CITOLOGIE

ANIMAL

Curs 1: CELULA ANIMAL

ORIGINEA I EVOLUIA CELULELOR Primele organisme vii au aprut n urm cu 3,5-3,8 miliarde de ani (aproximativ dup 1 miliard de ani de la formarea Pmntului). n prezent este unanim acceptat ideea c unitatea morfologic i funcional a lumii vii este celula. Dar cum a aprut prima celul i cum se poate explica diversitatea celulelor actuale, evoluate ? Se presupune c toate tipurile de celule ale organismelor vii au evoluat dintr-un strmo comun cu organizare precelular. Etapa precelular Se consider c atmosfera Pmntului primitiv a oferit condiii pentru formarea spontan a moleculelor organice (aminoacizi, glucide simple, uree, acizi grai i alte molecule cu importan biologic), ce au reprezentat materialul de baz pentru formarea organismelor vii. Etapa urmtoare a evoluiei a constituit-o formarea macromoleculelor, prin asamblarea spontan a unitilor de baz reprezentate de aminoacizi, nucleotide, glucide. Aminoacizi Lanuri polipeptidice (PROTEINE) Nucleotide Lanuri polinucleotidice (ACIZI NUCLEICI)

Acidul ribonucleic (ARN) a constituit macromolecula esenial pentru formarea primelor celule. Acest stadiu al evoluiei celulare a fost numit lumea ARN (concept elaborat de Walter Gilbert n 1986). Originea vieii 1920 Aleksander Oparin i John Haldane 1953 Stanley Miller i Harold Urey: sinteza de compui organici din precursori anorganici CELULA PRIMITIV Prin asamblarea spontan a lipidelor din mediul apos s-au format sisteme membranare capabil s delimiteze ARN-ul cu proprieti de autoreplicare i o serie de molecule asociate, rezultnd celula primitiv. Pe msura evoluiei, funciile ndeplinite de ARN au fost preluate de ADN (informaia genetic este mai bine stocat i stabilizat n moleculele de ADN dublu catenare). Ulterior proteinele au devenit catalizatorii cei mai importani, iar ARN-ul funcioneaz ca element de legtur ntre ADN i proteine ADN ARN Proteine CELULA ACTUAL n prezent este acceptat ideea ca celulele actuale au evoluat dintr-o celul ancestral comun numit PROGENOT. n cursul evoluiei s-au difereniat trei linii celulare distincte: ARCHAEBACTERII, EUBACTERII i EUCARIOTE. Aceste trei linii celulare au fost ncadrate n dou tipuri principale de celule: Procariote (PK) pro=nainte, karyon=miez, nucleu; limba greac Eucariote (EK) eu=adevrat, karyon=miez, smbure; limba greac Celula ancestral (progenot) i diferenierea celor trei linii

Celula ancestral (progenot) i diferenierea celor trei linii celulare: archaebacterii, eubacterii i eucariote.

Diferenierea celor trei linii celulare: archaebacterii, eubacterii i eucariote. Arhaebacteriiile i eucariotele sunt grupuri nrudite filogenetic. ntre celulele procariote i eucariote exist deosebiri eseniale n ceea ce privete organizarea lor, dar exist i o serie de asemnri care atest evoluia lor din aceeai celul ancestral.

Toate cele trei linii celulare au avut un strmo comun, i prin urmare celulele procariote nu sunt strmoi ai celulelor eucariote. PROCARIOTELE sunt cele mai simple forme celulare de organizare a vieii. Din aceast categorie fac parte archaebacteriile i eubacteriile.

Procariotele nu au nucleu delimitat de sisteme membranare, ci un corp nucleoid reprezentat de ADN, neconjugat cu proteine bazice i ataat de membrana celular. Citoplasma este lipsit de organite delimitate de endomembrane, dar prezint ribozomi liberi. Membrana plasmatic este dublat la exterior de o membran protectoare. Principalele caracteristici ale procariotelor sunt capacitatea de a prolifera rapid i de a se adapta relativ uor la variaiile condiiilor de mediu. PROCARIOTE: Archaebacteriile sunt reprezentate de bacterii ce triesc n condiii de mediu extreme (de ex. n ape termale, zona arctic). Din acest grup fac parte bacteriile sulfuroase, bacteriile halofile i bacteriile metanogene. Condiiile de mediu extreme sunt neobinuite n zilele noastre, dar ele au fost specifice momentului apariiei vieii pe Pmnt. Un exemplu de archaebacterii l reprezint bacteriile termoacidofile care triesc n izvoare sulfuroase calde cu temperaturi de peste 80oC i cu valori ale pH-ului extrem de acide (<2). Eubacteriile (bacteriile adevrate) sunt reprezentate de forme comune ale bacteriilor actuale. Ele sunt foarte numeroase i triesc ntr-o mare diversitate de medii: ap, aer, sol, alte organisme (de exemplu bacteriile patogene). Bacteriile au fost mprite n 2 grupe n funcie de structura peretelui celular i coloraia Gram Ca model de structur pentru celulele procariote poate fi prezentat Escherichia coli, bacterie ntlnit n intestinul uman. Escherichia coli este o celul n form de bastona cu o lungime de 2 m i diametrul de 1 m. Asemntor majoritii procariotelor, E.coli este nconjurat de un perete celular rigid alctuit din polizaharide i peptide. Sub peretele celular se afl membrana plasmatic reprezentat de un bistrat lipidic n care sunt integrate proteinele membranare. Citoplasma conine genomul celular (ADN circular condensat sub form de nucleoid) ribozomi i diferite incluzii. Procariotele pot avea ADN extracromozomal (elemente denumite plasmide)

