ULTRASTRUCTURA BACTERIILOR. ELEMENTELE PERMANENTE I NEPERMANENTE DE STRUCTUR. ELEMENTELE DE STRUCTUR ALE CELULEI BACTERIENE Elementele constante (permanente o!

!l"#ator""$ Peretele celular Membrana citoplasmatic Citoplasma Nucleoidul Ribosomii Mezosomii Elementele "nconstante (nepermanente neo!l"#ator""$ Capsula Sporul Flagelii Pilii/fimbriile Plasmidele Incluziunile celulare PERETELE CELULAR (PC$ Reprezint un nveli rigid ce ncon!oar protoplastul bacterian" #ipse te la micoplasme" Se disting $ mari grupe de bacterii n func%ie de structura PC& 'acterii gram(negative )*(+ 'acterii gram(pozitive )*,+ )-../0 savantul danez C1ristian *R2M+" 3lementul comun al ambelor grupe 4 pept"%o#l"can&l (P'$. PEPTIDO'LICANUL (P'$ P' 4 structur particular rigid a PC bacterian" Str&ct&ra P'( 5eteropolimer macromolecular reticulat0 constituit dintr(un component #l"can"c i unul pept"%"c" Partea #l"can"c) )poliza1aridic+ este constituit din catene liniare paralele n care alterneaz N(acet6l( glucozamina cu acidul N(acet6l(muramic" Partea pept"%"c) este reprezentat de uniti tetrapeptidice )izomeri # i 7 de 22+0 fi8ate de acidul muramic0 care pot fi legate intre ele direct )formand o structur bidimensional0 la bacterii *(+ sau prin puni interpeptidice )structur tridimensional0 la bacterii *,+" 2cidul diaminopimelic0 izomerii 7 ai 22 i acidul muramic se nt9lnesc doar la celulele procariote" Fragmente solubile de murein pot stimula secre%ia e8cesiv a cito:inelor de ctre macrofage0 prin legarea de receptorii toll(li:e sau C7-/0 induc9nd astfel simptome de oc septic P* reprezint %inta de atac a unor substan%e& -" #izozimul0 care taie legturile dintre N(2*2 i acidul N(2M )catena glicanic+ $" ;nele antibiotice )beta(lactamine0 glicopeptide0 fosfomicina+0 care perturb procesul de transpeptidare" PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR 'RAM*PO+ITI,E ;niform0 cu pori mici *rosimea $<(.< nm )p9n la =<< nm+
-

Component&l ma-or (./*0/1$ repre2"nt) P' )structur reticulat tridimensional+ -

Componente m"nore( 1. Acizii teichoici )polimeri de glicerol sau ribitol fosfat+0 fi8a%i de N(2*2" >raverseaz P* i creaz sarcin electric negativ la suprafa%a bacteriei0 asigur transferul de ioni i fi8area unor proteine0 func%ie antigenic" Pot activa complementul pe cale alternativ i stimula secre%ia cito:inelor de ctre macrofage" $. Acizii lipoteichoici: se fi8eaz de MCP i dep esc stratul de P*" Func%ii& identic cu acizii teic1oici0 intervin n adeziunea la celule i au un efect to8ic slab" =. Proteine asociate peretelui celular& proteina 20 coagulaza legat (clumping factor) i proteina fi8atoare de fibronectin la Staph lococcus aureus0 proteina M la Streptococcus p ogenes )rol n adeziune la substrate0 protec%ie de fagocitoz+ /" #a unele bacterii *, )de e8emplu& M6cobacterium0 Nocardia+ peretele con%ine o cantitate important de lipide sau ceruri0 la altele )e8"& streptococi+ peretele con%ine multe glucide"
-

