Cromatografie

Separarea diferitelor substane dintr-un amestec constituie una dintre cele mai importante probleme ale chimiei analitice. Metoda cromatografic se bazeaz pe repetarea echilibrului de repartiie a componentelor unui amestec ntre o faz mobil i una staionar. Datorit diferenelor n repartiie are loc deplasarea, cu vitez diferit, a componentelor purtate de faza mobil de-a lungul fazei staionare. n funcie de natura fazelor se disting urmtoarele tipuri de cromatografie! "aza mobil "aza staionar Denumirea tipului de cromatografie #ichid #ichid #ichid-lichid %##& #ichid Solid #ichid-solid %#S& $az Solid $az-solid %$S& $az #ichid $az-lichid %$#& n general, metodele de separare cromatografice se mpart n dou categorii! n prima intr cele care se bazeaz pe interaciunea diferit a componenilor cu faza staionar %repartiie, adsorbie, schimb ionic i afinitate&, iar n a doua cele care se bazeaz pe mrimea diferit a componenilor %e'cluziunea steric&. Schema de principiu a unui cromatograf %## sau #S& este reprezentat mai (os. )l se compune din! surs de eluent, dispozitiv de introducere al probei, coloan i un detector la care se adaug urmtoarele ane'e! sursa de eluent, dispozitiv de msurare i reglare a debitului, dispozitiv de introducere a probei, instrument de nregistrare a semnalului furnizat de detector. Principiul cromatografiei este urmtorul! eluentul trece prin dispozitivul de introducere a probei, preia proba de analizat i o introduce n coloana cromatografic. *oloana cromatografic este sediul procesului de separare. Din cauza interaciunii moleculelor cu faza staionar, componentele din amestecul de analizat rm+n n urma eluentului, n funcie de diferenele care e'ist ntre constantele echilibrului de repartiie ntre cele dou faze.

Semnal

,imp

Cromatografie de lichide i picul cromatografic

*omponentele amestecului separat vor iei din coloan la timpuri diferite, dup care sunt introduse de eluent n detector. -cesta transform diferena unei proprieti fizice ntre component i eluent, ntr-un semnal electric, proporional cu concentraia componentului din eluent. nregistrarea grafic a semnalului detectorului n funcie de timp se numete cromatogram %fig. .&. ,impul t/ la care apare ma'imul unui pic, msurat din momentul introducerii probei se numete timp de reinere sau retenie i este o caracteristic calitativ a componentului respectiv. nlimea picului h sau aria lui, -, sunt caracteristici cantitative, proporionale cu cantitatea componentului din prob. Se noteaz cu tM %timp mort& timpul n care eluentul i componentele care nu interacioneaz cu faza staionar parcurg distana p+n la detector. -stfel putem e'prima viteza zonei componentului %v& i a eluentului %u& prin urmtoarele ecuaii! v 0 #1t /, u 0 #1tM, unde # este lungimea coloanei. Coeficientul de partiie K reprezint raportul dintre concentraia molar %cS& a substanei n faza staionar i concentraia substanei n faza mobil %c M&! 2 0 cS1cM. "raciunea din timpul de reinere n care o molecul se gsete n faza mobil se noteaz cu / i reprezint probabilitatea ca molecula s se gseasc n faza mobil, respectiv fraciunea din totalul moleculelor care se afl n faza mobil. 3 - / reprezint restul moleculelor care se gsesc n faza staionar. #a echilibru reiese c! 4M 3 3 u = = v= c m 4M / 4 = , / 0 4M + 24S 3 + 2 4S 3 + 5 , / 0 v1u 0 tM1t/, 3+ 2 S 3 / c S 4S 4M 4M unde 4M i 4S reprezint volumul fazei mobile, respectiv staionare iar 5 0 24S14M reprezint raportul dintre cantitatea total de substan aflat n faz staionar i cantitatea total de substan aflat n faza mobil i se numete factor de capacitate. 6entru o specie oarecare - aflat n amestec, factorul de capacitate 5- va fi! 2 4 t tM 5 7 2 7 t / % 7& t M 5- = - S = / = = , = 4M tM 5 - 2 - t / %-& t M "actorul de capacitate 5 este o funcie de parametri de solubilitate, n cazul cromatografiei de separaie lichid-lichid. 6ractic, n vederea obinerii unei rezoluii ma'ime pe unitatea de timp, trebuie ca valoarea lui 5 s fie cuprins ntre . i 8. "actorul de separare 9 pentru o anumit coloan de separare este un parametru utilizat pentru descrierea diferenelor ce apar ntre vitezele de migrare a componenilor. Se definete ca fiind raportul dintre factorii de capacitate 5- i 57, ai componentului 7 %care trece mai greu prin coloan& i - %componentul care se elueaz mai repede& aflai n amestec. :na dintre cele mai importante caracteristici ale unui sistem cromatografic este eficiena sau numrul de talere teoretice. *u c+t o coloan va avea mai multe talere pe unitatea de lungime cu at+t eficacitatea ei de separare va fi mai bun. ;umrul de talere ; poate fi definit din cromatograma unui singur pic astfel!
t/ ;0 t t/ t/ = 3> < = 8,8= < 31 .
. .

unde! t/ este timpul de retenie, t este dispersia aceleiai benzi n uniti de timp, iar < este valoarea segmentului pe abscis rezultat din intersecia celor dou tangente prin punctele de infle'iune ale picului. ; este un numr adimensional. -ceeai valoare a lui ; . poate fi obinut din volumul de retenie 4/ i dispersia 4 e'primat n uniti de volum. ;umrul de talere ; este o msur a eficienei ntregului suport al coloanei. ? alt msur a eficienei coloanei, folosit curent n cromatografie este dat de nlimea unui taler @ %nlimea echivalent a unui taler teoretic&! . . .t / % 7& . t / % - & #< . 4/ # # . = @ = = ;0 , , @ 0 , / 0 . 3> t / <- + <7 ; # 4
.

unde # este lungimea coloanei cu umplutur. 6entru caracterizarea separabilitii a doi componeni s-a introdus noiunea de rezoluie, notat /S. n e'presia rezoluiei s-a cutat s se lege mrimile care caracterizeaz proprietile termodinamice ale fazelor i componenilor precum i mrimile care caracterizeaz dinamica proceselor din coloan. /ezoluia este o noiune mai cuprinztoare, conin+nd i mrimile care caracterizeaz eficacitatea coloanei precum i selectivitatea ei. 6entru simularea unei cromatografii de lichide se va folosi produsul softAare Chemland produs de o echip format din programatori, designeri i animatori de la :niversitatea Massachusetts din -rmhest, :.S.-. %http!11soulcatcher.chem.umass.edu&. 6e l+ng programul de simulare propriu zis, pachetul softAare conine i un tutorial bine documentat i ilustrat cu desene i animaii. Simularea unor e'perimente reale de laborator, care se bazeaz pe probe, faze mobile i faze staionare reale, poate fi utilizat pe l+ng calitatea de material de nvare, formare priceperi i deprinderi i ca i o baz de date cu informaii reale despre cromatografia de lichide care poate fi utilizat oric+nd ca preambul la e'periment. 6e ntreg parcursul pachetului softAare, se pot observa cuvinte rezervate colorate n verde deschis. -ps+nd aceste cuvinte, se vor afia definiii sau informaii adiionale despre subiectul n discuie. -cestea se nchid apoi prin simpla apsare asupra lor. -cion+nd asupra te'tului albastru se va produce o legtur ctre informaii adiionale, animaii i simulri. ,e'tul albastru se transform n rou dup acionare. 6entru ntoarcerea la te'tul original, se acioneaz asupra te'ului colorat n rou. Algoritmul de lucru 3. Se utilizeaz programul pentru formarea deprinderilor de simulare astfel! 3.3. Se lanseaz programul n e'ecuie % Start/Programs/LC&B 3... Se intr n meniul aplicaiei %clic5 pe fereastra *hemland&B 3.C. Se intr n seciunea 2 %se apas tasta mouse-ului cu cursorul pus pe butonul din dreapta (os al ferestrei), unde apare o descriere general a cromatografiei i este simulat o coloan de separare n care se introduce un amestec format din doi componeni - i 7 n diferite concentraii molareB 3.=. Se ruleaz programul de simulare, in(ect+nd amestecul lichid n coloan % click pe butonul Elute i se obine n final, rspunsul 0 f%timp& sub form de picuri, separ+nd cei doi compui e'isteni n amestecB se obine o cromatogramB modific+nd concentraia componenilor - i 7 se obine o alt cromatogram. 3.8. Se acceseaz seciunea ! %butonul din dreapta (os al ferestrei) unde se va simula un e'periment al cror rezultate se noteaz pas cu pas n caietB 3.>. Se selecteaz categoria de compui %componeni ai acizilor nucleici, aminoacizi sau tDrosine i tDronine&B 3.E. Se selecteaz doi componeni aflai n amestec %de e'emplu, din categoria aminoacizilor se selecteaz lizina i glicina&B 3.F. Se selecteaz apoi faza mobil %mobile phase&, tipul coloanei %column t"pe&, debitul %flo# rate&, temperatura de lucru i tipul de detecie %detection&B este necesar de precizat c nu toate opiunile apar la fiecare amestec n parteB 3.G. Se ruleaz modulul de simulare %click pe butonul Elute&B 3.3H. Modific+nd parametrii mai nainte enumerai, pentru acelai amestec ales, se observ c cromatograma se modific odat cu schimbrile fcuteB 3.33. Se noteaz concluziile referitoare la modelul ales %valorile lui 2 i 9&B 3.3.. Se ruleaz modulul de simulare pentru alt categorie de compui % compound categories&, repet+nd paii 3.G-3.33B 3.3C. n final se compar datele e'perimentale obinute aleg+nd valorile optime pentru dimensiunile coloanei, tipul de coloan %column t"pe&, faza mobil %mobile phase&, debitul %flo# rate&, temperatura folosit, detecie %detection&, astfel nc+t s rezulte un factor de separare 9 cel mai bun.

.. 6entru separarea unor componeni necunoscui dintr-un amestec se acceseaz seciunea $ a programului %butonul din dreapta (os al ferestrei& i se procedeaz astfel! ..3. Se alege un compus din lista de compui cunoscuiB .... Se selecteaz faza mobil %mobile phase& %de e'emplu! apa& i condiiile e'perimentale! tipul de coloan %Sephade' >.8, medium particule size, # 0 C8cm, D 0 ..8cm&, debitul %.8m#1h - floA-rate&, temperatura %room temperature&, detecie %:.4. absorption detection&B ..C. Se ruleaz modulul de simulare %clic5 pe butonul )lute& i se noteaz rspunsul n timp al fiecrei substane cunoscute, pentru ca ulterior, aceste valori s poat fi comparate cu rspunsurile substanelor aflate n amestecurile necunoscute i pentru a identifica componenii respectiviB ..=. Se modific faza mobil i se noteaz rezultatele simulrilor acu aceastaB ..8. n continuare, se alege de la amestecul 3 din lista de compui necunoscui aflai n amestec % 3 I G&B ..>. Se alege faza mobil %e'! apa& i condiiile e'perimentale de lucruB ..E. Se ruleaz programul de simulare %click pe butonul Elute&B ..F. Se identific componenii din amestecul 3, conform cromatogramei obinute i listei de rspunsuri n funcie de timp a componenilor cunoscui, list care a fost alctuit anteriorB ..G. Se repet succesiunea de pai ..3-..F pentru celelalte F amestecuri necunoscute, iar datele obinute se trec ntr-un tabel.
Rezultate cromatografice (exemplu de simulare)

Substane cunoscute "aza mobil @idrochinon @.? "enol @.? o-;itrofenol @.? *atechol @.? o-*lorofenol @.? -cid clorogenic @.? $uaiacol @.? -cid vanilic @.? -mestec "aza mobil /spuns 3 @.? .=.. J .>.= min. . @.? ...3 J .=.3 min. C @.? .3.E J .>.> min. = 8 > E F G @.? @.? @.? @.? @.? @.? ...3 J .=.8 min. .C min. .3.E J .C.. min. .C.G min. ...3 J .C.E min. .3.E J ...E min.

