Sisteme multifunctionale de

livrare a somniferelor
GEL CU N A N OTU B U R I
CON TIN A N D Z A LEP LON

Ciupei Monica Iulia

 -documentarea din literatura ştiinţifică
în legătură cu:
Obiectiv
- noi aspecte legate de formele farmaceutice
utilizate în practica farmaceutică;
- noi forme farmaceutice aflate în faza de
studiu sau de dezvoltare
 Zaleplon – tratamentul insomniei
Dezavantaje la administrarea zaleplonului:
- timp de injumatatire scurt
- efect de mentinere a starii de somn redus
- biodisponibilitate redusa
studiu: sistem de gel intranazal folosind nanotuburi
cu perete unic ca purtatori ai s.a.
Avantaje:
• efect neuroprotector al nanotuburilor
+ cresterea biodisponibilitatii zaleplonului in trecerea barierei
hemato-encefalice
-> cresterea timpului de actiune si a efectului terapeutic
/
• gelul pe baza de carbomer
➢ remanenta in cavitatea nazala – cresterea absorbtiei
➢ responsivitatea la ionii din mucoasa nazala previn
obstructia nazala prin interferarea cu respiratia
pacientului dupa adormire
Asadar, acest sistem creste eficienta tratamentului
insomniei cu zaleplon prelungind durata de actiune
a medicamentului
✓ Mod eficient si sigur de
a facilita patrunderea substantei la nivel SNC
Ce sunt nanotuburile cu un singur
perete:
oSWCNT ( Single-Walled Carbon NanoTube ):
structuri formate doar din atomi de carbon, vizibile la
microscop electronic), o singura foaie grafitica infasurata pe
sine.
oCorpul nanotubului este format doar din hexagoane, în
timp ce structurile de închidere sunt formate din
hexagoane si pentagoane.
oDiametrul unui nanotub cu un singur perete este între
minim 0,4 nm si maxim 6 nm.
oRaportul foarte mare intre lungime si diametru (in ordinea
104 ) le permite sa fie considerate ca fiind nanostructuri
unidimensionale si confera proprietati specifice acestor
molecule.
Zaleplon ca substanta medicamentoasa
zaleplon - medicament non-benzodiazepinic
DAR:
tipic
Timp de injumatatire redus: comparativ cu alte
hipnotice, zaleplon este mai putin eficient in mentinerea
starii de somn pe timpul noptii
Medicament liposolubil: efect de prim pasaj accentuat,
utilizare orala redusa

Se leaga specific de subunitatile α-1, β-2 ale

Asadar, sunt necesare metode pentru
receptorului tip A din sistemul acidului γ-amino
imbunatatirea caii de administrare a
butiric (GABA), subunitatile γ-2 –> efecte
zaleplonului si cresterea timpului de
secundare reduse (sedare redusa, somnolenta
injumatatire si a eficientei sale in tratamentul
reziduala diminuata, risc de dependenta
insomniei
scazut)
Avantaje nanotuburi
Au caracteristici modificabile
Capacitate mare de incarcare cu substante medicamentoase
Stabilitate chimica mare
Capabili sa transporte simultan substante hidrofile si hidrofobe
Trec bariera hemato-encefalica datorita structurii de ac
Sigure dpdv. biologic
Poseda efect neuroprotector
Avantaje cale de administrare
intra-nazala
Mucoasa nazala: suprafata mare de absorbtie, bogat vascularizata-> substantele se absorb rapid si evita
primul pasaj gastro-intestinal si hepatic

Cale de administrare studiata pentru administrarea medicamentelor active pe SNC:

Formulare de gel: remanenta crescuta, scade difuzia in nazo-faringe si clearance-ul muco-ciliar

! Pentru a nu interfera cu efectul de adormire dorit, se modifica gelul pentru a scadea remanenta in
cavitatea nazala -> gel pe baza de carbomer ("smart gel"): se lichefiaza in timp scurt sub actiunea diversilor
ioni din secretiile nazale: nu ingreuneaza respiratia dupa adormire, fara a scadea eficacitatea administrarii
Diagrama schematica a
sistemului de transport
PEG-SWCNT-Z pentru
tratamentul insomniei
 SWCNT (nanotuburi cu un singur perete)

DSPE-PEG5000-NH2 (PEG)

Zaleplon

Carbomer 940
Materiale Kit de numarare a celulelor (CCK-8)

DL-4-Clorofenilalanina (PCPA)

Kit testare soareci GABA ELISA

Kituri de detectie a serotoninei (5-HT) si dopaminei (DA) la soareci

Celule si animale utilizate

Celule diferentiate tip PC12 in mediu Roswell Park Memorial Institute

(RPMI) 1640 continand 10% ser fetal bovin, 1% penicillina/streptomicina,
la temperaturi sub 37 ◦C, cu o concentratie a CO2 de 5% .

Soareci experimentali de gen masculin, cu greutate de 20 ± 1 g

Soarecii au fost hraniti in mediu stabil, la temperaturi de 22 ± 2 ◦ C si

umiditate de 50 ± 5%, cu acces liber la mancare si apa, sub lumina:
intuneric 12:12 ore.
PC12
PC12 este o linie celulara derivata dintr-un feocromocitom al maduvei suprarenale de sobolan
- de origine embrionara, din creasta neuronală care are un amestec de celule neuroblastice
si celule eozinofile.