PERETELE CELULAR AL BACTERIILOR 'RAM*NE'ATI,E *rosimea -<(-$ nm Neomogen0 format din straturi distincte&? 3.P'0 stratul intern0 constituie -(-<@ din masa uscat a peretelui celular" 2cizii teic1oici lipsesc" Nu e8ista pun%i interpeptidice )structur bidimensional+" 4.Mem!rana e5tern) (ME$ 4 dublu strat lipidic cu proteine nserate )proteine ma!ore 4 A<@0 minore 4 =<@+" ;nele proteine ma!ore ( porine0 unindu(se n triplete0 particip la formarea porilor0 altele )nonporine+ 4 au func%ie de receptor pentru bacteriofagi i pili sau asigur adeziunea la receptorii celulelor(gazde" Proteinele minore sunt enzime implicate in captarea unor substan%e i transportul specific transmembranar" M3 este permeabil pentru ioni i mici molecule 1idrofile i impermeabil pentru molecule 1idrofobe sau amfipatice 6. L"poprote"nele asigur legtura dintre M3 i P* .. L"popol"2a7ar"%&l (LP+$ 4 stratul e8tern al peretelui gram(negativ" 3ste format din& Lipidul A )endoto"in+# glicolipid ancorat n M3" Stimuleaz formarea i secre%ia cito:inelor" 7etermin efectul to8ic al bacteriilor *( manifestat n urma lizei celulare" Polizaharide complexe0 fi8ate pe lipidul 2" Particip n procese de penetrare i transport a unor substan%e0 confer specificitate de gen (ant"#en&l R$ #a e8terior0 subunit%i oligozaharidice liniare sau ramificate" Creaz sarcin negativ la suprafa%a bacteriei )mpiedic fagocitoza0 accesul moleculelor to8ice+0 confer specificitate de specie sau tip (ant"#en&l O$ Spa8"&l per"plasm"c este regiunea dintre M3 i MCP" Con%ine P* i proteine(enzime implicate n transport0 digestia nutrien%ilor0 protec%ia contra substan%elor to8ice )e8"& beta(lactamazele0 care distrug antibioticele beta(lactamice+" #a bacteriile *, aceste enzime sunt secretate n mediul e8tern" 3viden%ierea peretelui celular& microscopia electronic0 metode speciale de colorare0 plasmoliz )n mediu 1ipertonic+0 plasmoptiz )n mediu 1ipotonic+" 9UNC:IILE PERETELUI CELULAR Confer forma bacteriilor 'arier osmotic i mecanic 'arier de permeabilitate selectiv Func%ie antigenic )2g B i R+ Particip la procesele de cre tere i diviziune celular Func%ie de receptor $

Responsabil de aderen%a specific la substrate Componente ale peretelui celular )lipidul 20 acizii lipoteic1oici0 fragmente de P*+ contribuie la producerea cito:inelor i activarea complementului pe cale alternativ cu manifestarea ocului septic )endoto8inic+ Reprezint %inta de atac a unor enzime i antibiotice

Determ"narea t"p&l&" peretel&" cel&lar

COLORA:IA 'RAM )condi%ionat de structura i compozi%ia c1imic a peretelui celular+ Colorarea frotiului fi8at cu violet de gen%ian )citoplasma bacteriilor se coloreaz n violet+ Splarea cu ap apoi tratarea cu solu%ie #ugol )I$ ,CI+ 4 fi8eaz colorantul n celule prin formarea comple8ului insolubil violet(iodin 7ecolorarea cu alcool DE@" 'acteriile *, pstreaz colorantul0 cele *( se decoloreaz" Recolorarea bacteriilor *( cu fucsin apoas Re2&ltat& bacteriile *, apar colorate n violet0 bacteriile *( n ro u" Mecan"sm&l& Peretele *( este sub%ire0 con%ine multe lipide )$<@+0 care sunt dizolvate de alcool0 porii au diametrul mare0 p5 citoplasmei este slab acid )se decoloreaz cu alcool+F Peretele *, este gros0 nu con%ine lipide sau foarte pu%ine0 alcoolul des1idrateaz peretele i reduce diametrul porilor0 p5 acid )colorantul nu este splat din citoplasm+ Ut"l"2area pract"c) a colora8"e" 'ram( 7iagnostic Brientare Gn tratament )sensibilitate diferit la antibiotice+

