1

I. PROPRIETILE GENERALE ALE

LICHIDELOR

1. DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE TENSIUNE
SUPERFICIAL A LICHIDELOR

Noiuni teoretice
Stratul de la suprafaa unui lichid care are grosimea razei sferei de aciune
molecular, 5.10
-9
m, se numete strat superficial. Toate moleculele cuprinse n
acest strat vor fi atrase spre interiorul lichidului datorit faptului c forele de
atracie (coeziune) exercitate de moleculele din interior (din lichid) sunt mai mari
dect cele exercitate de moleculele de gaz n contact cu suprafaa lichidului. Din
cauz c moleculele acestui strat sunt atrase spre interior, stratul superficial va
exercita asupra lichidului o presiune. Moleculele din stratul superficial au o energie
potenial mai mare dect cele din interior. Pe de alt parte, se tie c n general,
sistemele se gsesc n echilibru cnd energia lor potenial devine minim. De aici
rezult c starea de echilibru se realizeaz cnd exist cele mai puine molecule la
suprafa, de unde rezult tendina de micorare a suprafeei libere a lichidului.
Forele tangeniale care iau natere n stratul superficial i care micoreaz
suprafaa liber a lichidului poart numele de tensiune superficial. Din cauza
existenei tensiunii superficiale suprafaa liber a unui lichid ntr-un vas este plan,
iar picturile de lichid n cdere adopt forma sferic. Fora de tensiune superficial
este dat de relaia:
F = l o , unde
o
este o constant ce depinde de natura lichidului i se
numete coeficientul de tensiune superficial, iar l este lungimea conturului pe
suprafaa lichidului. Se exprim cu ajutorul relaiei o = F/1 i are unitatea de
masur N/m n sistemul internaional de uniti.
Coeficientul de tensiune superficial este deci egal cu fora ce se exercit n
planul suprafeei (sau tangent la aceasta pentru suprafeele curbe), perpendicular pe
2
unitatea de lungime. El scade cu creterea temperaturii datorit creterii energiei
cinetice a moleculelor lichidului.
Pentru coeficientul de tensiune superficial se poate utiliza i definiia ce
rezult din amplificarea cu distana (d), pe care se deplaseaz for a, conform
formulei:

rafata
energie
d l
d F
sup
=

=
[N/m; J/m
2
]
Se observ c valoarea coeficientului de tensiune superficial reprezint, de
fapt, energia liber a unitii de suprafa a stratului superficial.
ntr-un sistem izolat care evolueaz izoterm se produc numai acele procese
ce duc la scderea energiei libere a sistemului. n consecin, energia liber a
stratului superficial poate scdea att prin reducerea suprafeei libere ct i prin
diminuarea coeficientului de tensiune superficial. Pentru o soluie, la echilibru,
stratul ei superficial va avea suprafaa minim posibil, iar pe aceast suprafa se
vor fixa acele molecule din soluie care reduc coeficientul de tensiune superficial,
el lund valoarea minim posibil.
Substanele organice coninnd n molecule att grupuri polare, hidrofile,
ct i lanuri hidrocarbonate, hidrofobe, au tendina de a se acumula la suprafaa
soluiei, prin aceast energie liber a sistemului reducndu-se. Explicaia rezid n
aceea c lanurile hidrofobe vor fi excluse din faza apoas pe cnd gruprile
hidrofile vor rmne incluse n stratul superficial al fazei apoase. Are loc, deci, un
fenomen de absorbie, moleculele rmnnd fixate la suprafaa soluiei. Astfel,
coninutul de molecule de acest tip este mai mare n stratul superficial dect n
straturile profunde ale soluiei. Scderea energiei libere a sistemului prin acest
fenomen se traduce prin reducerea energiei libere pe unitatea de suprafa a
stratului superficial, adic a coeficientului de tensiune superficial. Astfel de
substane, care se absorb n stratul superficial al soluiilor i duc la scderea
coeficientului de tensiune superficial, se numesc tensioactive. Cantitatea de
substan tensioactiv absorbit pe stratul superficial este o funcie cresctoare de
concentraia soluiei. Mrind progresiv concetraia soluiei,cantitatea de substan
3
absorbit va crete la rndul ei, determinnd scderea progresiv a coeficientului de
tensiune superficial. Aceast scdere continu pn nc se mai pot absorbi noi
molecule i nceteaz n momentul n care suprafaa este saturat, adic este n
ntregime ocupat. Creterea n continuare a concentraiei soluiei nu mai duce la
scderea tensiunii superficiale, aceasta avnd valoarea minim posibil pentru
soluia dat, ntruct i cantitatea de substan absorbit pe unitatea de suprafa
este maxim posibil.
Substanele hidrofile, (electroliii sau substanele puternic polare) au
molecule care interacioneaz cu apa mai puternic dect moleculele de ap ntre
ele. Datorit acestui fapt, la dizolvarea unei astfel de substane n ap starea de
energie minim a sistemului se realizeaz dac moleculele solvite sunt nconjurate
din toate prile de molecule de ap. Ca urmare, ele au tendina de a se acumula n
interiorul soluiei apoase i nu se vor fixa pe stratul superficial. Coeficientul de
tensiune superficial a unei astfel de soluii va fi egal sau cu puin crescut n raport
cu cel al apei pure.
Substanele care la dizolvarea lor nu modific sau cresc foarte puin
coeficientul de tensiune superficial se numesc tensioinactive.
Creterea uoar a coeficientului de tensiune superficial ce se observ
uneori la astfel de soluii se explic prin atracia mai mare la care sunt supuse
moleculele stratului superficial de ap prin prezena n interiorul soluiei a
moleculelor puternic hidrofile. i n acest caz energia liber a sistemului este
minim, creterea discret a energiei libere a stratului superficial fiind nsoit de o
scdere foarte exprimat a energiei libere a soluiei prin interac iunea dintre
moleculele hidrofile i ap.
Pentru serul sanguin normal coeficientul de tensiune superficial este de 67
68.10
-3
N/m, iar pentru urin 70.10
-3
N/m. Aceste valori sunt numai cu puin mai
mici dect coeficientul de tensiune superficial al apei la 20

C, care este 72.10

-3

N/m. Ele se reduc considerabil ori de cte ori se acumuleaz n snge i se elimin
prin urin substane tensioactive (de exemplu: sruri biliare n caz de icter
mecanic).
4
Principiul msurtorii
Un lichid lsat s curg liber printr-un orificiu foarte strmt aflat la captul
inferior al unui tub capilar aezat n poziie vertical curge sub form de picturi.
Fiecare pictur se desprinde de captul tubului n momentul cnd greutatea i G
devine egal cu forele de tensiune superficial F exercitate pe circumferina care
formeaz linia de contact dintre marginea tubului i baza picturii. Vom avea deci:
G = F.
Deoarece G = mg i F = 2t r o atunci:
m g = 2t r o, unde m = masa picturii, g = acceleraia gravitaional.
n momentul desprinderii, greutatea picturii este proporional cu
constanta de tensiune superficial a lichidului (legea lui Tate). n locul masei unei
picturi putem lua produsul dintre volumul ei (v) i densitatea lichidului (d),
deoarece m = v d.
vdg =2t r o (1)
Volumul unei picturi e greu de msurat direct, ns l putem determina
indirect, msurnd exact un volum V de lichid (volumul stalagmometrului),
determinnd numrul de picturi (n) pe care l d acest volum la curgerea spontan
prin orificiul capilar i fcnd raportul:
V
n
v
=
Introducnd aceasta valoare a lui v n (1) avem:
= g d
n
v
2 t r o (2)
Lund un al doilea lichid, de exemplu apa, vom avea o relaie asemntoare :
a
v
n
d
a
g =2 t r o
a
(3)
mprind relaia (2) cu (3) obinem:
a
a
n
n
d
d
o
o
=
s
(4)
5
de unde coeficientul de tensiune superficial a lichidului respectiv:
a
a
a
d
d
n
n
=o o
(5)

Relaia (5) ne permite s calculm coeficientul de tensiune superficial a unui
lichid determinnd numrul de picturi dat de un volum anumit de lichid i
numrul de picturi dat de acelai volum de ap.

Aparatur :
Stalagmometrul Traube se compune dintr-un tub de sticl care prezint un rezervor
prevzut cu dou repere circulare a i b. Tubul n poriunea lui inferioar se
continu cu un capilar c, care se termin cu o suprafa lrgit i lefuit orizontal
d. Deasupra i dedesubtul reperelor a i b sunt gravate pe tub mai multe diviziuni
care servesc la determinarea fraciunilor de pictur.

Se spal stalagmometrul cu alcool i se usuc la trompa de vid. Se aspir n
stalagmometru lichidul i se numr picturile desprinse ntre aceleai repere. Fie n
Mod de lucru
Stalagmometrul, dup ce a fost splat
i uscat la trompa de vid, se prinde
vertical cu ajutorul unei cleme pe un
stativ i sub el se aeaz un vas n care
s cad picturile (vezi figura
alturat). Se aspir apa distilat pn
deasupra reperului a, cu ajutorul unui
tub de cauciuc ataat la partea
superioar a stalagmometrului, cu
precauia s nu se formeze bule de aer.
Se numr picturile care se desprind n
timpul cnd se scurge volumul
lichidului de la reperul a pn la reperul
b. Fie n
a
numrul lor i d
a
densitatea
apei la temperatura de lucru.

Fig1.1.Stalagmometrul Traube
6
numrul lor i d densitatea lichidului la temperatura de lucru. Se repet operaia de
mai multe ori i se face media determinrilor.
Rezultatele se trec ntr-un tabel de felul celui ilustrat mai jos.
n funcie de substana tensioactiv utilizat se vor face determinri la mai
multe concentraii urmrindu-se scderea tensiunii superficiale cu concentraia.
Rezultatele se vor reprezenta grafic.
o
= f(c).




















Nr.
soluie
Concentraie d [g/cm
3
]
(x10
3
Kg/m
3
)
Nr de picturi
n
Nr.mediu
de picturi
o [dyn/cm]
(x10
-3
N/m
3
)


7
2. DETERMINAREA COEFICIENTULUI DE VSCOZITATE
Noiuni teoretice
Mediile interne ale organismului, sngele, lichidul interstiial, citoplasma
etc., sunt sisteme disperse care posed proprietile fizice generale ale fluidelor.
Vscozitatea este o proprietate a fluidelor determinat de frecarea intern ce ia
natere n masa fluidului ca urmare a micrii straturilor care se deplaseaz unele
fa de altele cu viteze diferite. S considerm c exemplu de fluid un lichid
aderent, apa, care curge cu viteza mic printr-un tub. Se constat c viteza de
curgere este mai mic n apropierea pereilor tubului i mai mare de-a lungul
axului. Explicaia fenomenului este urmtoarea: un strat de ap ader de pereii
tubului i rmne n repaus, de acesta se freac stratul urmtor, care se va mica cu
o vitez relativ mic. Straturile urmtoare se vor mica cu o vitez din ce n ce mai
mare pn ce se atinge o vitez constant, dependent de presiunea de curgere i de
vscozitate. O astfel de curgere la care deplasarea lichidului se face prin straturi
paralele cu direcia de curgere se numete curgere laminar. Rezult c n masa
lichidului care curge prin tub exist un gradient de vitez perpendicular pe direc ia
de curgere. Un fluid la care deplasarea reciproc a straturilor s-ar face fr frecare
se numete fluid perfect.
Forele de frecare intern care apar la curgerea unui fluid determin
vscozitatea fluidelor. Ea depinde de natura lichidului ca i de concentraia,
mrimea i forma moleculelor dizolvate. Pentru definirea coeficientului lui de
vscozitatea s considrm n interiorul unui fluid un strat de molecule aezate ntr-
un plan orizontal, de suprafaa S, care se deplaseaz prin masa lichidului n planul
propriu cu viteza v.
Din cauza frecrii interne straturile vecine vor fi antrenate cu o for F, a
crei valoare depinde de mrimea suprafaei de contact S A , de variaia vitezei v A ,
de distana l A dintre straturi i de o constant care depinde de natura lichidului.
Relaia care leag toate aceste mrimi este urmtoarea:
8

S A
A
A
=
l
v
F q


Fig.2.1. a) Curgerea laminar; b) Apariia forelor de vscozitate

Din relaia de mai sus, valoarea constantei q va fi:
v S
F
A
A

A
=
l
q

Aceasta constant se numete coeficient de vscozitate i este o mrime
caracteristic pentru fiecare lichid.
Msurarea coeficientului de vscozitate are importan att pentru
cercetarea medical, unde poate fi utilizat pentru determinarea formei i mrimii
moleculelor dizolvate, ct i pentru aprecierea modului de desfurare a
fenomenelor hidrodinamice din organism. Astfel creterea coeficientului de
vscozitate a sngelui duce conform legii lui Poiseuille, la scderea debitului
sanguin dac fora de contracie a inimii rmne constant. n acest caz meninerea
constant a debitului sanguin nu se poate realiza dect prin creterea forei de
contracie a muchiului cardiac, deci i a tensiunii arteriale.

Principiul determinrii
Pentru calcularea coeficientului de vscozitate se utilizeaz trei categorii de
metode: 1) metode bazate pe curgerea lichidelor prin tuburi capilare conform legii
lui Poiseuille; 2) metode bazate pe rezistena opus de ctre fluide la cderea unei
sfere, conform legii lui Stokes; 3) metode de antrenare, bazate pe antrenarea n
9
micarea de rotaie a unui cilindru suspendat n masa lichidului. n cadrul
lucrrilor de laborator noi vom utiliza numai metode bazate pe legea lui Poiseuille.
Relaia stabilit de Poiseuille pentru cantitatea de lichid ce trece printr-un tub
cilindric, dac curgerea se face laminar, este urmtoarea:

l 8
t P r
Q
4
=

unde Q este volumul de lichid care se scurge n timpul t, r este raza tubului capilar,
l este lungimea capilarului i P presiunea de curgere. Dac tubul capilar se gsete
n poziie vertical presiunea de curgere P este egal cu presiunea hidrostatic a
coloanei de lichid n tub. Notnd nlimea coloanei de lichid cu h, densitatea
lichidului, , i acceleraia gravitaional g, vom avea urmtoarea relaie:
P = g h
ntroducnd n relaia de mai sus, avem

l 8
t g h r
4
q
= Q

Din aceast relaie se poate calcula coeficientul de vscozitate al lichidului
dac msurm mrimile cuprinse n relaie. Raza unui tub capilar este greu de
msurat cu precizie, n practic utilizm un procedeu care elimin din calcul
aceast mrime. Astfel se fac determinri comparative lsnd s curg prin acelai
tub capilar lichidul al crui coeficient de vscozitate vrem s-l aflm i apoi un
volum egal de ap distilat al crui coeficient de vscozitate este cunoscut. Vom
avea pentru lichid i ap distilat urmatoarele relaii:

Q l
gt h r

=
8
4
t
q
i
Q l
gt r a
a
a

=
8
4
t
q

mprind aceste relaii obinem:
a a a
t
t

q
q
i
a
q q =

a a
t
t

10
Ultima relaie se va folosi la calculul coeficientului de vscozitate, innd cont de
valorile constantelor
a
= 1 Cp = 10
-3
Ns/m
2
si
a
= 0,997 g/cm
3
.
Aparatur
Pentru determinarea coeficientului de vscozitate vom utiliza vscozimetrul
Ostwald (figura de mai jos).

Fig.2.2 . Vscozimetrul Ostwald.


Mod de lucru
Aparatul se spal bine i se usuc la trompa de vid. Se introduce cu o pipet
o cantitate determinat de lichid n rezervorul vscozimetrului, aceeai cantitate
pentru toate soluiile. Se aspir ncet lichidul n rezervorul situat la partea
superioar a tubului capilar. Se las lichidul s se scurg determinndu-se cu
ajutorul unui cronometru timpul necesar scurgerii lichidului ntre cele dou repere.
Pentru aceeai soluie se efectueaz mai multe determinri, i se va face media
rezultatelor care se trec n tabelul urmtor:





Nr.
Soluie
[g/cm
3
] Timp de
scurgere
Timp
mediu de
scurgere
q
cP(x10
-3
Ns/m
2
)
1.
2.
El se compune dintr-un tub capilar
(c), a crui extremitate se continu cu
un tub n form de U i cu un
rezervor (R), prelungit cu un tub
vertical (V). Extremitatea superioar
a capilarului se continu cu o bul (B)
care la poriunea superioar are un
tub prevzut cu o gtuitur.Pe
gtuitura superioar este trasat un
reper a, la fel i pe cea inferioar a
bulei, b. Pentru a menine constant
temperatur, n determinrile de
precizie vscozimetrul se introduce
ntr-un termostat.


Vscozimetrul Oswald
11
Detreminarea vscozitii sngelui are o deosebit importan medical
deoarece vscozitatea sngelui variaz dup cum urmeaz :
- snge total, de la 3,5 pna la 5,4 10
-3
N s/m
- valori medii :- femei 4,510 N s/ m
-brbai : 5,010 N s/ m
- plasm sanguin, de la 1,9 2,3 10 N s /m
- serul sanguin, de la 1,6-2,2 10 N s /m
Vscozitatea sngelui total este mai crescut la brbat fa de femeie, la adult
fa de copil, mai mare la sngele venos dect cel arterial, depinznd de
concentraia de CO
2
din snge. Din punct de vedere patologic vscozitatea
sngelui crete n cazul poliglobuliei i leucemiei, scade n cazul anemiei
depinznd de volumul i forma hematiilor, precum i n hipoproteinemie.

























12
3. DENSIMETRIE
Noiuni teoretice
Densitatea este o caracteristic fizic proprie fiecrei substane. Se definete
densitatea absolut ca fiind masa unitii de volum, adic raportul d = m/v
exprimat n kg/m
3
. Dac n locul masei din formula de mai sus se introduce
greutatea substanei, care variaz n raport cu acceleraia gravitaional (G = mg ),
atunci se poate defini noiunea de greutate specific ( = mg/V).
Se mai definete densitate relativ ca fiind raportul dintre densitatea
absolut a unei substane i densitatea absolut a apei distilate la + 4
o
C (cnd este
maxim ) sau la o alt temperatur dat:
d
r
=
a
d
d
=
V
m
.
a
m
V
=
a
m
m
, care este o mrime adimensional.
Menionm c masa unui metru cub de ap distilat la:
0
o
C este 999,8 kg
+ 4
o
C este 999,9 kg 1000 kg
+ 25
o
C este 997,0 kg
ceea ce demonstreaz c densitatea variaz odat cu modificarea temperaturii,
astfel c pentru msurarea riguroas a densitii absolute se face ntotdeauna
corecia de temperatur necesar ( d
corect at
= d
r


d
a

t oC
,
unde densitatea apei distilate
la t
o
C se cunoate din tabele ).
Dac se afl direct prin cntrire valorile m i m
a
, se poate calcula
densitatea oricrei substane dorite. Densitile diferitelor materiale exprimate n
10
3
kg/m
3
:
platin 21,40 O
2
lichid 1,14
aur 19,30 ghea 0,92
mercur 13,59 potasiu 0,86
fier 7,86 petrol 0,80
aluminiu 2,71 alcool 0,79
sulf 2,00 lemn stejar 0,70
CO
2
solid 1,53 H
2
lichid 0,07

13
Conform principiului lui Arhimede, un corp scufundat ntr-un lichid este
mpins de sus n jos cu o for egal cu greutatea volumului de lichid dezlocuit.
Cum fiecare lichid are o anumit densitate nseamn c prin scufundarea aceluiai
corp n diferite lichide, dei se dislocuiesc volume egale, acestea vor avea greuti
diferite, ceea ce genereaz fore de mpingere diferite. Pe acest raionament se
bazeaz determinarea densitii lichidelor cu ajutorul densimetrelor (areometrelor),
balanei Mohr-Westphal, metoda Van Slyke pentru densitatea sngelui etc.

3.1 DETERMINAREA DENSITII LICHIDELOR I SOLIDELOR CU
AJUTORUL PICNOMETRULUI I A BALANEI DIGITALE
a) La lichide: Deoarece se lucreaz cu unul i acelai picnometru, volumul
apei i a lichidului studiat sunt aceleai, urmnd doar s msurm masele cu
ajutorul unei balane electronice. Vom introduce notaiile:
m
0
= masa picnometrului;
m
a
= masa picnometrului umplut cu ap distilat;
m
l
= masa picnometrului umplut cu lichidul studiat;
m = masa lichidului studiat;
v = volumul picnometrului, egal cu al apei sau al lichidului studiat;
d
a
= densitatea apei la temperatura de lucru ( se ia din tabele );
d = densitatea lichidului studiat.
deci m = m
1
m
0

v = (m
a
m
0
)/ d
a

d = m/v =( m
l
m
0
)/ (m
a
m
0
) d
a
b) La solide:
Volumul unui corp solid se poate afla indirect prin msurarea masei de ap
dislocuite de ctre acel corp. Astfel vom introduce i notaiile:
m
s
= masa corpului studiat;
m
as
= masa picnometrului care conine corpul studiat i n rest este umplut
cu ap distilat;
14
v
s
= volumul corpului studiat ( egal cu volumul apei dislocuite de ctre
corpul studiat, la introducerea n picnometru );
d
s
= densitatea corpului studiat.
deci v
s
= (m
a
+ m
s
m
as
)/ d
a

d
s
= m
s
/v
s
= m
s
/ (m
a
+ m
s
m
as
) d
a


Dispozitive: Picnometrele sunt vase de sticl de diferite capaciti
prevzute cu dopuri strbtute de o capilar fin. Cele mai pretenioase sunt
prevzute cu termometre iar capilarele sunt marcate cu un reper (R). Unele
picnometre pentru corpuri solide nu au dop iar pe gtul lor este trasat reperul R
(fig. 3.1.). Alte instrumente necesare sunt balana digital i termometrul digital.
















Fig.3.2. Balana digital
Fig. 3.1. Tipuri de picnometre.
15
Mod de lucru
Dup ce se spal bine picnometrul i se usuc, se cntrete cu precizie
masa sa mpreun cu dopul (m
0
). Se umple apoi cu ap distilat astfel nct la
punerea dopului apa s refuleze prin capilara acestuia iar n interior s nu rmn
bule de aer. Se terge exteriorul picnometrului i dopul astfel nct capilara acestuia
s rmn plin cu lichid. Cntrind acum picnometrul cu ap obinem valoarea m
a
.
Se procedeaz identic i pentru aflarea celorlalte valori necesar calculului (masa
picnometrului cu lichidul de studiat-de exemplu soluie hidro-alcoolic- i masa
picnometrului care conine corpul solid -de exemplu cteva bile de plumb).
Pentru obinerea unor rezultate precise se va avea n vedere totdeauna grij ca:
- lichidul din interior s nu conin bule de aer;
- corpul solid s-l cntrim numai cnd este perfect uscat;
- s lum n lucru o cantitate ct mai mare de substan solid;
Densitatea apei (d
a
) necesar calculelor se afl din tabele, corespunztor
temperaturii de lucru ( temperatura se va msura cu termometrul digital).
Calculele i prezentarea rezultatelor
Dup aflarea tuturor maselor prin cntrire, facem nlocuirile n formulele
respective i calculm densitile substanelor studiate (plumb, aliaje).
Rezultatele le vom trece ntr-un tabel:
Nr. Substan m
0
m
a
m
l
m
s
m
as
d
l
d
s
g g g g g 10
3
kg/m
3
10
3
kg/m
3


1. lichid - - -

2. solid - - -









16
3.2 DETERMINAREA DENSITII LICHIDELOR CU AREOMETRELE

Dup cum am artat n introducere, un corp scufundat ntr-un lichid va
rmne n echilibru numai cnd greutatea va fi egal cu cea a volumului de lichid
dislocuit. Pe acest principiu sunt construite areometrele, formate n principal dintr-o
tij de sticl cu gradaii T
g
, o contragreutate G i un termometru T.











Fig.3.3 Utilizarea densimetrelor.


Se observ uor dac d
2
>

d
1
, atunci v
2
< v
1
, masa M areometrului rmnnd aceeai
adic: d
1
= M/V
1
si

d
2
= M/V
2,
deci d
1
/d
2
= V
1
/V
2
adic volumul poriunii din
aerometru cufundat ntr-un lichid este invers proporional cu densitatea lichidului.
Areometrele utilizate n laborator au diferite destinaii fiind etalonate corespunztor
(etalonarea se face cu ajutorul unor soluii de densitate cunoscut ).
Cele mai utilizate tipuri de areometre sunt:
- Densimetrul, un areometru care prin scufundare ne d direct densitatea
lichidului prin citirea gradaiei de pe tij T
g
n dreptul nivelului lichidului. Precizia
densimetrelor poate fi 10
-3
10
-4
( adic 0,001 0,0001 ). Deoarece aceasta
comport o lungime a tijei mare ( respectiv, distane mari ntre gradaii ) se
utilizeaz cu succes o trus de densimetrie, fiecare dintre ele acoperind cu
suficient precizie un domeniu ngust de densiti. De obicei, fiecare densimetru
este marcat cu un simbol care ne permite s transformm densitatea msurat la o
anumit temperatur, pentru o alt temperatur, de exemplu simbolul d
4
15
ne arat
17
c temperatura de lucru este de +15
o
C, iar densitatea indicat este densitatea
relativ n raport cu densitatea apei la +4
o
C. Formula cu ajutorul creia putem
converti densitatea relativ este:

t
1
t
1
t
1

d
t
= d
T
+ d
T

unde:
t
1

d
t
- densitatea cutat n baza t i la temperatura de lucru t
1.


t
1

d
T
densitatea msurat n baza T

( nscris pe densimetru ) i la
temperatura de lucru t
1,
factor de corecie.

Exemplu de corecie: cu un densimetru ce are simbol d
15

15
gsim d
15
15
= 1,6740 i
dorim s o convertim n baza d
4
20
, deci d
4
20
= 1,6740 0,000988 1,6740 =
1,6724. n practica laboratorului medical se utilizeaz n mod frecvent truse de
densimetrie care permit determinri de densitate n intervale destul de largi.


-Alcoolmetrul, este un densimetru etalonat n baza d
15
15
i ale crui gradaii
indic concentraia n procente de volum ( % V ) a soluiei alcoolice respective,
care se mai numete i trie real. Cum ns nu se lucreaz ntotdeauna la
temperatura 15
o
C nseamn ca vom citi n realitate o trie aparent
corespunztoare temperaturii la care lucrm. Deci va trebui s trecem de la tria
aparent la tria real, lucru realizabil cu ajutorul tabelelor. Cunoscnd tria real
care nu este altceva dect concentraia corectat n procente de volum ( % V ), cu
ajutorul tabelelor o putem converti n procente de greutate ( % G ) sau n g/l sau
putem pur i simplu aflm densitatea d
15
15
a soluiei alcoolice .
- Urodensimetrul este un areometru special cu scala mult redus, tija fiind
gradat doar ntre 1,000 1,050. Este utilizat frecvent n clinic pentru
determinarea densitii urinei n cadrul explorrilor funciunii aparatului renal.
Desigur, dac este nevoie se fac coreciile de temperatur necesare ( se adaug o
unitate densimetric pentru o variaie a temperaturii cu 3,3
o
C dac temperatura
depete +15
o
C ).
18

Mod de lucru
Indiferent cu care tip de areometru vom lucra,
vom proceda n acelai fel. ntr-un cilindru de
sticl C, se introduce soluia de cercetat ,S , n
suficient cantitate pentru ca areometrul s
poat pluti liber ( acesta se introduce n soluie
cu mult atenie pentru a nu-i sparge partea
inferioar prin lovire de fundul vasului, unde
pentru orice eventualitate se pune si vat ). n
momentul cnd areometrul se afl n echilibru
perfect, fr s ating fundul sau pereii
cilindrului C, se citete gradaia g pn la
care s-a cufundat n lichid precum i
temperatura nregistrat pe termometrul T.
Dup ntrebuinare areometrele se terg i se
nchid n cutiile lor protectoare. Citirea
gradaiei se face n dreptul prii inferioare a
meniscului.