/spuns ...3 min. .C.E min. ...G min. .=.3 min. .>.> min. .C.C min. .=.8 min. .3.E min.

Rezultate cromatografice pentru cromatografia de amestecuri

2 Substane identificate . ........ 3 @idrochinonJ*atechol C. -. vanilicJo-*lorofenol . .. @idrochinonJ$uaiacol . 3. ........ = 3. -. vanilicJ...... > . ......... 3 @idrochinonJ"enol 3. -. vanilic J ...... =

Interpretarea rezultatelor 3. Datele obinute se trec n tabele similare cu cele prezentate mai sus. Se urmrete corectitudinea nregistrrilor n tabel cu a(utorul schematizrii din tabelul urmtor!

Recapitularea noiunilor de cromatografie

;ume ,imp de migrare a speciilor nereinute, faza mobil ,imp de retenie a speciilor - i 7 -(ustarea timpului de retenie #rgimea picurilor #ungimea coloanei Debit 4olumul fazei staionare *oncentraia n faz mobil, respectiv n faz staionar

Simbol tM t/%-& i t/%7& t/%-&K , t/%7&K <-, <7 # " 4S cM, cS

Sursa cromatogram cromatogram t/%-&K 0 t/%-& - tM t/%7&K 0 t/%7& - tM cromatogram msurare direct msurare direct pregtirea coloanei pregtirea analizei

ntrebri 3. *um se obine o cromatogramL .. *um se realizeaz cromatografia lichid-lichid i care este aparatura necesar pentru separarea cromatografic a unui amestec de substaneL C. *e este rezoluiaL =. *e se nelege prin factor de separareL 8. )numerai cele mai importani pai care trebuie parcuri spre a obine o cromatogram.

Cromatografia de gaze
*romatografia de gaze reprezint acea tehnic cromatografic ce utilizeaz o faz mobil gazoas i o faz staionar lichid sau solid. )ste cea mai utilizat tehnic cromatografic, deoarece prezint o serie de avanta(e care i confer o adaptabilitate deosebit la problemele care pot apare n timpul analizei amestecurilor comple'e de componente. -stfel, prin utilizarea unui gaz drept faz mobil se realizeaz un transfer de mas rapid ntre faza mobil i faza staionar, ceea ce permite stabilirea echilibrelor de distribuie de multe ori ntr-un interval scurt de timp i obinerea unor separri eficiente corelate cu timp de analiz redus. 4+scozitatea sczut a gezelor permite utilizarea unor coloane lungi i nguste i n consecin creterea numrului de talere teoretice. "aza mobil fiind un gaz inert, dup separare componentele pot fi uor detectate deoarece faza mobil nu interfer la detecie. Dac este cazul, componentele separate pot fi analizate suplimentar prin metode spectroscopice cum ar fi spectrometria de mas sau spectrofotometria n M/. Singurele limitri ale cromatografiei de gaze sunt determinate de volatilitatea prea sczut sau instabilitatea termic a componentelor analizate. Ni aceste dezavanta(e pot fi ns limitate, de e'emplu prin transformarea compuilor respectivi n derivai care s aib volatilitate mai mare. ,ehnica se numete derivatizare i este larg utilizat n cromatografia de gaze.

3 ! "arametri de retenie specifici pentru cromatografia de gaze

n cromatografia de gaze, parametrii de retenie trebuie corectai pentru a ine cont de compresibilitatea fazei mobile. Din cauza acestei compresibilitOi, volumul i debitul fazei mobile cresc n timpul trecerii prin coloanO. -ceste creteri sunt cu at+t mai mari cu

c+t raportul dintre presiunea la intrarea n coloanO pi i presiunea la ieirea din coloanO po este mai mare. 6entru corectarea volumelor de retenie ca urmare a compresiei fazei mobile se definete un factor de corecie numit factor de compresie, care se noteazO cu % i are valoarea datO de ecuaia!

%=F& Pin+nd cont de factorul de compresie, vom putea defini un &olum de retenie corectat '(o i un &olum de retenie net '), conform relaiilor! %=G& %8H& :n alt parametru de retenie caracteristic pentru cromatografia gaz-lichid este &olumul de retenie specific 'g )l se definete ca volumul de retenie net raportat la HQ* i 3 g fazO sta 333iFCb ionarO lichidO.

%ml1gRQ2&

%83&

unde <S este masa de fazO staionarO lichidO din coloanO %n grame&, , este temperatura absolutO a coloanei, " debitul de fazO mobilO la ieirea din coloanO %n ml1sec&, iar t/K este timpul de retenie a(ustat al componentei %n secunde&. 4olumul de retenie specific este un parametru independent de aparat i de condiiile de lucru, caracteristic pentru solut i faza staionarO respectivO. )ste aadar un parametru calitativ, care s-ar putea utiliza pentru identificarea unei componente, nsO din pOcate determinarea sa e'perimentalO este dificilO pentru cO depinde de factorul de compresie (. 4olumul de retenie specific se poate e'prima i n funcie de coeficientul de activitate i presiunea de saturaie a componentei, consider+nd cO n sistemul cromatografic ea se gOsete ntr-o soluie e'trem de diluatO. /elaia, dedusO pe baza legii lui @enrD, este!

%8.& unde / este constanta generalO a gazelor, MS masa molecularO a fazei staionare, po presiunea de saturaie a componentei la temperatura coloanei, iar S coeficientul de activitate al componentei la diluie infinitO n faza staionarO. *oeficientul de activitate reprezintO o mOsurO a interaciunii dintre moleculele componentei dizolvate n faza staionarO lichidO i moleculele fazei staionare. DacO considerOm volumele de retenie specifice a douO componente care au picuri vecine i facem raportul lor, obinem pe baza relaiei %83&!

iar pe baza relaiei %8.&!

/ezultO deci!

%8C& /elaia %8C& ne aratO cO raportul dintre volumele de retenie specifice a douO componente cu picuri vecine este o mOsurO a selectivitOii sistemului cromatografic pentru componentele respective. -ceastO selectivitate, e'primatO prin coeficientul de separare 9, este determinatO de diferena dintre presiunile de saturaie sau coeficienii de activitate ai componentelor. -adar separarea a douO componente se va putea realiza n douO modalitOi!

n cazul unei serii omoloage de compui cu structuri chimice asemOnOtoare, coeficienii de activitate vor fi apro'imativ egali i separarea va avea loc n mOsura n care presiunile lor de saturaie, adicO temperaturile lor de fierbere, vor fi diferite. n cazul compuilor cu puncte de fierbere apropiate dar structuri chimice diferite, separarea se va produce dacO coeficienii lor de activitate vor fi diferii. -ceastO diferenO depinde de natura chimicO a fazei staionare.

3 # Analiza calitati$% &n cromatografia gaz'lic(id Retenia relati$% )i

indicii de retenie *romatografia este o e'celent metod de separare, dar care nu ofer nici un fel de informaii structurale despre componentele amestecului de analizat. Singurele informaii calitative obinute n urma analizei cromatografice sunt reprezentate de timpii de retenie ai componentelor %sau volumele de retenie corespunztoare&, ceea ce este foarte puin n condiiile n care acest parametru depinde foarte mult de condiiile de analiz! temperatura, debitul fazei mobile, natura i concentraia fazei staionare, lungimea i diametrul coloanei. n plus, este foarte posibil ca mai muli compui s aib acelai timp de retenie n condiii de analiz identice. -adar probabilitatea unor identificri calitative eronate este foarte mare dac ele se fac numai pe baza timpului de retenie. n vederea realizrii unor analize cromatografice calitative mai e'acte se folosesc urmtoarele metode! - determinarea unor parametri de retenie relativi, care depind n msur mai mic de condiiile de analizB - utilizarea unor detectoare specifice, care ofer anumite informaii i despre structura substanelor analizateB

- cuplarea cu tehnici spectrometrice %spectrometrie de masO, spectrofotometrie n infrarou&, care ofer informaii structurale nemi(locite despre componenii separai din proba de analizat. Dintre parametrii de retenie relativi, n analiza calitativ se utilizeaz retenia relativ i indicii de retenie Ko&ats. (etenia relati& se definete prin raportul dintre volumele de retenie specifice, sau timpii de retenie a(ustai, al compusului analizat i al unui compus considerat standard pentru analiza respectiv, conform relaiei!

%8=& /etenia relativ este dependent de temperatur i de natura fazei staionare, dar independent de celelalte condiii de analiz! lungimea coloanei, debitul de gaz purtOtor, factorul de compresie i uneori de raportul fazelor, ntruc+t ele afecteaz n mod egal timpul de retenie a(ustat al componentei de analizat i al standardului. )ste indicat ca timpul de retenie al standardului ales sO nu difere foarte mult de cel al compusului analizat. De aceea nu e'ist un compus standard universal, el aleg+ndu-se pentru fiecare amestec de analizat n funcie de condiiile concrete ale analizei respective. nsO n cazul unui anumit laborator, dac numrul compuilor care se analizeaz nu este foarte mare, este posibil s se foloseasc tot timpul acelai standard i s se creeze o banc de date proprie de retenii relative care s permit identificarea calitativ a compuilor respectivi. S-a constatat cO pentru o serie omoloagO de compui e'istO o relaie liniarO ntre numOrul atomilor de carbon i logaritmul volumului de retenie. -ceastO relaie a fost folositO pentru a defini indicii de retenie 2ovats. 2ovats a propus folosirea n-alcanilor ca i compui standard universali pentru analiza calitativO pe baza reteniei relative. )i prezint avanta(ul ca sunt uor accesibili i foarte stabili din punct de vedere chimic. *u a(utorul lor au fost definii nite parametri numii indici de retenie i o scal a acestor indici de retenie pe care fiecare alcan are o valoare egal cu *++ , n, n fiind numrul de atomi de carbon al alcanului. Mndicele de retenie al unui anumit compus , se determin prin interpolare ntre indicii de retenie a doi alcani, cu n i reapectiv n-. atomi de carbon, alei astfel nc+t timpul de retenie al compusului s fie situat ntre cei ai alcanilor respectivi. Se utilizeaz relaia!

%88& /ezultO!

sau dacO inem cont de faptul cO raportul timpilor de retenie a(ustai reprezintO reteniile relative!

