Popica Andreea Grupa 67, Seria VI

SISTEMUL DE TRANSPORT IONIC TRANSMEMBRANAR

1)Fenomenul de transport prin membrana celular

n structura membranei celulare ntlnim bistratul lipidic al crui interior hidrofob nu permite moleculelor polare s traverseze membrana. Acest lucru are o mare importan deoarece permite celulei s menin constant concentraia solviilor si citosolici, aceasta fiind diferit de cea a substanelor aflate n mediul extracelular. Datorit acestei bariere lipidice, celula s-a adaptat astfel nct transportul nutrimentelor, excretarea metaboliilor i meninerea concentraiei ionice intracelulare s fie posibile prin prezena n structura membranei a proteinelor. Prin structura lor aceste proteine transmembranare fac posibil fenomenul de transport la nivelul membranei celulare. Unele dintre acestea dein un por hidrofil care permit trecerea apei mpreun cu ioni i molecule mici, numite canale proteice. Altele, numite transportori proteici, se unesc cu ionul sau molecula ce trebuie transportat ca apoi s aib loc modificri conformaionale n structura proteinei care transport ionul sau molecula pe cealalt parte a membranei. Aceste mecaniseme sunt caracterizate printr-o specificitate crescut fa de substratul pe care l vehiculeaz. Trecerea ionilor la nivelul membranei celulare produce o nmagazinare de energie potenial stocat sub forma unui gradient electrochimic cu rol important n unele procese de transport, n transmiterea semnalului electric n celulele excitabile din punct de vedere electric iar la nivelul mitocondriei,cloroplastei i la unele bacteri produce cea mai mare parte a ATP-ului. Din punct de vedere al energiei consumate,fenomenul de transport transmembranar poate fi activ,atunci cnd are loc cu consum de energie i pasiv,atunci cnd energia nu este utilizat. Prin transport pasiv ntelegem difuziunea moleculelor mici la nivelul spailor intermoleculare de la nivelul membranei sau cuplate cu un transportor.

Acest tip de transport nu utilizeaz energie deoarece are loc n sensul gradientului de concentraie. Pe de alt parte, prin transport activ nelegem deplasarea ionilor mpotriva unui gradient de concentraie,astfel fiind nevoie de energie pentru a nvinge acest gradient. Difuziunea poate fi clasificat n dou tipuri i anume difuziune simpl si difuziune facilitat. Difuziunea simpl semnific trecerea ionilor pe la nivelul canalelor membranare sau spailor intermoleculare, far a fi implicate proteinele transportoare. Rata de difuziune este determinat de cantitatea de substrat ce va fi transportat si de numrul de canale disponibile pentru acest lucru. Difuziunea facilitat necesit prezena unui transportor proteic. Transportul activ, de asemenea, poate fi clasificat n dou categorii, transport activ primar, cnd energia necesar este obinut prin activitatea ATP-azelor, i transport activ secundar cnd energia necesar este obinut datorit gradientului creat de transportul primar.

2)Clasificarea sistemului de transport ionic membranar:

Sistemul de transport ionic membranar cuprinde trei tipuri de transportori i anume canalele proteice, pompele ionice i transportorii proteici.

A)Canale proteice:

Canalele proteice formeaz pori hidrofili la nivelul membranei care reprezint un mijloc de comunicare ntre citosol i mediul extracelular, cu o specificitate foarte ridicat

