IZOLAREA ARN-ULUI

MESAGER
ARN mesager
 Este o moleculă de ARN ce are rolul de a
copia informația genetică a unei catene
de ADN, proces numit transcripție.
La procariote (bacterii) ARN mesager
copiază informația genetică a mai
multor gene situate alăturat.
La eucariote ARN mesager copiază
informația genetică a unei singure gene.
ARN mesager este monocatenar și are o
lungime variabilă, în funcție de lungimea
genei (ADN) pe care a transcris-o, de
mărimea mesajului genetic purtat. El se
asociază cu ribozomii din citoplasma
celulară, la nivelul cărora dictează
secvența de aminoacizi din catena
polipeptică. După ce molecula de ARN își
îndeplineste rolul său de mesager, el este
supus hidrolizei enzimatice.
Izolarea ARN total cu guanidin-
tiocianat (metoda Chomczynski)
Principiul metodei:

Celulele în cultură sau fragmentele de

ţesut sunt bine omogenizate într-o soluţie
denaturantă care conţine guanidin-
tiocianat. Acesta este unul dintre cei mai
eficienţi agenţi denaturanţi ai proteinelor.
Omogenatul este ulterior amestecat în mai
multe etape cu soluţii de acetat de sodiu,
fenol şi cloroform/ alcool izoamilic.
(Fenolul este toxic şi cauzează arsuri sau
iritaţii în zonele de contact.)
În urma centrifugării, în faza superioară
apoasă separată, se va regăsi ARN total,
iar în faza inferioară, organică, se vor găsi
proteinele şi ADN.
Izolarea ARN din sânge
Principiul metodei:
La baza metodei stă proprietatea ARN de
a rămâne solubilizat într-o soluţie apoasă
care conţine guanidin-tiocianat şi amestec
de fenol/ cloroform/ alcool izoamilic, la
pH acid.
În aceleaşi condiţii proteinele şi
fragmentele mici de ADN trec în faza
organică, iar fragmentele mai mari de
ADN se regăsesc la interfaţa celor două
faze.
În cadrul metodei este recomandată
folosirea sângelui proaspăt, recoltat pe
anticoagulant. De asemenea, este necesară
tratarea tuturor soluţiilor de lucru şi a
recipientelor cu apă care conţine DEPC
(dietil-pirocarbonat).
Bibliografie:
 https://ro.wikipedia.org/wiki/ARN_mesager
 LUCRĂRI PRACTICE BIOCHIMIA ACIZILOR
NUCLEICI ŞI BIOLOGIE MOLECULARĂ -Sergiu
Emil GEORGESCU, Marieta COSTACHE
BUCUREŞTI 2009
 http://www.scritub.com/biologie/ARN-
Mesager211151771.php