EUCARIOTELE au o organizare celular complex ntruct conin un nucleu adevrat, numeroase organite citoplasmatice i citoschelet. Eucariotele au aprut n urm cu 2 miliarde de ani. Celulele eucariote sunt caracteristice plantelor i animalelor. In cadrul eucariotelor sunt incluse i o serie de organisme unicelulare: alge, protozoare, ciuperci, drojdii. Organizarea structural a celulei EK Celulele eucariote sunt nconjurate de membrana plasmatic. Spre deosebire de procariote, celulele eucariote prezint numeroase membrane intracelulare ce formeaz structuri specializate denumite organite celulare: nucleu, mitocondrii, aparat Golgi, reticul endoplasmic, lizosomi, peroxizomi, cloroplaste (la plante). Cel mai mare organit al celulelor eucariote este nucleul, cu un diametru de aproximativ 5 m. Compartimentalizarea mediului intracelular prin endomembrane permite celulelor eucariote s funcioneze mult mai eficient comparativ cu procariotele. Astfel, mitocondriile i cloroplastele joac un rol fundamental n cadrul metabolismului energetic al celulei. Dac se ndeprteaz membrana plasmatic i organitele, din celul rmne citosolul. Citosolul are consistena unui gel i reprezint locul de desfurare a numeroase reacii metabolice. Asemnri privind organizarea structural a PK i EK n ciuda diferenelor marcante privind organizarea structural, toate celulele, att cele PK ct i cele EK prezint o serie de asemnri. Membrana plasmatic este o structur comun, ce ndeplinete roluri similare pentru ambele tipuri de celule. Membrana plasmatic: - separ mediul intern intracelular de mediul extracelular, - regleaz schimburile de substane (molecule i ioni) ale celulei cu mediul extracelular (permebilitate selectiv) - menine potenialul electric al celulei. Materialul genetic (ereditar). Toate celulele, att cele PK ct si cele EK, posed ADN ca material ereditar, i diferite tipuri de ARN utilizate pentru sinteza proteinelor. Tabelul 1. Comparaie privind organizarea structural i funcional a celulei procariote i eucariote.

Teoria endosimbiotic Se apreciaz c o serie de organite au rezultat prin asocierea celulelor procariote cu un strmo al eucariotelor. Teoria endosimbiotic este susinut n special de cercetrile asupra mitocondriilor i cloroplastelor. Iniial atmosfera Pmntului era lipsit de oxigen molecular. Etapa evolutiv urmtoare a fost marcat de procesul de fotosintez, ce a permis celulelor s foloseasc energia solar. n acest proces celulele folosesc apa ca donor de electroni i hidrogen pentru transformarea CO2 n molecule organice, iar procesul de fotosintez este nsoit de eliberarea de oxigen molecular. Prin acest mecanism, n urm cu aproximativ 2 miliarde de ani n atmosfera Pmntului s-a produs oxigen molecular din abunden. Dup apariia oxigenului, celulele s-au diversificat, iar o parte din celule au adoptat o cale alternativ de supravieuire bazat pe un metabolism oxidativ. Se presupune c metabolismul oxidativ a furnizat un avantaj acestor celule comparativ cu cele cu metabolism anaerob. Prin asocierea simbiotic dintre o celul anaerob cu o celul aerob, celula anaerob a obinut capacitatea de a susine un metabolism aerob. Aadar, conform acestui mecanism, celulele eucariote au evoluat prin asocierea unui strmo al eucariotelor cu procariote aerobe. n prezent teoria endosimbiotic este unanim acceptat i se apreciaz c mitocondriile provin din bacterii aerobe, iar cloroplastele din bacterii fotosintetizante. Argumente in favoarea teoriei endosimbiotice: Mitocondriile i cloroplastele sunt asemntoare cu bacteriile n ceea ce privete dimensiunea. Mitocondriile i cloroplastele au propriul lor sistem genetic (sunt purttoare de informaie genetic) care este separat de genomul nuclear al celulei. Ribozomii din mitocondrii i cloroplaste i ARN-ul ribozomal sunt strns nrudite cu omologii lor de la bacterii. Trebuie menionat ns c, pe parcursul evoluiei o mare parte din genomul bacteriei a fost ncorporat n genomul nuclear al celulei, astfel nct numai o parte dintre componentele mitocondriilor i cloroplastelor sunt codificate la eucariotele actuale de ADN-ul localizat n mitocondrii, respectiv n cloroplaste. Organismele multicelulare

n cursul evoluiei ulterioare a celulei eucariote s-a realizat specializarea i diversificarea celular, fenomene ce au contribuit la formarea i evoluia organismelor multicelulare. Organismele pluricelulare au evoluat din EK unicelulare cu aproximativ un miliard de ani n urm. O serie de eucariote unicelulare, de exemplu alga verde Volvox, formeaz agregate multicelulare (colonii) care par s reprezinte punctul de tranziie evolutiv de la o singur celul la organismele pluricelulare. Organismele multicelulare primitive sunt formate din dou tipuri de celule ce ndeplinesc funcii diferite. Unele celule sunt mici i mai numeroase i sunt de obicei specializate pentru micare i mor dup un numr limitat de diviziuni celulare. A doua categorie este reprezentat de celule mari ce sunt specializate pentru reproducere i care au o capacitate de proliferare nelimitat. Organismele multicelulare mai evoluate prezint un grad mare de complexitate n ceea ce privete organizarea celular. n cadrul unui organism multicelular unele celule alctuiesc corpul (soma) i se numesc celule somatice, iar altele servesc ca precursori pentru o nou generaie. La plantele superioare i la animale aceste celule prezint particulariti speciale i se numesc celule germinale. Din celulele germinale se vor forma toate tipurile de celule dintr-un organism multicelular. Celulele germinale sunt necesare pentru reproducerea sexuat prin care se realizeaz posibiliti multiple de recombinare a genelor unei specii, proces ce a stat la baza variabilitii organismelor. Celulele procariote i eucariote sunt utilizate ca modele experimentale Studiile de biologie celular i molecular folosesc ca modele experimentale diferite tipuri de celule i organisme. Escherichia coli a fost folosit pentru investigarea unor mecanisme fundamentale, cum sunt: replicarea ADN, expresia genelor i sinteza proteinelor, descifrarea codului genetic. Avantajul acestui model experimental const n simplitatea sa i n uurina cu care aceast bacterie se poate reproduce n laborator. Genomul E.coli are dimensiuni reduse (codific circa 4.000 de proteine, comparativ cu organismul uman care codific aproximativ 100.000 proteine diferite). Saccharomyces cerevisiae. Studiile pe drojdii au permis nelegerea multor procese fundamentale cum sunt: replicarea ADN, transcrierea i procesarea ARN, sortarea proteinelor i reglarea diviziunii celulare.