care se deschid sau se nchid foarte rapid prin diverse mecanisme. Deoarece proteinele componente au o specificitate crescut pentru ionii anorganici aceste canale au fost denumite canale ionice. Un canal ionic poate fi traversat de peste 100 de milioane de ioni ntr-un interval de timp de o secund, astfel aceste structuri sunt mult mai eficiente avnd o rat de transport de 105 ori mai mare decat cea a oricrei proteine transportoare. Aceste canale nu pot fi cuplate la o surs de energie, deci toate transporturile mediate de acestea sunt pasive. Totui,principala funcie a acestor canale este de a permite ionilor anorganici-n special Na+ , K+, Ca2+ sau Cl- s difuzeze rapid , utiliznd gradientul electrochimic, traversnd bistratul lipidic. Abilitatea de a controla fluxul de ioni care traverseaz aceste canale este esenial pentru multe celule. La nivelul neuroniilor,aceast modalitate de transport este foarte important deoarece are rol n recepionarea, conducerea i transmiterea semnalelor electrice. Exist o serie de proprieti care difereniaz canalele ionice de aquaporine, n primul rnd , selectivitatea ionilor, permind unor ioni s traverseze canalul iar altora nu. Acest lucru sugereaz faptul c porii sunt strmi n anumite poriuni, permind doar ionilor care au o anumit dimensiune i o anumit ncrctur electric s traverseze membrana. Ioni permeabili trebuie s i piard atmonsfera de ap nconjurtoare pentru a putea traversa cea mai strmt parte a porului i anume filtrul selectiv, care limiteaz rata de trecere a ionilor. Cnd concentraia ionilor crete , fluxul de ioni care traverseaz canalul crete proporional ca apoi sa fie atins un prag de saturaie cnd rata de traversare devenine maxim. A doua proprietate important a canalelor ionice care le difereniaz de aquaporine este c aceste canale nu sunt mereu deschise, astfel fiind clasificate n canale ionice cu poart i canale ionice fr poart(deschise permanent i care sunt resposabile pentru meninerea potenialului de

repaus,pot fi pentru Na+, K+,Cl- i funcioneaz de obicei n echilibru funcional cu ATP-aza Na+/K+). Cnd un stimul de natur electric sau chimic este exercitat la nivelul canalelor,acestea se nchid, intrnd ntr-o stare inactivat, refractar nemaiputnd s se obin o deschidere a canalului pn cnd stimulul nu este ndeprtat. Canalele pot fi deschise de o serie de stimuli cum ar fi variaia potenialului mebranar i anume canalele ionice voltaj dependete, i de asemenea prin legarea unui ligand numindu-se canale ionice controlate de liganzi. Ligantul poate fi un mediator extracelular cum ar fi un neurotrasmitor (acetilcolina, glicina, acidul gammaaminobutiric), un mediator intracelular cum ar fi un ion sau un nucleotid. De asemenea activitatea canalelor ionice mai poate fi controlotat i de ctre fosforilare i defosforilare. Mai mult de 100 de canale ionice au fost individualizate pn acum,iar altele noi sunt nc descoperite, fiecare fiind caracterizat de ionul pe care l vehiculeaz, de mecanismul su de nchidere sau deschidere i de abundena i localizarea sa celular. Aceste canale ionice au un rol important n celulele musculare unde sunt resposabile pentru excitabilitatea sa electric, i n celulele nervoase unde mediaz cele mai multe forme ale transmiterii semnalului. Un singur neuron poate cuprinde pn la 10 tipuri de canale ionice, fiecare situat n diferite domenii ale membranei celulare. Cel mai comun canal ionic este canalul pentru K+ fiind ntlnit la nivelul membranei aproximativ tuturor celulelor. Acest canal are o propietate special i anume acea c acesta se poate deschide i fr stimulare i de aceea prin permeabilitatea sa crescut fa de a altor canale are rolul de a menine potenialul membranar la nivelul tuturor membranelor. Un potenial membranar ia natere atunci cnd ntre cele doua fee ale membranei celulare exist o diferen de electronegativitate, i anume exist un exces de ioni pozitivi

fa de cei negativi pe o parte a membranei si un deficit pe cealalt parte.

Membrana celular a tuturor celulelor excitabile electric-nu doar neuroni, ci i celule musculare ,endocrine- conine un numr crescut de canale voltaj-dependente pentru cationi care au rolul de a genera potenialul de aciune. Un potenial de aciune este declanat de o depolarizare a membranei celulare-i anume valoarea potenialului de pe faa intern a membranei celulare ajunge la o valoare mai puin negativ. La nivelul neuronului i a celulei musculare o depolarizare care are loc la nivelul membranei deschide promt canalele voltaj-dependente de Na+ , permind astfel unei mici cantiti de Na+ s ptrund n celul datorit gradientului electrochimic. Influxul de sarcini pozitive continu depolarizarea membranar, astfel tot mai multe canale de Na+ sunt deschise iar o cantitate mai mare de Na+ ptrunde n celul alimentnd n continuare procesul de depolarizare. Acest proces de auto-amplificare(feed-back pozitiv) continu pn cnd ntr-o fraciune de milisecund, potenialul electric al acelei regiuni membranare ajunge de la valoarea normal de repaus de -70 mV pn aproape de potenialul de echilibru al Na+ de +50 mV. n acest moment celula va ajunge la o nou stare de repaus i anume atunci cnd toate canalele de Na+ sunt deschise. Pentru a proteja celula de acest tip continu de spasm electric este nevoie s intervin dou mecanisme i anume: inactivarea canalelor de Na+ i deschiderea canalelor ionice pentru K+. Canalele de Na+ dein un mecanism automat de inactivare, care produce o nchidere rapid a canalului chiar dac membrana este nc depolarizat. Canalele rmn n aceast stare inactivat, deschiderea lor fiind imposibil, pn cnd potenialul membranei celulare revine la valoarea sa negativ. Tot acest ciclu, de la stimulul iniial i pn la revinerea la potenialul mebranar de repaus are o durat de cteva milisecunde. Deci canalul de Na+ poate exista n trei