%8>& unde r,/n este retenia relativO a componentei faO de alcanul n, iar rn-./n este retenia relativO a celor doi alcani. Mndicii de retenie se determinO pe o anumitO faz staionar i la o anumitO temperaturO. 6recizia determinrii crete atunci c+nd eficiena de separare a coloanei este suficient de mare pentru a ncadra compusul de analizat ntre doi alcani consecutivi ai seriei lor omoloage, cu alte cuvinte c+nd z03. 4alorile indicilor de retenie pentru o serie de compui pe diverse faze staionare au fost determinate i se gOsesc i n literatura de specialitate. *u a(utorul lor se poate aprecia calitativ posibilitatea separOrii a . compui pe o anumitO fazO staionarO. Se considerO cO o diferenO de cel puin CH de unitOi ntre valorile indicilor de retenie duce la o separare satisfOcOtoare, dei acest lucru nu este ntotdeauna valabil.

3 3 "rincipalele componente ale unui sistem cromatografic gaz'lic(id 3 3 ! *uportul fazei staionare
Dac faza staionar este lichid, ea trebuie s fie fi'at pe un suport solid adecvat. Suportul are rolul de a reine faza staionar sub forma unui film subire i uniform, permi+nd formarea unei interfee c+t mai e'tinse ntre faza mobil i faza staionar. n acelai timp ns, n cromatografia de repartiie suportul nu are voie s interacioneze cu componentele probei, nici fizic nici chimic. *ondiiile pe care trebuie s le ndeplineasc un suport utilizat n cromatografia gaz-lichid pe coloane cu umplutur sunt urmtoarele! suprafaa specific situat n intervalul 3-.H m.1gB inerie chimicB rezisten mecanic i stabilitate termic ridicatB dimensiuni uniforme ale porilor.

Deoarece nu e'ist un suport ideal care s corespund tuturor cerinelor, selectarea suportului se face n primul r+nd pe baza suprafeei specifice i ineriei chimice. *ontrar aparenelor, un suport nu este cu at+t mai bun cu c+t suprafaa sa specific este mai mare, deoarece la suprafee specifice foarte mari nu toat suprafaa ar fi acoperit de filmul de faz staionar lichid i ar e'ista pericolul adsorbiei componentelor. Din acest motiv se aleg n general suporturi cu suprafaa specific situat ntre 3-E m .1g. -cestor suprafee le corespund pori cu diametre situate ntre H,8 I8 Tm. :n alt parametru

important este volumul intern al porilor, care pentru un suport bun trebuie s fie n (ur de 3 ml1g. ? alt caracteristic important este granulaia suportului. Diametrul mediu al particulelor i uniformitatea acestora au o influen important asupra eficienei coloanei cromatografice. :n suport bun trebuie s fie constituit din particule c+t mai uniforme, de preferin sferice i cu diametre de valori apropiate. n acest mod crete eficiena de separare a coloanei, prin scderea nlimii echivalente a talerului teoretic, n conformitate cu ecuaia 4an Deemter %scade valoarea coeficienilor U i S care depind de iregularitatea mrimii particulelor i a spaiilor dintre particule&. ,ot din ecuaia 4an Deemter rezult c reducerea diametrului mediu al particulelor de suport determin creterea eficienei coloanei. -ceast reducere este ns limitat, deoarece dimensiuni prea mici ale particulelor ar duce la pierderi de presiune mult prea mari n coloan, deci presiunea gazului purttor la intrarea n coloan ar trebui s fie mult mai mare, ceea ce ar genera o mulime de probleme. $ranulaia suportului se e'prim n mod tradiional n mesh, care reprezint numrul de ochiuri al sitelor folosite pentru obinerea fraciunii respective, raportat la 3 inch %.,8= cm&. De e'emplu, un suport de FH-3HH mesh este constituit din particule care au trecut prin sita cu FH de ochiuri1inch dar au fost reinute de sita cu 3HH de ochiuri1inch. -cestei granulaii i corespund diametre ale particulelor ntre H,3C-H,38 mm. 6roprietile mecanice ale suportului sunt de asemenea importante deoarece sfr+marea particulelor, mai ales n timpul depunerii fazei staionare sau umplerii coloanei, determin scderea eficienei colanei. 3 3 ! ! +ezacti$area suporturilor *ea mai important caracteristic a unui suport al fazei staionare este ineria chimic. Deoarece nu e'ist materiale naturale corespunztoare condiiilor impuse unui suport cromatografic care s fie i suficient de inerte, este necesar modificarea suporturilor n sensul creterii acestei inerii chimice. Ma(oritatea materialelor utilizate drept suporturi sunt pm+nturi de diatomee, care din punct de vedere chimic sunt derivai de acid polisilicic. :nele dintre aceste materiale, mai ales cele care conin o'izi de fier i aluminiu, pot avea activitate catalitic i e'ist pericolul s catalizeze descompunerea fazei staionare, mai ales dac se lucreaz la temperaturi ridicate. -ceast activitate catalitic este n general corelat i cu activitate de adsorbie superficial, care are drept urmare adsorbia unei pri din componenta de analizat i apariia picurilor cu cozi. /educerea capacitii catalitice i activitii superficiale a suportului se face prin ndeprtarea aa-numitelor centre active de pe suprafaa acestuia. )'ist trei tipuri de asemena centri activi! - centre ba.ice, care determin formarea picurilor cu cozi n cazul soluilor cu caracter acid, de e'emplu acizi carbo'ilici sau fenoli. )'istena acestor centre se datorete o'izilor metalici %de "e, -l& care se gsesc n structura suportului. )liminarea lor se face prin splarea acid a suportului, av+nd loc concomitent i reducerea activitii catalitice. - centre acide, care formeaz picuri cu cozi n cazul compuilor bazici ca aminele sau anumii compui heterociclici. )liminarea acestora se realizeaz prin splare bazic.

- centre de legturi de hidrogen, care determin formarea picurilor cu cozi n cazul compuilor neutri, dar care pot da legturi de hidrogen! alcooli, aldehide, esteri, eteri, etc. )'istena acestor centre active se datorete e'istenei unor grupri silanolice %Si-?@& pe suprafaa suportului. ;eutralizarea acestora se realizeaz prin modificarea chimic a gruprilor respective, n special prin transformare n eteri sililici %Si-?-Si&. -ceast operaie se numete silanizare, iar reactivii de silanizare cei mai utilizai sunt clor-trimetilsilanul, diclor-dimetil-silanul, he'ametil-disilazanul i altele. )ste important ca aceti compui s aib to'icitate c+t mai redus i volatilitate ridicat, pentru ca reactivul de silanizare n e'ces s poat fi uor eliminat la terminarea reaciei. 6entru e'emplificare, reacia cu he'ametil-disilazanul poate fi reprezentat schematic astfel!

Modul n care a fost tratat suportul se indic n denumirea comercial a suportului, alturi de natura i granulaia suportului. De e'emplu, -< nseamn splat acid %acid Aashed&, iar DM*S nseamn c suportul a fost silanizat cu dimetil-diclor-silan, aa cum se poate vedea n e'emplul din "igura C.3!

"igura C.3. Semnificaia denumirii a suporturilor 3 3 ! # ,ipuri de suporturi Suporturile cele mai mult utilizate sunt cele pe baz de 2ieselghur sau pm+nt de diatomee, care conin acid polisilicic n form amorf hidratat, av+nd structur poroas i conin+nd cantiti variabile de o'izi metalici de "e, -l, Mg, *a, ;a, 2. -ceste suporturi sunt cunoscute sub diferite denumiri comerciale, cele mai utilizate fiind cele de tip *hromosorb. -cestea se gsesc n mai multe varieti, cele mai importante fiind! Chromosorb P %pin5& are culoare roz-roiatic i suprafa specific situat n intervalul =-> m.1g. -re avanta(ul c poate fi ncrcat cu o mare cantitate de faz staionar lichid %p+n la .8-CHV& i are rezisten mecanic ridicat. ;u este ns suficient de inert chimic. Din acest motiv se utilizeaz mai ales la separarea substanelor nepolare. Chromosorb 0 %Ahite& are culoare alb i suprafat specific mai mic, de 3-. m.1g. Din acest motiv se poate ncrca cu o cantitate mai mic de faz staionar lichid de cel mult 38V. -re inerie chimic bun, ns este friabil. -re aplicabilitate general, fiind utilizat la separarea tuturor claselor de compui, at+t polari c+t i nepolari.

Chromosorb 1 are suprafat specific i mai mic, de numai H,8 m.1g i se poate ncrca cu ma'im 8V faz staionar. -re ns avanta(ul de a combina ineria chimic a tipului < cu rezistena mecanic a tipului 6.

)'ist suporturi i de alt natur, dar care sunt mult mai puin utilizate. -semenea suporturi sunt cele pe baz de polimeri sintetici %de e'emplu teflon&, sticl i altele.

3 3 # -aza staionar lic(id

*ondiiile pe care o faz staionar lichid trebuie s le ndeplineasc sunt! S fie un bun solvent pentru componentele probei analizate, ns solubilitatea acestor componente s fie difereniatB S fie practic nevolatil la temperatura de lucru a coloanei %presiunea sa de vapori s fie mai mic de H,3 mm @g&B S fie inert din punct de vedere chimicB S aib o stabilitate termic c+t mai ridicat.

Dei alegerea fazei staionare este foarte important pentru realizarea unei analize bune, nu e'ist o regul general pe baza creia s se poat face aceast alegere, doar reguli semiempirice. )a este uurat dac se cunosc c+t mai multe date despre compuii analizai, n special structura chimic i temperatura de fierbere. ? asemenea regul empiric este cea a similaritii de structur, ceea ce nseamn c faza staionar trebuie s aib o structur asemntoare cu componenta analizat. -stfel, hidrocarburile se vor separa cel mai bine pe faze staionare parafinice %nepolare&, iar substanele polare pe faze staionare polare. /elaia %8C& ne-a artat c selectivitatea separrii a dou componente depinde de presiunile de saturaie ale acestora i de coeficienii lor de activitate. *oeficienii de activitate reflect interaciunile dintre faza staionar i componentele analizate. -ceste interaciuni pot fi de urmtoarele tipuri! 2nteraciuni nepolare, care se datoresc unor fore de dispersie %de tip #ondon& i se manifest ntre moleculele unor substane nepolare. Deoarece aceste interaciuni sunt slabe, separrile unor asemenea compui se vor produce n conformitate cu presiunile lor de vapori, adic ordinea de eluie din coloan va fi dat de punctele de fierbere ale componentelor analizate. 2nteraciuni dipol3dipol, care se stabilesc ntre molecule cu dipol permanent. -cestea sunt interaciuni puternice, iar separrile bazate pe ele se vor produce n conformitate cu polaritatea componentelor. Dac ntre moleculele fazei staionare i moleculele componentei e'ist fore de atracie puternice, se vor nregistra abateri negative de la legea lui /aoult, adic presiunea de vapori a componentei va fi mai mic dec+t cea prescris de aceast lege %SW3&. Drept urmare, concentraia componentei n faza mobil va fi mai mic i componenta va fi puternic reinut de faza staionar. Dac abaterea de la legea lui /aoult este pozitiv %SX3&, ceea ce se ntmpl n cazul compuilor cu polaritate diferit de cea a fazei staionare, presiunea de vapori a componentei va fi mai mare, concentraia sa in faza mobil de

asemenea mai mare dec+t cea prescris de aceast lege i n consecin componenta va fi slab reinut de faza staionar. 2nteraciuni de inducie, care se manifest ntre un dipol permanent i unul indus, care poate fi sau molecula fazei staionare sau molecula componentei analizate. Separrile bazate pe fore de inducie se vor produce n conformitate cu polarizabilitatea moleculei dipolului indus. )'emple de asemenea molecule sunt cele ale compuilor aromatici. 2nterciuni chimice, bazate pe formarea unor legturi chimice reversibile ntre ntre moleculele fazei staionare i moleculele compusului analizat %de e'emplu legturile dintre hidrocarburile nesaturate i ionii -gJ&.

