ENZIME AMILOLITICE

AMILOZA + AMILOPECTINA
AMIDONUL=

Amilopectina

a) reprezentarea legturilor -1,4 glicozidice din amiloz

CH2 OH
O
H OH H
H
O
O
H
OH

CH2 OH
O
H OH H
H
H
OH

CH2 OH

CH 2 OH
O
H OH H
H
O
H
OH

O
H OH H
H
O
H
OH

Amilopectina

b) reprezentarea legturilor -1,3 glicozidice

din macromoleculele mari de amiloz
CH2 OH

CH 2 OH

H O
H O
H
OH H
OH H
H
H
O
H
OH
OH
O
CH2 OH
H2 COH
H O
H O
H OH H
H OH
H
H
H
O
H
H
OH
OH

AMILOPECTINA
legturilor 1,6 - glicozidice n punctele de ramificare.

reprezentarea

CH 2 OH

CH 2 OH

CH2 OH

H O
H OH H
H
H
OH

H O
H OH H
H
H
OH

H O
H OH H
H
O
H
O
HO

CH 2 OH
H O
H OH H
H
O
H
OH

CH2
H O
H OH H
H
O
O
H
OH

Enzime implicate n hidroliza

complet a amidonului
Nr

Denumirea uzual
a enzimei

Denumirea
sistematic

Cod
I.U.B.

-amilaz

-1,4-glucan-4gluconohidrolaza

E.C.3.2.1.1.

1,4--glicozidice
interioare

-amilaz

-1,4-glucanmaltohidrolaza

E.C.3.2.1.2.

1,4--glicozidice
marginale

amiloglucozidaz
(glucoamilaz)

-1,4-glucanglucohidrolaza

E.C.3.2.1.3.

1,3--glicozidice

glucozidazele
(pullulanaza,
izoamilaza)

-1,6-glucozidaze

E.C.3.2.1.41
E.C.3.2.1.68

1,6--glicozidic
1,6--glicozidic
din pullulan
1,6--glicozidic
din glicogen

.
crt

Tip de legtur
asupra creia
acioneaz

Tehnologii de biosintez a
-amilazelor

-amilaza este o enzim ce face parte din

clasa hidrolazelor i anume conform
clasificrii I.U.B., din grupul "glicozidaze"
3.2.1. Denumirea ei sistematic este -1,4glucan-4-gluconohidrolaz (E.C.3.2.1.1.).
Microorganismele cele mai utilizate pentru
biosinteza -amilazelor sunt bacteriile i
fungii astfel nct deosebim -amilaze
bacteriene i fungice.

Dinamica acumulrii -amilazei n

culturi submerse, n sistem
discontinuu, este reprezentat n
figurile urmatoare:

Dinamica acumulrii de biomas n culturi submerse de Bacillus su

Activit. enz

100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0

8 10 12 14 16 18 20 22 24
Tmp, ore

Dinamica activitii enzimatice n

culturi submerse de Bacillus subtilis

10
9

pH

8
7
6
5
4
0

8 10 12 14 16 18 20 22 24
Timp, ore

Evoluia

pH-ului n culturi
submerse de Bacillus subtilis

Biosinteza -amilazelor n
sistem discontinuu submers
Biosinteza -amilazelor n sistem
discontinuu depinde de urmtorii
parametrii:
- starea fiziologic a microorganismului
utilizat;
- potenialul productiv al tulpinii folosite;
- compoziia mediului de biosintez;
- parametrii de bosintez (temperatur,
pH, agitare, rat de aerare, durata
cultivrii).

Clonarea genelor rspunztoare de

biosinteza -amilazelor la tulpini de Bacillus
spp.
Donor

Vector

Gazd

Observaii

Referine
bibliografi
ce

Bacillus subtilis

Fagul p11

Bacillus
subtilis

Detectarea calitativ a expresiei

NOMURA
i
colab.,197
9

Bacillus amylo
-liquefaciens
B. coagulans

Fagul 3T
Fagul NM781
Plasmida pBR322

B. subtilis
Escherichia
coli

Plasmida purtnd gena care a produs mrirea de 320 de

ori a producerii de enzime prin transfer n E. Coli.
Enzima periplasmic s-a clonat de asemenea n B.
Subtilis, dar a produs mici schimbri ale produciei.

