I.

PROPRIETILE GENERALE ALE

LICHIDELOR 1. DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE TENSIUNE SUPERFICIAL A LICHIDELOR Noiuni teoretice Stratul de la suprafaa unui lichid care are grosimea razei sferei de aciune molecular, 5.10-9m, se numete strat superficial. oate moleculele cuprinse !n acest strat "or fi atrase spre interiorul lichidului datorit faptului c forele de atracie #coeziune$ e%ercitate de moleculele din interior #din lichid$ sunt mai mari dec&t cele e%ercitate de moleculele de gaz !n contact cu suprafaa lichidului. 'in cauz c moleculele acestui strat sunt atrase spre interior, stratul superficial "a e%ercita asupra lichidului o presiune. (oleculele din stratul superficial au o energie potenial mai mare dec&t cele din interior. )e de alt parte, se tie c !n general, sistemele se gsesc !n echili*ru c&nd energia lor potenial de"ine minim. 'e aici rezult c starea de echili*ru se realizeaz c&nd e%ist cele mai puine molecule la suprafa, de unde rezult tendina de micorare a suprafeei li*ere a lichidului. +orele tangeniale care iau natere !n stratul superficial i care micoreaz suprafaa li*er a lichidului poart numele de tensiune superficial. 'in cauza e%istenei tensiunii superficiale suprafaa li*er a unui lichid !ntr-un "as este plan, iar picturile de lichid !n cdere adopt forma sferic. +ora de tensiune superficial este dat de relaia, F = l , unde

este o constant ce depinde de natura lichidului i se

numete coeficientul de tensiune superficial, iar l este lungimea conturului pe suprafaa lichidului. Se e%prim cu a-utorul relaiei = F/1 i are unitatea de masur N/m !n sistemul internaional de uniti. .oeficientul de tensiune superficial este deci egal cu fora ce se e%ercit !n planul suprafeei #sau tangent la aceasta pentru suprafeele cur*e$, perpendicular pe
1

unitatea de lungime. /l scade cu creterea temperaturii datorit creterii energiei cinetice a moleculelor lichidului. )entru coeficientul de tensiune superficial se poate utiliza i definiia ce rezult din amplificarea cu distana #d$, pe care se deplaseaz fora, conform formulei,
energie F d = l d sup rafata

[N/m; J/m2 ]

Se o*ser" c "aloarea coeficientului de tensiune superficial reprezint, de fapt, energia li*er a unitii de suprafa a stratului superficial. 0ntr-un sistem izolat care e"olueaz izoterm se produc numai acele procese ce duc la scderea energiei li*ere a sistemului. 0n consecin, energia li*er a stratului superficial poate scdea at&t prin reducerea suprafeei li*ere c&t i prin diminuarea coeficientului de tensiune superficial. )entru o soluie, la echili*ru, stratul ei superficial "a a"ea suprafaa minim posi*il, iar pe aceast suprafa se "or fi%a acele molecule din soluie care reduc coeficientul de tensiune superficial, el lu&nd "aloarea minim posi*il. Su*stanele organice conin&nd !n molecule at&t grupuri polare, hidrofile, c&t i lanuri hidrocar*onate, hidrofo*e, au tendina de a se acumula la suprafaa soluiei, prin aceast energie li*er a sistemului reduc&ndu-se. /%plicaia rezid !n aceea c lanurile hidrofo*e "or fi e%cluse din faza apoas pe c&nd gruprile hidrofile "or rm&ne incluse !n stratul superficial al fazei apoase. 1re loc, deci, un fenomen de a*sor*ie, moleculele rm&n&nd fi%ate la suprafaa soluiei. 1stfel, coninutul de molecule de acest tip este mai mare !n stratul superficial dec&t !n straturile profunde ale soluiei. Scderea energiei li*ere a sistemului prin acest fenomen se traduce prin reducerea energiei li*ere pe unitatea de suprafa a stratului superficial, adic a coeficientului de tensiune superficial. 1stfel de su*stane, care se a*sor* !n stratul superficial al soluiilor i duc la scderea coeficientului de tensiune superficial, se numesc tensioactive. .antitatea de su*stan tensioacti" a*sor*it pe stratul superficial este o funcie cresctoare de concentraia soluiei. (rind progresi" concetraia soluiei,cantitatea de su*stan
2

a*sor*it "a crete la r&ndul ei, determin&nd scderea progresi" a coeficientului de tensiune superficial. 1ceast scdere continu p&n !nc se mai pot a*sor*i noi molecule i !nceteaz !n momentul !n care suprafaa este 3saturat4, adic este !n !ntregime ocupat. .reterea !n continuare a concentraiei soluiei nu mai duce la scderea tensiunii superficiale, aceasta a"&nd "aloarea minim posi*il pentru soluia dat, !ntruc&t i cantitatea de su*stan a*sor*it pe unitatea de suprafa este ma%im posi*il. Su*stanele hidrofile, #electroliii sau su*stanele puternic polare$ au molecule care interacioneaz cu apa mai puternic dec&t moleculele de ap !ntre ele. 'atorit acestui fapt, la dizol"area unei astfel de su*stane !n ap starea de energie minim a sistemului se realizeaz dac moleculele sol"ite sunt !ncon-urate din toate prile de molecule de ap. .a urmare, ele au tendina de a se acumula !n interiorul soluiei apoase i nu se "or fi%a pe stratul superficial. .oeficientul de tensiune superficial a unei astfel de soluii "a fi egal sau cu puin crescut !n raport cu cel al apei pure. Su*stanele care la dizol"area lor nu modific sau cresc foarte puin coeficientul de tensiune superficial se numesc tensioinactive. .reterea uoar a coeficientului de tensiune superficial ce se o*ser" uneori la astfel de soluii se e%plic prin atracia mai mare la care sunt supuse moleculele stratului superficial de ap prin prezena !n interiorul soluiei a moleculelor puternic hidrofile. 5i !n acest caz energia li*er a sistemului este minim, creterea discret a energiei li*ere a stratului superficial fiind !nsoit de o scdere foarte e%primat a energiei li*ere a soluiei prin interaciunea dintre moleculele hidrofile i ap. )entru serul sanguin normal coeficientul de tensiune superficial este de 67 8 69.10-: N;m, iar pentru urin 70.10-: N;m. 1ceste "alori sunt numai cu puin mai mici dec&t coeficientul de tensiune superficial al apei la 20 <., care este 72.10-: N;m. /le se reduc considera*il ori de c&te ori se acumuleaz !n s&nge i se elimin prin urin su*stane tensioacti"e #de e%emplu, sruri *iliare 8 !n caz de icter mecanic$.
:

)rincipiul msurtorii =n lichid lsat s curg li*er printr-un orificiu foarte str&mt aflat la captul inferior al unui tu* capilar aezat !n poziie "ertical curge su* form de picturi. +iecare pictur se desprinde de captul tu*ului !n momentul c&nd greutatea i > de"ine egal cu forele de tensiune superficial + e%ercitate pe circumferina care formeaz linia de contact dintre marginea tu*ului i *aza picturii. ?om a"ea deci, > @ +. 'eoarece > @ mg i + @ 2 r atunci, m g @ 2 r , unde m @ masa picturii, g @ acceleraia gra"itaional.

0n momentul desprinderii, greutatea picturii este proporional cu

constanta de tensiune superficial a lichidului #legea lui ate$. 0n locul masei unei picturi putem lua produsul dintre "olumul ei #"$ i densitatea lichidului #d$, deoarece m @ " d. vdg = 2 r #1$

?olumul unei picturi e greu de msurat direct, !ns !l putem determina indirect, msur&nd e%act un "olum ? de lichid #"olumul stalagmometrului$, determin&nd numrul de picturi #n$ pe care !l d acest "olum la curgerea spontan prin orificiul capilar i fc&nd raportul,
" n

Antroduc&nd aceasta "aloare a lui v !n #1$ a"em,

" dg = n

2r

#2$

Bu&nd un al doilea lichid, de e%emplu apa, "om a"ea o relaie asemntoare ,

" d g = 2 r a na a

#:$

0mprind relaia #2$ cu #:$ o*inem,

d na = ds n a

#C$

de unde coeficientul de tensiune superficial a lichidului respecti",

C

 =a

na d n da

#5$

Delaia #5$ ne permite s calculm coeficientul de tensiune superficial a unui lichid determin&nd numrul de picturi dat de un "olum anumit de lichid i numrul de picturi dat de acelai "olum de ap. 1paratur , Stalagmometrul rau*e se compune dintr-un tu* de sticl care prezint un rezer"or pre"zut cu dou repere circulare a i ". 'easupra i dedesu*tul reperelor a i . u*ul !n poriunea lui inferioar se continu cu un capilar !, care se termin cu o suprafa lrgit i lefuit orizontal sunt gra"ate pe tu* mai multe di"iziuni care ser"esc la determinarea fraciunilor de pictur. (od de lucru Stalagmometrul, dup ce a fost splat i uscat la trompa de "id, se prinde "ertical cu a-utorul unei cleme pe un stati" i su* el se aeaz un "as !n care s cad picturile #"ezi figura alturat$. Se aspir apa distilat p&n deasupra reperului a, cu a-utorul unui tu* de cauciuc ataat la partea superioar a stalagmometrului, cu precauia s nu se formeze *ule de aer. Se numr picturile care se desprind !n timpul c&nd se scurge "olumul lichidului de la reperul a p&n la reperul . +ie na numrul lor i da densitatea apei la temperatura de lucru.
Fig1.1.Stalagmometrul Traube

Se spal stalagmometrul cu alcool i se usuc la trompa de "id. Se aspir !n stalagmometru lichidul i se numr picturile desprinse !ntre aceleai repere. +ie n

numrul lor i d densitatea lichidului la temperatura de lucru. Se repet operaia de mai multe ori i se face media determinrilor. Dezultatele se trec !ntr-un ta*el de felul celui ilustrat mai -os. 0n funcie de su*stana tensioacti" utilizat se "or face determinri la mai multe concentraii urm&rindu-se scderea tensiunii superficiale cu concentraia. Dezultatele se "or reprezenta grafic.
Nr. soluie .oncentraie d Eg;cm: F #%10: Gg;m:$

@ f#c$.
Nr de picturi # Nr.mediu de picturi
EdHn;cmF #%10-: N;m:$

2. DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE $%SCO&ITATE Noiuni teoretice (ediile interne ale organismului, s&ngele, lichidul interstiial, citoplasma etc., sunt sisteme disperse care posed proprietile fizice generale ale fluidelor. ?&scozitatea este o proprietate a fluidelor determinat de frecarea intern ce ia natere !n masa fluidului ca urmare a micrii straturilor care se deplaseaz unele fa de altele cu "iteze diferite. S considerm c e%emplu de fluid un lichid aderent, apa, care curge cu "iteza mic printr-un tu*. Se constat c "iteza de curgere este mai mic !n apropierea pereilor tu*ului i mai mare de-a lungul a%ului. /%plicaia fenomenului este urmtoarea, un strat de ap ader de pereii tu*ului i rm&ne !n repaus, de acesta se freac stratul urmtor, care se "a mica cu o "itez relati" mic. Straturile urmtoare se "or mica cu o "itez din ce !n ce mai mare p&n ce se atinge o "itez constant, dependent de presiunea de curgere i de "&scozitate. I astfel de curgere la care deplasarea lichidului se face prin straturi paralele cu direcia de curgere se numete curgere laminar. Dezult c !n masa lichidului care curge prin tu* e%ist un gradient de "itez perpendicular pe direcia de curgere. =n fluid la care deplasarea reciproc a straturilor s-ar face fr frecare se numete fluid perfect. +orele de frecare intern care apar la curgerea unui fluid determin "&scozitatea fluidelor. /a depinde de natura lichidului ca i de concentraia, mrimea i forma moleculelor dizol"ate. )entru definirea coeficientului lui de "&scozitatea s considrm !n interiorul unui fluid un strat de molecule aezate !ntrun plan orizontal, de suprafaa S, care se deplaseaz prin masa lichidului !n planul propriu cu "iteza v. 'in cauza frecrii interne straturile "ecine "or fi antrenate cu o for F, a
S , de "ariaia "itezei crei "aloare depinde de mrimea suprafaei de contact " , de distana l dintre straturi i de o constant care depinde de natura

lichidului. Delaia care leag toate aceste mrimi este urmtoarea,

+ =

" S l

Fig.2.1. a) Curgerea laminar

b) !pari"ia for"elor de v#sco$itate

'in relaia de mai sus, "aloarea constantei "a fi,

=
+ l S "

1ceasta constant se numete coeficient de v#sco$itate i este o mrime caracteristic pentru fiecare lichid. (surarea coeficientului de "&scozitate are importan at&t pentru cercetarea medical, unde poate fi utilizat pentru determinarea formei i mrimii moleculelor dizol"ate, c&t i pentru aprecierea modului de desfurare a fenomenelor hidrodinamice din organism. 1stfel creterea coeficientului de "&scozitate a s&ngelui duce conform legii lui )oiseuille, la scderea de*itului sanguin dac fora de contracie a inimii rm&ne constant. 0n acest caz meninerea constant a de*itului sanguin nu se poate realiza dec&t prin creterea forei de contracie a muchiului cardiac, deci i a tensiunii arteriale. )rincipiul determinrii )entru calcularea coeficientului de "&scozitate se utilizeaz trei categorii de metode, 1) metode ba$ate pe curgerea lic%idelor prin tuburi capilare conform legii lui &oiseuille; 2) metode ba$ate pe re$isten"a opus de ctre fluide la cderea unei sfere' conform legii lui Sto(es; 3) metode de antrenare' ba$ate pe antrenarea )n mi*carea de rota"ie a unui cilindru suspendat )n masa lic%idului. 0n cadrul
9

lucrrilor de la*orator noi "om utiliza numai metode *azate pe legea lui )oiseuille. Delaia sta*ilit de )oiseuille pentru cantitatea de lichid ce trece printr-un tu* cilindric, dac curgerea se face laminar, este urmtoarea,
L= K rC ) t 9Jl

unde ' este "olumul de lichid care se scurge !n timpul (, ) este raza tu*ului capilar, * este lungimea capilarului i P presiunea de curgere. 'ac tu*ul capilar se gsete !n poziie "ertical presiunea de curgere P este egal cu presiunea hidrostatic a coloanei de lichid !n tu*. Not&nd !nlimea coloanei de lichid cu +, densitatea lichidului, , i acceleraia gra"itaional ,, "om a"ea urmtoarea relaie, )@gh 0ntroduc&nd !n relaia de mai sus, a"em
+= K r Ch g M t 9 l

'in aceast relaie se poate calcula coeficientul de "&scozitate al lichidului dac msurm mrimile cuprinse !n relaie. Daza unui tu* capilar este greu de msurat cu precizie, !n practic utilizm un procedeu care elimin din calcul aceast mrime. 1stfel se fac determinri comparati"e ls&nd s curg prin acelai tu* capilar lichidul al crui coeficient de "&scozitate "rem s-l aflm i apoi un "olum egal de ap distilat al crui coeficient de "&scozitate este cunoscut. ?om a"ea pentru lichid i ap distilat urmatoarele relaii,
= r C %gt
9 l +

a =

r C a gta 9l +

0mprind aceste relaii o*inem,

t = a a ta

t i =a t a a

=ltima relaie se "a folosi la calculul coeficientului de "&scozitate, in&nd cont de "alorile constantelor J a @ 1 .p @ 10-:Ns;m2 si Ma @ 0,997 g;cm:. 1paratur
9

)entru determinarea coeficientului de "&scozitate "om utiliza "&scozimetrul IstNald #figura de mai -os$. /l se compune dintr-un tu* capilar #c$, a crui e%tremitate se continu cu un tu* !n form de = i cu un rezer"or #D$, prelungit cu un tu* "ertical #?$. /%tremitatea superioar a capilarului se continu cu o *ul #O$ care la poriunea superioar are un tu* pre"zut cu o g&tuitur.)e g&tuitura superioar este trasat un reper a, la fel i pe cea inferioar a *ulei, *. )entru a menine constant temperatur, !n determinrile de precizie "&scozimetrul se introduce !ntr-un termostat.

Fig.2.2 . ,#sco$imetrul -st.ald.

(od de lucru 1paratul se spal *ine i se usuc la trompa de "id. Se introduce cu o pipet o cantitate determinat de lichid !n rezer"orul "&scozimetrului, aceeai cantitate pentru toate soluiile. Se aspir !ncet lichidul !n rezer"orul situat la partea superioar a tu*ului capilar. Se las lichidul s se scurg determin&ndu-se cu a-utorul unui cronometru timpul necesar scurgerii lichidului !ntre cele dou repere. )entru aceeai soluie se efectueaz mai multe determinri, i se "a face media rezultatelor care se trec !n ta*elul urmtor, ?&scozimetrul IsNald
Nr. Soluie

Eg;cm:

imp de scurgere

imp mediu de scurgere

c)#%10-: Ns;m2$

1. 2.

10

'etreminarea "scozitii s&ngelui are o deose*it importan medical deoarece "&scozitatea s&ngelui "ariaz dup cum urmeaz , - s&nge total, de la :,5 p&na la 5,C P10 -: N- ./m/ - "alori medii ,- femei C,5P10QR NPs; mS -*r*ai , 5,0P10QR N P s; mS - plasm sanguin, de la 1,9 8 2,: P10QR N Ps ;mS - serul sanguin, de la 1,6-2,2 P 10QR NP s ;mS ?&scozitatea s&ngelui total este mai crescut la *r*at fa de femeie, la adult fa de copil, mai mare la s&ngele "enos dec&t cel arterial, depinz&nd de concentraia de .I2 din s&nge. 'in punct de "edere patologic "&scozitatea s&ngelui crete !n cazul poliglo*uliei i leucemiei, scade !n cazul anemiei depinz&nd de "olumul i forma hematiilor, precum i !n hipoproteinemie.

11

0. DENSIMETRIE N1234#3 (51)5(3!5 'ensitatea este o caracteristic fizic proprie fiecrei su*stane. Se definete densitatea absolut ca fiind masa unitii de "olum, adic raportul d @ m;" e%primat !n Tg;m:. 'ac !n locul masei din formula de mai sus se introduce greutatea su*stanei, care "ariaz !n raport cu acceleraia gra"itaional #> @ mg $, atunci se poate defini noiunea de greutate specific # U @ mg;?$. Se mai definete densitate relativ ca fiind raportul dintre densitatea a*solut a unei su*stane i densitatea a*solut a apei distilate la V C o. #c&nd este ma%im $ sau la o alt temperatur dat, dr @ d @ . m @ m , care este o mrime adimensional. , a a a (enionm c masa unui metru cu* de ap distilat la, 0o. este 999,9 Tg V Co. este 999,9 Tg W 1000 Tg V 25o. este 997,0 Tg ceea ce demonstreaz c densitatea "ariaz odat cu modificarea temperaturii, astfel c pentru msurarea riguroas a densitii a*solute se face !ntotdeauna corecia de temperatur necesar # dcorectat @ dr P da to. , unde densitatea apei distilate la to. se cunoate din ta*ele $. 'ac se afl direct prin c&ntrire "alorile m i m a, se poate calcula densitatea oricrei su*stane dorite. 'ensitile diferitelor materiale e%primate !n 10: Tg;m:, platin aur mercur fier aluminiu sulf .I2solid 21,C0 19,:0 1:,59 7,96 2,71 2,00 1,5: I2 lichid ghea potasiu petrol alcool lemn ste-ar X2 lichid 1,1C 0,92 0,96 0,90 0,79 0,70 0,07
d

12

.onform principiului lui 1rhimede, un corp scufundat !ntr-un lichid este !mpins de sus !n -os cu o for egal cu greutatea "olumului de lichid dezlocuit. .um fiecare lichid are o anumit densitate !nseamn c prin scufundarea aceluiai corp !n diferite lichide, dei se dislocuiesc "olume egale, acestea "or a"ea greuti diferite, ceea ce genereaz fore de !mpingere diferite. )e acest raionament se *azeaz determinarea densitii lichidelor cu a-utorul densimetrelor #areometrelor$, *alanei (ohr-Yestphal, metoda ?an SlHTe pentru densitatea s&ngelui etc. 0.1 DETERMINAREA DENSITII LICHIDELOR 6I SOLIDELOR CU AJUTORUL PICNOMETRULUI 6I A 7ALANEI DIGITALE a) La lichide: 'eoarece se lucreaz cu unul i acelai picnometru, "olumul apei i a lichidului studiat sunt aceleai, urm&nd doar s msurm masele cu a-utorul unei *alane electronice. ?om introduce notaiile, m0 @ masa picnometruluiZ ma @ masa picnometrului umplut cu ap distilatZ ml @ masa picnometrului umplut cu lichidul studiatZ m @ masa lichidului studiatZ " @ "olumul picnometrului, egal cu al apei sau al lichidului studiatZ da @ densitatea apei la temperatura de lucru # se ia din ta*ele $Z d @ densitatea lichidului studiat. deci m @ m1 8 m0 " @ #ma 8 m0 $; da d @ m;" @# ml 8 m0 $; #ma 8 m0 $P da b) La solide: ?olumul unui corp solid se poate afla indirect prin msurarea masei de ap dislocuite de ctre acel corp. 1stfel "om introduce i notaiile, ms @ masa corpului studiatZ mas @ masa picnometrului care conine corpul studiat i !n rest este umplut cu ap distilatZ

1:

"s @ "olumul corpului studiat # egal cu "olumul apei dislocuite de ctre corpul studiat, la introducerea !n picnometru $Z ds @ densitatea corpului studiat. deci "s @ #ma V ms 8 mas $; da ds @ ms;"s @ ms ; #ma V ms 8 mas $P da D3.8193(3v5: )icnometrele sunt "ase de sticl de diferite capaciti pre"zute cu dopuri str*tute de o capilar fin. .ele mai pretenioase sunt pre"zute cu termometre iar capilarele sunt marcate cu un reper #D$. =nele picnometre pentru corpuri solide nu au dop iar pe g&tul lor este trasat reperul D #fig. :.1.$. 1lte instrumente necesare sunt *alana digital i termometrul digital. Fig. /.1. Tipuri de picnometre.

Fig./.2. 0alan"a digital

1C

(od de lucru 'up ce se spal *ine picnometrul i se usuc, se c&ntrete cu precizie masa sa !mpreun cu dopul #m0$. Se umple apoi cu ap distilat astfel !nc&t la punerea dopului apa s refuleze prin capilara acestuia iar !n interior s nu rm&n *ule de aer. Se terge e%teriorul picnometrului i dopul astfel !nc&t capilara acestuia s rm&n plin cu lichid. .&ntrind acum picnometrul cu ap o*inem "aloarea m a. Se procedeaz identic i pentru aflarea celorlalte "alori necesar calculului #masa picnometrului cu lichidul de studiat-de e%emplu soluie hidro-alcoolic- i masa picnometrului care conine corpul solid -de e%emplu c&te"a *ile de plum*$. )entru o*inerea unor rezultate precise se "a a"ea !n "edere totdeauna gri- ca, - lichidul din interior s nu conin *ule de aerZ - corpul solid s-l c&ntrim numai c&nd este perfect uscatZ - s lum !n lucru o cantitate c&t mai mare de su*stan solidZ 'ensitatea apei #da$ necesar calculelor se afl din ta*ele, corespunztor temperaturii de lucru # temperatura se "a msura cu termometrul digital$. .alculele i prezentarea rezultatelor 'up aflarea tuturor maselor prin c&ntrire, facem !nlocuirile !n formulele respecti"e i calculm densitile su*stanelor studiate #plum*, alia-e$. Dezultatele le "om trece !ntr-un ta*el, Nr. Su*stan m0 g 1. 2. lichid solid ma g ml g ms g mas g dl 10: Tg;m: ds 10: Tg;m: -

15

0.2 DETERMINAREA DENSITII LICHIDELOR CU AREOMETRELE 'up cum am artat !n introducere, un corp scufundat !ntr-un lichid "a rm&ne !n echili*ru numai c&nd greutatea "a fi egal cu cea a "olumului de lichid dislocuit. )e acest principiu sunt construite areometrele, formate !n principal dintro ti- de sticl cu gradaii
g

, o contragreutate > i un termometru .

Fig././ 1tili$area densimetrelor. Se o*ser" uor dac d2 [ d1, atunci "2 \ "1, masa ( areometrului rm&n&nd aceeai adic, d1 @ (;?1 si d2 @ (;?2, deci d1;d2 @ ?1;?2 adic "olumul poriunii din aerometru cufundat !ntr-un lichid este in"ers proporional cu densitatea lichidului. 1reometrele utilizate !n la*orator au diferite destinaii fiind etalonate corespunztor #etalonarea se face cu a-utorul unor soluii de densitate cunoscut $. .ele mai utilizate tipuri de areometre sunt, ; D5#.3m5()4*, un areometru care prin scufundare ne d direct densitatea lichidului prin citirea gradaiei de pe ti-
g

!n dreptul ni"elului lichidului. )recizia

densimetrelor poate fi 10-: 8 10-C # adic 0,001 8 0,0001 $. 'eoarece aceasta comport o lungime a ti-ei mare # respecti", distane mari !ntre gradaii $ se utilizeaz cu succes o trus de densimetrie, fiecare dintre ele acoperind cu suficient precizie un domeniu !ngust de densiti. 'e o*icei, fiecare densimetru este marcat cu un sim*ol care ne permite s transformm densitatea msurat la o anumit temperatur, pentru o alt temperatur, de e%emplu sim*olul d C15 ne arat
16

c temperatura de lucru este de V15o., iar densitatea indicat este densitatea relati" !n raport cu densitatea apei la VCo.. +ormula cu a-utorul creia putem con"erti densitatea relati" este, t1 t1 t1 dt @ d V ] P d unde, t1 dt t1 temperatura d 8 densitatea msurat !n *aza de lucru t1, ] 8 factor de corecie. # !nscris pe densimetru $ i la - densitatea cutat !n *aza t i la temperatura de lucru t1.

/%emplu de corecie, cu un densimetru ce are sim*ol d 15 15 gsim d1515 @ 1,67C0 i dorim s o con"ertim !n *aza dC20 , deci dC20 @ 1,67C0 8 0,000999 P 1,67C0 @ 1,672C. 0n practica la*oratorului medical se utilizeaz !n mod frec"ent truse de densimetrie care permit determinri de densitate !n inter"ale destul de largi. ;A*!11*m5()4*, este un densimetru etalonat !n *aza d1515 i ale crui gradaii indic concentraia !n procente de "olum # ^ ? $ a soluiei alcoolice respecti"e, care se mai numete i 3trie real4. .um !ns nu se lucreaz !ntotdeauna la temperatura 15o. !nseamn ca "om citi !n realitate o 3trie aparent4 corespunztoare temperaturii la care lucrm. 'eci "a tre*ui s trecem de la tria aparent la tria real, lucru realiza*il cu a-utorul ta*elelor. .unosc&nd tria real care nu este altce"a dec&t concentraia corectat !n procente de "olum # ^ ? $, cu a-utorul ta*elelor o putem con"erti !n procente de greutate # ^ > $ sau !n g;l sau putem pur i simplu aflm densitatea d1515 a soluiei alcoolice . ; U)1"5#.3m5()4* este un areometru special cu scala mult redus, ti-a fiind gradat doar !ntre 1,000 8 1,050. /ste utilizat frec"ent !n clinic pentru determinarea densitii urinei !n cadrul e%plorrilor funciunii aparatului renal. 'esigur, dac este ne"oie se fac coreciile de temperatur necesare # se adaug o unitate densimetric pentru o "ariaie a temperaturii cu :,: o. dac temperatura depete V15o. $.
17

Fig /.2. 1rodensimetrul

(od de lucru Andiferent cu care tip de areometru "om lucra, "om proceda !n acelai fel. 0ntr-un cilindru de sticl ., se introduce soluia de cercetat ,S , !n suficient cantitate pentru ca areometrul s poat pluti li*er # acesta se introduce !n soluie cu mult atenie pentru a nu-i sparge partea inferioar prin lo"ire de fundul "asului, unde pentru orice e"entualitate se pune si "at $. 0n momentul c&nd areometrul se afl !n echili*ru perfect, fr s ating fundul sau pereii cilindrului ., se citete gradaia 3g4 p&n la care s-a cufundat !n lichid precum i temperatura !nregistrat pe termometrul . 'up !ntre*uinare areometrele se terg i se !nchid !n cutiile lor protectoare. .itirea gradaiei se face !n dreptul prii inferioare a meniscului.

.alcule i prezentarea rezultatelor 'up determinarea densitilor i a concentraiilor "om face coreciile de temperatur corespunztoare, rezultatele trec&ndu-le !n ta*lelul urmtor, 'eterminri d
densimetrie alcoolmetrice urodensimetrice t1 t1

t 1.

] P 10

-6

dt

ria apar. mas.

ria real. >^ sau ^ ? g;l

19

<. METODE CALORIMETRICE <.1. DETERMINAREA CLDURII SPECIFICE A UNUI CORP SOLID P)3#!3834: .alorimetria este partea termodinamicii care se ocup cu msurarea cantitilor de cldur. .ldura este o form de energie care se datorete agitaiei termice i se msoar !n -ouli #_$ sau calorii. I calorie este cantitatea de cldur necesar unui gram de ap distilat pentru a-i ridica temperatura cu un grad, de la 19,5 0 la 20,50 .. =nei calorii !i corespunde C.19 -ouli !n sistemul SA. .antitatea de cldur primit de un corp, depinde de masa m a lui, de natura corpului, caracterizat printr-o constant caracteristic, notat cu c, i de diferena de temperatur t adic, Q = m .c. t 'e aici , c @
+ Z mt

#1$

dac m @ 1 i t @ 10 o*inem, c @ L.