stri: deschis, nchis sau inactivat. Acest mecanism de producere a unui potenial de aciune se aplic doar pe mici zone ale membranei celulare dar depolarizarea acestei mici zone este sufiecient pentru a produce depolarizarea zonelor vecine, astfel potenialul propagndu-se la nivelul ntregii membrane celulare. Canalele voltaj-dependente pentru K+ reprezint cel de-al doilea mecanism care acioneaz pentru a aduce potenialul de membran napoi la valoarea sa negativ iniial. Aceste canale se deschid asemantor celor de Na+ n urma depolarizrii membranare, dar mai ncet. Odat ce canalul de K+ a fost deschis, efluxul de K+ depete influxul de Na+ i duce membrana celular rapid napoi la potenialul de echilibru al K+ , chiar nainte ca inactivarea canalelor de Na+ sa aib loc. Asemntor cu canalele de Na+ i canalele de K+ se inactiveaz. Studiile au artat c poriunea proteic implicat n inactivare este secvena N-terminal care conine 20 de aminoacizi, iar alterarea acestei poriuni produce schimbri n mecanismul de inactivare al acestor canale. Totui s-a descoperit c dac faa intern a membranei celulare este expus unei secvene proteice sintetice corespunztoare captului N-terminal mecanismul de inactivare functioneaznormal. Aceste date duc la concluzia c acest capt N-terminal blocheaz porul canalui funcionnd ca o poart, astfel intervenind n inactivare. n unele celule musculare sau endocrine mecanismul preferat pentru declaarea potenialui de aciune nu este reprezentat de canalele de Na+ ci de canalele de Ca2+.Deci mecanismul de deschidere al canalelor voltaj dependente pentru Na+ ,K+ sau Ca2+ funcioneaz pe baza unei structuri aminoacidice localizate n unul dintre domenile lor transmembranare care rspund la depolarizare prin schimbri conformaionale care produc deschiderea canalului. Exista un numr crescut de diferene funcionale i structural ntre aceste trei tipuri de canale voltaj-dependete rezultate din varietatea de gene implicate n transcrierea lor

dar studiile au artat c structura N-terminal este asemntoare la toate cele trei clase astfel putem afirma c ele aparin unei superfamilii de proteine asemntoare din punct de vedere al structurii i al evoluiei. Indivizii care sufer mutaii genetice n genele implicate n transcierea canalelor proteice sufer de o serie de afeciuni la nivelul muchilor, sistemului nervos sau inimii n funcie de tipul i localizarea canalului afectat. Astfel mutaiile survenite la nivelul genelor pentru canalele ionice de Na+ pot provoca o afeciune numit distrofie miotonic care se manifest prin incapacitatea relaxarii muchilor dup ce a avut loc o contracie voluntar, producnd spasme musculare dureroase. Acest lucru este produs deoarece canalele de Na+ ntrzie s se nchid iar Na+ continu s intre n celul producnd o depolarizare continu care este urmat de o contracie muscular. Similar,dac localizarea canalelor de Na+ si K+ afectate este la nivelul celulelor sistemului nervos afeciunea cauzat este epilepsia unde stimularea continu i sincronizat a unui grup de neuroni produce simptomatologia specific acestei boli. Pe lng canalele ionice voltaj-dependente mai putem vorbi de canale ionice controlate de trasmitori care au un rol important n sinapsele chimice. Semnalul neuronal este transmis de la o celul la alt celul prin formaiuni specializate numite sinapse. O sinapsa este alctuit dintr-o prim celul numit celul presinaptic i o a dou celul numit celul postsinaptic, desprite de fanta sinaptic. O schimbare a electronegativitii primei celule poate declana exocitarea veziculelor sinaptice ce conin mediatori chimici, prezente la nivelul citoplasmei celulei presinaptice ,n fanta sinaptic. Aceti mediatori chimici acioneaz la nivelul canalelor ionice controlate de transmitori i produc modificri ale electronegativitii celulei postsinaptice, astfel producndu-se deschiderea canalului. Aceste canale controlate de neurotransmitori sunt specializai pentru a transforma rapid energia chimic n energie electric.