Calcule i prezentarea rezultatelor
Dup determinarea densitilor i a concentraiilor vom face coreciile de
temperatur corespunztoare, rezultatele trecndu-le n tablelul urmtor:

Determinri t
1
t
1
Tria Tria
d
T
t
o
1
C 10
-6
d
t
apar. real. G%
mas. sau % V g/l

densimetrie
alcoolmetrice

urodensimetrice









Fig 3.4. Urodensimetrul
19
4. METODE CALORIMETRICE

4.1. DETERMINAREA CLDURII SPECIFICE A UNUI CORP SOLID
Principiu: Calorimetria este partea termodinamicii care se ocup cu msurarea
cantitilor de cldur. Cldura este o form de energie care se datorete agitaiei
termice i se msoar n jouli (J) sau calorii. O calorie este cantitatea de cldur
necesar unui gram de ap distilat pentru a-i ridica temperatura cu un grad, de la
19,5
0
la 20,5
0
C. Unei calorii i corespunde 4.18 jouli n sistemul SI. Cantitatea
de cldur primit de un corp, depinde de masa m a lui, de natura corpului,
caracterizat printr-o constant caracteristic, notat cu c, i de diferena de
temperatur A t adic:
Q = m
.
c
.
A t (1)
De aici : c =
t m
Q
A
; dac m = 1 i A t = 1
0
obinem, c = Q.

Deci cldur specific este cantitatea de cldur necesar unitii de mas dintr-un
corp pentru a-i ridica temperatura cu un grad. n sistemul CGS ea se msoar n
| | c =
grd g
cal
.
iar n sistemul internaional | | c =
K Kg
J
.
.
Cldura specific a apei este de 1 cal/g.grd = 4,18 J/KgK. Ea este mult mai
mare dect a celor mai multe corpuri. Produsul dintre cldura specific i masa
corpului se numete capacitate caloric i se notez cu C = m.c. Produsul dintre
cldura specific i masa molar M se numete cldur specific molar, C
M
=c.M
sau cldur molar.
Cldura specific a unui corp poate fi determinat prin mai multe metode,
cea mai simpl are la baza metoda amestecurilor. Ea se bazeaz pe schimbul de
cldur care se realizeaz prin punerea n contact a dou sau mai multe corpuri cu
temperaturi diferite. De exemplu dac introducem ntr-un calorimetru cu ap un
corp a crui temperatur este mai ridicat dect cea a apei el va ceda o anumit
20
cantitate de cldur. n momentul echilibrului termic, conform principiilor
calorimetrului, este valabil egalitatea:
Q
1
= Q
2
Q
3 ,
unde Q
1
reprezint cantitatea de cldur cedat de corpul mai
cald, Q
2
cantitatea de cldur absorbit de apa din calorimetru i Q
3
cantitatea de
cldur absorbit de calorimetru, agitator i termometru.
Q
1
= m ( t t
2
), Q
2
= m
1
c
1
( t
2
t
1
), Q
3
= m
2
c
2
( t
2
t
1
)
unde: m este masa corpului de analizat, m
1
este masa apei din calorimetru, m
2
este
masa calorimetrului, agitatorului i a termometrului, c este cldura specific a
corpului, c
1
este cldura specific a apei, c
2
este cldura specific a calorimetrului,
termometrului i agitatorului, t
2
este temperatura final a amestecului( de ehilibru) ,
t este temperatura iniial a corpului, t
1
este temperatura iniial a apei din
calorimetru, agitator, termometru. Deci t > t
2
> t
1.
nlocuind valorile pentru Q
1
, Q
2
i Q
3
obinem:
mc ( t t
1
) = ( m
1
c
1
+ m
2
c
2
) ( t
2
t
1
)
Capacitatea caloric a calorimetrului ( m
2
c
2
) se determin n prealabil i poart
denumirea de echivalent n ap al calorimetrului (notat cu A).
Astfel se poate calcula cldura specific a unui corp innd cont de valoarea
echivalentului n ap al calorimetrului i de faptul c pentru ap cldura specific
este egal cu 1 cal/g grad ( sau 4185 J/kg grad ), avem:
c

=
) (
) )( . (
2
1 2 1 1
t t m
t t A c m

+

Dispozitive: Vasul calorimetric este compus dintr-un vas cilindric B,
introdus ntr-un vas mai mare C i izolat termic.
Vasul B conine o cantitate precis msurat de ap, un termometru D i un agitator
E ( Fig. 4.1 ).



Fig.4.1 Prile componente ale
unui calorimetru.




21

Mod de lucru;
- Se introduce n calorimetru o cantitate de ap precis msurat, m
1
.
- Se msoar temperatura apei din calorimetru t
1
( fie cu un termometru cu mercur,
fie cu un termometru electric )
- Se cntrete corpul; apoi se introduce ntr-un vas cu ap care fierbe, unde se las
cteva minute.
- Se msoar temperatura apei care fierbe i care reprezint temperatura iniial a
corpului t.
- Se introduce repede corpul nclzit n calorimetru, agitnd lent apa din
calorimetru.
- Se urmrete indicaia termometrului. n momentul n care ea este staionar se
citete valoarea. Aceasta este temperatura final a amestecului, t
2
.
Pentru a determina cldura specific a corpului se introduc datele n relaia
de mai sus. Msurtorile i calculele se vor efectua pentru diferite materiale: fier,
plumb, aluminiu, aliaje.
Rezultatele se trec n tabelul urmtor:

Nr. Materialul A m m
1
t
2
t
1
t c
det. studiat J/kg J/kg grad
( cal/g) g g
0
C
0
C
0
C (cal/g.grad)
1. Pb

2. Al












22
4.2. DETERMINAREA CALDURII SPECIFICE A UNUI LICHID
Pentru a determina cldura specific a unui lichid se folosete unpurttor de cldur
numit termofor. Termoforul este un balon de sticl prevzut cu un tub subire, el
poate transporta aceeai cantitate de cldur att lichidului de referin ( apa ) ct i
lichidului de cercetat, deci este valabil ecuaia calorimetric Q
t ermofor
= Q
apa
i
Q
t ermofor
= Q
lichid
.
Mod de lucru:
Se msoar masa m
vas
a vasului interior al calorimetrului, m
a
-masa apei ce se
introduce n el i temperatura t
a
a sistemului ap-calorimetru.
Termofor
b

a


Se umple balonul pn la reperul a cu un lichid colorat i se nclzete ntr-un vas
cu ap cald pn lichidul din tub atinge nivelul b. n acest proces de nclzire
termoforul primete cantitatea de cldur Q. Se scoate termoforul din baia cald i
se introduce n apa din calorimetru., urmrind coborrea nivelului de la b la a. n
acest proces de rcire termoforul va ceda apei exact aceiai cantitate de cldur pe
care a primit-o. Dup stabilirea echilibrului termic se msoar temperatura final t
f.

Se repet aceleai operaii cu lichidul de cercetat. Dup golirea apei din calorimetru
se introduce o mas de lichid m
l
i se msoar temperatura lui t
l
. Masa lichidului
se poate afla din produsul volumului de lichid i densitatea lui. Se nclzete din
nou termoforul n baia cald pn ce lichidul din tub atinge nivelul b dup care se
23
introduce n calorimetrul cu lichid i se ateapt atingerea nivelului a, iar
temperatura de echilibru va fi t
e .
Cantitatea de cldur cedat lichidului n aceste
condiii este egal cu cea cedat apei. Cantitatea de cldur primit de ap i de
vasul interior al calorimetrului va fi :
Q = m
a
c
a
( t
f
- t
a
) + m
vas
.c
vas
( t
f
t
a
)
Cantitatea de cldur primit de lichidul de cercetat i de vasul interior al
calorimetrului va fi:
Q = m
l
c
l
( t
e
t
l
) + m
vas
c
vas
( t
e
t
l
)
Dar m
vas
c
vas
= C (capacitatea caloric a vasului ) care este deja cunoscut.
m
a .
c
a
( t
f
- t
a
) + C ( t
f
t
a
) = m
l
.c
l
( t
e
- t
l
) + C ( t
e
t
l
)
rezult
c
l
=
) (
) ( ) ( .
l e l
e l a f a f a a
t t m
t t t t C t t c m

+ +

Se va determina cldura specific a dou lichide diferite (alcool etilic i soluie de
acid acetic). Se tie c apa are c
a
= 1 cal/gr.grd, iar n general cldurile specifice ale
lichidelor obinuite sunt mai mici dect a apei.

4.3. DETERMINAREA VARIAIEI DE ENTALPIE LA DIZOLVARE
n sistemele biologice vii au loc o serie de transformri energetice nsoite de
producere de cldur. Desigur, rolul principal n producerea cldurii l au procesele
de oxidare ale substanelor nutritive, iar o parte mai mic o au i procesele de
hidroliz, de dizolvare etc., procese care au loc la presiune constant (1atmosfer ).
Pentru a studia aceste procese s-a introdus o funcie de stare numit entalpie (H),
care poate fi exprimat cu ajutorul relaiei:
24
H =U + pV (1)
Unde U este energia intern a sistemului, p este presiunea la care se gsete
sistemul iar V este volumul lui. Variaia entalpiei A H = H
2
- H
1
reprezint
cantitatea de cldur pe care sistemul o schimb cu mediul exterior ntr-un proces
izobar,
A H = Q
p
, Q
p
=A U +pA V (2)
Procesul de dizolvare a substanelor este nsoit de cldura de dizolvare, care
depinde de interaciunea ionilor sau moleculelor substanei cu moleculele
dizolvantului. La dizolvarea unei substane cristaline n ap au loc urmtoarele
fenomene: a) distrugerea reelei cristaline de ctre moleculele de ap dipolare,
care se interpun ntre ionii srii, energia ce trebuie cheltuit n acest proces se
numete energie de reea A H
r
i b) solvatarea (hidratarea) lor cnd are loc o
degajare de cldur datorit interaciunilor ion-dipol, numit energie de solvatare
AH
s
.
Conform legii lui Hess, suma cantitilor de cldur ce nsoete un proces este
constant.
A H
diz
= A H
r
+A H
s
(3)
Energia de reea A H
r
are valoarea de cca 10
2
cal /mol i este pozitiv deoarece
este absorbit de sistem, iar energia de solvatare A H
s
are cam aceeai valoare dar
este negativ, deoarece ea este degajat de ctre sistem. Entalpia de dizolvare
(cldura de dizolvare) poate fi pozitiv (dizolvarea endoterm ) sau negativ
(dizolvare exoterm ) dup cum energia de reea este mai mare sau mai mic dect
energia de solvatare. Cldura degajat sau absorbit se msoar n calorii /mol sau
n jouli/mol. Cantitatea de cldur Q primit sau cedat de un corp de mas m i
cldura specific c depinde de variaia temperaturii A t adic:
Q =m cA t (4)
Produsul dintre cldura specific i masa lui se numete capacitate caloric :
C = m
.
c , Deci:
Q =C A t (5)
25
Pentru determinarea cldurii de dizolvare se aplic ecuaia calorimetric conform
creia cantitatea de cldura absorbit de un sistem este egal cu cea degajat de alt
sistem, cu care este n contact. n cazul dizolvrii unor sruri, cldura primit
pentru dizolvare (Q
p
) este egal cu cea cedat de sistemul calorimetric (Q
cal
) i de
cldura cedat de solvent (Q
sol
). Cldura cedat de calorimetru este Q
cal
= CA t ,
iar cea cedat de solvent este Q
sol.
= m
s.
c
s
. A t, deci cldura total este:
A H =Q
p
=Q
sol
+Q
cal
= m
s
c
s A
t +CA t = ( m
s
c
s
+C )A t (6)
unde m
s
este masa soluiei ( masa apei + masa srii ), c cldura specific a soluiei
care se poate egal cu cea a apei (1 cal/gr.grd.). Constanta calorimetrului C se
poate determina din calcul. Entalpia de dizolvare se raporteaz la un mol de
substan.
Modul de lucru:
Se cntresc urmtoarele: vasul interior al calorimetrului i agitatorul, masa de
ap ce se va introduce n acest vas i sarea pe care vrem s-o dizolvm, ntr-o
eprubet. De exemplu: utilizai 200 moli ap (1M
ap
= 18 g ) pentru 1mol sare. Se
introduce eprubeta cu sare n apa din calorimetru i se msoar temperatura din
minut n minut, pn ce ea rmne constant. Se va folosi termometrul digital. Se
vars coninutul eprubetei n ap, se agit pn la dizolvarea srii. Se msoar din
nou temperatura, timp de 5 minute, din minut n minut. Pentru a gsi valoarea lui
At se reprezint grafic temperatura n funcie de timp. Se calculeaz apoi variaia
entalpiei cu relaia (6).

Fig.4.2.Variaia
temperaturii n procesul de
dizolvare.

26


II. MSURAREA PROPRIETILOR ELECTRICE ALE
LICHIDELOR BIOLOGICE

5. CONDUCTOMETRIE
Determinarea concentraiei electroliilor din plasma sanguin este foarte
util n practica clinic deoarece ofer indicaii asupra metabolismului
hidromineral, asupra repartiiei apei n organism ntre cele trei compartimente:
intracelular, interstiial i vascular. n diferite tulburri ale echilibrului hidromineral
aceast repartiie poate suferi modificri importante. Determinarea concentraiei
electrolitice a plasmei se poate face prin mai multe metode: conductivitate
electric, crioscopie sau prin dozarea separate a ionilor. Prin msurarea
conductibilitii sau a rezistivitii se poate face o dozare destul de precis i rapid
a electroliilor din plasm, substanele neionizabile cum sunt urea sau glucoza
nefiind implicate n aceste determinri.
Noiuni teoretice de baz:
Se numete conductivitate electric G ( conductan ), valoarea invers a
rezistenei, a mediului respectiv: G =
R
1
, unde R este rezistena electric i
se msoar n ohmi ( O). Pentru conductorii de ordinul II conductibilitatea este o
proprietate caracteristic i depinde de concentraia ionilor n soluie (deci de
gradul de disociere electrolitic), de numrul de purttori de sarcin i de viteza cu
care acetia transport curentul n soluie.
Rezistena electric este dat de relaia: R =
s
l
, n care l este lungimea
conductorului, s seciunea, rezistena specific sau rezistivitatea ( msurat n
O.cm ). Ea depinde de mediului respectiv. Rezistena specific, , este
rezistena unui cub din acel mediu care are lungimea i seciunea egal cu unitatea.


27
Conductana mediului G se msoar n O
-1
, numit i Siemens ( S ) . Valoarea
invers a rezistenei specifice se numete conductivitate electric specific :
=

1
=
s R
l
.
( O
-1
cm
-1
) sau ( S/cm )
Conductivitatea electric specific depinde de natura substanei, de temperatur i
de concentraia soluiei. Pentru a determina conductivitatea electric specific a
unui electrolit este nevoie de o celul de conductibilitate. Aceasta e alctuit din
doi electrozi de platin cu suprafaa de cca 1 cm
2
i distanai la 1 cm, astfel nct
volumul de lichid s rmn acelai pentru toate soluiile de msurat. Celula de
conductibilitate se caracterizeaz prin constanta celulei, care este dat de raportul
dintre distana dintre electrozi i suprafaa lor,
k =
S
l
( cm
-1
)
Deoarece raportul l/S apare i n legea lui Ohm, constanta celulei se poate
determina prin msurtori de rezisten sau de conductan a unor soluii etalon de
electrolit cu conductivitate cunoscut,
= G. k ( S.cm
-1
)
De obicei valoarea lui este dat n prospectul aparatului . Spre exemplu,
conductivitatea soluiilor de KCl la 25
0
C este dat n tabelul de mai jos.

Concentraia molar 0,1 0,02 0,01
Conductivitatea / O
-1
cm
-1
/ 0,01289 0,002768 0,001412

n practic se utilizeaz conductivitatea echivalent sau cea molar adic
conductivitatea raportat la numrul de echivaleni-gram sau de molecule-gram de
electrolit ntr-un cm
3
de soluie. Acestea sunt simbolizate prin
e
i
m
i pot fi
calculate cu relaia :

e , m
=
m e
c
,

= .V
28
unde c
e,m
= concentraia echivalent sau cea molar, iar V este volumul n cm
3.

Spre exemplu, fie o soluie molar a unei substane care disociaz n n ioni. Fiecare
mol din aceasta soluie conine 6,02
.
10
23
molecule i posed o sarcin electric
egal cu n
.
6,02
.
10
23

.
1,6
.
10
-19
coulombi sau n Faraday. Prin definiie o
concentraie de 1 Echivalent reprezint concentraia ionilor pozitivi sau negativi
care au o sarcin electric de 1 Faraday. n exemplul de mai sus concentraia
echivalent a soluiei este de n Echivalent / litru. Experimental s-a putut demonstra
c conductivitatea echivalent scade dac concentraia crete i se pot observa dou
tipuri de comportamente care caracterizeaz electroliii tari, respectiv cei slabi. La
diluii mari ( 1/ c ~ 10
4
) ea rmne aproximativ constant i se numete
conductivitate echivalent la diluie infinit . Extrapolnd la origine, la diluie
infinit - unde comportamentul tinde s fie ideal - se obine conductivitatea
echivalent limita
0
.

Fig.5.1. Dependena conductivitii electrice de concentraie pentru electrolii tari respectiv slabi.

Msurarea conductivitii (rezistivitii) are mare importan n
determinarea concentraiei ionilor din plasma sanguin. Valoarea normal a
rezistivitii plasmei sanguine la temperatura corpului este de 69-79 ohm.cm. O
cretere a rezistivitii a plasmei sanguine, indic o scdere a concentraiei
[ O
-1
cm
-1
]
C
e
[eq/l]

0
Electroliti tari
Electroliti slabi
29
electroliilor din plasm. Concentraia total a electroliilor din plasma sanguin
se poate determina cu ajutorul relaiei:
c =
) . 25 , 0 100 (
10 . 6 . 1
6
P
[ mEq / litru]
unde este rezistivitatea electric, iar P proteinemia n g/l, care este dat n
funcie de densitatea plasmei n tabelul de mai jos.

Tabelul 5
Densitatea g/cm
3
Proteinemia g/l Densitatea g/ cm
3
Proteinemia g/l
1,016 30,9 1.026 65,2
1,017 34,3 1,027 68,8
1,018 37,7 1,028 72,0
1,019 41,2 1,029 75,5
1,020 44,6 1,030 78,9
1.021 48,0 1,031 82,3
1,022 51,4

1,032 85,7
1,023 54. 9 1,033 89,2
1,024 58,9 1,034 92,6
1,025 61,7

1,035 96,3

Valoarea normal a concentraiei totale a electroliilor n plasma este de 310
mEq/l. Msurtorile conductometrice efectuate n legtur cu proprietile electrice
ale celulelor sanguine indic o valoare a capacitii electrice de 1 F/ cm
2
i o
conductan de 48 mS/cm, iar conductivitatea citoplasmei este de 4 mS/cm .


5.1. Utilizarea multimetrului electrochimic - pH, mV, temperatura i
conductivitate ntr-un singur instrument - CONSORT C 830.
La acest instrument pot fi conectate simultan un electrod de pH, un electrod
redox, o celul de conductivitate i un senzor de temperatur. Parametrii
tehnici:
30
Domeniu de masur: 014 pH, 1000 mV, 0100C, 0100 mS/cm.
Rezoluie : 0.01 pH, 1 mV, 1C, 0.1 S/cm
Precizie - pH/mV 0.5% din valoarea masurat.
- conductivitate- 2% pe toat scala.
Compensarea temperaturii- automat sau manual n intervalul 0-100 C.
Calibrare automat pH 2 puncte i conductivitate 1 punct
Recunoatere tampon pH, 9 valori preprogramate.
Accesorii- celul de conductivitate SK10B
- electrod de pH SP10B
- senzor de temperatur ST10N
- stativ flexibil cu bra.
- Soluii tampon i pentru calibrare.

Pe cutia aparatului exist 5 taste. Cu tasta Mode se poate selecta modul de lucru
(msurarea conductivitii, pH, temperatura) procedura de etalonare i revenire la
modul iniial. Butonul CAL ncepe sau continu etalonarea sau alegerea unei
funcii , sgeile se folosesc pentru alegerea manual a unei valori sau a unei
funcii, iar tasta ON/OFF pentru conectarea sau deconectarea aparatului . Pe ecran
pot aprea cteva mesaje sau coduri de eroare: / or / = depirea scalei , / cc / =
constanta celulei n afara domeniului de msur, / CAL/ = greeal de etalonare, /
MEM/ = eroare de memorare. Nu se va introduce celula de conductivitate i
electrodul de pH n acelai timp n soluie.



31


Fig.5.2. Conductometrul CONSORT 830.

5.1.a. Modul de lucru pentru msurarea conductivitii :
Se selecioneaz gama de conductibilitate apsnd pe butonul Mode.
Dup ce s-a splat electrodul cu ap distilat, pe urm cu soluia etalon de 0,01
M KCl ( 1413 S/ cm ), se cufund apoi electrodul n aceast soluie.Temperatura
soluiei nu are importan, dar totui ea trebuie s fie cuprins ntre 0 i 30 grade
Celsius. Dac temperatura este diferit, se compenseaz manual la valoarea
indicat . Apsai apoi tasta Cal.
Aparatul va arta temperatura de referin / r.20/ sau / r.25 /.Alegei valoarea
dorit i apsai tasta Cal.
Aparatul va indica constanta celulei de ex. / 1.045 / i se etaloneaz automat
cnd afiajul este stabil ( adic tasta Cal nceteaz clipirea ).
Dup ce se cltete electrodul cu ap distilat, apoi cu soluia de msurat, se
introduce n soluia de msurat i se citete valoarea pe ecran.
Dup utilizare, splai electrodul i introducei-l n ap distilat ( adugai puin
detergent pentru a conserva mai bine suprafaa electrozilor de platin).


32
5.1.b. Modul de lucru pentru msurarea pH.
Se va selecta gama de pH cu ajutorul tastei Mode. Afiajul va indica imediat
valoarea msurat la etalonarea precedent. Pentru o nou etalonare, se apas tasta
CAL.
Se cltete electrodul cu ap distilat i se introduce ntr-unul din tampoane.
Afiajul va indica unul dintre cele 9 tampoane din memorie, spre exemplu 4.01,
n timp ce indicatorul pH de pe ecran clipete. Se alege cu ajutorul sgeilor
tamponul corespunztor i se apas tasta Cal. Aparatul va arta tamponul msurat
i se va calibra automat atunci cnd afiajul este stabil(indicaia Cal de pe ecran nu
mai clipete).
Se va clti electrodul cu ap distilat i se introduce n cel de-al doilea tampon.
Afiajul va indica un nou tampon din memorie (de exemplu 9.18) n timp ce
indicatorul pH de pe ecran clipete. Se alege tamponul corespunztor i se apas
tasta Cal, etalonarea se face automat.
Se cltete electrodul cu ap distilat i se introduce n soluia de msurat, apoi
se citete direct valoarea de pe ecran.
Dup folosire cltii totdeauna electrozii cu ap distilat i pstrai n soluie de
KCl cu concentraie 3...4 M.

5.1.c. Modul de lucru pentru msurarea mV.
Selecionai gama mV cu tasta Mode.
Dup cltirea cu ap distilat se introduce electrodul n soluia de msurat i se
citete valoarea pe ecran.
Dup folosire se cltete cu ap distilat i se pstreaz n soluie KCl 3...4 M.
Pentru toate modurile de lucru se poate folosi concomitent senzorul de temperatur.

Aplicaie: 1) Se pregtete o soluie de KCl 1 n i o soluie de CH
3
COOH 1 n, n
ap distilat. Apoi se vor prepara diluiile 0,1; 0,01; 0,001 i 0,0001 normal i se
va determina conductivitatea si pH-ul lor. Datele se vor trece n urmtorul tabel. Se
33
va reprezenta grafic conductivitatea n funcie de concentraie pentru fiecare
soluie.

Soluie

Concentraia
[ n ]
G
[ O
-1
= Siemens]

[ mS/ cm]

pH





2) Se va calcula concentraia total de electrolii din plasm cunoscnd valoarea
normal a rezistivitii electrice a plasmei, conform formulei de mai sus.
Proteinemia se determin din tabelul 5 n funcie de densitatea plasmei.

















34

6. STUDIUL UNEI PILE DE CONCENTRAIE
Noiuni teoretice :

Un electrod metalic introdus n soluie apoas ce conine ionii si va
participa la o reacie redox de tipul :
red z

e
-
+ ox ,
unde red - atomul neutru, z valena ionului, e sarcina electronului, ox ionul
cu sarcina +z.
ntruct electronii rmn n metal iar ionii trec n soluie, datorit atraciei
electrostatice dintre ei, se formeaz la interfaa metal-soluie un strat dublu electric.
Diferena de potenial datorit stratului dublu electric se opune trecerii unei noi
cantiti de ioni n soluie. Sistemul ajunge la echilibru cnd tendina de trecere a
ionilor n soluie datorit diferenei de potenial chimic ntre formele red i ox este
anulat de tendina trecerii n sens opus datorit diferenei de potenial electric.



Se poate demonstra (avnd n vedere c potenialul chimic n faza metalic
este egal cu potenialul standard) c potenialul electric al electrodului metalic n
raport cu soluia se poate calcula cu formula:
ox
C ln
zF
RT
E E
0
+ = , unde C
ox
este concentraia molar a ionilor n soluie, R
constanta universala a gazelor, T- temperatura absolut, z- valena ionului, F
Fig.6.1. Formarea stratului dublu
electric la suprafaa electrodului
metalic
35
numrul lui Faraday (96500 C/mol) , E
0
potenialul electric normal al electrodului
(potenialul electric standard dac temperatura este 25

C).
Doi electrozi identici introdui n soluii de concentraii diferite, C
1ox
i C
2ox
,
se vor ncrca la poteniale diferite, E
1
i E
2
.
E
1
= E
0
+
1ox
C ln
zF
RT

E
2
= E
0
+
2ox
C ln
zF
RT

La punerea n contact electric a celor dou soluii printr-o punte electrolitic
(coninnd o sare ce disociaz n ioni cu mobiliti egale i deci nu produce
potenial de difuziune) ntre cei doi electrozi apare o diferen de potenial electric,
E:
E = E
2
E
1
=
1ox
2ox
C
C
ln
zF
RT

Un astfel de dispozitiv se numete pila de concentraie datorit faptului c
diferena de potenial electric este o consecin a diferenei de concentraie a ionilor
n cele dou soluii.
Cazul discutat mai sus se refer la trecerea n soluie a unor ioni pozitivi.
Dac electrodul utilizat se comport reversibil n raport cu ionii negativi din soluie
diferena de potenial se va calcula cu aceeai formul doar semnul va fi schimbat
datorit schimbrii polaritii stratului dublu electric. n general se va putea scrie:
E =
1
2
C
C
ln
zF
RT

Semnul + utilizndu-se pentru ionii pozitivi, iar - pentru ionii negativi.
Trecndu-se la logaritmi zecimali se obine forma practic a formulei de mai sus:
E = V) volti, ( lg
zF
RT
2,302
1
2
C
C
, sau
E = mV) , (milivolti lg
zF
RT
302 2
1
2
C
C

36
n cele ce urmeaz se va studia potenialul electric generat de o pil de
concentraie a ionului C1
-
din soluiile de KCl, dispozitiv ce se apropie de
comportamentul ideal.
Electrozii utilizai sunt fire de argint pe care s-a depus electrolitic un strat
de AgCl (notai pe scurt electrozi Ag/AgCl) i care sunt reversibili n raport cu Cl
-
.
Electrodul introdus n soluie mai diluat de KCl va trimite n faza apoas
mai muli ioni Cl
-
, el ncrcndu-se la un potenial pozitiv n raport cu cel aflat n
soluia mai concentrat. Diferena de potenial, masurat n mV, va fi:
E = - 2302
1
2
C
C
lg
zF
RT
sau, dup rsturnarea fraciei:
E = 2302
2
1
C
C
lg
zF
RT
(mV).
Msurarea diferenelor de potenial generate de pilele de concentraie nu
poate fi fcut cu instrumente obinuite datorit faptului c acestea modific stratul
dublu electric de la suprafaa electrozilor prin cantitatea mare de curent ce trebuie
s le strbat. Din acest motiv se folosesc galvanometre sau milivoltmetre
electronice care au rezistena de intrare suficient de mare.
Materiale necesare
Milivoltmetrul cu afisaj digital, 2 electrozi Ag/AgCl montai pe supori ce
se pot deplasa vertical pe stative, 2 pahare Berzelius de 50 ml, fii de hrtie de
filtru (ca puni electrolitice), soluie de KCl cu concentraia 12 moli/litru,
cilindru gradat de 50 ml, ap distilat.
Descrierea aparaturii
Dispozitivul experimental este realizat pe dou stative verticale n lungul
crora pot fi deplasate suporturile pe care sunt fixai cei doi electrozi i de care pot
fi prinse cu cleme paharele Berzelius coninnd soluiile de lucru. Primul pahar
Berzelius va conine soluia de KCl nediluat, de referin, cu concentraia pe care
o vom nota C
1
i care rmne nemodificat pe tot cursul experienei. Al doilea
pahar Berzelius va conine soluii de concentraie variabil, C
2
, obinute prin
diluarea progresiv a soluiei de referin. Prin coborrea suporilor, electrozii El
1
i
37
El
2
pot fi introdui n soluiile respective. Puntea electrolitic, P, dintre cele dou
soluii este realizat cu o band de hrtie de filtru. Cablurile electrozilor El
1
si El
2

vor fi cuplate la bornele referin i respectiv, msurare ale milivoltmetrului sau
pH-metrului. n cazul utilizrii unui pH-metru butonul de comutare mV-pH se va
pune n poziia mV.