Dictyostelium discoideum este un EK unicelular simplu. Este o celul deosebit de mobil i a constituit un model pentru studiul mecanismelor moleculare ce controleaz micarea celular. n condiii nefavorabile, n lipsa unei cantiti adecvate de hran, celulele izolate agreg formnd structuri multicelulare. Acest organism pare s fie situat la limita dintre organismele unicelulare i pluricelulare, i a fost utilizat ca model pentru studiile de semnalizare celular i pentru nelegerea interaciunilor intercelulare. Caenorhabditis elegans este un nematod utilizat ca model pentru studiul dezvoltrii i diferenierii celulare; a permis nelegerea mecanismului morii celulare programate (apoptozei). Drosophila melanogaster este, la fel ca i Caenorhabditis elegans, un model pentru studiul dezvoltrii embrionare. Arabidopsis thaliana reprezint principalul model pentru studiile de genetic molecular la plante. Xenopus laevis (amfibian), reprezint un model important pentru investigarea stadiilor timpurii ale dezvoltrii vertebratelor. Oule de Xenopus sunt celule mari i toate stadiile de dezvoltare de la ou la mormoloc pot fi studiate n laborator. oarecele de laborator (Mus musculus). Analizele genetice ce au utilizat ca model experimental oarecele au permis identificarea a numeroase mutaii ce afecteaz dezvoltarea organismului. n prezent se folosesc aa-numiii oareci transgenici la care anumite gene specifice au fost introduse n interiorul liniei germinale, astfel nct efectul acestor gene asupra dezvoltrii sau n legtur cu alte procese poate fi studiat pe animalul ntreg. S-a observat c mutaii ale genelor omoloage la oarece i om determin defecte asemntoare n dezvoltarea ambelor specii. Mutaiile genelor omoloage la oarece i om determin defecte asemntoare n dezvoltarea ambelor specii (n imagine, pata alb este determinat de o mutaie a genei kit ce controleaz dezvoltarea celulelor pigmentare) . Culturile de celule umane (normale i tumorale) au permis nelegerea mecanismelor ce guverneaz diviziunea celular, transformarea celulelor normale n celule canceroase, studiul efectelor unor ageni terapeutici. CONCLUZIE Evoluia organismelor a determinat la nivel celular o diversitate i o specializare celular remarcabil. Totui, termenul de celul este folosit adesea fr a se specifica un anumit tip de celul, deoarece n principiu organizarea structural i funcional a celulelor este similar la toate tipurile de cellule.

Curs 2: N U C L E U L Caracterizare generala: Nucleul este cel mai voluminos organit al celulei EK (6-10% din volumul celulei) Nucleul ndeplinete funcii fundamentale pentru viaa celulei: Stocarea i transmiterea informaiei genetice de la o celul ctre celulele descendente, pe parcursul diviziunilor celulare succesive Controlul activitii celulare (nucleul controleaz funciile metabolice ale celulei prin reglarea expresiei genelor). Nucleus, nuculeus smbure, lb.latin 1831 - Robert Brown (botanist scoian) a efectuat studii de microscopie optic pe esuturi vegetale i a descris n detaliu aceast formaiune intracelular; a enunat conceptul de celule nucleate. Din punct de vedere morfologic nucleii diferitelor tipuri de celule prezint variaii privind mrimea i forma. Forma cea mai comun este cea sferic-elipsoidal. De regul nucleul ocup n celul o poziie central. n cadrul organismului uman exist i celule anucleate (eritrocitele mature, trombocitele). n nucleu exist 3 categorii majore de molecule: ADN, ARN i proteine. Nucleul este un organit dinamic din punct de vedere al organizrii structural Nucleul prezint dou tipuri de organizri structurale distincte, corespunztoare celor dou faze majore ale ciclului celular: n interfaz nucleul este bine individualizat, delimitat de nveliul nuclear, nucleolii sunt vizibili, cromatina este dispersat. n mitoz nucleul sufer modificri complexe: condensarea cromatinei sub form de cromozomi, dezorganizarea nveliului nuclear i dispariia nucleolilor. nveliul nuclear

Este format din dou membrane concentrice: membrana nuclear extern membrana nucler intern ntre cele dou membrane este delimitat spaiul perinuclear. Spaiul perinuclear comunic cu lumenul reticulului endoplasmic (RE). Membrana nuclear extern are ataai ribosomi pe faa sa citoplasmatic (la fel ca i membrana RE). Porul nuclear - Porii nucleari au fost identificai n nveliul nuclear al tuturor celulelor eucariote. Numrul de pori nucleari din nveliul nuclear al celulelor de mamifere variaz ntre 3.000 i 4.000. - Porul nuclear este un edificiu multimolecular cu structur complex, cu masa molecular de 125x106 daltoni, alctuit din 100 de tipuri diferite de proteine numite nucleoporine. Complexul porului nuclear prezint la microscopul electronic aspectul unui poligon cu opt laturi organizat n jurul unui canal central. Dispunerea componentelor n complexul porului nuclear are o simetrie octogonal. Principalele componente din structura porului nuclear sunt: (a) subunitile dispuse sub form de coloane ce formeaz peretele porului, (b) subunitile centrale, fixate de peretele porului, ce delimiteaz deschiderea porului (numite subuniti anulare), (c) subunitile transmembranare ce ancoreaz complexul n membrana nuclear (numite subuniti lumenale sau de ancorare),

