHMWPE și
particulele ceramice au dus la o reducere rapidă a densității osoase, urmată de recuperare. Pseudo-
membranele inflamatorii au fost prezente omniprezent în apropierea locului de inserție a condililor
femurali și a pinilor????. Particulele ceramice au favorizat în mod semnificativ formarea țesutului
periprotetic comparativ cu celelalte grupuri (p <0,05). Celulele pozitive de tip catepsină K au fost
prezente în mod dominant la locul peri- implant, ca urmare a provocărilor legate de aliajele metalice
și particulele ceramice.

Concluzie: Diferitele biomateriale sub formă de particule exercită diferite efecte adverse în ceea ce
privește cantitatea de osteoliză și reacțiile inflamatorii asupra țesutului osos la interfața os-implantul.
Oferă informații pentru a proiecta materiale mai adecvate pentru componentele artroplastice.

Introducere

Osteoliza periprostatică în urma artroplasticii articulare protetice a fost un subiect de îngrijorare

crescândă în comunitatea de cercetare ortopedică, precum și un factor limitativ dominant în
longevitatea dispozitivului protetic. În funcție de distribuție și severitate, osteoliza poate duce la
slăbirea aseptică, fractura periprotetică și la problemele reconstructive descurajante la revizia
chirurgicală [1e3]. Este larg recunoscut faptul că resturile de uzură din polietilenă reprezintă una
dintre principalele cauze ale slăbirii protezei pe termen lung. Longevitatea înlocuitorilor articulațiilor
protetice este adesea periclitată de resturile de uzură a particulelor asociaiind pierdere osoasa de
cauza aseptică și osteoliză [4e6]. Mici resturi de particule uzate generate la locul periprotetic au fost
identificate ca un factor cauzal principal care conduce la osteoliză periprotetică, deoarece acestea
adesea stimulează o serie de răspunsuri celulare inflamatorii (inclusiv reacțiile corpului străin), ceea
ce poate duce, în cele din urmă, la osteoclastogeneza și resorbția osoasă [ ].

Cantitatea de resturi de particule, compoziția de resturi și localizarea generației de resturi trebuie să

fie luate în considerare atunci când sa incearca sa se rezolve problemele de proiectare și se vrea
minimalizarea resturile de uzură a particulelor. Deoarece osteoliza este predominant un răspuns
biologic la uzura de particule și la produsele de coroziune, au fost dezvoltate suprafețe alternative de
susținere și polietilenă cu greutate moleculară ultra-ridicată (UHMWPE) în încercarea de a reduce
incidența osteolizelor periprotetice induse de uzură. Aceste suprafețe de rulmenți alterative includ
ceramică pe UHMWPE, ceramică-onceramică, metal-on-metal și metal-on-UHMWPE. Cu toate
acestea, în multe studii sa demonstrat că chiar și aceste suprafețe alternative, precum și UHMWPE,
conduc la osteoliză și inflamație periprotetică [7,8]. În plus, răspunsul biologic la resturile generate de
suprafețele rulmentului a fost dezbătut în ultimii ani [7]. Howie și alții [9] au examinat resorbția
osoasă și formarea unei membrane la interfața dintre un implant de ciment acrilic și os. Un dop de
metilmetacrilat a fost introdus prin articulația genunchiului în partea distală a femurului șobolanului
,asemănănator cu protezele articulare umane. Resorbția osoasă care a apărut în jurul dopului după
injectarea particulelor de uzură din polietilenă de înaltă densitate la genunchiul de șobolan a avut loc
în absența unor cauze mecanice de slăbire. Această tehnică a modelului de șobolan a fost aplicată
mai recent pe șoarece și a fost utilizată cu succes pentru a studia osteoliza, răspunsurile inflamatorii
și reacțiile celulare particulelor purtate [10,11].