Spre deosebire de canalele voltaj-dependete, care sunt responsabile de generarea potenialului de aciune, canalele ionice controlate de transmitori nu reacioneaz la potenialul membranar, i deci nu pot singure s realizeze procesul de auto-amplificare a semnalului. n schimb, acestea produc un potenial de mebran local, care este dependent de cantitatea de neurotransmitor care traverseaz fanta sinaptic si de perioada de timp n care acesta persist. Canalele ionice contolate de neurotransmitori difer unul de cellalt n funcie de o serie de proprieti. n primul rnd,difer prin specificitatea crescut fa de neurotransmitori iar n al doilea rnd difer prin selectivitatea fa de ionii pe care i vehiculeaz. Aceste proprieti definesc natura rspunsului postinaptic. Neurotransmitorii resposabili de excitabilitate deschid canale cationice, cauznd influxul de Na+ n celul, care depolarizeaz membrana celular, astfel putndu-se genera un potenial de aciune n timp ce neurotransmitorii responsabili de inhibiie deschid canale de K+ i Cl- astfel generarea unui potenial devenind mai dificil, deoarece depolarizarea membranar este mpiedicat. Unii neurotransmitori pot fi i excitatori i inhibitori, diferind n funcie de locul n care sunt eliberai, cu ce receptori reacioneaz i de condiile ionice ntlnite. Totui, acetilcolina, glutamatul i serotonina sunt folosii ca excitatori n timp ce acidul gamma-aminobutiric i glicina sunt utilizai ca inhibitori. Canalul pentru Cl- are un rol foarte important n procesul de inhibiie. Cantitatea de Cl- extracelular este mai mare dect cea intracelular, dar potenialul membranar se opune influxului de Cl-. Unii neuroni au un potenial de echilibru pentru Cl- apropiat de valoarea potenialui de repaus sau chiar mai electronegativ. Dup ce membrana ncepe s se depolarizeze un numr crescut de ioni de Cl- intr n celul fcnd depolarizarea dificil. Deschiderea canlelor de K+ are un efect similar. Efectul toxinelor care blocheaz aceste canale demonstreaz funcia lor foarte improtant, de exemplu stricina se poate lega de receptori pentru glicina,

nepermind acesteia s i exercite rolul inhibitor astfel cauzndu-se spasme musculare, convulsii chiar i moarte. Cel mai important exemplu de canal ionic controlat de neurotransmitori este cel al canalului controlat de acetilcolin de la nivelul jonciunilor neuromusculare. Jonciunea neuromuscular reprezint jonciunea care ia natere ntre o terminaie nervoas, reprezentnd componenta presinaptic i o celul a musculaturii scheletice, ce reprezint componenta postsinaptic. Canalul cu receptori pentru acetilcolin reprezint primul canal ionic separat, primul canal ionic a crei secven de aminoacizi a fost descoperit, primul care a fost reconstituit artificial ntr-un bistrat lipidic sintetic, prima formaiune a crei semnal electric a unui singur canal a fost nregistrat i de asemenea primul canal ionic a cror gene au fost clonate. Receptorul pentru acetilcolin este format din cinci polipetide transmembranare, dou asemntoare i trei diferite, codificate de aceleai patru gene. Cele dou polipetide asemntoare reprezint situsurile de legare pentru acetilcolin. Cnd dou molecule de acetilcolin se prind de receptor, modificri conformaionale au loc i anume helixul care nconjoar porul, se rotete i rupe inelul de aminoacizi hidrofobi care nu permit trecerea ionilor cnd canalul este nchis. Aceast situaie continu pn cnd o enzim i anume,acetilcolinesteraza, prezent la nivelul jonciunii neuromusculare hidrolizeaz excesul de acetilcolina, scznd cantitatea de ligand, astfel receptorii revenind la starea lor iniial de repaus. Dac prezena acetilcolinei predomin o perioada de timp mai ridicat, pentru a evita suprastimularea , canalul se inactiveaz. O alt categorie de canale proteice sunt canalele care intr n structura sinapselor electrice sau jonciunile GAP, care se formeaz ntre dou celule adiacente la nivelul crora fiecare membran plasmatic particip egal la formarea canalului, conectnd citoplasma celor dou celule.