;Ac"%ore2"sten8a !acter""lor ;nele bacterii *, )M6cobacterium0 Nocardia+ con%in n componen%a peretelui multe lipide0 acizi gra i i ceruri )A<@ din greutatea peretelui+" 2ceasta le confer rezisten% marcant n mediul e8tern i sensibilitate distinct la antibiotice" Colora%ia +"e7l*Neelsen permite diferen%ierea acestor bacterii dup proprietatea lor de acido(alcoolo( rezisten% METODA DE COLORARE +IE<L*NEELSEN Pr"nc"p"&l& bacteriile acido(rezistente colorate cu fucsin fenicat nclzit nu pot fi decolorate de acizi sau alcool" Frotiul se coloreaz cu fucsin fenicat0 nclzind lama p9n la apari%ia vaporilor )$ ( = ori+ Se clte te cu ap0 apoi se trateaz cu solu%ie de acid sulfuric de E@ 7up splare frotiul se recoloreaz cu albastru de metilen Re2&ltat&l& bacteriile acido(rezistente rm9n colorate n ro u0 cele acido(nerezistente se decoloreaz0 apoi se recoloreaz n albastru Sub influen%a unor substan%e )lizozim0 antibiotice+ P* poate fi deteriorat0 iar bacteria He8plodeazI din cauza presiunii osmotice ridicate )E($< atm+" Jn mediu ec1ilibrat osmotic pot fi ob%inute forme particulare& Protoplast&l ( reprezint o structur sferic totalmente lipsit de perete celular" 3l este ob%inut din bacterii *, S=eroplast&l ( structur sferic sau neregulat par%ial lipsit de perete celular" 3ste o bacterie *( lipsit de peptidoglican i ncon!urat de M3 i MCP 'acteriile care prezint un deficit n P* sunt numite =orme L )descoperite la institutul #ister+" 3le se pot forma sub influen%a antibioticelor betalactamice" Sunt instabile fa% de varia%ii osmotice i rezistente la betalactamine" Pot fi reversibile sau ireversibile =

MEMBRANA CITOPLASMATIC (MCP$ Prezint o structur membranar clasic& dublu strat fosfolipidic n care sunt nserate proteine i glicoproteine" $ipsesc sterolii" #a bacteriile gram(pozitive MCP formeaz invagina%ii0 mezosomi )septali0 laterali+0 n care se con%in enzime0 citocromi i proteine ale sistemului transportor de electroni" Prote"nele MCP& PFP )Proteine Fi8atoare de Penicilin+0 enzime ce catalizeaz legturile dintre catenele peptidice din P* 4 reac%ia de transpeptidare )sunt inactivate de penicilin i antibiotice beta(lactamice+ Componente ale sistemului de transport )permeaze+ Proteine ale sistemelor de secre%ie )I 4 KI+( la bacterii gram negative" Reprezint cilindre proteice ce traverseaz nveli urile celulei bacteriene" 2sigur transportul proteinelor din interiorul celulei bacteriene spre e8terior Proteine 4 receptori 3nzime ale lan%ului respirator 9&nc8""le mem!rane" c"toplasmat"ce 'arier osmotic i de permeabilitate selectiv 2sigur transportul activ prin intermediul permeazelor 38cre%ia enzimelor 1idrolitice0 to8inelor0 etc Sediul metabolismului energetic )mezosomi+ Intervine n diviziunea celular )mezosomi+ Implicare n sinteza P* i a fosfolipidelor Implicare n c1emota8ie prin receptori specifici 2sigur transmiterea informa%iei din mediul ncon!urtor spre interiorul celulei bacteriene E>"%en8"erea MCP Microscopia electronic Fenomene de plasmoliz )n mediu 1ipertonic 4 retrac%ia citoplasmei+ sau plasmoptiz )n mediu 1ipotonic 4 liza celulei0 desprinderea MCP de peretele celular+ CITOPLASMA Necompartimentat #ipsesc organitele celulare Format din ap ).<@+0 con%ine nucleoidul0 ribosomi )apr" $< <<< per celul+0 incluziuni0 plasmide0 ioni0 enzime0 de euri0 etc" Consisten%a dens )stare de gel+ asigur permanen%a mediului intern p5 acid 9&nc8""& sediul tuturor proceselor metabolice E>"%en8"erea& prin orice metod de colorare NUCLEOIDUL BACTERIAN Constituit din 27N bicatenar circular0 uneori liniar0 plasat liber n citoplasm" 27N este repliat n bucle i stabilizat prin 2RN i proteine" Fiecare bucl este 1iperspiralizat sub ac%iunea 27N(girazei i topoizomerazei IK )se nt9lnesc doar la bacterii+" Pe 27N sunt fi8ate enzime de sintez )27N ( 0 2RN 4 polimeraze+ 9&nc8""& diri!az activitatea celulei )procesele de sintez0 cre terea0 multiplicarea0 diferen%ierea celulei0 replicarea proprie0 etc+ /

