Facultatea Ştiinţa şi Ingineria Alimentelor

Laborator Igiena

A
APPR
REEC
CIIE
ERRE
EAAG
GRRA
ADDU
ULLU
UII D
DEECCOON
NTTAAM
MIIN
NA RE
AR EM
MIIC
CRRO
OBBIIA
ANNĂ
ĂAA
S
SUUP
PRRA
AFFE
EŢŢEELLO
ORRDDE UC
E LLU CRRU
U

Consideraţii generale
Controlul eficienţei dezinfecţiilor se bazează pe stabilirea prezenţei sau absenţei
unor microorganisme.
Pentru controlul eficienţei dezinfecţiei suprafeţelor se utilizează două procedee de
control bacteriologic, care mai sunt numite şi teste de sanitaţie: testul bacteriilor
coliforme şi testul stafilococilor.
În ultimii ani au apărut numeroase propuneri de teste simplificate şi mai rapide
pentru aprecierea gradului de contaminare a suprafeţelor: Hygicult (Enterobacteriaceae;
Yeast & Fungi; Total Bacterial Count); Hycheck; Petrifilm (E. coli Count Plates; Coliform
Count Plates), Chromocult Coliformen Agar, Envirocheck Rodac, TMT etc. (Sala, 2000).
Hygicult se prezintă sub formă de lamele, din material plastic, acoperite pe o parte
cu mediu de creştere şi închise într-o fiolă. Petrifilmul este o peliculă din material plastic
acoperit cu un mediu de cultură deshidratat şi un agent de gelificare care este solubil în
apă rece. Se poate utiliza pentru determinarea numărului total de microorganisme
aerobe mezofile, a bacteriilor coliforme şi a E. coli din lapte, produse lactate, dar şi de
pe suprafeţe. Petrifilmele pentru determinarea bacteriilor coliforme conţine săruri biliare,
roşu violet, lactoză. Este destinat pentru determinarea numărului total de
microorganisme, a enterobacteriaceelor, drojdiilor şi a mucegaiurilor). Citirea
rezultatelor se face prin compararea cu o scară etalonată.
În ultimii ani au fost realizate mai multe tipuri de aparate pentru detecţia prezenţei
microorganismelor pe suprafeţele controlate. Dintre acestea sunt utilizate mai ales trusa
LIGHTNING (Ehrenfeld, 1997) şi trusa HY – LITE (Merck), care se bazează pe
fenomenul de bioluminescenţă.
Bioluminescenţa permite evaluarea indirectă a cantităţii de ATP în prezenţa unei
enzime substrat specifice şi anume sistemul luciferină – luciferază. Luciferina
reacţionează cu ATP în prezenţa ionilor de Mg2+ şi a luciferazei. În urma reacţiei rezultă
o emisie luminoasă proporţională cu concentraţia în ATP. Metoda este eficientă, dar
extrem de costisitoare, fiind recomandată pentru industria farmaceutică şi unele
sectoare de industrie alimentară.
Pentru aprecierea stării de igienă a suprafeţelor de lucru, ustensilelor, ambalajelor,
etc., se foloseşte examenul microbiologic aplicând tehnici de lucru bazate pe recoltări
făcute prin metoda tamponului, Hygiene SwabCheck şi însămânţări în medii nutritive.

1
Facultatea Ştiinţa şi Ingineria Alimentelor
Laborator Igiena

M
Maatteerriiaallee nneecceessaarree
Tampon de vată
Tamponul de vată se pregăteşte înfăşurând o bucată de vată pe o lungime de 2
cm, la capătul unei tije metalice cu lungimea de 20 – 25 cm ca în figură.

Tampon pentru
recoltare
Suprafaţa
delimitată de
şablon (săgeţile
indică direcţia de
ştergere)

Tija se poate confecţiona din sârmă, lemn şi material plastic. Tamponul se

sterilizează într-o eprubetă.
Şabloane
Se confecţionează din tablă cu partea decupată sub formă de pătrat de cu latura
de 5 cm. Şabloanele se sterilizează împachetate în hârtie, sau în anumite situaţii când
se fac recoltări de multe probe şi nu se dispune de multe şabloane, acestea pot fi
refolosite în urma unei sterilizări efectuate atent direct la flacără.
Medii de cultură
Ca medii de cultură se folosesc PCA (Plate Count Agar) pentru cultivarea
bacteriilor şi MEA (Malt Extract Agar) pentru drojdii şi mucegaiuri.
M
Moodduull ddee lluuccrruu
Se umezeşte tamponul de vată în lichid de umectare steril, îndepărtând excesul
prin presarea tamponului pe peretele eprubetei. Apoi după ce şablonul a fost aşezat pe
suprafaţa luată în analiză, se şterge cu tamponul suprafaţa delimitată de şablon atât pe
direcţie longitudinală cât şi transversală.
În acelaşi timp tamponul se răsuceşte astfel ca recoltarea să se facă pe toate
feţele acestuia. După recoltarea probei, se introduce tamponul în ser fiziologic şi se
agită pentru a se favoriza trecerea celulelor microbiene în lichid.
Apoi se pot face inoculări, prin metoda încorporării microorganismelor în medii
nutritive. După o termostatare corespunzătoare, se numără coloniile dezvoltate în cutiile
Petri şi se stabileşte numărul de microorganisme pe 1 cm2 suprafaţa luată în analiză.
Rezultatul obţinut se interpretează în raport cu normele în vigoare. O suprafaţă
bine spălată şi dezinfectată în condiţiile unei fabrici nu trebuie să prezinte mai mult de 1
microorganism/cm2.

2
Facultatea Ştiinţa şi Ingineria Alimentelor
Laborator Igiena

Teste de sanitaţie - Hygiene SwabCheck

Sunt compuse din beţişor de recoltare si tub
cu mediu special cu indicator de culoare, totul in
ambalaj individual steril. După recoltare de pe
suprafaţa de cercetat, beţişorul se introduce in tub
si se termostatează după prescripţia fiecăruia (24-
48 ore).
Chiar si o singura bacterie este suficienta
pentru a provoca schimbarea culorii mediului (asta
înseamnă ca SwabCheck-urile sunt aproape de
1000 de ori mai sensibile decât metoda
convenţionala
ATP).
Sunt uşor de utilizat. Testele arată o evidenta
schimbare de culoare de la roşu la galben. Timpul scurs
pentru aceasta schimbare este o indicaţie a nivelului de
contaminare.
Aceasta metodă trebuie utilizata adiţional.
Testul rapid de igiena este un test rapid care va
detecta contaminarea grosiera cu bacterii si fungi a
suprafeţelor de lucru, echipamentelor si a altor locuri de
unde se iau probe.
Similar exista teste specifice pentru Listeria, E. coli, Număr Total Microorganisme,
Drojdii si Mucegaiuri. Se incubează si acestea dar timpul este mai scurt decât
determinarea cantitativa clasica, informaţia se poate percepe mai repede decât 24-48
ore (timp prevăzut pentru fiecare tip de test).

3
Facultatea Ştiinţa şi Ingineria Alimentelor
Laborator Igiena

ANEXA

• Rezultatele unei operaţii corecte de spălare şi dezinfecţie a unui echipament

• Rezultatele unei operaţii incorecte de spălare şi dezinfecţie a unui echipament