BIOFIZICA LUCRRI PRCATICE

DETERMINAREA CONCENTRA IEI UNEI SOLU II PRIN METODA

REFRACTOMETRIC
1. Scopul lucrrii
Metoda refractometric este o metod a opticii geometrice prin care se studiaz
fenomenele de reflexie i refracie, fr a analiza natura corpuscular sau ondulatorie a luminii.
n lucrarea de fa se analizeaz parcursul razelor de lumin ntr-un sistem optic (refractometrul)
cu ajutorul cruia se determin indicele de refracie al soluiei de studiat. Putem evalua apoi
concentraia soluiei, folosind astfel o metod fizic simpl i rapid.
2. Principiul lucrrii
O und electromagnetic plan progresiv (se ndeparteaz treptat de sursa care a produs-
o) care se propag n sensul pozitiv al axei Ox are o variaie periodic n timp i spaiu a
cmpului electric/magnetic, de forma
1
]
1

,
_

x
t t x 2 sin E ) , E(
0 (3.1)
unde E(x,t) este valoarea cmpului electric n punctul de coordonat x, la momentul t, E
0
este
valoarea sa maxim (amplitudinea), este lungimea de und (aceasta reflect periodicitatea
spaial a undei, reprezentnd distana dintre dou maxime succesive ale acesteia), iar frecvena
undei (aceasta reflect periodicitatea temporal a undei, reprezentnd numrul de oscilaii
complete ale vectorului cmp electric n unitatea de timp). Argumentul funciei sinusoidale,

,
_

x
t 2
, poart numele de faz. La un anumit moment de timp, punctele cu aceeai faz
definesc frontul de und, care n cazul nostru este un plan.
1
DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII PRIN METODA REFRACTOMETRIC
Fig. 3.1 Reprezentare undei electromagnetice plane progresive
Raza de lumin poate fi definit fie ca traiectorie a unui corpuscul de lumin (foton), fie ca o
traiectorie ortogonal pe fronturile de und. Dac mediul este omogen i izotrop, razele sunt linii
drepte. Un con ngust de raze care pornesc dintr-un punct comun reprezint un fascicul divergent
de raze.
Viteza v de propagare a frontului undei electromagnetice pe o direcie Ox, numit viteza
de faz a undei, este

t
x
d
d
v (3.2)
unde dx este distana parcurs de frontul undei n timpul dt.
Raportul n = c/v unde c este viteza luminii n vid (c 300000 km/s), definete indicele
de refracie al mediului n care se propag unda electromagnetic. Raza de lumin care se
propag intr-un material rezult de fapt din compunerea undei incidente cu alte unde emise de
atomii materialului. Indicele de refracie este o mrime adimensional care n general are valori n
1. Exist ns anumite materiale cu indice de refracie subunitar. Aceasta nu nseamn c
lumina se poate propag in aceste materiale cu vitez mai mare dect c, ci doar faptul c viteza de
faz a undei n material, adic viteza cu care se deplaseaz maximele (sau zerourile) undei
compuse, poate depi viteza luminii n vid. ntr-adevr, viteza de faz nu este viteza real de
propagare a semnalului luminos, vitez care este ntotdeauna c. Aceasta se numete vitez de
grup i reprezint viteza cu care se propag energia undei electromagnetice.
Indicele de refracie al unei substane depinde de natura acesteia dar i de o serie de ali
factori. Exist substane pentru care n nu depinde de direcia de propagare a radiaiei (substane
2
BIOFIZICA LUCRRI PRCATICE
optic izotrope) i substane pentru care n poate varia cnd se modific direcia de propagare
(substane optic anizotrope). n general, n crete odat cu creterea densitii substanei, ca i cu
creterea temperaturii. Pentru ap i soluii apoase creterea este de aproximativ 0.0001/grad.
ntotdeauna, pentru o valoare a indicelui de refracie determinat experimental, trebuie indicat
temperatura la care s-a lucrat, precum i lungimea de und a radiaiei utilizate; n mod uzual se
folosete temperatura de 25C i radiaia galben a sodiului (
Na
G

=589.3 nm), care se afl

aproximativ la mijlocul spectrului vizibil.
S considerm dou medii omogene transparente, M
1
i M
2
, avnd indicii de refracie
diferiti, n
1
i n
2
, i separate de o suprafa plan S. O und electromagnetic monocromatic se
propag n M
1
spre suprafaa S (unda incident). n punctul de inciden I se produce ntotdeauna
fenomenul de reflexie i, n anumite condiii, poate avea loc i fenomenul de refracie. Unda
reflectat se propag in M
1
cu aceeai vitez de faz (v
1
) ca i unda incident (aceasta avnd
viteza de propagare v), iar unda refractat se propag n M
2
cu o vitez de faz diferit (v
2
) i pe o
alt direcie dect cea a undei incidente.
Fig. 3.2 Reflexia i refracia undei plane
Propriettile reflexiei i refraciei:
- frecvena undei () nu se modific n urma reflexiei i refraciei:
=
1
=
2
(3.3)