;u numai natura fazei staionare lichide are importan asupra separrii ci i concentraia ei, adic ncrcarea fazei suportului cu faz staionar. -ceast ncrcare influeneaz valoarea factorului de capacitate 5K, care crete odat cu creterea cantitii de faz staionar din coloan. 6e de alt parte ns, eficacitatea de separare a coloanei scade odat cu creterea concentraiei de faz staionar, datorit creterii nlimii echivalente a talerului teoretic %crete valoarea parametrului df din termenul * din ecuaia 4an Deemter, df fiind diametrul mediu al filmului de lichid, considerat uniform, care este depus pe suport&. Se consider c este mai indicat s se foloseac coloane av+nd concentraii mai reduse de faz staionar pentru a evita scderea performaelor coloanei. Ni aceast reducere este ns limitat, pentru ca filmul de faz staionar s poat acoperi toat suprafaa suportului i a nu se nregistra adsorbia componentelor analizate pe suport. n cazul coloanelor clasice, cu umplutur, concentraia de faz stationar cea mai indicat este n (ur de 3HV, pentru suporturile de tip *hromosorb < sau 6. n cazul coloanelor capilare, grosimea filmului de faz staionar este cuprins n mod uzual ntre H,3-3 Tm. 3 3 # ! Clasificarea fazelor staionare *lasificarea fazelor staionare lichide se face n urmtoarele categorii principale! 4a.e staionare nepolare, care sunt compui de tip hidrocarburi %parafine& sau uleiuri siliconice %polisilo'ani& care nu au grefate grupri polare. )'emple de asemenea faze staionare sunt! sYualan %hidrocarbura *CH@>.&, uleiuri siliconice de tip metilsilicon %denumiri comerciale ?4-3, S)-CH&. -ceste faze separ compuii analizai n ordinea creterii punctelor de fierbere ale acestora. 4a.e staionare polare, care conin o proporie ridicat de grupri polare, de e'emplu! polietilenglicoli cu mas molecular medie %*arboAa' .HM&, uleiuri siliconice cu grupri cianopropil %?4-..8 metil-fenil-cianopropil-silicon&, dietilenglicolsuccinat %D)$S&, esterul nitrotereftalic al polietilenglicolului %""-6&, etc. )i difereniaz compuii polari de cei nepolari, rein+ndu-i numai pe cei polari. Se utilizeaz mai ales pentru separarea compuilor polari. 4a.e staionare de polaritate intermediar, care conin grupri polare n concentraie mai mic sau grupri polarizabile, grefate pe un schelet nepolar. )'emple de astfel de faze sunt cele metil-fenil-siliconice %?4-3E&, dinonilftalatul, polietilenglicolii cu mase moleculari mari. Sunt faze staionare universale, care se pot folosi pentru analiza at+t a compuilor polari c+t i a celor nepolari.

4a.e staionare specifice, care se utilizeaz n anumite cazuri particulare. )le conin compui care interacioneaz numai cu anumite componente ale amestecului de analizat, de e'emplu -g;?C dizolvat n polietilenglicol care formeaz aduci cu olefinele. 4a.e staionare chirale/ care conin compui chirali ce interacioneaz doar cu un singur izomer optic al unei perechi de enantiomeri. -semenea faze sunt cele pe baz de ciclode'trin sau anumii aminoacizi. Pin+nd cont de polaritatea fazelor staionare i de interaciunile posibile,

compuii organici pot fi grupai din punct de vedere al separrii cromatografice n urmtoarele cinci clase! Clasa 2 - compui foarte polari, capabili s dea legturi de hidrogen! ap, glicerin, glicoli, hidro'iacizi, aminoacizi. -ceti compui sunt greu de separat prin cromatografie de gaze, din cauza polaritii foarte mari. *u e'cepia apei, ei se derivatizeaz nainte de separare. Clasa 22 - compui polari, care au atomi de hidrogen activi! alcooli, acizi carbo'ilici, fenoli, amine primare i secundare, nitroderivai i nitrili cu un atom de hidrogen n poziia 9. -ceti compui se separ pe faze staionare polare. Clasa 222 - compui de polaritate intermediar, care nu au hidrogen activ! eteri, esteri, aldehide, cetone, nitroderivai i nitrili fr atom de hidrogen n poziia 9. -ceti compui se separ pe faze staionare de polaritate intermediar. Clasa 2' I compui cu polaritate sczut, care ns au hidrogen activ! hidrocarburi aromatice, alchene, cloroform, clorur de metilen, dicloretan, tricloretan, etc. -ceti compui se separ pe faze staionare de polaritate intermediar sau nepolare. Clasa ' I compui nepolari! alcani, cicloalcani. -ceti compui se separ pe faze staionare nepolare.

-ceast clasificare este empiric i are doar rolul de a uura alegerea fazei staionare celei mai potrivite pentru analiza cromatografic. 3 3 # # Alegerea fazei staionare Constantele .c Re/nolds -a cum s-a artat, cel mai important criteriu pe baza creia se face alegerea fazei staionare pentru o anumit analiz este polaritatea fazei i a compuilor de analizat. )'primarea numeric a acestei polariti, care ar uura mult alegerea, nu este posibil pentru c nu e'ist nici o mrime fizic ce poate fi asociat direct cu polaritatea %n anumit msur momentul dipol ar putea fi o asemenea mrime&. Din acest motiv, pentru e'primarea polaritii fazelor staionare se utilizeaz nite compui de referin, care se aleg n mod arbitrar. :n asemenea sistem a fost elaborat de /ohrschneider i dezvoltat apoi de Mc /eDnolds, av+nd la baz indicii de retenie 2ovats i utiliz+nd sYualanul drept faz staionar de referin creia i se atribuie polaritatea nul. -u fost selectai un numr de 8 compui de referin! benzen, 3-butanol, .-pentanon, nitropropan i piridin. "iecare

dintre aceti compui poate fi considerat ca etalon pentru anumite clase de substane, cu care se aseamn n ce privete comportarea cromatografic, astfel! ben.enul, pentru hidrocarburi nesaturate i hidrocarburi aromaticeB *3butanolul, pentru alcooli, fenoli, acizi carbo'iliciB 23pentanona, pentru aldehide, cetone, eteri, esteriB nitropropanul, pentru nitroderivai i nitriliB piridina, pentru baze aromatice i heterocicli cu azot.

#a determinarea constantelor Mc /eDnolds pentru o anumit faz staionar -, n cazul coloanelor cu umplutur, se procedeaz astfel!

fiecare compus de referin se analizeaz pe o coloan cu .HV faz stationar sYualan, izoterm la 3HHZ* i se determin indicii de retenie corespunztoriB compuii de referin se analizeaz pe o coloan care conine .HV faz staionar -, n aceleai condiii i se determin i n aceste cazuri indicii de retenie 2ovatsB se calculeaz constantele Mc /eDnolds ale fazei staionare -, astfel! [ pentru benzen %notat cu 'K&! diferena dintre indicele de retenie al benzenului pe faza staionar - i pe sYualan!

[ [

pentru 3-butanol %notat cu DK&! diferena dintre indicele de retenie al butanolului pe faza staionar - i pe sYualanB la fel se procedeaz pentru .-pentanon %zK&, nitropropan %uK& i piridin %sK&.

-ceste valori ale constantelor Mc /eDnolds au fost determinate pentru un numr mare de faze staionare uzuale i ele se gsesc tabelate. *+teva asemenea valori sunt date in tabelul C.3. ,abelul C.3. 4aloarea constantelor Mc /eDnolds pentru unele faze staionare uzuale +enumirea fazei x0 staionare SYualan C3123# H Metilsilicon 45'! 3> Metilsilicon *6'31 38 Metil-fenil-silicon >G %.HV fenil& 45'7 Metil-fenil-silicon 33G %8HV fenil& 45'!7 *ianopropil-metil..F fenil-silicon 45'##8 6olietilenglicol C.. /0 H 88 8C 33C 38F C>G 8C> z0 H == == 333 3>. CCF C>F u0 H >= >= 3E3 .=C =G. 8E. s0 H =. =3 3.F .H. CF> 83H

Carbo9ax #1. )ster nitrotereftalic al C=H 8FH CGE >H. >.E 6)$ --A" Dietilenglicolsuccinat =G> E=> 8GH FCE FC8 +6:* #a ora actual e'ist c+teva sute de faze staionare utilizate n cromatografia de gaze i constantele Mc /eDnolds permit selectarea aceleia care promite cea mai bun separare a componentelor analizate. Deoarece evident e'ist o serie de faze staionare care au valorile constantelor Mc /eDnolds apropiate, acestea vor putea fi substituite ntre ele fr ca separarea s fie afectat. -stfel, dac e'ist o faz staionar recomandat n literatura de specialitate pentru o separare dar care nu este disponibil ntr-un anumit laborator, ea va putea fi nlocuit cu una echivalent.

3 3 3 Coloane cromatografice
*oloana reprezint partea cea mai important a unui cromatograf, fiind sediul procesului de separare. 6entru ca separarea s fie eficient, trebuie s fie alese n mod corespunztor fazele cromatografice %n cazul cromatografiei de gaze aceast alegere se refer la faza staionar&, dimensiunile coloanei, viteza fazei mobile i temperatura de analiz. *oloanele cromatografice sunt de dou tipuri! clasice %cu umplutur& i capilare.

3 3 3 ! Coloane cu umplutur
-u diametrul interior cuprins ntre . i F mm %uzual = mm& i lungimea ntre H,8-C m. Se pot confeciona din oel ino'idabil, sticl, mase plastice, iar forma coloanelor poate fi n form de : %n cazul coloanelor scurte& sau spiral %"igura C..&.

"igura C... *oloan cromatografic cu umplutur *oloanele confecionate din sticl au avanta(ul c permit observarea vizual a neregularitilor de aezare a umpluturii %goluri, crpturi& sau a eventualei deteriorri a umpluturii. -u ns dezavanta(ul c din cauza friabilitii sticlei conectarea la prile metalice ale aparatului este mai dificil. *oloanele din oel ino'idabil sunt cele mai utilizate. )le se pot confeciona i n variant preparativ, av+nd lungimi cuprinse ntre 3-= m i diametrul interior de .,8 cm. -cestea permit analiza unor volume de prob mai mari de 3 ml.

6repararea unei coloane clasice pentru cromatografia gaz-lichid presupune urmtoarele operaii! depunerea fazei staionareB umplerea coloaneiB condiionarea coloanei.