(d) subunitile inelare, dispuse circular pe cele dou fee ale complexului, faa nuclear, respectiv faa citosolic, i care sunt plasate la capetele coloanelor. Structura porului nuclear: De pe cele dou fee ale complexului porului nuclear se extind o serie de fibrile, cele dinspre citosol cu dispoziie paralel, iar cele de pe faa nuclear cu dispoziie convergent (ce seamn cu un co).n regiunea central a porului exist o reea fibrilar ce blocheaz difuzia pasiv a macromoleculelor de dimensiuni mari. Transportul prin porii nucleari Fenomenele de transport ce se desfoar la nivelul porilor nucleari sunt de dou tipuri: difuzia pasiv pentru moleculele mici, transportul activ (proces care necesit consum de energie) pentru moleculele de dimensiuni mari. Fiecare por nuclear poate transporta pn la 500 de macromolecule per secund, n ambele sensuri. Modul n care se realizeaz coordonarea acestui trafic bidirecional al macromoleculelor, astfel nct s se evite coliziunile i colmatarea porilor este nc neelucidat. ntruct controleaz traficul moleculelor ntre nucleu i citoplasm, porii nucleari joac un rol fundamental n controlul funciilor celulare. Transportul macromoleculelor este selectiv i se desfoar ntr-un singur sens, dinspre citoplasm spre nucleu (import) sau dinspre nucleu spre citoplasm (export). Importul este mediat de semnale de localizare nuclear (NLS, nuclear localization signal or sequence), n timp ce exportul este mediat de semnale nucleare de export (NES, nuclear export signal). Secvenele de aminoacizi ce funcioneaz ca semnale de localizare nuclear formeaz bucle sau aglomerri pe suprafaa proteinei care are ca destinaie nucleul (pentru a fi accesibile interaciunii cu receptorii nucleari specifici). Secvena de aminoacizi ce determin localizarea nuclear nu este identic pentru toate proteinele nucleare (nu exist o secven unic). Primul semnal de localizare nuclear descifrat a fost cel al antigenului T al virusului SV40 (protein viral necesar pentru replicarea ADN-ului viral n nucleul celulei infectate) i const ntr-o secven de aminoacizi bogat n Lys, n urmtoarea succesiune: Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val.

Lamina nuclear Lamina nuclear este o reea de natur proteic cu aspect fibros situat sub membrana nuclear intern, ce formeaz suportul structural al nucleului (menine forma i d stabilitate nveliului nuclear). Ataarea laminei de nveliul nuclear se realizeaz prin intermediul unor proteine integrale din membrana nuclear intern i prin ataare de complexele porilor nucleari. Lamina nuclear interacioneaz direct i cu cromatina, funcionnd astfel ca punte de legtur ntre ADN i nveliul nuclear. Reeaua de filamente este alctuit din proteine numite lamine nucleare, ce reprezint o clas special de proteine aparinnd filamentelor intermediare. Lamina nuclear este o structur dinamic ce se dezorganizeaz la intrarea n mitoz i se reorganizeaz la sfritul mitozei, odat cu refacerea nveliului nuclear. Matricea nuclear Studiile privind organizarea intern a nucleului au condus la identificarea unei reele de natur proteic numit matrice nuclear, alctuit din proteine nehistonice numite proteine scaffold. Filamentele matricei nucleare sunt dispuse ntr-o reea tridimensional ce formeaz n interiorul nucleului o structur cu rol analog citoscheletului. Matricea nuclear reprezint sediul unor procese importante ca replicarea ADN i procesarea ARN heterogen nuclear (hnARN), precursorul mARN. Macromoleculele de ADN se fixeaz de proteinele scaffold prin intermediul unor secvene polinucleotidice numite regiuni de ataare la scaffold (SAR, scaffold associated regions) sau MAR (matrix-attachment regions). Dei rolul secvenelor SAR nu este foarte bine precizat se consider c particip la organizarea cromozomilor i la reglarea transcrierii i replicrii ADN. Macromoleculele de ADN se fixeaz de proteinele scaffold care formeaz o ax de susinere, prin intermediul unor secvene polinucleotidice numite regiuni de ataare la scaffold (SAR, MAR).

Curs 3: Organizarea intern a nucleului n interfaz Cromatina: Cromatina reprezint complexul format de ADN-ul nuclear cu histone i proteine cromozomale nehistonice. Denumirea provine de la cuvntul chroma din limba greac, nsemnnd culoare. Examinarea nucleilor n interfaz prin tehnici de microscopie, relev aspectul neomogen al cromatinei, fiind evideniate dou tipuri distincte: eucromatina (cromatina adevrat, de la eu n limba greac) i heterocromatina (cromatina diferit, de la heteros n limba greac). Heterocromatina este o form de cromatin nalt condensat i inactiv din punct de vedere transcripional (netranscriptibil), avnd o pondere de circa 10% din genom, n timp ce eucromatina este o form de cromatin mai puin condensat i activ din punct de vedere transcripional (conine secvene de ADN ce sunt transcrise). Heterocromatina poate fi clasificat la rndul ei n dou tipuri: heterocromatin constitutiv, form n care cromatina rmne permanent condensat i care conine secvene de ADN ce nu sunt transcrise, i heterocromatin facultativ, form de cromatin condensat care nu este transcris, cu meniunea c fie s-a fcut transcrierea ntr-o perioad anterioar, fie se va face ulterior dac heterocromatina se va transforma n eucromatin sub aciunea unor factori specifici. Heterocromatina constitutiv apare n nucleul interfazic sub forma unor aglomerate localizate la periferia nucleului i n jurul nucleolilor. Heterocromatina facultativ Inactivarea cromozomilor X. n faze embrionare timpurii unul din cei 2 cromozomi X

(la organismele femele) devine inactiv prin condensare (corpuscul Barr). n celulele descendente rmne condensat acelai cromozom X. Organizarea structural a cromatinei i nivelurile de compactare Macromoleculele de ADN se asambleaz cu histonele i proteinele cromozomale nehistonice ntr-o manier nalt ordonat ce permite un grad mare de compactare a ADN-ului. Astfel, raportul de condensare specific interfazei este de 500 de ori, iar n condiiile de maxim condensare din cursul metafazei raportul de condensare este de 10.000 de ori. Histonele sunt un grup de proteine de mici dimensiuni, cu caracter bazic datorat prezenei n structura lor a unui numr mare a resturi de Lys i Arg. Aceast proprietate favorizeaz asocierea lor de ADN prin atracie electrostatic, de gruprile fosfat din coloanele glucido-fosforice ale catenelor polinucleotidice. Aadar, interaciunea histonelor cu ADN-ul nu este influenat de secvena de nucleotide a ADN. n celulele eucariote au fost identificate cinci tipuri principale de histone: H1, H2A, H2B, H3 i H4. Structura nucleosomal (fibra de cromatin de 11 nm) Structura nucleosomal reprezint primul nivel de compactare a cromatinei. Organizarea sub form de nucleosomi este rezultatul asocierii ADN cu anumite tipuri de histone. n imaginile de microscopie electronic nucleosomii apar sub forma unor particule discoidale de 11 nm, ce dau cromatinei aspectul unui irag de mrgele. Nucleosomul Nucleosomul conine un miez de histone format din 8 molecule de histone (octamer de histone) de forma unui cilindru turtit cu diametrul de 11 nm i nlimea de 5,5 nm, nconjurat de 1,65 ori de ADN-ul dublu catenar (rsucirii de 1,65 ori n jurul miezului de histone i corespunde o secven polinucleotidic de 147 perechi de nucleotide). Miezul de proteine al nucleosomului are cte dou copii ale histonelor H2A, H2B, H3 i H4, numite histone nucleosomale. Nucleosomul nu conine proteine nehistonice. Particulele nucleosomale succesive sunt separate prin secvene de ADN spaiator scurt ce poart numele de ADN de legtur sau ADN linker, a cror lungime poate s varieze ntre 18 i 80 de perechi de nucleotide (valoarea medie fiind de circa 50 perechi de nucleotide). Structura solenoid (fibra de cromatin de 30 nm)

