Année 2022 - 2023

Compte - Rendu Travaux

Pratiques Microbiologie
Licence Science de la vie Biologie Génie Biologique

Encadré par : Réalisé par :

Elie Dufour KOUAO FIEDIN ANGE ALIDA
Groupe TP BGB 2
 SOMMAIRE

I) Exploitation de la courbe de croissance

II) Dénombrement par cascade de dilution

III) Dénombrement sur cellules de malassez

IV) Exploitation des résultats métaboliques

1 - Coloration Gram

2 - Milieu BCP:

3 - Hajna-Kligler

V) conclusion
I) Exploitation de la courbe de croissance
Afin d'étudier la croissance des micro-organismes , une
courbe de croissance a été réalisée à partir d’une densité
optique à 600 nm en fonction du temps , toutes les 30
minutes . La croissance est constituée de différentes
phases, dont la phase de latence , la phase exponentielle et
la phase stationnaire.
la phase exponentielles permet de déterminer deux
paramètres:
⦁ le temps de génération :D2 = 2D1 soit, en conversion
logarithmique : ln D2 = ln2D1
⦁ µmax = (ln2D1 - lnD1) / G soit µmax = (ln2 + lnD1 -
lnD1) / G qui se simplifie donc en µmax = ln2 / G
⦁ G = ln2 / µexpo
- Taux de croissance : µ max = (ln D 2 - lnD 1 ) / (t 2
-t1)
Phase stationnaire : pendant cette phase la biomasse
est stable. deux explications sont envisageables :
⦁ les bactéries ne se divisent plus ;
⦁ il y a autant de bactéries qui se divisent que de
bactéries qui meurent.
Le temps de génération en minute est le temps de
doublement de la population bactérienne, c’est
l’intervalle de temps compris entre 2 divisions
bactériennes en phase exponentielle.
G=
Taux de croissance :
Tableau de valeur de DO et des dilutions
On sait que DO 600 nm = 5* 10exp 8
alors :
⦁ tube 1 : 200µl bactéries + 800µl LB/ml
⦁ tube 2 :10 µl bactéries + 990µl LB/ml
⦁ tube 3 : 10 µl bactéries + 990µl LB/ml
⦁ tube 4 : 100 µl bactéries + 900 µl LB/ml
⦁ tube 5 : 100 µl bactéries + 900 µl LB/ml
Courbe de croissance de bactéries E.coli dans
un milieu nutritif LB
Phase de latence : elle est facultative. quand elle existe,
elle correspond à une phase d’adaptation des bactéries
au milieu. les bactéries ne se divisent pas (ou trop peu
pour mesurer la variation ) Elle est absente quand
l'inoculum est jeune et que le milieu est le même que
le précédent. Cette phase correspond au temps
nécessaire aux bactéries pour synthétiser les enzymes
nécessaires pour dégrader le milieu et pour ajuster
certains paramètres comme le ph.
phase exponentielle de croissance : pendant cette
phase les bactéries se multiplient à leur rythme le plus
élevé. le ln de N est directement proportionnel au
temps. C’est la phase physiologique, on a une
production d’antibiotique et de toxine. la
représentation est une droite d'équation :
lnN= lnN zéro + µ(t-t zero)
Les 3 derniers tubes ont été utilisés pour l'étalement
des bactéries dans les boîtes de LB agar.
II) Dénombrement par cascade de dilution
A partir d’une concentration de bouillon pur ( 5*
10exp 8) versé dans 50 ml de milieu LB, on effectue
une dilution en cascade dans le but d’avoir une
colonie de 1000, 100 et 10 bactéries.
Les 3 derniers tubes ont été utilisés pour étaler dans
des boîtes de LB les bactéries dans le but d’avoir
respectivement 1000 , 100 et 10 colonies de
bactéries.
résultat
Dénombrement sur cellules de Malassez
 III) Dénombrement sur cellules de malassez

Tableau dénombrement cellules de Malassez

Moyenne par carré : 16 bacteries

l'écart type : 4,7
concentrations des batteries
soit N1 le nombres des bactéries présentent dans les
IV) Exploitation des résultats métaboliques 10 carré absorbés dans les cellules de Malassez
N1 = 20+14+10+23+16+8+19+14+21+25= 208
1 - Coloration Gram C1= N1/Vdep=208/0,1= 2080 UFC/mL
C0=N1/Dx= 2080/100= 20,8 UfC/g
l’observation au microscope suite à la coloration Gram
a permis de voir des cellules rosées plutôt allongées.
Nous pouvons donc en déduire que c’est un bacille
Gram-.le test de catalase ayant fait des bulles nous
permet de dire qu’elle est catalase + et donc qu’elle
possède une catalase lui permettant de dégrader le
peroxyde d’hydrogène.

Tableau des caractéristiques microscopique d’E.coli

2 - Milieu BCP:

La gélose bcp est un milieu de culture non sélectif,

lactose. après épuisement sur un milieu BCP, nous a
permet d’observer une colonie de couleur jaunâtre qui
est due a la production de composés acides lors de la
fermentation du lactose par les bactéries. Elles sont
dites lactose+

3 - Hajna-Kligler

le culo incliné montre une surface avec un milieu

devenu jaunâtre, ce qui signifie que le lactose est
fermenté. Le culot vire au jaune , il est possible
d’observer des bulles ou une poche gazeuse qui se
décolle du milieu lors de la production de gaz donc du
glucose.il n’y a pas de production de H2S car il n’y a
pas eu de noircissement du milieu entre le culot et la
pente.

V) conclusion

Au cours de ce TP , la mesure de la turbidité en fonction du temps a permis d’observer une courbe de croissance de
la bactérie E.coli qui se subdivise en une phase de latence, une phase exponentielle et une phase stationnaire. la
dilution en cascade a permit de compter les bactéries observer sur les 3 boites de LB.la coloration Gram a montré
que la bactérie étudié étais Escherichia coli, une lactose +. L'énergie qu’elle utilise provient des substrats et de la
voie fermentaire du lactose ainsi elle produit du gaz et du glucose