5epunerea fa.ei staionare se face prin c+ntrirea cantitilor corespunztoare de suport i faz staionar care urmeaz s fie depus %conform concentraiei pe suport stabilite&, urmat de dizolvarea fazei staionare ntr-un solvent volatil potrivit %toluen, aceton, tetraclorur de carbon, etc.&. Soluia de faz staionar se amestec apoi cu suportul, iar din suspensia obinut se evapor ncet solventul, ntr-un evaporator rotativ de vid, faza stationar rm+n+nd ataat de suport. 6mplerea coloanei se face prin introducerea umpluturii obinute prin depunerea fazei staionare pe suport la un capt al coloanei, la cellalt capt aplic+ndu-se un vid nu foarte naintat %tromp de ap, de e'emplu&. )vident c la captul la care se aplic vidul trebuie s e'iste o sit sau alt opritor pentru ca umplutura s rm+n n coloan. 6entru a favoriza aezarea compact a umpluturii, coloana se bate sau se vibreaz n tipul umplerii. *ontrolul umplerii este mai uor de realizat n cazul coloanelor din sticl. *ondiionarea coloanei se realizeaz prin meninerea coloanei timp de cel puin 3H ore la o temperatur situat cu apro'imativ 8-3HQ* mai (os dec+t temperatura ma'im admis pentru faza staionar respectiv. n timpul condiionrii captul dinspre detector al coloanei nu se conecteaz la aparat, iar prin coloan trebuie s treac un debit mic de gaz purttor. 3 3 3 # Coloane capilare Drept coloane capilare sunt considerate acele coloane al cror diametru interior este mai mic de 3 mm %"igura C.C&. n mod obinuit, ele se confecioneaz cu diametre de H,.8, H,C. sau H,8C mm, iar lungimea este n mod uzual cuprins ntre 38 i 8H m. Materialul de construcie cel mai utilizat este sticla, ns e'ist i coloane capilare confecionate din oel ino'idabil. n cazul coloanelor capilare, faza staionar se depune n strat foarte subire pe peretele interior al coloanei, motiv pentru care aceste coloane sunt denumite i coloane tubulare deschise. 6entru creterea uniformitii i aderenei fazei staionare, peretele interior al tubului capilar se poate trata chimic, sau se poate depune un strat foarte subire de suport.

"igura C.C. *oloan capilar *ea mai important operaie, de care depind in mare msur performanele coloanei, este depunerea peliculei de faz staionar pe peretele interior al tubului capilar. -ceast depunere se poate face prin dou metode! metoda static i metoda dinamic. 7etoda static const n umplerea coloanei cu o soluie ce conine cantitatea corespunztoare %ntre H,3-3V& de faz staionar dizolvat ntr-un solvent potrivit, n general clorur de metilen, dup care se las s se evapore solventul iar faza staionar rm+ne ataat de peretele coloanei. Dezavanta(ul acestei metode este c grosimea filmului de faz staionar nu este uniform. 7etoda dinamic const n trecerea unei soluii de faz staionar cu concentraia de apro'imativ 3HV n *@.*l. prin coloan, sub aciunea presiunii unui gaz inert p+n la umplerea complet a coloanei, dup care lichidul se evacueaz tot sub aciunea presiunii de gaz iar o parte din faza staionar rm+ne ataat de peretele coloanei. n continuare se sufl gaz inert prin coloan p+n la eliminarea complet a solventului i se determin cantitatea de faz staionar reinut %prin c+ntrire&. 3 3 3 3 Introducerea probelor &n coloana cromatografic Metoda utilizat pentru introducerea probei depinde de starea de agregare n care se gsete proba! gazoas, lichid sau solid. )ste indicat n toate cazurile ca introducerea probei s aib loc ntr-un timp c+t mai scurt. Mrimea probelor variaz ntre mai puin de 3 Tg n cazul coloanelor capilare i ordinul gramelor n cazul coloanelor preparative. 6robele gazoase sunt introduse cu a(utorul unor seringi speciale, rezistente la presiune, sau folosind dispozitive speciale care constau dintr-un robinet cu mai multe ci i o bucl calibrat %"igura C.=&. -ceste dispozitive permit introducerea unui volum cunoscut de prob n coloan printr-o singur micare a rotorului robinetului, fr a se opri flu'ul gazului purttor.

"igura C.=. Dipozitiv pentru introducerea probei n poziia de ncrcare, n coloan intr doar faza mobil, n timp ce proba gazoas, care vine dintr-un recipient sub presiune, umple complet bucla calibrat iar e'cesul este evacuat n atmosfer. Dup trecera rotorului pe poziia de analiz, faza mobil intr n bucl unde preia proba, pe care o introduce n coloan. n acest timp flu'ul gazos de prob este evacuat n atmosfer. Dup terminarea analizei se trece din nou pe poziia de ncrcare i se introduce n bucl o nou cantitate de prob. 6robele lichide sunt introduse n coloan cu a(utorul unor microseringi, av+nd n mod uzual capacitatea de 3, 8, sau 3H Tl. )le trebuie aduse n stare de vapori, ceea ce se realizeaz prin in(ectarea ntr-o camer de vaporizare %sau in(ector&, care se gsete naintea coloanei i care este nclzit la o temperatur programat. Mn(ectarea se face printr-un dop de cauciuc siliconic numit septum, care realizeaz izolarea in(ectorului de mediul e'terior %"igura C.8&. ,ot n camera de vaporizare se introduce i gazul purttor, care preia proba vaporizat i o transport prin coloan.

"igura C.8. *amera de vaporizare a unui cromatograf cu coloan capilar, prevzut cu dispozitiv de divizare a probei %splitare& 6robele solide sunt introduse n coloan tot prin in(ectare cu microseringi, dup ce au fost dizolvate ntr-un solvent adecvat. n cazul lor ns trebuie avut gri( ca proba s se vaporizeze la temperatura in(ectorului, altfel analiza nu va fi posibil, substanele cu punct de fierbere foarte rificat sau care se descompun nainte de fierbere neput+nd fi analizate prin cromatografie de gaze. )'ist cromatografe la care s-a renunat la camera de vaporizare, in(ectarea probei realiz+ndu-se direct n partea superioar a coloanei, care este ncadrat de o rezisten de nclzire i (oac rolul in(ectorului. -ceast tehnic se numete on-column i cu a(utorul ei se elimin volumul mort corespunztor camerei de vaporizare, care poate influena negativ analiza, mai ales atunci c+nd volumul probei in(ectate este foarte mic. n cazul coloanelor capilare se folosesc nite dispozitive de in(ectare speciale, care permit divizarea %splitarea& probei, cea mai mare parte fiind evacuat n atmosfer i doar o mic parte %de la 313HH la 318H n mod uzual& fiind introdus n coloan. De asemenea, n cazul aparatelor moderne destinate analizei unui mare numr de probe se utilizeaz dispozitive de in(ectare automat %autosampler&, care se pot ataa la cromatograf i permit analiza automat a unui mare numr de probe, fr intervenia operatorului. n cazul probelor care nu sunt stabile termic, au volatilitate sczut sau prezint picuri deformate cu coad %tailing&, se procedeaz la transformarea lor chimic n derivai care s nu mai aib aceste inconveniente. 6rocedeul se numete derivatizare i metodele aplicat c+t i reactivii de derivatizare utilizai sunt de o mare diversitate, depinz+nd de

natura compusului analizat. :na dintre metodele de derivatizare cele mai utilizate este silanizarea.

3 ; +etectoare folosite &n cromatografia de gaze

Detectorul reprezint, dup coloana cromatografic, cea mai important parte a unui cromatograf, el realiz+nd punerea n evident a componentelor separate sub forma unor semnale electrice care pot fi integrate sau nregistrate. Din punct de vedere al semnalelor pe care le emit, detectoarele pot fi de dou tipuri! integrale i difereniale. 5etectoarele integrale emit semnale corespunztoare masei totale a componentelor care a(ung n detector, cromatogramele fiind nite curbe n trepte. -ceste tipuri nu mai sunt utilizate la ora actual n practica cromatografic. 5etectoarele difereniale emit semnale n funcie de variaia unei anumite proprieti, pe msur ce componenta a(unge n detector, fiecrei componente corespunz+ndu-i un semnal individual. *romatograma se prezint n acest caz ca o succesiune de picuri de eluie de tip gaussian, concentraia fiecrei componente fiind proporional cu aria picului su. Detectoarele difereniale se pot clasifica la r+ndul lor n funcie de sensibilitatea lor la concentraia sau la debitul de mas al compusului analizat. n cazul detectoarelor cu rspuns la concentraia solutului n faza mobil aria picului solutului respectiv este dat de relaia!

%8E& unde m este masa total a solutului care a(unge n detector, " este debitul fazei mobile, iar 53 este o constant de proporionalitate. Se observ faptul c aria fiind invers proporional cu debitul fazei mobile, acest debit va trebui s rm+n neaprat constant n timpul analizei pentru a nu avea erori, mai ales la analiza cantitativ. Din aceast categorie fac parte detectoarele de conductivitate termic i cele cu captur de electroni. n cazul detectoarelor cu rspuns la debitul de mas al solutului, aria picului va fi dat de relaia! %8F& adic ea nu mai depinde de debitul fazei mobile i variaia acestuia n anumite limite nu mai reprezint un factor perturbator al analizei. Din aceast categorie fac parte detectoarele cu ionizare n flacr, cele cu spectrometru de mas i altele. Dup un alt criteriu, detectoarele se clasific n universale i specifice. Detectoarele universale sunt sensibile la un numr mare ce compui, n timp ce cele specifice sunt sensibile doar la anumii compui, respectiv la anumite grupe funcionale sau legturi din

structura acestora. Dintre detectoarele universale se pot aminti detectorul de conductivitate termic, detectorul cu ionizare n flacr, detectorul cu spectrometru de mas, iar din categoria celor specifice detectorul cu captur de electroni, detectorul cu flacr alcalin %sau detectorul ;%azot&-6%fosfor&&, detectorul flamfotometric, etc. 3 ; ! Criterii de apreciere a performanelor detectoarelor 6rincipiul de construcie i funcionare a detectoarelor fiind e'trem de diferit, comparaia performanelor acestora este dificil. )'ist totui anumite criterii generale care permit o evaluare a performanelor unui detector. a. Rspunsul detectorului

Se definete prin intensitatea semnalului generat de o anumit cantitate de solut care a(unge n detector. Se poate calcula prin raportul dintre aria picului de eluie al solutului respectiv i cantitatea de solut.
b. Sensibilitatea detectorului /eprezint variaia mrimii semnalului emis de detector n funcie de cantitatea de solut i se e'prim prin valoarea pantei rspunsului detectorului pentru componenta respectiv %"igura C.>&. ? sensibilitate mare a detectorului va duce la un rspuns mai mare pentru aceeai cantitate de solut analizat i deci va permite analiza unor cantiti mici de prob, reprezint+nd o calitate important pentru un detector performant.