E>"%en8"erea& Microscopia electronic Metode speciale de colorare )Feulgen+ Feulgen& 5ClL"alde1idaL"react" S1iffL"culoare rosie PLASMIDELE 3lemente genetice )27N+ e8tracromozomiale0 capabile de replicare autonom" Confer bacteriei caractere suplimentare" Se transmit celulelor(fiice la diviziunea bacteriei" Plasmidele con!ugative F se transmit prin con!ugare" %pisom ( plasmida integrat n cromosom T"p&r" %e plasm"%e( 9 4 factor de fertilitate0 con!ugative )sinteza pililor F+ R 4 rezisten% la antibiotice Ent 4 producerea enteroto8inei <l? 4 producerea 1emolizinei Col 4 producerea de bacteriocine
-

Ut"l"2area pract"c)& n te1nologii de 27N(recombinant SPORUL BACTERIAN Reprezint o diferen%iere celular care asigur supravie%uirea bacteriei n condi%ii nefavorabile ale mediului e8tern" 'acterii sporogene 4 'acillus0 Clostridium" 2ceste mi/o se prezint sau sub form &egetati&0 metabolic activ0 sau sub form inert metabolic 4 sporul" Procesul de formare a sporului este numit sporogenez0 sporulare" 3ste declan at n special de caren%e nutritive sau condi%ii nefavorabile ale mediului e8tern" Sta%""le sporo#ene2e" )durata =M(A$ ore+ Stadiul I 4 se formeaz filamentul a8ial0 compus din 27N Stadiul II 4 divizarea asimetric a citoplasmei printr(un sept0 formarea presporului0 care con%ine un filament de 27N" MCP nglobeaz presporul" Stadiul III 4 nglobarea complet a presporului0 care este limitat de $ membrane Stadiul IK 4 formarea corte"ului de P* ntre cele $ membrane Stadiile K(KI 4 formarea tunicii proteice la e8terior i maturarea sporului" ;neori se formeaz un nveli e8tern suplimentar ( e8osporiu Stadiul KII 4 sporul matur este eliberat iar celula(mam se dezintegreaz Propr"et)8"le spor&l&" Inactiv metabolic Con%inut sczut de ap liber Con%inut mare )p9n la -<@+ n dipicolinat de calciu Rezistent la temperaturi i p5 e8treme0 desicare0 radia%ii0 agen%i c1imici i fizici Jn condi%ii favorabile sporul germineaz0 dezvolt9ndu(se forma vegetativ" Forma sporului )sferic0 oval+ i pozi%ia n celul )central0 subterminal0 terminal+ sunt caractere utile n identificarea bacteriilor" E>"%en8"erea spor"lor& colorarea dup AU@ES+AB )sporul se coloreaz Gn ro u0 iar citoplasma Gn albastru+ E