Fig.6.2. Reprezentarea schematic a dispozitivului experimental pentru o pil de
concentraie.



Fig.6.3. Multimetre digitale
utilizate pentru nregistrarea
diferenei de potenial
electric produs de o pil de
concentraie.

38
Modul de lucru
Se cupleaz milivoltmetrul la reea i se pornete urmrindu-se aprinderea
ecranului de afiaj. Nu se va da importan valorilor indicate de aparat atta timp
ct electrozii nu sunt introdui n soluie iar puntea electrolitic nu este instalat
ntre cele dou vase cu soluie.
n ambele pahare, dup ce n prealabil au fost splate cu ap distilat, se
introduce soluie de concentraie C
1
. Paharul nr1 se va prinde cu o clema pe stativul
din stnga, n el va fi introdus electrodul El
1
i va fi meninut astfel pn la sfritul
determinrilor. n paharul nr.2, prins de stativul din dreapta, va fi introdus
electrodul El
2
i cu o banda de hrtie de filtru se va face legtura cu vasul nr.1.
Indicaiile aparatului se vor stabiliza ntr-un interval de timp 1-2 minute. Dac
ntregul sistem funcioneaz corect diferena de potenial afiat de aparatul de
msur este nul, sau difer cu cel mult 5 mV. Vom nota aceast valoare E
1
.
n continuare, se poate scoate electrodul El
2
din vasul nr2 i din soluia ce o
conine se prepar, prin diluare , 50 ml soluie de concentraie C
2
= C
1
/2 (25 ml
soluie inial + 25 ml ap distilat). Aceasta se reintroduce n vasul nr.2 dup
cltirea lui cu ap. Se repet msurarea diferenei de potenial obinndu-se
valoarea E
2
.
Se procedeaz ca i mai sus, n mai multe rnduri, dilund succesiv soluia
din vasul nr.2, astfel nct s se obin valorile pentru potenialele E
4
, E
8,
E
16,
E
32
...
corespunztoare unor soluii din vasul nr.2 de concentraii C
1
/4, C
1
/8, C
1
/16,
C
1
/32,... Este foarte important ca la fiecare msurtoare s se schimbe puntea
de hrtie de filtru dintre vase. Altfel exist riscul falsificrii rezultatelor prin
modificarea concentraiilor din acest vas.
Prezentarea rezultatelor i calcule:
C
2
C
1
/1 C
1
/2 C
1
/4 C
1
/8 C
1
/16 C
1
/32 C
1
/64 C
1
/128
C
1
/C
2
1 2 4 8 16 32 64 128
lg
2
1
C
C
0,00
0,301 0,602 0,903 1,204 1,505 1,806 2,107
E
n
(mV) O
39
Se va reprezenta grafic dependena potenialului pilei de concentraie, E, n
funcie de lg (C
1
/C
2
) trasndu-se dreapta care aproximeaz cel mai bine punctele
obinute experimental.
Cu ajutorul graficului se stabilesc valorile pentru panta experimental a
dreptei k
e
:
k
e
=
) /C lg(C
E
2 1
A

Ecuaia drepetei experimentale cu valorile astfel gsite se va scrie sub
formula:
E = E
0
+ k
e
lg (C
1
/C
2
)
Aceast ecuaie va fi comparat cu cea teoretic:
E = k
t

.

lg (C
1
/C
2
) unde k
t
=
F
RT 302 2
este panta teoretic pentru
msurtori fcute n mV.
Astfel se poate aprecia ct de aproape de comportamentul ideal este pila
studiat. Aceast apropiere este cu att mai mare cu ct E
0
(potenialul datorit
asimetriei n funcionarea electrozilor) este mai redus i cu ct panta experimental
k
e
se apropie mai mult de valoarea calculat pentru panta teoretic k
t
.















40
III. PROPRIETI OPTICE ALE LICHIDELOR BIOLOGICE

7. DETERMINAREA INDICELUI DE REFRACIE AL UNEI SOLUII
CU AJUTORUL REFRACTOMETRULUI ABBE

Notiuni teoretice. Refracia luminii reprezint fenomenul de trecere a
undei luminoase dintr-un mediu optic cu indicele de refracie n
1
ntr-un alt mediu
optic cu indicele de refracie n
2
, cu schimbarea direciei de propagare.
Reprezentnd raza de inciden (1), raza refractat (2) i notnd:
- i: unghiul de inciden, format de raza incident cu normala n punctul de
inciden la suprafaa de separare dintre cele dou medii
- r: unghiul de refracie, format de raza refractat cu normala, putem afirma
c raza incident, raza refractat i normal la suprafa sunt coplanare i
are loc relaia :
n
1
sin i = n
2
sin r

Fig. 7.1. Fenomenul de reflexie, refracie i reflexie total a luminii.

Discuii:
1. dac n
2
>n
1
atunci r < i; raza refractat se apropie de normal
2. dac n
2
<n
1
atunci r>i; raza refractat se deprteaz de normal
41
3. la suprafaa de separare dintre dou medii transparente au loc simultan fenomene
de reflexie i de refracie a luminii.
4. atunci cnd n
2
<n
1
notm cu l unghiul limita = unghiul format de raza incident
pentru care unghiul de refracie este r = 90 => n
1
sin l = n
2
Dac lumina trece din mediul 1 n mediul 2 i n
1
>n
2
atunci exist relaia
sin 1 = n
2
/ n
1
, relaie ce poate servi la aflarea unuia din cei doi indici de refracie
dac se cunoate cellalt i se msoar unghiul limit, 1. Pe acest principiu este
construit refractometrul Abbe cu ajutorul cruia se poate citi direct indicele de
refracie al unui lichid (dup ce s-a adus n dreptul unui reper fix zona de delimitare
lumin ntuneric ce apare atunci cnd radiaiile se propag n condiiile refraciei
la unghiul limit).
Determinrile refractometrice ne dau informaii preioase i n legtur cu
structura unor substane, cum ar fi de exemplu cele organice. Refracia specific i
refracia molecular a unei substane sunt mrimi fizice importante care pot
caracteriza din punct de vedere optic un lichid biologic. Ea se poate calcula cu
ajutorul relaiei lui Lorenz:
R
s
=
d n
n 1
2
1
2
2

i r
m
= r
s
M

n care n este indicele de refracie iar d este densitatea.
Produsul dintre refracia specific i greutatea molecular M a unei
substane se numete refracie molecular. Aceast mrime este i ea o
caracteristic molecular a fiecrei substane, valoare ei depinznd de starea de
agregare a substanei respective. Refracia molecular n cazul substanelor
organice este egal cu suma refraciilor atomice i a refraciilor legturilor, precum
i a grupelor coninute de molecul.
Refractometria ca metod de lucru are urmtoarele avantaje: se lucreaz cu
o cantitate infim de substan (1-2 picturi), este o metoda rapid i foarte precis
(se poate citi indicele de refracie cu o precizie de 4 zecimale). Cunoscndu-se
42
indicele de refracie, se poate determina concentraia soluiilor studiate( n cazul
laboratorului clinic -concentraia proteinelor n lichidele biologice).

Aparatura: Refractometrul de tip ABBE-Convex are urmtoarele pri
componente:
1. Ocular, mrire optic 30X.
2. Dispozitiv de deschidere/nchidere a prismei.
3. Oglinda reflectatoare.
4. Intrare pentru msurarea temperaturii apei de rcire (dac este cazul).
5. Intrare pentru luminarea prismei.
6. Intrare pentru sistem de termostatare.
7. Prisma superioar.
8. Dispozitiv pentru controlul dispersiei.
9. Dispozitiv de ajustare msurare.
10. Buton pentru compensarea culorii.
11. Intrare pentru msurarea temperaturii probei cu termometrul digital.
12. Buton de calibrare.
13. Reglajul luminozitii scalei de msurare.

43




Fig. 7.2. Ref ractometrul ABBE, tip CONVEX.




44
Partea principal a refractometrului Abbe se compune din dou prisme, una
pentru msurare i cealalt pentru iluminare, care se pot bloca cu ajutorul unui
urub. Prin intermediul unui tambur se poate deplasa blocul prismelor astfel ca n
cmpul vizual al lunetei s ne apar o imagine pe jumtate iluminat i a crei
limit de separaie ntre zona iluminat i cea ntunecat s fie plasat exact la
ncruciarea celor dou fire reticulare.





Modul de lucru
nainte de msurtoarea propriu zis trebuie fcute cteva teste de calibrare.
Se deschide intrarea prismei superioare (5) i se nchide oglida reflectatoare (3). Se
acioneaz tamburul de compensare a culorii (10) pn cnd culorile rou i
albastru dispar complet.
Metoda de calibrare utiliznd ap distilat: Se deschide prisma superioar,
se pipeteaz 2-3 picturi de ap i apoi se nchide. Dac temperatura nregistrat
este de 20C, indicele de refracie ar trebui s fie 1,3330. n caz contrar, se
acioneaz tamburul (9) pn cnd scala indic valoarea menionat. De asemenea
se acioneaz butonul de calibrare pn cnd limita de separare lumin-umbr
corespunde cu intersecia firelor reticulare.


Deoarece se lucreaz cu lumina alb (lumina
policromatic) pentru a se nltura fenomenele
de dispersie ce pot aprea (i care ar determina
erori de msurare datorit imposibilitii
obinerii unei limite de separaie nete) se
utilizeaz o prism suplimentar care se poate
roti cu ajutorul unui dispozitiv situat lateral,
acest dispozitiv numindu-se compensator. Cu
ajutorul lunetei se poate citi direct indicele de
refracie al substanei studiate, dar i
concentraia procentual.

Fig. 7.3. Aspectele privind punerea la punct (a)
i citirea indicilor de refracie (b) pentru
refractometrul Abbe.
45
Calibrarea odat fcut, se poate proceda la msurtorile propriu zise, determinnd
pentru diferite lichide biologice att indicele de refracie (cu precizie de patru
zecimale) ct i concentraia procentual. Dac msurtoarea se face la temperaturi
mai mari sau mai mici de 20C trebuie fcut o corecie a rezultatului. n tabelele
urmtoare sunt trecute coreciile care trebuie fcute n funcie de temperatur i
cteva valori ale indicelui de refracie pentru unele substane de referin.


n figura alturat sunt prezentate dou tipuri
de refractometre portabile care permit
msurtori rapide i uoare, ideale pentru
determinarea concentraiei procentuale n
scala Brix. Scala de msurare Brix arat
concentraia procentual a unor substane
solide dizolvate n ap, fiind calibrat la
cantitatea de zahr (trestie de zahr) n grame,
coninut n 100g de ap. Deci cnd se
msoar o soluie care conine zahr, scala Brix indic exact concentraia real.





46
Calcule i prezentarea rezultatelor

Odat citite valorile indicelui de refracie i ale concentraiei, cu ajutorul formulelor
anterioare se calculeaz refracia molecular i refracia specific pentru fiecare
prob. n cazul soluiilor proteice, concentraia se va determina din tabelele puse la
dispoziie. Rezultatele se trec n tabelul urmtor:

Nr. sol. n Concentraia
proteine
serice
d (kg/m
3
) Refracia
specific r
s

Refracia
molecular
r
m
































47

8. DETERMINAREA CONCENTRAIILOR SOLUIILOR OPTIC
ACTIVE CU POLARIMETRUL

Noiuni teoretice
Conform legilor electro-magnetismului o perturbaie electromagnetic
aprut ntr-o regiune a spaiului devine izvorul altor perturbaii de aceeai natur
n poriunile nvecinate n spaiu - apare astfel o und electromagnetic care se va
propaga cu viteza luminii.
Legile generale ale micrii ondulatorii se refer n aceeai msur att la
undele longitudinale ct i la cele transversale. Vibraiile longitudinale sunt
simetrice fa de direcia de propagare, adic aciunea lor asupra unui aparat
receptor oarecare nu se schimb dac acest aparat este rotit n jurul direciei de
propagare. n cadrul undelor transversale condiiile de aciune ale undei asupra
aparatului pot fi diferite, dup cum vibraiile transversale sunt surprinse ntr-un
plan sau ntr-altul, care trece prin direcia de propagare.
Din teoria electromagnetic a luminii rezult ca undele luminoase sunt
transversale. ntr-adevr, toate legile electromagnetismului duc la concluzia c
variaia n timp a intensitii cmpului electric

E este nsoit de apariia unui cmp

magnetic-alternativ

H, orientate perpendicular unul n raport cu cellalt.

Un asemenea cmp electromagnetic alternativ nu rmne fix n spaiu, ci se
propag cu viteza luminii de-a lungul unei linii perpendiculare pe vectorii

E i

H ,
genernd unde electromagnetice, unde de lumin. n felul acesta cei trei vectori

H ,

E i viteza de propagare

v , sunt perpendiculari ntre ei, cu alte cuvinte direciile

vectorilor

E i

H sunt perpediculare pe direcia de propagare, adic unda

electromagnetic este transversal. n fiecare caz dat exist o anumit orientare i
prin urmare raza luminoas nu reprezint axa de simetrie a undelor
electromagnetice. O asemenea simetrie este caracteristic undelor transversale.
48
Vom nelege prin lumina natural acea lumin n care vom ntlni toate orientrile
posibile ale vectorului

E ( i prin urmare i ale lui

H ).
Lumina n care

E, la fel i

H i pstreaz o singur direcie, o vom numi

lumina polarizat. Planul care trece prin direcia de propagare i care cuprinde
vectorul electric, se numete plan de vibraie al luminii polarizate, iar planul n care
se gsete vectorul magnetic i direcia de propagare se numete plan de
polarizaie.

Fig. 8.1. Planurile de vibraie i de polarizaie in cazul luminii polarizate.
Fenomenul de polarizare al luminii, adic selecionarea undelor de lumin
cu o anumit orientare a vectorului electric E, are loc prin reflexia sau refracia
luminii la suprafaa de separare a doi dielectrici izotropi sau prin dubla refracie
cnd lumina trece printr-un cristal anizotrop. Un sistem este izotrop dac toate
proprietile sale sunt identice dup oricare din direciile spaiului, iar un sistem va
fi anizotrop dac proprietile lui depind de direcia dup care are loc fenomenul.
Noi vom studia dubla refracie (sau birefringena) ce are loc la trecerea
luminii printr-un cristal de spat de Islanda (CaCO
3
) care cristalizeaz n sistemul
romboedric. Dac pe un asemenea cristal cade un fascicul de lumin, dup refracie
el va da natere la dou fascicule, avnd direcii diferite.
Chiar dac unghiul de inciden este nul, fascicolul refractat este dublu.
Raza care se propag n continuarea fascicolului incident se numete raza ordinar
iar cea de a doua, raza extraordinar. Dac studiem cele doua raze emergente
constatm c ambele sunt polarizate, i anume n planuri perpendiculare ntre ele.

49





8.1. Metode optice care utilizeaz lumina polarizat
Radiaia plan i circular polarizat
Radiaia electromagnetic reprezint o und ai crei vectori electric (E) i
magnetic (H) oscileaz perpendicular pe direcia de propagare i sunt orientai
reciproc perpendicular. Frecvena oscilaiei, v, reprezint numrul de oscilaii pe
secund. Lumina nepolarizat sau natural conine cuante ai cror vectori au
orientrile distribuite aleator, neexistnd un mod privilegiat de oscilaie. Lumina
plan-polarizat este cea n care vectorul electric, respectiv magnetic, oscileaz
fiecare doar ntr-un singur plan.
Lumina circular polarizat are caracteristic faptul c vectorul electric,
respectiv magnetic, rmn constani n modul dar descriu fiecare o traiectorie
elicoidal (Fig.5), cu v rotaii pe secund. Dup sensul n care vrful vectorului
parcurge elicea (atunci cnd privim spre surs), lumina poate fi circular polarizat
spre stnga (sens trigonometric sau antiorar) ori spre dreapta (sens
antitrigonometric sau orar).
Lumina plan-polarizat poate fi considerat ca fiind rezultatul compunerii
vectoriale a dou unde coerente, cu aceeai amplitudine, circular-polarizate una
spre stnga i una spre dreapta.


H
v
E
v
E
Fig.8.2. Oscilaiile vectorului electric n cazul
luminii plan-polarizate (sus) i circular
polarizate (jos)

Fig.8.3Polarizarea luminii prin spat de Islanda: cele
dou prisme sunt lipite cu balsam de Canada,
ansamblul constituind un NICOL; RO-Raza ordinar;
RE-Raza extraordinar polarizat n planul figurii.
50

Importana studiilor n lumin polarizat
Singura interaciune fizic care depinde explicit de asimetria structurii
moleculelor este interaciunea cu radiaia polarizat. Asimetria structurii trebuie
neleas n sens general, aici intrnd: asimetria distribuiei de sarcin (dipolii
electrici permaneni); asimetria n dislocrile sarcinilor sub influena cmpului
electric exterior (polarizabilitate asimetric); asimetria n micarea electronilor pe
orbitalii de valen (atomi asimetrici); etc.
n plus, fa de studiile n lumin nepolarizat, interaciunea luminii
polarizate cu moleculele ofer informaii de natur geometric (orientare,
distribuie, ordonare, suscesiune) asupra unor legturi sau zone din molecule.

8.2. Absorbia luminii polarizate
Ca n orice metod de spectroscopie de absorbie, lungimile de und alese
se afl n domeniile benzilor de absorbie ale legturilor.
n cazul luminii polarizate, interaciunea vectorului electric va depinde de
orientarea dipolilor absorbani i de geometria orbitalilor pe care sunt distribuii
electronii n jurul atomilor. Absorbia luminii polarizate are particulariti
exploatate de tehnicile de dicroism linear - n cazul utilizrii luminii plan
polarizate i dicroism circular - n cazul celui circular polarizate.
8.2.1. Dicroismul linear (DL) reprezint fenomenul prin care o prob
strbtut de o radiaie policromatic linear polarizat i schimb culoarea odat
cu rotirea planului de polarizare. El se datorete absorbiei unor radiaii cu lungimi
de und diferite, dac planul luminii polarizate i schimb orientarea fa
moleculele aezate ordonat.
Pentru punerea n eviden a DL este nevoie ca moleculele din prob s fie
aranjate n acelai fel. Aranjamentul ordonat este aproape perfect n cristale, dar
obinerea acestora, n cazul macromoleculelor, nu este o sarcin uoar. n
dielectrici, o orientare bun poate fi obinut cu ajutorul cmpului electric, dac
moleculele au momente dipolare. Rezult o aranjare mulumitoare a
51
macromoleculelor fibrilare sau alungite n
lichide n curgere sau prin perierea ntr-o
singur direcie a unei soluii vscoase,
pn se usuc.
Existena dicroismului linear, i
mrimea lui, dac moleculele sunt
orientate preponderent cu dimensiunea
mare n lungul unei axe, notate cu z, se
exprim prin valoarea raportului dicroic,
d.
d
E E
E E
II
II
=

+

unde E
||
este extincia probei cnd planul luminii polarizate este paralel cu axa z,
iar E

este extincia gsit cnd planul luminii poalarizate este perpendicular pe axa
z.
Valorile diferite de zero ale raportului dicroic semnaleaz existena unor
asimetrii moleculare, iar graficului d() poate furniza date asupra naturii acestor
asimetrii (gruprile, legturile sau conformaiile ce o produc).
DL este utilizat curent n scopul stabilirii orientrilor diferitelor legturi
din structura moleculelor. n acest fel s-au putut descifra orientrile legturilor de
hidrogen n structurile o - helix (paralel cu axul lanului polipeptidic) i | - foaie
plisat (perpendicular pe lan).
DL poate fi observat i n UV, pentru lumina polarizat avnd din benzile
de absorbie ale dublelor legturi conjugate ale aminoacizilor aromatici sau ale
bazelor azotate. Astfel, poate fi determinat orientarea planurilor bazelor azotate
fa de axele elicilor duble ale acizilor nucleici.
8.2.2. Dicroismul circular (DC) este fenomenul prin care radiaiile
monocromatice, circular polarizate n sensuri opuse, sunt absorbite diferit de ctre
moleculele substanei.

polimer
nalt
dimer
AMP (monomer)
(nm) 280 260 240
15
10
5
Ac
15
10
5
0
Fig. 8.4. Dicroismul circular la AMP.

52
DC, la o lungime de und dat, se evalueaz, cel mai simplu, prin diferena
dintre extinciile unei probe msurate pentru lumina circular polarizat spre stnga
(E
L
) i spre dreapta (E
R)
:
AE() = E
L
E
R

Exprimarea se poate face i pe baze molare, n funcie de coeficienii molari
de extincie:
Ac() = c
L
c
R
(M
1
cm
1
)

Fenomenul de absorbie n UV - VIS se datorete excitrii electronilor. n cazul
structurilor asimetrice, ei oscileaz pe traiectorii elicoidale. Absorbia n
vecintatea lungimii de und de rezonan (
o
) va fi alta dac sensul elicii
traiectoriei este acelai cu cel al elicii radiaiei considerat n sensul de propagare
1
,
sau n sens contrar. De aceea DC se manifest intens n domeniile benzilor
tranziiilor electronice. n funcie de lungimile de und la care |Ac| are valori
maxime se poate studia energetica legturilor, iar graficul lui Ac() d informaii
asupra asimetriei distribuiei structurilor ce le conin.
Fiecare band de DC este sensibil att la strucura macromoleculelor, ct i
la toi factorii care interacioneaz cu tranziiile electronilor din legturi. (Fig. 6)
8.3. Rotirea planului luminii polarizate este rezultatul activitii optice
a unor substane care au molecule asimetrice.
Activitatea optic se studiaz, de obicei, n domenii spectrale ndeprtate
de benzile de absorie ale substanelor. Deci ea nu se datorete absorbiei luminii
ci se explic prin vitezele de propagare diferit a radiaiilor circular polarizate n
sensuri opuse.
Asimetria molecular cea mai rspndit este cea datorit atomilor de
carbon asimetrici. n cazul macromoleculelor, asimetria se poate datora i
structurilor secundare (elici rotite spre dreapta sau stnga) sau teriare, cnd radicali
simetrici se plaseaz n medii asimetrice - cu cmpuri locale intense.

1
Trebuie notat c sensul rotirii elicii luminii circular polarizate, luat n sensul de propagare, este invers celui
considerat uzual, adic atunci cnd privim spre surs.
53
Rotirea planului luminii polarizate apare ca urmare a faptului c, n zonele
asimetrice, electronii execut micri pe traiectorii elicodale ce pot fi rsucite - fie
spre stnga, fie spre dreapta. Considernd c lumina plan-polarizat este compus
din dou componente circular polarizate n sensuri opuse, propagarea uneia va fi
favorizat fa de cealalt. Vitezele celor dou componente ntr-un astfel de mediu
vor fi inegale i, la ieire, cei doi vectori electrici vor avea ntrzieri diferite. n
final, rezultanta compunerii lor va fi rotit fa de poziia ce o avea la intrarea n
mediu.
Activitatea optic a polimerilor difer de cea a monomerilor din care provin
i este posibil ca un polimer, datorit structurii sale, s aib activitate optic fr a
conine momomeri optic activi.
8.3.1. Dispersia optic rotatorie (DOR) este fenomenul de dependen a
unghiului de rotaie specific [o](), de lungimea de und, , a radiaiei plan-
polarizate. Cu alte cuvinte, dac un fascicol de lumin policromatic, polarizat,
strbate o prob, componentele monocromatice ale fascicolului le vom gsi rotite
fiecare cu un alt unghi (dispersate rotator).
Efectele rotatorii se manifest pn departe de lungimile de und
o
ale
benzilor de absorbie. Deci acolo unde absorbia luminii i DC sunt absente.
Graficele DOR, ca i cele DC, depind de asimetria local a zonelor n care
se afl electronii ce pot executa tranziii. Scopul trasrii lor este de a identifica i
explora astfel de zone, interaciunile dintre ele, sau susceptibilitatea lor la factorii
de mediu.







54
Principiul lucrrii:
Cu ajutorul luminii polarizate se pot determina rapid i destul de exact, n
laboratorul clinic, concentraiile unor soluii ale cror substane au proprietatea de a
roti planul de polarizare al luminii. Substanele care au aceast proprietate se
numesc optic-active i se mpart, n fucie
de sensul n care rotesc planul luminii
polarizate, n: levogire, cele care rotesc
planul luminii polarizate nspre stnga, se
noteaz cu semnul minus;dextrogire,
cele care-l rotesc nspe dreapta, se
noteaz cu semnul plus.
Proprietatea aceasta de a roti
planul luminii polarizate se datorete
structurii asimetrice a substanelor
organice de obicei, coninnd unul sau
mai muli atomi de carbon aezai
asimetric (un atom de carbon cu cele
patru valente satisfcute de patru radicali
diferii).
n cazul soluiilor preparate cu ajutorul unei substane optic active, unghiul
o cu care va fi rotit planul luminii polarizate va depinde de urmtorii factori: de
concentraia soluiei,C deci de densitatea d a soluiei, de grosimea stratului de
lichid strbtut de lumina polarizat x(dm), de lungimea de und a luminii utilizate,
precum i de temperatura soluiei. Lumina polarizat se obine cu ajutorul unui
cristal anizotrop care prezint fenomenul de birefrigen.
Totodat, unghiul o cu care este rotit planul de polarizare mai depinde i de
natura substanei componente a soluiei, caracterizat cu ajutorul mrimii [o ] care
se mai numete unghi de rotaie specific.

ghem haotic
ohelix
|foaie plisata
(nm) 240 220 200

|o|
+
0
Fig.8.4.1. Dispersia optica rotatorie la poli-L-
lizina.

55
Deoarece rotaia specific variaz cu temperatura i cu lungimea de und a
luminii, s-a convenit ca s se standardizeze pentru lumina galben a sodiului i
pentru temperatura +20

C, aceast valoare standard notndu-se cu [o ]

20
Na
. Deci o
soluie va roti planul de polarizare al luminii cu unghiul o i care are valoarea:
o =
100
20
] [ c x d
Na
o

formula care permite aflarea concentraiei soluiei studiate.

Aparatur
Aparatul cu ajutorul cruia se determin unghiul cu care este rotit planul
luminii polarizate se numete polarimetru i este compus, n principiu, din
urmtoarele pri: o surs de lumin S, un nicol polarizator NP, un tub T n care se
pune soluia de analizat, un nicol analizator NA mobil, care se poate roti la dreapta
sau la stnga (corespunztor substanelor dextrogire sau levogire) i care este cuplat
la un dispozitiv mecanic de citire a unghiului o prevzut cu un vernier circular sau
ocular D, n care observatorului i apare cmpul ocular CO ce are o zon vertical
central ZC. Nicolii sunt astfel construii nct raza ordinar RO care apare n urma
fenomenului de birefrigen s se reflecte total pe suprafaa ce separ prismele
nicolului.

Fig.8.6 Schema polarimetrului.

56

Fig. 8.7. Polarimetrul Polaris pri componente:
1. Ocular
2. Lupa pentru citirea valorii unghiului de rotaie
3. urub de control
4. urub pentru focalizare.
5. Scala i vernierul pentru citirea unghiului de rotaie
6. Compartiment n care se introduce tubul cu proba
7. Filtru de sticl
8. Lampa de sodium
9. Comutator de pornire oprire.