'eci cldur specific este cantitatea de cldur necesar unitii de mas dintr-un corp pentru a-i ridica temperatura cu un grad. 0n sistemul .>S ea se msoar !n
cal g .grd

[c ] @

iar !n sistemul internaional [c ] @

4 . 3g .3

.ldura specific a apei este de 1 cal;g.grd @ C,19 _;GgG. /a este mult mai mare dec&t a celor mai multe corpuri. )rodusul dintre cldura specific i masa corpului se numete capacitate caloric i se notez cu C = m.c. )rodusul dintre cldura specific i masa molar ( se numete cldur specific molar, .(@c.( sau cldur molar. .ldura specific a unui corp poate fi determinat prin mai multe metode, cea mai simpl are la *aza metoda amestecurilor. /a se *azeaz pe schim*ul de cldur care se realizeaz prin punerea !n contact a dou sau mai multe corpuri cu temperaturi diferite. 'e e%emplu dac introducem !ntr-un calorimetru cu ap un corp a crui temperatur este mai ridicat dec&t cea a apei el "a ceda o anumit

19

cantitate de cldur. 0n momentul echili*rului termic, conform principiilor calorimetrului, este "ala*il egalitatea, L1 @ L2 8 L: , unde L1 reprezint cantitatea de cldur cedat de corpul mai cald, L2 cantitatea de cldur a*sor*it de apa din calorimetru i L: cantitatea de cldur a*sor*it de calorimetru, agitator i termometru. L1 @ m # t 8t2 $, L2 @ m1c1 # t2 8 t1 $, L: @ m2c2 # t2 8 t1 $ unde, m este masa corpului de analizat, m1 este masa apei din calorimetru, m2 este masa calorimetrului, agitatorului i a termometrului, c este cldura specific a corpului, c1 este cldura specific a apei, c2 este cldura specific a calorimetrului, termometrului i agitatorului, t2 este temperatura final a amestecului# de ehili*ru$ , t este temperatura iniial a corpului, t1 este temperatura iniial a apei din calorimetru, agitator, termometru. 'eci t [ t2 [ t1. 0nlocuind "alorile pentru L1, L2 i L: o*inem, mc 5 t 6 t1 ) = 5 m1 c1 7 m2 c2 ) 5 t2 6 t1 ) .apacitatea caloric a calorimetrului # m2 c2 $ se determin !n preala*il i poart denumirea de echi"alent !n ap al calorimetrului #notat cu 1$. 1stfel se poate calcula cldura specific a unui corp in&nd cont de "aloarea echi"alentului !n ap al calorimetrului i de faptul c pentru ap cldura specific este egal cu 1 cal;g grad # sau C195 _;Tg grad $, a"em, c @
# m1 .c1 + !$#t 2 t1 $ m #t t 2 $

D3.8193(3v5: ?asul calorimetric este compus dintr-un "as cilindric O, introdus !ntr-un "as mai mare . i izolat termic. ?asul O conine o cantitate precis msurat de ap, un termometru ' i un agitator / # +ig. C.1 $.

Fig.2.1 &r"ile componente ale unui calorimetru.

20

(od de lucruZ - Se introduce !n calorimetru o cantitate de ap precis msurat, m1. - Se msoar temperatura apei din calorimetru t 1 # fie cu un termometru cu mercur, fie cu un termometru electric $ - Se c&ntrete corpulZ apoi se introduce !ntr-un "as cu ap care fier*e, unde se las c&te"a minute. - Se msoar temperatura apei care fier*e i care reprezint temperatura iniial a corpului t. - Se introduce repede corpul !nclzit !n calorimetru, agit&nd lent apa din calorimetru. - Se urmrete indicaia termometrului. 0n momentul !n care ea este staionar se citete "aloarea. 1ceasta este temperatura final a amestecului, t2. )entru a determina cldura specific a corpului se introduc datele !n relaia de mai sus. (surtorile i calculele se "or efectua pentru diferite materiale, fier, plum*, aluminiu, alia-e. Dezultatele se trec !n ta*elul urmtor, Nr.
det. 1. 2. (aterialul studiat )* 1l 1 _;Tg # cal;g$ m g m1 g t2
0

t1 .
0

t .
0

c _;Tg grad #cal;g.grad$

21

<.2. DETERMINAREA CALDURII SPECIFICE A UNUI LICHID )entru a determina cldura specific a unui lichid se folosete un4purttor de cldur4 numit (5)m1=1). ermoforul este un *alon de sticl pre"zut cu un tu* su*ire, el poate transporta aceeai cantitate de cldur at&t lichidului de referin # apa $ c&t i lichidului de cercetat, deci este "ala*il ecuaia calorimetric Ltermofor@ Llichid. (od de lucru, Se msoar masa m
va.

L termofor @ Lapa i

a "asului interior al calorimetrului, ma-masa apei ce se

introduce !n el i temperatura (a a sistemului ap-calorimetru. ermofor

Se umple *alonul p&n la reperul a cu un lichid colorat i se !nclzete !ntr-un "as cu ap cald p&n lichidul din tu* atinge ni"elul . 0n acest proces de !nclzire la a. 0n termoforul primete cantitatea de cldur L. Se scoate termoforul din *aia cald i se introduce !n apa din calorimetru., urmrind co*or&rea ni"elului de la acest proces de rcire termoforul "a ceda apei e%act aceiai cantitate de cldur pe care a primit-o. 'up sta*ilirea echili*rului termic se msoar temperatura final (=. Se repet aceleai operaii cu lichidul de cercetat. 'up golirea apei din calorimetru se introduce o mas de lichid m* i se msoar temperatura lui ( * . (asa lichidului se poate afla din produsul "olumului de lichid i densitatea lui. Se !nclzete din nou termoforul !n *aia cald p&n ce lichidul din tu* atinge ni"elul introduce dup care se !n calorimetrul cu lichid i se ateapt atingerea ni"elului a> iar
22

temperatura de echili*ru "a fi (5 . .antitatea de cldur cedat lichidului !n aceste condiii este egal cu cea cedat apei. .antitatea de cldur primit de ap i de "asul interior al calorimetrului "a fi , + = m aca 5 t f 8 t a ) 7 m vas.cvas 5 t f 6 t a ) .antitatea de cldur primit de lichidul de cercetat i de "asul interior al calorimetrului "a fi, + = m l cl 5 t e 6 t l ) 7 m vasc vas5 t e 6 t l ) 'ar m "asc"as @ . #capacitatea caloric a "asului $ care este de-a cunoscut. m a .c a 5 t f 8 t a ) 7 C 5 t f 6 t a ) = m l .c l 5 t e 8 t l ) 7 C 5 t e 6 t l ) cl @
m a .c a #t f t a $ + C #t f t a t l + t e $ m l #t e t l $

rezult

Se "a determina cldura specific a dou lichide diferite #alcool etilic i soluie de acid acetic$. Se tie c apa are ca @ 1 cal;gr.grd, iar !n general cldurile specifice ale lichidelor o*inuite sunt mai mici dec&t a apei. <.0. DETERMINAREA $ARIAIEI DE ENTALPIE LA DI&OL$ARE 0n sistemele *iologice "ii au loc o serie de transformri energetice !nsoite de producere de cldur. 'esigur, rolul principal !n producerea cldurii !l au procesele de o%idare ale su*stanelor nutriti"e, iar o parte mai mic o au i procesele de hidroliz, de dizol"are etc., procese care au loc la presiune constant #1atmosfer $. )entru a studia aceste procese s-a introdus o funcie de stare numit entalpie 59)' care poate fi e%primat cu a-utorul relaiei, = ! " #V #1$ =nde U este energia intern a sistemului, 8 este presiunea la care se gsete sistemul iar ? este "olumul lui. ?ariaia entalpiei X @ X2 - X1 reprezint
2:

cantitatea de cldur pe care sistemul o schim* cu mediul e%terior !ntr-un proces izo*ar,

= Q#$

Q # = ! " # V #2$

)rocesul de dizol"are a su*stanelor este !nsoit de cldura de dizol"are, care depinde de interaciunea ionilor sau moleculelor su*stanei cu moleculele dizol"antului. Ba dizol"area unei su*stane cristaline !n ap au loc urmtoarele fenomene: a) distrugerea re"elei cristaline de ctre moleculele de ap dipolare' care se interpun )ntre ionii srii' energia ce trebuie c%eltuit )n acest proces se nume*te energie de re"ea 9r *i b) solvatarea 5%idratarea) lor c#nd are loc o dega:are de cldur datorit interac"iunilor ion8dipol' numit energie de solvatare

9 s.
.onform legii lui Xess, suma cantitilor de cldur ce !nsoete un proces este constant.

di%

"

#:$

/nergia de reea Xr are "aloarea de cca 102 cal ;mol i este poziti" deoarece este a*sor*it de sistem, iar energia de sol"atare X s are cam aceeai "aloare dar este negati", deoarece ea este dega-at de ctre sistem. /ntalpia de dizol"are #cldura de dizol"are$ poate fi poziti" #dizol"area endoterm $ sau negati" #dizol"are e%oterm $ dup cum energia de reea este mai mare sau mai mic dec&t energia de sol"atare. .ldura dega-at sau a*sor*it se msoar !n calorii ;mol sau !n -ouli;mol. .antitatea de cldur L primit sau cedat de un corp de mas m i cldura specific ! depinde de "ariaia temperaturii ( adic, Q = m c t C = m. c , 'eci, Q = & t #5$ )entru determinarea cldurii de dizol"are se aplic ecuaia calorimetric conform creia cantitatea de cldura a*sor*it de un sistem este egal cu cea dega-at de alt sistem, cu care este !n contact. 0n cazul dizol"rii unor sruri, cldura primit
2C

#C$

)rodusul dintre cldura specific i masa lui se numete capacitate caloric ,

pentru dizol"are #Lp $ este egal cu cea cedat de sistemul calorimetric #L cal $ i de cldura cedat de sol"ent #L sol $. .ldura cedat de calorimetru este Lcal @ . t , iar cea cedat de sol"ent este Lsol. @ m s.c s. t, deci cldura total este,

= Q # = Q sol " Q cal = m sc s t " & t = ' m scs " & ) t #6$

unde m. este masa soluiei # masa apei V masa srii $, ! cldura specific a soluiei care se poate egal cu cea a apei #1 cal;gr.grd.$. .onstanta calorimetrului C se poate determina din calcul. /ntalpia de dizol"are se raporteaz la un mol de su*stan. M1"4* "5 *4!)4: Se c&ntresc urmtoarele, "asul interior al calorimetrului i agitatorul, masa de ap ce se "a introduce !n acest "as i sarea pe care "rem s-o dizol"m, !ntr-o epru*et. 'e e%emplu, utilizai 200 moli ap #1(ap @ 19 g $ pentru 1mol sare. Se introduce epru*eta cu sare !n apa din calorimetru i se msoar temperatura din minut !n minut, p&n ce ea rm&ne constant. Se "a folosi termometrul digital. Se "ars coninutul epru*etei !n ap, se agit p&n la dizol"area srii. Se msoar din nou temperatura, timp de 5 minute, din minut !n minut. )entru a gsi "aloarea lui

( se reprezint grafic temperatura !n funcie de timp. Se calculeaz apoi "ariaia

entalpiei cu relaia #6$.

Fig.2.2.,aria"ia temperaturii )n procesul de di$olvare.

II.
MSURAREA PROPRIETILOR ELECTRICE ALE LICHIDELOR 7IOLOGICE

25

?. CONDUCTOMETRIE 'eterminarea concentraiei electroliilor din plasma sanguin este foarte util !n practica clinic deoarece ofer indicaii asupra meta*olismului hidromineral, asupra repartiiei apei !n organism !ntre cele trei compartimente, intracelular, interstiial i "ascular. 0n diferite tul*urri ale echili*rului hidromineral aceast repartiie poate suferi modificri importante. 'eterminarea concentraiei electrolitice a plasmei se poate face prin mai multe metode, conducti"itate electric, crioscopie sau prin dozarea separate a ionilor. )rin msurarea conducti*ilitii sau a rezisti"itii se poate face o dozare destul de precis i rapid a electroliilor din plasm, su*stanele neioniza*ile cum sunt urea sau glucoza nefiind implicate !n aceste determinri. N1234#3 (51)5(3!5 "5 a9@: Se numete conducti"itate electric > # conductan $, "aloarea in"ers a rezistenei, a mediului respecti", > @
1 , unde ;

D este rezistena electric i

se msoar !n ohmi # $. )entru conductorii de ordinul AA conducti*ilitatea este o proprietate caracteristic i depinde de concentraia ionilor !n soluie #deci de gradul de disociere electrolitic$, de numrul de purttori de sarcin i de "iteza cu care acetia transport curentul !n soluie. Dezistena electric este dat de relaia,
l D @ , !n care l este s

lungimea conductorului, s seciunea, rezistena specific sau

rezisti"itatea

# msurat !n .cm $. /a depinde de mediului respecti". Dezistena specific, , este rezistena unui cu* din acel mediu care are lungimea i seciunea egal cu unitatea. .onductana mediului > se msoar !n -1, numit i Siemens # S $ . ?aloarea in"ers a rezistenei specifice se numete conducti"itate electric specific ,

1 l -1 -1 @ ;.s # cm $ sau # S;cm $

26

.onducti"itatea electric specific depinde de natura su*stanei, de temperatur i de concentraia soluiei. )entru a determina conducti"itatea electric specific a unui electrolit este ne"oie de o celul de conducti*ilitate. 1ceasta e alctuit din doi electrozi de platin cu suprafaa de cca 1 cm 2 i distanai la 1 cm, astfel !nc&t "olumul de lichid s rm&n acelai pentru toate soluiile de msurat. .elula de conducti*ilitate se caracterizeaz prin constanta celulei, care este dat de raportul dintre distana dintre electrozi i suprafaa lor, T@
l # cm-1 $ S

'eoarece raportul l;S apare i !n legea lui Ihm, constanta celulei se poate determina prin msurtori de rezisten sau de conductan a unor soluii etalon de electrolit cu conducti"itate cunoscut, U @ >. T # S.cm-1 $ 'e o*icei "aloarea lui U este dat !n prospectul aparatului . Spre e%emplu, conducti"itatea soluiilor de G.l la 250 . este dat !n ta*elul de mai -os. .oncentraia molar .onducti"itatea ; -1cm-1; 0n practic se utilizeaz 0,1 0,01299 0,02 0,002769 0,01 0,001C12

conducti"itatea

echi"alent sau cea molar adic

conducti"itatea raportat la numrul de echi"aleni-gram sau de molecule-gram de electrolit !ntr-un cm: de soluie. 1cestea sunt sim*olizate prin `e i `m i pot fi calculate cu relaia ,
`e , m @ c @ .? e ,m

unde

e,m

@ concentraia echi"alent sau cea molar, iar ? este "olumul !n cm:.

Spre e%emplu, fie o soluie molar a unei su*stane care disociaz !n n ioni. +iecare mol din aceasta soluie conine 6,02. 102: molecule i posed o sarcin electric egal cu n. 6,02. 102: .1,6. 10-19 coulom*i sau n +aradaH. )rin definiie o concentraie de 1 /chi"alent reprezint concentraia ionilor poziti"i sau negati"i
27

care au o sarcin electric de 1 +aradaH. 0n e%emplul de mai sus concentraia echi"alent a soluiei este de n /chi"alent ; litru. /%perimental s-a putut demonstra c conducti"itatea echi"alent scade dac concentraia crete i se pot o*ser"a dou tipuri de comportamente care caracterizeaz electroliii tari, respecti" cei sla*i. Ba diluii mari # 1; c

10 C$ ea rm&ne apro%imati" constant i se numete

conducti"itate echi"alent la diluie infinit . /%trapol&nd la origine, la diluie infinit - unde comportamentul tinde s fie ideal - se o*ine conducti"itatea echi"alent limita `0.

` E-1cm-1 F

/lectroliti tari `0 /lectroliti sla*i

.e Eea;lF Fig.<.1. =ependen"a conductivit"ii electrice de concentra"ie pentru electroli"i tari respectiv slabi.

(surarea

conducti"itii

#rezisti"itii$

are

mare

importan

!n

determinarea concentraiei ionilor din plasma sanguin. ?aloarea normal a rezisti"itii plasmei sanguine la temperatura corpului este de 69-79 ohm.cm. I cretere a rezisti"itii a plasmei sanguine, indic o scdere a concentraiei
29

electroliilor din plasm. .oncentraia total a electroliilor din plasma sanguin se poate determina cu a-utorul relaiei, c @
1.6.10 6 E m/a ; litruF #100 0,25.&$

unde este rezisti"itatea electric, iar ) proteinemia !n g;l, care este dat !n funcie de densitatea plasmei !n ta*elul de mai -os. Ta 5*4* ?
'ensitatea g/cm/ 1,016 1,017 1,019 1,019 1,020 1.021 1,022 1,02: 1,02C 1,025 )roteinemia g/l :0,9 :C,: :7,7 C1,2 CC,6 C9,0 51,C 5C.9 59,9 61,7 'ensitatea g/ cm/ 1.026 1,027 1,029 1,029 1,0:0 1,0:1 1,0:2 1,0:: 1,0:C 1,0:5 )roteinemia g/l 65,2 69,9 72,0 75,5 79,9 92,: 95,7 99,2 92,6 96,:

?aloarea normal a concentraiei totale a electroliilor !n plasma este de :10 m/a;l. (surtorile conductometrice efectuate !n legtur cu proprietile electrice ale celulelor sanguine indic o "aloare a capacitii electrice de 1 b+; cm2 i o conductan de C9 mS;cm, iar conducti"itatea citoplasmei este de C mS;cm .

?.1. U(3*39a)5a m4*(3m5()4*43 5*5!()1!+3m3! ; 8H> m$> (5m85)a(4)a A3 !1#"4!(3v3(a(5 B#();4# .3#,4) 3#.()4m5#( ; CONSORT C C0D. Ba acest instrument pot fi conectate simultan un electrod de pX, un electrod redo%, o celul de conducti"itate i un senzor de temperatur. )arametrii tehnici, 'omeniu de masur, 081C pX, c 1000 m?, 08100d., 08100 mS;cm. Dezoluie , 0.01 pX, 1 m?, 1d., 0.1 bS;cm )recizie - pX;m? 8 0.5^ din "aloarea masurat. - conducti"itate- 2^ pe toat scala.
29

.ompensarea temperaturii- automat sau manual !n inter"alul 0-100 d.. .ali*rare 8automat pX 2 puncte i conducti"itate 1 punct Decunoatere tampon 8 pX, 9 "alori preprogramate. 1ccesorii- celul de conducti"itate SG10O electrod de pX S)10O senzor de temperatur S 10N stati" fle%i*il cu *ra. Soluii tampon i pentru cali*rare.

)e cutia aparatului e%ist 5 taste. .u tasta (ode se poate selecta modul de lucru #msurarea conducti"itii, pX, temperatura$ procedura de etalonare i re"enire la modul iniial. Outonul .1B !ncepe sau continu etalonarea sau alegerea unei funcii , sgeile ef se folosesc pentru alegerea manual a unei "alori sau a unei funcii, iar tasta IN;I++ pentru conectarea sau deconectarea aparatului . )e ecran pot aprea c&te"a mesa-e sau coduri de eroare, ; or ; @ depirea scalei , ; cc ; @ constanta celulei !n afara domeniului de msur, ; .1B; @ greeal de etalonare, ; (/(; @ eroare de memorare. Nu se "a introduce celula de conducti"itate i electrodul de pX !n acelai timp !n soluie.

:0

Fig.<.2. Conductometrul C-NS-;T >/?.

?.1.a. M1"4* "5 *4!)4 85#()4 m@.4)a)5a !1#"4!(3v3(@233 : g Se selecioneaz gama de conducti*ilitate aps&nd pe *utonul (ode. g 'up ce s-a splat electrodul cu ap distilat, pe urm cu soluia etalon de 0,01 ( G.l # 1C1:

S; cm $, se cufund apoi electrodul !n aceast

soluie. emperatura soluiei nu are importan, dar totui ea tre*uie s fie cuprins !ntre 0 i :0 grade .elsius. 'ac temperatura este diferit, se compenseaz manual la "aloarea indicat . 1psai apoi tasta .al. g 1paratul "a arta temperatura de referin ; r.20; sau ; r.25 ;.1legei "aloarea dorit i apsai tasta .al. g 1paratul "a indica constanta celulei de e%. ; 1.0C5 ; i se etaloneaz automat c&nd afia-ul este sta*il # adic tasta .al !nceteaz clipirea $. g 'up ce se cltete electrodul cu ap distilat, apoi cu soluia de msurat, se introduce !n soluia de msurat i se citete "aloarea pe ecran. g 'up utilizare, splai electrodul i introducei-l !n ap distilat # adugai puin detergent pentru a conser"a mai *ine suprafaa electrozilor de platin$.

:1

?.1. . M1"4* "5 *4!)4 85#()4 m@.4)a)5a 8H. g Se "a selecta gama de pX cu a-utorul tastei (ode. 1fia-ul "a indica imediat "aloarea msurat la etalonarea precedent. )entru o nou etalonare, se apas tasta .1B. g Se cltete electrodul cu ap distilat i se introduce !ntr-unul din tampoane. g 1fia-ul "a indica unul dintre cele 9 tampoane din memorie, spre e%emplu C.01, !n timp ce indicatorul pX de pe ecran clipete. Se alege cu a-utorul sgeilor tamponul corespunztor i se apas tasta .al. 1paratul "a arta tamponul msurat i se "a cali*ra automat atunci c&nd afia-ul este sta*il#indicaia .al de pe ecran nu mai clipete$. g Se "a clti electrodul cu ap distilat i se introduce !n cel de-al doilea tampon. g 1fia-ul "a indica un nou tampon din memorie #de e%emplu 9.19$ !n timp ce indicatorul pX de pe ecran clipete. Se alege tamponul corespunztor i se apas tasta .al, etalonarea se face automat. g Se cltete electrodul cu ap distilat i se introduce !n soluia de msurat, apoi se citete direct "aloarea de pe ecran. g 'up folosire cltii totdeauna electrozii cu ap distilat i pstrai !n soluie de G.l cu concentraie :...C (. ?.1.!. M1"4* "5 *4!)4 85#()4 m@.4)a)5a m$. g Selecionai gama m? cu tasta (ode. g 'up cltirea cu ap distilat se introduce electrodul !n soluia de msurat i se citete "aloarea pe ecran. g 'up folosire se cltete cu ap distilat i se pstreaz !n soluie G.l :...C (. )entru toate modurile de lucru se poate folosi concomitent senzorul de temperatur. A8*3!a235: 1$ Se pregtete o soluie de G.l 1 n i o soluie de .X :.IIX 1 n, !n ap distilat. 1poi se "or prepara diluiile 0,1Z 0,01Z 0,001 i 0,0001 normal i se "a determina conducti"itatea si pX-ul lor. 'atele se "or trece !n urmtorul ta*el.

:2

Se "a reprezenta grafic conducti"itatea !n funcie de concentraie pentru fiecare soluie. Soluie .oncentraia EnF > E -1 @ SiemensF ` E mS; cmF pX

2$ Se "a calcula concentraia total de electrolii din plasm cunosc&nd "aloarea normal a rezisti"itii electrice a plasmei, conform formulei de mai sus. )roteinemia se determin din ta*elul 5 !n funcie de densitatea plasmei.

::

E. STUDIUL UNEI PILE DE CONCENTRAIE N1234#3 (51)5(3!5 : =n electrod metalic introdus !n soluie apoas ce conine ionii si "a participa la o reacie redo% de tipul , red z e8 V o@ , unde red - atomul neutru, z 8 "alena ionului, e 8 sarcina electronului, o@ 8ionul cu sarcina Vz. 0ntruc&t electronii rm&n !n metal iar ionii trec !n soluie, datorit atraciei electrostatice dintre ei, se formeaz la interfaa metal-soluie un strat du*lu electric. 'iferena de potenial datorit stratului du*lu electric se opune trecerii unei noi cantiti de ioni !n soluie. Sistemul a-unge la echili*ru c&nd tendina de trecere a ionilor !n soluie datorit diferenei de potenial chimic !ntre formele red i o% este anulat de tendina trecerii !n sens opus datorit diferenei de potenial electric.

Fig.A.1. Formarea stratului dublu electric la suprafa"a electrodului metalic

Se poate demonstra #a"&nd !n "edere c potenialul chimic !n faza metalic este egal cu potenialul standard$ c potenialul electric al electrodului metalic !n raport cu soluia se poate calcula cu formula,
/ = /0 + D ln . o@ , unde .o% 8 este concentraia molar a ionilor !n soluie, D 8 z+

constanta uni"ersala a gazelor,

- temperatura a*solut, z- "alena ionului, + 8

:C

numrul lui +aradaH #96500 .;mol$ , /0 8 potenialul electric normal al electrodului #potenialul electric standard dac temperatura este 25<.$. 'oi electrozi identici introdui !n soluii de concentraii diferite, .1o% i .2o%, se "or !ncrca la poteniale diferite, /1 i /2. /1 @ /0 V /2 @ /0 V
D ln .1o% z+ D ln . 2o% z+

Ba punerea !n contact electric a celor dou soluii printr-o punte electrolitic #conin&nd o sare ce disociaz !n ioni cu mo*iliti egale i deci nu produce potenial de difuziune$ !ntre cei doi electrozi apare o diferen de potenial electric, /, / @ /2 8 /1 @
. D ln 2o% z+ .1o%

=n astfel de dispoziti" se numete #ila de concentra(ie datorit faptului c diferena de potenial electric este o consecin a diferenei de concentraie a ionilor !n cele dou soluii. .azul discutat mai sus se refer la trecerea !n soluie a unor ioni poziti"i. 'ac electrodul utilizat se comport re"ersi*il !n raport cu ionii negati"i din soluie diferena de potenial se "a calcula cu aceeai formul doar semnul "a fi schim*at datorit schim*rii polaritii stratului du*lu electric. 0n general se "a putea scrie,

/@

D .2 ln z+ .1
3-3 pentru ionii negati"i.

Semnul 3V4 utiliz&ndu-se pentru ionii poziti"i, iar

rec&ndu-se la logaritmi zecimali se o*ine forma practic a formulei de mai sus,

/@

2,:02

D C2 lg #"olti, ?$ , sau z+ C1
:5

/@

2 :02

D C2 lg #mili"olti, m?$ z+ C1

0n cele ce urmeaz se "a studia potenialul electric generat de o pil de concentraie a ionului .1- din soluiile de G.l, dispoziti" ce se apropie de comportamentul ideal. /lectrozii utilizai sunt fire de argint pe care s-a depus electrolitic un strat de 1g.l #notai pe scurt electrozi 1g;1g.l$ i care sunt re"ersi*ili !n raport cu .l-. /lectrodul introdus !n soluie mai diluat de G.l "a trimite !n faza apoas mai muli ioni .l-, el !ncrc&ndu-se la un potenial poziti" !n raport cu cel aflat !n soluia mai concentrat. 'iferena de potenial, masurat !n m?, "a fi, / @ - 2:02 / @ 2:02
. D lg 2 sau, dup rsturnarea fraciei, z+ .1 . D lg 1 #m?$. z+ . 2

(surarea diferenelor de potenial generate de pilele de concentraie nu poate fi fcut cu instrumente o*inuite datorit faptului c acestea modific stratul du*lu electric de la suprafaa electrozilor prin cantitatea mare de curent ce tre*uie s le str*at. 'in acest moti" se folosesc gal"anometre sau mili"oltmetre electronice care au rezistena de intrare suficient de mare. Ma(5)3a*5 #5!5.a)5 (ili"oltmetrul cu afisa- digital, 2 electrozi 1g;1g.l montai pe supori ce se pot deplasa "ertical pe stati"e, 2 pahare Oerzelius de 50 ml, f&ii de h&rtie de filtru #ca puni electrolitice$, soluie de G.l cu concentraia 1h2 moli;litru, cilindru gradat de 50 ml, ap distilat. D5.!)35)5a a8a)a(4)33 'ispoziti"ul e%perimental este realizat pe dou stati"e "erticale !n lungul crora pot fi deplasate suporturile pe care sunt fi%ai cei doi electrozi i de care pot fi prinse cu cleme paharele Oerzelius conin&nd soluiile de lucru. )rimul pahar
:6

Oerzelius "a conine soluia de G.l nediluat, de referin, cu concentraia pe care o "om nota .1 i care rm&ne nemodificat pe tot cursul e%perienei. 1l doilea pahar Oerzelius "a conine soluii de concentraie "aria*il, . 2, o*inute prin diluarea progresi" a soluiei de referin. )rin co*or&rea suporilor, electrozii /l 1 i /l2 pot fi introdui !n soluiile respecti"e. )untea electrolitic, ), dintre cele dou soluii este realizat cu o *and de h&rtie de filtru. .a*lurile electrozilor /l1 si /l2 "or fi cuplate la *ornele ireferinj i respecti", imsurarej ale mili"oltmetrului sau pX-metrului. 0n cazul utilizrii unui pX-metru *utonul de comutare m?-pX se "a pune !n poziia im?j.

Fig.A.2. ;epre$entarea sc%ematic a dispo$itivului e@perimental pentru o pil de concentra"ie.

:7

Fig.A./. Bultimetre digitale utili$ate pentru )nregistrarea diferen"ei de poten"ial electric produs de o pil de concentra"ie.

