Extracția ADN-ului

Materiale şi utilaje: sare (NaCl), apa calda, detergent lichid de vase, mojar, scobitori, hîrtie de filtru, vase
de sticlă,eprubetă, pâlnie, alcool (etilic sau izopropilic), cuțit, material vegetal (banane, kiwi, ceapă. ș.a.)
Explicaţii: ADN-ul sau acidul dezoxiribonucleic se găsește în toate celulele tuturor ființelor vii. La
celulele eucariote putem gasi ADN nu doar în nucleu dar și în mitocondrii și plastide. Deci dacă in fiecare
celulă este o cantitate mare de ADN este posibil de a extrage acestă substanță. Dacă ai scoate tot ADN-ul dintr-
un țesut sau organ (fruct, bulb) de mărime medie, ai putea vedea și chiar atinge ADN-ul.
Pentru a extrage ADN-ul este nevoie de următoarele etape:
1. Mărunțirea (triturarea) pentru a sparge pereții celulari și a expune maretialul din care se extrage la
soluția de lucru ( soluția buffer). Astfel triturarea dar și temperatura ridicată distruge pereții.
2. Extracția. cu ajutorul detergentului se emulsionează și astfel se distrug membranele celulare și
nucleare pentru eliberarea ADN-ului.
4. Filtrarea. ADN-ul se dizolvă în soluția buffer și fiind filtrată din această soluție sunt eliminate
resturile ne dizolvate.
3. Sedimentarea. ADN-ul spre deosebire de alte substanțe organice nu se dizolvă în alcool. Pentru a
spori eficiența procesului se folosește alcool adus la o temperatură mai mică de 0oC.

Mersul lucrării:
1. Decojiți bananele, kiwi, sau ceapa, folosind cuțitul, tăiați în bucăți mici materialul vegetal cu masa de circa
100g.
2. Omogenizați materialul vegetal cu ajutorul mojarului cu pistil, pentru a ușura omogenizarea adăugați o
1/2linguriță de sare și acoperiți ușor amestecul cu apă caldă.  Cristalele de sare ușurează mărunțirea, iar
soluția concentrată de sarea mai târziu va cauza aglomerarea fibrelor de ADN.
3. Se filtrează amestecul obținut prin hârtie de filtru.
4. La soluția filtrată se adăugați aproximativ 1 linguriță de detergent lichid și se amestecă ușor fară a crea bule
atunci când amestecați. Săpunul ajută la descompunerea membranelor celulare pentru a elibera ADN-ul. Se
transferă 3 - 4 ml de amestec într-o eprubetă.
5. Se toarnă cu grijă alcool foarte rece pe peretele eprubetei în care este amestecul, astfel ca la suprafață să se
formeze un strat de alcool de 2-3 cm. Așteptați 5 minute de oarece ADN-ului nu se dizolvă în alcool rece,
se observă formarea unor fibre gelatinoase în stratul superior al amestecului.
6. Cu ajutorul unei scobitori putem extrage ADN-ul care plutește la suprafață. 

Concluzii: Faceţi concluziile de rigoare răspunzînd la întrebări:

1. In conditiile laboratorului scolar cel mai efficient si mai usor
2. Care celule din corpul omului nu conțin ADN și de ce?
3. Documentațivă și explicați mecanismul de acțiune a sării și detergentului din soluția buffer.
Raspunsuri
1.In conditiile laboratorului scolar se prefer de folosit fructele in locul altor parti ale plantei ca de
exemplu :frunze si fructe deoarece ele tind sa fie mai usor de prosesat prin maruntire ,astfel
facilitandu-se procesul extragerii AND-ului.

2.Celulele din corpul uman care nu contin ADNsunt celulele cheratinizate,mai exact cela ale
parului si unghiilor precum si unele cellule ale pielii.De asemenea ,eritrocitecele sau celulele rosii ale
sangelui sunt lipsite de AND .Intrucat acestea nu au nucleul sau mitocondrii .Trombocitele din sangelui nu au
AND.

3.Solutiile Buffer sunt solutii in compozitia carora se pot gasi concentratii stabile de ioni de H+.
Obtinerea unui astfel de amestec se face prin combinarea urmatoarelor variante de reagenti.
Acid slab + Sare din acelasi rest de acid ;
Baza slaba + sare dintr-un acid tare;
Sare acida + Sare din acid de tarie medie;
In cazul nostrum s-a folosit sare de bucatarie (NaCl),adica o sare dintr-un acid tare (HCl)+ o baza
slaba ,reprenzetata de detergentul de vase.Solutia Buffer rezultata creeaza un mediu special pentru posibilele
reactii ulterioare .Acest mediu faciliteaza reactiile pe care le urmarim ,mai exact cele de obtinerea AND-ului.