57
Mod de lucru:
n lucrarea de fa vom studia concentraia n glucoz a unor soluii dup
formula urmtoare:
C=
c x d
Na

20
] [
100
o
o
n %
Pentru msurarea unghiului se procedez astfel:
Se umple tubul T cu ap distilat astfel nct s nu conin bule de aer i se
terg ferestrele de sticl de la capetele tubului pentru ca imaginea s se vad n
bune condiii.
Se introduce apoi tubul n polarimetru i se rotete nicolul analizor cu
ajutorul urubului micrometric pn ce zona central ZC apare egal ntunecat cu
cele dou cmpuri laterale. Deci se lucreaz n condiiile extinciei maxime ce se
obine atunci cnd cei doi nicoli ai polarimetrului sunt aezai n cruce.
Se citete unghiul iniial, notat cu | , cu o precizie de 0,05

utiliznd
vernierul cu care este prevzut aparatul.
Se nlocuiete apa din tub cu soluia de analizat, se realizeaz prin rotirea
urubului micrometric o iluminare uniform a cmpului CO. Se citete noul unghi
indicat de aparat, notat cu

.
Observaie. Operaiile de egalizare a cmpului i de citire a unghiului se realizeaz
att pentru soluie ct i pentru ap de cel puin 5ori, n calcule lundu-se media
valorilor unghiurilor, notate
|

.



58

Fig.8.8.a) Mersul razelor de lumina prin polarimetru cnd nicolii sunt aezai n cruce.
b) Aspectul cmpului luminos observat prin polarimetru n fucie de poziia nicolului analizator n
raport cu cel polarizator.

a.
b. Nicoli paraleli Nicoli n cruce
x + =

1 o
x = 0,30

o = 1,30

Fig. 8.9. Citirea unghiului cu
ajutorul vernierului circular.
59

Calcule i prezentarea rezultatelor
Cunoscnd valorile pentru unghiurile medii
|
i

, se calculeaz unghiul cu
care rotete soluia planul luminii polarizate astfel:
| o =

Apoi, se calculeaz concentraia procentual a soluiei, care n cazul de fa este
glucoza pentu care [
o
]
20
Na
= 52.8

.
La efectuarea calculelor se va ine cont c n formula de mai sus, densitatea d este
msurat n g/cm
3
iar lungimea stratului de soluie (a tubului ce o conine) , x, este
exprimat n decimetri (dm).
Rezultatele obinute se trec n tabelul urmtor:

Soluia
[
o
]
20
Na

x
(dm)
d
(g/cm
3
)
|
|

o
C
(g%)
Glucoza 52.8 1










60
9. MICROSCOPIA OPTIC

9.1. Studiul microscopului optic.
Microscopul optic este utilizat att n domeniul cercetrilor medicale ct i n
analize uzuale de laborator. Acest instrument optic poate da imagini clare ale unor
formaiuni celulare cu dimensiuni pn la aproximativ 0,15 m. Determinarea
acestor dimensiuni are o importan deosebit n explorrile clinice i de laborator.
Cu ajutorul microscopului optic se pot face analize ale lichidului cefalorahidian
(LCR), a urinii, a sngelui etc.
Exemplu: Departajnd eritrocitele n funcie de diametrul lor mediu, se obine curba
Prince-Jones pentru snge nomal, iar comparativ cu acesta se pot depista diferite
afeciuni.
Instrumentele optice dau imagini clare, n care se pot distinge amnunte ce
nu pot fi observate cu ochiul liber.
Din punct de vedere tehnic un instrument optic este un asamblu de lentile,
oglinzi i diafragme, axele optice ale prismelor trebuind s coincid cu axul
geometric al instrumentului. n funcie de natura imaginii, instrumentele optice se
mpart n:
-instrumente optice cu imagini reale cum sunt ochiul, aparatul fotografic,
aparatul de protecie;
-instrumente optice care dau imagini virtuale i sunt folosite pentru
examinarea direct a obiectivelor; astfel de instrumente sunt: luneta, microscopul
optic, lupa.
Microscopul optic este destinat observrii unor probe (frotiuri) a cror
dimensiuni pot atinge 0,15m. Acest instrument are trei pri principale: mecanic,
optic i dispozitiv de iluminare.




61
9.2. Componentele unui microscop cu lumin transmis
Principiul care st la baza construciei oricrui microscop l constituie
proprietatea lentilelor optice de a produce refracia razelor luminoase care le
traverseaz, formnd astfel o imagine real sau virtual. La microscopul optic,
obiectivul formeaz o imagine mrit, real i inversat specimenului. Ocularul
preia aceast imagine i o transform ntr-o imagine mrit, virtual i dreapt n
raport cu prima. Astfel, imaginea final dat de microscop este virtual, rsturnat
i mrit.
9.3.Componentele mecanice ale microscopului
Microscoapele optice moderne sunt alctuite dintr-o parte mecanic ce
cuprinde: piciorul microscopului, msua sau platina cu sistemele ei de deplasare a
preparatului i tubul microscopului, care poate fi deplasat n plan vertical cu
ajutorul unor angrenaje.
Piciorul sau talpa microscopului, este o component care confer
stabilitate aparatului. La microscoapele moderne talpa microscopului se afl
ncorporat n sursa de lumin.
Coloana sau mnerul- microscopul se articuleaz fix sau mobil cu piciorul.
Msua sau platina, perpendicular pe coloan, servete ca suport pentru
preparat. Acesta din urm se imobilizeaz pe platin prin dou lame metalice
numite valei sau cavaleri. Platina este prevzut cu un dispozitiv special numit car
mobil care, acionat de dou uruburi coaxiale, permite deplasarea fin a
preparatului.
Tubul microscopului are la partea superioar ocularele, iar la partea
inferioar, revolverul cu obiectivele. La microscoapele moderne, n tubul optic se
afl interpus lupa binocular, care conine un sistem de prisme pentru distribuirea
imaginii la cele dou oculare.
Revolverul, format din dou discuri metalice suprapuse, cel inferior mobil,
aduce prin rotirea obiectivului dorit n axul optic.
62
Dispozitivul de punere la punct a imaginii este alctuit din viza macrometric
care se folosete pentru prinderea grosier a imaginii; iar viza micrometric prin
micri fine, permite clasificarea imaginii.

- Vizorul
- Obiective
- Buton reglare
fina imagine
- Buton pornit/
oprit
- Suportul
- Diafragma
- Baza de
susinere
- Corpul
vizorului
- Obiective
finale
- Suport
prindere cu
lamele
- Dispozitiv
fixare
imagine
- Buton reglare
imagine
- Orificiu ( deschidere )
- Bra
- Sursa de lumina
Fig.9.3. Microscopul optic
9.4.Componentele optice ale microscopului
Aceste componente cuprind piese de calitatea crora depind performanele
ce pot fi obinute n examinarea unui preparat. Aceast component este alctuit
din oculare, obiective i sistemul de iluminare.
Obiectivelesunt constituite dintr-un sistem de lentile care sunt destinate s
funcioneze n imediata vecintate a preparatului. Singura lentil care formeaz
imaginea se afl la partea inferioar a obiectivului i se numete lentila frontal.
63
Distana dintre ea i suprafaa preparatului reprezint distana frontal i este cu att
mai mic cu ct obiectivul folosit are o putere mai mare de mrire. Celelalte lentile
din obiectiv au rolul de a corecta aberaiile optice produse de lentila frontal. n
general, obiectivele care se folosesc cel mai frecvent la microscoape au puterea de
mrire de: 6x, 10x, 20x, 40x, 60x, 90x, 100x, aceasta fiind gravat pe suprafaa
cilindrului. Obiectivele au putere de mrire mai mic (pn la 40x) se numesc
obiective uscate pentru ca mediul interpus ntre lentila frontal i preparat este
aerul. Obiectivele cu putere mare de mrire (60x, 90x, 100x), cu care se lucreaz
foarte aproape de preparat, se numesc obiective cu imersie deoarece spaiul
dintre lentila frontal i preparat este ocupat de un lichid (ulei de cedru, glicerin,
uleiul de parafin) n care este imersat vrful apropiat cu al sticlei port preparat i,
prin folosirea lor, se elimin n mare masur refracia n afara suprafeei lentilei
frontale a razelor de lumin care ilumineaz preparatul. Ca urmare imaginea
observat va ctiga n luminozitate i claritate.












Fig.9.4. Obiective
i oculare.


64
Ocularele se afl dispuse la partea superioar a lupei binocular, fiind formate
fiecare, din dou lentile plan convexe ce formeaz o imagine mrit, dreapta i
virtual. Pentru observare se folosesc de obicei oculare cu putere mic de mrire
(7x,10x), deoarece rolul lor este de a distinge detaliile fine date de obiectiv i mai
puin de a mri aceast imagine.
Gradul de mrire a imaginii finale date de microscop poate fi modificat
prin schimbarea obiectivelor i ocularelor i se calculeaz fcnd produsul dintre
puterea de mrire a ocularului i a obiectivului.
Formula pentru grosisment i putere de separare
Exemplu: ocular 10x; obiectiv 20x; marire: 20 X 10=200.
Aceast valoare d puterea de mrire total sau grosismentul
microscopului.
Sistemul de iluminare, la microscoapele moderne, se afl ncorporat n talp
i este reprezentat de un bec de 6V sau 12V. Tot aici se afl i un sistem special
pentru controlul fluxului n axul fluxului de lumin. Lumina este orientat n axul
optic al microscopului de ctre o oglind plan dispus oblic n dreptul unui
orificiu care se afl sub platin. nclinaia oglinzii poate fi reglat cu dou uruburi.
Sub platin, prins de coloana microscopului se afl condensorul, care are rolul de a
concentra razele de lumin ntr-un focar ce coincide cu planul preparatului.
Unghiul luminii care intr n condensor se regleaz cu ajutorul diafragmei iris,
dispus n montura condensorului, sub lentile. Condensorul poate fi ridicat sau
cobort, cu ajutorul unei vize dispus sub platin.

9.5.Cum se prinde imaginea la un microscop optic obinuit ?
Prinderea imaginii i observarea sa la un microscop optic obinuit se face
relativ simplu i nu necesit cunotine speciale de mecanic fin sau de alt natur.
Pentru evitarea unor eecuri, inerente la un nceptor, precum i a obine o imagine
corect i apropiat calitativ de performanele maxime ale aparatului, toate
manevrele trebuie s fie executate ntr-o anumit ordine:
65
1. Se aeaz lama cu preparatul de cercetat pe platin i se prinde cu valeii.
Este foarte important ca lama s fie aezat n aa fel nct preparatul s fie orientat
n sus. n caz contrar nu se va putea prinde imaginea cu obiective mai mari de 40x.
2. Privind lateral se aduce preparatul n axul optic prin manevra carului mobil.
Axul optic coincide cu punctul de lumin dat de condensatorul ridicat n prealabil
n poziia maxim. Dup efectuarea acestei operaii, condensatorul se coboar la o
poziie intermediar.
3.Se aduce obiectivul 10x n axul optic al microscopului prin rotirea
revolverului. Cnd obiectivul ajunge n ax, rotirea revolverului ntmpin o uoar
rezisten. Este bine ca ntotdeauna observarea unui preparat s nceap prin
folosirea obiectivului 10x, deoarece acesta d o imagine de ansamblu a
preparatului, permind totodat selectarea unei zone din preparat care urmeaz a fi
observat apoi de mriri mai mari.
4. Dei imaginea nu a fost nc prins, se poate stabili n aceast etap,
distana pupilar prin manevrarea lupei binocular.
5. Privind lateral, se coboar obiectivul pn n poziia inferioar.
Aceasta se afl la civa mm de suprafaa preparatului. Privind apoi n microscop,
se ridic obiectivul cu viza macrometric pn se prinde imaginea. Apoi, claritatea
imaginii se regleaz prin manevra vizei micrometrice, iar gradul de luminozitate al
cmpului se regleaz prin ridicarea sau coborrea condensorului.
6. Pentru observarea unor detalii ale preparatului, se introduce n axul optic un
obiectiv cu puterea de mrire mai mare. Pentru fiecare obiectiv imaginea se prinde
prin ridicarea acestuia fa de preparat pentru a evita lovirea accidental a lentilei
frontale de lama port preparat.
n cazul folosirii unui obiectiv cu imersie, se pune pe lamela care acoper
preparatul o pictur de ulei de imersie i se coboar apoi obiectivul pn ce vrful
su atinge pictura. Aceast operaie se face privind lateral. Imaginea se prinde
apoi, privind cu atenie n microscop, prin coborrea foarte fin a obiectivului cu
viza macrometric. Odat obinut imaginea, claritatea se menine prin manevra
66
continu a vizei micrometrice. Pentru a avea o iluminare corespunztoare,
condensorul va fi ridicat la maximum.
7. Dup ncheierea observrii, microscopul se las n repaus cu obiectivul
10x n axul optic i se acoper pentru a fi ferit de praf. Se verific dac s-a efectuat
deconectarea de la reeaua de curent electric.
n cazul ntrebuinrii obiectivului cu imersie, acesta se terge cu uleiul de
imersie prin trecerea degetului deasupra lentilei frontale. Periodic acest obiectiv se
cur cu o batist de finet umezit ntr-o soluie de alcool etilic-aceton (1:1). Se
va evita folosirea n acest scop a hidrocarburilor (xilen, benzen, toluen) pentru ca
aceasta va dizolva rina special n care este montat lentila frontal a
obiectivului.

Modul de lucru:
9.5. a) Etalonarea riglei gradate a ocularului. Microscopul este dotat cu o
reea ajuttoare micrometric gradat astfel nct pe poriunea vizibil cu ochiul
liber gradaiile reprezint 0,1 respectiv 0,5 mm. Pe poriunea central rigla este
divizat n zecimi de mm. Etalonarea riglei ocularului se face n felul urmtor: se
vizualizeaz concomitent att reeaua micrometric de pe lam ct i rigla
micrometric a ocularului astfel nct s se poat numra cte diviziuni de pe reea
corespund unei singure diviziuni de pe rigl. Apoi cu o regul de trei simpl se
poate calcula care este fraciunea dintr-un mm care corespunde unei diviziuni de pe
rigla ocularului.
9.5. b) Determinarea dimensiunii unor preparate. Odat ce a fost fcut
etalonarea riglei, reeaua micrometric ajuttoare poate fi nlturat. n locul ei se
fixeaz pe msua microscopului diverse preparate. Prima dat se ncearc
vizualizarea unui fir de pr, fixat cu o lamel pe o lam curat. Odat pus la punct
imaginea, rigla ocularului se suprapune peste grosimea firului de pr numrndu-
se cte diviziuni corespund acestei dimensiuni. Apoi, acest numr de diviziuni se
nmulete cu valoarea aflat anterior prin regula de trei simpl, obinndu-se
67
dimensiunea n mm a grosimii firului de pr. Apoi se vizualizeaz alte preparate
puse la dispoziie, fixate pe lame: ou de parazit, preparate histologice.

Element ul
St udiat
Diviziuni
coresp.element .
reelei
Valoarea unei
diviziuni
microm.
mm.
Diviziuni
coresp.dimensi.
preparat ului.

Dimensiunea
preparat ului.

mm
Dimensiunea
prepart ului medie

mm
Ou de parazit 6,5 0,0307 3,5
3
4,5
0,1075
0,0921
0,1381
0,1128

Grosismentul- reprezint raportul dintre tangenta unghiului sub care se
vede imaginea prin instrument i tangenta unghiului sub care se vede obiectul
atunci cnd este privit cu ochiul liber sau altfel spus, raportul dintre diametrul
aparent al imaginii i cel al obiectului aezat la distana optim de vedere clar -
care pentru un ochi normal are valoarea 25 cm.


4
.
1
2
P
P
tg
tg
G = = = o
o
o
sau G= G
ob
G
oc
Puterea separatoare sau de rezoluie : este capacitatea microscopului de a
forma imagini distincte a dou puncte vecine ale obiectului. Aceast mrime,
depinde de aberaiile sferice i de fenomenul de difracie a luminii care traverseaz
instrumentul. Putem mri valoarea l/ prin mrirea lui n, folosind observarea prin
imersie, n care ntre Ob (de 90X) i prob se pune o pictur de ulei de cedru.

u nsin 2
22 , 1
c =
unde:
l/ =putere separatoare
= lungime de und a radiaiei folosite
n = indicele de refracie al mediului dintre Ob i Oc.
u = unghiul de apertur, format de razele extreme.
68
n
.
sin u = apertur numeric, este nscris pe obiectiv alturi de mrirea sa.
Modul de lucru:
Determinarea grosismentului i a coeficientului micrometric.
Micrometrul obiectiv este o lam de sticl pe care sunt gravate 100 de diviziuni
pe o distan de 1 mm, intervalul ntre dou diviziuni succesive este de 0,01mm.
Micrometrul ocular - are forma unui disc cu diametrul egal cu cel al tubului n care
se introduce. Este confecionat din sticl pe care sunt gravate 100 diviziuni pe o
lungime de 1 cm, intervalul dintre dou diviziuni succesive este egal cu 0,1 mm.
Pentru determinarea grosismetrului microscopic se procedeaz astfel:
- se fixeaz lama micrometrului obiectiv pe msua de lucru ;
- se introduce tekerul micoscopului n bornele transformatorului, iar tekerul
transformatorului n priza de 220V;
- se regleaz iluminarea cu ajutorul diafragmei;
- se introduce din mijlocul micrometrului ocular n dreptul obiectivului cu
ajutorul uruburilor cu care este prevzut msua microscopului;
- alegem i fixm obiectivul cel mai mic (10X);
- se apropie obiectivul de micrometru pn la distan minim fr a privi n
ocular;
- ridicnd lent obiectivul se caut imaginea diviziunilor micrometrului;
- microscopul se pune la punct astfel nct n cmp s avem imaginea
ambelor micrometre;
- se rotete ocularul pn cnd cele dou scri sunt paralele i parial
suprapuse;
- se mrete contrastul prin ridicarea sau coborre condensatorului (crescnd
contrastul va scdea puterea separatoare l/);
- se aduce scala gradat a micrometrului obiectiv astfel nct captul su s
coincid cu cel al micrometrului ocular;
- se compar imaginea micrometrului obiectiv (mrit de
ob
G ori) cu
micrometrul ocular astfel nct n diviziuni ale micrometrului obiectiv s
corespund la m diviziuni ale micrometrului ocular.



69
nlocuind valorile lui m i n n relaia:

n
m
G
ob
.
10
100
=
Se calculeaz G microscop cu relaia :
G =
oc ob
G G .
Se efectueaz trei determinri pentru fiecare obiectiv (10X, 20X , 40X)
rezultatele trecndu-se n tabel:
Tabelul 1
Ob. Nr.deter. n m
ob
G
oc
G
Goc
o
G
o
G
10X
20X
40X


Pentru determinarea coeficientului micrometric se efectueaz urmtoarele :
-se suprapune scala micrometrului ocular cea a obiectivului i se citesc;
=
ob
n numrul de diviziuni ale micrometrului obiectiv care se suprapun exact
peste un numr ntreg de diviziuni ale micrometrului ocular.
=
oc
n numrul de diviziuni ale micrometrului obiectiv.
-se calculeaz coeficientul micrometric cu formula:

) ( 10 . m
n
n
C
oc
ob
M
=
-se mai fac multe combinaii de oculare i obiective, iar rezultatele se trec n tabelul
2:





70

Tabelul 2
Obiectiv Ocular 5X Ocular 7X Ocular 10X
10X
20X
40X



9.6. Ochiul - un sistem optic complex.
Ochiul este pentru organismul uman un analizator cu ajutorul cruia
analizm mediul nconjurtor. Analizatorul vizual este alctuit din trei segmente :
segmentul periferic, reprezentat de ochiul propriu-zis i anexele sale, segmentul
intermediar, reprezentat de fibrele nervoase care conduc excitaiile vizuale la creier
i segmentul cortical, situat n regiunea occipital a scoarei creierului.
Globul ocular (ochiul) are forma unei sfere, care n partea din fa are aplicat o
alt poriune sferic cu raz mai mic, reprezentat de corneea transparent. n faa
cristalinului se afl irisul care are forma unei diafragme prevzut cu o deschidere
numit pupil cu dimensiunea variabil ntre 3 i 7mm. n calota posterioar este
situat retina, o membran nervoas, alctuit din celule nervoase, celule de
susinere i celule pigmentare.

71

Celulele nervoase sunt de 6 tipuri :
1. Fotoreceptoare cu conuri
2. Fotoreceptoare cu bastonae
3. Bipolare
4. Multipolare
5. Orizontale neuroni de asociaie cu dendrite i axon
6. Amacrine neuroni de asociaie fr dendrite cu un axon lung i foarte
ramificat .
Ca urmare a suprapunerii acestor tipuri de celule i a sinapselor dintre ele, se pot
diferenia 10 straturi ale retinei . Primul strat este cel al celulelor pigmentare
alctuite din celule care conin pigment melanic. Cel de-al doilea este stratul
celulelor fotoreceptoare alctuit din celule nervoase specializate, care nu se divid,
numite dup forma lor, bastonae i conuri. Conurile i bastonaele conin pigmeni
vizuali diferii. Conurile, n numr de 5-7 milioane, reprezint receptorii vederii
diurne, colorate (percep detalii i culori). Se gsesc n special la nivelul petei
galbene (macula lutea) la distana de 25 m. Exist 3 tipuri de conuri, unul pentru
perceperea luminii roii, altul pentru perceperea luminii verzi i al treilea pentru
lumina albastr. Ele conin rodopsin care se descompune n prezena luminii i se
resintetizeaz n prezena vitaminei A.
72


Membrana limitant extern, cel de-al treilea strat, este o reea de prelungiri ale
celulelor gliale, ce nconjoar baza celulelor fotoreceptoare. Stratul granular extern
cuprinde corpii neuronali i prelungirile celulelor fotoreceptoare. Stratul plexiform
extern reprezint zona sinaptic dintre celulele fotoreceptoare i neuronii bipolari.
Stratul granular intern este alctuit din corpii neuronilor bipolari. Stratul plexiform
intern este zona sinaptic dintre neuronii bipolari i neuronii multipolari. Stratul
neuronilor multipolari cuprinde corpul neuronilor multipolari. Stratul fibrelor
optice este format din axonii neuronilor multipolari. Ultimul strat al retinei,
membrana limitant intern delimiteaz retina spre faa sa extern. Fiecare celul
cu con face sinaps cu un singur neuron bipolar i acesta cu un singur neuron
multipolar. Mai multe celule cu bastona fac sinaps cu un singur neuron bipolar,
73
iar mai muli neuroni bipolari fac sinapsa cu un singur neuron multipolar.



Fig.9.6.1.Arhitectura straturilor de celule fotoreceptoare.

74
Segmentul intermediar sau segmentul de conducere (calea optic) este format din 3
neuroni. Primii 2 neuroni, senzitivi, sunt reprezentai de protoneuron (bipolar),
respectiv deutoneuronul (multipolar) din retin. Axonii deutoneuronului formeaz
nervul optic i tractul optic.
Globul ocular este alctuit dintr-o serie de medii transparente :
a) umoarea apoas (n=1,33), un lichid clar secretat de procesele ciliare fiind
drenat permanent de venele scleroticii (tunica extern- partea posterioar)
b) cristalinul este o lentil biconvex care este acionat de muchiul ciliar care i
modific raza de curbur i odat cu aceasta convergena (n [1,33 ; 1,41])
c) umoarea sticloas (corpul vitros) este o substan gelatinoas situat n spatele
retinei (n=1,33).
Capacitatea cristalinului de a-i modifica raza de curbur pentru ca s poat
fi vzute clar obiectele aflate la distane diferite poart numele de acomodare la
distan. Pentru acomodare este necesar i corectarea axelor oculare prin
contracia musculaturii extrinseci a globului ocular. Un ochi standard (emetrop) are
distanele obiect i imagine diferite cu valorile f
1
=15,7mm i f
2
=24,4mm. Exist
deci o concordan perfect ntre puterea de convergen a mediilor refringente i
lungimea axului antero-posterior, ceea ce permite vederea clar, fr acomodare, a
obiectelor situate la o distan mai mare de 6m.
75

Fig.9.6.2. Formarea imaginii in ochiul emetrop.

Distana minim de vedere clar pentru un ochi standard este de 25cm, iar rezoluia
ochiului (capacitatea de a distinge separat 2 puncte vecine) la aceast distan este
de 75m.Pentru ca un ochi normal s poat vedea imaginea obiectului fr efort de
acomodare aceasta trebuie s se formeze la o distan mai mare de distana minim
de vedere clar de 0,25m- Punct Proximum. Ideal ar fi ca imaginea s se formeze la
distana maxim de 6m- Punct Remotum. n cazul n care puterea de convergen a
sistemului dioptric nu concord cu lungimea axului antero-posterior, ochiul este
ametrop prezentnd diverse defecte optice :
-miopie
-hipermetropie
-prezbiie
-astigmatism

1. Miopia este un viciu de refracie care const n faptul c razele luminoase care
vin paralele de la infinit se ntlnesc ntr-un focar situat naintea retinei. Acest viciu
76
de refracie se corecteaz cu lentile divergente, care ndeprteaz focarul pn
ajunge pe retin.


2. Hipermetropia este un viciu de refracie caracterizat prin aceea c razele
paralele venite de la infinit se reunesc ntr-un focar situat n spatele retinei. Acest
viciu de refracie se corecteaz cu lentile convergente, care apropie focarul pn
ajunge pe retin.


3. Prezbiia este un viciu datorat pierderii elasticitii cristalinului, deci a
posibilitii de acomodare a acestuia, care se instaleaz odat cu naintarea n
77
vrst. Acest viciu se corecteaz cu lentile a cror convergen variaz continuu pe
nlimea lentilei pentru acomodarea ochiului la diferite distane.
4. Astigmatismul este un defect optic ce se caracterizeaz prin faptul c raza de
curbur a cristalinului i mai ales a corneei nu este aceeai n toate meridianele (nu
este omogen).Razele care vin de la infinit nu se ntlnesc ntr-un focar unic,
existnd focare pentru razele care cad pe meridianele orizontale i focare pentru
cele care cad pe meridianele verticale. Defectul se corecteaz prin lentile cilindrice
aezate n aa fel nct s uniformizeze refracia n toate meridianele corneei sau
cristalinului.




Pierderea vederii se numete cecitate i are cauze multiple. Ea se poate datora unei
rupturi a corneei sau unei afeciuni a cristalinului, care devine opac i incapabil s
lase s treac lumina. n alte cazuri cecitatea se datoreaz dezlipirii retinei, ca
urmare a unei lovituri sau faptului c celulele sale nervoase nu mai funcioneaz
corect. Unele cazuri de cecitate se datoreaz unor factori externi. De exemplu, dac
nervii optici sunt lezai, dei se formeaz o imagine corect pe retin, aceasta nu
este transmis la creier. Un traumatism cranian suferit de o persoan poate distruge
aria vizual a creierului, determinnd orbirea persoanei respective, n ciuda faptului
c ochii acestuia funcioneaz perfect.
78

Vederea cromatic
Retina conine 2 tipuri de fotoreceptori (receptori vizuali) : conurile i bastonaele.
Bastonaele sunt mult mai numeroase (130 milioane) i sunt mai sensibile dect
conurile la intensitatea luminoas ; ns nu sunt sensibile la culoare.
Cele 7 milioane de conuri confer ochiului sensibilitatea la culoare. Acestea sunt
concentrate n partea central a petei galbene, numit fovea centralis (diametru
0,3mm). Se apreciaz c acestea sunt distribuite ca sensibilitate pe culori n felul
urmtor : 64 % sunt conuri roii; 32 % sunt conuri verzi; 2 % sunt conuri
albastre. Conurile verzi i roii sunt concentrate n fovea centralis, iar cele
albastre n exteriorul acestei regiuni. De aici rezult o deosebire n modul cum se
disting culorile. Astfel, percepia obiectelor albastre cu intensitate mare este mai
slab dect a celor roii sau verzi. Faptul c vedem culorile cu un efort comparabil
este atribuit unui amplificator n albastru aflat n cicuitul de prelucrare din creier.