M1"4* "5 *4!)4 Se cupleaz mili"oltmetrul la reea i se pornete urmrindu-se aprinderea ecranului de afia-. Nu se "a da importan "alorilor indicate de aparat at&ta timp c&t electrozii nu sunt introdui !n soluie iar puntea electrolitic nu este instalat !ntre cele dou "ase cu soluie. 0n am*ele pahare, dup ce !n preala*il au fost splate cu ap distilat, se introduce soluie de concentraie .1. )aharul nr1 se "a prinde cu o clema pe stati"ul din st&nga, !n el "a fi introdus electrodul /l 1 i "a fi meninut astfel p&n la sf&ritul determinrilor. 0n paharul nr.2, prins de stati"ul din dreapta, "a fi introdus electrodul /l2 i cu o *anda de h&rtie de filtru se "a face legtura cu "asul nr.1. Andicaiile aparatului se "or sta*iliza !ntr-un inter"al de timp 1-2 minute. 'ac !ntregul sistem funcioneaz corect diferena de potenial afiat de aparatul de msur este nul, sau difer cu cel mult 5 m?. ?om nota aceast "aloare /1. 0n continuare, se poate scoate electrodul /l 2 din "asul nr2 i din soluia ce o conine se prepar, prin diluare k, 50 ml soluie de concentraie .2 @ .1;2 #25 ml soluie inial V 25 ml ap distilat$. 1ceasta se reintroduce !n "asul nr.2 dup cltirea lui cu ap. Se repet msurarea diferenei de potenial o*in&ndu-se "aloarea /2. Se procedeaz ca i mai sus, !n mai multe r&nduri, dilu&nd succesi" soluia din "asul nr.2, astfel !nc&t s se o*in "alorile pentru potenialele / C, /9, /16, /:2 ...
:9

corespunztoare unor soluii din "asul nr.2 de concentraii . 1;C, .1;9, .1;16, .1;:2,... /ste foarte important ca la fiecare msurtoare s se schim*e puntea de h&rtie de filtru dintre "ase. 1ltfel e%ist riscul falsificrii rezultatelor prin modificarea concentraiilor din acest "as. )rezentarea rezultatelor i calcule,
.2 .1;.2 lg .1;1 1 .1;2 2 0,:01 .1;C C 0,602 .1;9 9 0,90: .1;16 16 1,20C .1;:2 :2 1,505 .1;6C 6C 1,906 .1;129 129 2,107

C1 C2
I

0,00 /n#m?$

Se "a reprezenta grafic dependena potenialului pilei de concentraie, /, !n funcie de lg #.1;.2$ tras&ndu-se dreapta care apro%imeaz cel mai *ine punctele o*inute e%perimental. .u a-utorul graficului se sta*ilesc "alorile pentru panta e%perimental a dreptei Te, Te@
/ llg#.1 ;. 2 $

/cuaia drepetei e%perimentale cu "alorile astfel gsite se "a scrie su* formula, / @ /0 V Te lg #.1;.2$ 1ceast ecuaie "a fi comparat cu cea teoretic, / @ Tt . lg #.1;.2$ unde Tt @ msurtori fcute !n m?. 1stfel se poate aprecia c&t de aproape de comportamentul ideal este pila studiat. 1ceast apropiere este cu at&t mai mare cu c&t / 0 #potenialul datorit asimetriei !n funcionarea electrozilor$ este mai redus i cu c&t panta e%perimental Te se apropie mai mult de "aloarea calculat pentru panta teoretic Tt.
2 :02 D +

este panta teoretic pentru

:9

III. PROPRIETI OPTICE ALE LICHIDELOR 7IOLOGICE

F. DETERMINAREA INDICELUI DE REFRACIE AL UNEI SOLUII CU AJUTORUL REFRACTOMETRULUI A77E

N1(34#3 (51)5(3!5. )e*rac(ia luminii reprezint fenomenul de trecere a undei luminoase dintr-un mediu optic cu indicele de refracie n1 !ntr-un alt mediu optic cu indicele de refracie n2, cu schim*area direciei de propagare. Deprezent&nd raza de inciden #1$, raza refractat #2$ i not&nd, - iC unghiul de inciden, format de raza incident cu normala !n punctul de inciden la suprafaa de separare dintre cele dou medii - rC unghiul de refracie, format de raza refractat cu normala, putem afirma c raza incident, raza refractat i normal la suprafa sunt coplanare i are loc relaia , n1 sin i @ n2 sin r

C0

Fig. D.1. Fenomenul de refle@ie' refrac"ie *i refle@ie total a luminii.

D3.!4233: 1. dac n2[n1 atunci r \ iZ raza refractat se apropie de normal 2. dac n2\n1 atunci r[iZ raza refractat se deprteaz de normal :. la suprafaa de separare dintre dou medii transparente au loc simultan fenomene de refle%ie i de refracie a luminii. C. atunci c&nd n2\n1 notm cu l unghiul limita @ unghiul format de raza incident pentru care unghiul de refracie este r @ 90 d @[ n1sin l @ n2 'ac lumina trece din mediul 1 !n mediul 2 i n1[n2 atunci e%ist relaia sin 1 @ n2 ; n1 , relaie ce poate ser"i la aflarea unuia din cei doi indici de refracie dac se cunoate cellalt i se msoar unghiul limit, 1. )e acest principiu este construit refractometrul 1**e cu a-utorul cruia se poate citi direct indicele de refracie al unui lichid #dup ce s-a adus !n dreptul unui reper fi% zona de delimitare lumin 8 !ntuneric ce apare atunci c&nd radiaiile se propag !n condiiile refraciei la unghiul limit$. 'eterminrile refractometrice ne dau informaii preioase i !n legtur cu structura unor su*stane, cum ar fi de e%emplu cele organice. Defracia specific i refracia molecular a unei su*stane sunt mrimi fizice importante care pot caracteriza din punct de "edere optic un lichid *iologic. /a se poate calcula cu a-utorul relaiei lui Borenz,
C1

Ds@

n 2 1 1 i n2 + 2 d

rm @ rs P(

!n care n este indicele de refracie iar d este densitatea. )rodusul dintre refracia specific i greutatea molecular ( a unei su*stane se numete refrac"ie molecular. 1ceast mrime este i ea o caracteristic molecular a fiecrei su*stane, "aloare ei depinz&nd de starea de agregare a su*stanei respecti"e. Defracia molecular !n cazul su*stanelor organice este egal cu suma refraciilor atomice i a refraciilor legturilor, precum i a grupelor coninute de molecul. Defractometria ca metod de lucru are urmtoarele a"anta-e, se lucreaz cu o cantitate infim de su*stan #1-2 picturi$, este o metoda rapid i foarte precis #se poate citi indicele de refracie cu o precizie de C zecimale$. .unosc&ndu-se indicele de refracie, se poate determina concentraia soluiilor studiate# !n cazul la*oratorului clinic -concentraia proteinelor !n lichidele *iologice$. A8a)a(4)a, Defractometrul de tip 1OO/-.on"e% are urmtoarele pri componente, 1. Icular, mrire optic :0m. 2. 'ispoziti" de deschidere;!nchidere a prismei. :. Iglinda reflectatoare. C. Antrare pentru msurarea temperaturii apei de rcire #dac este cazul$. 5. Antrare pentru luminarea prismei. 6. Antrare pentru sistem de termostatare. 7. )risma superioar. 9. 'ispoziti" pentru controlul dispersiei. 9. 'ispoziti" de a-ustare 8msurare. 10. Outon pentru compensarea culorii. 11. Antrare pentru msurarea temperaturii pro*ei cu termometrul digital. 12. Outon de cali*rare.
C2

1:. Degla-ul luminozitii scalei de msurare.

Fig. D.2. ;efractometrul !00E' tip C-N,EF. C:

)artea principal a refractometrului 1**e se compune din dou prisme, una pentru msurare i cealalt pentru iluminare, care se pot *loca cu a-utorul unui uru*. )rin intermediul unui tam*ur se poate deplasa *locul prismelor astfel ca !n c&mpul "izual al lunetei s ne apar o imagine pe -umtate iluminat i a crei limit de separaie !ntre zona iluminat i cea !ntunecat s fie plasat e%act la !ncruciarea celor dou fire reticulare.
Fig. D./. !spectele privind punerea la punct 5a) *i citirea indicilor de refrac"ie 5b) pentru refractometrul !bbe.

'eoarece se lucreaz cu lumina al* #lumina policromatic$ pentru a se !nltura fenomenele de dispersie ce pot aprea #i care ar determina erori de msurare datorit imposi*ilitii o*inerii unei limite de separaie nete$ se utilizeaz o prism suplimentar care se poate roti cu a-utorul unui dispoziti" situat lateral, acest dispoziti" numindu-se icompensatorj. .u a-utorul lunetei se poate citi direct indicele de refracie al su*stanei studiate, dar i concentraia procentual. M1"4* "5 *4!)4 0nainte de msurtoarea propriu zis tre*uie fcute c&te"a teste de cali*rare. Se deschide intrarea prismei superioare #5$ i se !nchide oglida reflectatoare #:$. Se acioneaz tam*urul de compensare a culorii #10$ p&n c&nd culorile rou i al*astru dispar complet. (etoda de cali*rare utiliz&nd ap distilat, Se deschide prisma superioar, se pipeteaz 2-: picturi de ap i apoi se !nchide. 'ac temperatura !nregistrat este de 20d., indicele de refracie ar tre*ui s fie 1,:::0. 0n caz contrar, se acioneaz tam*urul #9$ p&n c&nd scala indic "aloarea menionat. 'e asemenea
CC

se acioneaz *utonul de cali*rare p&n c&nd limita de separare lumin-um*r corespunde cu intersecia firelor reticulare. .ali*rarea odat fcut, se poate proceda la msurtorile propriu zise, determin&nd pentru diferite lichide *iologice at&t indicele de refracie #cu precizie de patru zecimale$ c&t i concentraia procentual. 'ac msurtoarea se face la temperaturi mai mari sau mai mici de 20d. tre*uie fcut o corecie a rezultatului. 0n ta*elele urmtoare sunt trecute coreciile care tre*uie fcute !n funcie de temperatur i c&te"a "alori ale indicelui de refracie pentru unele su*stane de referin.

0n figura alturat sunt prezentate dou tipuri de refractometre porta*ile care permit msurtori rapide i uoare, ideale pentru determinarea concentraiei procentuale !n scala Ori%. Scala de msurare Ori% arat concentraia procentual a unor su*stane solide dizol"ate !n ap, fiind cali*rat la cantitatea de zahr #trestie de zahr$ !n grame, coninut !n 100g de ap. 'eci c&nd se msoar o soluie care conine zahr, scala Ori% indic e%act concentraia real.

C5

.alcule i prezentarea rezultatelor Idat citite "alorile indicelui de refracie i ale concentraiei, cu a-utorul formulelor anterioare se calculeaz refracia molecular i refracia specific pentru fiecare pro*. 0n cazul soluiilor proteice, concentraia se "a determina din ta*elele puse la dispoziie. Dezultatele se trec !n ta*elul urmtor, Nr. sol. # .oncentraia proteine serice d #Tg;m:$ Defracia specific ). Defracia molecular )m

C6

C. DETERMINAREA CONCENTRAIILOR SOLUIILOR OPTIC ACTI$E CU POLARIMETRUL N1234#3 (51)5(3!5 .onform legilor electro-magnetismului o pertur*aie electromagnetic aprut !ntr-o regiune a spaiului de"ine iz"orul altor pertur*aii de aceeai natur !n poriunile !n"ecinate !n spaiu - apare astfel o und electromagnetic care se "a propaga cu "iteza luminii. Begile generale ale micrii ondulatorii se refer !n aceeai msur at&t la undele longitudinale c&t i la cele trans"ersale. ?i*raiile longitudinale sunt simetrice fa de direcia de propagare, adic aciunea lor asupra unui aparat receptor oarecare nu se schim* dac acest aparat este rotit !n -urul direciei de propagare. 0n cadrul undelor trans"ersale condiiile de aciune ale undei asupra aparatului pot fi diferite, dup cum "i*raiile trans"ersale sunt surprinse !ntr-un plan sau !ntr-altul, care trece prin direcia de propagare. 'in teoria electromagnetic a luminii rezult ca undele luminoase sunt trans"ersale. 0ntr-ade"r, toate legile electromagnetismului duc la concluzia c "ariaia !n timp a intensitii c&mpului electric / este !nsoit de apariia unui c&mp magnetic-alternati" X , orientate perpendicular unul !n raport cu cellalt. =n asemenea c&mp electromagnetic alternati" nu rm&ne fi% !n spaiu, ci se propag cu "iteza luminii de-a lungul unei linii perpendiculare pe "ectorii / i
X , gener&nd unde electromagnetice, unde de lumin. 0n felul acesta cei trei

"ectori X , / i "iteza de propagare " , sunt perpendiculari !ntre ei, cu alte cu"inte direciile "ectorilor / i X sunt perpediculare pe direcia de propagare, adic unda electromagnetic este trans"ersal. 0n fiecare caz dat e%ist o anumit

C7

orientare i prin urmare raza luminoas nu reprezint a%a de simetrie a undelor electromagnetice. I asemenea simetrie este caracteristic undelor trans"ersale. ?om !nelege prin lumina natural acea lumin !n care "om !nt&lni toate orientrile posi*ile ale "ectorului / # i prin urmare i ale lui X $. Bumina !n care / , la fel i X !i pstreaz o singur direcie, o "om numi lumina polarizat. )lanul care trece prin direcia de propagare i care cuprinde "ectorul electric, se numete plan de "i*raie al luminii polarizate, iar planul !n care se gsete "ectorul magnetic i direcia de propagare se numete plan de polarizaie.

Fig. >.1. &lanurile de vibra"ie *i de polari$a"ie in ca$ul luminii polari$ate.

+enomenul de polarizare al luminii, adic selecionarea undelor de lumin cu o anumit orientare a "ectorului electric /, are loc prin refle%ia sau refracia luminii la suprafaa de separare a doi dielectrici izotropi sau prin du*la refracie c&nd lumina trece printr-un cristal anizotrop. =n sistem este izotrop dac toate proprietile sale sunt identice dup oricare din direciile spaiului, iar un sistem "a fi anizotrop dac proprietile lui depind de direcia dup care are loc fenomenul. Noi "om studia du*la refracie #sau *irefringena$ ce are loc la trecerea luminii printr-un cristal de spat de Aslanda #.a.I :$ care cristalizeaz !n sistemul rom*oedric. 'ac pe un asemenea cristal cade un fascicul de lumin, dup refracie el "a da natere la dou fascicule, a"&nd direcii diferite. .hiar dac unghiul de inciden este nul, fascicolul refractat este du*lu. Daza care se propag !n continuarea fascicolului incident se numete raza ordinar

C9

H E

v +ig.,.2. -scila"iile vectorului electric )n ca$ul luminii plan8polari$ate 5sus) *i circular polari$ate 5:os)

iar cea de a doua, raza e%traordinar. 'ac studiem cele doua raze emergente constatm c am*ele sunt polarizate, i anume !n planuri perpendiculare !ntre ele.

+ig.,.3 &olari$area luminii prin spat de GslandaC cele dou prisme sunt lipite cu balsam de Canada' ansamblul constituind un NGC-H ;-8;a$a ordinar ;E8;a$a e@traordinar polari$at )n planul figurii.

C.1. M5(1"5 18(3!5 !a)5 4(3*395a9@ *4m3#a 81*a)39a(@ Ra"3a23a 8*a# A3 !3)!4*a) 81*a)39a(@ Dadiaia electromagnetic reprezint o und ai crei "ectori electric # E$ i magnetic #H$ oscileaz perpendicular pe direcia de propagare i sunt orientai reciproc perpendicular. +rec"ena oscilaiei, , reprezint numrul de oscilaii pe
C9

secund. Humina nepolari$at sau natural conine cuante ai cror "ectori au orientrile distri*uite aleator, nee%ist&nd un mod pri"ilegiat de oscilaie. Humina plan8polari$at este cea !n care "ectorul electric, respecti" magnetic, oscileaz fiecare doar !ntr-un singur plan. Bumina circular polarizat are caracteristic faptul c "ectorul electric, respecti" magnetic, rm&n constani !n modul dar descriu fiecare o traiectorie elicoidal #+ig.5$, cu rotaii pe secund. 'up sensul !n care "&rful "ectorului parcurge elicea #atunci c&nd pri"im spre surs$, lumina poate fi circular polarizat spre st&nga #sens trigonometric sau antiorar$ ori spre dreapta #sens antitrigonometric sau orar$. Bumina plan-polarizat poate fi considerat ca fiind rezultatul compunerii "ectoriale a dou unde coerente, cu aceeai amplitudine, circular-polarizate una spre st&nga i una spre dreapta.

Im81)(a#2a .(4"33*1) B# *4m3#@ 81*a)39a(@ Singura interac"iune fi$ic care depinde e@plicit de asimetria structurii moleculelor este interac"iunea cu radia"ia polari$at. 1simetria structurii tre*uie !neleas !n sens general, aici intr&nd, asimetria distribu"iei de sarcin #dipolii electrici permaneni$Z asimetria )n dislocrile sarcinilor sub influen"a c#mpului electric e@terior #polariza*ilitate asimetric$Z asimetria )n mi*carea electronilor pe orbitalii de valen" #3atomi asimetrici4$Z etc. 0n plus, fa de studiile !n lumin nepolarizat, interac"iunea luminii polari$ate cu moleculele ofer informa"ii de natur geometric #orientare, distribu"ie, ordonare, suscesiune$ asupra unor legturi sau $one din molecule. C.2. A .1) 23a *4m3#33 81*a)39a(5 .a !n orice metod de spectroscopie de a*sor*ie, lungimile de und alese se afl )n domeniile ben$ilor de absorb"ie ale legturilor.
50

0n cazul luminii polarizate, interaciunea "ectorului electric "a depinde de orientarea dipolilor a*sor*ani i de geometria or*italilor pe care sunt distri*uii electronii !n -urul atomilor. 1*sor*ia luminii polarizate are particulariti e%ploatate de tehnicile de dicroism linear 8 )n ca$ul utili$rii luminii plan polari$ate i dicroism circular 8 )n ca$ul celui circular polari$ate. C.2.1. D3!)13.m4* *3#5a) GDLH repre$int fenomenul prin care o prob strbtut de o radia"ie policromatic linear polari$at )*i sc%imb culoarea odat cu rotirea planului de polari$are. /l se datorete a*sor*iei unor radiaii cu lungimi de und diferite, dac planul luminii polarizate !i schim* orientarea fa moleculele aezate ordonat. &entru punerea )n eviden" a DL este nevoie ca moleculele din prob s fie aran:ate )n acela*i fel. 1ran-amentul ordonat este aproape perfect !n cristale, dar o*inerea acestora, !n cazul macromoleculelor, nu este o sarcin uoar. 0n dielectrici, o orientare *un poate fi o*inut cu a-utorul c&mpului electric, dac moleculele au momente dipolare. Dezult o aran-are mulumitoare a macromoleculelor fi*rilare sau alungite !n lichide !n curgere sau prin perierea !ntr-o singur direcie a unei soluii "&scoase, p&n se usuc. /%istena dicroismului linear, i mrimea lui, dac moleculele sunt orientate preponderent cu dimensiunea mare !n lungul unei a%e, notate cu %, se e%prim prin "aloarea raportului dicroic, d.

"=

E II E E II + E

unde EII este e%tincia pro*ei c&nd planul luminii polarizate este paralel cu a%a %, iar E este e%tincia gsit c&nd planul luminii poalarizate este perpendicular pe a%a %. ?alorile diferite de zero ale raportului dicroic semnaleaz e@isten"a unor asimetrii moleculare, iar graficului d#$ poate furniza date asupra naturii acestor asimetrii #gruprile, legturile sau conformaiile ce o produc$.
51

DL este utili$at curent )n scopul stabilirii orientrilor diferitelor legturi

1? 1D ? D K? K1D K1? 2<D 2ED 2CD #nm$ F3,. C.<. 'icroismul circular la AMP. AMP #monomer$

polimer !nalt

dimer

din structura moleculelor. 0n acest fel s-au putut descifra orientrile legturilor de hidrogen !n structurile ; heli% #paralel cu a%ul lanului polipeptidic$ i ; foaie plisat #perpendicular pe lan$. DL poate fi o*ser"at i !n =?, pentru lumina polarizat a"&nd din

*enzile de a*sor*ie ale du*lelor legturi con-ugate ale aminoacizilor aromatici sau ale *azelor azotate. 1stfel, poate fi determinat orientarea planurilor *azelor azotate fa de a%ele elicilor du*le ale acizilor nucleici. C.2.2. D3!)13.m4* !3)!4*a) GDCH este fenomenul prin care radia"iile monocromatice, circular polari$ate )n sensuri opuse, sunt absorbite diferit de ctre moleculele substan"ei. DC, la o lungime de und dat, se e"alueaz, cel mai simplu, prin diferena dintre e%tinciile unei pro*e msurate pentru lumina circular polarizat spre st&nga #EL$ i spre dreapta #ERH, EG $ J EL K ER /%primarea se poate face i pe *aze molare, !n funcie de coeficienii molari de e%tincie, #$ J L K R #(81cm81$

52

+enomenul de a*sor*ie !n =? - ?AS se datorete e%citrii electronilor. 0n cazul structurilor asimetrice, ei oscileaz pe traiectorii elicoidale. 1*sor*ia !n "ecintatea lungimii de und de rezonan # 1$ "a fi alta dac sensul elicii traiectoriei este acelai cu cel al elicii radiaiei considerat !n sensul de propagare 1, sau !n sens contrar. 'e aceea =& se manifest intens )n domeniile ben$ilor tran$i"iilor electronice. 0n funcie de lungimile de und la care I I are "alori ma%ime se poate studia energetica legturilor, iar graficul lui # $ d informaii asupra asimetriei distribu"iei structurilor ce le conin. +iecare *and de DC este sensi*il at&t la strucura macromoleculelor, c&t i la toi factorii care interacioneaz cu tranziiile electronilor din legturi. #+ig. 6$ C.0. R1(3)5a 8*a#4*43 *4m3#33 81*a)39a(5 este rezultatul 3acti"itii optice4 a unor su*stane care au molecule asimetrice. !ctivitatea optic se studia$, de obicei, )n domenii spectrale )ndeprtate de ben$ile de absor"ie ale substan"elor . =eci ea nu se datore*te absorb"iei luminii ci se e@plic prin vite$ele de propagare diferit a radia"iilor circular polari$ate )n sensuri opuse. 1simetria molecular cea mai rsp&ndit este cea datorit atomilor de car*on asimetrici. 0n cazul macromoleculelor, asimetria se poate datora i structurilor secundare #elici rotite spre dreapta sau st&nga$ sau teriare, c&nd radicali simetrici se plaseaz !n medii asimetrice - cu c&mpuri locale intense. ;otirea planului luminii polari$ate apare ca urmare a faptului c , )n $onele asimetrice, electronii e@ecut mi*cri pe traiectorii elicodale ce pot fi rsucite - fie spre st#nga, fie spre dreapta. .onsider&nd c lumina plan-polarizat este compus din dou componente circular polarizate !n sensuri opuse, propagarea uneia "a fi fa"orizat fa de cealalt. ?itezele celor dou componente !ntr-un astfel de mediu "or fi inegale i, la ieire, cei doi "ectori electrici "or a"ea !nt&rzieri diferite. 0n final, rezultanta compunerii lor "a fi rotit fa de poziia ce o a"ea la intrarea !n mediu.
1

re*uie notat c sensul rotirii elicii luminii circular polarizate, luat !n sensul de propagare, este in"ers celui considerat uzual, adic atunci c&nd pri"im spre surs.

5:

1cti"itatea optic a polimerilor difer de cea a monomerilor din care pro"in i este posi*il ca un polimer, datorit structurii sale, s ai* acti"itate optic fr a conine momomeri optic acti"i. C.0.1. D3.85).3a 18(3!@ )1(a(1)35 GDORH este fenomenul de dependen" a ung%iului de rota"ie specific [ ]G $, de lungimea de und, , a radia"iei plan8 polari$ate. .u alte cu"inte, dac un fascicol de lumin policromatic, polarizat, str*ate o pro*, componentele monocromatice ale fascicolului le "om gsi rotite fiecare cu un alt unghi #dispersate rotator$. /fectele rotatorii se manifest p&n departe de lungimile de und ale *enzilor de a*sor*ie. 'eci acolo unde a*sor*ia luminii i DC sunt a*sente. >raficele DOR, ca i cele DC> depind de asimetria local a $onelor )n care se afl electronii ce pot e@ecuta tran$i"ii. Scopul trasrii lor este de a identifica i e%plora astfel de zone, interaciunile dintre ele, sau suscepti*ilitatea lor la factorii de mediu.

P)3#!3834* *4!)@)33:

5C

.u a-utorul luminii polarizate se pot determina rapid i destul de e%act, !n la*oratorul clinic, concentraiile unor soluii ale cror su*stane au proprietatea de a roti planul de polarizare al luminii. Su*stanele care au aceast proprietate se numesc optic8active i se !mpart, !n fucie de sensul !n care rotesc planul luminii polarizate, !n, ile"ogirej, cele care rotesc planul luminii polarizate !nspre st&nga, se
[] heli% L foaie plisata

noteaz cu semnul minusZide%trogirej, cele care-l rotesc !nspe dreapta, se noteaz cu semnul plus.

K 2DD
li$ina.

ghem haotic 22D 2<D #nm$

F3,.C.<.1. 'ispersia optica rotatorie la poli8B8

)roprietatea aceasta de a roti planul luminii polarizate se datorete structurii asimetrice a su*stanelor organice de o*icei, conin&nd unul sau mai muli atomi de car*on aezai asimetric #un atom de car*on cu cele patru "alente satisfcute de patru radicali diferii$. 0n cazul soluiilor preparate cu a-utorul unei su*stane optic acti"e, unghiul

cu care "a fi rotit planul luminii polarizate "a depinde de urmtorii factori, de
concentraia soluiei,C deci de densitatea d a soluiei, de grosimea stratului de lichid str*tut de lumina polarizat @#dm$, de lungimea de und a luminii utilizate, precum i de temperatura soluiei. Bumina polarizat se o*ine cu a-utorul unui cristal anizotrop care prezint fenomenul de *irefrigen.

55

otodat, unghiul cu care este rotit planul de polarizare mai depinde i de natura su*stanei componente a soluiei, caracterizat cu a-utorul mrimii E F care se mai numete iunghi de rotaie specificj. 'eoarece rotaia specific "ariaz cu temperatura i cu lungimea de und a luminii, s-a con"enit ca s se standardizeze pentru lumina gal*en a sodiului i pentru temperatura V20<., aceast "aloare standard not&ndu-se cu E F 20 . 'eci o soluie "a roti planul de polarizare al luminii cu unghiul
Na

i care are "aloarea,

E F

Na

d @ c 20 100

formula care permite aflarea concentraiei soluiei studiate. A8a)a(4)@ 1paratul cu a-utorul cruia se determin unghiul cu care este rotit planul luminii polarizate se numete polarimetru i este compus, !n principiu, din urmtoarele pri, o surs de lumin S, un nicol polarizator N), un tu* !n care se pune soluia de analizat, un nicol analizator N1 mo*il, care se poate roti la dreapta sau la st&nga #corespunztor su*stanelor de%trogire sau le"ogire$ i care este cuplat la un dispoziti" mecanic de citire a unghiului

pre"zut cu un "ernier circular sau

ocular ', !n care o*ser"atorului !i apare c&mpul ocular .I ce are o zon "ertical central n.. Nicolii sunt astfel construii !nc&t raza ordinar DI care apare !n urma fenomenului de *irefrigen s se reflecte total pe suprafaa ce separ prismele nicolului.

F3,.C.E Sc%ema polarimetrului.

56

+ig. ,.-. .olarimetrul .olaris 8 pri componente, 1. 2. :. C. 5. 6. 7. 9. 9. Icular Bupa pentru citirea "alorii unghiului de rotaie 5uru* de control 5uru* pentru focalizare. Scala i "ernierul pentru citirea unghiului de rotaie .ompartiment !n care se introduce tu*ul cu pro*a +iltru de sticl Bampa de sodium .omutator de pornire 8 oprire.

57

M1" "5 *4!)4: 0n lucrarea de fa "om studia concentraia !n glucoz a unor soluii dup formula urmtoare,
100 Na .@ EF d @ c !n ^ 20

)entru msurarea unghiului J se procedez astfel, Se umple tu*ul *une condiii. Se introduce apoi tu*ul !n polarimetru i se rotete nicolul analizor cu a-utorul uru*ului micrometric p&n ce zona central n. apare egal !ntunecat cu cele dou c&mpuri laterale. 'eci se lucreaz !n condiiile e%tinciei ma%ime ce se o*ine atunci c&nd cei doi nicoli ai polarimetrului sunt aezai i!n crucej. Se citete unghiul iniial, notat cu , cu o precizie de 0,05< utiliz&nd "ernierul cu care este pre"zut aparatul. Se !nlocuiete apa din tu* cu soluia de analizat, se realizeaz prin rotirea uru*ului micrometric o iluminare uniform a c&mpului .I. Se citete noul unghi indicat de aparat, notat cu . I*ser"aie. Iperaiile de egalizare a c&mpului i de citire a unghiului se realizeaz at&t pentru soluie c&t i pentru ap de cel puin 5ori, !n calcule lu&ndu-se media "alorilor unghiurilor, notate . cu ap distilat astfel !nc&t s nu conin *ule de aer i se terg ferestrele de sticl de la capetele tu*ului pentru ca imaginea s se "ad !n

59

a.

*.

Nicoli paraleli

Nicoli !n cruce

Fig.>.>.a) Bersul ra$elor de lumina prin polarimetru c#nd nicolii sunt a*e$a"i K)n cruceL. b) !spectul c#mpului luminos observat prin polarimetru )n fuc"ie de po$i"ia nicolului anali$ator )n raport cu cel polari$ator.

Fig. >.M. Citirea ung%iului cu a:utorul vernierului circular.