Modelul s-a dovedit în repetate rânduri o reprezentare fiabilă pentru a ajuta la elucidarea
problemelor cu proteze articulare protetice [12-16]. Din cunoștințele noastre, nu există un raport
publicat utilizând un model de șobolan, în care o tijă sterilă de titan (care elimină variația de slăbire
mecanică), a fost plasată în partea distală a unui femur viabil pentru a investiga efectele diferitelor
particule de biomateriale de uzură asupra a reacțiilor inflamatorii și a procesulor osteolitice la
interfața osul-implant, și nici un studiu până în prezent nu a comparat efectele fiecăreia dintre
resturile particulare cu gradul de osteoliză asupra osului. Acest model teoretic permite evaluarea
biocompatibilității biomaterialelor ortopedice sub formă de particule și evaluarea particulelor de
uzură care provoacă resorbția osoasă și formarea țesutului conjunctiv care duce la slăbirea simultană
a protezelor. Noi presupunem că resturile uzate din compoziția diferită a biomaterialelor acționează
diferit in promovarea răspunsul țesutului local. Obiectivul acestui studiu a fost de a testa ipoteza de a
cuantifica și compara răspunsul cu resturile de uzură din diferite biomateriale sub formă de particule
(UHMWPE, crom de cobalt, aliaj de titan și particule ceramice) la interfața os-implant într-o
articulație de genunchi de șobolan cu un model de implant distal femural.

Materiale si metode

Protocolul experimental și gruparea Protocolul privind animalele a fost aprobat de Comitetul pentru
îngrijirea și utilizarea animalelor instituționale.

În acest studiu au fost utilizați 60 de șobolani Lewis de sex feminin cu greutate corporală de 200 -225
g .Animalele au fost adăpostite în cuști de trei pentru un total de 20 de cuști, potrivit Asociației
pentru Evaluarea și Acreditarea Animalelor Internaționale de Asigurare a Animalelor (AAALAC
International). Acestea au fost ținute la unitatea animalieră a Universității de Stat Wichita cu o
săptămână înainte de implantarea chirurgicală și repartizate aleatoriu în cinci grupe (n Z 12 pentru
fiecare grup): particule UHWMPE, particule de aliaj de cobaltciciu (CoCr), particule din aliaj de titan
(Tie6Ale4V) Al2O3), și soluție salină tamponată cu fosfat (PBS). Toate grupurile aveau o inserție din
tija de titan în femurul distal stâng, cu injecții ale particulelor cu soluție purtător (PBS), așa cum a fost
definită de fiecare grupă. Grupa 5 (control) a avut o inserție de tija de titan în femurul distal la
stânga, prin injectarea numai a soluției PBS fără particule.

Acest studiu a fost efectuat pe o perioadă de 16 săptămâni, permițând primelor 4 săptămâni

stabilitatea și vindecarea implantului să aibă loc și următoarele 16 săptămâni pentru injecții de
particule, evaluare și sacrificarea animalelor.
Particule biomateriale

Patru biomateriale ortopedice sub formă de particule au fost evaluate pentru reacții numai la
modelul femural distal la șobolan (Tabelul 1), iar mărimea și distribuția particulelor au fost evaluate
cu ajutorul microscopiei electronice de scanare (SEM), așa cum a fost detaliat anterior [17].