Specializarea celor dou tipuri de fotoreceptori din ochi conduce la o mulime de
fenomene aparent ciudate. De exemplu, un cpitan de vas sau un pilot vd mai bine
noaptea, n ntuneric, dac aparatele de pe bord sunt luminate n rou. Efortul lor de
acomodare este mai mic, ochiul utiliznd tipuri diferite de fotoreceptori pentru
79
culoarea roie (conurile) i pentru lumina slab (bastonaele). Din studiile efectuate
asupra percepiei imaginilor colorate n comparaie cu cele alb-negru s-a evidenat
faptul c n imaginile colorate ochiul detecteaz mai uor marginile obiectelor i
caracteristicile acestora. n imaginile alb-negru se pierde informaia coninut n
lungimea de und a fiecrei culori. Din numeroase experimente efectuate cu diferii
subieci, crora li se prezentau imagini colorate diferit i li se cerea s le
recunoasc, s-a ajuns la concluzia c ochiul omenesc poate distinge mii poate chiar
milioane de culori. O caracterisic important a vederii cromatice este faptul c
prin diminuarea intensitii luminii care se reflect pe un obiect colorat nu se
modific i distribuia spectral, adic distribuia lungimilor de und ale undelor
reflectate de obiect i apoi percepute de ochi. Creierul primete pentru prelucrare
aceleai informaii, care sunt legate de lungimea de und a culorilor din imagine.
Dac obiectul este cenuiu, atunci el reflect la fel toate lungimile de und, conurile
de pe pata galben sunt toate impresionate la fel i creierul nu reuete s disting
diferitele puncte de pe suprafaa obiectului. Dac obiectul este colorat de exemplu,
in rou i albastru, el reflect din lumina incident cu predilecie componenta roie
i pe cea albastr, ceea ce face s fie impresionate doar conurile specializate pentru
aceste culori i creierul reuete s prelucreze uor informaia primit.Toate
proprietile vederii cromatice sunt azi utilizate n domeniul publicitii, n
televiziune, cinematografie, mod etc.

Fotometria
Fotometria se ocup cu msurarea energiei transportat de undele electromagnetice
din domeniul optic. Radiaiile electromagnetice din domeniul vizibil dau senzaia
de lumin i n acelai timp transport energie. ntr-un sens mai ngust, fotometria
se ocup cu msurarea efectului radiaiilor din domeniul vizibil asupra ochiului
omenesc. Astfel, se definesc dou categorii de mrimi i uniti de msur :
fotometrice i energetice. Pentru caracterizarea transportului de energie de ctre
lumin se definesc mrimile energetice :
- flux de energie radiant
80
- intensitate energetic
- iluminare energetic
Pentru definirea mrimilor energetice trebuie s definim sursa de lumin
punctiform, care este o surs ce emite ntr-un mediu omogen i izotrop, cu
suprafaa de und sferic.
Fluxul de energie radiant
e
se definete ca energia care strbate o suprafa
oarecare, normal pe direcia de propagare a razei de lumin, n unitatea de timp,
adic :
e
= W / t care are unitatea de msur wattul.
Intensitatea energetic a unei surse punctiforme este fluxul de energie radiant
emis n unitatea de unghi solid, adic :
I
e
= de / d , unde d= unghiul solid elementar (1)
Intensitatea energetic se msoar n W/steradian. Unghiul solid este o poriune din
spaiu coninut ntr-o cavitate a unei suprafee conice. El se msoar ca raportul
dintre aria tiat de con pe suprafaa unei sfere cu centrul n vrful conului i
ptratul razei sferei. Unghiul solid elementar taie o arie elementar dA pe suprafaa
sferei, astfel: d = dA / r
2
.


Unitatea de msur este steradianul (sr) definit ca fiind unghiul sub care se vede din
centrul unei sfere o arie de pe suprafaa sferei egal cu raza la ptrat.
Iluminarea energetic a unei suprafee este egal cu fluxul de energie radiant
care strbate unitatea de arie a suprafeei transversale, adic :
81
E
e
= d
e
/ dA
n
(2)


care are unitatea de msur W / m
2
.
Dac eliminm fluxul de energie radiant ntre relaiile 1) i 2) vom obine o relaie
ntre iluminarea energetic a unei suprafee i intensitatea energetic a unei surse
punctiforme sub forma :
E
e
= I
e
/ r
2
(3)
Dac fasciculul cade sub inciden oblic, astfel nct axa conului care delimiteaz
unghiul solid este nclinat fa de normala la suprafa cu unghiul , n relaia (3)
apare proiecia pe direcia normal la suprafa definit de versorul n, adic
expresia se nmulete cu cos :
E
e
= ( I
e
/ r
2
)cos

Efectul luminii din domeniul vizibil asupra ochiului depinde n afar de
caracteristicile fizice ale luminii (densitatea de energie, frecvena) i de
sensibilitatea diferit a ochiului la frecvene diferite ale luminii. Din msurtori
fotometrice efectuate s-a constat c ochiul omenesc are sensibilitatea maxim la
frecvenele din mijlocul spectrului vizibil, adic n verde. S-a convenit s se
considere c sensibilitatea ochiului este maxim pentru = 550nm. Aceasta
nseamn c pentru a obine un anumit efect luminos asupra ochiului, la aceast
lungime de und este necesar cel mai mic flux de energie radiant. Pentru a
82
caracteriza sensibilitatea ochiului la diferite culori se definete sensibilitatea
spectral a ochiului (eficien luminoas) V

, care este egal cu raportul dintre
fluxul de energie radiant
e0
care produce o anumit senzaie luminoas la =
550nm i fluxul de energie radiant
e
care produce aceai senzaie luminoas la
alt lungime de und , adic :

V

=
e0
/
e

Dependena de lungimea de und a funciei V

este diferit ziua i noaptea.
Dependena nocturn are un maxim deplasat spre albastru. Cu ajutorul mrimii V

se poate trece de la definirea mrimilor fotometrice. Efectul radiaiilor asupra
ochiului se caracterizeaz prin urmtoarele mrimi fotometrice :
- fluxul luminos
- intensitatea luminoas
- iluminarea
Fluxul luminos este mrimea fotometric corespunztoare mrimii energetice
fluxul de energie radiant
e
i se definete ca produsul :
= kV

e
, k = constant numit echivalent
fotometric al radiaiei.
Unitatea de msur pentru fluxul luminos este lumenul ( lm ). Astfel, echivalentul
fotometric al radiaiei are valoarea k = 683 lm/w.
Intensitatea luminoas a unei surse punctiforme este fluxul de energie luminos
emis n unitatea de unghi solid, adic :
I = d / d
Intensitatea luminoas este mrime fundamental pentru mrimile fotometrice n
sistemul internaional de uniti (SI). Unitatea de msur este candela (cd), fiind
egal cu intensitatea luminoas ntr-o direcie dat a unei surse care emite radiaie
electromagnetic monocromatic cu frecvena de 54010
12
Hz i cu intensitatea
energetic n acea direcie egal cu 1/683 (W/sr). Suprafaa unei sfere se vede din
centrul acesteia sub un unghi solid egal cu 4. Astfel, fluxul luminos emis de o
surs n toate direciile cu aceai intensitate luminoas este egal cu :
83
= 4I
Iluminarea unei suprafee este egal cu fluxul luminos care strbate unitatea de arie
a unei suprafee transversale, adic :
E = d / dA
n
= ( I / r
2
)cos

Unitatea de msur pentru iluminare este luxul (lx). 1 lx = 1 lm/m
2
. Se mai
utilizeaz i unitatea tolerat phot (ph), care este egal cu 1 lm/cm
2
, astfel c 1 lx =
10
4
ph.




























84
10. SPECTROFOTOMETRIE
ABSORBIA I EMISIA RADIAIILOR DE CTRE MOLECULE

10.1. Energia moleculelor i posibilitile de modificare a ei
prin absorbia radiaiilor electromagnetice
Spre deosebire de atomi, la care mecanismul curent de absorbie i de
emisie a radiaiilor este cel de tranziie a electronilor ntre diferitele nivele
energetice, moleculele i pot schimba energia i datorit: micrii de vibraie a
atomilor la capetele legturilor prin care sunt fixai, sau prin variaia energiei
cinetice de rotaie a moleculei.
Tranziiile electronice, n cazul moleculeleor i macromoleculelor, se fac
ntre nivele energetice ale orbitalilor moleculari de legtur i antilegtur.
Diferenele energetice (AE
te
) dintre aceti orbitali corespund unor lungimi de und
plasate n domeniile ultraviolet (UV) i vizibil (VIS). Fiecare tip de legtur are
tranziii electronice n domenii spectrale care permit identificarea ei.
Vibraia se poate face n dou feluri: n lungul legturilor (cnd are loc
ntinderea i comprimarea lor) sau perpendicular pe legturi (cnd se produc
modificri ale unghiurilor dintre acestea). Ca i energia electronilor, energia
cinetic a fiecrui mod de vibraie este cuantificat, cu ajutorul unui numr cuantic,
v = 0,1,2,3.... Diferena energetic (AE
v
) dintre dou nivele de vibraie este
constant, iar cuantele absorbite n acest caz se afl n domeniile de infrarou (IR) -
apropiat sau mijlociu.
ntruct nu exist atom legat care s nu vibreze, energia moleculei pe
nivelul de vibraie cel mai sczut, cu v = 0, este totdeauna superioar unui nivel
energetic electronic -Fig.10.1.



85
Rotaia moleculelor
poate produce acumulare de
energie cinetic, de asemenea
cunatificat. Numrul cuantic de
rotaie, r = 0,1,2,3... cuantific
momentul cinetic de rotaie i
energia corespunztoare. ntruct
exist molecule care nu se rotesc,
primul nivel de rotaie (r = 0) se
suprapune peste primul nivel de
vibraie - Fig.1. Diferenele
energetice datorit rotaiei (AE
r
)
sunt i mai reduse, cuantele
corespunztoare fiind n IR
ndeprtat.

Influena agitaiei termice.
ntruct energia cinetic de agitaie termic, pe mol, este de ordinul RT
(constanta gazelor x temperatura absolut) adic 2,5 Kcal/mol, o proporie mare
dintre molecule se vor afla pe unul din nivelele energetice de rotaie, iar o fraciune
redus pe unul din nivele de vibraie. Rezult c, n echilibru termodinamic,
populaia de molecule se va afla distribuit pe o multitudine de nivele energetice
foarte apropiate ntre ele.
10.2. Absorbia energiei de ctre molecule, spectre moleculare
Moleculele i macromoleculele pot absorbi radiaii electromagnetice, cuante
de energie hv. Energia primit modific prin unul sau mai multe din mecanismele
de mai sus energia moleculei absorbante. Pentru o cuant din domeniul UV-VIS va
fi adevrata egalitate:
hv = AE
te
+ AE
v
+ AE
r


4
3
2
1
0
5
4
3
2
1
0
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
5
1
0
1
0
C
B
A
Nivele
electronice
Nivele
de rotaie
r = 0,1,2...
Nivele
de vibraie
v = 0,1,2...
Fig.10.1 Dispunerea nivelelor energetice moleculare.
Sgetile reprezint cteva dintre tranzitiile permise ntre
nivelele electronice A si B. Selectia tranzitiilor prmise
se face cu regulile: v
sup
v
inf
= 1 si r
sup
r
inf
= 1.

86

ntruct nivelele ntre care se face tranziia, pot avea stri de vibraie i/sau de
rotaie diferite, rezult c, pentru o tranziie ntre aceleai nivele electronice,
cuantele absorbite pot avea energii diferite. (Fig.10.1). Spectroscopic fenomenul se
traduce prin apariia unui numr corespunztor de linii, apropiate ntre ele, grupate
n bande sau benzi spectrale.
Liniile care compun benzile de absorbie molecular pot fi distinse numai n
cazul moleculelor izolate, aflate n stare gazoas. Pentru moleculele dizolvate, cum
sunt macromoleculele biologice, interaciunea cu solventul face ca liniile din bezi
s nu mai pot fi distinse.

10.3. Emisia radiaiilor de ctre macromolecule, luminescena
Posibilitatea de aducere a macromoleculelor n stare excitat
Pentru a emite radiaii, un atom sau molecul trebuie s se gseasc pe un
nivel energetic superior (ntr-o stare excitat), radiaia fiind emis la trecerea pe un
nivel energetic inferior.
Energia necesar excitrii poate fi termic (substane aduse la
incandescen), electric (descrcri n gaze), chimic sau radiant (excitarea
radiativ). Excitarea radiativ, prin absorbie de cuante, este modul curent de a
aduce moleculele n soluie ntr-o stare n care sunt capabile s emit radiaii.
Dezexcitarea moleculelor
n afar de dezexcitarea prin emisie de radiaii (tranziie radiativ) o
molecul poate trece pe un nivel energetic inferior prin tranziii neradiative.
Tranziiile neradiative se explic prin convertirea energiei n alte forme, cum sunt
energia chimic, electric sau mecanic de agitaie termic. n acelai lan de
procese ce nsoete revenirea unei molecule la starea de energie joas se ntlnesc
ambele tipuri de desexcitri. (Fig.10.2.)
87
Luminescena este
fenomenul de emisie a unor radiaii
de lungime de und mai mare
(frecven i energie mai reduse), n
comparaie cu cele ale radiaiilor pe
care substana le-a absorbit. Ea
reprezint modalitatea curent de
emisie a radiaiilor de ctre
moleculele aflate n soluie, la
temperaturi obinuite.
Faptul poate fi uor explicat dac inem cont c ntre excitarea radiativ (n
care molecula absoarbe cuanta cu energia hv
abs
) i dezexcitarea radiativ (n care
emite cuanta hv
emis
) au loc una sau mai multe dezexcitri neradiative, n care
molecula comunic sistemului (de obicei solventului) o cantitate de energie
termic, AE
n
. Legea conservrii energiei se va scrie:
hv
abs
= hv
emis
+ AE
n

Este evident c energiile cuantelor emise sunt mai reduse dect cele ale
celor absorbite.
Dup natura strii intermediare de pe care se face dezexcitarea radiativ,
luminescena poate s se produc n dou moduri: fluorescen i fosforescen.
(Fig.10.2.)
Fluorescena apare atunci cnd, dup dezexcitarea neradiativ, electronul
i pstreaz spinul de sens opus perechii sale, rmas pe nivelul energetic inferior
(stare singlet). Timpul de via, t, al electronului n aceast stare este extrem de
scurt, t = 10
9
... 10
3
s. Dup acest interval de timp, toi electronii au revenit pe
nivelele inferioare. Practic, fenomenul dureaz numai ct timp dureaz excitarea
radiativ.
Excitarea este realizat cu radiaii care corespund unei benzi de absorbie
intens a substanei. Indiferent de lungimea de und aleas pentru excitare,

t
s
emisie
absorbtie
fosforescent fluorescent
s - stare singlet; t - stare triplet;
- desexcitare neradiativ

Fig. 10.2. Tranzitiile electronice la producerea
luminescenei

88
datorit multitudinii nivelelor de vibro-rotaie ale populaiei de molecule, lumina
emis se distribuie ntr-o band.
Fluorescena este produs de majoritatea macromoleculelor aflate n soluie.
n cazul proteinelor, responsabili de producerea fluorescenei sunt radicalii
aromatici ai unor aminoacizi (Phe, Tyr, Trp), iar n cazul acizilor nucleici toate
bazele azotate.
Fosforescena se produce dac pe nivelul intermediar, de pe care revine,
electronul excitat se afl cu spinul n acelai sens cu cel al electronului rmas pe
nivelul inferior (stare triplet). Timpul de via al electronului n aceast stare poate
fi mult mai lung, t = 10
3
s ... ore. nseamn c substanele fosforescente,
coninnd o multitudine de electroni excitai, continu s emit lumin nc mult
timp dup ce a ncetat iluminarea care a produs excitarea.
ntruct fosforescena poate avea loc numai n stare solid, ea nu i -a gsit
aplicaii n studiul biomacromoleculelor.

10.4. Studiul macromoleculelor prin spectroscopie de absorbie
Msurarea absorbiei radiaiilor de ctre o substan
Absorbia se exprim cantitativ cu ajutorul extinciei (E) numit i
absorban (A). Ea exprim gradul de atenuare a unui fascicol de luminos dup
strbaterea unui strat de substan ce conine molecule absorbante.
La trecerea unui fascicol luminos de o anumit lungime de und , printr-un strat
de substan cu grosimea dx, el va fi absorbit conform legii :
-dI= K I dx, dI= I I
0,
Unde I este intensitatea fascicolului dup ce a strbtut stratul absorbant, dI este
variaia elementar a intensitii, K este constanta de absorbie a mediului pentru
lumina cu lungimea de und .

89

Extincia, datorat unui component din soluie, crete linear cu concentraia
lui molar, C, i cu grosimea stratului de soluie strbtut, x :
E = c C x (legea Lambert i Beer)
c se numete coeficient molar de extincie i, pentru scopuri biologice,
unitatea curent este de M
1.
cm
1
, exprimat uneori ca litri
/
mol
.
cm

. Valoarea lui
nu depinde dect de natura absorbantului i de lungimea de und la care a fost
msurat. Se poate demonstra c :
E = lg I
0
/ I = lg T, unde T este gradul de transmisie al luminii, adic
T = I / I
0
sau T(%) = I /I
0
. 100.
Spre exemplu, valoarea extinciei unui fascicol luminos a crui intensitate scade de
10 ori fa de cel incident pe suprafa, va fi E=1.
Se numete curb caracteristic de absorbie, sau spectrul de absorbie al
substanei, graficul dependenei coeficientului molar de extincie de lungimea de
und: c = c().
Informaiile oferite de curba caracteristic de absorbie privesc: a) tipurile
legturilor i energetica lor (prin lungimile de und la care se plaseaz maximele
de absorbie) i b) abundena gruprilor sau legturilor absorbante (prin valorile
coeficienilor de extincie). Ea este determinat de natura moleculei (compoziie,
structur) i depinde de interaciunile (intra- sau intermoleculare) pe care le are
molecula sau pri ale ei.
Selectarea lungimilor de und potrivite pentru determinarea concentraiilor prin
msurtori de extincie se face utiliznd monocromatoare. Lungimea de und la
care se fac determinrile se alege astfel nct substana de determinat s prezinte
I
0
dx
x
I
Fig.10.3. Scderea
intensitii fascicolului
luminos la trecerea
printr-un strat de
substan cu grosimea x
I =I
0
e
k x
90
absorbanta maxim iar ceilalti componeni ai amestecului s absoarb ct mai puin
(sau deloc). Trebuie menionat c toate corpurile apar colorate n culoarea
complementar radiaiilor absorbite, deci pentru a obine extincia maxim pentru o
soluie de o anumit culoare, trebuie ales un filtru de culoare complementar
acesteia (vezi diagrama de mai jos).

Fig.10.4. Diagrama culorilor complementare

Gruprile cromofore reprezint grupri de atomi, legate prin interaciuni
chimice sau fizice, i care au benzi de absorbie caracteristice.
Absorbia n ultraviolet i vizibil se datorete gruprilor cromofore reprezentate
de legturile covalente. Cromo-for nseamn purttor de culoare. Culoarea
observat la o soluie strbtut de lumin alb, se datorete radiaiilor pe care
moleculele ce o compun le las s treac (nu le absoarbe).
Legtura simpl, CC, absoarbe sub 160 nm, dar studiile la < 180 nm sunt
imposibile n soluie apoas, ntruct i legturile covalente ale apei absorb puternic
n acest domeniu.
Legturile duble absorb ntre 180 i 300 nm prin tranziiile electronice ntre
orbitalii t i t*.

91
Dublele legturi conjugate ale ciclurilor aromatice (aminoacizi ca Phe, Tyr,
Trp), sau ale heterociclurilor
bazelor azotate (purinice i
pirimidinice), au cte o band de
absorbie intens ntre 230 i 300
nm. Deplasrile lungimilor de und
ale maximelor, i variaiile
coeficienilor molari de extincie ai
radicalilor, servesc la studiul
structurii i a interaciunilor cu
agenii de mediu: fora ionic, pH-
ul, temperatura.
Legturile pepetidice (avnd craracter de dubl legtur) absorb ntr-o
band cu dou maxime: unul mai exprimat, la 200 nm, i altul mai redus, la 225
nm. Spectrele lanurilor polipeptidice, dac acestea adopt o structur secundar
definit, au particulariti caracteristice ale spectrului de absorbie (Fig.10.5).

Metaloproteinele, ca
i compuii ce conin
radicali aromatici
policiclici i sisteme
de duble legturi
conjugate absorb n
domeniul vizibil.







(nm)
c(M
1
cm
1
)
|
o
0
8000
4000
200 180 220
ghem haotic
Fig. 10.5 Spectrele de absorbie n UV ale
poli-L-lizinei n conformaiile o, | ,
ghem haotic.


(nm)
200000
100000
50000
10000
5000
3000
600 500 400 300
c
Fig. 10.6 Spectrele de absorbtie ale oxihemoglobinei (),
deoxihemoglobinei () si methemoglobinei (- -)

92
Prima categorie include compuii metalelor tranziionale, iar pentru a doua se pot
cita flavo-proteinele. Proteinele heminice (hemoglobina - Fig.10.6. - i citocromii)
au spectre caracteristice datorate, pe de o parte, nucleului conjugat tetrapirolic i,
pe de alt parte, prezenei ionilor de fier. Cuprul, determin spectrele
ceruloplasminei plasmatice, citocrom-oxidazelor mitocondriale sau al hemocianinei
(transportorul de oxigen din sngele unor nevertebrate).
Absorbia n infrarou, n condiii apropiate de cele biologice, are loc
datorit vibraiilor moleculare, fiindc, aa cum s-a vzut, n soluie strile
rotaionale pure nu pot exista. Domeniul spectral n care se lucreaz este IR
apropiat i mediu.
n cazul vibraiilor longitudinale ale legturilor marginale, de exemplu, se
cunosc lungimile de und ale maximelor de absorbie. Dac atomii acestora
particip la puni de hidrogen se produc deplasri caracteristice, n sensul creterii
lungimilor de und. (Tabelul. 1)
Tabelul 1 : Poziiile maximelor de absorbie pentru vibraiile longitudinale ale unor legturi
LEGATURA Lungimea de und Lungimea de und
n lipsa legturii de H n prezena legturii de H
OH 2,75 m 3,00 m
NH 2,95 m 3,10 m
SH 3,90 m 4,00 m
C=O 5,90 m 6,05 m

Soluiile apoase nu sunt propice studiilor n infrarou datorit celor dou
benzi de absorbie intens ale apei (n jurul a 3,1 m i 6,1 m). Legturile de
hidrogen, care de pot studia uor n solveni neapoi, nu pot fi studiate n ap.









93

10.5. DESCRIEREA SPECTROFOTOMETRULUI UV-VIS
SP-8001 METERTECH















Parametrii tehnici
Domeniul de msurare: 200-1100 nm
Lime de band: 2 nm
Precizia lungimii de und: 1 nm
Monocromator: split beam (raz divizat)
Reproductibilitate: 0.2 nm
Domeniul fotometric: - 0.300-3.000 Abs
Precizia fotometric: 0.005 % la 1.000 Abs
Stabilitate (drift): < 0.0003 Abs / or la 500 nm
(dup 1 or de nclzire)
Stabilitate baseline: 0.002 Abs (ntre 210-1000 nm)
Lumina mprtiat: < 0.05% la 340 nm i 220 nm
Surs de lumin: lamp deuteriu (UV) i lamp halogen (VIS)
Schimbare surs de lumin: automat
Detector: dou fotodiode
Vitez de nregistrare spectru: 100-5000 nm/min
Drum optic: schimbabil ntre 10-100 mm
Afiaj: LCD cu iluminare din spate, contrast reglabil
Ieiri semnal: port serial i paralel
Alimentare / sigurane: 100/120/220/240 V ~ 50/60 Hz
sigurane: T 2A 220/240 V, T 4A 100/120 V
Ambient / umiditate: temperatura camerei: 15-30C, umiditate < 80%
Dimensiuni: 506 mm x 430 mm x 220 mm. Masa: ~18 kg
Moduri de msurare: la lungime de und fix, nregistrare de spectru, msurare n
timp la o lungime de und, msurare cantitativ, cinetic simpl.

94
ELEMENTE DE COMAND



Comanda spectrofotometrului, introducerea parametrilor de msurare precum i
vizualizarea rezultatelor se face cu ajutorul butoanelor tastaturii protejate cu folie. Se
pot observa urmtoarele grupuri:

Taste funcii: F1-F5, selectarea unei funcii de pe afiaj
Taste numerice: cifre, punct zecimal, semnul minus
: introducerea lungimii de und dorite
CLEAR: tergerea valorilor nedorite
ESC: ntoarcere dintr-o fereastr n cea precedent, sau ntoarcere de la
o operaie la un nivel superior de meniu
ENTER: validarea datelor sau operaiilor introduse
READ: pornirea msurtorii conform parametrilor setai
AUTO ZERO: corecie blanc, seteaz valoarea fotometric la 0 ABS (100%T)
Sgei: deplasarea cursorului prin lista parametrilor
CELL deplasare schimbtorului de cuve nainte cu o poziie
CELL deplasare schimbtorului de cuve napoi cu o poziie
QUICK RUN: la apsarea tastei apare lista tuturor fiierelor salvate cu
parametrii de msurare, indiferent de modul de lucru; alegnd de
aici, se ajunge imediat n modul de lucru corespunztor

PORNIRE I FUNCIONARE: Ne asigurm c n incinta de lucru nu este nici o
cuv. Se nchide capacul incintei, se pornete aparatul. Pe afiaj vor aprea
urmtoarele mesaje:







95
12:00:00
0.0nm 0.000A




Metertech
Metertech Inc. SP-
8001

UV/VIS
SPECTROPHOTOMETER

All rights reserved.
Version 1.0




Detect
Accessory...Single-Cell

Initial System.....






Aparatul va executa un autotest, va aprinde lmpile i va recunoate accesoriile
opionale, dac ele exist, toate acestea n mod automat. Dup iniializare va fi
afiat fereastra meniului principal. De aici se poate alege din apte (ase) opiuni.



















12:00:00
500.0nm 0.000A
System Main Menu


1.Photometric
2.Spectrum
3.Timescan
4.Kinetic
5.Quantitative
6.System Setup




Select Number:1




Quick Sample
Run Contro
l

96

Alegerea se face prin tastarea numrului corespunztor sau prin deplasarea benzii
luminoase (hightlight) urmate de apsarea tastei ENTER. Pe partea de jos a
afiajului mai sunt dou opiuni, dintre care "Sample Control" are sens doar n
cazul utilizrii unui suport multicell (multicuv), iar cu tasta F1 de sub "Quick
Run" se poate intra n meniul de fiiere, ca i cu ajutorul tastei QUICK RUN.
Parametrii de baz ai spectrofotometrului se pot seta din submeniul 6, "System
Setup". Opiunile din acest submeniu se aleg prin tastarea numrului corespunztor
urmat de apsarea tastei ENTER.
1.
Setup clock: pentru setarea datei i orei.
2.
Setup lamp: aici putem vedea nivelul de energie a lmpilor, putem opri
lmpile individual, totodat aici putem reseta la zero orele de funcionare a
lmpilor, dup nlocuirea cu una nou.
3.
Setup printer: pentru alegerea tipului potrivit de imprimant.
4.
Setup RS-232: pentru setarea portului serial.
5.
Setup hardware: se pot seta trei parametri de baz:
lungimea de und la care se comut sursa de lumin la trecerea din VIS
n UV. n cazul n care lungimea de und de msurare coincide cu cea de
comutare a sursei de lumin setat de productor (363 nm), se recomand
modificarea acestei valori n intervalul 330 i 365 nm.
Switch to..... comutare ntre accesorii i single cell.
Scan base line..... dac este setat pe ON, dup pornire, aparatul msoar
automat un baseline.
6.
Measure bandwidth: Pentru msurarea limii de band se apas tasta
READ. Va fi nregistrat spectrul lmpii UV. Dac aparatul este bine calibrat,
atunci va rezulta un vrf n jurul valorii de 656.1 nm, iar limea de band va
fi sub 2 nm. Rezultatul poate fi tiprit apsnd tasta de sub "Print Data".
7.
Measure baseline: apsnd ENTER, se va msura un baseline.
8.
Search zero point: msurare n poziia de zero, pentru test hardware.

EFECTUAREA MSURTORILOR N DIFERITE MODURI

a) MSURARE LA LUNGIME DE UND FIX
Este un mod de msurare simplu, la lungime de und fix. Se pornete din meniul
principal, alegnd punctul 1. Apare fereastra Photometric Parameter setup.
Deplasndu-ne cu ajutorul sgeilor, putem selecta parametrii dorii pentru setare
sau editare. Avem posibilitatea de a ncrca i seturi de parametri de la msurtori
anterioare, prin apsarea tastei funcie F1, de sub afiaj. Cu tasta F2 se salveaz, cu
F3 se tipresc parametrii. Pot fi setai urmtorii parametri de msurare:

Input the Number of : stabilirea numrului de lungimi de und de msurare
(1-5); dup apsarea tastei ENTER se dau valorile lor.
Measure Mode: alegerea modului de msurare: ABS-absorban, %T-
97
transmitan, Conc.-concentraie.
Cycle Number: specificarea numrului ciclurilor de msurare (1-999)
pe aceai prob. Un ciclu nseamn cte o msurare la
fiecare lungime de und din list.
Cycle Interval (sec): timp de ateptare (1-999 sec) ntre cicluri
Print Every Cycle: Dac se seteaz pe Yes, rezultatele se tipresc dup
fiecare ciclu.


