= 1 + @

% @ 0,:0 @ 1,:0

59

.alcule i prezentarea rezultatelor .unosc&nd "alorile pentru unghiurile medii i , se calculeaz unghiul cu care rotete soluia planul luminii polarizate astfel,
=

1poi, se calculeaz concentraia procentual a soluiei, care !n cazul de fa este glucoza pentu care E F 20 @ 52.9<. Ba efectuarea calculelor se "a ine cont c !n formula de mai sus, densitatea d este msurat !n g;cm: iar lungimea stratului de soluie #a tu*ului ce o conine$ , @, este e%primat !n decimetri #dm$. Dezultatele o*inute se trec !n ta*elul urmtor, Soluia
Na Na

E F 20

@ #dm$ 1

d #g;cm:$

. #g^$

>lucoza 52.9

M. MICROSCOPIA OPTIC

60

M.1. S(4"34* m3!)1.!184*43 18(3!. (icroscopul optic este utilizat at&t !n domeniul cercetrilor medicale c&t i !n analize uzuale de la*orator. 1cest instrument optic poate da imagini clare ale unor formaiuni celulare cu dimensiuni p&n la apro%imati" 0,15 bm. 'eterminarea acestor dimensiuni are o importan deose*it !n e%plorrile clinice i de la*orator. .u a-utorul microscopului optic se pot face analize ale lichidului cefalorahidian #B.D$, a urinii, a s&ngelui etc. E@empluC 'eparta-&nd eritrocitele !n funcie de diametrul lor mediu, se o*ine cur*a )rince-_ones pentru s&nge nomal, iar comparati" cu acesta se pot depista diferite afeciuni. Anstrumentele optice dau imagini clare, !n care se pot distinge amnunte ce nu pot fi o*ser"ate cu ochiul li*er. 'in punct de "edere tehnic un instrument optic este un asam*lu de lentile, oglinzi i diafragme, a%ele optice ale prismelor tre*uind s coincid cu a%ul geometric al instrumentului. 0n funcie de natura imaginii, instrumentele optice se !mpart !n, -instrumente optice cu imagini reale cum sunt ochiul, aparatul fotografic, aparatul de protecieZ -instrumente optice care dau imagini virtuale i sunt folosite pentru e%aminarea direct a o*iecti"elorZ astfel de instrumente sunt, luneta, microscopul optic, lupa. (icroscopul optic este destinat o*ser"rii unor pro*e #frotiuri$ a cror dimensiuni pot atinge 0,15bm. 1cest instrument are trei pri principale, mecanic, optic i dispoziti" de iluminare.

M.2. C1m81#5#(5*5 4#43 m3!)1.!18 !4 *4m3#@ ()a#.m3.@

61

)rincipiul care st la *aza construciei oricrui microscop !l constituie proprietatea lentilelor optice de a produce refracia razelor luminoase care le tra"erseaz, form&nd astfel o imagine real sau "irtual. Ba microscopul optic, o*iecti"ul formeaz o imagine mrit, real i in"ersat specimenului. Icularul preia aceast imagine i o transform !ntr-o imagine mrit, "irtual i dreapt !n raport cu prima. 1stfel, imaginea final dat de microscop este "irtual, rsturnat i mrit. M.0.C1m81#5#(5*5 m5!a#3!5 a*5 m3!)1.!184*43 (icroscoapele optice moderne sunt alctuite dintr-o parte mecanic ce cuprinde, piciorul microscopului, msua sau platina cu sistemele ei de deplasare a preparatului i tu*ul microscopului, care poate fi deplasat !n plan "ertical cu a-utorul unor angrena-e. .iciorul sau tal#a microscopului, este o component care confer sta*ilitate aparatului. Ba microscoapele moderne talpa microscopului se afl !ncorporat !n sursa de lumin. &oloana sau m/nerul0 microscopul se articuleaz fi% sau mo*il cu piciorul. 1su(a sau #latina , perpendicular pe coloan, ser"ete ca suport pentru preparat. 1cesta din urm se imo*ilizeaz pe platin prin dou lame metalice numite vale"i sau cavaleri. )latina este pre"zut cu un dispoziti" special numit car mo*il care, acionat de dou uru*uri coa%iale, permite deplasarea fin a preparatului. 2ubul microsco#ului are la partea superioar ocularele, iar la partea inferioar, re"ol"erul cu o*iecti"ele. Ba microscoapele moderne, !n tu*ul optic se afl interpus lupa *inocular, care conine un sistem de prisme pentru distri*uirea imaginii la cele dou oculare. )evolverul, format din dou discuri metalice suprapuse, cel inferior mo*il, aduce prin rotirea o*iecti"ului dorit !n a%ul optic. 3is#o%itivul de punere la punct a imaginii este alctuit din "iza macrometric care se folosete pentru prinderea grosier a imaginiiZ iar "iza micrometric 8 prin micri fine, permite clasificarea imaginii.
62

?izorul I*iecti"e Outon reglare fina imagine Outon pornit; oprit Suportul 'iafragma Oaza de susinere .orpul "izorului I*iecti"e finale Suport prindere cu lamele 'ispoziti" fi%are imagine Outon reglare imagine Irificiu # deschidere $ Ora Sursa de lumina
Fig.M./. Bicroscopul optic

M.<.C1m81#5#(5*5 18(3!5 a*5 m3!)1.!184*43 1ceste componente cuprind piese de calitatea crora depind performanele ce pot fi o*inute !n e%aminarea unui preparat. 1ceast component este alctuit din oculare, o*iecti"e i sistemul de iluminare. 4biectivele sunt constituite dintr-un sistem de lentile care sunt destinate s funcioneze !n imediata "ecintate a preparatului. Singura lentil care formeaz imaginea se afl la partea inferioar a o*iecti"ului i se numete lentila *rontal. 'istana dintre ea i suprafaa preparatului reprezint distana frontal i este cu at&t mai mic cu c&t o*iecti"ul folosit are o putere mai mare de mrire. .elelalte lentile din o*iecti" au rolul de a corecta a*eraiile optice produse de lentila frontal. 0n general, o*iecti"ele care se folosesc cel mai frec"ent la microscoape au puterea de mrire de, EN> 1DN> 2DN> <DN> EDN> MDN> 1DDN, aceasta fiind gra"at pe suprafaa cilindrului. I*iecti"ele au putere de mrire mai mic #p&n la <DN$ se numesc
6:

o*iecti"e 3uscate4 pentru ca mediul interpus !ntre lentila frontal i preparat este aerul. I*iecti"ele cu putere mare de mrire #EDN> MDN> 1DDNH, cu care se lucreaz foarte aproape de preparat, se numesc o*iecti"e cu 3imersie4 deoarece spaiul dintre lentila frontal i preparat este ocupat de un lichid #ulei de cedru, glicerin, uleiul de parafin$ !n care este imersat "&rful apropiat cu al sticlei port preparat i, prin folosirea lor, se elimin !n mare masur refracia !n afara suprafeei lentilei frontale a razelor de lumin care ilumineaz preparatul. .a urmare imaginea o*ser"at "a c&tiga !n luminozitate i claritate.

Fig.M.2. -biective *i oculare.

4cularele se afl dispuse la partea superioar a lupei *inocular, fiind formate fiecare, din dou lentile plan con"e%e ce formeaz o imagine mrit, dreapta i "irtual. )entru o*ser"are se folosesc de o*icei oculare cu putere mic de mrire #7%,10%$, deoarece rolul lor este de a distinge detaliile fine date de o*iecti" i mai puin de a mri aceast imagine.

6C

>radul de mrire a imaginii finale date de microscop poate fi modificat prin schim*area o*iecti"elor i ocularelor i se calculeaz fc&nd produsul dintre puterea de mrire a ocularului i a o*iecti"ului. +ormula pentru grosisment i putere de separare 56em#lu: ocular 176; obiectiv 276; marire: 27 8 17=277. 1ceast "aloare d puterea de mrire total sau grosismentul microscopului. Sistemul de iluminare, la microscoapele moderne, se afl !ncorporat !n talp i este reprezentat de un *ec de E$ sau 12$. ot aici se afl i un sistem special pentru controlul flu%ului !n a%ul flu%ului de lumin. Bumina este orientat !n a%ul optic al microscopului de ctre o oglind plan dispus o*lic !n dreptul unui orificiu care se afl su* platin. 0nclinaia oglinzii poate fi reglat cu dou uru*uri. Su* platin, prins de coloana microscopului se afl condensorul, care are rolul de a concentra razele de lumin !ntr-un focar ce coincide cu planul preparatului. =nghiul luminii care intr !n condensor se regleaz cu a-utorul diafragmei iris, dispus !n montura condensorului, su* lentile. .ondensorul poate fi ridicat sau co*or&t, cu a-utorul unei "ize dispus su* platin. M.?.C4m .5 8)3#"5 3ma,3#5a *a 4# m3!)1.!18 18(3! 1 3A#43( O )rinderea imaginii i o*ser"area sa la un microscop optic o*inuit se face relati" simplu i nu necesit cunotine speciale de mecanic fin sau de alt natur. )entru e"itarea unor eecuri, inerente la un !nceptor, precum i a o*ine o imagine corect i apropiat calitati" de performanele ma%ime ale aparatului, toate mane"rele tre*uie s fie e%ecutate !ntr-o anumit ordine, 1. Se aeaz lama cu preparatul de cercetat pe platin i se prinde cu "aleii. /ste foarte important ca lama s fie aezat !n aa fel !nc&t preparatul s fie orientat !n sus. 0n caz contrar nu se "a putea prinde imaginea cu o*iecti"e mai mari de C0%. 2. )ri"ind lateral se aduce preparatul !n a%ul optic prin mane"ra carului mo*il. 1%ul optic coincide cu punctul de lumin dat de condensatorul ridicat !n preala*il

65

!n poziia ma%im. 'up efectuarea acestei operaii, condensatorul se co*oar la o poziie intermediar. 0.Se aduce o*iecti"ul 10% !n a%ul optic al microscopului prin rotirea re"ol"erului. .&nd o*iecti"ul a-unge !n a%, rotirea re"ol"erului !nt&mpin o uoar rezisten. /ste *ine ca !ntotdeauna o*ser"area unui preparat s !nceap prin folosirea o*iecti"ului 10%, deoarece acesta d o imagine de ansam*lu a preparatului, permi&nd totodat selectarea unei zone din preparat care urmeaz a fi o*ser"at apoi de mriri mai mari. <. 'ei imaginea nu a fost !nc prins, se poate sta*ili !n aceast etap, distana pupilar prin mane"rarea lupei *inocular. ?. )ri"ind lateral, se co*oar o*iecti"ul p&n !n poziia inferioar. 1ceasta se afl la c&i"a mm de suprafaa preparatului. )ri"ind apoi !n microscop, se ridic o*iecti"ul cu "iza macrometric p&n se prinde imaginea. 1poi, claritatea imaginii se regleaz prin mane"ra "izei micrometrice, iar gradul de luminozitate al c&mpului se regleaz prin ridicarea sau co*or&rea condensorului. E. )entru o*ser"area unor detalii ale preparatului, se introduce !n a%ul optic un o*iecti" cu puterea de mrire mai mare. )entru fiecare o*iecti" imaginea se prinde prin ridicarea acestuia fa de preparat pentru a e"ita lo"irea accidental a lentilei frontale de lama port preparat. 0n cazul folosirii unui o*iecti" cu imersie, se pune pe lamela care acoper preparatul o pictur de ulei de imersie i se co*oar apoi o*iecti"ul p&n ce "&rful su atinge pictura. 1ceast operaie se face pri"ind lateral. Amaginea se prinde apoi, pri"ind cu atenie !n microscop, prin co*or&rea foarte fin a o*iecti"ului cu "iza macrometric. Idat o*inut imaginea, claritatea se menine prin mane"ra continu a "izei micrometrice. )entru a a"ea o iluminare corespunztoare, condensorul "a fi ridicat la ma%imum. F. 'up !ncheierea o*ser"rii, microscopul se las !n repaus cu o*iecti"ul 10% !n a%ul optic i se acoper pentru a fi ferit de praf. Se "erific dac s-a efectuat deconectarea de la reeaua de curent electric.

66

0n cazul !ntre*uinrii o*iecti"ului cu imersie, acesta se terge cu uleiul de imersie prin trecerea degetului deasupra lentilei frontale. )eriodic acest o*iecti" se cur cu o *atist de finet umezit !ntr-o soluie de alcool etilic-aceton #1:1$. Se "a e"ita folosirea !n acest scop a hidrocar*urilor #%ilen, *enzen, toluen$ pentru ca aceasta "a dizol"a rina special !n care este montat lentila frontal a o*iecti"ului.

M1"4* "5 *4!)4: 9.:. a) E(a*1#a)5a )3,*53 ,)a"a(5 a 1!4*a)4*43. (icroscopul este dotat cu o reea a-uttoare micrometric gradat astfel !nc&t pe poriunea "izi*il cu ochiul li*er gradaiile reprezint 0,1 respecti" 0,5 mm. )e poriunea central rigla este di"izat !n zecimi de mm. /talonarea riglei ocularului se face !n felul urmtor, se "izualizeaz concomitent at&t reeaua micrometric de pe lam c&t i rigla micrometric a ocularului astfel !nc&t s se poat numra c&te di"iziuni de pe reea corespund unei singure di"iziuni de pe rigl. 1poi cu o regul de trei simpl se poate calcula care este fraciunea dintr-un mm care corespunde unei di"iziuni de pe rigla ocularului. 9.:. b) D5(5)m3#a)5a "3m5#.34#33 4#1) 8)58a)a(5. Idat ce a fost fcut etalonarea riglei, reeaua micrometric a-uttoare poate fi !nlturat. 0n locul ei se fi%eaz pe msua microscopului di"erse preparate. )rima dat se !ncearc "izualizarea unui fir de pr, fi%at cu o lamel pe o lam curat. Idat pus la punct imaginea, rigla ocularului se suprapune peste grosimea firului de pr numr&nduse c&te di"iziuni corespund acestei dimensiuni. 1poi, acest numr de di"iziuni se !nmulete cu "aloarea aflat anterior prin regula de trei simpl, o*in&ndu-se dimensiunea !n mm a grosimii firului de pr. 1poi se "izualizeaz alte preparate puse la dispoziie, fi%ate pe lame, ou de parazit, preparate histologice.

67

/lementul Studiat

'i"iziuni coresp.element. reelei

?aloarea di"iziuni microm. mm.

unei

'i"iziuni coresp.dimensi. preparatului.

'imensiunea preparatului. mm

'imensiunea prepartului medie mm

Iu de parazit

6,5

0,0:07

:,5
: C,5

0,1075 0,0921 0,1:91

0,1129

G)1.3.m5#(4*- reprezint raportul dintre tangenta unghiului su* care se "ede imaginea prin instrument i tangenta unghiului su* care se "ede o*iectul atunci c&nd este pri"it cu ochiul li*er sau altfel spus, raportul dintre diametrul aparent al imaginii i cel al o*iectului aezat la distana optim de "edere clar ]care pentru un ochi normal are "aloarea 25 cm.
tg 2 & = &. = tg1 C

N=

sau N= Nob Noc

)uterea separatoare sau de rezoluie , este capacitatea microscopului de a forma imagini distincte a dou puncte "ecine ale o*iectului. 1ceast mrime, depinde de a*eraiile sferice i de fenomenul de difracie a luminii care tra"erseaz instrumentul. )utem mri "aloarea l;o prin mrirea lui n' folosind o*ser"area prin imersie, !n care !ntre I* #de 90m$ i pro* se pune o pictur de ulei de cedru.
=
1,22 2n sin u

unde, l;o @putere separatoare p @ lungime de und a radiaiei folosite n @ indicele de refracie al mediului dintre I* i Ic. u @ unghiul de apertur, format de razele e%treme. n. sin u @ apertur numeric, este !nscris pe o*iecti" alturi de mrirea sa. M1"4* "5 *4!)4: =eterminarea grosismentului *i a coeficientului micrometric.

69

Bicrometrul obiectiv 8 este o lam de sticl pe care sunt gra"ate 100 de di"iziuni pe o distan de 1 mm, inter"alul !ntre dou di"iziuni succesi"e este de 0,01mm. Bicrometrul ocular - are forma unui disc cu diametrul egal cu cel al tu*ului !n care se introduce. /ste confecionat din sticl pe care sunt gra"ate 100 di"iziuni pe o lungime de 1 cm, inter"alul dintre dou di"iziuni succesi"e este egal cu 0,1 mm. )entru determinarea grosismetrului microscopic se procedeaz astfel, se fi%eaz lama micrometrului o*iecti" pe msua de lucru Z se introduce teTerul micoscopului !n *ornele transformatorului, iar teTerul transformatorului !n priza de 220?Z se regleaz iluminarea cu a-utorul diafragmeiZ se introduce din mi-locul micrometrului ocular !n dreptul o*iecti"ului cu a-utorul uru*urilor cu care este pre"zut msua microscopuluiZ alegem i fi%m o*iecti"ul cel mai mic #10m$Z se apropie o*iecti"ul de micrometru p&n la distan minim fr a pri"i !n ocularZ ridic&nd lent o*iecti"ul se caut imaginea di"iziunilor micrometruluiZ microscopul se pune la punct astfel !nc&t !n c&mp s a"em imaginea am*elor micrometreZ se rotete ocularul p&n c&nd cele dou scri sunt paralele i parial suprapuseZ se mrete contrastul prin ridicarea sau co*or&re condensatorului #cresc&nd contrastul "a scdea puterea separatoare l;o$Z se aduce scala gradat a micrometrului o*iecti" astfel !nc&t captul su s coincid cu cel al micrometrului ocularZ se compar imaginea micrometrului o*iecti" #mrit de Nob ori$ cu micrometrul ocular astfel !nc&t # di"iziuni ale micrometrului o*iecti" s corespund la m di"iziuni ale micrometrului ocular.
69

0nlocuind "alorile lui m i # !n relaia,

Nob = 100 m . 10 n

Se calculeaz > microscop cu relaia , > @ Nob .Noc Se efectueaz trei determinri pentru fiecare o*iecti" #10m, 20m , C0m$ rezultatele trec&ndu-se !n ta*el, a*elul 1 I*. 10m 20m C0m Nr.deter . n m
Nob Noc

Noc

>

)entru determinarea coeficientului micrometric se efectueaz urmtoarele , -se suprapune scala micrometrului ocular cea a o*iecti"ului i se citescZ
nob =numrul de di"iziuni ale micrometrului o*iecti" care se suprapun e%act

peste un numr !ntreg de di"iziuni ale micrometrului ocular.

noc = numrul de di"iziuni ale micrometrului o*iecti".

-se calculeaz coeficientul micrometric cu formula,

nob .10# m$ noc ;se mai fac multe com*inaii de oculare i o*iecti"e, iar rezultatele se trec !n ta*elul 2, CB =

70

a*elul 2 I*iecti" 10m 20m C0m

Icular 5m

Icular 7m

Icular 10m

M.E. O!+34* ; 4# .3.(5m 18(3! !1m8*5N. Ichiul este pentru organismul uman un analizator cu a-utorul cqruia analizqm mediul !ncon-urtor. 1nalizatorul "izual este alcqtuit din trei segmente , segmentul periferic, reprezentat de ochiul propriu-zis i ane%ele sale, segmentul intermediar, reprezentat de fi*rele ner"oase care conduc e%citaiile "izuale la creier i segmentul cortical, situat !n regiunea occipitalq a scoarei creierului. >lo*ul ocular #ochiul$ are forma unei sfere, care !n partea din faq are aplicatq o altq poriune sfericq cu razq mai micq, reprezentatq de corneea transparentq. 0n faa cristalinului se aflq irisul care are forma unei diafragme pre"zut cu o deschidere numitq pupilq cu dimensiunea "aria*ilq !ntre : i 7mm. 0n calota posterioarq este situatq retina, o mem*ranq ner"oasq, alctuitq din celule ner"oase, celule de susinere i celule pigmentare.

71

.elulele ner"oase sunt de 6 tipuri , 1. +otoreceptoare cu conuri 2. +otoreceptoare cu *astonae :. Oipolare C. (ultipolare 5. Irizontale 8 neuroni de asociaie cu dendrite i a%on 6. 1macrine 8 neuroni de asociaie fqrq dendrite cu un a%on lung i foarte ramificat . .a urmare a suprapunerii acestor tipuri de celule i a sinapselor dintre ele, se pot diferenia 10 straturi ale retinei. )rimul strat este cel al celulelor pigmentare alcqtuite din celule care conin pigment melanic. .el de-al doilea este stratul celulelor fotoreceptoare alctuit din celule ner"oase specializate, care nu se di"id, numite dupq forma lor, *astonae i conuri. .onurile i *astonaele conin pigmeni "izuali diferii. .onurile, !n numqr de 5-7 milioane, reprezintq receptorii "ederii diurne, colorate #percep detalii i culori$. Se gqsesc !n special la ni"elul petei gal*ene #macula lutea$ la distana de 2r5 bm. /%istq : tipuri de conuri, unul pentru perceperea luminii roii, altul pentru perceperea luminii "erzi i al treilea pentru

72

lumina al*astrq. /le conin rodopsinq care se descompune !n prezena luminii i se resintetizeazq !n prezena "itaminei 1.

(em*rana limitant e%tern, cel de-al treilea strat, este o reea de prelungiri ale celulelor gliale, ce !ncon-oar *aza celulelor fotoreceptoare. Stratul granular e%tern cuprinde corpii neuronali i prelungirile celulelor fotoreceptoare. Stratul ple%iform e%tern reprezint zona sinaptic dintre celulele fotoreceptoare i neuronii *ipolari. Stratul granular intern este alctuit din corpii neuronilor *ipolari. Stratul ple%iform intern este zona sinaptic dintre neuronii *ipolari i neuronii multipolari. Stratul neuronilor multipolari cuprinde corpul neuronilor multipolari. Stratul fi*relor optice este format din a%onii neuronilor multipolari. =ltimul strat al retinei, mem*rana limitant intern delimiteaz retina spre faa sa e%tern. +iecare celul cu con face sinaps cu un singur neuron *ipolar i acesta cu un singur neuron multipolar. (ai multe celule cu *astona fac sinaps cu un singur neuron *ipolar,

7:

iar mai muli neuroni *ipolari fac sinapsa cu un singur neuron multipolar.

7C

Fig.M.A.1.!r%itectura straturilor de celule fotoreceptoare.

Segmentul intermediar sau segmentul de conducere #calea optic$ este format din : neuroni. )rimii 2 neuroni, senziti"i, sunt reprezentai de protoneuron #*ipolar$, respecti" deutoneuronul #multipolar$ din retin. 1%onii deutoneuronului formeaz ner"ul optic i tractul optic. >lo*ul ocular este alctuit dintr-o serie de medii transparente , a$ umoarea apoas #n@1,::$, un lichid clar secretat de procesele ciliare fiind drenat permanent de "enele scleroticii #tunica e%tern- partea posterioar$ *$ cristalinul este o lentil *icon"e% care este acionat de muchiul ciliar care !i modific raza de cur*ur i odat cu aceasta con"ergena #n s E1,:: Z 1,C1F$ c$ umoarea sticloas #corpul "itros$ este o su*stan gelatinoas situat !n spatele retinei #n@1,::$. .apacitatea cristalinului de a-i modifica raza de cur*ur pentru ca s poat fi "zute clar o*iectele aflate la distane diferite poart numele de acomodare la distan. )entru acomodare este necesar i corectarea a%elor oculare prin contracia musculaturii e%trinseci a glo*ului ocular. =n ochi standard #emetrop$ are distanele o*iect i imagine diferite cu "alorile f1@15,7mm i f2@2C,Cmm. /%ist
75

deci o concordan perfect !ntre puterea de con"ergen a mediilor refringente i lungimea a%ului antero-posterior, ceea ce permite "ederea clar, fr acomodare, a o*iectelor situate la o distan mai mare de 6m.

Fig.M.A.2. Formarea imaginii in oc%iul emetrop.

'istana minim de "edere clar pentru un ochi standard este de 25cm, iar rezoluia ochiului #capacitatea de a distinge separat 2 puncte "ecine$ la aceast distan este de 75bm.)entru ca un ochi normal s poat "edea imaginea o*iectului fr efort de acomodare aceasta tre*uie s se formeze la o distan mai mare de distana minim de "edere clar de 0,25m- )unct )ro%imum. Adeal ar fi ca imaginea s se formeze la distana ma%im de 6m- )unct Demotum. 0n cazul !n care puterea de con"ergen a sistemului dioptric nu concord cu lungimea a%ului antero-posterior, ochiul este ametrop prezent&nd di"erse defecte optice , -miopie -hipermetropie -prez*iie -astigmatism

76

1. M3183a este un "iciu de refracie care const !n faptul c razele luminoase care "in paralele de la infinit se !nt&lnesc !ntr-un focar situat !naintea retinei. 1cest "iciu de refracie se corecteaz cu lentile di"ergente, care !ndeprteaz focarul p&n a-unge pe retin.

2. H385)m5()183a este un "iciu de refracie caracterizat prin aceea c razele paralele "enite de la infinit se reunesc !ntr-un focar situat !n spatele retinei. 1cest "iciu de refracie se corecteaz cu lentile con"ergente, care apropie focarul p&n a-unge pe retin.

77

0. P)59 323a este un "iciu datorat pierderii elasticitii cristalinului, deci a posi*ilitii de acomodare a acestuia, care se instaleaz odat cu !naintarea !n "&rst. 1cest "iciu se corecteaz cu lentile a cror con"ergen "ariaz continuu pe !nlimea lentilei pentru acomodarea ochiului la diferite distane. <. A.(3,ma(3.m4* este un defect optic ce se caracterizeaz prin faptul c raza de cur*ur a cristalinului i mai ales a corneei nu este aceeai !n toate meridianele #nu este omogen$.Dazele care "in de la infinit nu se !nt&lnesc !ntr-un focar unic, e%ist&nd focare pentru razele care cad pe meridianele orizontale i focare pentru cele care cad pe meridianele "erticale. 'efectul se corecteaz prin lentile cilindrice aezate !n aa fel !nc&t s uniformizeze refracia !n toate meridianele corneei sau cristalinului.

)ierderea "ederii se numete cecitate i are cauze multiple. /a se poate datora unei rupturi a corneei sau unei afeciuni a cristalinului, care de"ine opac i incapa*il s lase s treac lumina. 0n alte cazuri cecitatea se datoreaz dezlipirii retinei, ca urmare a unei lo"ituri sau faptului c celulele sale ner"oase nu mai funcioneaz corect. =nele cazuri de cecitate se datoreaz unor factori e%terni. 'e e%emplu, dac ner"ii optici sunt lezai, dei se formeaz o imagine corect pe retin, aceasta nu este transmis la creier. =n traumatism cranian suferit de o persoan poate distruge

79

aria "izual a creierului, determin&nd or*irea persoanei respecti"e, !n ciuda faptului c ochii acestuia funcioneaz perfect. $5"5)5a !)1ma(3!@ Detina conine 2 tipuri de fotoreceptori #receptori "izuali$ , conurile i *astonaele. Oastonaele sunt mult mai numeroase #1:0 milioane$ i sunt mai sensi*ile dec&t conurile la intensitatea luminoas Z !ns nu sunt sensi*ile la culoare. .ele 7 milioane de conuri confer ochiului sensi*ilitatea la culoare. 1cestea sunt concentrate !n partea central a petei gal*ene, numit fo"ea centralis #diametru 0,:mm$. Se apreciaz c acestea sunt distri*uite ca sensi*ilitate pe culori !n felul urmtor , 6C ^ sunt conuri 3roii4Z :2 ^ sunt conuri 3"erzi4Z 2 ^ sunt conuri 3al*astre4. .onurile 3"erzi4 i 3roii4 sunt concentrate !n fo"ea centralis, iar cele 3al*astre4 !n e%teriorul acestei regiuni. 'e aici rezult o deose*ire !n modul cum se disting culorile. 1stfel, percepia o*iectelor al*astre cu intensitate mare este mai sla* dec&t a celor roii sau "erzi. +aptul c "edem culorile cu un efort compara*il este atri*uit unui iamplificator !n al*astruj aflat !n cicuitul de prelucrare din creier.

Specializarea celor dou tipuri de fotoreceptori din ochi conduce la o mulime de fenomene aparent ciudate. 'e e%emplu, un cpitan de "as sau un pilot "d mai *ine
79

noaptea, !n !ntuneric, dac aparatele de pe *ord sunt luminate !n rou. /fortul lor de acomodare este mai mic, ochiul utiliz&nd tipuri diferite de fotoreceptori pentru culoarea roie #conurile$ i pentru lumina sla* #*astonaele$. 'in studiile efectuate asupra percepiei imaginilor colorate !n comparaie cu cele al*-negru s-a e"idenat faptul c !n imaginile colorate ochiul detecteaz mai uor marginile o*iectelor i caracteristicile acestora. 0n imaginile al*-negru se pierde informaia coninut !n lungimea de und a fiecrei culori. 'in numeroase e%perimente efectuate cu diferii su*ieci, crora li se prezentau imagini colorate diferit i li se cerea s le recunoasc, s-a a-uns la concluzia c ochiul omenesc poate distinge mii poate chiar milioane de culori. I caracterisic important a "ederii cromatice este faptul c prin diminuarea intensitii luminii care se reflect pe un o*iect colorat nu se modific i distri*uia spectral, adic distri*uia lungimilor de und ale undelor reflectate de o*iect i apoi percepute de ochi. .reierul primete pentru prelucrare aceleai informaii, care sunt legate de lungimea de und a culorilor din imagine. 'ac o*iectul este cenuiu, atunci el reflect la fel toate lungimile de und, conurile de pe pata gal*en sunt toate impresionate la fel i creierul nu reuete s disting diferitele puncte de pe suprafaa o*iectului. 'ac o*iectul este colorat de e%emplu, in rou i al*astru, el reflect din lumina incident cu predilecie componenta roie i pe cea al*astr, ceea ce face s fie impresionate doar conurile specializate pentru aceste culori i creierul reuete s prelucreze uor informaia primit. oate proprietile "ederii cromatice sunt azi utilizate !n domeniul pu*licitii, !n tele"iziune, cinematografie, mod etc. F1(1m5()3a +otometria se ocup cu msurarea energiei transportat de undele electromagnetice din domeniul optic. Dadiaiile electromagnetice din domeniul "izi*il dau senzaia de lumin i !n acelai timp transport energie. 0ntr-un sens mai !ngust, fotometria se ocup cu msurarea efectului radiaiilor din domeniul "izi*il asupra ochiului omenesc. 1stfel, se definesc dou categorii de mrimi i uniti de msur ,

90

fotometrice i energetice. )entru caracterizarea transportului de energie de ctre lumin se definesc mrimile energetice , - flu% de energie radiant - intensitate energetic - iluminare energetic )entru definirea mrimilor energetice tre*uie s definim sursa de lumin punctiform, care este o surs ce emite !ntr-un mediu omogen i izotrop, cu suprafaa de und sferic. F*4N4* "5 5#5),35 )a"3a#(@ P5 se definete ca energia care str*ate o suprafa oarecare, normal pe direcia de propagare a razei de lumin, !n unitatea de timp, adic , te @ Y ; t care are unitatea de msur Nattul. I#(5#.3(a(5a 5#5),5(3!@ a 4#53 .4).5 84#!(3=1)m5 este flu%ul de energie radiant emis !n unitatea de unghi solid, adic , Ae @ dte ; du , unde du@ unghiul solid elementar #1$ Antensitatea energetic se msoar !n O/steradian. =nghiul solid este o poriune din spaiu coninut !ntr-o ca"itate a unei suprafee conice. /l se msoar ca raportul dintre aria tiat de con pe suprafaa unei sfere cu centrul !n "&rful conului i ptratul razei sferei. =nghiul solid elementar taie o arie elementar d1 pe suprafaa sferei, astfel, du @ d1 ; r2.