Acest mod de mpachetare se realizeaz prin rsucirea a ase nucleosomi ntr-o structur spiralat numit solenoid. Aceast mpachetare strns este posibil att datorit implicrii histonei H1 (histon linker), ct i interaciunilor dintre nucleosomii adiaceni, stabilite ntre cozile histonelor (n special aparinnd histonei H4), ce se extind ca nite prelungiri din particula nucleosomal. Nivelurile superioare de compactare ale cromatinei Nivelul urmtor de mpachetare corespunde organizrii fibrei de cromatin de 30 nm sub form de bucle de 300nm fixate de un miez proteic de natur non-histonic, de tip scaffold. Nivelul maxim de condensare a cromatinei corespunde unor bucle super-rsucite cu dimensiunea de 700nm (n concordan cu dimensiunea cromatidei cromozomului mitotic). n concluzie, formarea cromatinei prin asocierea i mpachetarea nalt ordonat cu histonele i alte proteine cromozomale este important att pentru compactarea ADN-ului pn la nivelul maxim reprezentat de comozomul metafazic, ct i pentru reglarea accesului la secvene specifice de ADN n cursul transcrierii i replicrii. CROMOZOMII n momentul intrrii celulei n mitoz cromatina se condenseaz sub form de cromozomi, structuri vizibile la microscopul optic. Aceast condensare puternic este necesar pentru a permite micarea cromozomilor de-a lungul fusului mitotic, fr ca macromoleculele de ADN s se ncolceasc sau s se rup n timpul distribuiei n celulele fiice. Cromozomii sunt formai din ADN i proteine, n proporii aproximativ egale. Componenta proteic este un amestec heterogen de proteine, dintre care pot fi menionate histonele, proteinele scaffold, ADN i ARN polimerazele. Dup ieirea din mitoz, cromozomii individuali se decondenseaz ocupnd anumite zone bine delimitate n interiorul nucleului interfazic numite teritorii cromozomale. Un cromozom este format dintr-o singur molecul liniar de ADN. Un cromozom opereaz ca o unitate structural distinct, astfel nct o copie a fiecrui cromozom s fie transmis fiecreia dintre celulele fiice. Structura cromozomilor la EKUn cromozom funcional prezint 3 tipuri de secvene specializate de ADN: origine a replicrii reprezint secvenele nucleotidice de unde ncepe replicarea ADN. centromer (constricie primar) -reprezint regiunea specializat a cromozomului ce asigur adeziunea cromatidelor surori, ancorarea i deplasarea cromozomilor de-a lungul fibrelor fusului de diviziune i segregarea corect a cromatidelor surori n

timpul diviziunii celulare. n timpul diviziunii mitotice la nivelul centromerului se formeaz tranzitoriu o structur proteic complex numit kinetocor. telomere secvene de la capetele cromozomului ce confer stabilitate cromozomilor i mpiedic asocierea lor. Cariotipul reprezint totalitatea cromozomilor unui celule, dispui ntr-un set complet (caracteristic unui individ sau unei specii) i ntr-un anumit aranjament. Realizarea cariotipului const n aezarea cromozomilor microfotografiai dintr-o celul n metafaz n ordinea descresctoare a dimensiunii lor n perechi omoloage. Conform Standardului Internaional de Nomenclatur Citogenetic, cariotipul uman este redat prin numrul total de cromozomi (46) urmat de formula comozomilor de sex (XX pentru femeie i XY pentru brbat), de exemplu 46, XX i respectiv 46, XY. Cariotipul uman are 23 de perechi de dintre care 22 perechi de autozomi i o pereche de heterozomi (cromozomii ce determin sexul unui organism, denumii i gonozomi). Cariotipurile sunt studiate pentru a determina aberaiile cromozomale. NUCLEOLUL Nucleolul este o formaiune intranuclear decelabil la microscopul optic, ce reprezint sediul producerii subunitilor ribosomale. Nucleul celulelor somatice umane conine n mod obinuit cte un nucleol pentru fiecare set de cromozomi, astfel c majoritatea celulelor umane somatice (diploide) prezint doi nucleoli. Nucleolul nu este delimitat de membrane, ci este organizat n aria regiunilor cromozomale ce conin gene codificatoare pentru ARN-urile ribosomale. Morfologia nucleolului: Din punct de vedere morfologic n nucleol au fost evideniate trei regiuni distincte: centrul fibrilar zona fibrilar dens zona granular Genele pentru rARN sunt localizate i transcrise n centrul fibrilar i n zona fibrilar dens. Prelucrarea rARN i asamblarea cu proteinele ribosomale este iniiat n zona fibrilar dens i continu n zona granular unde se formeaz subunitile ribozomale, gata de a fi exportate n citoplasm.Mrimea nucleolului depinde de activitatea metabolic a celulei. Cursul 4: MEMBRANA PLASMATIC(PLASMALEMA)