"igura C.>. Sensibilitatea i liniaritatea rspunsului detectorului c. Limita de sensibilitate

)ste un criteriu str+ns legat de cel precedent, definindu-se prin cantitatea minim din componenta respectiv pentru care se obine un semnal de rspuns al detectorului de dou ori mai mare dec+t valoarea medie a zgomotului %semnalului& de fond %"igura C.E&. *antitatea respectiv se numete cantitate minim detectabil. Semnalul de fond reprezint semnalul dat de detector n absena vreunei componente in(ectate i depinde de caracteristicile sale constructive.

"igura C.E. #imita de sensibilitate a detectorului d. Domeniul de rspuns liniar /eprezint intervalul n care semnalul de rspuns al detectorului este direct proporional cu cantitatea de solut care a(unge n detector. Stabilirea acestei liniariti se face prin etalonare, cu a(utorul unor etaloane pure ale compuilor analizai. -semenea etaloane pentru cromatografia de gaze sunt accesibile comercial, la o puritate foarte avansat %n general peste GG,GV&. Stabilirea domeniului de rspuns liniar este important mai ales pentru analiza cantitativ. n situaiile n care rspunsul nu este liniar, caz ntlnit mai ales la detectoarele folosite n cromatografia de lichide dar i la unele detectoare folosite n cromatografie de gaze, este necesar trasarea unor curbe de etalonare polinomiale pentru a se putea efectua analiza cantitativ. e. Stabilitatea detectorului -cest criteriu se refer la meninerea liniei de baz fr deviaii, chiar n condiiile variaiei unor condiii de analiz! temperatur, presiunea i debitul fazei mobile. *auzele care determin deriva liniei de baz %numit i drift& pot fi multiple i n general pot fi remediate. )'ist i alte condiii pe care trebuie s le ndeplineasc un detector bun! vitez de rspuns c+t mai mare, rezisten ridicat la temperatur, simplitatea construciei, pre c+t mai sczut. 3 ; # +etectorul de conducti$itate termic (catarometru, ,C+) )ste un detector universal, cu rspuns la concentraia solutului n faza mobil. -re avanta(ul c este nedestructiv pentru prob, deci poate fi utilizat n cromatografia

preparativ sau cuplat cu alte instrumente pentru analiza suplimentar a probei! spectrometru de mas, spectrofotometru n M/, etc. 6rincipiul su de funcionare se bazeaz pe dependena pierderii cldurii de ctre un fir metalic nclzit, n funcie de compoziia mediului gazos ncon(urtor. )l const din dou filamente metalice, care se gsesc n c+te un canal de form cilindric din interiorul unui bloc metalic ce poate fi nclzit la o temperatur programat %"igura C.F&. :nul dintre filamente este filamentul de msur, iar cellalt este filamentul de referint.

"igura C.F. Detectorul de conductibilitate termic 6rin fiecare filament trece un curent de aceeai intensitate, determin+nd nclzirea sa la o anumit temperatur. Dac n spaiul ncon(urtor filamentului se gsete numai gaz purttor, pierderea de cldur va fi constant i aceeai pentru ambele filamente. Dac ns n celula de msur a(unge o component eluat din coloana cromatografic, pierderea de cldur a filamentului de msur va fi diferit, deci i temperatura i rezistena sa electric se vor modifica. *ele dou filamente se gsesc ntr-un monta( electric de tip punte <heatsone, iar modificarea rezistenei electrice a filamentului de msur va determina dezechilibrarea acestei puni i apariia unui curent electric. -cest curent este amplificat, reprezent+nd semnalul se ieire al detectorului, iar intensitatea sa este este proporional cu cantitate de component care a a(uns n detector. "ilamentele pot fi confecionate din Aolfram, platin sau dintr-un alia( Aolframreniu i sunt pasivate pentru a reduce sensibilitatea lor la o'igen. Mrimea semnalului detectorului depinde i de diferena dintre conductibilitatea termic a gazului purttor i a

componentei analizate. 4alorile relative %raportate la heliu& ale acestei conductibiliti pentru c+teva gaze permanente i compui organici uzuali sunt prezentate n ,abelul C..! ,abelul C... *onductibilitile termice relative ale unor gaze i substane organice Denumirea compusului argon hidrogen heliu azot bio'id de carbon etan benzen cloroform acetat de etil *onductivitatea termic relativ 3.,8 3.F 3HH 3F 3.,E 3E,8 G,G >,H G,G

Se observ c numai hidrogenul i heliul vor putea fi folosite ca gaze purttoare c+nd se lucreaz cu acest tip de detecor, deoarece ele au cele mai mari valori ale conductibilitii termice, iar semnalul detectorului pentru un anumit compus va fi cu at+t mai mare cu c+t diferena dintre conductibilitatea termic a gazului purttor i a compusului analizat este mai mare. Detectoarele de conductivitate termic au i unele dezavanta(eB - au sensibilitate mai mic dec+t alte tipuri de detectoare, cantitatea minim detectabil fiind n (ur de 3H->-3H-F g.B - domeniul de rspuns liniar este destul de redusB - au volum mort relativ mare, ceea ce este un dezavanta( important mai ales c+nd se lucreaz cu coloane capilareB - timpul de rspuns este relativ mare comparativ cu alte detectoare. #a utilizarea practic a acestor detectoare trebuie inut cont i de urmtoarele considerente! - este foarte important meninerea constant a presiunii i debitului gazului purttor n timpul analizeiB - curentul filamentului trebuie ntrerupt la schimbarea coloanei sau septumului, pentru a nu veni n contact cu o'igenul care ar determina distrugerea filamentului prin arderea saB - dac se constat o deviaie a liniei de baz ce nu poate fi eliminat, este posibil ca aceasta s se datoreze depunerii pe filament a unor componente greu volatile. ndeprtarea acestora se poate face prin in(ectare de toluen sau 'ilen. - nu se recomand analiza cu acest tip de detector a halogenilor i derivailor halogenai, deoarece acetia pot ataca filamentul.

3 ; 3 +etectorul cu ionizare &n flacr (-I+) )ste tipul de detector cel mai mult folosit n cromatografia de gaze. 6rincipul su de funcionare const n msurarea modificrii conductibilitii electrice a unei flcri de hidrogen n prezena compuilor organici %"igura C.G&.

"igura C.G. Detectorul cu ionizare n flacr #a ieirea din coloana cromatografic, gazul purttor mpreun cu componentele separate este amestecat cu un curent de hidrogen i este aprins la captul unei mici duze de ardere. -ceast duz se gsete montat ntr-o camer de ardere n care se sufl un curent de aer pentru a asigura o'igenul necesar arderii. *amera de ardere se nclzete la o temperatur programabil, folosind nite rezistene electrice care se gsesc n e'teriorul camerei %nu sunt prezentate n figur&. Detectorul are doi electrozi, dintre care unul este capacul duzei iar cellalt este electrodul colector care este poziionat deasupra sau n (urul flcrii. ntre cei doi electrozi se aplic o tensiune de polarizare, care este n general de 38H 4. Drept urmare, prin flacr se stabilete un curent slab, de apro'imativ 3H-3=-. #a apariia unui compus organic separat din coloan, acesta va a(unge n flacr i n urma arderii se vor genera specii ionice %mai ales ioni *@?J& i electroni liberi. -cetia vor fi colectai de electrozi i n consecin se va produce creterea intensitii curentului, care poate a(unge p+n la 3H-F-. -cest curent este amplificat ntr-un amplificator electronic i este nregistrat, reprezent+nd semnalul detecorului pentru componenta respectiv. Duza de ardere poate fi constituit din diferite materiale! cuar, ceramic, oel ino'idabil, nichel. )ste important ca diametrul su s fie mic, pentru ca flacra s fie punctiform. Sensibilitatea detectorului depinde de numrul ionilor formai n urma arderii compusului respectiv. )a este proporional cu numrul atomilor de carbon din molecula compusului legai de ali atomi de carbon sau atomi de hidrogen, la care se adauag contribuia atomilor de carbon din legai de halogeni, grupri hidro'il, amino i altele. -tomii de carbon din gruprile carbonil i carbo'il nu au nici o contribuie la semnalul detectorului. Din acest motiv e'ist o serie de compui care nu dau rspuns

sau dau rspuns foarte slab n detectorul cu ionizare n flacr. -semenea compui sunt! @.?, @.S, S?., *S., ;.?, ;@C, *?, *?., formaldehid, acid formic i altele. -ceast lips de sensibilitate poate fi uneori avanta(oas n sensul c pot fi analizate soluii apoase fr ca apa utilizat ca solvent s interfere la detecie cu vreunul din compuii analizai. Sensibilitatea detectorului "MD depinde de raportul hidrogen1gaz purttor, av+nd o valoare ma'im la un raport ce depinde de construcia detectorului. Debitul de aer influeneaz de asemenea sensibilitatea, deoarece un debit prea mic duce la scderea acesteia i mrete instabilitatea liniei de baz prin creterea zgomotului de fond. Detectoarele cu ionizare n flacr sunt n medie de 3HHH de ori mai sensibile dec+t cele de conductivitate termic, cantitatea minim detectabil fiind cuprins ntre 3H-G-3H-3. g. ,rebuie menionat c rspunsul detectorului pentru o anumit component depinde de structura acesteia, de aceea pentru a se realiza analiz cantitativ trebuie fcut neaprat etalonare. *+teva aspecte practice de care trebuie inut cont la folosirea detectoarelor "MD sunt urmtoarele! - nu se lucreaz la temperaturi ale detectorului mai mici de 3HHQ*B - temperatura detectorului trebuie s fie superioar temperaturilor de fierbere ale tuturor componentelor analizateB - compuii aromatici las reziduuri pe detector, de aceea nu este recomandat folosirea lor ca solveni pentru probele supuse analizeiB 3 ; ; +etectorul cu captur de electroni (6C+) "ace parte din categoria detectoarelor specifice, cu rspuns la concentraia probei. 6rincipiul su de funcionare se bazeaz pe diferena afinitilor pentru electroni ale moleculelor diferitelor tipuri de substane. -finitatea pentru electroni este determinat de proprietatea moleculelor substanelor organice n stare gazoas de a adiiona electroni liberi, manifest+ndu-se mai ales la compuii aromatici polinucleari, compuii care conin grupri carbonil con(ugate, compuii organometalici, compuii organici halogenai, nitrili, etc. )a nu se manifest n schimb la ali compui cum sunt hidrocarburile saturate. -adar detectorul cu captur de electroni va fi foarte sensibil pentru anumite clase de compui, put+nd detecta cantiti p+n de ordinul 3H-G-3H-3Cg i total insensibil pentru ali compui. 6rincipiul de funcionare al detectorului se bazeaz pe ionizarea moleculelelor gazului purttor, care este n general azotul, sub aciunea particulelor \ produse de o surs radioactiv, n general >C;i.

)lectronii liberi produi n urma ionizrii au vitez foarte mare i ei nu se recombin cu ionii pozitivi, fiind colectai de un electrod aflat n camera de ionizare. *ellalt electrod al detectorului %catodul& este n general chiar celula care conine sursa radioactiv. ntre cei doi electrozi se aplic un c+mp electric slab, n general de 8H4, iar n urma ionizrii moleculelor de azot prin iradiere se genereaz un curent electric slab, care este amplificat rezult+nd un semnal de baz al detectorului cu intensitatea de apro'imativ 3H-F-. Dac n camera de ionizare a detectorului a(unge un compus organic cu afinitate mare pentru electroni, moleculele acestuia vor adiiona o parte din electroni form+nd ioni negativi, care ns av+nd mobilitate mult mai mic dec+t electronii se vor putea

recombina cu ionii pozitivi nainte de a fi colectai de electrod. -ceast captur de electroni se poate produce n dou moduri! nedisociativ sau disociativ.