B)Pompele ionice

Pompele ionice mai sunt numite adesea ATP-aze deoarece au rolul de a hidroliza ATP-ul n ADP i fosfat, i utilizeaz astfel energia obinut pentru a transporta diferii ioni de o parte sau de alta a membranei celulare. Exist trei tipuri de pompe pentru ATP i anume: 1) Pompele de tip P structural sunt alctuite din proteine transmembranare multipas. Acestea au propietatea de a se autofosforila. Aceast categorie cuprinde pompele care creaz i menin gradientele de Na+,K+,Ca2+ si H+. 2) Pompele de tip F sunt pompe asemntoare unor turbine, se difereniaz de cele de tip P structural i se gsesc la nivelul membranei bacteriene, membranei interne mitocondriale si membranei cloroplasmatice. Sunt denumite ATP-sintetaze, deoarece funcioneaz invers: n loc s utilizeze hidroliza ATP-ul pentru vechicularea protonilor, formeaza ATP din ADP i fosfat. 3) Transportori ABC transport molecule mici n celul, spre deosebire de tipurile P si F care transport exclusiv ioni. Pompa de Ca2+ este cea mai bine neleas pomp ionic. Aceasta este o pomp de tip P. La nivelul celulelor eucariote exist o mare cantitate de Ca2+ situat n mediul extracelular (103 M) spre deosebire de cea prezent n citosol(10 -7 M). Chiar i un influx minor de Ca2+ n celul produce modificri ale concentraiei citosolice a ionului astfel este foarte important s fie meninut constant gradientul de Ca2+. n acest sens acioneaz pompa ionic pentru Ca2+. Acest tip de pomp este prezent la nivelul membranei reticulului sarcoplasmatic al celulei musculare. Acesta este un timp specializat de reticul endoplasmatic care depoziteaz Ca2+ intracelular.

Acest pomp, care se gsete pe aproximativ 90% din structura mebranei reticulului sarcoplasmic, are rolul de a muta Ca2+ din spaiul intracelular n reticul. O alt pomp ionic important este ATP-aza Na+/K+. Aceasta are rolul de a menine concentraia crescut de K+ intracelular i concentraia crescut de Na+ extracelular. Aceast pomp funcioneaz ca un antiport, pompnd Na+ activ afar din celula i introducnd K+ n celul. Aceast pomp funcioneaz asemntor pompei de Ca2+. Aceast pomp are trei receptori pentru Na+ la nivelului segmentului intracelular i doi receptori pentru K+ la nivelul segmentului extracelular, i de asemenea mai prezint un segment intern al acestei proteine situate n apropierea receptorilor pentru Na+ care prezint activitate ATP-azic. Modul de funcionarea al acestei pompe este urmtorul: cnd doi ioni de K+ se leag la nivelul segmentului extracelular iar trei ioni de Na+ se leag la nivelul segmentului intracelular pompa este activat. Urmeaz hidroliza unei molecule de ATP care furnizeaz energie prin scindarea legturii sale macroergice. Aceast energie rezultat este utilizat pentru realizarea unor modificri conformaionale i chimice ale proteinei de transport, rezultatul fiind eliberarea celor trei ioni de Na+ n mediul extracelular i a celor doi ioni de K+ n mediul intracelular. Una dintre cele mai importante funcii ale acestei pompe este controlul volumului celular. Mecanismul de control al volumului este urmtorul: n interiorul celului se gsesc numeroase proteine i alte molecule organice care nu pot prsi celula. Majoritatea acestor proteine sunt ncrcate negative, atrgnd astfel ioni ncrcai pozitiv cum ar fi Na+ si K+ iar toate aceste molecule produc intrarea apei prin osmoz n celul. Dac aceste procese nu sunt controlate, celula i poate mri volumul mult iar ulterior se poate produce liza ei. Deci dac volumul unei celule ncepe s creasc dintr-o anumit cauz, pompele de Na+/K+ sunt activate, transportnd un numr mai mare ioni n afara celulei, apa trecnd odat cu acetia.