91

=nitatea de msur este steradianul #sr$ definit ca fiind unghiul su* care se "ede din centrul unei sfere o arie de pe suprafaa sferei egal cu raza la ptrat. I*4m3#a)5a 5#5),5(3!@ a unei suprafee este egal cu flu%ul de energie radiant care str*ate unitatea de arie a suprafeei trans"ersale, adic , /e @ dte ; d1n care are unitatea de msur Y ; m2 . 'ac eliminm flu%ul de energie radiant !ntre relaiile 1$ i 2$ "om o*ine o relaie !ntre iluminarea energetic a unei suprafee i intensitatea energetic a unei surse punctiforme su* forma , / e @ Ae ; r 2 #:$ 'ac fasciculul cade su* inciden o*lic, astfel !nc&t a%a conului care delimiteaz unghiul solid este !nclinat fa de normala la suprafa cu unghiul J, !n relaia #:$ apare proiecia pe direcia normal la suprafa definit de "ersorul #, adic e%presia se !nmulete cu !1. Q , /e @ # Ae ; r2 $Pcos v #2$

/fectul luminii din domeniul "izi*il asupra ochiului depinde !n afar de caracteristicile fizice ale luminii #densitatea de energie, frec"ena$ i de sensi*ilitatea diferit a ochiului la frec"ene diferite ale luminii. 'in msurtori fotometrice efectuate s-a constat c ochiul omenesc are sensi*ilitatea ma%im la
92

frec"enele din mi-locul spectrului "izi*il, adic !n "erde. S-a con"enit s se considere c sensi*ilitatea ochiului este ma%im pentru p @ 550nm. 1ceasta !nseamn c pentru a o*ine un anumit efect luminos asupra ochiului, la aceast lungime de und este necesar cel mai mic flu% de energie radiant. )entru a caracteriza sensi*ilitatea ochiului la diferite culori se definete .5#.3 3*3(a(5a .85!()a*@ a 1!+34*43 #eficien luminoas$ $R , care este egal cu raportul dintre flu%ul de energie radiant te0 care produce o anumit senzaie luminoas la p @ 550nm i flu%ul de energie radiant t e care produce aceai senzaie luminoas la alt lungime de und p, adic , ?p @ te0 ; te 'ependena de lungimea de und a funciei ?p este diferit ziua i noaptea. 'ependena nocturn are un ma%im deplasat spre al*astru. .u a-utorul mrimii ? p se poate trece de la definirea mrimilor fotometrice. /fectul radiaiilor asupra ochiului se caracterizeaz prin urmtoarele mrimi fotometrice , ; ; ; flu%ul luminos intensitatea luminoas iluminarea

F*4N4* *4m3#1. este mrimea fotometric corespunztoare mrimii energetice flu%ul de energie radiant te i se definete ca produsul , t @ TP?p Pte, fotometric al radiaiei. =nitatea de msur pentru flu%ul luminos este lumenul # lm $. 1stfel, echi"alentul fotometric al radiaiei are "aloarea T @ 69: lm;N. I#(5#.3(a(5a *4m3#1a.@ a 4#53 .4).5 84#!(3=1)m5 este flu%ul de energie luminos emis !n unitatea de unghi solid, adic , A @ dt ; du Antensitatea luminoas este mrime fundamental pentru mrimile fotometrice !n sistemul internaional de uniti #SA$. =nitatea de msur este candela #cd$, fiind egal cu intensitatea luminoas !ntr-o direcie dat a unei surse care emite radiaie
9:

T @ constant numit echi"alent

electromagnetic monocromatic cu frec"ena de 5C0P1012 Xz i cu intensitatea energetic !n acea direcie egal cu 1;69: #Y;sr$. Suprafaa unei sfere se "ede din centrul acesteia su* un unghi solid egal cu CK. 1stfel, =*4N4* *4m3#1. 5m3. "5 1 .4).@ !n toate direciile cu aceai intensitate luminoas este egal cu , t @ CKPA Aluminarea unei suprafee este egal cu flu%ul luminos care str*ate unitatea de arie a unei suprafee trans"ersale, adic , / @ dt ; d1n @ # A ; r2 $Pcos v =nitatea de msur pentru iluminare este lu%ul #l%$. 1 l% @ 1 lm;m2. Se mai utilizeaz i unitatea tolerat phot #ph$, care este egal cu 1 lm;cm 2, astfel c 1 l% @ 10C ph.

9C

1D. SPECTROFOTOMETRIE A7SOR7IA 6I EMISIA RADIAIILOR DE CTRE MOLECULE 1D.1. E#5),3a m1*5!4*5*1) A3 81.3 3*3(@23*5 "5 m1"3=3!a)5 a 53 8)3# a .1) 23a )a"3a233*1) 5*5!()1ma,#5(3!5 Spre deose*ire de atomi, la care mecanismul curent de a*sor*ie i de emisie a radiaiilor este cel de tran$i"ie a electronilor )ntre diferitele nivele energetice, moleculele !i pot schim*a energia i datorit, mi*crii de vibra"ie a atomilor la capetele legturilor prin care sunt fi%ai, sau prin varia"ia energiei cinetice de rota"ie a moleculei. T)a#93233*5 5*5!()1#3!5, !n cazul moleculeleor i macromoleculelor, se fac !ntre ni"ele energetice ale or*italilor moleculari de legtur i antilegtur. 'iferenele energetice # E(5$ dintre aceti or*itali corespund unor lungimi de und plasate !n domeniile ultra"iolet #=?$ i "izi*il #?AS$. +iecare tip de legtur are tranziii electronice !n domenii spectrale care permit identificarea ei. $3 )a23a se poate face !n dou feluri, !n lungul legturilor #c&nd are loc !ntinderea i comprimarea lor$ sau perpendicular pe legturi #c&nd se produc modificri ale unghiurilor dintre acestea$. .a i energia electronilor, energia cinetic a fiecrui mod de "i*raie este cuantificat, cu a-utorul unui numr cuantic, v J D>1>2>0.... 'iferena energetic # Ev$ dintre dou ni"ele de "i*raie este constant, iar cuantele a*sor*ite !n acest caz se afl !n domeniile de infrarou #AD$ apropiat sau mi-lociu. 0ntruc&t nu e%ist atom legat care s nu "i*reze, energia moleculei pe ni"elul de "i*raie cel mai sczut, cu v J D, este totdeauna superioar unui ni"el energetic electronic -+ig.10.1.

95

R1(a23a m1*5!4*5*1) poate produce acumulare de energie cinetic, de

C
D
1 0

asemenea cunatificat. Numrul cuantic de rotaie, ) J D>1>2>0... cuantific momentul cinetic de rotaie i energia corespunztoare. 0ntruc&t e%ist molecule care nu se rotesc, primul ni"el de rotaie #) J D$ se suprapune peste primul ni"el de "i*raie - +ig.1. 'iferenele energetice datorit rotaiei # E)$ sunt i mai corespunztoare !ndeprtat. reduse, cuantele fiind !n AD

< 0 2 1

D ? < 0 2 1

5 1 05 1 50 1 0 5 1 50 1 0

5 1 05 1 50 1 0 5 1 50 1 0

A
Ni"ele electronice

D Ni"ele de "i*rawie v J D>1>2...

Ni"ele de rotawie ) J D>1>2...

F3,.1D.1 'ispunerea ni"elelor energetice moleculare. Sxgetile reprezintx c&te"a dintre tranzitiile permise !ntre ni"elele electronice A si 7. Selectia tranzitiilor prmise se face cu regulile : v.48 K v3#= J 1 si ).48 K )3#= J 1.

I#=*45#2a a,3(a2353 (5)m3!5. 0ntruc&t energia cinetic de agitaie termic, pe mol, este de ordinul RT #constanta gazelor % temperatura a*solut$ adic 2>? Gcal;mol, o proporie mare dintre molecule se "or afla pe unul din ni"elele energetice de rotaie, iar o fraciune redus pe unul din ni"ele de "i*raie. Dezult c, !n echili*ru termodinamic, populaia de molecule se "a afla distri*uit pe o multitudine de ni"ele energetice foarte apropiate !ntre ele.

96

1D.2. A .1) 23a 5#5),353 "5 !@()5 m1*5!4*5> .85!()5 m1*5!4*a)5 (oleculele i macromoleculele pot a*sor*i radiaii electromagnetice, cuante de energie + . /nergia primit modific prin unul sau mai multe din mecanismele de mai sus energia moleculei a*sor*ante. )entru o cuant din domeniul =?-?AS "a fi ade"rata egalitate, + = E(5 L Ev L E) 0ntruc&t ni"elele !ntre care se face tranziia, pot a"ea stri de "i*raie i;sau de rotaie diferite, rezult c, pentru o tranziie !ntre aceleai ni"ele electronice, cuantele a*sor*ite pot a"ea energii diferite. #+ig.10.1$. Spectroscopic fenomenul se traduce prin apariia unui numr corespunztor de linii, apropiate !ntre ele, grupate !n bande sau ben$i spectrale. Biniile care compun *enzile de a*sor*ie molecular pot fi distinse numai !n cazul moleculelor izolate, aflate !n stare gazoas. )entru moleculele dizol"ate, cum sunt macromoleculele *iologice, interaciunea cu sol"entul face ca liniile din *ezi s nu mai pot fi distinse. 1D.0. Em3.3a )a"3a233*1) "5 !@()5 ma!)1m1*5!4*5> *4m3#5.!5#2a P1.3 3*3(a(5a "5 a"4!5)5 a ma!)1m1*5!4*5*1) B# .(a)5 5N!3(a(@ )entru a emite radiaii, un atom sau molecul tre*uie s se gseasc pe un ni"el energetic superior #!ntr-o stare e%citat$, radiaia fiind emis la trecerea pe un ni"el energetic inferior. /nergia necesar e%citrii poate fi termic #su*stane aduse la incandescen$, electric #descrcri !n gaze$, c%imic sau radiant #e%citarea radiati"$. /%citarea radiati", prin a*sor*ie de cuante, este modul curent de a aduce moleculele !n soluie !ntr-o stare !n care sunt capa*ile s emit radiaii. D595N!3(a)5a m1*5!4*5*1) 0n afar de deze%citarea prin emisie de radiaii # tran$i"ie radiativ$ o molecul poate trece pe un ni"el energetic inferior prin tran$i"ii neradiative.
97

ranziiile neradiati"e se e%plic prin con"ertirea energiei !n alte forme, cum sunt energia chimic, electric sau mecanic de agitaie termic. 0n acelai lan de procese ce !nsoete re"enirea unei molecule la starea de energie -oas se !nt&lnesc

.
a*sor*tie

(
emisie

=*41)5.!5#(S . ; stare singletZ ( ; stare tripletZ ; dese%citare neradiati"x

=1.=1)5.!5#(S

F3,. 1D.2. ranzitiile electronice la producerea luminescenei

am*ele tipuri de dese%citri. #+ig.10.2.$ L4m3#5.!5#2a este fenomenul de emisie a unor radia"ii de lungime de und mai mare #frecven" *i energie mai reduse$, )n compara"ie cu cele ale radia"iilor pe care substan"a le8a absorbit. /a reprezint modalitatea curent de emisie a radiaiilor de ctre moleculele aflate !n soluie, la temperaturi o*inuite. +aptul poate fi uor e%plicat dac inem cont c !ntre e%citarea radiati" #!n care molecula a*soar*e cuanta cu energia + a .$ i deze%citarea radiati" #!n care emite cuanta + 5m3.$ au loc una sau mai multe deze%citri neradiati"e, !n care molecula comunic sistemului #de o*icei sol"entului$ o cantitate de energie termic, E#. Begea conser"rii energiei se "a scrie, + a . J + 5m3. L E# /ste e"ident c energiile cuantelor emise sunt mai reduse dec&t cele ale celor a*sor*ite.

99

'up natura strii intermediare de pe care se face deze%citarea radiati", luminescena poate s se produc !n dou moduri, fluorescen" i fosforescen". #+ig.10.2.$ F*41)5.!5#2a apare atunci c&nd, dup deze%citarea neradiati", electronul !i pstreaz spinul de sens opus perechii sale, rmas pe ni"elul energetic inferior #stare singlet$. impul de "ia, , al electronului !n aceast stare este e%trem de scurt, J 1DKM ... 1DK0 .. 'up acest inter"al de timp, toi electronii au re"enit pe ni"elele inferioare. )ractic, fenomenul dureaz numai c&t timp dureaz e%citarea radiati". /%citarea este realizat cu radiaii care corespund unei *enzi de a*sor*ie intens a su*stanei. Andiferent de lungimea de und aleas pentru e%citare, datorit multitudinii ni"elelor de "i*ro-rotaie ale populaiei de molecule, lumina emis se distri*uie !ntr-o *and. +luorescena este produs de ma-oritatea macromoleculelor aflate !n soluie. 0n cazul proteinelor, responsa*ili de producerea fluorescenei sunt radicalii aromatici ai unor aminoacizi #)he, *azele azotate. F1.=1)5.!5#2a se produce dac pe ni"elul intermediar, de pe care re"ine, electronul e%citat se afl cu spinul !n acelai sens cu cel al electronului rmas pe ni"elul inferior #stare triplet$. impul de "ia al electronului !n aceast stare poate fi mult mai lung, J 1DK0 . ... 1)5. 0nseamn c su*stanele fosforescente, Hr, rp$, iar !n cazul acizilor nucleici toate

conin&nd o multitudine de electroni e%citai, continu s emit lumin !nc mult timp dup ce a !ncetat iluminarea care a produs e%citarea. 0ntruc&t fosforescena poate a"ea loc numai !n stare solid, ea nu i-a gsit aplicaii !n studiul *iomacromoleculelor.
1D.<. S(4"34* ma!)1m1*5!4*5*1) 8)3# .85!()1.!1835 "5 a .1) 235

M@.4)a)5a a .1) 2353 )a"3a233*1) "5 !@()5 1 .4 .(a#2@

99

1*sor*ia se e%prim cantitati" cu a-utorul e@tinc"iei #E$ numit i absorban" #A$. /a e%prim gradul de atenuare a unui fascicol de luminos dup str*aterea unui strat de su*stan ce conine molecule a*sor*ante. Ba trecerea unui fascicol luminos de o anumit lungime de und R> printr-un strat de su*stan cu grosimea "N> el "a fi a*sor*it conform legii , ;"IJ T I "N, "IJ I K ID> =nde A este intensitatea fascicolului dup ce a str*tut stratul a*sor*ant, dA este "ariaia elementar a intensitii, G este constanta de a*sor*ie a mediului pentru lumina cu lungimea de und R.

ID
"N N

Fig.1?./. Scderea intensit"ii fascicolului luminos la trecerea printr8un strat de substan" cu grosimea @

A @A0 e 8T %

/%tincia, datorat unui component din soluie, crete linear cu concentraia lui molar, C, i cu grosimea stratului de soluie str*tut, 6 , EJC6 Glegea Hambert *i 0eerH

se numete coeficient molar de e@tinc"ie i, pentru scopuri *iologice, unitatea curent este de MK1.!mK1, e%primat uneori ca *3()3/m1*.!m . ?aloarea lui nu depinde dec&t de natura a*sor*antului i de lungimea de und la care a fost msurat. Se poate demonstra c , E J *, ID / I J *, T, unde T este gradul de transmisie al luminii, adic T J I / ID sau TGUH J I /ID . 1DD. Spre e%emplu, "aloarea e%tinciei unui fascicol luminos a crui intensitate scade de 10 ori fa de cel incident pe suprafa, "a fi /@1.

90

Se numete curb caracteristic de absorb"ie, sau spectrul de absorb"ie al substan"ei, graficul dependenei coeficientului molar de e%tincie de lungimea de und, J G H. Anformaiile oferite de cur*a caracteristic de a*sor*ie pri"esc, a$ tipurile legturilor *i energetica lor #prin lungimile de und la care se plasea$ ma@imele de absorb"ie$ i *$ abunden"a gruprilor sau legturilor absorbante #prin valorile coeficien"ilor de e@tinc"ie$. /a este determinat de natura moleculei #compoziie, structur$ i depinde de interaciunile #intra- sau intermoleculare$ pe care le are molecula sau pri ale ei. Selectarea lungimilor de und potri"ite pentru determinarea concentraiilor prin msurtori de e%tincie se face utiliz&nd monocromatoare. Hungimea de und la care se fac determinrile se alege astfel !nc&t su*stana de determinat s prezinte a*sor*anta ma%im iar ceilalti componeni ai amestecului s a*soar* c&t mai puin #sau deloc$. re*uie menionat c toate corpurile apar colorate !n culoarea complementar radiaiilor a*sor*ite, deci pentru a o*ine e%tincia ma%im pentru o soluie de o anumit culoare, tre*uie ales un filtru de culoare complementar acesteia #"ezi diagrama de mai -os$.

+ig.1?.2. =iagrama culorilor complementare

G)48@)3*5 !)1m1=1)5 repre$int grupri de atomi, legate prin interac"iuni c%imice sau fi$ice, *i care au ben$i de absorb"ie caracteristice.

91

A .1) 23a B# 4*()av31*5( A3 v393 3* se datore*te gruprilor cromofore repre$entate de legturile covalente. Cromo8for !nseamn 3purttor de culoare4. .uloarea o*ser"at la o soluie str*tut de lumin al*, se datorete radiaiilor pe care moleculele ce o compun le las s treac #nu le a*soar*e$. Legtura sim#l> CKC, a*soar*e su* 160 nm, dar studiile la V 1CD nm sunt imposi*ile !n soluie apoas, !ntruc&t i legturile co"alente ale apei a*sor* puternic !n acest domeniu. Legturile duble a*sor* !ntre 190 i :00 nm prin tranziiile electronice !ntre or*italii i W. =ublele legturi con;ugate ale ciclurilor aromatice #aminoacizi ca )he, Hr, rp$,
( cm $ CDDD
g%em %aotic
81 81

sau

ale

heterociclurilor #purinice i

*azelor

azotate

pirimidinice$, au c&te o *and de a*sor*ie intens !ntre 2:0 i :00 nm. 'eplasrile lungimilor de und ale ma%imelor, ser"esc i la "ariaiile studiul coeficienilor molari de e%tincie ai

<DDD

1CD 2DD 22D #nm$ F3,. 1D.? Spectrele de a*sor*ie !n =? ale

poli-B-lizinei !n conformawiile , , ghem haotic.

radicalilor,

structurii i a interaciunilor cu agenii de mediu, fora ionic, pXul, temperatura.

92

Legturile #e#etidice #a"&nd craracter de du*l legtur$ a*sor* !ntr-o *and cu dou ma%ime, unul mai e%primat, la 200 nm, i altul mai redus, la 225 nm. Spectrele lanurilor polipeptidice, dac acestea adopt o structur secundar definit, au particulariti caracteristice ale spectrului de a*sor*ie #+ig.10.5$.
2DDDDD

1DDDDD

?DDDD

1DDDD

?DDD 0DDD 0DD <DD ?DD G#mH F3,. 1D.E Spectrele de a*sor*tie ale o@i%emoglobinei #XH> deo@i%emoglobinei #y$ si met%emoglobinei #- -$ EDD

1etalo#roteinele> ca <i com#u<ii ce con(in radicali aromatici #oliciclici <i sisteme de duble legturi con;ugate absorb )n domeniul vi%ibil.

)rima categorie include compuii metalelor tranziionale, iar pentru a doua se pot cita fla"o-proteinele. )roteinele heminice #hemoglo*ina - F3,.1D.E. ; i citocromii$ au spectre caracteristice datorate, pe de o parte, nucleului con-ugat tetrapirolic i,
9:

pe de alt parte, prezenei ionilor de fier. .uprul, determin spectrele ceruloplasminei plasmatice, citocrom-o%idazelor mitocondriale sau al hemocianinei #transportorul de o%igen din s&ngele unor ne"erte*rate$. A .1) 23a B# 3#=)a)1A4> !n condiii apropiate de cele *iologice, are loc datorit vibra"iilor moleculare, fiindc, aa cum s-a "zut, !n soluie strile rotaionale pure nu pot e%ista. 'omeniul spectral !n care se lucreaz este AD apropiat i mediu. 0n cazul "i*raiilor longitudinale ale legturilor marginale, de e%emplu, se cunosc lungimile de und ale ma%imelor de a*sor*ie. 'ac atomii acestora particip la puni de hidrogen se produc deplasri caracteristice, !n sensul creterii lungimilor de und. # a*elul. 1$
Ta 5*4* 1 : P193233*5 maN3m5*1) "5 a .1) 235 85#()4 v3 )a233*5 *1#,3(4"3#a*5 a*5 4#1) *5,@(4)3 LEGATURA XOKH XNKH XSKH XCJO L4#,3m5a "5 4#"@ B# *38.a *5,@(4)33 "5 H 2>F? m 2>M? m 0>MD m ?>MD m 0>DD m 0>1D m <>DD m E>D? m L4#,3m5a "5 4#"@ B# 8)595#2a *5,@(4)33 "5 H

Soluiile apoase nu sunt propice studiilor !n infrarou datorit celor dou *enzi de a*sor*ie intens ale apei #!n -urul a 0>1 m i E>1 mH. Begturile de hidrogen, care de pot studia uor !n sol"eni neapoi, nu pot fi studiate !n ap.

1D.?. DESCRIEREA SPECTROFOTOMETRULUI U$;$IS SP;CDD1 METERTECH

9C

Parametrii tehnici

'omeniul de msurare, 200-1100 nm Bime de *and, 2 nm )recizia lungimii de und, 1 nm (onocromator, split *eam #raz di"izat$ Deproducti*ilitate, 0.2 nm 'omeniul fotometric, - 0.:00-:.000 1*s )recizia fotometric, 0.005 ^ la 1.000 1*s Sta*ilitate #drift$, \ 0.000: 1*s ; or la 500 nm #dup 1 or de !nclzire$ Sta*ilitate *aseline, 0.002 1*s #!ntre 210-1000 nm$ Bumina !mprtiat, \ 0.05^ la :C0 nm i 220 nm Surs de lumin, lamp deuteriu #=?$ i lamp halogen #?AS$ Schim*are surs de lumin, automat 'etector, dou fotodiode ?itez de !nregistrare spectru, 100-5000 nm;min
95

'rum optic, schim*a*il !ntre 10-100 mm 1fia-, B.' cu iluminare din spate, contrast regla*il Aeiri semnal, port serial i paralel 1limentare ; sigurane, 100;120;220;2C0 ? z 50;60 Xz sigurane, 21 220;2C0 ?, C1 100;120 ? 1m*ient ; umiditate, temperatura camerei, 15-:0{., umiditate \ 90^ 'imensiuni, 506 mm % C:0 mm % 220 mm. (asa, z19 Tg M1"4)3 "5 m@.4)a)5, la lungime de und fi%, !nregistrare de spectru, msurare !n timp la o lungime de und, msurare cantitati", cinetic simpl. ELEMENTE DE COMAND

.omanda spectrofotometrului, introducerea parametrilor de msurare precum i "izualizarea rezultatelor se face cu a-utorul *utoanelor tastaturii prote-ate cu folie. Se pot o*ser"a urmtoarele grupuri, aste funcii, aste numerice, p, .B/1D, /S., /N /D, D/1', 1= I n/DI, Sgei, ./BB | ./BB } L=A.G D=N, +1-+5, selectarea unei funcii de pe afiacifre, punct zecimal, semnul minus introducerea lungimii de und dorite tergerea "alorilor nedorite !ntoarcere dintr-o fereastr !n cea precedent, sau !ntoarcere de la o operaie la un ni"el superior de meniu "alidarea datelor sau operaiilor introduse pornirea msurtorii conform parametrilor setai corecie *lanc, seteaz "aloarea fotometric la 0 1OS #100^ $ deplasarea cursorului prin lista parametrilor deplasare schim*torului de cu"e !nainte cu o poziie deplasare schim*torului de cu"e !napoi cu o poziie la apsarea tastei apare lista tuturor fiierelor sal"ate cu parametrii de msurare, indiferent de modul de lucruZ aleg&nd de aici, se a-unge imediat !n modul de lucru corespunztor

96

PORNIRE 6I FUNCIONARE: Ne asigurm c !n incinta de lucru nu este nici o cu". Se !nchide capacul incintei, se pornete aparatul. )e afia- "or aprea urmtoarele mesa-e,

12:00:00

Metertech Metertech Inc. SPUV/VIS All rights reserved. Version 1.0

Detect Initial Syste .....

97

1paratul "a e%ecuta un autotest, "a aprinde lmpile i "a recunoate accesoriile opionale, dac ele e%ist, toate acestea !n mod automat. 'up iniializare "a fi afiat fereastra meniului principal. 'e aici se poate alege din apte #ase$ opiuni. 12:00:00 Syste Main Men!

1.Photo etric 2.S"ectr! #.$i escan %.&inetic '.(!antitative ).Syste Set!"

Select *! +er:1

(!ic, -!n

Sa "le .ontro l

1legerea se face prin tastarea numrului corespunztor sau prin deplasarea *enzii luminoase #hightlight$ urmate de apsarea tastei /N /D. )e partea de -os a
99

afia-ului mai sunt dou opiuni, dintre care ~Sample .ontrol~ are sens doar !n cazul utilizrii unui suport multicell #multicu"$, iar cu tasta +1 de su* ~LuicT Dun~ se poate intra !n meniul de fiiere, ca i cu a-utorul tastei L=A.G D=N. )arametrii de *az ai spectrofotometrului se pot seta din su*meniul 6, ~SHstem Setup~. Ipiunile din acest su*meniu se aleg prin tastarea numrului corespunztor urmat de apsarea tastei /N /D. 1. Setup cloc(, pentru setarea datei i orei. 2. Setup lamp, aici putem "edea ni"elul de energie a lmpilor, putem opri lmpile indi"idual, totodat aici putem reseta la zero orele de funcionare a lmpilor, dup !nlocuirea cu una nou. :. Setup printer, pentru alegerea tipului potri"it de imprimant. C. Setup ;S82/2, pentru setarea portului serial. 5. Setup %ard.are, se pot seta trei parametri de *az, lungimea de und la care se comut sursa de lumin la trecerea din ?AS !n =?. 0n cazul !n care lungimea de und de msurare coincide cu cea de comutare a sursei de lumin setat de productor #:6: nm$, se recomand modificarea acestei "alori !n inter"alul ::0 i :65 nm. SNitch to..... comutare !ntre accesorii i single cell. Scan *ase line..... dac este setat pe IN, dup pornire, aparatul msoar automat un *aseline. 6. Beasure band.idt%, )entru msurarea limii de *and se apas tasta D/1'. ?a fi !nregistrat spectrul lmpii =?. 'ac aparatul este *ine cali*rat, atunci "a rezulta un "&rf !n -urul "alorii de 656.1 nm, iar limea de *and "a fi su* 2 nm. Dezultatul poate fi tiprit aps&nd tasta de su* ~)rint 'ata~. 7. Beasure baseline, aps&nd /N /D, se "a msura un *aseline. 9. Searc% $ero point, msurare !n poziia de zero, pentru test hardNare. EFECTUAREA MSURTORILOR YN DIFERITE MODURI aH (S=D1D/ B1 B=N>A(/ '/ =N' +Am /ste un mod de msurare simplu, la lungime de und fi%. Se pornete din meniul principal, aleg&nd punctul 1. 1pare fereastra )hotometric )arameter setup. 'eplas&ndu-ne cu a-utorul sgeilor, putem selecta parametrii dorii pentru setare sau editare. 1"em posi*ilitatea de a !ncrca i seturi de parametri de la msurtori anterioare, prin apsarea tastei funcie +1, de su* afia-. .u tasta +2 se sal"eaz, cu +: se tipresc parametrii. )ot fi setai urmtorii parametri de msurare, Gnput t%e Number of P, Beasure BodeC CQcle Number, sta*ilirea numrului de lungimi de und de msurare #1-5$Z dup apsarea tastei /N /D se dau "alorile lor. alegerea modului de msurare, 1OS-a*sor*an, transmitan, .onc.-concentraie. specificarea numrului ciclurilor de msurare #1-999$ pe aceai pro*. =n ciclu !nseamn c&te o msurare la
99

^ -

CQcle Gnterval 5sec)C &rint EverQ CQcle,

fiecare lungime de und din list. timp de ateptare #1-999 sec$ !ntre cicluri 'ac se seteaz pe es, rezultatele se tipresc dup fiecare ciclu.

12:00:00 Set!"