Datorit scderii numrului ionilor care a(ung la electrod, se produce reducerea intensitii curentului electric. -adar semnalul detectorului pentru compusul cu afinitate pentru electroni ar fi un pic negativ, dar pentru a opera n modul cunoscut de la celelalte detectoare acesta este transformat pe cale electronic ntr-un pic pozitiv. Detectorul cu captur de electroni are avanta(ul selectivitii i sensibilitii ridicate, dar n acelai timp i anumite dezavanta(e! - nu se pot utiliza dec+t anumite faze staionare, cu volatilitate foarte micB - electrodul se contamineaz repde, de e'emplu cu urme de solveni cloruraiB - intervalul su de liniaritate este foarte scurtB - curirea detectorului contaminat este mai dificil deoarece e'ist pericolul contaminrii radioactive a personalului. )a se poate face n general prin nclzire la C8HQ* sau splare cu un solvent adecvatB - gazul purttor i proba trebuie s fie perfect uscate, deoarece i apa are proprietatea de a adiiona electroni. Drept gaz purttor se mai poate folosi i argonul, cu coninut de 8-3HV metan. ? atenie deosebit trebuie acordat meninerii constante a temperaturii detectorului n timpul analizei, deoarece semnalul detectorului variaz foarte mult n funcie de aceast temperatur %de pn la 8 ori la modificarea temperaturii cu CHQ*&. *u toate dezavanta(ele sale, detectorul cu captur de electroni se folosete foarte mult n anumite domenii, de e'emplu pentru analiza compuilor halogenai to'ici din ap sau a urmelor de substane antiduntoare din produsele alimentare i din alte produse.

3 8 Cromatografia de gaze cuplat cu spectrometria de mas

Dac o molecul este ionizat n vid, are loc fragmentarea sa cu formarea unui grup de ioni caracteristici cu diferite mase. Dac aceti ioni snt separai printr-o metod oarecare, reprezentarea abundenei lor n funcie de mas constituie spectrul de mas. Spectrometria de mas a debutat la nceputul secolului ]] ca o metod folosit de fizicieni pentru a pune n eviden e'istena izotopilor unor elemente, dar la ora actual a devenit o metod analitic de mare importan ntr-o serie de domenii ale tiinei, incluznd i chimia. n principiu, spectrometria de mas const din dou procese de baz!

- ionizarea moleculelor substanei de analizat urmat de fragmentarea i rearan(area ionilor, care se realizeaz n camera de ionizare a spectrometrului. - separarea ionilor formai n funcie de masa lor i detectarea acestora, care are loc n analizorul de mas al spectrometrului. 3 8 ! Ionizarea moleculelor )i fragmentarea ionilor Monizarea se poate efectua n dou modaliti! ionizare prin impact cu electroni i ionizare chimic. 3 8 ! ! Ionizarea prin impact cu electroni

6rincipiul acestui proces poate fi urmrit pe baza schemei de construcie i funcionare a camerei de ionizare cu electroni, redat n "igura C.3H. "igura C.3H. *amera de ionizare a spectrometrului de mas n camer se realizeaz un vid naintat, de 3H-F torr. )lectronii provenii de la un filament nclzit sunt focalizai n timp ce strbat camera i colectai de un electrod av+nd un potenial de EH 4. -cesta i confer fiecrui electron o energie de EH e4. Dac n camera de ionizare se introduce o substan %de e'emplu metanul& ntr-o cantitate suficient ca presiunea s creasc la 3H-8 torr, ciocnirile dintre electroni i moleculele compusului respectiv determin fragmentarea acestora. ntruc+t electronii la EH e4 au energie suficient pentru a rupe orice legtur din molecul, prin fragmentare se vor forma toi ionii posibli, de e'emplu n cazul metanului! *@= Je *@=J, *@CJ, *@.J, *@J, *J

Din cauza presiunii sczute din camera de ionizare, numai o molecul din apro'imativ 3H> va realiza ciocnirea i ionizarea. 6resiunea de 3H-8 torr n prezena probei este important pentru realizarea unor spectre de mas reproductibile. Drumul liber

mi(lociu al ionilor sau moleculelor la aceast presiune este mai mare dec+t dimensiunea camerei de ionizare, care este dat de relaia apro'imativ!

%cm& -ceasta nseamn c fragmentele de molecule neutre i de ioni formai nu se vor ciocni ntre ei ci numai cu pereii camerei, fiind posibil aadar ndeprtarea lor din camera de ionizare i colectarea ionilor de mase diferite n detector. Spectrul de mas obinut n asemenea condiii va fi reproductibil i caracteristic pentru compusul respectiv. n aceast idee trebuie inut cont de faptul c abundena relativ a ionilor formai n urma impactului cu electronii depinde n afar de energia electronilor de ionizare i de temperatura la care are loc ionizarea. Monizarea prin impact cu electroni duce la fragmentarea moleculei i la obinerea unui amestec comple' de ioni a cror mas i abunden relativ se poate utiliza pentru identificarea calitativ a compuilor respectivi. 6rimul ion care se formeaz n urma impactului este aa-numitul ion molecular, care are mare importan n identificarea substanei deoarece are aceeai mas cu masa molecular a compusului respectiv. Din pcate ns n aceste condiii stabilitatea ionului molecular este aa de redus %el se va fragmenta mai departe& nc+t abundena sa relativ va fi foarte mic i identificarea de cele mai multe ori imposibil %a se vedea e'emplul he'aclorbenzenului&. n consecin, a devenit necesar utilizarea unei tehnici de ionizare mai bl+nde prin care s se obin informaii despre masa molecular. -ceast tehnic a fost ionizarea chimic, introdus n anul 3G>>. 3 8 ! # Ionizarea c(imic n spectrometria de mas prin ionizare chimic, n sursa de ioni se introduce un anumit gaz numit gaz reactiv, n condiiile n care se menine o presiune relativ ridicat, n (ur de 3 torr. -cest gaz este ionizat sub aciunea electronilor, obin+nd-se ioni reactivi care realizeaz ionizarea moleculelor probei de analizat. -cestea nu sufer dec+t n msur foarte mic ionizare direct, datorit concentraiei mari a gazului reactiv n comparaie cu proba. 6e de alt parte, probabilitatea ciocnirilor cu ionii reactivi este mare din cauza presiunii ridicate din sursa de ioni. /eaciile dintre ionii reactivi i moleculele compusului de analizat au loc cu energie mic n comparaie cu impactul direct cu electronii, deci abundena ionului molecular fa de alte fragmente rezultate va fi mare i mecanismul de fragmentare va fi mult mai simplu %"igura C.33&.

"igura C.33. Spectrele de mas prin ionizare cu electroni i ionizare chimic cu metan ale unor esteri Ma(oritatea tehnicilor de ionizare chimic lucreaz cu ioni pozitivi, dei n ultima perioad s-au dezvoltat i cele cu ioni negativi %bazate pe captura unor electroni cu energie mai mic&, iar gazul reactiv cel mai mult utilizat este metanul. Dezavanta(ul principal al tehnicilor de ionizare chimic este c rezultatele depind foarte mult de condiiile de ionizare i nu este posibil alctuirea unei librrii de spectre care s fie folosit n scopuri de identificare, aa cum se procedeaz n cazul ionizrii prin impact cu electroni. 3 8 # *epararea )i detectarea ionilor Separarea ionilor formai are loc ntr-un analizor de mas i este urmat de detectarea lor cu nregistrarea diagramei abundenei %concentraiei relative& n funcie de masa ionilor, care reprezint spectrul de mas. n funcie de metoda folosit pentru separarea ionilor, spectrometrele de mas pot fi de mai multe tipuri, cele mai uzuale fiind cele magnetice i cu cuadrupoli.

3 8 # ! Analizorul de mas cu separare &n c&mp electric )i magnetic

:tilizeaz un magnet pentru separarea ionilor provenii din camera de ionizare, aa cum se poate observa n "igura C.33.

"igura C.33. -nalizorul de mas cu c+mp magnetic i electric Monii care ies din sursa de ioni sunt accelerai cu a(utorul unui c+mp electric cu o tensiune ' cuprins ntre .HHH i FHHH 4. n continuare fasciculul de ioni este focalizat i intr n sectorul magnetic al analizorului de mas unde este supus aciunii unui c+mp magnetic de intensitate @, perpendicular pe direcia sa de deplasare. Drept rezultat, ionilor li se imprim o micare circular cu raza de curbur r, devierea fasciculului fiind n cazul artat n figur de 3FHQ. Monii accelerai sunt separai sub influena potenialului de accelerare i a c+mpului magnetic, conform relaiei!

%8G& unde m este masa ionului, . sarcina sa, 8 reprezint intensitatea c+mpului magnetic, r raza de curbur iar ' tensiunea de accelerare aplicat ionilor. Deoarece ma(oritatea ionilor formai au sarcina . egal cu unitatea, la separare conteaz de fapt numai masa lor. Se observ c pentru o anumit valoare a potenialului ' i c+mpului magnetic 8 numai ionii av+nd o anumit valoare m/. se vor nscrie pe o traiectorie cu raza de curbur r i vor putea a(unge n detector. Din aceast relaie mai rezult c masa ionului care trece prin analizor i a(unge n detector poate fi controlat prin modificarea potenialului ' sau a c+mpului magnetic 8, deoarece raza de curbur r este o constant dat de construcia aparatului. n general se menine potenialul de accelerare constant i se modific c+mpul magnetic pentru a realiza o scanare a ntregului domeniu de mas. Dup cum se observ din relaia %8G&, pe msura creterii acestui c+mp detectorul va nregistra ioni din ce n ce mai grei. Detectorul de ioni al spectrometrului de mas este constituit n general dintr-un multiplicator electronic ce realizeaz at+t detectarea c+t i amplificarea curentului ionic

datorat fragmentelor ionice care a(ung n detector. -cest curent este apoi nregistrat, obin+ndu-se spectrul de mas. /ezultatul analizei este aadar o diagram ce conine reprezentarea concentraiilor relative %cunoscute sub numele de abunden& ale fragmentelor ionice n funcie de masa lor, mai e'act raportul dintre mas i sarcin. Spectrele de mas pot fi nregistrate sub form de picuri cu ma'ime, care constituie de fapt forma original a spectrului, dar n practic se utilizeaz reprezentarea fiecrui pic sub forma unei linii %calculate pe baza spectrului original&. *elei mai nalte asemenea linii din spectru i se acord n mod arbitrar valoarea 3HH, iar restul sunt e'primate ca procenta(e fat de aceasta, obin+ndu-se concentraiei diverselor fragmente ionice ca valori de abunden relati&. n figura C.3. este prezentat schema de fragmentare a acetatului de etil, iar n "igura C.3C spectrul de mas ala acestui compus n care se regsesc principalele benzi corespunztoare fragmentelor ionice rezultate.