YONEDA
colab.,
1979
COLSON
colab.,
1981

Bacillus amyloliquefaciens

Plasmida pUB110

B. subtilis

Tulpina transformat produce de 5 ori mai mult dect cea

parental.

PALVA,1982

B. stearo- thermophilus

Plasmidele pTB 90
i PTB 53

B.stearotherm
ophilus
B. subtilis

A mrit activitatea de 5 ori a tulpinii transformate de

B. stearothermophilus.
Exprimare slab n B. subtilis

AIBA i colab.,
1983

B. licheniformis

Fagul
lambda
XL47
Plasmida pBR322,
pUB110

E. coli
B. subtilis

Clonare n E. Coli utiliznd fag. Subclonare din E. Coli n

plasmide pentru transformarea lui B. subtilis

JOYET
colab.,
1984

B.amyloliquefaciens

pUB110

B. subtilis

Brevetat pentru copii multiple ale plasmidei

PALVA, 1984

B.amyloliquefaciens

pUB110

B. subtilis

Plasmid coninnd promotorul de -amilaz al gazdei i

semnalul secvenelor; utilizat de asemenea pentru
exprimarea altor proteine alturi de -amilaz.

ULMANEN
colab.
1985

i
i

Variaia concentraiei de O2
dizolvat pe parcursul
biosintezei.
140

[O] mM/l/h

120
100
80
60
40
0

6
timp [ore]

10

12

Compoziia mediului i condiiile de

cultivare ale ctorva bacterii
productoare de -amilaz
Specia

Componentele mediului de fermentaie

Temp.
[ C ]

Durata
[h]

Aparatura
utilizat,
Volum mediu

amidon de cartofi, tre de orz, Na2so4,

CaCO3

30

144

flacoane agitate,
100ml mediu

Outtrup, 1972

glicerol, extract de drojdie,

KH2Po4, NaCl, CaCO3

Na2HPO4,

55

20

500 l
bioreactor

Smalley, 1972

B. subtilis

orz, must de mal, fosfat de amoniu, citrat de

sodiu

30

40

6l
bioreactor

Markkanen and
Bailey,
1974

B. stearothermophilus

amidon de porumb, pepton, extract de

porumb, sruri

55-65

40-72

flacoane agitate,
50 ml

CPC, International
Inc.
1979

aminoacizi,

48

24

flacoane agitate,
30 l, bioreactor

Chandra, 1980

B. subtilis

amidon, extract de porumb, sulfat de

amoniu, fosfat de potasiu

30

18

2 l, bioreactor

Baig, 1984

B. subtilis

amidon, hidrolizat de casein, sruri

30

18

2 l, bioreactor

Pazlarova, 1984

Bacillus licheniformis

B. coagulans

B. licheniformis

amidon, pepton,
vitamine

sruri,

Referine
bibliografice

Denumirea comercial a
enzimei
-Amilaz

Denumire
sistematic
-1,4-glucon
maltohidrolaza

Cod
enzim
E.C.
3.2.1.
2.

Microorganism productor

Bacillus polymyxa

Bacillus circulans
Bacillus negaterium

Amyloglucozidaz
(glucoamilaz)

-1,4-glucon
glucohidrolaza

E.C.
3.2.1.
3.

1,6-glucozidaze

E.C.

Robyt and French (1964)(18)

Griffin and Fogarty (1973)(19)
Napier
(1977)(20)
Higashihara and Osada (1974)(21)

Bacillus cercus var.mycoides

Takasaki
(1976)(22)

Aspergillus niger

Aunstrup (1967)
Lasater,Smith (1979)(23)
Svensson (1982)(25)

Aspergillus awamori

Flor and Hayashida (1983)(24)

Clostridium
thermoamylolyticum

Glucozidazele

Referine bibliografice

Katkocin et.al
(1985)(26)

Halobacterium sodomense

Oren
(1983)(27)

Aerobacter (Klebsiella)
aerogenes

Bulich (1978)(28)
Takizawa and Murooka (1985)(29)

Bacillus acidopullulyticus

Nielsen
(1982)(30)

Pseudomonas

Harada
(1968)(31)

Bacillus stearothermophilus

Suzuki and Imai

(1985)(32)