P/0$0M1$-I. Para eter

'00.0n

1.In"!t the *! +er o2 :1 1 :'00.0 2.Meas!re ode /ave !nit45es/*o67 Unit 8actor4de2a!lt916 #..ycle n! +er %..ycle interval4sec6 '.Print every cycle :A3S :5es : :1.000 :1 :0 :*o

*! +er 2ro 1 to '... :oad Save Print Sa "le *e;t Para Para Data .ontro Screen

100

'up setarea tuturor parametrilor, se recomand sal"area lor !ntr-un fiier. 'up apsarea tastei +2, apare un careu cu litere. Selectarea unei litere are loc prin deplasarea cu a-utorul sgeilor pe linia care o conine, urmat de apsarea numrului corespunztoare coloanei !n care se gsete ea. 'up completarea numelui se apas tasta /N /D, apoi cu a-utorul sgeilor ne deplasm pe o linie goal i se apas din nou /N /DZ fiierul este sal"at. Se pot sal"a c&te 15 fiiere pentru fiecare mod de msurare. A(5#235Z A8a)a(4* va .48)a.!)35 =@)@ B#()5 a)5 =3A35)5*5 !4 a!5*aA3 #4m5ZZ 'up introducerea parametrilor se apas tasta +5, apare un ta*el gol, i fotometrul se poziioneaz pe prima lungime de und din list. ! se urmri )ntotdeauna mesa:ele din partea de :os a afi*a:ului' opera"iile acelea trebuie efectuate. )entru a ine cont de "aloarea *lancului, se aeaz cu"a goal sau umplut cu sol"ent !n suportul de cu"e i se apas tasta 1= I n/DI. 12:00:00 *o 1 2 # % ' P/0$0M1$-I. ''0.0n

%00.0 %'0.0 '00.0 ''0.0 A3S1 A3S2 A3S# A3S% 0.<'' 1.22# 1.'01 1.<02 0.<'' 1.22% 1.'02 1.<0# 0.<'% 1.22# 1.'02 1.<01 0.<'' 1.22% 1.'0# 1.<0# 0.<'% 1.22# 1.'01 1.<02 Press -1AD =hen ready... Print Data

Prev Screen

(surarea pornete dup apsarea tastei D/1'. Ba sf&rit se poate reporni msurarea sau pot fi printate datele. /%ist i un mod foarte simplu de msurare pentru cazul !n care se lucreaz la o singur lungime de und. 'in meniul principal

101

se apas tasta R. .u tasta ~(ode~ se alege modul fotometric de msurare #a*sor*an, transmitan, concentraie$.

12:00:00 0.000A

:AM3DA

'00.0n

: '00.0 n

Data: 0.000 A
Press =avelength... > ,eyin

Vie= Data

Save Data

Mode Sa "le $oggle A/./?$ .ontro Digits l

102

Se introduce lungimea de und i se "alideaz cu /N /D, dup care msurarea pornete imediat i se afieaz rezultatul. Se poate i sal"a prin apsarea tastei +2. I msurtoare nou se poate porni aps&nd din nou tastele p i /N /D. .u tasta +1 #?ieN 'ata$ se pot afia rezultatele msurtorilor i se pot i tipri. Dezultatele nu sunt sal"ate definiti"Z dac se iese din acest mod de msurare, ele se pierd. H 0ND/>AS D1D/ '/ S)/. D= 0n modul de !nregistrare de spectru a"em posi*ilitatea de a msura fie pe un domeniu restr&ns, fie pe tot domeniul spectrofotometrului, cu specificarea "itezei de scanare. Spectrul rezultat poate fi prelucrat !n di"erse moduri, poate fi printat, sal"at i deschis mai t&rziu. Spectrele pot fi i suprapuse !n aceai fereastr #o"erlaH$. )entru pornirea acestui mod, din meniul principal se alege punctul 2. Na"ig&nd cu tastele sgei, putem seta sau edita parametrii.

10:

12:00:00

SP1.$-UM Para eter

'00.0n

1.Start =avelength4n 6 2.Sto" =avelength4n 6 #.Meas!re ode %.:o= val!e4A3S6 './igh val!e4A3S6 ).Scan s"eed4n / in6 @.0verlay screen

:%00.0 :<00.0 :A3S :-0.#0 :#.00 :1000 :5es

*! +er :oad Save Para Para

2ro 200 to Print Sa "le *e;t Data .ontro Screen l

.omenzile afiate !n partea inferioar a ferestrei se pot e%ecuta cu a-utorul tastelor de su* ele. )utem seta urmtorii parametri de lucru, Start Oavelengt%, Bungimea de und de start #200-1099 nm$ Stop Oavelengt%, Bungimea de und final #202-1100 nm$ Beasure BodeC (odul de msurare fotometric #a*sor*an,
10C

Ho. ,alueC 9ig% ,alueC Scan Speed 5nm/min)C -verlaQ ScreenC

transmitan$ Bimita de -os a scalei grafice pe timpul msurrii #-0.:-2.99 1 ; 0-119.9 ^ $ Bimita de sus a scalei grafice pe timpul msurrii #-0.29-:.00 1 ; 0.1-120.0 ^ $ ?iteza de scanare a spectrului #100-5000 nm;min$ Res !nseamn c msurtorile succesi"e "or fi afiate suprapuse !n fereastr. Numai ultima msurtoare se poate analiza.

'up setarea tuturor parametrilor, este indicat sal"area lor !ntr-un fiier, similar celor descrise la modul fi% de msurare. 1cestea pot fi rechemate oric&nd pentru pornirea unei msurtori. )utem sal"a !n total 15 fiiere de parametri. 'up umplerea memoriei, r&ndurile "or fi suprascrise. 'easemenea, la o sal"are aparatul nu "a cere confirmarea suprascrierii r&ndului actual. 'in acest moti", se recomand deplasarea cu a-utorul sgeilor pe un r&nd gol. 'up "alidarea parametrilor de msurare se apas tasta +5 #Ne%t Screen$ i se "a intra !n fereastra grafic de msurare. 12:00:00
1.'0 A3S

SP1.$-UM

<00.0n

0.@'

0.00 %00 * )0' <00

Press -1AD =hen ready... Access Mani- .lear Data "!late Ara"h

Prev Screen

105

)e partea de -os a ecranului apare mesa-ul ~)ress D/1' Nhen readH~. ! se urmri )ntotdeauna mesa:ele din partea de :os a afi*a:ului' opera"iile acelea trebuie efectuate. 'eoarece spectrofotometrul are un singur drum optic, un spectru msurat s-ar compune din a*sor*anele ansam*lului cu" V sol"ent V pro* necunoscut. 'in aceast cauz, pentru luarea !n consideraie a "alorii de *lanc, !nainte de msurarea propriu zis, "om introduce !n suport cu"a sau cu"a cu sol"entul pur i "om apsa tasta 1= I n/DI. 'up care aparatul "a msura un *aseline #*lanc$ pe domeniul de lungimi de und definit prin parametri de lucruZ acesta "a fi sczut din msurtorile de pro*e pornite cu tasta D/1'. Se aeaz cu"a cu pro* !n locaul din incinta de lucru, se !nchide capacul incintei. Se apas tasta D/1', msurtoarea pornete i spectrul "a fi trasat pe ecranul grafic. )e partea de sus a ecranului sunt afiate lungimea de und i "aloarea fotometric, actuale. (surtoarea poate fi oric&nd oprit prin apsarea tastei /S.. Ba sf&rit, dac este ne"oie, cu tasta D/1' putem !nregistra din nou spectrul. )e partea de -os a ecranului se "d ferestrele operaiilor posi*ile. /le pot fi e%ecutate cu a-utorul tastelor funcii #+1-+5$, aflate dedesu*t. .u tasta ~)re" Screen~ #+5$ ne !ntoarcem !n fereastra de parametri. .u tasta ~.lear >raph~ #+:$ putem terge spectrul. 'ac am acti"at o"erlaH, "or fi terse toate spectrele. .u tasta ~1cces 'ata~ #+1$ acceptm msurtoarea. 0n ferestrele de -os "or aprea noi mesa-e, +: ~)rint 'ata~ printarea rezultatuluiZ +2 ~Sa"e 'ata~ sal"area spectrului su* numele dat de noi #5 fiiere$Z +1 ~Boad 'ata~ re!ncrcarea spectrelor sal"ate pentru analiz. .u *anda luminoas ne poziionm pe r&ndul dorit i cu /N /D !l !ncrcm !n fereastra grafic de mai !nainte. .u tasta /S. putem urca cu un ni"el mai sus, unde putem face analiza spectrului. !H 1N1BAn '/ S)/. D= )utem intra !n acest punct de meniu dup !nregistrarea unui spectru sau dup reapelarea unui spectru sal"at !n preala*il. )entru acesta tre*uie s apsm tasta +2 de su* fereastra ~(anipulate~. ?om a"ea urmtoarele posi*iliti,
106

8 F1 Smoot% =ata, netezirea automat a cur*ei 8 F2 Soom =ataC mrirea;micorarea cur*eiZ la a%a p&lp&ie cursorul, acolo tre*uie introdus noua "aloare apoi se "alideaz cu /N /D. .ursorul "a sri la poziia urmtoareZ prin repetarea operaiei precedente i termin&nd pe partea dreapt a a%ei m, cur*a "a fi redesenat conform coordonatelor. 1ps&nd din nou tasta +2 se "a repeta procesul, sau se poate re"eni la aspectul iniial cu tasta +5. 8 F/ S%o. Trac(, apare o linie "ertical, !n r&ndul de sus "a fi afiat poziia ei actual i "aloarea fotometric corespunztoare. )oate fi deplasat cu tastele sgei, astfel putem cuta orice "&rf sau "ale. 'ac !ntr-un loc apsm tasta ~Sa"e 'ata~, datele "or fi sal"ate. .u ~?ieN 'ata~ se pot "izualiza, cu ~)rint 'ata~ se pot printa datele "&rfurilor. Aeirea se face cu tasta /S.. 8 F2 &ea( OalleQ, dup apsare, apare -os un meniu nou. 12:00:00
1.'0 A3S

SP1.$-UM

<00.0n

0.@'

0.00 %00 * )0' <00

Press hot ,ey to "rocessing... Vie= Search Search :ess More Data Pea, Valley Point Point

107

1leg&nd ~Search )eaT~ se "a face o cutare de ma%ime. 'ac se alege ~Search ?alleH~ se "or cuta minime ale spectrului. +olosind tastele ~Bess )oint~, ~(ore )oint~ se "a e%ecuta o cutare pentru mai puine, respecti" pentru mai multe puncte. 'up cutare, datele pot fi afiate su* form ta*elar dac se apas tasta ~?ieN 'ata~, de aici pot fi i printate. 12:00:00 0.1#2A SP1.$-UM <00.0n

Data 8ile :ist -------------------------------Data01 %1#.2n 0.#%%A Data02 %B<.<n 1.%1'A Data0# '<@.1n 0.#'2A Data0% @1%.#n 1.0)'A Data0' @<@.'n 0.'#%A

Prev Page

*e;t Page

Print Data

Prev Screen

109

.u tasta +5 #)re" Screen$ ne !ntoarcem !n fereastra precedent, de analiz. .u tasta /S. ne putem deplasa !napoi prin structura meniului. "H (S=D1D/ 0N A() # A(/ S.1N$ 0n acest mod de msurare putem !nregistra "ariaia !n timp a "alorii fotometrice alese, la o lungime de und. Se utilizeaz pentru urmrirea reaciilor, pentru msurtori de cinetic. /ste posi*il !nt&rzierea msurtorii propriu-zise #'elaH ime$, astfel citirea pornete numai dup e%pirarea timpului setat. 'in meniul principal putem a-unge !n modul ime Scan aleg&nd punctul trei. 1pare fereastra 3)arameter Setup4.

12:00:00 0.000A

$IM1S.A*

'00.0n

Para eter 1.Cavelength4n 6 2.Scan ti e4sec6 #.Delay ti e4sec6 %.Meas!re ode '.:o= val!e4A3S6 )./igh val!e4A3S6 @.0verlay screen :'00.0 :#0 :0 :A3S :-0.#0 :#.00 :5es

*! +er 2ro 200 to 1100D :oad Save Print Sa "le *e;t Para Para Data .ontro Screen

109

'up ce am setat parametrii, putem porni msurtoarea sau !i putem sal"a !ntr-un fiier. ot de aici, parametrii pot fi i printai. )utem seta urmtorii parametri, Oavelengt%, Scan Time, =elaQ Time, Beasure Bode, Ho. ,alueC 9ig% ,alueC -verlaQ ScreenC Bungimea de und aleas #200-1100 nm$ 'urata msurtorii #5-9999 sec$ impul de !nt&rziereZ dup apsarea tastei D/1', msurtoarea propriu zis "a porni dup acest timp #0-50 sec$ (odul de msurare fotometric #1OS sau ^ $ Bimita de -os al ecranului grafic pe timpul msurtorii #-0.:-2.99 1*s ; 0-119.9 ^ $ Bimita de sus al ecranului grafic pe timpul msurtorii #-0.29-:.00 1*s ; 0.1-120.0 ^ $ Res !nseamn c msurtorile succesi"e "or fi afiate suprapuse !n fereastr. Numai ultima msurtoare se poate analiza.

'up setarea parametrilor, dac este necesar, msurm "alorea de *lanc, apoi aezm cu"a cu pro* !n incinta de lucru i !nchidem capacul. 1psm tasta D/1', dup trecerea timpului setat la delaQ time "a porni msurtoarea i cur*a "a fi trasat pe ecranul grafic. 0n partea de sus al ecranului se poate "edea timpul scurs i "aloarea fotometric actual. )utem opri msurtoarea cu tasta /S.. 12:00:00 0.000A
101.0 ?$

$IM1S.A*

'00.0n

100.0

110

BB.0 0 Sec 1'0 #00

Press -1AD =hen ready... Access Mani- .lear Prev Data "!late Ara"h Screen Ba sf&rit putem repeta msurtoarea cu tasta D/1'. )e partea de -os a ecranului sunt afiate ferestrele comenzilor ce pot fi e%ecutate. 1cestea pot fi lansate cu tasta aflat dedesu*tul lor #+1-+5$. 1naliza rezultatelor se face similar celor descrise la analiza spectrelor. 5H (I'=B '/ (S=D1D/ .1N A 1 A? 0n acest mod de msurare a"em posi*ilitatea determinrii concentraiei unei pro*e necunoscute, pe *aza unei cur*e de cali*rare !nregistrate !n preala*il de ctre utilizator cu a-utorul unor soluii standard, a cror concentraie se cunoate. Se pot !nregistra patru tipuri de cur* de cali*rare. 'in meniul principal putem a-unge !n modul Luantitati"e aleg&nd punctul cinci. 1pare fereastra 3)arameter Setup4. 12:00:00 (UA*$I$A$IV1 '00.0n Para eter 1.Cavelength4n 6 :'00.0 2.Standard n! +er4.onc.6 :# S 1:0.0 S S #:0.0 #./ave Unit45es/*o6 :*o

%.Method :1Eord. '.&eyin A3S :*o ).Print every cycle :*o *! +er 2ro 200 to :oad Save Print Sa "le *e;t Para Para Data .ontro Screen Na"ig&nd cu tastele sgei, putem seta sau edita parametrii. ?alidarea lor se face prin apsarea tastei /N /D. )utem !ncrca i seturi de parametri sal"ai anterior. Bista parametrilor de setat este urmtoarea, Oavelengt%, Bungimea de und aleas #200-1100 nm$. Standard Number, Numrul standardelor cu concentraia cunoscut #1-10$ . 9ave 1nit5Res/No)C Se "rea asocierea "alorilor cu o unitate de msur 'ac se alege Res, apare un ta*el din care putem alege una dintre cele 12 u. m. Bet%odC ipul cur*ei de cali*rare #a"em patru opiuni$,
111

3eQin !0S, &rint EverQ CQcle,

1ord.#Irigin$,dreapt, care trece prin origineZ 1ord. #No Irg$, dreapt, care nu trece prin origineZ 2ord. #Irigin$,cur* de gradul doi, care trece prin origineZ 2ord. #No Irg$,cur* de gradul doi, care nu trece prin origine. ~No~ !nseamn c soluiile standard tre*uie msurateZ ~es~ - a*sor*ana soluiilor standard se introduce manual. S se printeze dup fiecare msurare sau nu.

'up "alidarea tuturor parametrilor, cu tasta +5 trecem !n fereastra Luantitati"e Standard a*le. 1psm tasta D/1', pe r&ndul de sus apare concentraia introdus mai !nainte, precum i un mesa- !n partea de -os, T&ress ;E!= for read stdsT. 'up apsarea tastei apare un mesa- nou, TGnsert stds and press ;E!=T. 1cum putem introduce primul standard din seria de diluie. Se apas D/1', dup care "aloarea a*sor*anei msurate "a fi !nscris !n r&ndul corespunztor. .elelalte soluii din seria de standarde se msoar la fel. .u tasta +2 trecem !n fereastra TmanipulateT unde T,ie. CurveT ne "a afia cur*a de cali*rare, iar T,ie. EUuatiT ecuaia pe *aza creia aparatul "a calcula concentraia pro*elor necunoscute, dup ce le-a msurat a*sor*ana. #1ps&nd T3eQin FactorT putem edita parametrii G1 i G0 ai ecuaiei, corect&nd astfel "aloarea calculat$. 'ac nu dorim folosirea factorului, ne !ntoarcem cu T&rev ScreenT. .u tasta ~Sample (easure~ #+2$ a-ungem !n fereastra de msurare propriu zis. Meas!re Sa "le -------------------------------Sa "le *o. A3S C1#!.G G/LH 1 0.'21 '.2100 2 1.1#@ 11.#@0 # 2.#2' 2#.2'0

Press -1AD =hen ready... Print Sa "le Prev Data .ontro Screen 1cum putem aeza cu"a cu pro*a de concentraie necunoscut !n incint. 'up !nchiderea capacului se apas tasta D/1'Z msurtoarea "a fi e%ecutat. )e r&ndul de sus "or fi !nregistrate numrul de ordine al pro*ei, a*sor*ana msurat precum i concentraia calculat pe *aza cur*ei de dinainte. =rmtoarele pro*e necunoscute "or fi msurate pe r&nd, la fel. Ba sf&rit putem printa rezultatele. 'up "alidarea tuturor parametrilor, cu tasta +5 trecem !n fereastra Luantitati"e Standard a*le.

112

12:00:00

(UA*$I$A$IV1 '00.0n Standard $a+le -------------------------------Sa "le *o. .onc. A7S 1 1.0000 0.1 2 2.0000 0.2 # #.0000

*! +er 2ro F0.# to #.0... Access ManiPrev Data P!late Screen

1psm tasta D/1', pe r&ndul de sus, l&ng concentraia introdus !n preala*il, "a p&lp&i cursorul. 1ici tre*uie introdus cu tastele numerice "aloarea a*sor*anei, apoi se "alideaz cu /N /D. Ba sf&rit cu tasta /sc "alidm cur*a de cali*rare. 1psm +2 i intrm !n fereastra TBanipulateT, unde T,ie. CurveT ne afieaz cur*a de cali*rare, iar T,ie. EUuatiT ne arat ecuaia pe *aza creia aparatul "a calcula concentraia pro*elor necunoscute, dup ce le-a msurat a*sor*ana. 1ps&nd T3eQin FactorT putem edita parametrii G1 i G0 ai ecuaiei. 'ac nu dorim folosirea factorului, ne !ntoarcem cu T&rev ScreenT. .u tasta
11:

~Sample (easure~ #+2$ a-ungem !n fereastra de msurare propriu zis. 1cum putem aeza cu"a cu pro*a de concentraie necunoscut !n incint. 'up !nchiderea capacului se apas tasta D/1', msurtoarea "a fi e%ecutat. )e r&ndul de sus "or fi !nregistrate numrul de ordine al pro*ei, a*sor*ana msurat precum i concentraia calculat pe *aza cur*ei de dinainte. =rmtoarele pro*e necunoscute "or fi msurate pe r&nd, la fel. Ba sf&rit putem printa rezultatele.

=H CINETIC 0n acest mod de msurare !nregistrm "ariaia a*sor*anei !n timp la o lungime de und fi%Z pe *aza cur*ei !nregistrate se poate calcula acti"itatea. I aplicaie tipic este analiza acti"itii enzimatice. 1leg&nd punctul patru din meniul principal SHstem, a-ungem !n acest mod de msurare. 1pare fereastra 3)arameter Setup4. 12:00:00 &I*1$I. Para eter 1.Cavelength4n 6 2.Sa "ling *! +er #.:ag $i e4sec6 %.-ate $i e4sec6 '.Delay $i e4sec6 )./ave !nit45es/*o67 @.8actor4de2a!lt916 <.:o= Val!e4A3S6 B./igh Val!e4A3S6 10.Meas!re $e "erat!re 11.0verlay Screen 12.Print every cycle :'00.0 :' :2 :12 :0 :*o :1.0 :-0.#0 :#.00 :*one :5es :*o '00.0n

*! +er 2ro 2 to BBD :oad Save Print Sa "le *e;t Para Para Data .ontro Screen

11C

'e aici putem introduce sau edita parametrii de msurare. )utem !ncrca i parametri sal"ai anterior. 1"em acces la urmtorii parametri, Oavelengt%, Bungimea de und aleas #200-1100 nm$Z Sampling number, Numrul pro*elorZ "alorile care "or fi folosite la calculul acti"itii #2-20$Z Hag Time, =n inter"al de timp !n secunde, dup pornirea msurtorii, pe durata cruia nu dorim s folosim datele pentru calcul #2-9999$Z ;ate Time, Anter"alul de timp dup Bag ime, pe durata cruia dorim s folosim datele pentru calcul #:-9999 sec$Z =elaQ TimeC impul de !nt&rziere a msurtorii dup apsarea tastei D/1' #0-50 sec$Z 9ave Set&nd Res, "om putea alege dintre 12 uniti de msurZ 1nit5Res/No)C Factor )utem seta un factor de care s se in cont la con"ertirea 5default=1)C "ariaiei de a*sor*an !n acti"itate #0-9999.9$Z !(tivitate = Factor V W!0S/min 5panta de varia"ie a absorban"ei) Ho. ,alueC Bimita de -os al ecranului grafic la msurtoare #-0.:-2.99 1$Z 9ig% ,alueC Bimita de sus al ecranului grafic la msurtoare #- 0.29:.001$. 1ceasta tre*uie s fie mai mare dec&t cea de -os cu min. 0.1. Beasure )osi*ilitatea termostatrii, none, 25, :0, :7{.. 1re sens Temperature, doar !n cazul echiprii cu accesoriu de termostatareZ -verlaQ ScreenC Res !nseamn c msurtorile succesi"e "or fi afiate suprapuse !n fereastr. Numai ultima msurtoare se poate analiza #Banipulate$Z &rint EverQ CQcle, S se printeze dup fiecare msurare sau nu. 'up setarea lor, parametrii pot fi sal"ai pentru utilizri ulterioare. 'up "alidarea parametrilor, intrm !n fereastra de msurare cu +5. 1ezm pro*a !n incinta de lucru, apoi apsm tasta D/1'. (surtoarea "a porni, "or trece inter"alele delaQ time i lag time, dup care cur*a "a fi trasat pe ecran. )utem opri oric&nd msurtoarea cu tasta /S.. 'up terminarea msurtorii se "a e%ecuta calcularea acti"itiiZ rezultatul "a fi afiat !n partea de -os a ecranului. )trelele de pe cur* arat punctele de
115

calculaie. l arat parametrul rate time, l1OS;l rata de "ariaie a a*sor*anei, iar l.;l rata de "ariaie a concentraiei !n cazul utilizrii unui factor. 12:00:00
1.00 A3S

&I*1$I.

%0'.0n

0.#'

-0.#0 )0 B0 120 sec

$9)0.0 8actor9#2'#.000 A3S/ $90.11#0<4 A3S/ in6 . / $9#)@.<)%1%4 U/:/ in6 A3S 90.001<<$ G 0.2@1B% Press -1AD =hen readyD Data Mani- .lear Print Prev :ist "!late Ara"h Data Screen 'e aici putem printa datele sau le putem afia su* form de ta*el #cu tasta =ata Hist$. .u tasta +2 #(anipulate$ o*inem dou noi opiuni de analiz. 0n su*meniul S%o. Trac( putem deplasa o dreapt "ertical cu a-utorul tastelor sgei, e"alu&nd cur*a astfel. Hinear Fit aeaz peste cur* o dreapt de regresie. Ipiunea -riginal "a reafia cur*a iniial. APLICATII : 1. T)a.a)5a 4#53 !4) 5 "5 5(a*1#a)5 'ependenta coeficientului de e%tincie de concentraia su*stanei dizol"ate este un indiciu asupra e%istenei unor interaciuni !ntre moleculele dizol"ate, deci este o preioas surs de informaii. 0n cadrul acestei lucrri se "a trasa, pentru o anumit su*stan etalon, a crei concentraie este cunoscut, graficul dependentei e%tinciei de concentraie, adic / @ / #c$. 1cest grafic "a putea fi utilizat pentru , a) determinarea concentra"iilor unor solu"ii necunoscute #preparate pornind de la etalon$ , b) stabilirea domeniului de concentra"ii pentru care este valabil legea Hambet80eer' c) eviden"ierea unor eventuale interac"iuni )ntre moleculele de solvit 5de e%emplu, moleculele de al*astru de metilen a"&nd o structura planar, tind s se agrege !n soluie apoas, datorit forelor hidrofo*e$.
116

aromatic

)lec&nd de la soluia etalon care are o concentraie cunoscut, se prepar !n epru*ete diferite diluii, cu ap distilat, 5^, 10^, :0^, C0^, 50^, 70^. )entru cazul !n care se lucreaz la o singur lungime de und, din meniul principal al spectrofotometrului se apas tasta R. .u tasta ~(ode~ se alege modul fotometric de msurare #a*sor*an$. ?aloarea lungimii de und se alege corespunztor culorii soluiei, urm&rind diagrama culorilor complementare #dac etalonul este al*astru de metilen se "a selecta p @ C90 nm $. )rima msurtoare se "a efectua cu ap distilat, pentru a ine cont de "aloarea *lancului, se aeaz cu"a umplut cu sol"ent #ap$ !n suportul de cu"e i se apas tasta 1= I n/DI. 'up ce se sal"eaz rezultatul, se !nlocuiete cu"a care conine *lancul #ap distilat$ cu o cu" care conine pe r&nd, soluiile preparate din etalon, sal"&nd de fiecare dat rezultatul. 0n final, toate "alorile e%tinciilor "or aprea !n ta*el, care poate fi printat ulterior. Se "a trasa graficul / @/#c$, in&nd cont c pentru c @ 0 / @ 0 #graficul !ncepe din origine$, o*ser"&nd creterea e%tinciei odat cu concentraia soluiei. 1poi se "a determina spectrofotometric e%tincia soluiei #soluiilor$ necunoscute, iar pe *aza graficului se "a sta*ili concentraia acesteia. 'e asemenea se "a o*ser"a c poriunea liniar a graficului reprezint domeniul de concentraii pentru care legea Bam*ert 8Oeer este strict "ala*il. 2. D5(5)m3#a)5a !1#!5#()a233*1) "3=5)3(5*1) =1)m5 a*5 +5m1,*1 3#53 B# .1*4233 A3 B# .[#,5 Xemoglo*ina se poate afla !n soluii su* trei forme diferite, o%ihemoglo*ina, deo%ihemoglo*ina i methemoglo*ina # fig.10.6$ . +ormele o%i i deo%i trec re"ersi*il una !n cealalt !n funcie de presiunea parial a o%igenului !n soluie, au fierul heminic su* forma +e
2V

i sunt acti"e din punct de "edere

fiziologic !n procesul de transport al o%igenului. +orma met apare su* aciunea unor o%idanti puternici , are fierul heminic su* forma +e:V i este inacti" din punct de "edere fiziologic. .onform fig. C. spectrele de a*sor*ie ale acestor forme difer !ntre ele , iar coeficienii de e%tincie molari au "alori diferite !n funcie de lungimea de und. )unctele de intersecie a cur*elor coeficienilor de e%tincie se
117

numesc puncte isos*estice, adic au aceeai a*sor*ti"itate pentru lungimea de und corespunztoare lor. 0n cazul hemoglo*inei, un interes deose*it !l reprezint concentraia total de hemoglo*in !n s&nge #hemoglo*inemia $ dar i proporia de methemoglo*ina din hemoglo*ina total. .oncentraia hemoglo*inei !n s&nge #hemoglo*inemia$ se poate determina con"ertind toate formele de hemoglo*in la methemoglo*ina, cu a-utorul unei soluii a-uttoare de ferocianur de potasiu, dup care se efectueaz msurarea fotometric a concentraiei la lungimea de und 5C0 nm, unde a*sor*ti"itatea molar #coeficientul molar de e%tincie$ are "aloarea ma%im o @ 11. 10: (-1cm-1. +ie pro*a de s&nge care conine soluia de methemoglo*in diluat de d ori ft din s&ngele proaspt recoltat. /%tincia pro*ei !n cu"e de 1 cm grosime "a fi, /X*5C0 @

omet5C0 . c , de unde rezult concentraia cX* @ /X*5C0 ; omet5C0, dar

cX* @ # d ; omet5C0$ . /X*5C0.

concentraia real !n s&nge "a fi de d ori mai mare, adic

)roporia de methemoglo*in se calculeaz dup determinarea e%tinciilor soluiei de hemoglo*in rezultat din hemoliza la dou lungimi de und diferite, prima este 525 nm unde formele o%i i met au un punct isos*estic, iar a doua la 5C0 nm unde diferena de a*sor*ti"itate ale celor dou forme este ma%im #"ezi fig.10.6.$ . 'eoarece se lucreaz cu soluii saturate cu aer, !n care se poate considera c toat hemoglo*ina acti" este su* forma o%i, cantitatea aflat su* forma deo%i se negli-eaz. Ba 525 nm cele dou forme au aceeai a*sor*ti"itate, deci e%tincia se poate scrie su* forma, /525 @ o525 .cX*, iar la 5C0 nm , unde a*sor*ti"itile difer , /5C0 @ oo%i 5C0. co%i V omet 5C0. cmet. 1poi se ine cont de faptul c concentraia !n forma o%i reprezint de fapt diferena co%i @ cX* 8 cmet . 'ac se calculeaz rapoartele coeficienilor de e%tincie pentru cele dou forme de hemoglo*in la 5C0 i respecti" 525 nm se o*ine, omet 5C0; o525 @ 1.091, respecti" oo%i 5C0; o525 @ 1.75:.
119

in&nd cont de aceste "alori, dup un ir de calcule simple, relaia pentru procentul de methemoglo*ina din pro* se poate scrie su* forma urmtoare, (etX* ^ @ #2.6C9-1,151. /5C0; /525$ ,100 #1$

P)58a)a)5a .1*4233*1)> !3(3)5a 5N(3#!233*1) A3 8)595#(a)5a )594*(a(5*1). Se pregtesc dou epru*ete curate i uscate. 0n prima se pipeteaz 5 ml de soluie methemoglo*inizant #conin&nd fericianur de potasiu$ iar !n cealalt 5 ml de soluie hemolizant # conin&nd amoniac 0,1^$ . 0n fiecare se adaug c&te 0,02 ml de s&nge proaspt recoltat, utiliz&nd pipeta automat. .ele dou epru*ete se agit i se las !n repaus circa 5 minute.'up acest inter"al !n prima epru*et "a aprea o coloraie *run, caracteristic methemoglo*inei, iar !n a doua coloraia "a fi roie-ru*inie, caracteristic o%ihemoglo*inei. 1ceste pro*e se "or plasa !n cu"e standard de 1 cm. )entru determinarea hemoglo*inemiei se "a citi e%tincia soluiei din prima epru*et #care conine !ntreaga cantitate de hemoglo*in con"ertit la hemoglo*ina$ la p @ 5C0 nm, fa de soluia methemoglo*inizant ca *lanc. ?aloarea o*inut se noteaz /X*5C0. )rocentul de methemoglo*in se determin folosind ca *lanc soluia hemolizant i apoi citind e%tincile soluiei din epru*eta a doua la 525 i respecti" 5C0 nm. ?alorile se noteaz /525 respecti" /5C0. Xemoglo*inemia se "a calcula conform formulei prezentat anterior in&ndu-se cont de factorul de diluie d @ 5; 0,02 @ 251 i de "aloarea omet 11.10-: (-1cm-1. 1stfel, CX* @ 22,9 /X*5C0 m(. #2$ (asa molecular a hemoglo*inei este 16 000 'a, o soluie milimolar conine deci 1,6 g X*;100ml, deci concentraia de hemoglo*in se mai poate e%prima i astfel, .X* @ :6,9 /X*5C0 g;100ml s&nge. #:$ )rocentul de methemoglo*in se "a calcula cu a-utorul formulei #1$ . Anterpretarea rezultatelor se face in&nd cont c hemoglo*inemia normal are urmtoarele "alori, raportat la "&rsta su*iecilor umani,
5C0

119

g; 100 ml 1duli +emei Oar*ai .opii Nou- nscui Sugari )recolari 5colari 12 - 16 1C 8 19 16 - 25 10 - 15 11 8 1C 12 -16

(m 7,5 - 10 9,7 - 11,2 10 8 15,5 6,2 8 9,: 6,9 - 9,7 7,5 - 10

0n mod normal mai puin 0,: ^ din hemoglo*ina total se afl su* forma de methemoglo*in, aceast "aloare crete semnificati" !n cazul unor into%icaii cu su*stane o%idante cum ar fi nitrii, nitrai, chinone, nitri*enzen, anilina, etc. )recizia metodei se !ncadreaz !n limitele de c 1^, chiar dac precizia aparatului este mult mai *un. ?alorile necunoscute se pot determina i folosind modul de msurare cantitati" a spectrofotometrului, dup ce !n preala*il a fost sal"at !n memorie cur*a de etalonare. /ste interesant de "erificat dac rezultatele coincid.

