Extracia/Izolarea ADN-ului din tomate1

Toate produsele de origine vegetal i animal conin o anumit cantitate de ADN (acid
deoxiribonucleic). Experimentul de extragere a ADN-ului din celulele vegetale presupune
ruperea membranei celulelor vegetale (tomate n acest caz) i izolarea ADN-ului sub form
vizibil cu ochiul liber (Figura 1)1b. ADN-ul precipit din soluie sub forma de fire albe, lungi.
Precipitatul conine mii, sau chiar milioane, de uniti ADN dublu-helix, mpachetate mpreun.
Imaginea unei uniti DNA-dublu helix individuale poate fi observat doar cu ajutorul
microscoapelor specializate. ''Imaginea'' care a dus la descoperirea structurii de tip dublu-helix a
ADN-ului, de ctre Watson and Crick n anul 1953, este difractograma de raze X obinut de
Rosalind Franklin utiliznd fibre de ADN similare cu cele pe care le vei izola astzi.

Extragerea ADN-ului presupune parcurgerea urmtoarelor etape:

1. distrugerea peretelui celular - aceast etap este realizat mecanic prin mojarare i
sonicare.
2. distrugerea memnranei celulare i nucleare - este realizat cu ajutorul unei soluii apoase
de extracie care conine detergent (SDS- dodecil sulfat de sodiu), citrat de sodiu si
clorur de sodiu.
3. Separarea soluiei apoase de ADN de materialul insolubil prin filtrare.
4. Precipitarea ADN-ului, sub form de fire, cu etanol

Mod de lucru
Se decupeaz un sfert de roie n buci foarte mici i se adaug ntr-un ntr-un mojar. Se adaug
10 mL de soluie tampon de extracie2 i se mojareaz timp de 1-2 min. Se transvazeaz
coninutul ntr-un tub falcon i se sonicheaz timp de 3 minute. Se fileteaz iniial pe filtru cre
sau la vid i apoi printr-un filtru de 0.45 m. ntr-o eprubet se adaug 0.5 mL filtrat i 0.5 mL
ap la care se adaug cu grij 4 mL etanol 95 % rcit pe baia de ghea. Se observ formarea a
dou straturi. Etanolul trebuie s rmn n partea superioar. La interfaa dintre cele dou
soluii se pot observa un precipitat alb, sub form de fire (ADN-ul extras). Se agit eprubeta
pentru a precipita o cantitate mai mare de ADN. Precipitatul se colecteaz cu ajutorul unei
spatule i se introduce ntr-un tub eppendorf.
Obs. ADN-ul astfel izolat va fi utilizat n etapa urmtoare, de hidroliz a ADN, i se pstreaz la
- 20 C.

[1]

[2]

(a) Anumukonda, L. N.; Young, A.; Lynn, D. G.; Buckley, R.; Warrayat, A.; Graves, C. L.; Bean, H. D.;
Hud N. V. J. Chem. Educ. 2011, 88, 16981701; (b) http://www.simplyscience.ch/jeunes-experimentenature-corpshumaine/articles/extraction-de-l-adn-de-tomate.html
Prepararea soluiei tampon de extracie: se dizolv 4,4 g clorur de sodiu i 22 g citrat de sodiu n 500 mL
ap. Se adaug 50 mL soluie SDS 15 %.