Dup setarea tuturor parametrilor, se recomand salvarea lor ntr-un fiier.
Dup apsarea tastei F2, apare un careu cu litere. Selectarea unei litere are loc prin
deplasarea cu ajutorul sgeilor pe linia care o conine, urmat de apsarea
numrului corespunztoare coloanei n care se gsete ea.
Dup completarea numelui se apas tasta ENTER, apoi cu ajutorul sgeilor ne
deplasm pe o linie goal i se apas din nou ENTER; fiierul este salvat. Se pot
salva cte 15 fiiere pentru fiecare mod de msurare.
Atenie! Aparatul va suprascrie fr ntrebare fiierele cu acelai nume!!
Dup introducerea parametrilor se apas tasta F5, apare un tabel gol, i fotometrul
se poziioneaz pe prima lungime de und din list.
12:00:00 PHOTOMETRIC 500.0nm
0.000A
Parameter
Setup


1.Input the Number of
:1
1 :500.0



2.Measure mode :ABS
Have unit(Yes/No)? :Yes
Unit :
Factor(default=1) :1.000
3.Cycle number :1
4.Cycle interval(sec) :0
5.Print every cycle :No




Number from 1 to 5...
Load Save Print Sample Next
Param Param Data Contro
l
Screen
98
A se urmri ntotdeauna mesajele din partea de jos a afiajului, operaiile acelea
trebuie efectuate.
Pentru a ine cont de valoarea blancului, se aeaz cuva goal sau umplut cu
solvent n suportul de cuve i se apas tasta AUTO ZERO.

12:00:00 PHOTOMETRIC 550.0nm
1.802A

400.0 450.0 500.0 550.0
No ABS1 ABS2 ABS3 ABS4
1 0.855 1.223 1.501 1.802
2 0.855 1.224 1.502 1.803
3 0.854 1.223 1.502 1.801
4 0.855 1.224 1.503 1.803
5 0.854 1.223 1.501 1.802

Press READ when ready...
Print Prev
Data Screen

Msurarea pornete dup apsarea tastei READ. La sfrit se poate reporni
msurarea sau pot fi printate datele. Exist i un mod foarte simplu de msurare
pentru cazul n care se lucreaz la o singur lungime de und. Din meniul principal
se apas tasta . Cu tasta "Mode" se alege modul fotometric de msurare
(absorban, transmitan, concentraie).













99























Se introduce lungimea de und i se valideaz cu ENTER, dup care msurarea
pornete imediat i se afieaz rezultatul. Se poate i salva prin apsarea tastei F2.
O msurtoare nou se poate porni apsnd din nou tastele i ENTER. Cu tasta
F1 (View Data) se pot afia rezultatele msurtorilor i se pot i tipri. Rezultatele
nu sunt salvate definitiv; dac se iese din acest mod de msurare, ele se pierd.


b) NREGISTRARE DE SPECTRU
n modul de nregistrare de spectru avem posibilitatea de a msura fie pe un
domeniu restrns, fie pe tot domeniul spectrofotometrului, cu specificarea vitezei
de scanare. Spectrul rezultat poate fi prelucrat n diverse moduri, poate fi printat,
salvat i deschis mai trziu. Spectrele pot fi i suprapuse n aceai fereastr
(overlay). Pentru pornirea acestui mod, din meniul principal se alege punctul 2.
Navignd cu tastele sgei, putem seta sau edita parametrii.





12:00:00 LAMBDA 500.0nm
0.000A





: 500.0 nm
Data: 0.000 A





Press & keyin
wavelength...

View Save Mode Sample Toggle
Data Data A/C/%T Contro
l
Digits
100




















Comenzile afiate n partea inferioar a ferestrei se pot executa cu ajutorul tastelor
de sub ele. Putem seta urmtorii parametri de lucru:
Start Wavelength: Lungimea de und de start (200-1098 nm)
Stop Wavelength: Lungimea de und final (202-1100 nm)
Measure Mode: Modul de msurare fotometric (absorban,
transmitan)
Low Value:

Limita de jos a scalei grafice pe timpul msurrii
(-0.3-2.99 A / 0-119.9 %T)
High Value: Limita de sus a scalei grafice pe timpul msurrii
(-0.29-3.00 A / 0.1-120.0 %T)
Scan Speed (nm/min): Viteza de scanare a spectrului (100-5000 nm/min)
Overlay Screen: Yes nseamn c msurtorile succesive vor fi afiate
suprapuse n fereastr. Numai ultima msurtoare se
poate analiza.

Dup setarea tuturor parametrilor, este indicat salvarea lor ntr-un fiier, similar
celor descrise la modul fix de msurare. Acestea pot fi rechemate oricnd pentru
pornirea unei msurtori. Putem salva n total 15 fiiere de parametri. Dup
umplerea memoriei, rndurile vor fi suprascrise. Deasemenea, la o salvare aparatul
nu va cere confirmarea suprascrierii rndului actual. Din acest motiv, se recomand
deplasarea cu ajutorul sgeilor pe un rnd gol. Dup validarea parametrilor de
12:00:00 SPECTRUM 500.0nm
0.000A
Parameter
Setup


1.Start wavelength(nm) :400.0
2.Stop wavelength(nm) :800.0
3.Measure mode :ABS
4.Low value(ABS) :-0.30
5.High value(ABS) :3.00
6.Scan speed(nm/min) :1000
7.Overlay screen :Yes





Number from 200 to
1098...

Load Save Print Sample Next
Param Param Data Contro
l
Screen
101
msurare se apas tasta F5 (Next Screen) i se va intra n fereastra grafic de
msurare.
















Pe partea de jos a ecranului apare mesajul "Press READ when ready". A se urmri
ntotdeauna mesajele din partea de jos a afiajului, operaiile acelea trebuie
efectuate.

Deoarece spectrofotometrul are un singur drum optic, un spectru msurat s-ar
compune din absorbanele ansamblului cuv + solvent + prob necunoscut. Din
aceast cauz, pentru luarea n consideraie a valorii de blanc, nainte de msurarea
propriu zis, vom introduce n suport cuva sau cuva cu solventul pur i vom apsa
tasta AUTO ZERO. Dup care aparatul va msura un baseline (blanc) pe domeniul
de lungimi de und definit prin parametri de lucru; acesta va fi sczut din
msurtorile de probe pornite cu tasta READ.
Se aeaz cuva cu prob n locaul din incinta de lucru, se nchide capacul
incintei. Se apas tasta READ, msurtoarea pornete i spectrul va fi trasat pe
ecranul grafic. Pe partea de sus a ecranului sunt afiate lungimea de und i
valoarea fotometric, actuale. Msurtoarea poate fi oricnd oprit prin apsarea
tastei ESC. La sfrit, dac este nevoie, cu tasta READ putem nregistra din nou
spectrul. Pe partea de jos a ecranului se vd ferestrele operaiilor posibile.
Ele pot fi executate cu ajutorul tastelor funcii (F1-F5), aflate dedesubt.
Cu tasta "Prev Screen" (F5) ne ntoarcem n fereastra de parametri. Cu tasta "Clear
Graph" (F3) putem terge spectrul. Dac am activat overlay, vor fi terse toate
spectrele.
Cu tasta "Acces Data" (F1) acceptm msurtoarea. n ferestrele de jos vor aprea
noi mesaje:
12:00:00 SPECTRUM 800.0nm
0.132A
1.50

ABS

0.75


0.00
400 Nm 605 800
Press READ when ready...
Access Mani- Clear Prev
Data pulate Graph Screen
102
F 3 "Print Data" printarea rezultatului;
F 2 "Save Data" salvarea spectrului sub numele dat de noi (5 fiiere);
F 1 "Load Data" rencrcarea spectrelor salvate pentru analiz. Cu banda
luminoas ne poziionm pe rndul dorit i cu ENTER l ncrcm n fereastra
grafic de mai nainte. Cu tasta ESC putem urca cu un nivel mai sus, unde putem
face analiza spectrului.

c) ANALIZ DE SPECTRU

Putem intra n acest punct de meniu dup nregistrarea unui spectru sau
dup reapelarea unui spectru salvat n prealabil. Pentru acesta trebuie s apsm
tasta F2 de sub fereastra "Manipulate".
Vom avea urmtoarele posibiliti:
- F1 Smooth Data: netezirea automat a curbei
- F2 Zoom Data: mrirea/micorarea curbei; la axa Y plpie cursorul, acolo
trebuie introdus noua valoare apoi se valideaz cu ENTER. Cursorul va sri la
poziia urmtoare; prin repetarea operaiei precedente i terminnd pe partea
dreapt a axei X, curba va fi redesenat conform coordonatelor. Apsnd din nou
tasta F2 se va repeta procesul, sau se poate reveni la aspectul iniial cu tast a F5.
- F3 Show Track: apare o linie vertical, n rndul de sus va fi afiat poziia ei
actual i valoarea fotometric corespunztoare. Poate fi deplasat cu tastele sgei,
astfel putem cuta orice vrf sau vale. Dac ntr-un loc apsm tasta "Save Data",
datele vor fi salvate. Cu "View Data" se pot vizualiza, cu "Print Data" se pot printa
datele vrfurilor. Ieirea se face cu tasta ESC.
- F4 Peak Walley: dup apsare, apare jos un meniu nou.















12:00:00 SPECTRUM 800.0nm
0.132A
1.50

ABS

0.75


0.00

400 Nm 605 800
Press hot key to processing...
View Search Search Less More
Data Peak Valley Point Point
103
Alegnd "Search Peak" se va face o cutare de maxime. Dac se alege "Search
Valley" se vor cuta minime ale spectrului. Folosind tastele "Less Point", "More
Point" se va executa o cutare pentru mai puine, respectiv pentru mai multe
puncte. Dup cutare, datele pot fi afiate sub form tabelar dac se apas tasta
"View Data", de aici pot fi i printate.

















Cu tasta F5 (Prev Screen) ne ntoarcem n fereastra precedent, de analiz. Cu
tasta ESC ne putem deplasa napoi prin structura meniului.


d) MSURARE N TIMP (TIME SCAN)
n acest mod de msurare putem nregistra variaia n timp a valorii
fotometrice alese, la o lungime de und. Se utilizeaz pentru urmrirea reaciilor,
pentru msurtori de cinetic. Este posibil ntrzierea msurtorii propriu-zise
(Delay Time), astfel citirea pornete numai dup expirarea timpului setat. Din
meniul principal putem ajunge n modul Time Scan alegnd punctul trei. Apare
fereastra Parameter Setup.







12:00:00 SPECTRUM 800.0nm
0.132A
Data File List
--------------------------------
------
Data01 413.2nm 0.344A
Data02 498.8nm 1.415A
Data03 587.1nm 0.352A
Data04 714.3nm 1.065A
Data05 787.5nm 0.534A












Prev Next Print Prev
Page Page Data Screen
104

















Dup ce am setat parametrii, putem porni msurtoarea sau i putem salva
ntr-un fiier. Tot de aici, parametrii pot fi i printai. Putem seta urmtorii
parametri:

Wavelength: Lungimea de und aleas (200-1100 nm)
Scan Time: Durata msurtorii (5-9999 sec)
Delay Time: Timpul de ntrziere; dup apsarea tastei READ,
msurtoarea propriu zis va porni dup acest timp (0-50 sec)
Measure Mode: Modul de msurare fotometric (ABS sau %T)
Low Value: Limita de jos al ecranului grafic pe timpul msurtorii
(-0.3-2.99 Abs / 0-119.9 %T)
High Value:

Limita de sus al ecranului grafic pe timpul msurtorii
(-0.29-3.00 Abs / 0.1-120.0 %T)
Overlay Screen: Yes nseamn c msurtorile succesive vor fi afiate
suprapuse n fereastr. Numai ultima msurtoare se poate
analiza.

Dup setarea parametrilor, dac este necesar, msurm valorea de blanc,
apoi aezm cuva cu prob n incinta de lucru i nchidem capacul.
Apsm tasta READ, dup trecerea timpului setat la delay time va porni
msurtoarea i curba va fi trasat pe ecranul grafic. n partea de sus al ecranului se
poate vedea timpul scurs i valoarea fotometric actual. Putem opri msurtoarea
cu tasta ESC.

12:00:00 TIMESCAN 500.0nm
0.000A

Parameter
Setup


1.Wavelength(nm) :500.0
2.Scan time(sec) :30
3.Delay time(sec) :0
4.Measure mode :ABS
5.Low value(ABS) :-0.30
6.High value(ABS) :3.00
7.Overlay screen :Yes








Number from 200 to 1100
Load Save Print Sample Next
Param Param Data Contro
l
Screen
105
12:00:00 TIMESCAN 500.0nm
0.000A
101.0

%T

100.0


99.0

0 Sec 150 300
Press READ when ready...
Access Mani- Clear Prev
Data pulate Graph Screen
La sfrit putem repeta msurtoarea cu tasta READ.
Pe partea de jos a ecranului sunt afiate ferestrele comenzilor ce pot fi executate.
Acestea pot fi lansate cu tasta aflat dedesubtul lor (F1-F5). Analiza rezultatelor se
face similar celor descrise la analiza spectrelor.

e) MODUL DE MSURARE CANTITATIV
n acest mod de msurare avem posibilitatea determinrii concentraiei unei
probe necunoscute, pe baza unei curbe de calibrare nregistrate n prealabil de ctre
utilizator cu ajutorul unor soluii standard, a cror concentraie se cunoate. Se pot
nregistra patru tipuri de curb de calibrare. Din meniul principal putem ajunge n
modul Quantitative alegnd punctul cinci. Apare fereastra Parameter Setup.
12:00:00 QUANTITATIVE 500.0nm
0.000A
Parameter
Setup


1.Wavelength(nm) :500.0
2.Standard number(Conc.) :3
S 1:0.0 S
2 :0.0

S 3:0.0



3.Have Unit(Yes/No) :No

4.Method
:1ord.(Origin)

5.Keyin ABS :No
6.Print every cycle :No


Number from 200 to
1100...

Load Save Print Sample Next
Param Param Data Contro
l
Screen
106
Navignd cu tastele sgei, putem seta sau edita parametrii. Validarea lor se face
prin apsarea tastei ENTER. Putem ncrca i seturi de parametri salvai anterior.
Lista parametrilor de setat este urmtoarea:
Wavelength: Lungimea de und aleas (200-1100 nm).
Standard Number: Numrul standardelor cu concentraia cunoscut (1-10) .
Have Unit(Yes/No): Se vrea asocierea valorilor cu o unitate de msur? Dac se
alege Yes, apare un tabel din care putem alege una dintre
cele 12 u. m.
Method: Tipul curbei de calibrare (avem patru opiuni):
1'ord.(Origin): dreapt, care trece prin origine;
1'ord. (No Org): dreapt, care nu trece prin origine;
2'ord. (Origin):curb de gradul doi, care trece prin origine;
2'ord. (No Org):curb de gradul doi, care nu trece prin origine.
Keyin ABS: "No" nseamn c soluiile standard trebuie msurate;
"Yes" - absorbana soluiilor standard se introduce manual.
Print Every Cycle: S se printeze dup fiecare msurare sau nu.

Dup validarea tuturor parametrilor, cu tasta F5 trecem n fereastra
Quantitative Standard Table. Apsm tasta READ, pe rndul de sus apare
concentraia introdus mai nainte, precum i un mesaj n partea de jos: "Press
READ for read stds". Dup apsarea tastei apare un mesaj nou: "Insert stds and
press READ". Acum putem introduce primul standard din seria de diluie. Se apas
READ, dup care valoarea absorbanei msurate va fi nscris n rndul
corespunztor. Celelalte soluii din seria de standarde se msoar la fel. Cu tasta F2
trecem n fereastra "manipulate" unde "View Curve" ne va afia curba de calibrare,
iar "View Equati" ecuaia pe baza creia aparatul va calcula concentraia probelor
necunoscute, dup ce le-a msurat absorbana. (Apsnd "Keyin Factor" putem
edita parametrii K1 i K0 ai ecuaiei, corectnd astfel valoarea calculat). Dac nu
dorim folosirea factorului, ne ntoarcem cu "Prev Screen".
Cu tasta "Sample Measure" (F2) ajungem n fereastra de msurare propriu zis.




Measure Sample
--------------------------------
------
Sample No. ABS
Conc.( G/L)
1 0.521 5.2100
2 1.137 11.370
3 2.325 23.250







Press READ when ready...
Print Sample Prev
Data Contro
l
Screen
107
Acum putem aeza cuva cu proba de concentraie necunoscut n incint.
Dup nchiderea capacului se apas tasta READ; msurtoarea va fi executat. Pe
rndul de sus vor fi nregistrate numrul de ordine al probei, absorbana msurat
precum i concentraia calculat pe baza curbei de dinainte. Urmtoarele probe
necunoscute vor fi msurate pe rnd, la fel. La sfrit putem printa rezultatele.
Dup validarea tuturor parametrilor, cu tasta F5 trecem n fereastra Quantitative
Standard Table.

















Apsm tasta READ, pe rndul de sus, lng concentraia introdus n
prealabil, va plpi cursorul. Aici trebuie introdus cu tastele numerice valoarea
absorbanei, apoi se valideaz cu ENTER. La sfrit cu tasta Esc validm curba de
calibrare. Apsm F2 i intrm n fereastra "Manipulate", unde "View Curve" ne
afieaz curba de calibrare, iar "View Equati" ne arat ecuaia pe baza creia
aparatul va calcula concentraia probelor necunoscute, dup ce le-a msurat
absorbana. Apsnd "Keyin Factor" putem edita parametrii K1 i K0 ai ecuaiei.
Dac nu dorim folosirea factorului, ne ntoarcem cu "Prev Screen". Cu tasta
"Sample Measure" (F2) ajungem n fereastra de msurare propriu zis. Acum
putem aeza cuva cu proba de concentraie necunoscut n incint. Dup nchiderea
capacului se apas tasta READ, msurtoarea va fi executat. Pe rndul de sus vor
fi nregistrate numrul de ordine al probei, absorbana msurat precum i
concentraia calculat pe baza curbei de dinainte. Urmtoarele probe necunoscute
vor fi msurate pe rnd, la fel. La sfrit putem printa rezultatele.




12:00:00 QUANTITATIVE 500.0nm
0.000A Standard Table
--------------------------------
------ Sample No. Conc.(
G/L)
ABS
1 1.0000 0.1
2 2.0000 0.2
3 3.0000








Number from 0.3 to 3.0...
Access Mani-
Repeat
Prev
Data Pulate Screen
108
f) CINETIC
n acest mod de msurare nregistrm variaia absorbanei n timp la o
lungime de und fix; pe baza curbei nregistrate se poate calcula activitatea. O
aplicaie tipic este analiza activitii enzimatice. Alegnd punctul patru din meniul
principal System, ajungem n acest mod de msurare. Apare fereastra Parameter
Setup.















De aici putem introduce sau edita parametrii de msurare. Putem ncrca i
parametri salvai anterior. Avem acces la urmtorii parametri:

Wavelength: Lungimea de und aleas (200-1100 nm);
Sampling number:

Numrul probelor; valorile care vor fi folosite la calculul
activitii (2-20);
Lag Time: Un interval de timp n secunde, dup pornirea msurtorii,
pe durata cruia nu dorim s folosim datele pentru calcul
(2-9999);
Rate Time: Intervalul de timp dup Lag Time, pe durata cruia dorim
s folosim datele pentru calcul (3-9999 sec);
Delay Time: Timpul de ntrziere a msurtorii dup apsarea tastei
READ (0-50 sec);
Have
Unit(Yes/No):
Setnd Yes, vom putea alege dintre 12 uniti de msur;
Factor
(default=1):
Putem seta un factor de care s se in cont la convertirea
variaiei de absorban n activitate (0-9999.9);
Aktivitate = Factor * ABS/min (panta de variaie a absorbanei)
Low Value: Limita de jos al ecranului grafic la msurtoare (-0.3-2.99
A);
12:00:00 KINETIC 500.0nm
0.000A
Parameter
Setup


1.Wavelength(nm) :500.0
2.Sampling Number :5
3.Lag Time(sec) :2
4.Rate Time(sec) :12
5.Delay Time(sec) :0
6.Have unit(Yes/No)? :No

7.Factor(default=1) :1.0
8.Low Value(ABS) :-0.30
9.High Value(ABS) :3.00
10.Measure Temperature :None
11.Overlay Screen :Yes
12.Print every cycle :No

Number from 2 to 99
Load Save Print Sample Next
Param Param Data Contro
l
Screen
109
High Value: Limita de sus al ecranului grafic la msurtoare (- 0.29-
3.00A). Aceasta trebuie s fie mai mare dect cea de jos cu
min. 0.1.
Measure
Temperature:
Posibilitatea termostatrii: none, 25, 30, 37C. Are sens
doar n cazul echiprii cu accesoriu de termostatare;
Overlay Screen: Yes nseamn c msurtorile succesive vor fi afiate
suprapuse n fereastr. Numai ultima msurtoare se poate
analiza (Manipulate);
Print Every Cycle: S se printeze dup fiecare msurare sau nu.

Dup setarea lor, parametrii pot fi salvai pentru utilizri ulterioare. Dup
validarea parametrilor, intrm n fereastra de msurare cu F5. Aezm proba n
incinta de lucru, apoi apsm tasta READ. Msurtoarea va porni, vor trece
intervalele delay time i lag time, dup care curba va fi trasat pe ecran. Putem opri
oricnd msurtoarea cu tasta ESC.
Dup terminarea msurtorii se va executa calcularea activitii; rezultatul
va fi afiat n partea de jos a ecranului. Ptrelele de pe curb arat punctele de
calculaie. T arat parametrul rate time, ABS/T rata de variaie a absorbanei,
iar C/T rata de variaie a concentraiei n cazul utilizrii unui factor.



De aici putem printa datele sau le putem afia sub form de tabel (cu tasta Data
List). Cu tasta F2 (Manipulate) obinem dou noi opiuni de analiz. n submeniul
Show Track putem deplasa o dreapt vertical cu ajutorul tastelor sgei, evalund
12:00:00 KINETIC 405.0nm
0.540A
1.00

ABS

0.35
-0.30
60 90 120 sec
AT=60.0
Factor=3253.000
AABS/AT=0.11308( ABS/min)
AC /AT=367.86414( U/L/min)
ABS =0.00188T + 0.27194
Press READ when ready
Data Mani- Clear Print Prev
List pulate Graph Data Screen
110
curba astfel. Linear Fit aeaz peste curb o dreapt de regresie. Opiunea Original
va reafia curba iniial.

APLICATII : 1. Trasarea unei curbe de etalonare
Dependenta coeficientului de extincie de concentraia substanei dizolvate
este un indiciu asupra existenei unor interaciuni ntre moleculele dizolvate, deci
este o preioas surs de informaii. n cadrul acestei lucrri se va trasa, pentru o
anumit substan etalon, a crei concentraie este cunoscut, graficul dependentei
extinciei de concentraie, adic E = E (c). Acest grafic va putea fi utilizat pentru :
a) determinarea concentraiilor unor soluii necunoscute (preparate pornind de la
etalon) , b) stabilirea domeniului de concentraii pentru care este valabil legea
Lambet-Beer, c) evidenierea unor eventuale interaciuni ntre moleculele de solvit
(de exemplu, moleculele de albastru de metilen avnd o structura aromatic
planar, tind s se agrege n soluie apoas, datorit forelor hidrofobe).
Plecnd de la soluia etalon care are o concentraie cunoscut, se prepar n
eprubete diferite diluii, cu ap distilat: 5%, 10%, 30%, 40%, 50%, 70%.
Pentru cazul n care se lucreaz la o singur lungime de und, din meniul principal
al spectrofotometrului se apas tasta . Cu tasta "Mode" se alege modul fotometric
de msurare (absorban). Valoarea lungimii de und se alege corespunztor culorii
soluiei, urmrind diagrama culorilor complementare (dac etalonul este albastru de
metilen se va selecta = 480 nm ). Prima msurtoare se va efectua cu ap
distilat: pentru a ine cont de valoarea blancului, se aeaz cuva umplut cu
solvent (ap) n suportul de cuve i se apas tasta AUTO ZERO. Dup ce se
salveaz rezultatul, se nlocuiete cuva care conine blancul (ap distilat) cu o
cuv care conine pe rnd, soluiile preparate din etalon, salvnd de fiecare dat
rezultatul. n final, toate valorile extinciilor vor aprea n tabel, care poate fi printat
ulterior.
Se va trasa graficul E =E(c), innd cont c pentru c = 0 E = 0 (graficul
ncepe din origine), observnd creterea extinciei odat cu concentraia soluiei.
Apoi se va determina spectrofotometric extincia soluiei (soluiilor) necunoscute,
iar pe baza graficului se va stabili concentraia acesteia. De asemenea se va observa
111
c poriunea liniar a graficului reprezint domeniul de concentraii pentru care
legea Lambert Beer este strict valabil.
2. Determinarea concentraiilor diferitelor forme ale hemoglobinei n
soluii i n snge
Hemoglobina se poate afla n soluii sub trei forme diferite:
oxihemoglobina, deoxihemoglobina i methemoglobina ( fig.10.6) . Formele oxi i
deoxi trec reversibil una n cealalt n funcie de presiunea parial a oxigenului n
soluie, au fierul heminic sub forma Fe
2+
i sunt active din punct de vedere
fiziologic n procesul de transport al oxigenului. Forma met apare sub aciunea
unor oxidanti puternici , are fierul heminic sub forma Fe
3+
i este inactiv din
punct de vedere fiziologic. Conform fig. 4. spectrele de absorbie ale acestor forme
difer ntre ele , iar coeficienii de extincie molari au valori diferite n funcie de
lungimea de und. Punctele de intersecie a curbelor coeficienilor de extincie se
numesc puncte isosbestice, adic au aceeai absorbtivitate pentru lungimea de und
corespunztoare lor. n cazul hemoglobinei, un interes deosebit l reprezint
concentraia total de hemoglobin n snge (hemoglobinemia ) dar i proporia de
methemoglobina din hemoglobina total. Concentraia hemoglobinei n snge
(hemoglobinemia) se poate determina convertind toate formele de hemoglobin la
methemoglobina, cu ajutorul unei soluii ajuttoare de ferocianur de potasiu, dup
care se efectueaz msurarea fotometric a concentraiei la lungimea de und 540
nm, unde absorbtivitatea molar (coeficientul molar de extincie) are valoarea
maxim = 11
.
10
3
M
-1
cm
-1
.
Fie proba de snge care conine soluia de methemoglobin diluat de d ori
ft din sngele proaspt recoltat. Extincia probei n cuve de 1 cm grosime va fi:
E
Hb
540
=
met
540

.
c , de unde rezult concentraia c
Hb
= E
Hb
540
/
met
540
, dar
concentraia real n snge va fi de d ori mai mare, adic
c
Hb
= ( d /
met
540
)
.
E
Hb
540
.
Proporia de methemoglobin se calculeaz dup determinarea extinciilor
soluiei de hemoglobin rezultat din hemoliza la dou lungimi de und diferite:
112
prima este 525 nm unde formele oxi i met au un punct isosbestic, iar a doua la 540
nm unde diferena de absorbtivitate ale celor dou forme este maxim (vezi
fig.10.6.) . Deoarece se lucreaz cu soluii saturate cu aer, n care se poate
considera c toat hemoglobina activ este sub forma oxi, cantitatea aflat sub
forma deoxi se neglijeaz. La 525 nm cele dou forme au aceeai absorbtivitate,
deci extincia se poate scrie sub forma:
E
525
=
525
.c
Hb,
iar la 540 nm , unde absorbtivitile difer ,
E
540
=
oxi

540
. c
oxi
+
met

540
. c
met
.
Apoi se ine cont de faptul c concentraia n forma oxi reprezint de fapt diferena
c
oxi
= c
Hb
c
met .
Dac se calculeaz rapoartele coeficienilor de extincie pentru cele dou forme de
hemoglobin la 540 i respectiv 525 nm se obine:

met

540
/
525
= 1.091, respectiv
oxi

540
/
525
= 1.753.
innd cont de aceste valori, dup un ir de calcule simple, relaia pentru
procentul de methemoglobina din prob se poate scrie sub forma urmtoare:
MetHb % = (2.649-1,151. E
540
/ E
525
) :100 (1)

Prepararea soluiilor, citirea extinciilor i prezentarea rezultatelor.
Se pregtesc dou eprubete curate i uscate. n prima se pipeteaz 5 ml de
soluie methemoglobinizant (coninnd fericianur de potasiu) iar n cealalt 5 ml
de soluie hemolizant ( coninnd amoniac 0,1%) . n fiecare se adaug cte 0,02
ml de snge proaspt recoltat, utiliznd pipeta automat. Cele dou eprubete se
agit i se las n repaus circa 5 minute.Dup acest interval n prima eprubet va
aprea o coloraie brun, caracteristic methemoglobinei, iar n a doua coloraia va
fi roie-rubinie, caracteristic oxihemoglobinei. Aceste probe se vor plasa n cuve
standard de 1 cm. Pentru determinarea hemoglobinemiei se va citi extincia soluiei
din prima eprubet (care conine ntreaga cantitate de hemoglobin convertit la
hemoglobina) la = 540 nm, fa de soluia methemoglobinizant ca blanc.
Valoarea obinut se noteaz E
Hb
540
. Procentul de methemoglobin se determin
113
folosind ca blanc soluia hemolizant i apoi citind extincile soluiei din eprubeta a
doua la 525 i respectiv 540 nm. Valorile se noteaz E
525
respectiv E
540
.
Hemoglobinemia se va calcula conform formulei prezentat anterior
inndu-se cont de factorul de diluie d = 5/ 0,02 = 251 i de valoarea
met

540
=
11
.
10
-3
M
-1
cm
-1
. Astfel,
C
Hb
= 22,8 E
Hb
540
mM. (2)
Masa molecular a hemoglobinei este 16 000 Da, o soluie milimolar
conine deci 1,6 g Hb/100ml, deci concentraia de hemoglobin se mai poate
exprima i astfel:
C
Hb
= 36,8

E
Hb
540
g/100ml snge. (3)
Procentul de methemoglobin se va calcula cu ajutorul formulei (1) .
Interpretarea rezultatelor se face innd cont c hemoglobinemia normal
are urmtoarele valori, raportat la vrsta subiecilor umani:

Aduli





Femei
Barbai

g/ 100 ml

12 - 16
14 18
Mm

7,5 - 10
8,7 - 11,2

Copii
Nou- nscui
Sugari
Precolari
colari
16 - 25
10 - 15
11 14
12 -16
10 15,5
6,2 9,3
6,8 - 8,7
7,5 - 10

n mod normal mai puin 0,3 % din hemoglobina total se afl sub forma de
methemoglobin, aceast valoare crete semnificativ n cazul unor intoxicaii cu
substane oxidante cum ar fi nitrii, nitrai, chinone, nitribenzen, anilina, etc.
Precizia metodei se ncadreaz n limitele de 1%, chiar dac precizia aparatului
este mult mai bun. Valorile necunoscute se pot determina i folosind modul de
msurare cantitativ a spectrofotometrului, dup ce n prealabil a fost salvat n
memorie curba de etalonare. Este interesant de verificat dac rezultatele coincid.