1
i
2
sunt frecvenele undei reflectate si, respectiv, refractate.
3
DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII PRIN METODA REFRACTOMETRIC
- prima lege a reflexiei i prima lege a refraciei: unda incident, cea reflectat i cea refractat
se propag n acelai plan;
- a doua lege a reflexiei: unghiul sub care se reflect unda este egal cu unghiul de inciden:
=
1
(3.4)
- a doua lege a refraciei:
2
2
1
1
v
sin
v
sin
v
sin

sau, echivalent,
n
1
sin
1
= n
2
sin
2
(3.5)
(ecuaia Snell-Descartes)
Dac mediul M
1
este mai refringent dect mediul M
2
(n
1
> n
2
), pentru unghiuri de inciden
mai mari dect o valoare limit, >
lim
, nu se mai produce fenomenul de refracie, ci unda se
ntoarce n totalitate in mediul M
1
. Acesta este fenomenul de reflexie total.
Unghiul de inciden pentru care raza refractat rmne n planul de separare S (adic

2
= 90) se numete unghi limit (
lim
) i valoarea sa este dat de relaia:
1
2
lim
sin
n
n

(3.6)
Fig. 3.3 Reflexia total
1: reflexie + refracie ( = 0)
2: reflexie + refracie ( < lim)
3: reflexie + refracie ( = lim); unda refractat rmne in planul de separare
4: reflexie total ( > lim)
Prin urmare, pentru a se produce reflexia total, trebuie ndeplinite dou condiii:
1. lumina s treac dintr-un mediu mai refringent ntr-un mediu mai puin refringent (n
2
< n
1
);
2. unghiul de inciden s fie mai mare dect unghiul limit ( > lim).
4
Fig 3.4 Refractometrul Abbe
BIOFIZICA LUCRRI PRCATICE
Majoritatea refractometrelor funcioneaz pe baza determinrii unghiului limit, a crui
valoare depinde de indicele de refracie al soluiei de studiat, conform relaiei (2).
Descrierea refractometrului Abb
Piesa principal a refractometrului Abb
(Fig. 3.4) este un bloc de dou prisme identice
cu indice de refracie mare (n
P
> 1.7), avnd ca
seciune principal un triunghi dreptunghic ca
n figura de mai jos, cu unghiul A de 60. Faa
ipotenuz a prismei inferioare (P
1
) este mat,
iar cea a prismei superioare (P
2
) este neted.
Soluia de studiat se aplic n strat subire ntre
feele-ipotenuz ale celor dou prisme.
Fasciculul divergent de raze emise de sursa
electric de lumin alb este dirijat cu ajutorul
unei oglinzi spre suprafaa inferioar a prismei
de sticl P
1
. Razele ptrunse n sticl prin
refracie cad pe faa ipotenuz a prismei sub
diverse unghiuri de inciden. Faa prismei,
fiind mat, mprtie razele n toate direciile n soluia dintre prisme, astfel c unghiurile de
inciden ale razelor care cad pe faa ipotenuz a prismei P
2
vor avea valori cuprinse ntre 0 i 90
. O raz avnd unghiul de inciden de 90 vine razant, la nivelul interfeei soluie prisma P
2
i
intr n P
2
, prin refracie, sub unghiul limit

,
_

P
s
n
n
arcsin
lim
(3.7)
unde n
s
este indicele de refracie al soluiei.
La interfaa soluie-prisma P2 nu se poate produce reflexia total, deoarece np > ns. Mersul razelor de lumin fiind
ns reversibil, cazul particular al undei razante din figur reprezint exact drumul unei razei care vine din prisma P2
sub unghiul de inciden lim i se refract la 90 n soluie, numai c sensul de parcurgere a drumului este inversat.
5
DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII PRIN METODA REFRACTOMETRIC
Fig. 3.5 Mersul razelor de lumin prin una din prismele refractometrului Abbe
Ne intereseaz cum va aprea imaginea n cmpul vizual, aceasta fiind obinut prin focalizarea
razelor paralele care ies prin faa-catet AB a prismei P
2
, de ctre obiectivul telescopului T, n
planul su focal. Se poate arat c toate razele care ies prin faa AB se refract n aer sub unghiuri
mai mari sau egale cu o valoare minim,
min
. Valoarea minim a unghiului de ieire este
obinut n cazul discutat anterior al undei incidente razante. ntr-adevr, o raz care cade pe faa
AC a prismei P
2
sub un unghi mai mic de 90 se refract n prism sub un unghi <
lim
i cade
pe faa AB sub un unghi
= 60 (3.8)
deci
> 60
lim
(3.9)
Deoarece >
min
, unde

min
= 60
lim
(3.10)
din legea Snell-Descartes rezult c i are o valoare minim,
min
. Ca urmare, razele emergente
captate de telescop vor delimita o zon luminoas, care corespunde unghiurilor