I$. INTERACIUNEA RADIAIILOR CU MATERIA

11.1 CLASIFICAREA RADIAIILOR> SURSE DE RADIAII D5=3#3235: Numim radiaie fenomenul fi$ic de transmitere la distan" a energiei fr a fi nevoie de un mediu purttor . Studiul complet al unui fenomen radiati" presupune in"estigarea mecanismelor *i a legilor care guvernea$ , a$ producerea lorZ *$ propagarea #care, conform definiiei, poate a"ea loc !n "id$ i c$ absorb"ia energiei pe care o transport. C*a.3=3!a)5a )a"3a233*1) D48@ #a(4)a *1)> radiaiile pot fi corpusculare i electromagnetice.

120

)adia(iile cor#usculare sunt compuse din particule de substan" av#nd o anumit energie cinetic. /le pot fi su*di"izate !n funcie de sarcina i masa particulelor transportoare ale energiei, conform schemei de mai -os,
C )articule # 2 $

/le sunt nuclee de heliu, rezultx din dezintegrarea radiaocti"x de tip alfa, poartx doux sarcini elementare poziti"e iar masa lor este egalx cu patru unitxi atomice de masx.

0 )articule # 1 $

Ancxrcate electric

1cestea sunt electroni, rezultx din dezintegrarea radiaocti"x de tip *eta minus, poartx o sarcinx elementarx negati"e, numxr de masx zero, masa lor fiind egalx cu 1;19C0 unitxwi atomice de masx.

)articule Dadiaii corpusculare

Sunt compuse din pozitroni #antiparticula electronilor$ rezultx din dezintegrarea radiaocti"x de tip *eta plus sau prin generarea de perechi.

0 # +1 $

1 )rotoni, 1 8 , care sunt nuclee de hidrogen. Neutre 1 Neutroni, 0 # . )articule

elementare neutre, cu numxr de masx 1. nucleare,

)adia(iile electromagnetice sunt emise *i absorbite )n natur sub form de cuante #fotoni$. +otonii sunt particule fr mas de repaus, ce transport, fiecare, o cantitate de energie ce poate fi calculat cu e%presia E J + , unde + @ constanta lui )lancT #6,625.108:C _s$, iar @ frec"ena radiaiilor. (asa lor de micare, m, se leag de energie prin formula lui /instein, E J m!2, ! fiind "iteza luminii !n "id. .urent, energia lor se e%prim !n electron-?oli, 15$ J 1>E.1DK1M J . Spectrul radiaiilor electromagnetice este e%trem de e%tins. 0n funcie de lungimile lor de und !n "id # J !/ $, acesta se poate reprezenta ca !n figura de mai -os,

121

 (m ) *+2 *+3 *+ * *+,* *+ *+

,3

#u )i me dii $ "urte RA(IO

u#tra$ "urte

TV TEL% MOBILA SATELIT &U'TOARE

mi"rou de

,2

IR de p!rtat *+,4 IR me diu *+,1 IR apropiat *+,0 *+

,/

INFRAROSU (IR)

+4/%*+,0 VIZIBIL (VIS) +45%*+,0 ULTRAVIOLET (UV)

*+,. *+,*+ *+
,*+

R]NTGEN (X)

,**

*+,*3

GAMMA ()

Y# =4#!235 "5 5#5),3a ()a#.81)(a(@> radiaiile se clasific !n radia"ii neioni$ante i radia"ii ioni$ante. 'istincia dintre aceste este con"enional, i este legat de efectele asupra materiei. 'ac se iau !n considerare energiile de ionizare ale principalilor atomi ce compun materia "ie #H, C, N i O$, pot fi considerate ionizante radiaiile ce transport energie mai mare de 1:,6 e? pe particul, ceea ce corespunde, !n cazul radiaiilor electromagnetice, la o lungime de und V 1DD #m. )e de alt parte, anumite macromolecule *iologice pot fi ionizate la energii ce depesc ? 5$, lungimea de und corespunztoare fiind V 2DD #m. )entru simplificare, c&nd este "or*a de radiaiile electromagnetice, se consider ioni%ante radia"iile din domeniile \ i , neioni%ante cele din domeniile radio' microunde' AD, ?AS i =?.
122

Dadiaiile corpusculare au importan *iologic numai prin efectele lor ionizante. S4).5 "5 )a"3a233. 1cestea pot fi naturale i artificiale. =ursele naturale au fost singurele la care a fost e%pus *iosfera #i populaia uman$ p&n !n epoca modern. 1cestea sunt la r&ndul lor cosmice i telurice. &rincipala surs cosmic de radia"ii este soarele. 1cesta emite tot spectrul de radiaii electromagnetice i toate radiaiile corpusculare. 'intre cele electromagnetice, numai o mic parte a-ung la suprafaa solului, fiind a*sor*ite de cromosfera solar i atmosfera terestr. 1stfel, "aporii de ap i *io%idul de car*on atmosferice a*sor* !n AD, iar stratul de ozon a*soa*e =?. )roporia, !n procente, a fotonilor neionizani care a-ung la ni"elul mrii este de 2^ =?, C5^ ?AS i 5:^ AD. +otonii ionizani sunt a*sor*ii !n proporie co"&ritoare de moleculele straturilor atmosferei !nalte, pe care le ionizeaz d&nd natere ionosferei. ;adia"iile corpusculare emise de soare, care formeaz v#ntul solar, sunt, de asemenea !mpiedicate s atig straturile inferioare ale atmosferei. .ele !ncrcate electric, datorit !nclinrii a%ei )m&tului, intr o*lic !n c&mpul magnetic al acestuia i, fiind supuse forei Borentz, se mic pe traiectorii elicoidale ce le direcioneaz spre poli. 1ici efectele lor ionizante asupra atmosferei !nalte se manifest prin apariia aurorelor polare. Neutronii nu a-ung p&n la )m&nt, timpul lor mediu de "ia !n stare li*er, de apro%imati" 1000 s, fiind mult mai scurt dec&t durata cltoriei lor de la Soare i planeta noastr. /i se "or transforma, fiecare, !ntr-un proton i un electron, care "or crete numrul particulelor ionizante, !ncrcate electric. !lte surse cosmice de radia"ii ioni$ante sunt furnizate de acti"itatea stelar. .ele mai importante sunt ra$ele cosmice, formate din nuclee atomice #mai ales protoni$ de mare energie care, prin coliziune cu nucleele gazului atmosferic produc -er*e de particule secundare ionizante. 1cestea din urm sunt atenuate odat cu str*aterea atmosferei su*-acente. 'in acest moti", efectele cresc cu altitudinea, du*l&ndu-se cu fiecare cretere cu 1500 m a acesteia.
12:

=ursele telurice, sunt reprezentate de izotopii radioacti"i din atmosfer i scoar. Antensitatea radiaiilor emise de acestea depind de localizarea geografic. nonele aflate !n "ecintatea unor zcminte de uraniu, de e%emplu, "or fi afectate de ni"ele de radiaie mai mari. =ursele arti*iciale sunt construite prin acti"itate uman. /%punerea la radiaiile emise de acestea poate fi general #nedescriminatorie$, profesional, medical #e@ploratorie *i terapeutic$, sau accidental. E@punerea general include toate persoanele aflate !n "ecintatea unei surse de radiaii neionizante #lmpi, emitore radio, cuptoare, etc.$ sau ionizante #generatoare de raze m, sau centrale nucleare$. E@punerea profesional afecteaz personalul care, prin natura meseriei, manipuleaz dispoziti"e sau materiale emitoare de radiaii #operatorii staiilor de radio, medicii radiologi, sau profesionitii industriei de e%tracie, prelucrare i utilizare a materialelor radioacti"e$. E@punerea e@ploratorie #diagnostic$ i terapeutic este consecina acti"itii medicale i are importan !n cazul utilizarrii radiaiilor m i . Dadiografiile i radioscopiile de orice tip reprezint e%puneri semnificati"e la radiaii ionizante. /%puneri importante se produc !n Dentgenterapia sau co*altoterapia afeciunilor tumorale. E@punerea accidental are loc !n cazul e%ploatrii defectuoase a surselor artificiale de radiaii. /a afecteaz, !n primul r&nd, personalul din "ecintate i apoi restul populaiei. 11.2. E=5!(5 a*5 )a"3a233*1) #531#39a#(5: )a"3a233*1) #531#39a#(5 /nergia a*sor*it de ctre gruprile cromofore ale moleculelor poate antrena modificri #reac"ii$ fotoc%imice ale acestora. +aptul este comun i !mpiedicarea lui poate fi regsit !n pstrarea !n flacoane *rune sau opace a unor E=5!(5*5 !+3m3!5 a*5

12C

medicamente sau *uturi #*ere, "in$. 0n lumea "ie, plantele i algele transform curent energia luminoas !n energie chimic stocat !n compui organici de sintez. /%ist dou legi ale fotoc%imieiC 1$ 1n foton interac"ionea$ cu o singur molecul i 2$ Xn urma interac"iunii, energia fotonului este absorbit integral. =e procese fotoc%imice sunt responsabile mai ales radia"iile =?, a*sor*ite de du*lele legturi. recerea electronilor pe or*italii de antilegtur #$ este echi"alent cu ruperea acesteia urmat de posi*ilitatea refacerii !n alte modaliti. .a urmare, pot a"ea loc unul din fenomenele, - Defacerea ei !n alt poziie #migrarea$Z - Azomerizarea cis-transZ - 1diia unui su*stituent, !n general 8IX sau 8XZ - 'imerizareaZ - .iclizarea intern. !supra macromoleculelor proteice, transformrile fotochimice susmenionate se manifest mai ales asupra aminoacizilor aromatici i a sec"enei legturilor peptidice. /le au ca efect schim*area structurii primare #co"alente$ i, consecuti" a celor secundare, teriare i cuaternare. Dezultatul este apariia unor compui denaturai, lipsii de funcie *iologic sau cu funcia alterat. Bacromoleculele de aci$i nucleici sufer efecte fotochimice importante datorit a*sor*iei radiaiilor =? de ctre du*lele legturi ale *azelor azotate. 'imerizrile i trimerizrile de *aze, ciclizrile sau adiiile la acestea !mpiedic adoptarea unei geometrii corecte a heli%urilor de acizi nucleici. .onsecinele *iochimice rezid !n imposi*iliatea de recunoatere a acestora de ctre enzimele implicate !n citirea, utilizarea i transmiterea informaiei genetice. E=5!(5*5 31*1,3!5 a*5 )a"3a233*1) #531#39a#(5 La #3v5* "5 1),a#3.m, procesele fotochimice pot fi implicate !n dou procese fiziologice, a$ +otoconversia, prin care are loc tranformarea energiei luminoase !n energie chimic. .el mai important este fotosinte$a, realizat de ma-oritatea plantelor "ezi i de microorganismele plactonului oceanic.
125

*$ +otodetec(ia, !n timpul creia energia luminoas este tratat ca semnal informatic i mi-locete orientarea i !ncadrarea organismelor !n mediu. /a este !nt&lnit de la protozoare la plante i animale. 'intre acestea, numai animalele au ochi - organe specializate !n o*inerea unor imagini 3fotografice4 ale mediului !ncon-urtor. E=5!(5*5 *1!a*5> (3.4*a)5> ale radiaiilor neionizante depind de domeniul spectral !n care sunt plasate. oate, c&nd sunt a*sor*ite, produc !nclzirea esuturilor, profunzimea de ptrundere scz&nd odat cu scderea lungimii de und. 1ndele utili$ate )n telecomunica"ii au efecte incerte. .ele cu lungimi de und mari nu au fost incriminate !n producerea unor afeciuni specifice. =ndelor din domeniul celor ultrascurte, utilizate !n telefonia mo*il, le-a fost atri*uit, fr a fi indu*ita*il, creterea riscului de tumori cere*rale !n "ecintatea urechii la care este folosit telefonul. Bicroundele au efect caloric e%primat i de profunzime, prin punerea !n oscilaie a dipolilor de ap, cea ce antreneaz creterea energiei de agitaie termic din mediu. +aptul i-a gsit aplicaii practice at&t !n *alneofizioterapie #!n tratarea afeciunilor degenerati"e, c&nd !nclzirea local i "asodilataia consecuti" au efecte *enefice$ c&t i gospodreti - cuptoarele cu microunde. ;adia"ia din domeniul AD produce !nclzirea local, profunzimea lor de ptrundere !n esuturi fiind de c&i"a milimetri. 5i acestea sunt a*sor*ite mai ales de apa tisular, dar i de macromolecule, prin e%citatrea micrilor de "i*raie ale atomilor. Andiferent de mecanismul !nclzirii, creterea e%agerat a temperaturii produce denaturarea ire"ersi*il a proteinelor i a structurilor celulare cu manifestrile clinice curente ale arsurilor. ;adia"ia vi$ibil nu are efecte patologice, ea fiind implicat !n fotodetecie i fotocon"ersie. otui, dac este focalizat pe zone reduse, antreneaz arsuri tisulare, cum este cazul pri"irii cu ochiul li*er a soarelui !mpre-urare !n care se produc arsuri de retin.

126

;adia"ia =? are cele mai multe efecte fotochimice, care se constat p&n la profunzimi de 2- : mm. )rotecia !mpotri"a lor se face fiziologic prin pigmentarea #*ronzarea$ pielii. 1ceasta poate fi determinat genetic la populaiile din zonele tropicale, sau poate fi indus de e%punerea la =? a su*iecilor cu tegumente de nuane deschise. 0n doze mici, radiaiile =? produc *ronzarea prin transformarea tirozinei !n melanin, pigment a*sor*ant al acestora. 'ozele mari, a*sor*ite !n timp scurt, produc fenomene similare arsurilor termice, cauza fiind denaturarea proteinelor. /fectul *acteriostatic al dozelor mari de =? se e%plic mai ales prin !mpiedicarea multiplicrii microorganismelor, ca o consecin a interaciunii cu acizii nucleici. 'ozele moderate i repetate de ultra"iolete au asupra tegumentelor, !n timp mai !ndelungat, efecte carcinogene. # umorile maligne ale esuturilor epiteliale se numesc carcinoame i o *un parte a celor cutanate, la "&rstnici, se datoresc radiaiilor =?$. acizilor nucleici. 5i acestea sunt consecine genetice rezultate din modificarea

11.0. INTERACIUNEA RADIAIILOR IONI&ANTE CU MATERIA $IE Studiul efectelor radiaiilor ionizante asupra materiei "ii este mai complicat i presupune parcurgerea mai multor etape, - 0nelegerea mecanismelor de transfer a energiei lor ctre mediu i a producerii ionizrilor care reprezint interac"iunea lor primar cu substan"a. - 'escifrarea efectelor radioc%imice produse de ionizri. 1ceste efecte pot a"ea loc fie datorit interac"iunii directe cu macromoleculele sistemului "iu, fie ca o consecin a modificrilor induse de radiaii !n sol"entului apos, c&nd "or*im de interac"iuni indirecte.
127

- ransformrile radiochimice sunt urmate, !n final de efecte biologice. I#(5)a!234#5a 8)3ma)@ !4 .4 .(a#2@ a )a"3a233*1) !1)84.!4*a)5 B#!@)!a(5 )rincipalul mecanism de transfer a energiei lor ctre mediul str*tut este acela de ionizare a atomilor i moleculelor su*stanei. ;esponsabile de ioni$ri sunt interac(iunile electrostatice dintre particul *i electronii atomilor. )entru o particul, scderea energiei ei i creterea energiei mediului este caracterizat prin transferul linear de energie, TLE. 1cesta reperezint energia pierdut de particul pe fiecare unitate de lungime a traiectoriei sale. 'ac o particul face I ionizri pe unitatea de lungime, i energia medie pierdut de la iniierea unei ionizri p&na la producerea urmtoarei , a"em,
TLE J I.

0ntruc&t !ntre dou ionizri particula produce i un numr de e%citri ale atomilor, este mai mare dec&t energia de ionizare. 1stfel, pentru aer i ap "alorile sunt de 02 5$ i 0< 5$, respecti". TLE crete cu ptratul sarcinei particulei i concentraia electronilor din mediu dar nu are o "aloare constant de-a lungul traiectoriei. /a scade cu creterea ptratului "itezei particulei deoarece, la "iteze mari ale acesteia, timpul c&t are loc interaciunea cu electronii este mai redus. =nitatea curent utilizat, la str*aterea mediilor apoase, este T5$/ m. 'ac particula str*ate o su*stan compus dintr-un element pur, !n "ecintata fiecrui punct al traiectoriei este "ala*il e%presia,
TLE = dE 9 = ^ & # v dN
2

unde dE este pierderea de energie pe distana dNZ ^ - o constant ce depinde de natura particulei, a mediului i unitile de msur aleseZ 9 ; numrul de sarcini elementare ale particuleiZ " - "iteza particulei !n punctul datZ & - numrul de ordine ai atomilor mediuluiZ # ; numrul de atomi pe unitatea de "olum a mediului #concentraia atomilor mediului$.

129

0ntruc&t & # J #5 , concentraia electronilor !n mediu, formula se poate rescrie

9 TLE = ^ # e v
2

=ltima e%presie este util pentru calcularea "alorii TLE !n medii ce conin amestecuri moleculare i pentru care #5 este uor accesi*il calculului. 'ac "om considera dou particule de aceeai energie cinetic, una grea i alta uoar, prima "a a"ea o "itez mai mic dec&t a doua. 'in acest moti" particulele grele au un TLE mai mare dec&t cele uoare de aceeai energie. )ri"ind din punctul de vedere a lungimii parcursului, particulele grele, pierz&nd mai mult energie pe unitatea de lungime, au parcursuri mai scurte, pe c&nd cele uoare str*at !n mediu distane mai mari. 'ac o particul are energie E i, pentru !ntreg parcursul de lungime ", are un B/ mediu, notat TLE , aceste mrimi se leag cu relaia simpl,
"= E TLE

0n plus, particulele cu mas mare #alfa i protoni$, nu ricoeaz la ciocnirile cu electronii, a"&nd traiectorii rectiliniiZ pe c&nd cele uoare #electronii$ dup fiecare ciocnire cu un electron din mediu !i schim* direcia, prezent&nd traiectorii su* forma unor linii fr&nte. C1#.5!3#25 m5"3!a*5 .articulele al*a #cu sarcin mare, 9 J L2, i mas mare m J < 4.a.m.$ prezint un pericol redus !n cazul iradierii e@terne, ad&ncimea lor de ptrundere nedepind stratul cornos al epidermei. I astfel de particul cu energia de 5,: (e? #(ega electron-?oli$ are un B/ tisular mediu de 1:0 Ge?; m i ptrunde la o profunzime de ma%imum C0 m. Gradierea intern ce poate a"ea loc datorit a*sor*iei digesti"e sau respiratorii a unor radionuclizi alfa-emitori duce la iradieri importante ale celulelor "ecine locului unde se fi%eaz i se acumuleaz atomii radioacti"i.

129

.rotonii #9 J L1 i m J 1 4.a.m.$ se comport apro%imati" similar !ntruc&t, conform formulelor precedente, au B/ de 16 ori mai mic iar lungimea traiectoriei de 16 ori mai mare. .articulele beta #electroni cu 9 J K1 i m J 1/1C?D 4.a.m.$, datorit masei foarte mici au "iteze e%trem de mari, ceea ce conduce la "alori de TLE foarte reduse, cu parcursuri !n esuturi mult mai lungi. /le pot produce consecine at&t datorit iradierii e%terne c&t i celei interne. Ba energii de zeci de (e?, particulele *eta au parcursuri !n esuturi de 1 ... 2 cm. I#(5)a!234#5a 8)3ma)@ a #54()1#3*1) !4 .4 .(a#2a Nea"&nd sarcin electric, neutronii nu interacioneaz electrostatic cu componentele atomilor, fiind, prin sine, fr proprieti ionizante. /i produc 8

S 4 .(a # (a

T raseel e io n iz arilo r p o d u se d e p ro to n i i c io c n ii d e n eu tro n i

C ap tu r n eu tro n ic

ionizri indirect, datorit interaciunilor cu nucleele atomice. 1ceste interaciuni sunt difu$iunea i captura neutronic. 3i*u%iunea neutronilor este consecina fenomenului de ciocnire mecanic dintre acetia i nucleele atomilor, !n urma cruia nucleele ciocnite #intele$ preiau parte din energia cinetic a neutronilor #proiectilele$. 0n urma unei succesiuni de ciocniri, neutronul !i pierde progresi" energia cinetic. .um !n mediile *iologice mai mult de -umtate de nuclee sunt de hidrogen, iar legile ciocnirilor elastice arat
1:0

c energia preluat de int crete cu scderea masei acesteia, protonii de energie mare re$ulta"i din cicniri vor fi principalii responsabili de producerea ioni$rilor . 0ntruc&t pro*a*ilitatea ciocnirii nucleelor este destul de mic, parcursurile neutromilor !ntre dou ciocniri sunt lungi, ceea ce e%plic marea lor putere de penetrare. )e de alt parte, masele proiectilului #neutron$ i intei #proton$ sunt aporoape egale iar neutronul ricoeaz dup fiecare ciocnire, efectele ionizante fiind difuze. 'e e%emplu, !n ap, un neutron cu energia de 2 (e? i-o reduce la 1 e? dup 19 ciocniri, !n medie. &a#tura neutronic este o reacie nuclear produs de neutronii leni, cu energii inferioare a 1Ge?. 0n urma capturii rezut un nucleu izotopic de mas superioar cu 1 u.a.m., care este !n stare e%citat. 'eze%citarea lui se produce prin emisia unei radiaii . Schema general a transformrilor este,

A 1 A+ 1 #radioacti"$ & \ + 0 # &_ V

foton

A +1 &_

#sta*il$

+otonii , sunt !n continuare responsa*ili de ionizri prin mecanisme ce "or fi sumarizate !n continuare. I#(5)a!234#5a =a.!3!1*5*1) "5 =1(1#3 \ A3 !4 .4 .(a#2a. 'ac un fascicol de radiaie m sau
,

monocromatic #fotoni

monoenergetici$ str*ate normal un strat de su*stan, la ieire el se "a gsi atenuat. Not&nd Io intensitatea radiaiei incidente, I intensitatea celei emergente pe aceeai direcie, i cu N grosimea stratului se demonstreaz teoretic i se constat e%perimental c atenuarea fascicolului respect legea,
N I = I o e

Z e fiind *aza logaritmilor, iar coeficientul de atenuare

linear. Se mai constat c depinde at&t de energia fotonilor c&t i de natura materialului str*tut.
1:1

)roprietile atenuante ale unui material fa de o radiaie cu fotoni de energie dat se caracterizeaz prin grosimea de )n:umt"ire #%1;2$ care este grosimea stratului care reduce intensitatea radiaiei emergente la Io/2. 0nlocuind !n formul i logaritm&nd am*ii mem*ri ai egalitii se o*ine,
ln 1 = N1 / 2 Z 2

de unde rezult relaia dintre grosimea de !n-umtire i coeficientul de atenuare linear,

N1/ 2 = ln 2

'ac se "or face msurtori pe alte direcii dec&t cea a fascicolului incident se "or gsi intensiti de radiaii diferite de zero pentru fotoni de energii mai mici sau pentru electroni accelerai. 1ceasta arat c interaciunile a radiaiilor \ i cu su*stana sunt comple%e, !n urma acestora rezult&nd radia"ii difu$ate, unele )mpr*tiate iar altele secundare. 0nseamn c reducerea intensitii fascicolului #atenuarea lui$ are loc at&t prin absorb"ia energiei lui de ctre su*stan c&t i prin difu$ia energiei pe alte direcii i su* alte forme dec&t cele ale fotonilor fascicolului incident. /nergia transportat de fascicolul incident #`3#!H se "a regsi integral, distri*uit !ntre cea a fascicolului emergent #`5m,$, energia a*sor*it de su*stana str*tut #`a ., transferat mediului$ i energia radiaiei difuzate #`"3=$. =ltimele dou reduc intensitatea #energia$ fascicolului emergent i, cu c&t reprezint o fraciune mai mare din aceasta, coeficientul de atenuare linear # $ are "aloarea mai mare. 'ei sunt mai multe tipuri de interaciuni care reduc intensitatea fascicolelor de fotoni m i , de importan practic sunt numai trei, efectul fotoelectric, efectul Compton i generarea de perec%i #efectul de materiali$are$.