Astfel pompa Na+/K+ realizeaz supravegherea continu a volumui intracelular, intervenind pentru meninerea sa constant.

C)Transportorii proteici

Transportorii proteici sunt implicai n transportul moleculelor polare, glucozei, aminoacizilor, nucleotidelor i a altor metabolii celulari pentru care bistratul lipidic nu este permeabil. Aceste proteine sunt foarte diferite unele de altele din punct de vedere structural, i prin localizarea lor la nivelul tuturor membranelor biologice. Ele sunt caracterizate de o specificitate crescut fa de substratul transportat. Mecanismul prin care funcioneaz aceste proteine este urmtorul: substratul este legat la nivelul proteinei, ca apoi aceasta s sufere o serie de modificri conformaionale astfel transfernd substratul prin membrana celular. Unele dintre aceste proteine transport, asemntor cu canalele, printr-un proces pasiv respectnd gradientul electrochimic. Atunci cnd transportul se face contra gradientul electrochimic, devenind astfel un transport activ, proteinele transportoare se numesc pompe. Afectarea acestor proteine poate conduce la diferite afeciuni cum ar fi anemia feripriv, care se datoreaza afectrii transportorului pentru Fe2+ din structura enterocitului. De asemenea transportori proteici importani sunt implicai i n absorbia glucidelor i anume GLUT1 si GLUT4. Glucoza, fructoza i galactoza sunt preluate de ctre celulele epiteliale cu rol n absorbie ale intestinului subire fie prin transport activ Na+-dependent, fie prin difuzie facilitat. Din celulele epiteliale sunt apoi transportate, de ctre transportori specifici(GLUT), n snge i apoi n celulele ficatului i ale esuturilor.

3) Descoperiri in domeniul sistemului de transport ionic mebranar

a) utilizarea canalelor ionice ca inte pentru descoperirea unor noi interventii terapeutice Ciclul de descoperire a unei noi metode terapeutice ncepe prin fixarea unei inte terapeutice pe care acest medicament s acioneze. Astfel pompele de tip P, cu structur enzimatic, reprezint nite astfel de inte. Un exemplu reprezentativ este pompa de Na+ de la nivel cardiac, care este blocat de glicozide cardiace cum ar fi digoxin, utilizat pentru tratarea afeciunilor cardiace. De asemnea la aceai categorie mai gsim i pompa de protoni de la nivelul stomacului, care este blocat de omerprazol, o substan care inhib producia de acid fiind utilizat n terapia ulcerelor. Aceste dou substane, digoxin si omerprazol, sunt incluse n primele zece cele mai prescrise medicamente din lume. Succesul lor terapeutic reflect eficiena lor i astfel este pus in eviden rolul important pe care l au studiile acestor structuri mebranare.

b) n 2006 s-a descoperit c o secvena proteic numit ORAI1, care intr n componena canalelor de Ca2+, de la nivelul celulelor T, celule cu rol n imunitate. Aceast secven proteic este implicat n funcia limfocitar a celulelor. Aceast descoperire a fost facut n urma unui caz de mutaii genetice aprute n aceai familie i care au avut ca urmri afectarea sistemui imunitar, ducnd la identificarea secvenei ORAI1. c) n 2003 Roderick MacKinnon a primit premiul Nobel pentru chimie pentru c ntre anii 1998 si 2003 a descoperit structura canalelor pentru K+ i mecanismele prin care acestea funcioneaz, i de asemenea a descoperit cum canalele de Na+ i K+ voltaj-dependente funcioneaz.

Bibliografie: 1) Molecular Biology of the Cell, B.Alberts, chapter 11: Membrane Transport of small Molecules and the Electrical properties of Mebranes pg.651-694 2) Textbook of Medical Physiology,Guyton and Hall , Unit II: Membrane Physiology, Nerve and Muscle, Chapter 4: Transport of Substances Through the Cell Membrane pg 45-56

3) http://www.osti.gov/accomplishments/mackinnon.html 4) http://news.harvard.edu/gazette/story/2006/04/discovery-ofcalcium-channel-protein-illuminates-t-cell-signaling/ 5) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2346569/ 6) http://www.ejbiotechnology.info/content/vol1/issue2/full/2/bi p/index.html