114

IV. INTERACIUNEA RADIAIILOR CU MATERIA

11.1 CLASIFICAREA RADIAIILOR, SURSE DE RADIAII

Definiie: Numim radiaie fenomenul fizic de transmitere la distan a
energiei fr a fi nevoie de un mediu purttor. Studiul complet al unui fenomen
radiativ presupune investigarea mecanismelor i a legilor care guverneaz: a)
producerea lor; b) propagarea (care, conform definiiei, poate avea loc n vid) i c)
absorbia energiei pe care o transport.
Clasificarea radiaiilor
Dup natura lor, radiaiile pot fi corpusculare i electromagnetice.

Radiaiile corpusculare sunt compuse din particule de substan avnd o
anumit energie cinetic. Ele pot fi subdivizate n funcie de sarcina i masa
particulelor transportoare ale energiei, conform schemei de mai jos:

Radiaii
corpusculare
Neutre
Incrcate
electric
Neutroni,
0
1
n .
Particule elementare nucleare,
neutre, cu numr de mas 1.
Protoni,
1
1
p, care sunt nuclee de hidrogen.
Particule |
+
(
+1
0
| )
Sunt compuse din pozitroni
(antiparticula electronilor) rezult din
dezintegrarea radiaoctiv de tip beta plus sau
prin generarea de perechi.
Particule | (
1
0
| )
Acestea sunt electroni, rezult din
dezintegrarea radiaoctiv de tip beta minus,
poart o sarcin elementar negative, numr
de mas zero, masa lor fiind egal cu 1/1840
uniti atomice de mas.
Particule o (
2
4
o )
Ele sunt nuclee de heliu, rezult din
dezintegrarea radiaoctiv de tip alfa, poart
dou sarcini elementare pozitive iar masa lor
este egal cu patru uniti atomice de mas.

115

Radiaiile electromagnetice sunt emise i absorbite n natur sub form de
cuante (fotoni). Fotonii sunt particule fr mas de repaus, ce transport, fiecare, o
cantitate de energie ce poate fi calculat cu expresia E = hv, unde h = constanta lui
Planck (6,625
.
10
34
Js), iar v= frecvena radiaiilor. Masa lor de micare, m, se
leag de energie prin formula lui Einstein: E = mc
2
, c fiind viteza luminii n vid.
Curent, energia lor se exprim n electron-Voli: 1eV = 1,6
.
10
19
J .
Spectrul radiaiilor electromagnetice este extrem de extins. n funcie de
lungimile lor de und n vid ( =
c
/
v
), acesta se poate reprezenta ca n figura de mai
jos:


GAMMA ()
RNTGEN (X)
ULTRAVIOLET (UV)
VIZIBIL (VIS)
INFRAROSU (IR)
IR apropiat
IR mediu
IR ndeprtat
microunde
ultrascurte
TEL. MOBILA
SATELIT
CUPTOARE
RADIO
TV
scurte
medii
lungi
10
10
11

10
10

10
9

10
8

10
7

10
6

10
5

10
4

10
3

10
2

10
1

1
10
12

10
3

10
2

(m)
0,4
.
10
6

0,7
.
10
6


116
n funcie de energia transportat, radiaiile se clasific n radiaii
neionizante i radiaii ionizante. Distincia dintre aceste este convenional, i este
legat de efectele asupra materiei. Dac se iau n considerare energiile de ionizare
ale principalilor atomi ce compun materia vie (H, C, N i O), pot fi considerate
ionizante radiaiile ce transport energie mai mare de 13,6 eV pe particul, ceea ce
corespunde, n cazul radiaiilor electromagnetice, la o lungime de und < 100 nm.
Pe de alt parte, anumite macromolecule biologice pot fi ionizate la energii ce
depesc 5 eV, lungimea de und corespunztoare fiind < 200 nm.
Pentru simplificare, cnd este vorba de radiaiile electromagnetice, se
consider ionizante radiaiile din domeniile X i , neionizante cele din domeniile
radio, microunde, IR, VIS i UV.
Radiaiile corpusculare au importan biologic numai prin efectele lor
ionizante.
Surse de radiaii. Acestea pot fi naturale i artificiale.
Sursele naturale au fost singurele la care a fost expus biosfera (i
populaia uman) pn n epoca modern. Acestea sunt la rndul lor cosmice i
telurice. Principala surs cosmic de radiaii este soarele. Acesta emite tot
spectrul de radiaii electromagnetice i toate radiaiile corpusculare.
Dintre cele electromagnetice, numai o mic parte ajung la suprafaa solului,
fiind absorbite de cromosfera solar i atmosfera terestr. Astfel, vaporii de ap i
bioxidul de carbon atmosferice absorb n IR, iar stratul de ozon absoabe UV.
Proporia, n procente, a fotonilor neionizani care ajung la nivelul mrii este de 2%
UV, 45% VIS i 53% IR. Fotonii ionizani sunt absorbii n proporie covritoare
de moleculele straturilor atmosferei nalte, pe care le ionizeaz dnd natere
ionosferei.
Radiaiile corpusculare emise de soare, care formeaz vntul solar, sunt, de
asemenea mpiedicate s atig straturile inferioare ale atmosferei. Cele ncrcate
electric, datorit nclinrii axei Pmtului, intr oblic n cmpul magnetic al
acestuia i, fiind supuse forei Lorentz, se mic pe traiectorii elicoidale ce le
direcioneaz spre poli. Aici efectele lor ionizante asupra atmosferei nalte se
117
manifest prin apariia aurorelor polare. Neutronii nu ajung pn la Pmnt, timpul
lor mediu de via n stare liber, de aproximativ 1000 s, fiind mult mai scurt dect
durata cltoriei lor de la Soare i planeta noastr. Ei se vor transforma, fiecare,
ntr-un proton i un electron, care vor crete numrul particulelor ionizante,
ncrcate electric.
Alte surse cosmice de radiaii ionizante sunt furnizate de activitatea stelar.
Cele mai importante sunt razele cosmice, formate din nuclee atomice (mai ales
protoni) de mare energie care, prin coliziune cu nucleele gazului atmosferic produc
jerbe de particule secundare ionizante. Acestea din urm sunt atenuate odat cu
strbaterea atmosferei subjacente. Din acest motiv, efectele cresc cu altitudinea,
dublndu-se cu fiecare cretere cu 1500 m a acesteia.
Sursele telurice, sunt reprezentate de izotopii radioactivi din atmosfer i
scoar. Intensitatea radiaiilor emise de acestea depind de localizarea geografic.
Zonele aflate n vecintatea unor zcminte de uraniu, de exemplu, vor fi afectate
de nivele de radiaie mai mari.
Sursele artificiale sunt construite prin activitate uman. Expunerea la
radiaiile emise de acestea poate fi general (nedescriminatorie), profesional,
medical (exploratorie i terapeutic), sau accidental.
Expunerea general include toate persoanele aflate n vecintatea unei surse
de radiaii neionizante (lmpi, emitore radio, cuptoare, etc.) sau ionizante
(generatoare de raze X, sau centrale nucleare).
Expunerea profesional afecteaz personalul care, prin natura meseriei,
manipuleaz dispozitive sau materiale emitoare de radiaii (operatorii staiilor de
radio, medicii radiologi, sau profesionitii industriei de extracie, prelucrare i
utilizare a materialelor radioactive).
Expunerea exploratorie (diagnostic) i terapeutic este consecina
activitii medicale i are importan n cazul utilizarrii radiaiilor X i .
Radiografiile i radioscopiile de orice tip reprezint expuneri semnificative la
radiaii ionizante. Expuneri importante se produc n Rentgenterapia sau
cobaltoterapia afeciunilor tumorale.
118
Expunerea accidental are loc n cazul exploatrii defectuoase a surselor
artificiale de radiaii. Ea afecteaz, n primul rnd, personalul din vecintate i apoi
restul populaiei.

11.2. Efecte ale radiaiilor neionizante: Efectele chimice ale
radiaiilor neionizante
Energia absorbit de ctre gruprile cromofore ale moleculelor poate
antrena modificri (reacii) fotochimice ale acestora. Faptul este comun i
mpiedicarea lui poate fi regsit n pstrarea n flacoane brune sau opace a unor
medicamente sau buturi (bere, vin). n lumea vie, plantele i algele transform
curent energia luminoas n energie chimic stocat n compui organici de sintez.
Exist dou legi ale fotochimiei: 1) Un foton interacioneaz cu o singur
molecul i 2) n urma interaciunii, energia fotonului este absorbit integral.
De procese fotochimice sunt responsabile mai ales radiaiile UV, absorbite
de dublele legturi. Trecerea electronilor pe orbitalii de antilegtur (t-) este
echivalent cu ruperea acesteia urmat de posibilitatea refacerii n alte modaliti.
Ca urmare, pot avea loc unul din fenomenele:
- Refacerea ei n alt poziie (migrarea);
- Izomerizarea cis-trans;
- Adiia unui substituent, n general OH sau H;
- Dimerizarea;
- Ciclizarea intern.
Asupra macromoleculelor proteice, transformrile fotochimice
susmenionate se manifest mai ales asupra aminoacizilor aromatici i a secvenei
legturilor peptidice. Ele au ca efect schimbarea structurii primare (covalente) i,
consecutiv a celor secundare, teriare i cuaternare. Rezultatul este apariia unor
compui denaturai, lipsii de funcie biologic sau cu funcia alterat.
Macromoleculele de acizi nucleici sufer efecte fotochimice importante
datorit absorbiei radiaiilor UV de ctre dublele legturi ale bazelor azotate.
Dimerizrile i trimerizrile de baze, ciclizrile sau adiiile la acestea mpiedic
119
adoptarea unei geometrii corecte a helixurilor de acizi nucleici. Consecinele
biochimice rezid n imposibiliatea de recunoatere a acestora de ctre enzimele
implicate n citirea, utilizarea i transmiterea informaiei genetice.
Efectele biologice ale radiaiilor neionizante
La nivel de organism, procesele fotochimice pot fi implicate n dou
procese fiziologice:
a) Fotoconversia, prin care are loc tranformarea energiei luminoase n
energie chimic. Cel mai important este fotosinteza, realizat de majoritatea
plantelor vezi i de microorganismele plactonului oceanic.
b) Fotodetecia, n timpul creia energia luminoas este tratat ca semnal
informatic i mijlocete orientarea i ncadrarea organismelor n mediu. Ea este
ntlnit de la protozoare la plante i animale. Dintre acestea, numai animalele au
ochi - organe specializate n obinerea unor imagini fotografice ale mediului
nconjurtor.
Efectele locale, tisulare, ale radiaiilor neionizante depind de domeniul
spectral n care sunt plasate. Toate, cnd sunt absorbite, produc nclzirea
esuturilor, profunzimea de ptrundere scznd odat cu scderea lungimii de und.
Undele utilizate n telecomunicaii au efecte incerte. Cele cu lungimi de
und mari nu au fost incriminate n producerea unor afeciuni specifice. Undelor
din domeniul celor ultrascurte, utilizate n telefonia mobil, le-a fost atribuit, fr a
fi indubitabil, creterea riscului de tumori cerebrale n vecintatea urechii la care
este folosit telefonul.
Microundele au efect caloric exprimat i de profunzime, prin punerea n
oscilaie a dipolilor de ap, cea ce antreneaz creterea energiei de agitaie termic
din mediu. Faptul i-a gsit aplicaii practice att n balneofizioterapie (n tratarea
afeciunilor degenerative, cnd nclzirea local i vasodilataia consecutiv au
efecte benefice) ct i gospodreti - cuptoarele cu microunde.
Radiaia din domeniul IR produce nclzirea local, profunzimea lor de
ptrundere n esuturi fiind de civa milimetri. i acestea sunt absorbite mai ales de
120
apa tisular, dar i de macromolecule, prin excitatrea micrilor de vibraie ale
atomilor.
Indiferent de mecanismul nclzirii, creterea exagerat a temperaturii
produce denaturarea ireversibil a proteinelor i a structurilor celulare cu
manifestrile clinice curente ale arsurilor.
Radiaia vizibil nu are efecte patologice, ea fiind implicat n fotodetecie
i fotoconversie. Totui, dac este focalizat pe zone reduse, antreneaz arsuri
tisulare, cum este cazul privirii cu ochiul liber a soarelui mprejurare n care se
produc arsuri de retin.
Radiaia UV are cele mai multe efecte fotochimice, care se constat pn la
profunzimi de 2- 3 mm. Protecia mpotriva lor se face fiziologic prin pigmentarea
(bronzarea) pielii. Aceasta poate fi determinat genetic la populaiile din zonele
tropicale, sau poate fi indus de expunerea la UV a subiecilor cu tegumente de
nuane deschise.
n doze mici, radiaiile UV produc bronzarea prin transformarea tirozinei n
melanin, pigment absorbant al acestora. Dozele mari, absorbite n timp scurt,
produc fenomene similare arsurilor termice, cauza fiind denaturarea proteinelor.
Efectul bacteriostatic al dozelor mari de UV se explic mai ales prin mpiedicarea
multiplicrii microorganismelor, ca o consecin a interaciunii cu acizii nucleici.
Dozele moderate i repetate de ultraviolete au asupra tegumentelor, n timp
mai ndelungat, efecte carcinogene. (Tumorile maligne ale esuturilor epiteliale se
numesc carcinoame i o bun parte a celor cutanate, la vrstnici, se datoresc
radiaiilor UV). i acestea sunt consecine genetice rezultate din modificarea
acizilor nucleici.






121
11.3. INTERACIUNEA RADIAIILOR IONIZANTE CU MATERIA VIE
Studiul efectelor radiaiilor ionizante asupra materiei vii este mai complicat
i presupune parcurgerea mai multor etape:
- nelegerea mecanismelor de transfer a energiei lor ctre mediu i a
producerii ionizrilor care reprezint interaciunea lor primar cu substana.
- Descifrarea efectelor radiochimice produse de ionizri. Aceste efecte pot
avea loc fie datorit interaciunii directe cu macromoleculele sistemului viu, fie ca
o consecin a modificrilor induse de radiaii n solventului apos, cnd vorbim de
interaciuni indirecte.
- Transformrile radiochimice sunt urmate, n final de efecte biologice.
Interaciunea primar cu substan a radiaiilor corpusculare ncrcate
Principalul mecanism de transfer a energiei lor ctre mediul strbtut este
acela de ionizare a atomilor i moleculelor substanei. Responsabile de ionizri
sunt interaciunile electrostatice dintre particul i electronii atomilor.
Pentru o particul, scderea energiei ei i creterea energiei mediului este
caracterizat prin transferul linear de energie, TLE. Acesta reperezint energia
pierdut de particul pe fiecare unitate de lungime a traiectoriei sale.
Dac o particul face I ionizri pe unitatea de lungime, i energia medie
pierdut de la iniierea unei ionizri pna la producerea urmtoarei e
,
avem:
TLE = e I.
ntruct ntre dou ionizri particula produce i un numr de excitri ale
atomilor, e este mai mare dect energia de ionizare. Astfel, pentru aer i ap
valorile sunt de 32 eV i 34 eV, respectiv.
TLE crete cu ptratul sarcinei particulei i concentraia electronilor din
mediu dar nu are o valoare constant de-a lungul traiectoriei. Ea scade cu creterea
ptratului vitezei particulei deoarece, la viteze mari ale acesteia, timpul ct are loc
interaciunea cu electronii este mai redus. Unitatea curent utilizat, la strbaterea
mediilor apoase, este
KeV
/m.
122
Dac particula strbate o substan compus dintr-un element pur, n
vecintata fiecrui punct al traiectoriei este valabil expresia:
TLE
E
x
k
z
v
Zn = =
|
\

|
.
|
d
d
2

unde dE este pierderea de energie pe distana dx; k - o constant ce depinde
de natura particulei, a mediului i unitile de msur alese; z - numrul de sarcini
elementare ale particulei; v - viteza particulei n punctul dat; Z - numrul de ordine
ai atomilor mediului; n - numrul de atomi pe unitatea de volum a mediului
(concentraia atomilor mediului).
ntruct Z n = n
e
, concentraia electronilor n mediu, formula se poate
rescrie

TLE k
z
v
n =
|
\

|
.
|
2
e

Ultima expresie este util pentru calcularea valorii TLE n medii ce conin
amestecuri moleculare i pentru care n
e
este uor accesibil calculului.
Dac vom considera dou particule de aceeai energie cinetic, una grea i
alta uoar, prima va avea o vitez mai mic dect a doua. Din acest motiv
particulele grele au un TLE mai mare dect cele uoare de aceeai energie.
Privind din punctul de vedere a lungimii parcursului, particulele grele,
pierznd mai mult energie pe unitatea de lungime, au parcursuri mai scurte, pe
cnd cele uoare strbat n mediu distane mai mari. Dac o particul are energie E
i, pentru ntreg parcursul de lungime d, are un TLE mediu, notat TLE , aceste
mrimi se leag cu relaia simpl:
d
E
TLE
=
n plus, particulele cu mas mare (alfa i protoni), nu ricoeaz la ciocnirile
cu electronii, avnd traiectorii rectilinii; pe cnd cele uoare (electronii) dup
fiecare ciocnire cu un electron din mediu i schimb direcia, prezentnd traiectorii
sub forma unor linii frnte.
123
Consecine medicale
Particulele alfa (cu sarcin mare, z = +2, i mas mare m = 4 u.a.m.)
prezint un pericol redus n cazul iradierii externe, adncimea lor de ptrundere
nedepind stratul cornos al epidermei. O astfel de particul cu energia de 5,3
MeV (Mega electron-Voli) are un TLE tisular mediu de 130 KeV/m i ptrunde
la o profunzime de maximum 40 m. Iradierea intern ce poate avea loc datorit
absorbiei digestive sau respiratorii a unor radionuclizi alfa-emitori duce la
iradieri importante ale celulelor vecine locului unde se fixeaz i se acumuleaz
atomii radioactivi.
Protonii (z = +1 i m = 1 u.a.m.) se comport aproximativ similar ntruct,
conform formulelor precedente, au TLE de 16 ori mai mic iar lungimea traiectoriei
de 16 ori mai mare.
Particulele beta (electroni cu z = 1 i m =
1
/1850 u.a.m.), datorit masei
foarte mici au viteze extrem de mari, ceea ce conduce la valori de TLE foarte
reduse, cu parcursuri n esuturi mult mai lungi. Ele pot produce consecine att
datorit iradierii externe ct i celei interne. La energii de zeci de MeV, particulele
beta au parcursuri n esuturi de 1 ... 2 cm.
Interaciunea primar a neutronilor cu substana
Neavnd sarcin electric, neutronii nu interacioneaz electrostatic cu
componentele atomilor, fiind, prin sine, fr proprieti ionizante. Ei produc
|
n
p
o
S u b s t a n t a
T r a s e e l e i o n i z a r i l o r p o d u s e d e
p r o t o n i i c i o c n i i d e n e u t r o n i C a p t u r n e u t r o n i c

124
ionizri indirect, datorit interaciunilor cu nucleele atomice. Aceste interaciuni
sunt difuziunea i captura neutronic.
Difuziunea neutronilor este consecina fenomenului de ciocnire mecanic
dintre acetia i nucleele atomilor, n urma cruia nucleele ciocnite (intele) preiau
parte din energia cinetic a neutronilor (proiectilele). n urma unei succesiuni de
ciocniri, neutronul i pierde progresiv energia cinetic. Cum n mediile biologice
mai mult de jumtate de nuclee sunt de hidrogen, iar legile ciocnirilor elastice arat
c energia preluat de int crete cu scderea masei acesteia, protonii de energie
mare rezultai din cicniri vor fi principalii responsabili de producerea ionizrilor.
ntruct probabilitatea ciocnirii nucleelor este destul de mic, parcursurile
neutromilor ntre dou ciocniri sunt lungi, ceea ce explic marea lor putere de
penetrare. Pe de alt parte, masele proiectilului (neutron) i intei (proton) sunt
aporoape egale iar neutronul ricoeaz dup fiecare ciocnire, efectele ionizante
fiind difuze. De exemplu, n ap, un neutron cu energia de 2 MeV i-o reduce la 1
eV dup 18 ciocniri, n medie.
Captura neutronic este o reacie nuclear produs de neutronii leni, cu
energii inferioare a 1KeV. n urma capturii rezut un nucleu izotopic de mas
superioar cu 1 u.a.m., care este n stare excitat. Dezexcitarea lui se produce prin
emisia unei radiaii . Schema general a transformrilor este:

Z
A
Z
A
X n Y +
+
0
1 1
* (radioactiv)
foton



Z
A
Y
+1
(stabil)
Fotonii , sunt n continuare responsabili de ionizri prin mecanisme ce vor fi
sumarizate n continuare.
Interaciunea fascicolelor de fotoni X i cu substana.
Dac un fascicol de radiaie X sau , monocromatic (fotoni
monoenergetici) strbate normal un strat de substan, la ieire el se va gsi atenuat.
125
Notnd I
o
intensitatea radiaiei incidente, I intensitatea celei emergente pe aceeai
direcie, i cu x grosimea stratului se demonstreaz teoretic i se constat
experimental c atenuarea fascicolului respect legea:
I I
x
=

o
e

; e fiind baza logaritmilor, iar coeficientul de atenuare
linear. Se mai constat c depinde att de energia fotonilor ct i de natura
materialului strbtut.
Proprietile atenuante ale unui material fa de o radiaie cu fotoni de
energie dat se caracterizeaz prin grosimea de njumtire (x
1/2
) care este
grosimea stratului care reduce intensitatea radiaiei emergente la
I
o/2. nlocuind n
formul i logaritmnd ambii membri ai egalitii se obine:
ln
/
1
1 2
2
= x ;
de unde rezult relaia dintre grosimea de njumtire i coeficientul de atenuare
linear:

x
1 2
2
/
ln
=

Dac se vor face msurtori pe alte direcii dect cea a fascicolului incident
se vor gsi intensiti de radiaii diferite de zero pentru fotoni de energii mai mici
sau pentru electroni accelerai. Aceasta arat c interaciunile a radiaiilor X i cu
substana sunt complexe, n urma acestora rezultnd radiaii difuzate: unele
mprtiate iar altele secundare. nseamn c reducerea intensitii fascicolului
(atenuarea lui) are loc att prin absorbia energiei lui de ctre substan ct i prin
difuzia energiei pe alte direcii i sub alte forme dect cele ale fotonilor fascicolului
incident. Energia transportat de fascicolul incident (Winc) se va regsi integral,
distribuit ntre cea a fascicolului emergent (Wemg), energia absorbit de substana
strbtut (Wabs, transferat mediului) i energia radiaiei difuzate (Wdif).
Ultimele dou reduc intensitatea (energia) fascicolului emergent i, cu ct
reprezint o fraciune mai mare din aceasta, coeficientul de atenuare linear ()
are valoarea mai mare.
126
Dei sunt mai multe tipuri de interaciuni care reduc intensitatea fascicolelor
de fotoni X i , de importan practic sunt numai trei: efectul fotoelectric, efectul
Compton i generarea de perechi (efectul de materializare).