✓linia celulara PC12 a fost utilizata pentru a obține mai multe informatii despre bolile creierului
✓in cercetarea hipoxiei, unde hipoxia acuta induce exocitoza, iar hipoxia prelungita poate induce
exocitoza excesiva.
✓celulele PC12 au fost utilizate pentru a gasi care fragmente de proteine prionice au cauzat
disfuncții neuronale
✓indicatori ai actiunii cailor dopaminei si serotoninei
+ modificari ale expresiei la tratamentul cu melatonină
Metode
Pasul 1: obtinerea PEG-SWCNT

1. amestecare DSPE-PEG5000-NH2 si SWCNT in raport de masa 5:1 (recipient de sticla) + apa distilata, agitare
pana la dizolvarea PEG-ului.
2. la ultrasunete 2 h la temp. camerei, cu schimbarea apei din aparat pentru evitarea supraincalzirii
3. amestecul este centrifugat la 24,000 g la temperatura camerei timp de 6 h
4. 1 mL de supernatant transferat in tub de ultrafiltrare de 4 mL + 3 mL apa distilata in cuva aparatului, apoi
centrifugat la 4,000 g timp de 10 min la temp. camerei
5. apa din cuva este completata la 4 mL, se centrifugheaza din nou

6. completarea apei si centrifugarea se repeta de 5-6 ori pentru a spala excesul de PEG
7. dupa ultima spalare, se adauga apa pana la concentratie de aproximativ 50 mg/L
Metode
Pasul 2: obtinerea PEG-SWCNTs-Z

1. 1 mg zaleplon si 1 mL dispersie PEG-SWCNT amestecate la 4 ◦C, la of 500 r/min timp de 24

h.
2. amestecul refrigerat la 4 ◦C pentru 24 h
3. centrifugare la 10,000 rpm timp de 3 min pentru indepartarea precipitatului
4. supernatantul transferat in tub de ultrafiltare cu greutate de 10 kDa
5. +apa distilata, centrifugare la 4 ◦C timp de 10 minute
6. adaugare apa in cuva pana la 4 mL, spalare de 5 ori pentru indepartarea zaleplonului liber,
apoi completare la volum de 1 ml.
Pasi ulteriori prepararii sistemului PEG-
nanotuburi-zaleplon
oDeterminarea curbei standard a solutiei apoase de zaleplon
oEvaluarea eficientei incarcarii cu zaleplon a sistemului (pe baza
absorbantei prin spectrofotometrie UV-VIS)
oDeterminarea profilului de cedare a medicamentului
oTest de citotoxicitate (PC12)
Prepararea gelului ion-respondent
intranazal

1. 50 mg Carbomer 940 +10 mL apa distilata – 24 ore

2. + 2% glicerina, amestecare
3. preparare solutie 0.1%–0.5% carbomer 940, adaugare solutie alcalina -> gel
4. gelurile de concentratii diferite, incubate cu solutia preparata anterior, la
37 ◦ C, pentru determinarea concentratiei potrivite de gel, pe baza timpului de
lichefiere
Administrare experimentala unica in vivo

4 grupuri de soareci:

1+2: grup control: nicio administrare sau apa distilata

3. 50 μL gel PEG-SWCNT-Z (continand 1.5 μg zaleplon) in cavitatea nazala

4. solutie obtinuta prin dizolvare cp cu zaleplon cu denumire comerciala continand 13.5 μg zaleplon, prin gavaj

• La o ora dupa administrare, recoltare probe si testare continut ser cu kitul Elisa pentru detectarea GABA,
5-HT si DA

+spectroscopie Raman pentru detectarea nanotuburilor la nivelul SNC

Experiment 7 zile - administrare la
soareci
1. creare de model de soareci cu insomnie prin administrare de suspensie de PCPA (4-Cloro-DL-
Fenilalanina)
2-7: soareci cu insomnie indusa
2. administrare solutii 1. grup control – nu se
administreaza nimic
2. model cu PCPA 3. gel cu PEG-SWCNT-Z

3. recoltare probe si testare continut ser cu

kitul Elisa pentru detectarea GABA, 5-HT si DA 6. PEG-SWCNTs-
4. gel cu zaleplon 5. gel cu PEG-SWCNT
Z solutie apoasa
4. analiza in camp deschis
(inregistrare miscari pe campuri:
7.
distanta parcursa, timp de pauza, viteza medie medicament comercial cu
zaleplon

si parcurgerea unor cadrane in timp dat)

 Discutii
✓Solutia de nanotuburi cu PEG a fost dispersata uniform vs. cea fara PEG
✓Dispersia nanotuburilor in solutie a ramas nemodificata si dupa incarcarea cu zaleplon
✓Spectrofotometrie UV-Vis: confirmare pe baza absorbantei a incarcarii cu zaleplon, in
proportie de 40%
✓in vitro, solutia de PEG-SWCNTs-Z a cedat aproape toata cantitatea de zaleplon in
aprox. 4 h, cu concentratie constanta dupa 4 ore -> timp de actiune prelungit, se
evita somnolenta reziduala a doua zi
✓Teste pe celulele PC12: 80% din celule au ramas viabile chiar si la concentratii mari ->
biocompatibilitate crescuta
✓Teste in vivo: concentratii crescute de GABA si scazute de serotonina si dopamina chiar si
dupa o singura administrare sau la concentratii scazute
Concluzii
Zaleplon este transportat eficient la nivel SNC, iar timpul de actiune prelungit prin
incarcare pe nanotun de carbon (SWCNT).

SWCNT au efect neuroprotector si s-au dovedit eficiente in tratamentul insomniei

Smart gel-ul creste remanenta substantei medicamentoase in cavitatatea nazala (10

minute), fara a afecta respiratia pacientului dupa adormire .

Sistemul de transport s-a dovedit sigur si eficient pentru a transporta medicamente la

nivel SNC.
 Bibliografie

https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S138589472104211X
https://ro.warbletoncouncil.org/nanotubos-de-carbono-13717

Va multumesc!