Conceptul actual al organizrii membranei plasmatice Toate tipurile de celule din lumea vie sunt delimitate de o structur fin, cu o grosime de circa 7 nm ce poart numele de membran plasmatic sau plasmalem. Organizarea structural i funcional a celulei este dependent de membrana plasmatic ce constituie o barier cu permeabilitate selectiv ce delimiteaz coninutul celular de mediul extracelular i mediaz schimbul de substane i informaie dintre celul i mediul extracelular. Teorii despre membrane: Pn la stabilirea conceptului actual al structurii membranelor s-au emis numeroase modele privind arhitectonica molecular a membranei plasmatice. Teoria lipidic elaborat de ctre Overton (1902), conform creia plasmalema este un stat lipidic continuu ce delimiteaz suprafaa celular, venind n contact direct att cu mediul apos extracelular ct i cu cel intracelular (apa celular). Gorter i Grendel (1925) au susinut pentru prima dat dispoziia bimolecular a stratului lipidic membranar. Danielli i Davson (1935) au imaginat un model al organizrii moleculare a membranelor celulare cunoscut sub numele de modelul paucimolecular sau modelul sandwich. Acest model susine c membranele sunt alctuite nu numai din lipide pure aranjate n bistrat, ci menioneaz i prezena proteinelor dispuse att spre exterior ct i spre interiorul membranei celulare. Studiile de microscopie electronic au artat c membrana plasmatic prezint o structur trilamelar, fiind alctuit din dou straturi electrono-opace ce delimiteaz ntre ele un strat electrono-transparent. Cercetrile fcute pe diverse esuturi de la organisme diferite (animale, plante, microorganisme) au artat c toate membranele celulare, inclusiv cele ale organitelor din citoplasma celulelor eucariote prezint o organizare structural similar cu cea a plasmalemei. Examinarea electrono-microscopic relev faptul c membranele prezint o zon central, clar, marginit de dou zone dense, avnd o grosime total de 7,5 nm. Acest concept al organizrii structurale similare a membranelor poart denumirea de teoria unitii de membran (teoria membranei unitare) sau teoria trilamelar i a fost elaborat de ctre J. Robertson (1959). Modelul n mozaic fluid al organizrii membranelor: Modelul elaborat de Robertson nu reflect organizarea dinamic a membranelor i nici dispoziia topografic a proteinelor n membran. Aceste critici au fost nlturate prin teoria mozaicului fluid, elaborat de ctre Singer i Nicolson (1972).

Elemente de noutate aduse de modelul lui Singer i Nicolson: Moleculele lipidice sunt organizate structural sub forma unui bistrat molecular ce ntreine proprietile hidrofobe ale membranei i asigur suportul pentru integrarea proteinelor n membran (concepie similar cu a modelelor anterioare). n plus, modelul n mozaic fluid sugereaz c bistratul lipidic poate prezenta stri fizice diferite (mai vscos sau mai fluid), ceea ce favorizeaz mobilitatea componentelor de membran. Un alt element de noutate al modelului mozaicului fluid const n faptul c precizeaz c proteinele de membran sunt dispuse sub forma unor particule discontinue. Proteinele sunt considerate entiti globulare, inserate n bistratul lipidic mai mult sau mai puin adnc. O mare parte a proteinelor de membran, numite proteine transmembranare strbat n ntregime bistratul lipidic i apar expuse pe ambele fee ale membranei. Poriunea hidrofob a proteinelor transmembranare este plasat n miezul hidrofob al bistratului lipidic, iar domeniile hidrofile ale catenei polipeptidice sunt n contact cu mediul apos. Prin urmare, proteinele de membran prezint o dispoziie topografic n mozaic i au posibilitatea de a se mica n membran. Modelul actual al organizrii membranelor: n prezent se consider c toate membranele biologice, att membrana plasmatic ct i endomembranele eucariotelor au aceeai organizare structural de baz, n acord, n cea mai mare msur, cu modelul n mozaic fluid. Modelul actual al membranei plasmatice adaug ca elemente de noutate: interaciunea plasmalemei cu citoscheletul membranar pe faa citoplasmatic, rolul componentei glucidice a glicolipidelor i glicoproteinelor de membran (expuse la suprafaa celulei) n exercitarea funciilor membranei, corelate n special cu mecanismele de adeziune i recunoatere. Compoziia chimic a membranelor celulare: Toate membranele celulare au o compoziie chimic similar, fiind alctuite din dou clase majore de componente, reprezentate de lipide i proteine. Aceste componente sunt asamblate prin legturi necovalente. n afara acestor componente ce reprezint elementele de baz, n alctuirea structurilor de membran intr i alte molecule, glucide i ioni anorganici, al cror coninut este mult inferior coninutului de lipide i proteine.

Membranele diverselor tipuri de celule prezint o compoziie heterogen din punct de vedere al proporiei dintre lipide i proteine. Membrana plasmatic a unei celule animale tipice are un coninut de circa 50% lipide i 50% proteine. Cantitatea de glucide este relativ sczut (2-10%) dar glucidele intr n structura unor componente deosebit de importante pentru funciile de membran. Chiar n cadrul aceluiai tip de celul pot s apar variaii ale compoziiei chimice n funcie de specie, starea fiziologic, influena factorilor de mediu, etc. Compoziia n lipide a membranelor celulare: Componenta lipidic joac rolul de barier hidrofob de permebilitate ntre diverse compartimente celulare i ntre celul i mediul extracelular. Lipidele de membran joac un rol important n reglarea activitii proteinelor asociate de membran (enzime, receptori, molecule de adeziune), dar i n generarea unor mesageri intracelulari (ex.IP3, DAG). Biochimia descrie o mare diversitate de clase de lipide, grupate n dou mari categorii: Lipide complexe: acilgliceroli, fosfogliceride, sfingolipide, ceruri Lipide simple: steroizi, prostaglandine i terpene n membranele celulelor animale ntlnim numai trei tipuri de lipide: fosfogliceride colesterol sfingolipide Enumerarea lipidelor membranare este fcut n funcie de abundena n care apar. Fosfogliceridele reprezint 70-75% dintre lipidele membrane, colesterolul 2025%, iar sfingolipidele 1-10%. Clasificarea fosfogliceridelor fosfatidilcoline (prescurtare internaional PC, denumire uzual lecitin), cnd X este colin fosfatidiletanolamine (PE), X fiind etanolamin; fosfatidilserine (PS), la care X este serin; fosfatidilinozitoli (PI), n care X este inozitol;

Formula structural a acidului fosfatidic (reprezentat sub forma anionului fosfatidat, denumire alternativ 1,2-diacilglicerol 3-fosfat). PA funcioneaz ca precursor metabolic pentru formarea altor tipuri de fosfogliceride. Prezint un cap hidrofil de mici dimensiuni cu ncrcare electric negativ (2-).