"igura C.33. Schema de fragmentare a acetatului de etil

"igura C.3C. Spectrul de mas al acetatului de etil

3 8 3 Cuplarea cromatografului de gaze cu spectrometrul de mas -t+t cromatografia de gaze c+t i spectrometria de mas sunt tehnici analitice de mare utilitate pentru analiza compuilor organici. *ombinarea lor ntr-un singur sistem duce ns la obinerea unor rezultate care depesc mult ceea ce s-ar realiza prin simpla nsumare a datelor oferite de cele dou tehnici. 6entru a putea gestiona imensa cantitate de date oferit de un sistem $*-MS este neaprat necesar utilizarea unui calculator echipat cu un program adecvat. *uplarea cromatografiei de gaze cu spectrometria de mas ofer n primul r+nd posibilitatea identificrii calitative a componentelor analizate, cu o probabilitate de eroare foarte mic. ?ptimizarea performanelor unui sistem $*-MS nu este ns deloc simpl, deoarece este vorba despre dou aparate care lucreaz n condiii mult diferite. -stfel, cromatograful de gaze folosete diferite gaze purttoare cu diverse debite, iar temperatura la ieirea din coloan i cantitatea din fiecare component variaz de asemenea pe un domeniu larg. 6e de alt parte, spectrometrul de mas lucreaz n condiii de vid avansat realizat n diferite variante, iar construcia camerei de ionizare i a analizorului de mas poate fi realizat n diverse modaliti. 6roblema principal este de a plasa o cantitate c+t mai mare din fiecare compus organic, separat n coloan i corespunztor unui pic cromatografic, n camera de ionizare a spectrometrului fr a afecta vidul necesar funcionrii acesteia. n aceast camer presiunea trebuie meninut la o valoare sub 3H-= torr pentru a evita ciocnirile dintre ionii formai i molecule neutre, care ar duce la o fragmentare necontrolat. De asemenea, n analizorul de mas drumul liber mi(lociu al moleculelor trebuie s fie mai mare dec+t .HH cm pentru a nu avea loc ciocniri ntre ionii formai, iar acest lucru nseamn meninerea unei presiuni mai sczute dec+t 3H-8 torr.

,recerea ntre cromatograf i spectrometru cu respectarea acestor condiii se realizeaz folosind nite dispozitive numite interfee. 3 8 3 ! ,ipuri de interfee folosite &n cromatografia :C'.* 6e baza celor artate, rezult c la trecereAa ntre cromatograf i spectrometru trebuie realizat o reducere a presiunii efluentului %constituit din gaz purttor i componenta separat& de apro'imativ 3HF ori, concomitent cu ndeprtarea preferenial a gazului purttor pentru ca n detector s a(ung, pe c+t posibil, numai moleculele componentei separate. n cazul n care cromatograful este echipat cu coloan capilar %la care debitul fazei mobile este cuprins ntre 3-C ml1min&. n aceste condiii, dac spectrometrul de mas posed pompe de vid de capacitate suficient, toat cantitatea de efluent din coloan poate fi introdus n sursa de ioni a spectrometrului. -ceste interfee se numesc directe, ns utilizarea lor prezint inconvenientele c schimbarea coloanei se poate face doar c+nd spectrometrul de mas este oprit i cele dou instrumente nu se pot folosi independent una de alta. 6entru eliminarea acestor inconveniente au fost elaborate variante de interfee n care se face divizarea %sau splitarea& probei. Dintre acestea, cea mai folosit este interfaa deschis cu splitare %"igura C.3=&. )a se caracterizeaz prin faptul c poriunea terminal a coloanei capilare i o capilar mai subire %cu diametrul de H,38 mm& sunt mbinate cu a(utorul unui manon de sticl, iar n spaiul ncon(urtor se sufl un curent de heliu, care preia e'cesul de prob ce nu intr n spectrometrul de mas. Divizarea probei se face n funcie de diametrul capilarei care face legtura la spectrometrul de mas, cu c+t aceasta este mai subire raportul de splitare fiind mai mare. n acest mod, schimbarea coloanei cromatografice poate fi realizat fr a afecta funcionarea spectrometrului de mas.

"igura C.3=. Mnterfaa direct cu splitare n cazul coloanelor cu umplutur nu se pot utiliza asemenea tipuri de interfee deoarece debitele de faz mobil sunt prea mari %uzual n intervalul 38-=H ml1min&. )ste necesar de aceea eliminarea celei mai mari pri din efluentul coloanei, concomitent cu concentrarea probei, dar fr a afecta compoziia ei. n acest scop se utilizeaz nite dispozitive numite separatoare moleculare, care realizeaz o reducere brusc a presiunii efluentului ntr-un spaiu situat ntre captul coloanei cromatografice i camera de ionizare a spectrometrului de mas, concomitent cu eliminarea preferenial a gazului purttor. Separarea se bazeaz pe mrimile diferite ale moleculelor gazului purttor i componentei de analizat. )a se poate realiza de e'emplu prin trecerea preferenial a moleculelor gazului purttor prin pereii unui tub de sticl poroas n e'teriorul careia se face vid, sau prin aezarea unei membrane din cauciuc siliconic la intrarea n camera de ionizare a spectrometrului, membran care este permeabil doar pentru moleculele organice. Sistemul cel mai utilizat de separator molecular este ns separatorul 9interfaa cu %et %"igura =.38&. Moleculele gazului purttor i componentei separate n coloan trec dup ieirea din coloan printr-o fant ngust ntr-un spaiu n care se realizeaz un anumit vid, av+nd loc o cretere nsemnat a vitezei de curgere. Moleculele componentei organice, mai mari i mai grele, vor avea tendina de a se deplasa rectiliniu i vor fi direcionate printr-o a

doua fant care se gsete la apro'imativ H,8 mm de prima. n acelai timp, moleculele gazului purttor care sunt mai uoare vor fi aspirate preferenial de pompa de vid. Mai departe, prin acelai mecanism are loc trecerea moleculelor din separator n camera de ionizare a spectrometrului de mas. )'ist posibilitatea de a construi asemenea separatoare cu una, dou sau mai multe trepte. Separatorul din "igura =.38 este construit n dou trepte. n treapta a doua procesul de separare are loc n mod identic, cu deosebirea c presiunea trebuie s fie mai sczut dec+t n prima treapt.

"igura C.38. Separatorul molecular cu (et 3 8 3 # Realizarea practic a analizelor :C'.* 6entru utilizarea practic a sistemelor $*-MS pot fi luate n considerare dou alternative! "i'area spectrometrului de mas la o anumit valoare m1z caracteristic doar pentru o anumit component care ne intereseaz, el funcion+nd n acest caz ca un detector foarte specific. 6arcurgerea %scanarea& ntregului domeniu de mas ntr-un interval de timp redus, ceea ce nseamn c se obin sute sau chiar mii de spectre pentru fiecare analiz. ,oate aceste spectre sunt stocate n memoria calculatorului ataat instrumentului.

n practic se utilizeaz cu precdere cea de-a doua variant, pentru c ea permite identificarea calitativ a tuturor componentelor prezente n amestecul supus analizei i nu doar a uneia dintre acestea. -cest lucru nseamn ns c este necesar prelucrarea unui numr foarte mare de date, deoarece spectrometrele moderne au vitez de scanare ridicat %de obicei ntre H,3-3,8 secunde&. -pelarea oricrui dintre spectrele de mas nregistrate se poate face simplu, prin asociere cu numrul scanrii sau cu timpul trecut de la nceputul analizei i care corespunde timpului de retenie obinut n condiiile utilizrii ca detector a spectrometrului de mas. ,rebuie ns precizat c acest timp de retenie nu va fi identic cu cel obinut cu un alt detector %de e'emplu "MD&, din cauza caracteristicilor constructive diferite ale celor dou detectoare, chiar dac se utilizeaz aceeai coloan i acelai gaz purttor. Din acest motiv este necesar ca analiza $*-MS s produc i o cromatogram pe care s fie evideniate picurile corespunztoare componentelor separate, la fel ca n cazul celorlalte detectoare. -ceast cromatogram se realizeaz pe baza curentului ionic total, care reprezint nsumarea curenilor corespunztori tuturor ionilor rezultai n urma fragmentrii compusului respectiv. -cest curent ionic total este calculat pentru fiecare spectru de mas corespunztor unei scanri, iar diagrama curentului ionic total n funcie de timp %sau numrul de scanri& constituie cromatograma asociat analizei respective. )vident c atunci c+nd nu elueaz nici o component curentul ionic total va fi slab, corespunztor liniei de baz, iar pe msur ce numrul moleculelor din substana respectiv care a(ung n spectrometrul de mas crete el va crete de asemenea i va fi ma'im n zona concentraiei corespunztoare timpului de retenie al substanei respective %ma'imul picului cromatografic&. Datorit faptului c rspunsul detecorului pentru fiecare compus va fi diferit, rezult c i mrimile reltive ale picurilor vor fi diferite comparativ cu aceeai analiz realizat cu un alt tip de detector. :neori este posibil ca n cromatograma realizat pe baza spectrelor de mas s nu fie separate toate picurile care aparin unor componente

cu rezoluie mic, pentru c capacitatea de rezoluie a acestui tip de detector este mai mic dec+t a altora. *u c+t viteza de scanare este mai mare, rezoluia componentelor n cromatogram va fi i ea mai mare. 4iteza de scanare ridicat este important nu numai pentru a realiza o rezoluie bun a picurilor vecine ci i pentru a obine spectre de mas c+t mai fidele i reproductibile. Dac n timpul elurii unei componente concentraia se schimb mai repede dec+t timpul necesar realizrii spectrului de mas, acest spectru va fi distorsionat i identificarea calitativ a compusului va fi ngreunat. Din acest motiv pentru identificarea calitativ este recomandat s se utilizeze un spectru de mas selectat din zona de v+rf a picului compusului respectiv. n condiii de analiz date, spectrul de mas al unei molecule reprezint o caracteristic specific numai compusului respectiv i poate fi utilizat pentru identificarea sa calitativ. -ceasta identificare este ns foarte dificil %dei nu imposibil& de realizat prin interpretarea spectrului de mas pe baza fragmentelor de ioni pe care le conine i a abundenei relative a acaestora. ? variant mult mai simpl este compararea cu spectre de referin ale unor compui cu structur cunoscut. -ceast comparaie se poate face cel mai uor cu a(utorul calculatorului. )'ist o serie de variante de cutare pentru identificarea spectrului de mas al unui compus necunoscut prin comparaie cu spectrele stocate n biblioteca de spectre a calculatorului. )ficiena acestei variante de identificare calitativ depinde de numrul de spectre de mas care se gsete n bibliotec, comple'itatea programului de cutare i viteza de lucru a calculatorului. 7ibliotecile moderne de spectre conin zeci de mii de spectre de mas ale compuilor organici cei mai folosii i ele se livreaz n general odat cu programul care realizeaz achiziia i prelucrarea datelor provenite de la spectrometrul de mas. /olul operatorului este ns de a evalua critic rezultatele analizei calitative oferite de calculator i de a le compara cu

rezultatele unor analize paralele efectuate cu alte metode care pot oferi informaii despre compusul analizat.