1:2

5*ectul *otoelectric se manifest prin absorb"ia integral a energiei unui foton de ctre un electron al unui atom. /nergia lui se distri*uie integral !ntre energia necesar e%traciei din atom i energia cinetic a electronului e%pulzat #fotoelectronului$. 0n acest caz, efectele ioni$ante se datoresc fotoelectronilor, care 6inc
Substan

6emg 6abs

6dif 6inc =6emg +6abs + 6dif se comport similar radia"iei . /nergia lor "a fi a*sor*it de mediul str*tut. )e de alt parte, atomii e%citai prin e%pulzarea unui electron din pturile inferioare re"in !n stare fundamental prin tranziii ale celor din pturile superioare. 1stfel de tranziii sunt responsa*ile de emisia unor radia"ii secundare de fluorescen" #m !n cazul atomilor grei sau =? !n cazul celor uori$. /nergia radiaiilor astfel difuzate este, !n general, negli-a*il. 1tenuarea prin efect fotoelectric a fascicolului se descrie cantitati" prin coeficientul de atenuare linear = , care crete cu pro*a*ilitate producerii efectului. 1ceasta depinde pronunat de energia fotonilor incideni i de natura atomilor int. Efectul fotoelectric este deosebit de important )n ca$ul fotonilor de energii reduse care strbat materiale ce con"in elemente grele. A8*3!a233*5 8)a!(3!5 ale efectului fotoelectic se regsesc !n alegerea *i construc"ia filtrelor pentru realizarea imaginilor radiografice. 0ntruc&t nu sunt potri"ite e%plorrii radiologice de profunzime, radiaiile cu fotonii de energii mici #su* 50 Ge?$ sunt atenuate !n fasciculele policromatice emise de tu*urile Dentgen cu filtre din cupru. )e de alt parte, contrastul optim al imaginilor radiografice se o*ine !n domeniul 60 ... 120 Ge?, unde efectul fotoelectric !nc este manifest.
1::

5*ectul &om#ton apare la ciocnirea dintre un foton *i un electron #considerat liber sau slab legat$. Dezult un electron de recul' care primete o parte din energia fotonului incident i un foton difu$at, cu energie #i frec"en$ mai mici dec&t a celui incident. 1cest efect este semnificati" ca importan c&nd energiile de legare a electronilor !n atom pot fi considerate negli-a*ile fa de energiile fotonilor incideni. 0n urma ciocnirii, energia fotonului incident se regse*te )n energia transferat electronului de recul *i energia fotonului difu$at . /lectronii de recul au energii suficiente pentru a produce ionizri similare razelor *eta, iar fotonii difuzai, !n funcie de energia pe care o mai au, pot produce fie alte efecte .ompton fie efecte fotoelectrice. 'ac !n cazul efectului fotoelectric aproape !ntreaga energie pierdut de fascicolul incident este transferat su*stanei a*sor*ante, !n cazul efectului .ompton o parte este emis de su*stana tra"ersat su* form de radiaie !mprtiat su* unghiuri mari fa de cea incigent. 0n mediul *iologic, energia radiaiei difuzate #`dif$ este de C ... 5 ori mai mare dec&t energia transferat electronilior i a*sor*it #`a*s$ !n zona str*tut de fascicol. .a urmare, efectele iradierii prin radiaia !mprtiat se "or manifesta p&n departe de zona intit de fascicolul incident. 1tenuarea fascicolului incident se caracterizeaz cantitati" printr-un coeficient de atenuare linear pe care-l "om nota C. 1cesta scade lent odat cu creterea energiei fotonilor dar crete e%primat odat cu numrul de electroni din unitatea de "olum #densitatea materialul$. 1stfel se e%plic proprietile a*sor*ante deose*ite ale metalelor grele, cum este plum*ul. >eanerarea de #erechi are loc atunci c#nd un foton de energie )nalt traversea$ c#mpul electrostatic al unui nucleu . 'ac acest c&mp este destul de intens, energia fotonului se 3materiali$ea$4, prin apari"ia unui electron #5K $ *i a unui po$itron #5L, antiparticula electronului$. (aterializarea nu poate a"ea loc dec&t dac energia fotonului depete de dou ori energia de repaus a unui electron #0,511 (e?$. )ragul teoretic al energiei fotonului este + a 2. 0,511 @ 1,022
1:C

M5$. 0n practic, atenuarea prin generare de perechi depete !n amploare celelalte fenomene la energii cu mult mai mari, ne&nt&lnite !n practica medical, #5 (e? pentru plum* i 25 (e? pentru ap i car*on$. 'iferena dintre energia fotonului i cea necesar materializrii, este regsit ca energie cinetic a electronului i pozitronului. 1ceast energie este a*sor*it de mediu #`a*s$, prin ionizri similare celor produse de radiaia . Spre deose*ire de electron, "iaa pozitronului este scurt. 'up !ncetinirea responsa*il de ionizri, la !nt&lnirea unui electron, perechea pozitron - electron sufer reac"ia de ani%ilare, energia particulelor transform&ndu-se !n dou cuante , fiecare cu + J 0,511 (e?. 1ceste cuante sunt emise pe o direcie oarecare, !n sensuri opuse, i intr !n componena energiei difuzate # `"3=$. +otonii de anihilare pot produce, !n alte zone dec&t cea supus iradierii primare, efecte fotoelectrice sau, mai ales, .ompton. 'ac ne referim numai la pierderea de energie a fascicolului incident prin generarea de perechi, aceasta se caracterizeaz prin coeficientul de atenuare linear
8. )ierdere se datorete !n special a*sor*iei de ctre mediu, energia fotonilor

difuzai fiind o fraciune redus din cea a fotonilor ce a generat perechea. C15=3!35#(4* ,*1 a* "5 a(5#4a)5 *3#5a)@ "a fi suma celor trei, corespunztoare fiercruia dintre efecte,
@ = V C V 8

.ontri*uia independent la scderea energiei radiaiei incidente depinde de energia fotonilor i de mediul str*tut. 0n ap, fasciculele de fotonii cu diferite energii sunt atenuai dup cum urmeaz, + < ?D T5$ ;;;;;;;a predomin efectul fotoelectric ?D T5$ < + < 2D M5$ ;;;;;;;a predomin efectul Compton + > 2D M5$ ;;;;;;;a predomin generarea de perec%i Andiferent de efectul considerat, radiaiile m i , prin natura lor au proprieti ionizante directe sla*e. Aonizrile importante sunt indirecte i se datoresc

1:5

electronilor accelerai care rezult !n urma fiecruia din cele trei efecte discutate mai sus.

11.<. EFECTELE RADIOCHIMICE ALE RADIAIILOR IONI&ANTE

1:6

)rocesele chimice care au loc dup ionizarea unor molecule de ctre radiaii se numesc efecte radioc%imice. 1a cum se "a "edea, ionizarea conduce la ruperea legturilor co"alente simple cu formarea de radicali li*eri. 1cetia sunt fragmente de molecul a"&nd electroni ne&mperecheai #celi*atari$, ceea ce !i face e%trem de reacti"i. Deaciile date de radicalii li*eri sunt responsa*ile de toate consecinele chimice pe care le au radiaiile ionizante asupra sistemelor "ii. 0n ecuaiile chimice prezena electronului n&mperecheat se semnaleaz cu . un punct plasat !n dreapta sus a radicalului, de e%emplu IX #radical li*er o%idril$ . sau X #radical hidrogen$. Ba iradierea unui sistem "iu, "or suferi ionizri at&t moleculele sol"entului apos c&t i moleculele lui *iologice. 1pa "a suferi procesul de radioli$, radicalii li*eri rezultai "or da reacii care se "or repercuta, !n moduri "ariate asupra macromoleculelor sistemului. Dealiz&ndu-se prin intermediul sol"entului, acestea se numesc efecte radioc%imice indirecte. .onsecinele ionizrii macromoleculeor se numesc efecte radioc%imice directe.

E=5!(5*5 )a"31!+3m3!5 3#"3)5!(5 a*5 )a"3a233*1) 31#39a#(5

Ra"31*39a a853 Aonizarea unei molecule de ap are loc dup reacia X2I ------[ X2IV V e8 Ba impactul cu particula ionizant electronul, de mas mai mic, "a a"ea o "itez mai mare i "a fi proiectat departe de ionul de ap. 'in acest moti" ionii "or rm&ne !n "ecintatea traiectoriei particulei iar electronii !mprtiai mai la distan. +iecare din produii de ionizare este insta*il transform&ndu-se conform reaciilor, X2IV------[ XV V IX . e8 V X2I ------[ X . V IX 8 #l&ng traiectorie$ #la distan$

1:7

P)3#!38a*5*5 )5a!233 a*5 !1m84A3*1) "5 )a"31*39@ Dadicalii li*eri formai se pot recom*ina oricum, dar distri*uia lor spaial este puin propice re-formrii apei, X . V IX . ------[ X2I 0n schim*, radiacalii li*eri de acelai tip se pot com*ina !ntre ei, X . V X . ------[ X2 IX . V IX . ------[ H2O2 #la distan$ #l&ng traiectorie$

'ac hidrogenul molecular este neto%ic, apa o%igenat #X 2I2$ este un agent o%idant foarte puternic, ce produce denaturarea ire"ersi*il a proteinelor. S-ar prea c efectele denaturante rm&n cantonate l&ng punctele de ionizare, dar nu este aa din cauza prezenei o%igenului molecular !n mediile *iologice. Dadicalii X dau lanuri de reacii !n urma crora o%igenul este fi%at ca ap o%igenat, X . V I2 ------[ HO2. #radical pero%id de hidrogen, o%idant e%trem de puternic$ 2 XI2. ------[ H2O2 V I2

X . V I2 ------[ HO2. s.a.m.d... Dadicalii hidro%il i pero%id pot fi responsa*ili i de o%idarea unor grupri din structura moleculelor organice, mai ales a celei 8SX, cu formarea unor puni 8 S8S 8, dup reaciile generale, D18SX V XS8D2 V 2 IX . ------[ D18S8S8D2 V 2 X2I D18SX V XS8D2 V 2 XI2. ------[ D18S8S8D2 V 2 X2I2 Dezultatul acestor reacii este apariia !n timp a unor macromolecule cu structuri primare alterate i modificate ca funcie.

1:9

E=5!(5*5 )a"31!+3m3!5 "3)5!(5 a*5 )a"3a233*1) 31#39a#(5

(oleculele organice, la fel ca i moleculele de ap pot fi ionizate la ni"elul unei legturi, urmarea fiind ruperea ei i apariia unor radicali li*eri organici suscepti*ili de a se com*ina !ntre ei i;sau cu cei rezultai din radioliza apei. 'ac lum cazul a numai dou molecule organice afectate rezult C radicali li*eri, Da8D* ------[ Da.V D*. Dc8Dd ------[ Dc.V Dd. 1ceti radicali se pot lega !ntre ei !n orice com*inaie i, !n plus, fiecare poate adiiona radicali X . sau IX . din mediul apos. Dezult c ansa de refacere a moleculelor originale este foarte mic !n raport cu cea de apariie a unora modificate. 1desea, !n cazul unor molecule comple%e, e%cesul de energie nu rm&ne localizat i s rup legtura, ci se distri*uie la mai multe legturi sau se transfer de la o molecul la alta. 1ceste reacii de transfer a energiei nu sunt imediate. =neori strile acti"e persist mai multe ore sau zile i reaciile radiochimice se prelungesc mult dup iradiere. 1stfel de post-efecte sunt foarte e"idente la proteine i acizi nucleici. I%igenul din mediu produce pero%idarea !n lan a macromoleculelor, similar mediului apos, conform reaciilor, Da8X V IX . ------[ Da. V X2I Da. V I2 ------[ RaO2. #radical pero%id organic$

D*8X V DaI2. ------[ RaOOH V D*.

D*. V I2 ------[ R O2.

Dc8X V D*I2. ------[ R OOH V Dc.

1:9

Dc. V I2 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . s. a. m. d. . . . . S-a putut, pornind de la o singur ionizare, s se pun !n e"iden formarea unui lan de 70 de pero%izi organici. A!234#5a a.48)a 8)1(53#5*1) )roteinele sunt denaturate prin fragmentri, polimerizri, pero%idri i formri de puni disulfidice. /fectele cele mai noci"e asupra funciilor celulare sunt produse prin inacti"area enzimelor. A!234#5a a.48)a a!393*1) #4!*53!3 (odificrile radiochimice ale acizilor nucleici sunt foarte comple%e. 1lterarea structurii chimice a *azelor azotate produce disocierea du*lelor heli%uri datorit imposi*ilitii de asociere a *azelor !n perechi. )e de alt parte, fiecare dintre lanurile du*lului heli% poate suferi ruperi. +rec"ena ruperilor unui singur lan este de 10 ori mai mare dec&t cea a ruperii !n acelai loc a am*elor lanuri. +aptul are importan fiindc !n primul caz moleculele pot fi reparate, pe c&nd !n al doilea nu. 1a se e%plic sensi*ilitatea crescut la radiaii a organismelor haploide #cu stocare a informaiei genetice !ntr-un singur lan 1N'$ fa de cele diploide #c&nd stocarea se face !ntr-un du*lu heli%$. Duperile, chiar pe un singur lan, dac nu sunt reparate rapid, pot conduce la ramificri cu adoptarea de structuri tridimensionale, nerecognosci*ile *iochimic. 'egradarea radiochimic a acizilor nucleici este responsa*il de efectele asupra sintezelor celulare #alturi de inacti"area enzimelor$ i, !ntr-o faz ulterioar, de cele genetice.

1C0

11.?. EFECTELE 7IOLOGICE ALE RADIAIILOR IONI&ANTE 1pariia efectelor *iologice la organismele e%puse radierii este rezultatul desfurrii !n timp a trei faze, +a%a reac(iilor elementare, foarte scurt, de ordinul a 10815 secunde, care corespunde la a$ interac"iunea primar care are ca re$ultat e@citarea *i ioni$area moleculelor i *$ la reac"iile radio8c%imice prin care apar radicali liberi *i rupturi moleculare. /a nu este influenat de temperatur. +a%a reac(iilor chimice, care dureaz de la c&te"a secunde la mai multe ore. 0n timpul ei, radicalii liberi *i moleculele e@citate reac"ionea$ )ntre ele *i cu alte molecule.?iteza acestor reacii crete cu temperatura, din care cauz se mai numete fa$a termosensibil. +a%a modi*icrilor *unc(iilor <i structurilor celulare corespunde efectelor manifeste ale bolii de iradiere. 1cest stadiu *iologic poate dura de la c&te"a ore la mai muli ani. #Su*iecii puternic iradiai !n noaptea accidentului de la .erno*&l au sucom*at p&n a doua zi la amiaz, pe c&nd unele dintre "ictimele *om*ardamentului de la Xiroima au supra"ieuit cu simptome manifeste 10 ... 20 de ani.$ Studiile e%perimentale asupra culturilor de celule iradiate cu doze creasctoare de radiaii au condus la urmtoarele concluzii pri"ind unele funcii celulare, F4#!23a !5*4*a)@ &re<terea 1ito%a 1oatea celular D195 m3!3 accelerat )ncetinit tardiv D195 ma)3 diminuat oprit precoce

/ste necesar o precizare a sensului terminologiei utilizate pentru moarte celular. Boartea celular precoce !nseamn c !n urma iradierii mor chiar celulele iradiate. Boartea celular tardiv caracterizeaz populaia care este condamnat s dispar la tentati"a de reproducere a descendenilor de generaia a AA-a, a AAA-a, a A?-a . . .etc.. /a semnific faptul c celulele iradiate )*i pierd capacitatea de reproducere indefinit.
1C1

)rimele constatri asupra radiosensi*ilitii au fost fcute de 75),1#35; T)3 1#"5a4 !n 1906. /l a enunat o 3lege4 care sumarizeaz caracteristicile celulelor suscepti*ile la efecte letale, - popula"ie de celule este cu at#t mai sensibil le radia"ii cu c#t 1$ are vite$a proceselor metabolice mai mareZ 2$ este iradiat )ntr8o fa$ mai precoce a mito$ei i :$ este mai nediferen"iat. Sunt 3nedifereniate4 celulele care au un "iitor cariocinetic lung, deci morfologia i funciile nu sunt definiti" fi%ate. 1ceast lege ofer un ghid simplu pentru msurile de radioprotec"ie medical i pentru !nelegerea cazurilor !n care se practic radioterapia. Dadioprotecia impune s nu fie e%puse radiaiilor esuturile sntoase sensi*ile, cele em*rionare, cele hematopoetice, gonadele, epiderma i mucoasa intestinal. )e de alt parte, *eneficiaz de radioterapie tumorile cu celule de radiosensi*ilitate mare. 1cestea sunt, !n general, sarcoamele #!n special blastoamele$ care sunt tumori cu celule deri"ate din esuturile mezenchimale #nedifereniate$. 1cestea satisfac !n foarte *un parte cerinele specificate de Oergonie- ri*ondeau.

1C2

11.E.

UTILI&AREA

DETECTORULUI SCINTILAIE

GEIGER;MbLLER PENTRU

SAU

DETECTORULUI

CU

DETERMINAREA

$ARIAIEI CU DISTANA A FLU\ULUI DE RADIAII /miterea spontan de radiaii alfa, *eta i gamma de ctre unele nuclee se numete radioacti"itate natural. )rin emiterea unei particule alfa are loc o transformare a elementului dat !ntr-un alt element pentru ca numrul de ordine al elementului scade cu 2 uniti, iar cel de mas cu C uniti.
226 99 222 C ;a 96 ;n +2 .

/%emplu,

0n general,

21C 92

Xe

1-C n-2

0n cazul emiterii de radiaii *eta numrul de mas 1 rm&ne constant, iar numrul de ordine n crete cu o unitate. /%emplu, 0n general,
! S

0 21C &b 1 e + 9: 0i

0 1

! S+ 1

R .

)articulele *eta emise, nu se gsesc !n nucleu, ele apar !n timpul tranziiei de la proton !n neutron i in"ers c&nd se emit i particule de mas i sarcin zero numite neutrino i antineutrino. /%emplu, Ba
1 1

1 0

n V

V1

V o.

emisia radiaiilor gamma, numrul atomic i cel de mas rm&n

constante, deoarece nucleul trece dintr-o stare e%citat la una normal. 'ac la un moment dat t @ 0, e%ist N 0 nuclee radioacti"e, dintr-un element oarecare, atunci numrul de nuclee rmase nedezintegrate N, dup timpul t #!n sec $ "a fi, N @ N0.e- t, unde este constanta de dezintegrare. ?aloarea ei depinde numai de structura intern, specific fiecrui radionuclid, nu i de condiiile e%terioare. Begea de mai sus ne indic faptul c numrul de nuclee rmase nedezintegrate scad e%ponenial cu timpul.

1C:

)entru a caracteriza sta*ilitatea nucleului se utilizeaz !n loc de , timpul de !n-umtire

1;2

. /l reprezint inter"alul de timp !n care se dezintegreaz -umtate N0 @ N0.e- 2

ln 2

din numrul de nuclee iniiale, N 0;2 , deci relaia "a fi,

t

1;2

impul de !n-umtire este foarte diferit de la un nucleu la altul, fiind cuprins !ntre 109 ani i c&te"a s #microsecunde$.emple de timpi de injumatatire N
Fig. 11.1. Scderea )n timp a numrului de nuclee instabile

N0

N?.

N0;2 N0;C
1;2 1;C

1CC

1lt mrime folosit !n practic este activitatea unei surse radioacti"e, notat cu i definit ca numrul de dezintegrri care au loc !ntr-o secund, !ntro cantitate de su*stan radioacti". 1cti"itatea este deci dat de scderea !n timp a numrului de nuclee insta*ile N,
dN @ N dt

@-

1cti"itatea se msoar !n dezintegrri pe secund . I dezintegrare pe secund se numete *ecaerel # Oa$. 0n practic e folosete .urie, 1 .i @ :,7 . 10 10 dez;sec sau Oa. )entru a pune !n e"iden i pentru a msura radiaiile nucleare se folosesc detectoare de radiaii 'etectoarele de radiaii se *azeaz pe faptul c radiaiile alfa, *eta i gama produc direct sau indirect o cantitate de ioni prin mediile prin care trec. Nucleele care apar !n urma dezintegrrii alfa i *eta sunt !n general e%citate i re"in instantaneu la starea fundamental prin emisia de fotoni gamma. /%ist !ns i nuclee care rm&n !n stare e%citat un timp mai !ndelungat, stare metasta*il. 1ceste nuclee dau natere la o radioacti"itate gamma "erita*il, caracterizat prin propria perioad. =n fascicul de radiaii emis de o surs radioacti", dup ce a str*tut un mediu oarecare poate fi caracterizat prin "iteza de numrare produs !ntr-un detector adec"at, ?@
nr.impulsuri timp

)entru cazul c&nd ne intereseaz mai mult efectele *iologice produse de ctre radiaiile, alfa, *eta sau gama se folosesc alte mrimi ca, doza de ioni #msurat !n ;Yentgen$, doza de energie a*sor*it # msurat !n NraQ$, sau doza *iologic # msurat !n Sievert$ etc. Ba trecerea radiaiilor printr-un mediu oarecare ele sunt a*or*ite i intensitatea lor scade e%ponenial cu distana parcurs !n mediu conform relaiei, A @ Ao.e @

unde A0 este intensitatea flu%ului incident, A intensitatea flu%ului emergent, coeficientul de atenuare, iar @ distana parcurs prin mediul studiat.
1C5

Put 11.P4(5)5a

85#5()a#(a a )a"3a233*1):

Q c d
Puterea p

X&rtie

Bemn

Oeton

.oeficientul se poate determina msur&nd "itezele de numrare ale contorului, ?2 i ?1, corespunztoare grosimilor stratului parcurs %2 i %1, folosind e%presia,
ln ,2 ln ,1 @ 2 @1

@T

)entru a elimina "aloarea constantei T, se fac msurtori relati"e pentru dou materiale, cunosc&nd coeficientul de atenuare al unuia dintre ele. )entru fier @ 0,C55 cm-1, iar pentru plum* @ 0,: cm-1. 'etectorii se clasific dup principiul lor de funcionare. =n dectector este format din dou pri, a$ un mediu !n care radiaia produce un efect specific #scintilaii, ionizri, efect fotoelectric sau efect .ompton$ i *$ un sistem de !nregistrare a efectului produs de radiaii. 'etectorii cu scintilaii se *azeaz pe apariia de scintilaii !n cristalele anorganice sau organice, atunci c!nd acestea sunt lo"ite de particulele respecti"e. +otonii scintilailor sunt !nregistrai cu a-utorul unui fotomultiplicator produc&nduse un impuls de tensiune. 1mplitudinea impulsului este proporional cu numrul de scintilaii deci cu energia lor. 'in acest moti" detectorul cu scintilaii se folosete at&t la numrarea particulelor emise c&t i la msurarea energiei lor. 'etectorul >eiger- (uller este un detector cu ionizri !n gaz. /l este constituit dintr-un tu* metalic 8 catodul- i un fir central-anodul- am*ele fiind introduse !ntr1C6

un cilindru de sticl, etan. 1mestecul de gaze conine !n general heliu sau argon plus "apori de alcool etilic. 'atorit simetriei cilindrice, intensitatea c&mpului !n -urul anodului "a scdea rapid odat cu distana fa de aceasta. 0ntre cei doi electrozi se aplic o diferen de potenial relati" mare, p&n la 2500 ?. Dadiaiile alfa i *eta ionizeaz direct gazul din tu*, pe c&nd radiaiile gama ionizeaz gazul indirect prin electronii secundari.

Schema detectorului #contorului$ >eiger-(uller, Sursa

ubul Geiger-Muller

1nod 1parat de msur >az la presiune -oas

.atod

U(3*39a)5a "5(5!(1)4*43 !4 .5m3!1#"4!(1)3 eRADIATION ALERTf. 1cest tip de detector porta*il are tu*ul >( !ncasat !n instrument. Ba intrarea unui flu% de particule ionizante !n tu*, acesta "a declana un impuls electronic care este semnalizat prin apariia unei lumini roii i printr-un semnal sonor. +ondul cosmic e%istent permanet poate fi !nregistrat !n fiecare minut i are "alori !ntre 5 8 25 impulsuri pe minut, depinz&nd de locaie i de altitudine. Se selecteaz ni"elul de alert la poziia m1, iar dac numrtorul depete scala aparatului se trece la ni"elurile superioare m10, m100. Semnalul sonor poate fi auzit acion&nd *utonul IN;I++;1='AI. Se o*ser" c at&t indicatorul "izual de pe ecran c&t i cel audio diminueaz progresi" pe msur ce se trece la ni"ele

1C7

superioare de alert. )entru a determina ce tip de radiaie #alfa, *eta sau gamma$ pro"ine de la o anumit surs, procedm astfel, detectorul se poziioneaz "ertical cu partea din spate !n apropierea sursei, iar dac se !nregistreaz un semnal, el poate pro"eni de la radiaia gamma sau *eta de energie mare #deoarece razele gamma de energie -oas i razele m cu energie de 10-C0 Te? nu pot penetra peretele tu*ului >(, dar pot ptrunde prin fereastr$. Se plaseaz o folie de aluminiu !ntre instrument i sursa, iar dac indicaia ecranului se modific, este "or*a de radiaie *eta. (a-oritatea izotopilor conin at&t radiaie gamma c&t i *eta. 'ac !n poziia de mai sus nu se inregistreaz semnal, se poziioneaz instrumentul cu fereastra spre surs. Semnalul !nregistrat poate pro"eni !n acest caz de la radiaie alfa, *eta sau gamma de energie -oas. 'ac se plaseaz o foaie de h&rtie !ntre fereastr i surs, iar semnalul !nceteaz, este "or*a despre radiaie alfa. Anter"alul de operare al instrumentului, 0-50 mD;h @ miliDentgens per or, sau 0-500 bS";h @ microSie"erts per or #gamma i m$ i 0-50000 .)( @ counts per minute #alfa si *eta$. Sensi*ilitatea instrumentului a"&nd ca referin izotopul detecia
125 60

.o este de 25 impulsuri;sec;1mD;h. 'ac se utilizeaz pentru

A, se recomand 0.5 m.i sau mai mult. Ni"elul minim detecie este

!n acest caz apro%imati" 0.02 b.i .

1C9

1C9

Fig.11./. a) &anoul frontal al detectorului de radia"ii. b) &o$i"ionarea sursei de radia"ii fa" de detector.

M1"4* "5 *4!)4: a$ Andiferent ce tip de radiaie urmeaz a fi detectat, se "a face o determinare iniial a fondului cosmic, adic numrul de impulsuri;100 secunde !nregistrate de instrument !n lipsa sursei studiate. Ba fiecare 100 secunde se noteaz "aloarea #timp de cinci minute$ i apoi se "a face media, care reprezint de fapt fondul cosmic. 'eterminarea numrului de particule radioacti"e care a-ung la detector se face plas&nd sursa succesi" la diferite distane, 20 cm, 15 cm, 10 cm, 5 cm, 1 cm. Se !nregistreaz de fiecare dat numrul de impulsuri ; 100 secunde, repet&ndu-se msurtorile de cte"a ori i apoi se face media pentru fiecare distan aleas. Numrul de particule care pro"in e%clusi" de la surs se afl prin scderea fondului cosmic din "aloarea medie a impusurilor pentru fiecare distan. Se "a reprezenta grafic numrul de impulsuri pro"enite de la surs, !n funcie de distan, iar din grafic se "a determina distana de !n-umtire. Se completeaz ta*elul urmtor,

'istana sursa 8contor cm Anfinita #fond cosmic$ 1cm 5 cm 10 cm........

Nr. impulsuri;100 sec (surat (edia

Nr.imp.;100sec pro"enite de la sursa #media$ 0

*$ Se fi%eaz distana dintre sursa radioacti" i detector la una din "alorile de mai sus. Se introduc pe r&nd, !ntre surs i detector, plci de plum* de diferite grosimi i se !nregistreaz de fiecare dat numrul de impulsuri. Se "a reprezenta grafic numrul de impulsuri pro"enite de la surs !n funcie de grosimea stratului de

150

material a*sor*ant, iar din grafic se "a determina distana de !n-umtire. 1poi se "a calcula coeficientul de atenuare g conform relaiei m1;2 @ @
ln 2 0,69:

7I7LIOGRAFIE SELECTI$ Y. Xoppe, Y. Bohmann, X. (arTl, X.niegler, OiophHsics, 199:, Springer?erlag, Oerlin Xeidel*erg. 1. .. >uHton, e%t*ooT of (edical )hHsiologH, 1996, Y.O. Saunders .ompanH. OiophHsical _ournal- pu*lished monthlH *H the DocTefeller =ni"ersitH )ress, No. _une 199C - +e*ruarH 2000. 1. )rentice, Xuman energH on trap, NeN Scientist, 1997, 20;11. _. )ope, (edical phHsics, 199C, Xeinemann /ducational. >. . 1*sten, S.N. _offe, Basers in medicine, an introductorH guide, 1995, .hapman and Xall. B..romNell, +.Yei*ell, /.)feiffer, Oiomedical instrumentation and measurement, 1990, )rentice Xall. >. O. 'e"eH, ). N. . Yells, =ltrasound in medical diagnosis, Scientific 1merican, (aH 1995,p.99.
151

_.B. Oall, 1.'. (oore, /ssentials phHsics for radiographers, 1990, OlacTNell Scientific. 1... =pton, he *iological effects of loN le"el ionizing radiation, Scientific 1merican, fe*r.1992, p.29. (. >oldman, 1 guide to the m-raH department, 1996, Yright, Oristol. (. Xollins, (edical OiophHsics, 1990, (acmillan /ducation. (ioara ripsa, Oiofizic (edical, 1997, .ris OooT =ni"ersal. (. Asac, .. +ilipescu, D.( Asac, Oiofizica de la Oig-Oang la ecosisteme, 1996, /d. ehnica Oucuresti. (ioara ripa, Simona .a"alu, (edical *iophHsics for students in (edicine and 'entistrH, 2000, /d.=ni". Iradea. . Na-ean col., (edecine Nucleaire, 1990, /llipses, )aris. (. '&noreanu, Antroducere !n *iofizic, 200:, /d. (edical- =ni". .lu-Napoca. (. Ourgeat, '.GaHser, OiophHsiaue du neurone, 1992, (asson, )aris-NeN orT-(ilan. 1. Oertrand, '. 'ucassou, _... XealH, _. Do*ert, OiophHsiaue, )hHsicochimie et /lectrophHsiologie, 1979, (asson, )aris-NeN orT-(ilan. (. elia, (. '&noreanu, 1. >"ru, '. alo, ?. Bupea, X. )orum*, Bucrri practice de Oiofizic (edical, 1996, Bitogr. A.(.+. .lu--Napoca. Simona .a"alu, (edical *iophHsics and electronic medical de"ices, 2005, /d. =ni". Iradea.

CUPRINS I. 1. 2. :. C. PROPRIETILE GENERALE ALE LICHIDELOR 'eterminarea coeficientului de tensiune superficial a lichidelorh ...1 'eterminarea coeficientului de "&scozitatehhhhhhhhhh..7 'ensimetriehhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhh.12 (etode calorimetricehhhhhhhhhhhhhhhhhh..19

II. MSURAREA PROPRIEThILOR ELECTRICE ALE LICHIDELOR 7IOLOGICE 5. .onductometriehhhhhhhhhhhhhhhhhhhh..26 6. Studiul unei pile de concentraiehhhhhhhhhhhhhh:C

152

III. PROPRIETI OPTICE ALE LICHIDELOR 7IOLOGICE 7. 'eterminarea indicelui de refracie al unei soluii cu a-utorul refractometrului 1OO/hhhhhhhhhhhhhhhhh..C0 9. 'eterminarea concentraiilor soluiilor optic acti"e cu a-utorul polarimetruluihhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhC7 9. (icroscopie optic. Ichiul-un sistem optic comple%hhhh.......70 10. Spectrofotometrie. 1*sor*ia i emisia radiaiilor de ctre molecule hhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhh9: =tilizarea spectrofotometului =?-?AS pentru trasarea unei cur*e de etalonare i determinarea diferitelor forme ale hemoglo*inei !n soluii i !n s&ngehhhhhhhhhhhhhhhhhhhh92 I$. INTERACIUNEA RADIAIILOR CU MATERIA $IE 11. .lasificarea radiaiilor. Surse de radiaiihhhhhhhh. hh11: /fectele radiaiilor neionizantehhhhhhhhhhhh. h...117 Anteraciunea radiaiilor ionizante cu materia "ie, efecte radiochimicehhhhhhhhhhhhhhhhhhhhh.129 =tilizarea detectorului >eiger-(uller sau a detectorului cu scintilaie pentu determinarea "ariaiei cu distana a flu%ului de radiaii hhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhhh1:: 7I7LIOGRAFIE SELECTI$hhhhhhhhhhhhhhh1C2

15:

SIMONA

&AVALU

C1*a 1)a(1)3 : P18 L51#(3# L1)5"a#a 7[2

EDITURA UNI$ERSIThII DIN ORADEA 2DDE

15C

155