>
min
, i o zon
ntunecat, care corespunde unghiurilor mai mici dect
min
. Astfel, limita de separare ntre cele
dou zone care apar n cmpul vizual corespunde unghiului
min
.
6
BIOFIZICA LUCRRI PRCATICE
Fig. 3.6 Aspectul imaginii din vizorul refractometrului Abbe
Cu refractometrul Abb msurm tocmai aceast valoare
min
, pe care o putem citi pe o scal
circular gradat. Aparatul are ataat ns i o alt scal gradat, pe care se citete concomitent
valoarea indicelui de refracie al lichidului studiat. Acest lucru este posibil prin etalonarea scalei
indicelui de refracie, care se realizeaz la fabricarea refractometrului innd cont de relaia
univoc dintre valoarea
min
i cea a indicelui n
s
. ntr-adevr, aplicnd ecuaia Snell-Descartes
pentru refracia la interfaa prisma P
2
aer, obinem
min min P
sin sin n (3.11)
deoarece n
aer
1. Prin urmare,
( ) [ ]
1
1
]
1

,
_

,
_

P
s
P min
lim P min
arcsin 60 sin arcsin
adica , 60 sin arcsin
n
n
n
n

(3.12)
Se observ c, pentru un n
P
constant, valoarea
min
este funcie de n
s
.
Rotind simultan ambele prisme fa de vizor, limita de separare poate fi deplasat n
cmpul vizual, al crui centru este marcat de intersecia a dou fire reticulare ortogonale. Citirea
valorii indicelui de refracie se face numai dup reglarea orientrii prismelor fa de vizor astfel
nct limita de separare s fie adus n zona median a cmpului vizual (s treac prin punctul de
intersecie a firelor reticulare).
7
A
B
A
B
T T
Vizor
plan
focal
plan
focal

min

DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII PRIN METODA REFRACTOMETRIC
Deoarece observarea prismelor se face n lumin alb, traversarea lor de ctre razele luminoase
este nsoit de dispersia luminii. Aceasta reprezint variaia indicelui de refracie cu lungimea
de und, ceea ce face ca, la traversarea unei prisme, un fascicul paralel compus din raze cu
lungimi de und diferite s fie descompus n raze de diferite culori care ies din prism sub
unghiuri diferite.
Cnd rotim butonul compensatorului de dispersie, cele dou prisme Amici se rotesc n
sensuri opuse, astfel nct ntr-o anumit poziie relativ a prismelor, dispersia se compenseaz i
linia de separare ntre cmpul luminos i cmpul ntunecat apare net, necolorat.
Fig. 3.7 Prisma Amici
8
La refractometru, dispersia luminii determin apariia in cmpul vizual a unei
benzi spectrale irizate in locul unei limite nete de separare intre zona
luminoas i cea intunecat. Efectul dispersiei este eliminat prin intermediul
compensatorului de dispersie, care cuprinde dou sisteme (A1 i A2)
compuse fiecare din trei prisme alipite. Cele trei prisme, cele laterale fiind
fabricate din sticl de crown, iar cea interioar din sticl de flint, sunt
proiectate astfel inct prisma rezultat, numit prisma Amici, sa fie o prism
cu vedere direct (nu produce o deviaie net a unei raze de o anumit
lungime de und, dei menine in general o dispersie remarcabil a spectrului)
pentru radiaia galben a sodiului. Aceasta trece nedeviat prin compensator,
care este montat in faa obiectivului vizorului.
S
O
T
A
1
A
2
Pentru anumite unghiuri de inciden a razelor pe
prisma Amici, radiaiile spectrului vizibil avnd <
Na
G