Efectul fotoelectric se manifest prin absorbia integral a energiei unui
foton de ctre un electron al unui atom. Energia lui se distribuie integral ntre
energia necesar extraciei din atom i energia cinetic a electronului expulzat
(fotoelectronului). n acest caz, efectele ionizante se datoresc fotoelectronilor, care
se comport similar radiaiei |. Energia lor va fi absorbit de mediul strbtut. Pe
de alt parte, atomii excitai prin expulzarea unui electron din pturile inferioare
revin n stare fundamental prin tranziii ale celor din pturile superioare. Astfel de
tranziii sunt responsabile de emisia unor radiaii secundare de fluorescen (X n
cazul atomilor grei sau UV n cazul celor uori). Energia radiaiilor astfel difuzate
este, n general, neglijabil.
Atenuarea prin efect fotoelectric a fascicolului se descrie cantitativ prin
coeficientul de atenuare linear
f
, care crete cu probabilitate producerii efectului.
Aceasta depinde pronunat de energia fotonilor incideni i de natura atomilor int.
Efectul fotoelectric este deosebit de important n cazul fotonilor de energii reduse
care strbat materiale ce conin elemente grele.
Aplicaiile practice ale efectului fotoelectic se regsesc n alegerea i
construcia filtrelor pentru realizarea imaginilor radiografice. ntruct nu sunt
Winc = Wemg + Wabs + Wdif
Winc Wemg
Wabs
Wdif
Substan

127
potrivite explorrii radiologice de profunzime, radiaiile cu fotonii de energii mici
(sub 50 KeV) sunt atenuate n fasciculele policromatice emise de tuburile Rentgen
cu filtre din cupru. Pe de alt parte, contrastul optim al imaginilor radiografice se
obine n domeniul 60 ... 120 KeV, unde efectul fotoelectric nc este manifest.
Efectul Compton apare la ciocnirea dintre un foton i un electron
(considerat liber sau slab legat). Rezult un electron de recul, care primete o parte
din energia fotonului incident i un foton difuzat, cu energie (i frecven) mai mici
dect a celui incident. Acest efect este semnificativ ca importan cnd energiile de
legare a electronilor n atom pot fi considerate neglijabile fa de energiile fotonilor
incideni. n urma ciocnirii, energia fotonului incident se regsete n energia
transferat electronului de recul i energia fotonului difuzat . Electronii de recul au
energii suficiente pentru a produce ionizri similare razelor beta, iar fotonii
difuzai, n funcie de energia pe care o mai au, pot produce fie alte efecte Compton
fie efecte fotoelectrice.
Dac n cazul efectului fotoelectric aproape ntreaga energie pierdut de
fascicolul incident este transferat substanei absorbante, n cazul efectului
Compton o parte este emis de substana traversat sub form de radiaie
mprtiat sub unghiuri mari fa de cea incigent. n mediul biologic, energia
radiaiei difuzate (Wdif) este de 4 ... 5 ori mai mare dect energia transferat
electronilior i absorbit (Wabs) n zona strbtut de fascicol. Ca urmare, efectele
iradierii prin radiaia mprtiat se vor manifesta pn departe de zona intit de
fascicolul incident.
Atenuarea fascicolului incident se caracterizeaz cantitativ printr-un
coeficient de atenuare linear pe care-l vom nota
C
. Acesta scade lent odat cu
creterea energiei fotonilor dar crete exprimat odat cu numrul de electroni din
unitatea de volum (densitatea materialul). Astfel se explic proprietile absorbante
deosebite ale metalelor grele, cum este plumbul.
Geanerarea de perechi are loc atunci cnd un foton de energie nalt
traverseaz cmpul electrostatic al unui nucleu. Dac acest cmp este destul de
intens, energia fotonului se materializeaz, prin apariia unui electron (e

) i a
128
unui pozitron (e
+
, antiparticula electronului). Materializarea nu poate avea loc dect
dac energia fotonului depete de dou ori energia de repaus a unui electron
(0,511 MeV). Pragul teoretic al energiei fotonului este hv > 2
.
0,511 = 1,022 MeV.
n practic, atenuarea prin generare de perechi depete n amploare celelalte
fenomene la energii cu mult mai mari, nentlnite n practica medical, (5 MeV
pentru plumb i 25 MeV pentru ap i carbon).
Diferena dintre energia fotonului i cea necesar materializrii, este
regsit ca energie cinetic a electronului i pozitronului. Aceast energie este
absorbit de mediu (Wabs), prin ionizri similare celor produse de radiaia |.
Spre deosebire de electron, viaa pozitronului este scurt. Dup ncetinirea
responsabil de ionizri, la ntlnirea unui electron, perechea pozitron - electron
sufer reacia de anihilare, energia particulelor transformndu-se n dou cuante ,
fiecare cu hv = 0,511 MeV. Aceste cuante sunt emise pe o direcie oarecare, n
sensuri opuse, i intr n componena energiei difuzate (Wdif). Fotonii de anihilare
pot produce, n alte zone dect cea supus iradierii primare, efecte fotoelectrice sau,
mai ales, Compton.
Dac ne referim numai la pierderea de energie a fascicolului incident prin
generarea de perechi, aceasta se caracterizeaz prin coeficientul de atenuare linear

p
. Pierdere se datorete n special absorbiei de ctre mediu, energia fotonilor
difuzai fiind o fraciune redus din cea a fotonilor ce a generat perechea.
Coeficientul global de atenuare linear va fi suma celor trei,
corespunztoare fiercruia dintre efecte:
=
f
+
C
+
p

Contribuia independent la scderea energiei radiaiei incidente depinde de energia
fotonilor i de mediul strbtut. n ap, fasciculele de fotonii cu diferite energii sunt
atenuai dup cum urmeaz:
hv < 50 KeV -------> predomin efectul fotoelectric
50 KeV < hv < 20 MeV -------> predomin efectul Compton
hv > 20 MeV -------> predomin generarea de perechi
129
Indiferent de efectul considerat, radiaiile X i , prin natura lor au
proprieti ionizante directe slabe. Ionizrile importante sunt indirecte i se datoresc
electronilor accelerai care rezult n urma fiecruia din cele trei efecte discutate
mai sus.


























130
11.4. EFECTELE RADIOCHIMICE ALE RADIAIILOR IONIZANTE
Procesele chimice care au loc dup ionizarea unor molecule de ctre radiaii
se numesc efecte radiochimice. Aa cum se va vedea, ionizarea conduce la ruperea
legturilor covalente simple cu formarea de radicali liberi. Acetia sunt fragmente
de molecul avnd electroni nemperecheai (celibatari), ceea ce i face extrem de
reactivi. Reaciile date de radicalii liberi sunt responsabile de toate consecinele
chimice pe care le au radiaiile ionizante asupra sistemelor vii.
n ecuaiile chimice prezena electronului nmperecheat se semnaleaz cu
un punct plasat n dreapta sus a radicalului, de exemplu OH
.
(radical liber oxidril)
sau H
.
(radical hidrogen).
La iradierea unui sistem viu, vor suferi ionizri att moleculele solventului
apos ct i moleculele lui biologice. Apa va suferi procesul de radioliz, radicalii
liberi rezultai vor da reacii care se vor repercuta, n moduri variate asupra
macromoleculelor sistemului. Realizndu-se prin intermediul solventului, acestea
se numesc efecte radiochimice indirecte. Consecinele ionizrii macromoleculeor
se numesc efecte radiochimice directe.

Efectele radiochimice indirecte ale radiaiilor ionizante
Radioliza apei
Ionizarea unei molecule de ap are loc dup reacia
H
2
O ------> H
2
O
+
+ e

La impactul cu particula ionizant electronul, de mas mai mic, va avea o
vitez mai mare i va fi proiectat departe de ionul de ap. Din acest motiv ionii vor
rmne n vecintatea traiectoriei particulei iar electronii mprtiai mai la distan.
Fiecare din produii de ionizare este instabil transformndu-se conform
reaciilor:
H
2
O
+
------> H
+
+ OH

.
(lng traiectorie)
e

+ H
2
O ------> H

.
+ OH

(la distan)

131
Principalele reacii ale compuilor de radioliz
Radicalii liberi formai se pot recombina oricum, dar distribuia lor spaial
este puin propice re-formrii apei:
H

.
+ OH

.
------> H
2
O
n schimb, radiacalii liberi de acelai tip se pot combina ntre ei:
H

.
+ H

.
------> H
2
(la distan)
OH

.
+ OH

.
------> H
2
O
2
(lng traiectorie)
Dac hidrogenul molecular este netoxic, apa oxigenat (H
2
O
2
) este un agent
oxidant foarte puternic, ce produce denaturarea ireversibil a proteinelor.
S-ar prea c efectele denaturante rmn cantonate lng punctele de
ionizare, dar nu este aa din cauza prezenei oxigenului molecular n mediile
biologice. Radicalii H
.
dau lanuri de reacii n urma crora oxigenul este fixat ca
ap oxigenat:
H

.
+ O
2
------> HO
2
.
(radical peroxid de hidrogen, oxidant extrem
de puternic)
2 HO
2
.
------> H
2
O
2
+ O
2


H

.
+ O
2
------> HO
2
.

s.a.m.d...
Radicalii hidroxil i peroxid pot fi responsabili i de oxidarea unor grupri
din structura moleculelor organice, mai ales a celei SH, cu formarea unor puni
SS , dup reaciile generale:
R
1
SH + HSR
2
+ 2 OH

.
------> R
1
SSR
2
+ 2 H
2
O
R
1
SH + HSR
2
+ 2 HO
2
.
------> R
1
SSR
2
+ 2 H
2
O
2

Rezultatul acestor reacii este apariia n timp a unor macromolecule cu
structuri primare alterate i modificate ca funcie.

132
Efectele radiochimice directe ale radiaiilor ionizante
Moleculele organice, la fel ca i moleculele de ap pot fi ionizate la nivelul
unei legturi, urmarea fiind ruperea ei i apariia unor radicali liberi organici
susceptibili de a se combina ntre ei i/sau cu cei rezultai din radioliza apei. Dac
lum cazul a numai dou molecule organice afectate rezult 4 radicali liberi:
RaRb ------> Ra
.
+ Rb
.

RcRd ------> Rc
.
+ Rd
.

Aceti radicali se pot lega ntre ei n orice combinaie i, n plus, fiecare
poate adiiona radicali H

.
sau OH

.
din mediul apos. Rezult c ansa de refacere a
moleculelor originale este foarte mic n raport cu cea de apariie a unora
modificate. Adesea, n cazul unor molecule complexe, excesul de energie nu
rmne localizat i s rup legtura, ci se distribuie la mai multe legturi sau se
transfer de la o molecul la alta. Aceste reacii de transfer a energiei nu sunt
imediate. Uneori strile active persist mai multe ore sau zile i reaciile
radiochimice se prelungesc mult dup iradiere. Astfel de post-efecte sunt foarte
evidente la proteine i acizi nucleici.
Oxigenul din mediu produce peroxidarea n lan a macromoleculelor,
similar mediului apos, conform reaciilor:
RaH + OH
.
------> Ra
.
+ H
2
O
Ra
.
+ O
2
------> RaO
2
.
(radical peroxid organic)

RbH + RaO
2
.
------> RaOOH + Rb
.


Rb
.
+ O
2
------> RbO
2
.


RcH + RbO
2
.
------> RbOOH + Rc
.


133
Rc
.
+ O
2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
s. a. m. d. . . . .
S-a putut, pornind de la o singur ionizare, s se pun n eviden formarea
unui lan de 70 de peroxizi organici.
Aciunea asupra proteinelor
Proteinele sunt denaturate prin fragmentri, polimerizri, peroxidri i
formri de puni disulfidice. Efectele cele mai nocive asupra funciilor celulare sunt
produse prin inactivarea enzimelor.
Aciunea asupra acizilor nucleici
Modificrile radiochimice ale acizilor nucleici sunt foarte complexe.
Alterarea structurii chimice a bazelor azotate produce disocierea dublelor helixuri
datorit imposibilitii de asociere a bazelor n perechi. Pe de alt parte, fiecare
dintre lanurile dublului helix poate suferi ruperi. Frecvena ruperilor unui singur
lan este de 10 ori mai mare dect cea a ruperii n acelai loc a ambelor lanuri.
Faptul are importan fiindc n primul caz moleculele pot fi reparate, pe cnd n al
doilea nu. Aa se explic sensibilitatea crescut la radiaii a organismelor haploide
(cu stocare a informaiei genetice ntr-un singur lan AND) fa de cele diploide
(cnd stocarea se face ntr-un dublu helix).
Ruperile, chiar pe un singur lan, dac nu sunt reparate rapid, pot conduce la
ramificri cu adoptarea de structuri tridimensionale, nerecognoscibile biochimic.
Degradarea radiochimic a acizilor nucleici este responsabil de efectele asupra
sintezelor celulare (alturi de inactivarea enzimelor) i, ntr-o faz ulterioar, de
cele genetice.






134
11.5. EFECTELE BIOLOGICE ALE RADIAIILOR IONIZANTE
Apariia efectelor biologice la organismele expuse radierii este rezultatul
desfurrii n timp a trei faze:
Faza reaciilor elementare, foarte scurt, de ordinul a 10
15
secunde, care
corespunde la a) interaciunea primar care are ca rezultat excitarea i ionizarea
moleculelor i b) la reaciile radio-chimice prin care apar radicali liberi i rupturi
moleculare. Ea nu este influenat de temperatur.
Faza reaciilor chimice, care dureaz de la cteva secunde la mai multe ore.
n timpul ei, radicalii liberi i moleculele excitate reacioneaz ntre ele i cu alte
molecule.Viteza acestor reacii crete cu temperatura, din care cauz se mai
numete faza termosensibil.
Faza modificrilor funciilor i structurilor celulare corespunde efectelor
manifeste ale bolii de iradiere. Acest stadiu biologic poate dura de la cteva ore la
mai muli ani. (Subiecii puternic iradiai n noaptea accidentului de la Cernobl au
sucombat pn a doua zi la amiaz, pe cnd unele dintre victimele
bombardamentului de la Hiroima au supravieuit cu simptome manifeste 10 ... 20
de ani.)
Studiile experimentale asupra culturilor de celule iradiate cu doze
creasctoare de radiaii au condus la urmtoarele concluzii privind unele funcii
celulare:
Funcia celular Doze mici Doze mari
Creterea accelerat diminuat
Mitoza ncetinit oprit
Moatea celular tardiv precoce

Este necesar o precizare a sensului terminologiei utilizate pentru moarte
celular. Moartea celular precoce nseamn c n urma iradierii mor chiar celulele
iradiate. Moartea celular tardiv caracterizeaz populaia care este condamnat s
dispar la tentativa de reproducere a descendenilor de generaia a II-a, a III-a, a
IV-a . . .etc.. Ea semnific faptul c celulele iradiate i pierd capacitatea de
reproducere indefinit.
135
Primele constatri asupra radiosensibilitii au fost fcute de Bergonie-
Tribondeau n 1906. El a enunat o lege care sumarizeaz caracteristicile
celulelor susceptibile la efecte letale:
O populaie de celule este cu att mai sensibil le radiaii cu ct 1) are
viteza proceselor metabolice mai mare; 2) este iradiat ntr-o faz mai precoce a
mitozei i 3) este mai nedifereniat. Sunt nedifereniate celulele care au un viitor
cariocinetic lung, deci morfologia i funciile nu sunt definitiv fixate.
Aceast lege ofer un ghid simplu pentru msurile de radioprotecie
medical i pentru nelegerea cazurilor n care se practic radioterapia.
Radioprotecia impune s nu fie expuse radiaiilor esuturile sntoase sensibile:
cele embrionare, cele hematopoetice, gonadele, epiderma i mucoasa intestinal. Pe
de alt parte, beneficiaz de radioterapie tumorile cu celule de radiosensibilitate
mare. Acestea sunt, n general, sarcoamele (n special blastoamele) care sunt
tumori cu celule derivate din esuturile mezenchimale (nedifereniate). Acestea
satisfac n foarte bun parte cerinele specificate de Bergonie-Tribondeau.














136
11.6. UTILIZAREA DETECTORULUI GEIGER-MLLER SAU A
DETECTORULUI CU SCINTILAIE PENTRU DETERMINAREA
VARIAIEI CU DISTANA A FLUXULUI DE RADIAII
Emiterea spontan de radiaii alfa, beta i gamma de ctre unele
nuclee se numete radioactivitate natural. Prin emiterea unei particule alfa are loc
o transformare a elementului dat ntr-un alt element pentru ca numrul de ordine al
elementului scade cu 2 uniti, iar cel de mas cu 4 uniti. Exemplu:
o
4
2
222
86
226
88
+ Rn Ra . n general:
Z
A
X


2
4
He +
Z-2
A-4
Y
n cazul emiterii de radiaii beta numrul de mas A rmne constant, iar numrul
de ordine Z crete cu o unitate. Exemplu: Bi e Pb
214
83
0
1
214
82
+

n general: X
A
Z

e
0
1
+ Y
A
Z 1 +
.
Particulele beta emise, nu se gsesc n nucleu, ele apar n timpul tranziiei de la
proton n neutron i invers cnd se emit i particule de mas i sarcin zero numite
neutrino i antineutrino. Exemplu: p
1
1
n
1
0
+
+1
0

+
o
.


La emisia radiaiilor gamma, numrul atomic i cel de mas rmn
constante, deoarece nucleul trece dintr-o stare excitat la una normal.
Dac la un moment dat t = 0, exist N
0
nuclee radioactive, dintr-un element
oarecare, atunci numrul de nuclee rmase nedezintegrate N, dup timpul t (n sec )
va fi: N = N
0
.e
- t
, unde este constanta de dezintegrare. Valoarea ei depinde
numai de structura intern, specific fiecrui radionuclid, nu i de condiiile
exterioare. Legea de mai sus ne indic faptul c numrul de nuclee rmase
nedezintegrate scad exponenial cu timpul.





137
Pentru a caracteriza stabilitatea nucleului se utilizeaz n loc de , timpul de
njumtire T
1/2
. El reprezint intervalul de timp n care se dezintegreaz jumtate
din numrul de nuclee iniiale, N
0
/2 , deci relaia va fi:

2
0
N
= N
0
.e
-

t
T
1/2
=

2 ln

Timpul de njumtire este foarte diferit de la un nucleu la altul, fiind cuprins ntre
10
9
ani i cteva s (microsecunde).emple de timpi de injumatatire












N
N
0



N
0
/2


N
0
/4


T
1/2
T
1/4
t
Fig. 11.1. Scderea n timp a numrului de nuclee instabile
N
0
.
138
Alt mrime folosit n practic este activitatea unei surse radioactive,
notat cu A i definit ca numrul de dezintegrri care au loc ntr-o secund, ntr- o
cantitate de substan radioactiv. Activitatea este deci dat de scderea n timp a
numrului de nuclee instabile N:
A = -
dt
dN
= N
Activitatea se msoar n dezintegrri pe secund . O dezintegrare pe
secund se numete becqerel ( Bq). n practic e folosete Curie, 1 Ci = 3,7 . 10
10

dez/sec sau Bq.
Pentru a pune n eviden i pentru a msura radiaiile nucleare se folosesc
detectoare de radiaii Detectoarele de radiaii se bazeaz pe faptul c radiaiile alfa,
beta i gama produc direct sau indirect o cantitate de ioni prin mediile prin care
trec. Nucleele care apar n urma dezintegrrii alfa i beta sunt n general excitate i
revin instantaneu la starea fundamental prin emisia de fotoni gamma. Exist ns
i nuclee care rmn n stare excitat un timp mai ndelungat, stare metastabil.
Aceste nuclee dau natere la o radioactivitate gamma veritabil, caracterizat prin
propria perioad. Un fascicul de radiaii emis de o surs radioactiv, dup ce a
strbtut un mediu oarecare poate fi caracterizat prin viteza de numrare produs
ntr-un detector adecvat:
V =
timp
impulsuri nr.

Pentru cazul cnd ne intereseaz mai mult efectele biologice produse de ctre
radiaiile, alfa, beta sau gama se folosesc alte mrimi ca: doza de ioni (msurat n
Rentgen), doza de energie absorbit ( msurat n Gray), sau doza biologic (
msurat n Sievert) etc.
La trecerea radiaiilor printr-un mediu oarecare ele sunt aborbite i intensitatea lor
scade exponenial cu distana parcurs n mediu conform relaiei:
I = I
o
.e
-
x

unde I
0
este intensitatea fluxului incident, I intensitatea fluxului emergent,
coeficientul de atenuare, iar x distana parcurs prin mediul studiat.
139
Put 11.Puterea penetranta a radiaiilor:
Puterea p
Hrtie Lemn Beton

Coeficientul se poate determina msurnd vitezele de numrare ale
contorului, V
2
i V
1
, corespunztoare grosimilor stratului parcurs x
2
i x
1,

folosind expresia:
= k
1 2
1 2
ln ln
x x
V V

Pentru a elimina valoarea constantei k, se fac msurtori relative pentru dou
materiale, cunoscnd coeficientul de atenuare al unuia dintre ele. Pentru fier =
0,455 cm
-1
, iar pentru plumb = 0,3 cm
-1
.
Detectorii se clasific dup principiul lor de funcionare. Un dectector este
format din dou pri: a) un mediu n care radiaia produce un efect specific
(scintilaii, ionizri, efect fotoelectric sau efect Compton) i b) un sistem de
nregistrare a efectului produs de radiaii.
Detectorii cu scintilaii se bazeaz pe apariia de scintilaii n cristalele
anorganice sau organice, atunci cnd acestea sunt lovite de particulele respective.
Fotonii scintilailor sunt nregistrai cu ajutorul unui fotomultiplicator producndu-
se un impuls de tensiune. Amplitudinea impulsului este proporional cu numrul
de scintilaii deci cu energia lor. Din acest motiv detectorul cu scintilaii se
folosete att la numrarea particulelor emise ct i la msurarea energiei lor.
Detectorul Geiger- Muller este un detector cu ionizri n gaz. El este constituit
dintr-un tub metalic catodul- i un fir central-anodul- ambele fiind introduse ntr-






140
un cilindru de sticl, etan. Amestecul de gaze conine n general heliu sau argon
plus vapori de alcool etilic. Datorit simetriei cilindrice, intensitatea cmpului n
jurul anodului va scdea rapid odat cu distana fa de aceasta. ntre cei doi
electrozi se aplic o diferen de potenial relativ mare, pn la 2500 V. Radiaiile
alfa i beta ionizeaz direct gazul din tub, pe cnd radiaiile gama ionizeaz gazul
indirect prin electronii secundari.


Schema detectorului (contorului) Geiger-Muller: ubul Geiger-Muller




Utilizarea detectorului cu semiconductori RADIATION ALERT.
Acest tip de detector portabil are tubul GM ncasat n instrument. La
intrarea unui flux de particule ionizante n tub, acesta va declana un impuls
electronic care este semnalizat prin apariia unei lumini roii i printr-un semnal
sonor. Fondul cosmic existent permanet poate fi nregistrat n fiecare minut i are
valori ntre 5 25 impulsuri pe minut, depinznd de locaie i de altitudine. Se
selecteaz nivelul de alert la poziia X1, iar dac numrtorul depete scala
aparatului se trece la nivelurile superioare X10, X100. Semnalul sonor poate fi
auzit acionnd butonul ON/OFF/AUDIO. Se observ c att indicatorul vizual de
pe ecran ct i cel audio diminueaz progresiv pe msur ce se trece la nivele
Anod

Gaz la
presiune
joas Catod

Sursa
Aparat
de
msur
141
superioare de alert. Pentru a determina ce tip de radiaie (alfa, beta sau gamma)
provine de la o anumit surs, procedm astfel:
- detectorul se poziioneaz vertical cu partea din spate n apropierea sursei,
iar dac se nregistreaz un semnal, el poate proveni de la radiaia gamma
sau beta de energie mare (deoarece razele gamma de energie joas i razele
X cu energie de 10-40 keV nu pot penetra peretele tubului GM, dar pot
ptrunde prin fereastr).
- Se plaseaz o folie de aluminiu ntre instrument i sursa, iar dac indicaia
ecranului se modific, este vorba de radiaie beta. Majoritatea izotopilor
conin att radiaie gamma ct i beta.
- Dac n poziia de mai sus nu se inregistreaz semnal, se poziioneaz
instrumentul cu fereastra spre surs. Semnalul nregistrat poate proveni n
acest caz de la radiaie alfa, beta sau gamma de energie joas. Dac se
plaseaz o foaie de hrtie ntre fereastr i surs, iar semnalul nceteaz, este
vorba despre radiaie alfa.
Intervalul de operare al instrumentului: 0-50 mR/h = miliRentgens per or,
sau 0-500 Sv/h = microSieverts per or (gamma i X) i 0-50000 CPM =
counts per minute (alfa si beta). Sensibilitatea instrumentului avnd ca referin
izotopul
60
Co este de 25 impulsuri/sec/1mR/h. Dac se utilizeaz pentru
detecia
125
I, se recomand 0.5 mCi sau mai mult. Nivelul minim detecie este
n acest caz aproximativ 0.02 Ci .

142


Fig.11.3. a) Panoul f rontal al detectorului de radiaii. b) Poziionarea sursei de radiaii fa de
detector.

Modul de lucru:
a) Indiferent ce tip de radiaie urmeaz a fi detectat, se va face o determinare
iniial a fondului cosmic, adic numrul de impulsuri/100 secunde nregistrate de
instrument n lipsa sursei studiate. La fiecare 100 secunde se noteaz valoarea
(timp de cinci minute) i apoi se va face media, care reprezint de fapt fondul
cosmic. Determinarea numrului de particule radioactive care ajung la detector se
face plasnd sursa succesiv la diferite distane: 20 cm, 15 cm, 10 cm, 5 cm, 1 cm.
Se nregistreaz de fiecare dat numrul de impulsuri / 100 secunde, repetndu-se
msurtorile de cteva ori i apoi se face media pentru fiecare distan aleas.
Numrul de particule care provin exclusiv de la surs se afl prin scderea fondului
cosmic din valoarea medie a impusurilor pentru fiecare distan. Se va reprezenta
grafic numrul de impulsuri provenite de la surs, n funcie de distan, iar din
grafic se va determina distana de njumtire. Se completeaz tabelul urmtor:

143

Distana sursa contor
cm
Nr. impulsuri/100 sec
Msurat Media
Nr.imp./100sec provenite
de la sursa (media)
Infinita (fond cosmic) 0
1cm
5 cm
10 cm........

b) Se fixeaz distana dintre sursa radioactiv i detector la una din valorile de mai
sus. Se introduc pe rnd, ntre surs i detector, plci de plumb de diferite grosimi
i se nregistreaz de fiecare dat numrul de impulsuri. Se va reprezenta grafic
numrul de impulsuri provenite de la surs n funcie de grosimea stratului de
material absorbant, iar din grafic se va determina distana de njumtire. Apoi se
va calcula coeficientul de atenuare conform relaiei X
1/2
=

2 ln
=

693 , 0
.




















144

BIBLIOGRAFIE SELECTIV

- W. Hoppe, W. Lohmann, H. Markl, H.Ziegler, Biophysics, 1993, Springer-
Verlag, Berlin Heidelberg.
- A. C. Guyton, Textbook of Medical Physiology, 1986, W.B. Saunders
Company.
- Biophysical Journal- published monthly by the Rockefeller University
Press, No. June 1994 - February 2000.
- A. Prentice, Human energy on trap, New Scientist, 1987, 20/11.
- J. Pope, Medical physics, 1984, Heinemann Educational.
- G.T. Absten, S.N. Joffe, Lasers in medicine, an introductory guide, 1985,
Chapman and Hall.
- L.Cromwell, F.Weibell, E.Pfeiffer, Biomedical instrumentation and
measurement, 1980, Prentice Hall.
- G. B. Devey, P. N. T. Wells, Ultrasound in medical diagnosis, Scientific
American, May 1995,p.98.
- J.L. Ball, A.D. Moore, Essentials physics for radiographers, 1980,
Blackwell Scientific.
- A.C. Upton, The biological effects of low level ionizing radiation,
Scientific American, febr.1982, p.29.
- M. Goldman, A guide to the X-ray department, 1986, Wright, Bristol.
- M. Hollins, Medical Biophysics, 1990, Macmillan Education.
- Mioara Tripsa, Biofizic Medical, 1997, Cris Book Universal.
- M. Isac, C. Filipescu, R.M Isac, Biofizica de la Big-Bang la ecosisteme,
1996, Ed. Tehnica Bucuresti.
- Mioara Tripa, Simona Cavalu, Medical biophysics for students in
Medicine and Dentistry, 2000, Ed.Univ. Oradea.
- Y. Najean & col., Medecine Nucleaire, 1990, Ellipses, Paris.
- M. Dnoreanu, Introducere n biofizic, 2003, Ed. Medical- Univ. Cluj-
Napoca.
- M. Burgeat, D.Kayser, Biophysique du neurone, 1982, Masson, Paris-New
York-Milan.
- A. Bertrand, D. Ducassou, J.C. Healy, J. Robert, Biophysique: Physico-
chimie et Electrophysiologie, 1979, Masson, Paris-New York-Milan.
- M. Telia, M. Dnoreanu, A. Gvru, D. Talo, V. Lupea, H. Porumb,
Lucrri practice de Biofizic Medical, 1986, Litogr. I.M.F. Cluj-Napoca.
- Simona Cavalu, Medical biophysics and electronic medical devices, 2005,
Ed. Univ. Oradea.




145


CUPRINS

I. PROPRIETILE GENERALE ALE LICHIDELOR

1. Determinarea coeficientului de tensiune superficial a lichidelor ...1
2. Determinarea coeficientului de vscozitate..7
3. Densimetrie.12
4. Metode calorimetrice..19

II. MSURAREA PROPRIETILOR ELECTRICE ALE
LICHIDELOR BIOLOGICE
5. Conductometrie..26
6. Studiul unei pile de concentraie34

III. PROPRIETI OPTICE ALE LICHIDELOR BIOLOGICE

7. Determinarea indicelui de refracie al unei soluii cu ajutorul
refractometrului ABBE..40
8. Determinarea concentraiilor soluiilor optic active cu ajutorul
polarimetrului47
9. Microscopie optic. Ochiul-un sistem optic complex.......70
10. Spectrofotometrie. Absorbia i emisia radiaiilor de ctre
molecule 83
Utilizarea spectrofotometului UV-VIS pentru trasarea unei curbe
de etalonare i determinarea diferitelor forme ale hemoglobinei n
soluii i n snge92

IV. INTERACIUNEA RADIAIILOR CU MATERIA VIE

11. Clasificarea radiaiilor. Surse de radiaii. 113
Efectele radiaiilor neionizante. ...117
Interaciunea radiaiilor ionizante cu materia vie, efecte
radiochimice.128
Utilizarea detectorului Geiger-Muller sau a detectorului cu
scintilaie pentu determinarea variaiei cu distana a fluxului de
radiaii 133

BIBLIOGRAFIE SELECTIV142




146

SIMONA CAVALU

Colaboratori :
Pop Leontin Loredana B









EDITURA UNIVERSITII DIN ORADEA 2006
147