Starea fizic (fluiditatea) bistratului lipidic Bistratul lipidic este fluid, ntr-o continu dinamic. Fluiditatea bistratului lipidic depinde de compoziia n acizi grai saturai/nesaturai din structura fosfogliceridelor. Fluiditatea bistratului lipidic este o rezultant a diverselor posibiliti de micare a lipidelor din componena sa. Lipidele membranare pot executa micri intramoleculare i micri intermoleculare 1. Micri intramoleculare, pe care lipidele le realizeaz n raport cu propria lor structur (n raport cu propria lor ax). Aceste micri pot fi: Micri de rotaie, cu o frecven de 109 rotaii/s; aceste micri sunt determinate de capacitatea lanurilor acizilor grai de a se roti n jurul legturilor C-C, capacitate care se rsfrnge asupra comportamentului ntregii molecule, prin cuplurile de fore pe care le induc; rezultanta acestui zbucium intern molecular este micarea de rotaie a moleculei lipidice n ansamblu. Micri de flexie a cozilor hidrofobe, cu o frecven de 108 flexii/s; aceste micri trebuie nelese tot ca rezultat al micrilor din interiorul moleculelor de lipid, la nivelul cozilor hidrofobe ale acizilor grai nesaturai, care, datorit mpiedicrilor

datorate prezenei celuilalt acid gras din structur, nu pot executa, de regul, dect micri asemntoare tergtorului de parbriz. 2. Micri intermoleculare, care implic schimbarea poziiei moleculelor lipidice unele n raport cu altele. Acestea pot fi: - Micri de translaie (difuzie lateral), micri ale lipidelor n planul membranei, n aceiai foi a bistratului, unele printre altele; frecvena acestei micri este de 107 schimbri de direcie/s. Trebuie menionat faptul c prezena colesterolului n bistrat determin o diminuare a mobilitii laterale. - Micri de interversiune sau de flip-flop, adic micri de trecere a lipidelor dintr-o foi a bistratului n cealalt; aceste micri presupun o rsturnare a moleculei n planul membranei, pentru a-i pstra capul hidrofil la exteriorul structurii, adic trecerea capului hidrofil prin poriunea hidrofob a membranei; frecvena acestor micri este foarte mic, practic nul (o dat pe lun pentru fiecare molecul individual). Micrile de interversiune ale lipidelor sunt facilitate de proteine specifice denumite translocatori fosfolipidici sau flipaze fosfolipidice. Mobilitatea fosfolipidelor membranare

Tipuri de micri posibile ale moleculelor de fosfolipide n bistratul lipidic Capacitate de micare a lipidelor n cadrul membranei determin proprietatea membranelor numit fluiditate. Fluiditatea membranelor poate fi modulat (modificat, reglat) de mai muli factori. Aceti factori pot fi de natur fizic, sau chimic. Factori fizici: temperatura i presiunea (fluiditatea membranelor este direct proporional cu temperatura i invers proporional cu presiunea).

Factori chimici:(i) factori chimici intrinseci, sau (ii) factori chimici extrinseci. Factorii chimici intrinseci, pe care celula i folosete n modularea fluiditii membranei n funcie de necesiti, sunt cantitatea de acizi grai nesaturai din structura fosfolipidelor i cantitatea de colesterol. Factorii chimici extrinseci se clasific la rndul lor n (a) fiziologici (hormoni sau mediatori chimici liposolubili), (b) patologici (metabolii liposolubili ai unor ageni patogeni, substane chimice toxice liposolubile), sau (c) terapeutici (medicamente liposolubile). Rolul lipidelor membranare Principala funcie a a lipidelor membranare organizate n bistrat este funcia structural, conferind membranei celulare rolul de barier ntre mediul intracelular i extracelular. Lipidele membranare sunt implicate n importante funcii metabolice. Lipidele membranare sunt implicate n fenomene de recunoatere i semnalizare intercelular. Rolurile metabolice ale lipidelor sunt bine cunoscute pentru fosfogliceride. Acestea pot fi modificate de enzime specifice numite fosfolipaze. Exist mai multe tipuri de fosfolipaze, care au proprietatea de a elibera diverse molecule din structura complex a fosfogliceridelor. Acestea sunt: (i) Fosfolipaza A1, care elibereaz acidul gras din poziia 1 a glicerinei; (ii) Fosfolipaza A2, care elibereaz acidul gras din poziia 2 a glicerinei. Aciunea fosfolipazelor A1 i A2 conduce la formarea de lisofosfogliceride; (iii) Fosfolipaza B, care poate scoate ambii acizi grai din structura fosfolipidelor; acioneaz n general asupra lisofosfogliceridelor; (iv) Fosfolipaza C, care desface legatura dintre glicerin i fosfat, cu eliberarea diacilglicerolilor (DAG); (v) Fosfolipaza D, care elimin restul hidrofil X, cu eliberarea acidului fosfatidic. Locurile specifice de aciune ale diferitelor tipuri de fosfolipaze, la nivelul moleculelor de fosfogliceride:

PLA1 fosfolipaza A1 ; PLA2 fosfolipaza A2 ; PLC fosfolipaza C ; PLD fosfolipaza D

PROTEINELE DIN MEMBRANA PLASMATIC Proteinele din membran sunt dispuse n bistratul lipidic sub form de proteine individuale sau asociate n agregate macromoleculare. Una din particularitile proteinelor membranare este aceea c ele intr n contact cu dou medii diferite: pe de o parte cu lipidele membranare i pe de alta cu mediul apos. Similar lipidelor, proteinele de membran sunt molecule amfipatice: prezint regiuni hidrofile ce interacioneaz cu mediul apos i cu capetele polare ale lipidelor de la suprafaa membranei, i regiuni hidrofobe care interacioneaz cu acizii grai din structura fosfogliceridelor din interiorul bistratului lipidic.