nu mai apar in cmpul vizual, rezultnd o irizare
albastr a limitei de separare. Pentru alte unghiuri de
inciden, irizarea apare roie. Se regleaz orientarea
compensatorului pn se obine separarea clar, fr
irizaii, a zonei luminoase de cea ntunecat.
BIOFIZICA LUCRRI PRCATICE
Modul de lucru
I. Cu ajutorul refractometrului se determin indicele de refracie n
x
al soluiei de studiat
(de concentraie necunoscut c
x
) i al unor soluii de aceeai natur, avnd concentraiile c
i
(i = 1,
2, 3 ); Principala pies a unui refractometru Abb este blocul celor dou prisme P
1
si P
2
. De
prisma P
1
este ataat o oglind mobil R. Cu ajutorul butonului K
1
, blocul prismelor se poate
roti, solidar cu un sector circular S pe care este trasat o scal gradat cu valori ale indicelui de
refracie. Scala poate fi privit printr-un microscop M prevzut cu vizorul reglabil V
2
. Un al
doilea vizor (V
1
), prevzut cu dou fire reticulare perpendiculare unul pe cellalt, aparine
telescopului T.
Pentru fiecare citire se procedeaz astfel:
- Sursa electric de lumin se plaseaz n faa oglinzii.
- Se deschide blocul prismelor, meninnd faa ipotenuz a prismei inferioare n poziie
orizontal. Pe aceasta se pun 1-2 picturi din lichidul de studiat. Se nchide blocul prismelor,
meninnd n continuare faa mat n poziie orizontal, pentru a evita scurgerea lichidului dintre
prisme (o condiie foarte important pentru reuita msuratorii).
- Se adapteaz orientarea oglinzii i a vizorului pentru a obine iluminare optim n cmpul
vizual.
- Se rotete butonul prismelor pn cnd n cmpul vizual apar cele dou zone I, II i limita de
separare irizat.
- Se elimin irizaiile prin rotirea butonului compensatorului de dispersie.
- Se rotete butonul prismelor pn cnd se aduce limita de separare la intersecia firelor
reticulare.
- Se citete valoarea indicelui de refracie cu trei zecimale exacte. A patra zecimal se apreciaz
cu aproximaie, orientndu-ne dup poziia liniei de reper n cel mai mic interval (avnd valoarea
de 0.001) care o cuprinde.
- Se deschide blocul prismelor. Se cur feele ambelor prismelor cu vat i alcool. Aceast
curare este foarte important, deoarece, n caz contrar, ntre prisme vom avea de fapt un
amestec de substane i este posibil s nu mai obinem o linie de demarcaie net ntre cele dou
zone, chiar dac dispersia este compensat.
9
DETERMINAREA CONCENTRAIEI UNEI SOLUII PRIN METODA REFRACTOMETRIC
- Se fac 10 citiri pentru fiecare soluie. Se determin valoarea medie n i abaterea ptratic
medie respectiv.
II. Se reprezint grafic punctele (c
i
,n
i
) obinute.
Graficul se obine reprezentnd pe ordonat concentraia i pe abscis indicele de
refracie. Pentru fiecare concentraie c
i
(i = 1, 2, 3, ) se obin punctele de coordonate (c
i
,
i
n
).
III. Se determin dreapta care trece cel mai aproape de toate punctele obinute.
Teoretic, pentru un anumit domeniu al concentraiilor mici (domeniu care depinde de
natura soluiei), indicele de refracie crete liniar cu concentraia:
n = k c + n
0
, k = const.; n
0
= indicele solventului
Aceasta este ecuaia dreptei teoretice care d dependena lui n de concentraia soluiei. n cazul
nostru, solventul este apa, iar n
0
= 1.3333.
Datorit erorilor experimentale, punctele obinute prin msuratorile anterioare se vor
abate de la dreapta teoretic. Pentru a determina constanta k din datele obinute experimental, se
aplic metoda celor mai mici ptrate. Se calculeaz valoarea numeric a constantei k, se traseaz
dreapta pe grafic.
IV. Se determin c
x
att prin interpolare grafic ct i prin calcul numeric.
Numeric, concentraia necunoscut se calculeaz cu ajutorul relaiei:
k
n n
0 x
x
c

(3.13)
Grafic, c
x
se determin prin interpolare, ducnd paralela la ordonat prin punctul (0,
x
n
)
pn la intersecia cu dreapta obinut la punctul anterior. Se determin c
x
cobornd, din punctul
de intersecie, perpendiculara pe ordonat.
Aplicaii
Metoda refractometric de determinare a concentraiei unei soluii este o metod rapid i
suficient de precis, ce poate fi uor utilizat n analize medicale, biologice sau biofizice, cu o
cantitate redus de substan.
Prin determinarea indicelui de refracie se pot determina variaiile de concentraie n
substanele proteice ale diferitelor lichide din organism. Deoarece indicele de refracie al unei
10
BIOFIZICA LUCRRI PRCATICE
soluii crete cu concentraia substanelor dizolvate, variaia indicelui de refracie al serului uman
reflect variaia coninutului n proteine, srurile gsindu-se n concentraie aproximativ
constant. nregistrarea unei valori sczute a proteinemiei (concentraia proteinelor n snge)
indic o stare patologic (nefrit, ciroz hepatic decompensat, atrofie hepatic acut).
Valoarea normal a indicelui de refracie al serului sanguin uman este cuprins ntre
1.3487 1.3517. Lichidul cefalo-rahidian are un indice de refracie de aproximativ 1.390.
11