Figura 1 prezintă imaginile SEM ale biomaterialelor utilizate în experimente. Imaginile SEM au relevat
faptul că toate materialele au o formă predominant sferică. Particulele au fost spălate în soluție de
etanol 70% pentru a îndepărta endotoxina legată și suspensia de particule a fost determinată ca fiind
lipsită de endotoxine utilizând testul Limulus (Endosafe, Charles Rivers, Charlestown, SC, USA).
Particulele au fost apoi suspendate în PBS steril la 6,4105 particule / ml pentru injectare. Operația de
implantare a titanului Animalele au fost anestezite cu o injecție intraperitoneală a unui amestec de
ketamină (90 mg / kg) și xilazină (5 mg / kg) și buprenorfină (0,05 mg / kg, i.p.) pentru analgezie
preventivă. Un chirurg ortopedic a efectuat toate procedurile chirurgicale pe șobolani. După ce
animalele au fost anestezate, incizia parapatelarală mediană a genunchiului stâng a fost incizată și
patella a fost dislocată lateral. Folosind o tehnică sterilă, crestarea intracondilară a femurului distal a
fost expusă printr-o artrotomie medială parapatelară. Un burghiu cu diametrul de 0,9 mm a fost
utilizat pentru a fora prin crestătură intracondilară pentru a accesa cavitatea medulară a femurului
distal. O tijă de titan cu diametru de 1,1 mm și o suprafață netedă de 6,0 mm a fost presată în
femurul distal, iar radiografiile au fost făcute imediat după operație pentru a evalua plasarea
implantului. După inserarea implantului, arthrotomia parapatelară mediană a fost reparată cu suturi
5.0 Vicryl, iar o sutură de mătase 5.0 a fost utilizată pentru a închide pielea cu o tehnică de sutură
simplă întreruptă. Radiografiile au fost luate cu tije de titan in situ, atât în planurile
anteroposterioare, cât și în cele laterale, pentru a verifica amplasarea tijei de titan. Introducerea
biomaterialului pentru particule Au fost permise patru săptămâni după operație pentru stabilizarea
implantului și vindecarea în canalul femural, înainte de prima uzură injecție de particule (figura 2C).
În fiecare jumătate de săptămână (săptămânile 4, 6, 8, 10, 12, 14 și 16) au fost injectate particulele
de biomateriale diferite în 50 ml (6,410,5 particule / ml) pentru fiecare din cele cinci grupuri.
Scanarea tomografiei cu micro-calcul (CT) a fost efectuată la fiecare 4 săptămâni la toți șobolanii vii
începând cu introducerea inițială a tijei de titan. Trei șobolani din fiecare grup au fost sacrificați în
Săptămâni 4, 8, 12 și 16 pentru recoltarea femurului cu titan cu pin, pentru analiza histologică.
Scanarea și evaluarea micro-CT O evaluare detaliată calitativă și cantitativă a 3-D a fost efectuată pe
fiecare femur distal folosind un sistem SCANCO microCT (viva CT 40; SCANCO Medical, Zu¨rich,
Elveția) cu dimensiune voxel de 10 mm. În urma achiziției și reconstrucției, datele de imagine au fost
analizate cu software-ul de evaluare MicroCT V6.5-1 pentru a genera izosferfe ale volumului de
interes și pentru a calcula densitatea minerală osoasă (BMD) a oaselor femurale din jurul pinilor de
titan după stabilirea un prag inferior fixat și o excludere superioară pentru a elimina zgomotul
artificial din țesutul moale și pinul de titan [11]. Datele înregistrate imediat după intervenția
chirurgicală au fost utilizate ca bază pentru comparație. Evaluarea histologică și analiza imaginii

După fiecare sacrificare, femurul stâng cu implantare cu pin a fost recoltat pentru procesarea
histologică. Toate probele de femur au fost decalcificate în acid 10% etilen-diaminotetraacetic
(EDTA), apoi încastrate în parafină și secționate longitudinal după retragerea implanturilor de titan.
Secțiunile de histologie cu hematoxilină și eozină (H & E) au fost examinate sub un microscop de
lumină Zeiss. Un sistem computerizat de analiză a imaginii cu software-ul Image-Pro Plus (Media
Cybernetics, Silver Spring, MD, SUA) a fost utilizat pentru a capta microfotografia digitală și pentru a
cuantifica grosimea pseudo-membranelor [11,17]. Cinci măsurători aleatorii de-a lungul interfeței
ososimplant a fiecărei secțiuni de femur H & E au fost înregistrate și medii în funcție de grupurile de
tratament. Pentru a evalua influența particulelor asupra osteoclastogenezei periimplantului, s-a
efectuat colorarea imunohistochimică împotriva catepsinei K, o enzimă exprimată prin osteoclaste
mature, pe secțiunile femurului încorporate în parafină. Pe scurt, secțiunile de parafină au fost
deparafinate în xilen, apoi rehidratate în alcooli gradați și apă. Apoi, s-a aplicat 0,3% peroxid de
hidrogen pentru diminuarea peroxidazei endogene urmată de incubarea cu microunde pentru a
crește antigenii. După blocarea cu ser de capre normală de 1,5% timp de o oră, secțiunile au fost
incubate peste noapte cu anticorp anticatepsin K (diluție 1: 200, Cat ab19027, Abcam. Com) într-o
cameră hidratată la 4 ° C. Anticorp secundar conjugat cu biotină și enzime antibiotice reactivii au fost
aplicați secvențial timp de 30 min între spălări extinse. Culoarea a fost dezvoltată adăugând 3,30 -
diametru.