Principiile generale de organizare tridimensional a proteinelor: Catenele polipeptidice prezint structuri sub form de -helix i structuri -pliate. Structura beta este plan, iar structura alfa helix este o structur cilindric. Proteinele mari, cum sunt cele membranare conin combinaii de structuri alfa i beta. Structura favorabil din punct de vedere termodinamic pentru o secven de aminoacizi hidrofobi este structura alfa-helix i prin urmare segmentele proteinelor care strbat bistratul lipidic au aceast conformaie, ce se acomodeaz cu hidrofobicitatea din profunzimea bistratului lipidic. Un segment de circa 20 de aminoacizi este suficient de lung pentru a strbate bistratul lipidic dac este dispus perpendicular n bistrat. Clasificarea proteinelor membranare: Clasificare a proteinelor membranare se face n funcie de poziia lor fa de bistratul lipidic: Proteine periferice, sau extrinseci: acele proteine care se afl ataate de o parte i de alta a bistratului lipidic, interacionnd cu capetele hidrofile ale lipidelor sau cu domenii aparinnd altor proteine membranare; Proteine integrale, sau intrinseci: acele proteine care sunt cufundate n bistratul lipidic, strbatndu-l complet sau parial. Proteinele periferice reprezint aproximativ 25% din proteinele unei membrane. n funcie de partea bistratului lipidic cruia i sunt asociate se clasific n: - ectoproteine (proteine periferice asociate feei externe a bistratului, aadar expuse la exteriorul membranei celulare) - endoproteine (proteine periferice asociate feei interne a bistratului). Proteinele integrale reprezint aproximativ 75% din proteinele unei membrane. Proteinele integrale care traverseaz complet bistratul lipidic sunt denumite proteine transmembranare. Cele care sunt parial cufundate n bistratul lipidic nu au primit o denumire specific. Proteinele transmembranare, au trei domenii structurale: (i) un ectodomeniu (poriunea expus pe faa extern a membranei), (ii) un domeniu transmembranar (poriunea ce strbate bistratul lipidic) (iii) un endodomeniu, sau domeniul citoplasmatic (poriunea expus pe faa intern a membranei).

Proteinele transmembranare se pot clasifica n funcie de numrul de treceri ale lanului polipeptidic prin planul membranei n: (i) unipas (au un singur domeniu transmembranar) (ii) multipas (sunt alctuite din mai multe segmente transmembranare unite prin secvene sub form de bucle). Structura glicoforinei (exemplu de protein transmembranar unipas) Glicoforina e alctuit din 131 de aminoacizi, dintre care 23 (din poziiile 73-95) formeaz un segment hidrofob cu structur n alfa-helix. Capetele catenei polipeptidice sunt reprezentate de segmente hidrofile expuse spre faa extracelular (captul amino terminal n ectodomeniu) i respectiv spre faa citoplasmatic (captul carboxil spre endodomeniu). Glicoforina este de fapt o glicoprotein pentru c de structura proteic, la nivelul ectodomeniului, sunt ataate 16 lanuri glucidice (peste 100 de resturi de monozaharide). Mobilitatea proteinelor membranare: Mobilitatea proteinelor membranare const n capacitatea de a executa micri de rotaie i micri de translaie. Micarea de rotaie a proteinelor membranare n jurul propriei axe, denumit i difuzie rotaional, este de cel puin 1000 de ori mai lent dect a lipidelor. Micarea de translaie, denumit i difuzie lateral, este i ea mult mai lent dect a lipidelor, fiind n medie de 1m/s. Proteinele membranare nu pot executa micri flip-flop, de rsucire n planul membranei, micri ce au fost semnalate n cazul lipidelor membranare. Proteinele, la fel ca i lipidele, au o dispoziie asimetric n membrana plasmatic. Aceast asimetrie permite membranei s exercite funcii diferite pe cele dou fee ale sale. ntruct nu pot executa micarea de flip-flop dispoziia asimetric a proteinelor n membrane este absolut. De exemplu, glicoforina are intotdeauna domeniul aminoterminal de care a ataat poriunea glucidic expus spre exteriorul celulei. Rolul proteinelor membranare: Proteinele membranare au att rol structural, ct i rol metabolic. Rolul structural.O exemplificare a rolului structural al proteinelor membranare l constituie medierea aderenei celulelor la matricea extracelular sau la celulele

adiacente (stabilirea jonciunilor dintre celule la nivelul esuturilor). Un alt exemplu legat de rolul structural l reprezint participarea proteinelor membranare la realizarea conexiunii dintre membrana plasmatic i componentele citoscheletului. Rolurile metabolice ale proteinelor membranare se manifest n ceea ce privete schimburile de informaii i substan dintre celule, sau dintre celule i mediu. Astfel, proteinele membranare pot fi receptori sau transportori prin membran. Proteinele membranare mai pot funciona ca enzime, sau ca proteine implicate n semnalizare. n exercitarea acestor funcii asimetria membranei este deosebit de important. COMPONENTA GLUCIDIC A MEMBRANEI: n membranele celulare glucidele nu se gsesc ca entiti moleculare individuale, ci sunt grefate pe un purttor lipidic sau proteic, ca structuri oligozaharidice, mai rar polizaharidice, formnd entiti chimice numite glicoconjugate. Ele sunt dispuse ntotdeauna pe faa extern a membranelor celulare formnd ceea ce denumim glicocalix. Glicocalixul reprezint nveliul glucidic al celulelor, constituit din structuri oligozaharidice inserate pe lipidele feei externe a bistratului, sau pe proteine (pe ectodomeniile proteinelor transmembranare). Grosimea glicocalixului este, n medie, cuprins ntre 20 i 50nm, variind de la un tip de celul la altul, dar i pentru aceeai celul de la un domeniu membranar la altul. Rolul glicocalixului Glicocalixul protejaz membrana celular mpotriva agresiunilor fizico-(bio)chimice i intervine n procesul de recunoatere celular. De exemplu, glicocalixul protejeaz celulele din vasele sanguine de agresiunea mecanic a fluxului sanguin, celulele tubului digestiv de agresiunea chimic (aciditatea gastric) i enzimatic (de aciunea proteazelor).