CAPSULA ( nveli ul e8tern al unor bacterii" Reprezint polimeri organici sintetiza%i n mediul natural de via% al bacteriilor )e8emplu& n macroorganism+" Se disting& 'apsula ade&rat )peste <0$Nm+0 vizibil la microscopul optic (icrocapsula0 detectat la microscopul electronic 'apsula fle"i)il )slime0 glicocali8+0 o re%ea la8 de fibre poliza1aridice0 care difuzeaz n mediu" Nu se eviden%iaz microscopic" 2sigur formarea biofilmelor bacteriene 4 ansamblu structurat de celule bacteriene nglobate ntro matrice de polimeri de origine bacterian0 care poate adera la suprafe%e inerte )e8"& cateter0 stimulator cardiac0 endoproteze0 sonde de intubare0 etc+ sau %esuturi vii" Compo2"8"a c7"m"c) a caps&le"& ap i substan%e organice )poliza1aride0 mucopoliza1aride0 peptide+ *acillus anthracis + acid glutamic ,eisseria meningitidis# Streptococcus pneumoniae + poliza1aride Streptococcus p ogenes + acid 1ialuronic 9&nc8""le caps&le"& Impiedic desicarea bacteriei 'arier de permeabilitate pentru substan%e to8ice )antibiotice0 ioni metalici+ 'arier protectoare fa%a de factori antiinfec%io i )complement0 fagocite+0 bacteriofagi0 protozoare Rezerv nutritiv 2sigur aderarea bacteriei la substrate 4 %esuturi sau suporturi inerte )placa dentar0 biofilm pe catetere0 proteze0 instrumente0 etc+ Specificitate antigenic de specie sau tip )2g C+ E>"%en8"erea caps&le" Colora8"a B&rr"*<"ns )metod negativ+ Pe lam se amestec suspensia bacterian cu tu de C1ina0 se etaleaz0 se usuc Frotiul se fi8eaz cu alcool Se coloreaz frotiul cu fucsin apoas Re2&ltat&l& capsula apare ca un 1alou incolor pe fondul negru" Citoplasma bacteriilor se coloreaz n ro u" Colora8"a Romano>sC" D '"emsa )capsula se coloreaz n roz+ 4 colora%ie pozitiv a capsulei 'RANULA:IILE DE ,OLUTIN Reprezint polimeri anorganici de polimetafosfat" Servesc n calitate de rezerv de fosfa%i i pot interveni n metabolismul energetic" -nteresul medical& la agentul difteriei0 'or ne)acterium diphtheriae# granulele de volutin se localizeaz la e8tremit%ile celulei0 iar la cor6nebacterii nepatogene sunt repartizate neuniform n citoplasm" #a tratarea cu unii coloran%i bazici granulele de volutin se coloreaz n alt culoare0 de e8" n ro u(violet la colorarea cu albastru de metilen 4 fenomenul metacromaziei" E>"%en8"erea& metoda #oeffler0 metoda Neisser 9LA'ELII 4 structuri filamentoase proteice0 nt9lnite la bacterii0 bacili0 spirili i spiroc1ete" 9&nc8""& intervin n mobilitatea bacterian0 reprezint 2g 5 al bacteriilor" M

Str&ct&ra =la#el&l&"& Filamentul0 structur 1elicoidal constituit din fibrile proteice )flagelin+ rsucite C9rligul de articula%ie Corpul bazal0 constituit dintr(un a8 rigid i mai multe inele ce servesc la fi8area flagelului )la MCP i PC+" Mobilitatea bacteriei este asigurat de rota%ia flagelului )=< 4 A< micrometri/s+"
-

T"p&r"le %e !acter"" %&p) %"spo2"8"a =la#el"lor 'acterii monotriche 'acterii lofotriche )un mnunc1i de flageli la o e8tremitate+ 'acterii amfitriche )c9te un flagel sau un mnunc1i de flageli la fiecare e8tremitate+ 'acterii peritriche )flageli pe toat suprafa%a celulei+ #a spiroc1ete flagelii se plaseaz n spa%iul periplasmic 4 flageli interni0 periplasmatici" E>"%en8"erea =la#el"lor I ( meto%e %"recte Microscopia electronic (Colora%ia special #oeffler )mordansarea cu tanin0 sruri de aluminiu0 Fe0 apoi colorarea cu fucsin sau albastru de metilen+ II 4 meto%e "n%"recte )studierea mobilit%ii bacteriilor+ Studierea preparatelor native Hpictur suspendatI sau Hntre lam i lamelI )microscopia cu contrast de faz sau pe fond negru+ Jnsm9n%area culturii bacteriene n medii semisolide )se observ turbiditate+ Cre terea culturii Hn vlI pe suprafa%a mediului solid P"l"" com&n" (="m!r""le$D elemente proteice fine0 rigide0 scurte repartizate pe suprafa%a celulei bacteriene * ( n special" Sunt formate din subunit%i proteice identice )pilina+0 implantate n M3" Numrul fimbriilor per celul& - 4 sute 9&nc8""& asigur adeziunea bacteriilor la suprafe%e inerte0 la celule sau alte bacterii0 reprezint antigenul F P"l"" con-&#at">" 4 structuri capiliforme de natur proteic0 prezen%i n numr de -(-< per celul )numai la bacteriile ce gzduiesc plasmide con!ugative F+" 9&nc8""& transferul de 27N prin con!ugare0 receptori pentru unii bacteriofagi E>"%en8"erea p"l"lor& microscopia electronic